JPH05219933A - Dna detector - Google Patents
Dna detectorInfo
- Publication number
- JPH05219933A JPH05219933A JP5944492A JP5944492A JPH05219933A JP H05219933 A JPH05219933 A JP H05219933A JP 5944492 A JP5944492 A JP 5944492A JP 5944492 A JP5944492 A JP 5944492A JP H05219933 A JPH05219933 A JP H05219933A
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- Japan
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- dna
- row
- pipette
- storage container
- treatment liquid
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、特定の塩基配列を持つ
ＤＮＡを検出するための装置に関し、細菌による疾患の
診断や遺伝病の診断に利用することができる。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an apparatus for detecting DNA having a specific nucleotide sequence, and can be used for diagnosis of bacterial diseases and genetic diseases.
【０００２】[0002]
【従来の技術】従来、細菌等の検体のＤＮＡを検出する
には、まず検体を物理的あるいは化学的方法で破砕し、
フェノール、クロロホルム等で精製し、エタノール沈殿
を行なうことで抽出する。その抽出したＤＮＡを、例え
ばＰＣＲやＮＡＳＢＡ法等により増幅し、その増幅され
たＤＮＡを一本鎖にして酵素、放射性同位元素、ビオチ
ン、蛍光物質等でラベルしたＤＮＡプローブによりハイ
ブリダイゼーションする。そのハイブリダイゼーション
されたＤＮＡを、酵素活性、放射能活性、蛍光活性等に
基づき解析装置により解析することで目的とするＤＮＡ
を検出する。2. Description of the Related Art Conventionally, in order to detect DNA of a sample such as bacteria, the sample is first crushed by a physical or chemical method,
Purify with phenol, chloroform, etc. and extract by performing ethanol precipitation. The extracted DNA is amplified by, for example, PCR or NASBA method, and the amplified DNA is made into a single strand and hybridized with a DNA probe labeled with an enzyme, a radioisotope, biotin, a fluorescent substance or the like. The target DNA is obtained by analyzing the hybridized DNA with an analyzer based on enzyme activity, radioactivity, fluorescence activity and the like.
To detect.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】従来のＤＮＡの検出
は、ＤＮＡの抽出、増幅およびハイブリダイゼーション
の各過程が連続することなく個別になされ、しかも各作
業は人手により行なわれていたため、非常に煩雑かつ時
間を要する作業であった。また、作業中に疾患に感染し
ないよう注意する必要がある。The conventional detection of DNA is very complicated because each process of DNA extraction, amplification and hybridization is carried out individually without being continuous and each work is performed manually. And it was a time-consuming task. It is also necessary to be careful not to get a disease while working.
【０００４】本発明は上記従来技術に鑑み、ＤＮＡの検
出の自動化に寄与できる装置を提供することを目的とす
る。The present invention has been made in view of the above-mentioned prior art, and an object thereof is to provide an apparatus which can contribute to automation of DNA detection.
【０００５】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明のＤＮＡ検出装置
の特徴とするところは、ＤＮＡの抽出用処理液と増幅用
処理液とＤＮＡプローブによるハイブリダイゼーション
用処理液の各収納容器と、ＤＮＡプローブによりハイブ
リダイゼーションされたＤＮＡの解析装置と、各収納容
器に対しピペットを相対変位させる変位装置と、そのピ
ペットに前記各処理液の吸入と吐出を行なわせるポンプ
装置と、前記ハイブリダイゼーション用処理液の収納容
器を前記解析装置まで相対的に搬送する搬送装置と、そ
の変位装置とポンプ装置と搬送装置とを予め定めた順序
で制御する制御装置とを備える点にある。The features of the DNA detection apparatus of the present invention are that each of the storage containers for the DNA extraction treatment solution, the amplification treatment solution, and the hybridization treatment solution using a DNA probe, and the DNA probe. An analyzer for the DNA hybridized by the above, a displacement device for relatively displacing the pipette with respect to each storage container, a pump device for causing the pipette to inhale and discharge the treatment liquid, and a treatment liquid for the hybridization. A point is that a transport device that relatively transports the storage container to the analysis device, and a control device that controls the displacement device, the pump device, and the transport device in a predetermined order are provided.
