JPH05215736A - Chromato separation method - Google Patents
Chromato separation methodInfo
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- JPH05215736A JPH05215736A JP4018958A JP1895892A JPH05215736A JP H05215736 A JPH05215736 A JP H05215736A JP 4018958 A JP4018958 A JP 4018958A JP 1895892 A JP1895892 A JP 1895892A JP H05215736 A JPH05215736 A JP H05215736A
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、液体クロマトグラフィ
ーにより化合物と化合物を分離する方法に関するもので
あり、研究・製造管理などにおける分析や分取による精
製の目的に用いることができる。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for separating compounds from each other by liquid chromatography, which can be used for the purpose of analysis in research / manufacturing control or purification by fractionation.
【0002】[0002]
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】多糖の
カルボン酸エステル、あるいはこれをシリカゲルなどの
担体に担持した分離剤は、液体クロマトグラフィー用固
定相として光学異性体をはじめとする様々の構造的に類
似した化合物(ジアステレオマーなどの立体異性体、位
置異性体、幾何異性体、不飽和度の異なる化合物、ホモ
ローグに属する化合物など)の分離において、優れた特
性を示すことが明らかになっている(第28回HPLC研究談
話会要旨集、p25、26引用)。この種の固定相を利用す
る場合、従来は実質的に順相系の移動相(具体的には、
ヘキサンなどの非極性有機溶剤とアルコール類の混液)
のみを用いてきた。しかし、順相系の移動相では分離対
象物として極性の強い化合物をもってくることが非常に
困難である。優れた分離性能を有する多糖のカルボン酸
エステルを用いた分離剤を何とかして逆相系でも使える
ようにして、分離対象物の範囲を広げたいというのが本
発明の目的である。2. Description of the Related Art Polycarboxylic acid esters of polysaccharides, or separating agents which carry these on a carrier such as silica gel, have various structures including optical isomers as stationary phases for liquid chromatography. It has been revealed that it shows excellent properties in the separation of chemically similar compounds (stereoisomers such as diastereomers, regioisomers, geometric isomers, compounds with different degrees of unsaturation, compounds belonging to homologues). (The 28th HPLC Research Symposium Abstracts, p25, 26). When using this type of stationary phase, conventionally, a substantially normal phase mobile phase (specifically,
Mixture of non-polar organic solvent such as hexane and alcohols)
I have used only. However, it is very difficult to bring a highly polar compound as an object to be separated in the normal phase mobile phase. It is an object of the present invention to broaden the range of objects to be separated so that a separating agent using a carboxylic acid ester of a polysaccharide having excellent separating performance can be somehow used in a reverse phase system.
【0003】この課題に対して、最近本発明者らは、逆
相系の移動相として、水溶性の有機溶剤と水あるいは各
種塩類を含む水溶液との混液を用いた系が各種化合物の
分離に実用上有効であることを見出した(特願平3−24
5681号)。しかし、塩の添加だけではpHの調整ができ
ず、またpHも不安定であるなどの問題があった。In response to this problem, the present inventors have recently proposed that a system using a mixture of a water-soluble organic solvent and water or an aqueous solution containing various salts as a mobile phase of a reverse phase system can separate various compounds. It was found to be practically effective (Japanese Patent Application No. 3-24).
No. 5681). However, there is a problem that the pH cannot be adjusted only by adding a salt and the pH is unstable.
【0004】[0004]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上に述べ
た従来のクロマトグラフィー系の問題点を解決するため
に鋭意検討を行い、その結果、緩衝液と水溶性有機溶剤
との99:1〜1:99(体積比)の混液を移動相として用
いた場合、よりよい分離を与えることができ、しかも懸
念されていた多糖のカルボン酸エステルの加水分解はな
いことを見出し本発明を完成するに至った。即ち、本発
明は、多糖のカルボン酸エステルを有効成分とする分離
剤を用いて、液体クロマトグラフィーを行うとき、移動
相として緩衝液と水溶性有機溶剤の99:1〜1:99(体
積比)の混液を用いることを特徴とする各種化合物の液
体クロマトグラフィーによる分離法を提供するものであ
る。[Means for Solving the Problems] The present inventors have conducted extensive studies to solve the above-mentioned problems of the conventional chromatography system, and as a result, 99% of the buffer solution and the water-soluble organic solvent were used. It has been found that when a mixed liquid of 1: 1 to 1: 99 (volume ratio) is used as a mobile phase, better separation can be given, and further there is no concern about hydrolysis of the carboxylic acid ester of the polysaccharide. It came to completion. That is, the present invention uses a separating agent containing a carboxylic acid ester of a polysaccharide as an active ingredient, and when performing liquid chromatography, 99: 1 to 1:99 (volume ratio of a buffer solution and a water-soluble organic solvent as a mobile phase). The present invention provides a method for separating various compounds by liquid chromatography, which is characterized in that a mixed solution of (1) is used.
