JPH05130899A - Determination of blood coagulation - Google Patents
Determination of blood coagulationInfo
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- JPH05130899A JPH05130899A JP24674291A JP24674291A JPH05130899A JP H05130899 A JPH05130899 A JP H05130899A JP 24674291 A JP24674291 A JP 24674291A JP 24674291 A JP24674291 A JP 24674291A JP H05130899 A JPH05130899 A JP H05130899A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、光学的測定装置、粘張
度検出装置などを使用して検体血漿の凝固活性を測定す
るための血液凝固測定方法、詳しくは、従来より大きな
光学的変化量、粘張度変化量などが得られるようにする
ことによって、低凝固活性の検体を測定可能ならしめる
とともに、通常検体においては正確性の向上に寄与する
血液凝固能測定のための血液凝固測定方法に関するもの
である。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a blood coagulation measuring method for measuring the blood coagulation activity of a sample plasma using an optical measuring device, a stickiness detecting device, etc. By measuring the amount of blood coagulation and the amount of change in viscosity, it is possible to measure a sample with low coagulation activity and to improve the accuracy of a normal sample. It is about the method.
【０００２】[0002]
【従来の技術】血液凝固の機構を図３を参照して説明す
る。血液凝固の機構は通常二つの経路から起こるとされ
る。すなわち、一つの経路は、外因系凝固と言われる経
路であり、表皮細胞等から放出される組織トロンボプラ
スチンを出発点として凝固第VII因子が活性化され、こ
の活性化された凝固第VII因子により凝固第X因子が活性
化され、その後、凝固第V因子、第II因子の活性化が起
こり、最終的にはフィブリノーゲンがフィブリンに転化
することにより凝固が起こる経路である。一般的に、こ
の経路の凝固反応の強弱（即ち正常か異常かという判
定）はプロトロンビン時間（ＰＴ）と言われる方法によ
って測定される。もう一つは、内因系凝固と言われる経
路であり、接触等により、凝固第XII因子に活性化が起
こり、第XI因子を活性化させる。引き続いて活性化第XI
因子は第IX因子を活性化させ、さらに活性化第IX因子は
カルシウムイオン・第VIII因子の共同作用のもとに第X
因子を活性化させる。その後、第V因子、II因子の活性
化が起こり、最終的にはフィブリノーゲンがフィブリン
に転化することにより凝固がおこる経路である。一般的
に、この経路の凝固反応の強弱（即ち正常か異常かとい
う判定）は活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴ
Ｔ）、あるいは部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）
と言われる方法によって測定される。また、凝固反応の
最終段階においてはフィブリノーゲンがフィブリンに転
化する反応が必要であり、これにより凝固が完成する。
このため、フィブリノーゲンの血中量を知ることもまた
重要である。血中のフィブリノーゲン量を知る方法とし
てはクラウス（Ｃｌａｕｓｓ）法と呼ばれる方法が一般
的であるが、この方法は、既知のフィブリノーゲン含有
物質と一定量のトロンビン試薬を混合した時に得られる
フィブリノーゲン量と凝固時間の関係から、検体血漿の
フィブリノーゲン量を算出する方法である。2. Description of the Related Art The mechanism of blood coagulation will be described with reference to FIG. The mechanism of blood coagulation is usually thought to occur by two pathways. That is, one pathway is a pathway called extrinsic coagulation, in which coagulation factor VII is activated starting from tissue thromboplastin released from epidermal cells and the like, and coagulation factor VII thus activated causes coagulation. This is a pathway in which coagulation is caused by activation of factor X, followed by activation of coagulation factors V and II, and finally by conversion of fibrinogen into fibrin. Generally, the strength of coagulation reaction in this pathway (that is, determination of normal or abnormal) is measured by a method called prothrombin time (PT). The other is a pathway called intrinsic coagulation, in which coagulation factor XII is activated by contact or the like and activates factor XI. Subsequent activation No. XI
Factor activates factor IX, and activated factor IX activates factor X under the synergistic action of calcium ion and factor VIII.
Activate the factor. After that, activation of factors V and II occurs, and finally, fibrinogen is converted into fibrin, which is a pathway in which coagulation occurs. In general, the strength of coagulation reaction in this pathway (that is, whether it is normal or abnormal) depends on the activated partial thromboplastin time (APT).
T), or partial thromboplastin time (PTT)
Is measured by the method said to be. Further, in the final stage of the coagulation reaction, a reaction in which fibrinogen is converted into fibrin is necessary, which completes coagulation.