【０００６】[0006]
【作用】本発明装置を用いてＤＮＡの検出を行なうに
は、まず、ＤＮＡの抽出用処理液の収納容器に検体を入
れ、その検体からＤＮＡを抽出する。次に、抽出された
ＤＮＡを含む処理液の収納容器内にピペットを変位装置
により変位させ、その処理液をポンプ装置により吸入さ
せる。そのピペットを、ＤＮＡの増幅処理液の収納容器
内に変位装置により変位させ、その容器内に抽出された
ＤＮＡを含む処理液をポンプ装置により吐出させ、ＤＮ
Ａの増幅を行なう。その増幅されたＤＮＡを含む処理液
をポンプ装置によりピペットに吸入させ、そのピペット
を、ＤＮＡのＤＮＡプローブによるハイブリダイゼーシ
ョン用処理液の収納容器内に変位装置により変位させ、
その容器内に増幅されたＤＮＡを含む処理液をポンプ装
置により吐出させ、ＤＮＡをＤＮＡプローブによりハイ
ブリダイゼーションする。そのハイブリダイゼーション
されたＤＮＡを含む処理液の収納容器を搬送装置により
解析装置まで搬送し、そのハイブリダイゼーションされ
たＤＮＡを解析することで目的とするＤＮＡの検出を行
なう。In order to detect DNA using the apparatus of the present invention, first, a sample is put in a container for a treatment liquid for extracting DNA, and the DNA is extracted from the sample. Next, the pipette is displaced by the displacement device into the storage container of the treatment liquid containing the extracted DNA, and the treatment liquid is sucked by the pump device. The pipette is displaced by a displacement device into a container for storing a DNA amplification treatment liquid, and the treatment liquid containing the extracted DNA is discharged into the container by a pump device, and DN
A is amplified. The processing solution containing the amplified DNA is sucked into the pipette by the pump device, and the pipette is displaced by the displacement device into the container for the processing solution for hybridization with the DNA probe of DNA.
A treatment liquid containing amplified DNA is discharged into the container by a pump device, and the DNA is hybridized with a DNA probe. The container for the processing solution containing the hybridized DNA is conveyed to the analyzer by the conveying device, and the hybridized DNA is analyzed to detect the target DNA.
【０００７】[0007]
【実施例】以下、図面を参照して本発明の実施例を説明
する。Embodiments of the present invention will be described below with reference to the drawings.
【０００８】図１〜図３に示すＤＮＡ検出装置１はフレ
ーム２を備えている。そのフレーム２にベルトコンベヤ
（搬送装置）３が取り付けられている。そのベルトコン
ベヤ３は図中Ｙ方向に並列する１０本のコンベヤベルト
４を有し、各コンベヤベルト４はフレーム２に取り付け
られたプーリ５に巻き掛けられている。そのプーリ５が
モータにより回転駆動されることでコンベヤベルト４の
上面は図中Ｘ方向に移動する。各コンベヤベルト４に図
中Ｘ方向に並列する複数の保持孔６が開口され、この保
持孔６を介し収納容器７がコンベヤベルト４に保持され
る。すなわち、各収納容器７は上方が開口した筒状であ
って、その径は保持孔６よりも小さくされ、その外周に
保持孔６よりも径の大きなフランジ８が設けられてい
る。The DNA detection apparatus 1 shown in FIGS. 1 to 3 has a frame 2. A belt conveyor (transport device) 3 is attached to the frame 2. The belt conveyor 3 has ten conveyor belts 4 arranged in parallel in the Y direction in the figure, and each conveyor belt 4 is wound around a pulley 5 attached to the frame 2. When the pulley 5 is rotationally driven by the motor, the upper surface of the conveyor belt 4 moves in the X direction in the figure. A plurality of holding holes 6 arranged in parallel in the X direction in the drawing are opened in each conveyor belt 4, and the storage container 7 is held by the conveyor belt 4 via the holding holes 6. That is, each of the storage containers 7 has a tubular shape with an open upper portion, the diameter thereof is smaller than that of the holding hole 6, and a flange 8 having a diameter larger than that of the holding hole 6 is provided on the outer periphery thereof.
【０００９】また、ＤＮＡ検出装置１は図中Ｘ方向に並
列する１６本のピペット１０を備え、各ピペット１０は
収納容器７内の液体を吸入しあるいは吐出するために用
いられる。各ピペット１０の下端は交換可能なチップ１
０ａとされ、上端は連結チューブ１１に連結されてい
る。その連結チューブ１１はポンプ装置１７に連結さ
れ、そのポンプ装置１７は、ピペット１０を容器７に対
し相対変位させる変位装置１３に連結されている。Further, the DNA detection device 1 is provided with 16 pipettes 10 arranged in parallel in the X direction in the figure, and each pipette 10 is used for sucking or discharging the liquid in the storage container 7. Replaceable tip 1 at the bottom of each pipette 10
0a, and the upper end is connected to the connecting tube 11. The connecting tube 11 is connected to a pump device 17, and the pump device 17 is connected to a displacement device 13 that relatively displaces the pipette 10 with respect to the container 7.