【0005】本発明に用いられる水溶性有機溶剤として
は、水と混和するものであればいかなるものでもよい
が、好ましくは、アセトニトリル、メタノール、エタノ
ールが挙げられるが、他の公知の水溶性有機溶剤も用い
うる。本発明で用いられる緩衝液としては、いかなるも
のでも良い。例を挙げれば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝
液、過塩素酸緩衝液等である。また本発明に用いられる
緩衝液の好ましいpH範囲は2〜8である。本発明の移動
相を調製する方法は、いかなるものであってもよいが、
任意に調製した上記の緩衝液と水溶性有機溶剤とを、体
積比で99:1〜1:99、好ましくは90:10〜10:90の範
囲で混合することが最も容易な方法である。The water-soluble organic solvent used in the present invention may be any one as long as it is miscible with water. Preferred are acetonitrile, methanol and ethanol. Other known water-soluble organic solvents are preferred. Can also be used. Any buffer may be used in the present invention. Examples include acetate buffer, phosphate buffer, perchlorate buffer and the like. The preferred pH range of the buffer used in the present invention is 2-8. The method for preparing the mobile phase of the present invention may be any method,
The easiest method is to mix the above-mentioned arbitrarily prepared buffer solution and the water-soluble organic solvent in a volume ratio of 99: 1 to 1:99, preferably 90:10 to 10:90.
【0006】本発明に用いられる分離剤は多糖のカルボ
ン酸エステルを有効成分とするものであり、具体的に
は、合成多糖、天然多糖、天然物変成多糖のカルボン酸
エステルが用いられ、好ましくは高純度の多糖を容易に
得ることのできるセルロース、アミロース、β−1,4 −
キトサン、キチン、β−1,4 −マンナン、β−1,4 −キ
シラン、イヌリン、α−1,3 −グルカン、β−1,3 −グ
ルカン等の多糖の有する水酸基上の水素原子の一部ある
いは全部、好ましくは85%以上がカルボン酸でエステル
化されたものである。これらの中で最も有効な分離剤の
例としてはセルロース・トリス(4−メチル)ベンゾエ
ート等を挙げることができる。The separating agent used in the present invention contains a carboxylic acid ester of a polysaccharide as an active ingredient, and specifically, a carboxylic acid ester of a synthetic polysaccharide, a natural polysaccharide or a natural product-modified polysaccharide is used, preferably Cellulose, amylose, β-1,4-
Some hydrogen atoms on the hydroxyl groups of polysaccharides such as chitosan, chitin, β-1,4-mannan, β-1,4-xylan, inulin, α-1,3-glucan, β-1,3-glucan Alternatively, all, preferably 85% or more, are esterified with a carboxylic acid. Examples of the most effective separating agent among these include cellulose tris (4-methyl) benzoate and the like.
【0007】本発明の方法により分離される化合物とし
ては、特に限定されず、光学異性体をはじめとし、ジア
ステレオマーなどの立体異性体、位置異性体、幾何異性
体、不飽和度の異なる化合物、ホモローグに属する化合
物など様々の構造的に類似した化合物を分離することが
できる。The compound separated by the method of the present invention is not particularly limited, and includes optical isomers, stereoisomers such as diastereomers, positional isomers, geometric isomers, compounds having different degrees of unsaturation. , Various structurally similar compounds such as compounds belonging to the homologue can be separated.
【0008】[0008]
【実施例】以下、本発明を実施例及び比較例によって詳
述するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
ないことは既に述べた理由より明白である。尚、実施
例、比較例中に用いられるパラメーターk'及びαは以下
のように定義される。EXAMPLES The present invention will be described below in detail with reference to Examples and Comparative Examples, but it is clear from the above-mentioned reasons that the present invention is not limited to these Examples. The parameters k ′ and α used in Examples and Comparative Examples are defined as follows.