For this reason, it is also important to know the blood level of fibrinogen. The method called the Clauss method is generally known as a method for knowing the amount of fibrinogen in blood, and this method is a method in which a known fibrinogen-containing substance and a certain amount of thrombin reagent are mixed with each other to obtain the amount of fibrinogen and coagulation. This is a method of calculating the amount of fibrinogen in the sample plasma from the relationship of time.
【０００３】血液凝固の検出方法としては、血液が凝固
するに従って液体の粘性が高くなるのを調べる方法（粘
張度検出法）と、血液が凝固するに従って白く濁るのを
検出する方法（濁度検出法）、およびこれら二つを混合
した方法とに大別される。粘張度検出法は、検体となる
血漿に棒状あるいは球状の磁性物等を投入し、凝固検出
用試薬を混合したとき、凝固によってこれらの磁性物等
の動きが鈍くなるのを検出する方法である。しかし、こ
の粘張度検出法は血液凝固の最終産物であるフィブリン
塊の形成状態（すなわち、フィブリン量が多少あるいは
凝固状態の硬軟）によって測定結果が大きく左右される
と言う特性を持ち、ある一定値以上の粘張度がなければ
検出できないと言う致命的な欠点がある。また、磁性物
等の動きを観察する測定原理であるために、磁性物等の
強弱に影響されると言う欠点もある。濁度検出法は、検
体血漿と凝固試薬とを混合することによってのみ凝固測
定を行なう方法であり、磁性物等の投入は必要としな
い。検出する方法としては透過光検出方式、または散乱
光検出方式がある。これらの検出方式ではフィブリノー
ゲン量が少ない場合でも透過光量の変化、あるいは散乱
光量の変化として捉えることができるので、粘張度検出
法にみられるような欠点はない。ただ、いずれの検出方
法においても、光量の変化量が多いほうがより正確な検
出ができることになるのは当然であるので、使用される
凝固試薬は光変化量が大きく表示されるような特性を持
つものが望ましい。As a method of detecting blood coagulation, a method of examining the viscosity of a liquid as the blood coagulates (viscosity detection method) and a method of detecting white turbidity as the blood coagulates (turbidity) Detection method) and a method in which these two are mixed. The stickiness detection method is a method in which when a rod-shaped or spherical magnetic substance or the like is put into plasma as a sample, and a reagent for coagulation detection is mixed, it is detected that the movement of these magnetic substances becomes slow due to coagulation. is there. However, this stickiness detection method has the characteristic that the measurement result is greatly influenced by the formation state of the fibrin clot, which is the final product of blood coagulation (that is, the amount of fibrin is slightly or the coagulation state is hard or soft), and it has a certain value. There is a fatal defect that it cannot be detected unless the viscosity is more than the value. In addition, since the measurement principle is to observe the movement of a magnetic substance or the like, there is also a drawback that it is affected by the strength of the magnetic substance or the like. The turbidity detection method is a method in which coagulation measurement is performed only by mixing a sample plasma and a coagulation reagent, and it is not necessary to add a magnetic substance or the like. As a detecting method, there are a transmitted light detecting method and a scattered light detecting method. With these detection methods, even if the amount of fibrinogen is small, it can be grasped as a change in the amount of transmitted light or a change in the amount of scattered light, and therefore there is no drawback as seen in the stickiness detection method. However, in any of the detection methods, it is natural that more accurate change can be detected when the amount of change in the light amount is larger, so the coagulation reagent used has a characteristic that the amount of change in the light is displayed large. Things are desirable.
【０００４】図２は、散乱光検出方式で得られる信号強
度の変化を説明するための図である。血漿が凝固してい
く過程を光学式検出装置（散乱光検出方式）で調べた時
の結果を示す。図中のＡ点は血漿と凝固試薬が混合され
た時点であり、その後、多段におよぶ凝固反応が進行
し、安定的フィブリンの形成により散乱光の変化となっ
て現れる（図中Ｂ点）。安定的フィブリンの形成が進行
すると散乱光の変化は増加するが、ほとんどのフィブリ
ノーゲンが消費され、散乱光量の変化はなくなり、反応
は終息する（Ｃ点）。凝固時間は、たとえばＢ点の散乱
光量を０％としＣ点の散乱光量を１００％とする時の５
０％点である時間（Ｔ点）で表すことができる。△Ｈは
凝固反応開始時と終了時との散乱光量の変化分である。FIG. 2 is a diagram for explaining a change in signal intensity obtained by the scattered light detection method. The results of examining the process of blood plasma coagulation with an optical detection device (scattered light detection method) are shown. The point A in the figure is the time point when the plasma and the coagulation reagent are mixed, and thereafter, the coagulation reaction proceeds in multiple stages, and changes in scattered light appear due to the formation of stable fibrin (point B in the figure). When the formation of stable fibrin proceeds, the change in scattered light increases, but most of the fibrinogen is consumed, the change in scattered light amount disappears, and the reaction ends (point C). The coagulation time is, for example, 5 when the amount of scattered light at point B is 0% and the amount of scattered light at point C is 100%.