【００１０】その変位装置１３は、前記フレーム２に支
持されると共に図中Ｙ方向に沿う案内レール１４と、こ
の案内レール１４に図中Ｙ方向に沿って往復移動可能に
取り付けられた移動体１５と、この移動体１５に取り付
けられて上下方向（図中Ｚ方向）に伸縮可能な流体圧シ
リンダ１６とを有する。その流体圧シリンダ１６の伸縮
ロッドの上端にポンプ装置１７が取り付けられている。
そのポンプ装置１７は、例えばピストンポンプにより構
成することができ、このポンプ装置１７の作動により、
ピペット１０による液体の吸入と吐出が可能になる。The displacement device 13 is supported by the frame 2 and has a guide rail 14 extending in the Y direction in the figure, and a moving body 15 attached to the guide rail 14 so as to be capable of reciprocating in the Y direction in the figure. And a fluid pressure cylinder 16 attached to the moving body 15 and capable of expanding and contracting in the vertical direction (Z direction in the drawing). A pump device 17 is attached to the upper end of the telescopic rod of the fluid pressure cylinder 16.
The pump device 17 can be configured by, for example, a piston pump, and by the operation of the pump device 17,
The liquid can be sucked and discharged by the pipette 10.
【００１１】その案内レール１４にラック１８が取り付
けられ、このラック１８に噛み合うピニオン１９が移動
体１５に取り付けられたモータ２０の出力軸に取り付け
られている。これにより、モータ２０の回転により移動
体１５がレール１４に沿って図中Ｙ方向に移動すること
で、各ピペット１０は収納容器７に対し図中Ｙ方向に相
対変位する。また、流体圧シリンダ１６が伸縮すること
で各ピペット１０は収納容器７に対し上下方向（図中Ｚ
方向）に相対変位する。A rack 18 is attached to the guide rail 14, and a pinion 19 meshing with the rack 18 is attached to an output shaft of a motor 20 attached to a moving body 15. As a result, the moving body 15 moves along the rails 14 in the Y direction in the figure by the rotation of the motor 20, whereby each pipette 10 is displaced relative to the storage container 7 in the Y direction in the figure. Further, as the fluid pressure cylinder 16 expands and contracts, each pipette 10 moves vertically with respect to the storage container 7 (Z in the figure).
Direction) relative displacement.
【００１２】本実施例では、図１において左方から３番
目の図中Ｃ列のコンベヤベルト４の下方と、左方から８
番目の図中Ｈ列のコンベヤベルト４の下方と、左方から
９番目の図中Ｉ列のコンベヤベルト４の下方と、最右方
の図中Ｊ列のコンベヤベルト４の下方に、それぞれ温度
調節用ブロック２５Ｃ、２５Ｈ、２５Ｉ、２５Ｊが配置
されている。各温度調節用ブロック２５Ｃ、２５Ｈ、２
５Ｉ、２５Ｊに、コンベヤベルト４に保持された１６本
の収納容器７を挿入可能な上方開口の凹部２５ａが設け
られている。各ブロック２５は熱媒および冷媒用流体の
通路（図示省略）を有し、温度調節装置により温度調節
可能とされている。各ブロック２５Ｃ、２５Ｈ、２５
Ｉ、２５Ｊは、前記フレーム２に支持された支持ビーム
２６に流体圧シリンダ２７Ｃ、２７Ｈ、２７Ｉ、２７Ｊ
を介して上下動可能に取り付けられ、その流体圧シリン
ダ２７Ｃ、２７Ｈ、２７Ｉ、２７Ｊの伸長により上方移
動して凹部２５ａ内に収納容器７が挿入されることで、
その収納容器７内の液体の温度調節を行なうことができ
る。その収納容器７をベルトコンベヤ３により搬送する
際は、流体圧シリンダ２７Ｃ、２７Ｈ、２７Ｉ、２７Ｊ
の縮小により収納容器７の下方にブロック２５Ｃ、２５
Ｈ、２５Ｉ、２５Ｊを位置させる。In the present embodiment, the lower part of the conveyor belt 4 in the third row C from the left in FIG. 1 and the row 8 from the left in FIG.
The temperature is measured below the conveyor belt 4 in the H-th row in the second figure, below the conveyor belt 4 in the I-th row in the ninth row from the left, and below the conveyor belt 4 in the J-row in the rightmost figure. Adjustment blocks 25C, 25H, 25I, 25J are arranged. Each temperature control block 25C, 25H, 2
5I and 25J are provided with upper opening recesses 25a into which 16 storage containers 7 held by the conveyor belt 4 can be inserted. Each block 25 has passages (not shown) for the heat medium and the fluid for the refrigerant, and the temperature can be adjusted by the temperature adjusting device. Each block 25C, 25H, 25
I and 25J are fluid pressure cylinders 27C, 27H, 27I and 27J on the support beam 26 supported by the frame 2.
Is attached so as to be movable up and down via the fluid pressure cylinders 27C, 27H, 27I, and 27J and is moved upward to insert the storage container 7 into the recess 25a.
The temperature of the liquid in the storage container 7 can be adjusted. When the storage container 7 is conveyed by the belt conveyor 3, the fluid pressure cylinders 27C, 27H, 27I and 27J are used.