【0009】[0009]
【数1】 [Equation 1]
【0010】実施例1 移動相として、pH3、0.1M HClO4-NaClO4 水溶液/CH3C
N =80/20(体積比)の混合液を用いて、ミアンセリン
の光学異性体を分離した。カラムとしては、セルロース
・トリス(4−メチル)ベンゾエートをシリカゲル上に
担持した固定相を充填した長さ25cm、内径0.46cmの市販
のCHIRALCEL OJ(ダイセル化学工業株式会社製)を用い
た。移動相流速は 1.0ml/min 、カラム温度は40℃とし
た。溶離する光学異性体の検出は紫外検出器を用い、波
長は254nm とした。分離結果として、クロマトグラムを
図1に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び
分離係数を表1に示した。Example 1 As a mobile phase, pH 3 , 0.1M HClO 4 -NaClO 4 aqueous solution / CH 3 C
The optical isomers of mianserin were separated using a mixed solution of N = 80/20 (volume ratio). As the column, a commercially available CHIRALCEL OJ (manufactured by Daicel Chemical Industries, Ltd.) having a length of 25 cm and an inner diameter of 0.46 cm packed with a stationary phase in which cellulose tris (4-methyl) benzoate was supported on silica gel was used. The mobile phase flow rate was 1.0 ml / min, and the column temperature was 40 ° C. An ultraviolet detector was used to detect the eluting optical isomer, and the wavelength was set to 254 nm. As a separation result, a chromatogram is shown in FIG. 1, and retention times, volume ratios and separation coefficients of both enantiomers are shown in Table 1.
【0011】比較例1 移動相として、 H2O/CH3CN =80/20(体積比)の混合
液を用い、ミアンセリンの光学異性体を分離した。実験
条件は実施例1と同様にした。両エナンチオマーは1時
間以内に溶出しなかった。Comparative Example 1 As a mobile phase, a mixed solution of H 2 O / CH 3 CN = 80/20 (volume ratio) was used to separate optical isomers of mianserin. The experimental conditions were the same as in Example 1. Both enantiomers did not elute within 1 hour.
【0012】[0012]
【表1】 [Table 1]
【0013】実施例2 移動相として、pH3、0.1M HClO4-NaClO4 水溶液/CH3C
N =80/20(体積比)の混合液を用いて、トリメブチン
の光学異性体を分離した。カラムとしては、セルロース
・トリス(4−メチル)ベンゾエートをシリカゲル上に
担持した固定相を充填した長さ25cm、内径0.46cmの市販
のCHIRALCEL OJ(ダイセル化学工業株式会社製)を用い
た。移動相流速は 1.0ml/min 、カラム温度は40℃とし
た。溶離する光学異性体の検出は紫外検出器を用い、波
長は254nm とした。分離結果として、クロマトグラムを
図2に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び
分離係数を表2に示した。Example 2 As a mobile phase, pH 3 , 0.1 M HClO 4 -NaClO 4 aqueous solution / CH 3 C
The enantiomers of trimebutine were separated using a mixture of N 2 = 80/20 (volume ratio). As the column, a commercially available CHIRALCEL OJ (manufactured by Daicel Chemical Industries, Ltd.) having a length of 25 cm and an inner diameter of 0.46 cm packed with a stationary phase in which cellulose tris (4-methyl) benzoate was supported on silica gel was used. The mobile phase flow rate was 1.0 ml / min, and the column temperature was 40 ° C. An ultraviolet detector was used to detect the eluting optical isomer, and the wavelength was set to 254 nm. As a result of separation, a chromatogram is shown in FIG. 2, and retention times, volume ratios and separation coefficients of both enantiomers are shown in Table 2.
【0014】比較例2 移動相として、0.1M NaClO4 水溶液/CH3CN =80/20
(体積比)の混合液を用い、トリメブチンの光学異性体
を分離した。実験条件は実施例2と同様にした。両エナ
ンチオマーは1時間以内に溶出しなかった。Comparative Example 2 As a mobile phase, 0.1 M NaClO 4 aqueous solution / CH 3 CN = 80/20
The optical isomers of trimebutine were separated using the mixed solution (volume ratio). The experimental conditions were the same as in Example 2. Both enantiomers did not elute within 1 hour.
【0015】比較例3 移動相として、 H2O/CH3CN =80/20(体積比)の混合
液を用い、トリメブチンの光学異性体を分離した。実験
条件は実施例2と同様にした。両エナンチオマーは1時
間以内に溶出しなかった。Comparative Example 3 As a mobile phase, a mixed solution of H 2 O / CH 3 CN = 80/20 (volume ratio) was used to separate optical isomers of trimebutine. The experimental conditions were the same as in Example 2. Both enantiomers did not elute within 1 hour.