Of the blocks 25C, 25 below the storage container 7
Position H, 25I, 25J.
【００１３】また、検出装置１は解析装置３５を備えて
いる。この解析装置３５はカットオフフィルターが装備
された蛍光光源およびフォトマルチプライマーからなる
公知の解析装置でフレーム２に支持されている。The detecting device 1 also comprises an analyzing device 35. The analysis device 35 is a well-known analysis device including a fluorescent light source equipped with a cutoff filter and a photomulti-primer, and is supported on the frame 2.
【００１４】図４に示すように、前記ベルトコンベヤ３
の駆動用モータ３ａと、変位装置１６の流体圧シリンダ
１６およびモータ２０と、ポンプ装置１７と、各ブロッ
ク２５Ｃ、２５Ｈ、２５Ｉ、２５Ｊの昇降用油圧シリン
ダ２７Ｃ、２７Ｈ、２７Ｉ、２７Ｊおよび温度調節装置
２８Ｃ、２８Ｈ、２８Ｉ、２８Ｊは、制御装置３０に接
続され予め定められた順序で作動される。その制御装置
３０は例えばシーケンス制御装置により構成することが
できる。また、その制御装置３０には操作装置３１が接
続され、この操作装置３１のスイッチ操作により検出装
置１の制御が開始される。なお、操作装置３１のスイッ
チを手動にて操作することによっても検出装置１を制御
することが可能とされている。As shown in FIG. 4, the belt conveyor 3
Drive motor 3a, fluid pressure cylinder 16 and motor 20 of displacement device 16, pump device 17, lifting hydraulic cylinders 27C, 27H, 27I, 27J of respective blocks 25C, 25H, 25I, 25J and temperature control device. 28C, 28H, 28I and 28J are connected to the control device 30 and are operated in a predetermined order. The control device 30 can be composed of, for example, a sequence control device. Further, an operation device 31 is connected to the control device 30, and a switch operation of the operation device 31 starts control of the detection device 1. It is also possible to control the detection device 1 by manually operating the switch of the operation device 31.
【００１５】上記ＤＮＡ検出装置１を用い、食中毒原因
因子遺伝子である腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒遺伝子
（ｔｄｈ遺伝子）の検出を行なった。Using the above-described DNA detection apparatus 1, the heat-resistant hemolytic poison gene ( tdh gene) of Vibrio parahaemolyticus, which is a food poisoning causative factor gene, was detected.
【００１６】図１においてＡ列の収納容器７は空容器と
した。Ｂ列およびＣ列の収納容器７には洗浄処理液とし
て１×ＰＢＳおよび０．５％Ｔｗｅｅｎ２０の溶液を収
納した。Ｄ列の収納容器７には洗浄処理液として１×Ｐ
ＢＳの溶液を収納した。Ｅ列の収納容器７には酵素反応
処理液として０．１ｍＭの４‐メチルウンベリフェリル
リン酸と０．２Ｍのトリス緩衝液と１ｍＭのＭｇＣｌ2
（ｐＨ９．５）の酵素基質溶液を収納した。Ｆ列の収納
容器７には酵素反応停止処理液として５０ｍＭのＥＤＴ
Ａ溶液を収納した。Ｇ列の収納容器７には増菌処理液と
してＬ‐ｂｒｏｔｈ培地と３％ＮａＣｌの溶液を収納し
た。Ｈ列の収納容器７にはＤＮＡの抽出処理液として１
×ＴＥ（１×ＴＥは１０ｍＭのトリス塩酸バッファー、
１ｍＭのＥＤＴＡ）溶液を収納した。Ｉ列の収納容器７
には増幅処理液としてＰＣＲ反応液を収納した。Ｊ列の
収納容器７には増幅ＤＮＡのＤＮＡプローブによるハイ
ブリダイゼーション用及び固定液として、アルカリフォ
スファターゼを標識物質とする酵素ラベルプローブの溶
液を収納した。また、Ｊ列の収納容器７の内面にはアビ
ジンをコーティングした。アビジンは、ＰＣＲで増幅し
たＤＮＡを吸着させるために用いている。In FIG. 1, the storage container 7 in the row A is an empty container. The storage container 7 in the rows B and C contained a solution of 1 × PBS and 0.5% Tween 20 as a cleaning treatment solution. 1 × P as a cleaning treatment liquid in the storage container 7 of the D row
A solution of BS was stored. The storage container 7 in the row E contains 0.1 mM 4-methylumbelliferyl phosphate, 0.2 M Tris buffer, and 1 mM MgCl 2 as an enzyme reaction treatment solution.
The enzyme substrate solution of (pH 9.5) was stored. In the F-row storage container 7, 50 mM EDT as an enzymatic reaction termination treatment liquid was used.
A solution was stored. The storage container 7 of the G row contained a solution of L-broth medium and 3% NaCl as a sterilization treatment solution. In the storage container 7 of the H row, 1 is used as a DNA extraction treatment liquid.
X TE (1 x TE is 10 mM Tris-HCl buffer,
1 mM EDTA) solution was stored. Row I storage container 7
The PCR reaction solution was stored as an amplification treatment solution in the. A storage container 7 in the J-row stores a solution of an enzyme-labeled probe having alkaline phosphatase as a labeling substance for hybridization with a DNA probe of amplified DNA and as a fixing solution. In addition, the inner surface of the J-row storage container 7 was coated with avidin. Avidin is used to adsorb DNA amplified by PCR.
【００１７】そして、腸炎ビブリオ菌を混ぜた健状人人
フン便液（ＰＢＳ液１０μｌ）をＧ列の収納容器７に入
れ、温度調節用ブロック２５Ｇを用いて３７℃の温度に
２時間〜１８時間保って増菌を行なった後に、操作装置
３１を操作して検出装置１の制御を開始した。以下に、
その制御手順を説明する。Then, the feces fluid of healthy human beings mixed with Vibrio parahaemolyticus (10 μl of PBS solution) is placed in the storage container 7 of the G row, and the block 25G for temperature control is used at a temperature of 37 ° C. for 2 hours-18. After the sterilization was carried out for a certain period of time, the operation device 31 was operated to start the control of the detection device 1. less than,
The control procedure will be described.
【００１８】まず、ピペット１０をＧ列の収納容器７内
に変位させ、検体を含む処理液を吸入させる。次に、ピ
ペット１０をＨ列の収納容器７内に変位させ、検体を含
む処理液を吐出させる。次に、Ｈ列の収納容器７内の処
理液をブロック２５Ｈを用いて９５℃の温度で５分間保
持した後に４℃に冷却することで検体からＤＮＡを抽出
する。次に、Ｈ列の収納容器７内のＤＮＡを含む処理液
をピペット１０により吸入させ、そのピペット１０をＩ
列の収納容器７内に変位させ、抽出されたＤＮＡを含む
処理液を吐出させる。そのＩ列の収納容器７内でＰＣＲ
反応によりＤＮＡの増幅を行なう。このＰＣＲ反応は、
収納容器７内の処理液をブロック１５Ｉを用いて９４
℃、５５℃、７２℃に各１分間ずつ順次保持するサイク
ルを３５回繰り返すことで行なう。次に、その処理液を
９４℃で５分間保持した後に４℃に冷却することで増幅
されたＤＮＡを１本鎖にする。次に、Ｉ列の収納容器７
内の増幅されたＤＮＡを含む処理液をピペット１０によ
り吸入し、そのピペット１０をＪ列の収納容器７内に変
位させ、増幅されたＤＮＡを含む処理液を吐出させる。
そのＪ列の収納容器７内の処理液を室温で１５分間保持
することで、増幅されたＤＮＡをＤＮＡプローブにより
ハイブリダイゼーションする。又同時にＪ列の収納容器
７の内壁に増幅したＤＮＡを固定した。次に、ピペット
１０をＡ列の収納容器７内に変位させてピペット１０内
の残留処理液を吐出させ、そのピペット１０をＢ列の収
納容器７内に変位させて洗浄液を吸入させ、そのピペッ
ト１０をＪ列の収納容器７内に変位させて洗浄液を吐出
させることにより、ハイブリダイゼーションされたＤＮ
Ａを洗浄して過剰なＤＮＡプローブ及びＪ列の収納容器
７の内壁に固定されなかった増幅ＤＮＡを除去する。こ
の洗浄を２度繰り返す。次に、ピペット１０をＡ列の収
納容器７内に変位させてピペット１０内の残留処理液を
吐出させ、そのピペット１０をＣ列の収納容器７内に変
位させて洗浄液を吸入させ、そのピペット１０をＪ列の
収納容器７内に変位させて洗浄液を吐出させることよ
り、ハイブリダイゼーションされたＤＮＡの３回目の洗
浄を行なう。次に、ピペット１０をＡ列の収納容器７内
に変位させてピペット１０内に残留した処理液を吐出さ
せ、そのピペット１０をＤ列の収納容器７内に変位させ
て洗浄液を吸入させ、そのピペット１０をＪ列の収納容
器７内に変位させて洗浄液を吐出させることで、ハイブ
リダイゼーションされたＤＮＡの４回目の洗浄を行な
う。次に、ピペット１０をＡ列の収納容器７内に変位さ
せてピペット１０内の残留処理液を吐出させ、そのピペ
ット１０をＥ列の収納容器７内に変位させて酵素基質溶
液を吸入させ、そのピペット１０をＪ列の収納容器７内
に変位させて酵素基質溶液を吐出させる。次に、ブロッ
ク２５Ｊを用いてＪ列の処理容器７内の処理液を３７℃
の温度で１５分間保持することで酵素反応を行なわせ、
ＤＮＡプローブに結合させたアルカリフォスファターゼ
による酵素反応を行なわせた。次に、ピペット１０をＦ
列の収納容器７内に変位させて酵素反応停止処理液を吸
入させ、そのピペット１０をＪ列の収納容器７内に変位
させて酵素反応停止処理液を吐出させることで上記酵素
反応を停止させる。次に、ベルトコンベヤ３を駆動して
Ｊ列の収納容器７を解析装置３５に搬入すると共に、各
ピペット１０の下方に次の検出を行なうための収納容器
７を位置させる。First, the pipette 10 is displaced into the G-row storage container 7, and the treatment liquid containing the sample is sucked. Next, the pipette 10 is displaced into the storage container 7 in the H row, and the processing liquid containing the sample is discharged. Next, the treatment liquid in the storage container 7 in the H row is held at a temperature of 95 ° C. for 5 minutes using the block 25H and then cooled to 4 ° C. to extract DNA from the sample. Next, the treatment liquid containing DNA in the storage container 7 of the H row is sucked by the pipette 10, and the pipette 10 is
The treatment liquid containing the extracted DNA is discharged by displacing it into the storage container 7 in the row. PCR in the storage container 7 of the I row
DNA is amplified by the reaction. This PCR reaction
The processing liquid in the storage container 7 is set to 94 by using the block 15I.