【0016】[0016]
【表2】 [Table 2]
【0017】[0017]
【発明の効果】本発明の特定の移動相を用いる方法によ
り、各種化合物を良好に分離することができ、多糖のカ
ルボン酸エステルを用いた分離剤の分離対象化合物の範
囲が広がった。懸念された分離剤として用いられる多糖
のカルボン酸エステルの加水分解などのダメージを受け
ることもなく、逆にpHを酸性よりにすることにより担体
のシリカゲルの寿命が長くなった。また、単に塩だけの
添加に比べ保持時間が短く、短時間での分析が可能とな
った。更に、本移動相中では、分離対象物としてアミン
のような塩基性物質の溶解性が増大することも長所であ
る。従って、本発明の方法は各種化合物の分析一般、特
に血漿、血清、体液など水を主とする試料液中に含まれ
る物質の分析を容易ならしめるものである。Industrial Applicability By the method of using the specific mobile phase of the present invention, various compounds can be favorably separated, and the range of compounds to be separated in the separating agent using the carboxylic acid ester of polysaccharide is expanded. There was no concern about damage such as hydrolysis of the carboxylic acid ester of the polysaccharide used as a separating agent, and conversely, by making the pH more acidic, the life of the silica gel carrier became longer. In addition, the retention time was shorter than the addition of only salt, which enabled analysis in a short time. Further, in this mobile phase, the solubility of a basic substance such as an amine as an object to be separated is also increased. Therefore, the method of the present invention facilitates the general analysis of various compounds, particularly the substances contained in sample liquids such as plasma, serum, and body fluids, which are mainly water.
【図1】実施例1の分離結果を示すクロマトグラムであ
る。FIG. 1 is a chromatogram showing the separation result of Example 1.
【図2】実施例2の分離結果を示すクロマトグラムであ
る。FIG. 2 is a chromatogram showing the separation result of Example 2.
Claims (1)
する分離剤を用いて、液体クロマトグラフィーを行うと
き、移動相として緩衝液と水溶性有機溶剤の99:1〜
1:99(体積比)の混液を用いることを特徴とする各種
化合物の液体クロマトグラフィーによる分離法。1. When performing liquid chromatography using a separating agent containing a carboxylic acid ester of a polysaccharide as an active ingredient, 99: 1 to 1: 1 of a buffer solution and a water-soluble organic solvent as a mobile phase.
A method for separating various compounds by liquid chromatography, which comprises using a mixed solution of 1:99 (volume ratio).
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4018958A JPH05215736A (en) | 1992-02-04 | 1992-02-04 | Chromato separation method |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4018958A JPH05215736A (en) | 1992-02-04 | 1992-02-04 | Chromato separation method |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH05215736A true JPH05215736A (en) | 1993-08-24 |
Family
ID=11986158
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP4018958A Pending JPH05215736A (en) | 1992-02-04 | 1992-02-04 | Chromato separation method |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH05215736A (en) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6143180A (en) * | 1997-10-23 | 2000-11-07 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Method for separating optical isomers |
JP2008518997A (en) * | 2004-11-09 | 2008-06-05 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | Process for the preparation of enantiomers of amide acetonitrile compounds from racemic amide acetonitrile compounds |
CN102527086A (en) * | 2010-12-20 | 2012-07-04 | 义守大学 | Method simulating moving bed to separate three-component compound |
CN103182198A (en) * | 2011-12-29 | 2013-07-03 | 义守大学 | Method for separating macromolecules with different molecular weights by simulated moving bed |
-
1992
- 1992-02-04 JP JP4018958A patent/JPH05215736A/en active Pending
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6143180A (en) * | 1997-10-23 | 2000-11-07 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Method for separating optical isomers |
JP2008518997A (en) * | 2004-11-09 | 2008-06-05 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | Process for the preparation of enantiomers of amide acetonitrile compounds from racemic amide acetonitrile compounds |
CN102527086A (en) * | 2010-12-20 | 2012-07-04 | 义守大学 | Method simulating moving bed to separate three-component compound |
CN103182198A (en) * | 2011-12-29 | 2013-07-03 | 义守大学 | Method for separating macromolecules with different molecular weights by simulated moving bed |
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