It is carried out by repeating a cycle in which the temperature is kept at 1 ° C., 55 ° C. and 72 ° C. for 1 minute each 35 times. Next, the treated solution is kept at 94 ° C. for 5 minutes and then cooled to 4 ° C. to make the amplified DNA single-stranded. Next, the storage container 7 in row I
The treatment liquid containing the amplified DNA therein is sucked by the pipette 10, the pipette 10 is displaced into the J-row container 7, and the treatment liquid containing the amplified DNA is discharged.
The amplified DNA is hybridized with the DNA probe by keeping the treatment liquid in the J-row container 7 at room temperature for 15 minutes. At the same time, the amplified DNA was fixed to the inner wall of the J-row storage container 7. Next, the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row A to discharge the residual treatment liquid in the pipette 10, the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row B to suck the cleaning liquid, and the pipette By displacing 10 into the J-row container 7 and discharging the washing liquid, the hybridized DN
A is washed to remove the excess DNA probe and the amplified DNA that is not fixed to the inner wall of the storage container 7 in row J. This wash is repeated twice. Next, the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row A to discharge the residual treatment liquid in the pipette 10, the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row C to suck the cleaning liquid, and the pipette A third washing of the hybridized DNA is carried out by displacing 10 into the J-row storage container 7 and discharging the washing liquid. Next, the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row A to discharge the treatment liquid remaining in the pipette 10, and the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row D to suck the cleaning liquid. The fourth washing of the hybridized DNA is performed by displacing the pipette 10 into the storage container 7 of the J-row and discharging the washing liquid. Next, the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row A to discharge the residual treatment liquid in the pipette 10, and the pipette 10 is displaced into the storage container 7 of the row E to suck the enzyme substrate solution, The pipette 10 is displaced into the J-row storage container 7 and the enzyme substrate solution is discharged. Next, using the block 25J, the treatment liquid in the treatment vessels 7 in the J-th row is 37 ° C.
The enzyme reaction is performed by holding at the temperature of 15 minutes,
An enzymatic reaction was performed with alkaline phosphatase bound to the DNA probe. Next, pipette 10 to F
The enzyme reaction is stopped by displacing the enzyme reaction-stopping treatment liquid by displacing it in the row storage container 7, and displacing the pipette 10 into the J-row storage container 7 and discharging the enzyme reaction terminating treatment liquid. .. Next, the belt conveyor 3 is driven to carry the J-row storage containers 7 into the analyzer 35, and the storage containers 7 for performing the next detection are positioned below each pipette 10.
【００１９】その解析装置３５により波長が３６０ｎｍ
の励起光をハイブリダイゼーションされたＤＮＡに照射
し、波長が４５０ｎｍの蛍光強度を測定したところ、腸
炎ビブリオｔｄｈ陽性株であるＷＰ１株の蛍光信号が強
く検出された。なお、上記検出装置１を用いてｔｄｈ陰
性株のＡＱ４０３７株の検出を行なったが検出信号は極
めて弱かった。With the analyzer 35, the wavelength is 360 nm.
When the hybridized DNA was irradiated with the excitation light of (1) and the fluorescence intensity at a wavelength of 450 nm was measured, the fluorescence signal of the WP1 strain, which is a Vibrio parahaemolyticus tdh positive strain, was strongly detected. Although the detection device 1 was used to detect the tdh- negative strain AQ4037, the detection signal was extremely weak.
【００２０】なお、本発明は上記実施例に限定されるも
のではない。例えば、Ｇ列の収納容器７内の培地として
Ｌ‐ｂｒｏｔｈを用いることで、大腸菌の遺伝子（Ｌ
Ｔ、ＳＴ、ＣＳＴｈ、ＳＴｐ）、ＶＴ遺伝子等の検出が
でき、ガムブイヨン培地を用いることでウェルシュ菌や
キャンピＤバクター菌の検出ができ、ブレインハート培
地を用いることで黄色ブドウ球菌の検出ができる。ま
た、増菌処理液は必須ではなく、例えばコレラ菌のｃｔ
ｘ遺伝子は培養せずとも検出できる。また、ＤＮＡを増
幅するのにＰＣＲ反応を行なったが、これに限定されず
例えばＮＡＳＢＡ法により増幅を行なってもよい。ま
た、ＤＮＡプローブとして酵素ラベルプローブを用いた
が放射性同位元素や蛍光物質によりラベルされたＤＮＡ
プローブを用いてもよい。また、ピペット１０を複数と
して同時に処理する収納容器７も複数としたが単一であ
ってもよい。また、ピペット１０を変位装置１３によっ
て収納容器７に対し上下方向と横方向に駆動させたが、
ピペット１０を静止させて収納容器７を変位させてもよ
く、相対的に変位させればよい。また、制御装置として
マイクロコンピュータを用いてもよい。The present invention is not limited to the above embodiment. For example, by using L-broth as the medium in the G-row storage container 7, the E. coli gene (L
T, ST, CSTh, STp), VT gene, etc. can be detected. By using gum broth medium, it is possible to detect C. perfringens and Campy D. bacteria, and by using brain heart medium, Staphylococcus aureus can be detected. .. In addition, the enrichment treatment liquid is not essential, for example, ct of cholera
The x gene can be detected without culturing. Further, although the PCR reaction was performed to amplify the DNA, the present invention is not limited to this, and the amplification may be performed by the NASBA method, for example. Also, an enzyme-labeled probe was used as a DNA probe, but the DNA was labeled with a radioisotope or a fluorescent substance.
A probe may be used. Further, although the number of the pipettes 10 is plural and the number of the storage containers 7 for processing at the same time is also plural, the number may be one. Further, the pipette 10 was driven by the displacement device 13 in the vertical direction and the lateral direction with respect to the storage container 7,
The pipette 10 may be stationary and the storage container 7 may be displaced, or may be relatively displaced. A microcomputer may be used as the control device.
【００２１】[0021]
【発明の効果】本発明のＤＮＡ検出装置によれば、検体
中のＤＮＡの検出作業を自動化でき、検出作業の高能率
化と省力化が図れると共に、検出作業中に疾患に感染す
るのを防止できる。According to the DNA detecting apparatus of the present invention, the work of detecting DNA in a sample can be automated, the efficiency of the work of detection can be improved and the labor can be saved, and infection of a disease during the work of detection can be prevented. it can.
【図１】本発明の実施例のＤＮＡ検出装置の構成説明用
平面図FIG. 1 is a plan view for explaining the configuration of a DNA detection device according to an embodiment of the present invention.
【図２】本発明の実施例のＤＮＡ検出装置の要部の正断
面図FIG. 2 is a front sectional view of a main part of a DNA detection device according to an embodiment of the present invention.
【図３】本発明の実施例のＤＮＡ検出装置の要部の側断
面図FIG. 3 is a side sectional view of a main part of a DNA detection device according to an embodiment of the present invention.
【図４】本発明の実施例のＤＮＡ検出装置の構成説明用
ブロック図FIG. 4 is a block diagram for explaining the configuration of a DNA detection device according to an embodiment of the present invention.
７ 収納容器 １０ ピペット １３ 変位装置 １７ ポンプ装置 ３０ 制御装置 ３５ 解析装置 7 Storage Container 10 Pipette 13 Displacement Device 17 Pump Device 30 Control Device 35 Analysis Device
Claims (1)
ＤＮＡプローブによるハイブリダイゼーション用処理液
の各収納容器と、ＤＮＡプローブによりハイブリダイゼ
ーションされたＤＮＡの解析装置と、各収納容器に対し
ピペットを相対変位させる変位装置と、そのピペットに
前記各処理液の吸入と吐出を行なわせるポンプ装置と、
前記ハイブリダイゼーション用処理液の収納容器を前記
解析装置まで相対的に搬送する搬送装置と、その変位装
置とポンプ装置と搬送装置とを予め定めた順序で制御す
る制御装置とを備えることを特徴とするＤＮＡ検出装
置。1. Storage containers for a DNA extraction treatment liquid, an amplification treatment liquid, and a hybridization treatment liquid with a DNA probe, an analyzer for analyzing DNA hybridized with a DNA probe, and a pipette for each storage container. A displacement device for relatively displacing, and a pump device for causing the pipette to inhale and discharge each of the processing liquids,
And a controller for controlling the displacement device, the pump device, and the carrier device in a predetermined order. DNA detection device.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5944492A JPH05219933A (en) | 1992-02-12 | 1992-02-12 | Dna detector |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5944492A JPH05219933A (en) | 1992-02-12 | 1992-02-12 | Dna detector |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05219933A true JPH05219933A (en) | 1993-08-31 |
Family
ID=13113470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5944492A Pending JPH05219933A (en) | 1992-02-12 | 1992-02-12 | Dna detector |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05219933A (en) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8840848B2 (en) | 2010-07-23 | 2014-09-23 | Beckman Coulter, Inc. | System and method including analytical units |
| US8883455B2 (en) | 1998-05-01 | 2014-11-11 | Gen-Probe Incorporated | Method for detecting the presence of a nucleic acid in a sample |
| US8973736B2 (en) | 2011-11-07 | 2015-03-10 | Beckman Coulter, Inc. | Magnetic damping for specimen transport system |
| US9046506B2 (en) | 2011-11-07 | 2015-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | Specimen container detection |
| US9446418B2 (en) | 2011-11-07 | 2016-09-20 | Beckman Coulter, Inc. | Robotic arm |
| US9482684B2 (en) | 2011-11-07 | 2016-11-01 | Beckman Coulter, Inc. | Centrifuge system and workflow |
| US9506943B2 (en) | 2011-11-07 | 2016-11-29 | Beckman Coulter, Inc. | Aliquotter system and workflow |
| US9910054B2 (en) | 2011-11-07 | 2018-03-06 | Beckman Coulter, Inc. | System and method for processing samples |
-
1992
- 1992-02-12 JP JP5944492A patent/JPH05219933A/en active Pending
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9598723B2 (en) | 1998-05-01 | 2017-03-21 | Gen-Probe Incorporated | Automated analyzer for performing a nucleic acid-based assay |
| US8883455B2 (en) | 1998-05-01 | 2014-11-11 | Gen-Probe Incorporated | Method for detecting the presence of a nucleic acid in a sample |
| US9150908B2 (en) | 1998-05-01 | 2015-10-06 | Gen-Probe Incorporated | Method for detecting the presence of a nucleic acid in a sample |
| US8996320B2 (en) | 2010-07-23 | 2015-03-31 | Beckman Coulter, Inc. | System and method including analytical units |
| US8962308B2 (en) | 2010-07-23 | 2015-02-24 | Beckman Coulter, Inc. | System and method including thermal cycler modules |
| US8840848B2 (en) | 2010-07-23 | 2014-09-23 | Beckman Coulter, Inc. | System and method including analytical units |
| US9519000B2 (en) | 2010-07-23 | 2016-12-13 | Beckman Coulter, Inc. | Reagent cartridge |
| US9046455B2 (en) | 2010-07-23 | 2015-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | System and method including multiple processing lanes executing processing protocols |
| US8956570B2 (en) | 2010-07-23 | 2015-02-17 | Beckman Coulter, Inc. | System and method including analytical units |
| US9140715B2 (en) | 2010-07-23 | 2015-09-22 | Beckman Coulter, Inc. | System and method for controlling thermal cycler modules |
| US8932541B2 (en) | 2010-07-23 | 2015-01-13 | Beckman Coulter, Inc. | Pipettor including compliant coupling |
| US9274132B2 (en) | 2010-07-23 | 2016-03-01 | Beckman Coulter, Inc. | Assay cartridge with reaction well |
| US9285382B2 (en) | 2010-07-23 | 2016-03-15 | Beckman Coulter, Inc. | Reaction vessel |
| US8973736B2 (en) | 2011-11-07 | 2015-03-10 | Beckman Coulter, Inc. | Magnetic damping for specimen transport system |
| US9482684B2 (en) | 2011-11-07 | 2016-11-01 | Beckman Coulter, Inc. | Centrifuge system and workflow |
| US9506943B2 (en) | 2011-11-07 | 2016-11-29 | Beckman Coulter, Inc. | Aliquotter system and workflow |
| US9446418B2 (en) | 2011-11-07 | 2016-09-20 | Beckman Coulter, Inc. | Robotic arm |
| US9046506B2 (en) | 2011-11-07 | 2015-06-02 | Beckman Coulter, Inc. | Specimen container detection |
| US9910054B2 (en) | 2011-11-07 | 2018-03-06 | Beckman Coulter, Inc. | System and method for processing samples |
| US10048284B2 (en) | 2011-11-07 | 2018-08-14 | Beckman Coulter, Inc. | Sample container cap with centrifugation status indicator device |
| US10274505B2 (en) | 2011-11-07 | 2019-04-30 | Beckman Coulter, Inc. | Robotic arm |
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