It can be represented by the time (T point) which is the 0% point. ΔH is the amount of change in the amount of scattered light at the start and end of the coagulation reaction.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】従来の凝固試薬は、凝
固因子に対する活性化の反応性をより正確に持ち、か
つ、最終的にフィブリンを形成することが命題であり、
正確な測定結果の表示に関してはあまり省みられなかっ
た。そのため、凝固に関する検査結果が大きくバラつい
ていても容認するしかない状況となっていた。本発明が
解決しようとする課題は、正確な測定結果の表示を行な
うために、光学的変化量を大きくするような組成に調製
することにある。このことによって、低凝固活性の検体
を測定可能とならしめると共に、通常検体においては正
確性の向上に寄与するものである。本発明は、上記の諸
点に鑑みなされたもので、光学的変化量を大きくするこ
とにより、低凝固活性の検体を測定可能にし、通常検体
においては正確性を向上させることができる血液凝固測
定方法を提供することを目的とするものである。SUMMARY OF THE INVENTION The conventional coagulation reagents are required to have more accurate reactivity of activation to coagulation factors and ultimately form fibrin.
Not much was done on the display of accurate measurement results. Therefore, even if the test results regarding coagulation vary widely, there is no choice but to tolerate it. The problem to be solved by the present invention is to prepare a composition that increases the amount of optical change in order to display accurate measurement results. This makes it possible to measure a sample having low coagulation activity and contributes to improvement in accuracy in a normal sample. The present invention has been made in view of the above points, and by increasing the amount of optical change, it is possible to measure a sample having low coagulation activity, and a blood coagulation measuring method capable of improving accuracy in a normal sample. It is intended to provide.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
めに、本発明の血液凝固測定方法は、検体血漿に試薬を
混合して凝固反応を行なわせ、反応の進行に伴う混合液
の光学的特性又は粘張度を経時的に追跡し、検体血漿の
凝固能を測定する方法において、検体血漿に、高分子物
質を混合する第一過程と、第一過程における混合液に、
凝固因子活性化物質を含有する試薬を混合する第二過程
と、を包含することを特徴としている。高分子物質とし
ては、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコー
ル、ポリノキシリンなどからなる群より選ばれた高分子
ビニルや、デキストラン、グリコーゲン、可溶性デンプ
ン、デキストリン、アガロースなどからなる群より選ば
れた高分子多糖などが使用できる。高分子物質は、高分
子ビニル、高分子多糖の一方又は両方を使用する。例を
挙げて詳細に説明すれば、例えばポリエチレングリコー
ルでは分子量１，０００〜５００，０００（より好適に
は５，０００〜１００，０００、最良は２０，０００）
のもの、デキストランでは分子量５，０００〜２，００
０，０００（より好適には５０，０００〜５００，００
０、最良は１７０，０００〜２００，０００）のものが
良い。含有量については適宜決めれば良いが、少な過ぎ
ると高感度の効果が得られず、多過ぎると未凝固時と凝
固時の濁度差が不十分になるなどの不都合が発生するの
で、１〜数％（Ｗ／Ｖ）が妥当である。上記の第一過程
において、検体血漿中に高分子物質を直接混合してもよ
く、高分子物質を含有する液を検体血漿に混合してもよ
い。In order to achieve the above-mentioned object, the blood coagulation measuring method of the present invention comprises a method of mixing a reagent with a sample plasma to cause a coagulation reaction, and performing an optical reaction of a mixed solution as the reaction progresses. In the method of measuring the coagulation ability of the sample plasma by tracing the physical characteristics or the degree of stickiness over time, the first step of mixing the polymeric material into the sample plasma, and the mixed solution in the first step,
And a second step of mixing a reagent containing a coagulation factor activator. As the polymer substance, a polymer vinyl selected from the group consisting of polyethylene glycol, polyvinyl alcohol, polynoxyline, etc., and a polymer polysaccharide selected from the group consisting of dextran, glycogen, soluble starch, dextrin, agarose, etc. are used. it can. As the polymer substance, one or both of polymer vinyl and polymer polysaccharide is used. For example, polyethylene glycol has a molecular weight of 1,000 to 500,000 (more preferably 5,000 to 100,000, most preferably 20,000).
, Dextran has a molecular weight of 5,000 to 2,000.
50,000 (more preferably 50,000 to 500,000)
0, the best is 170,000 to 200,000). The content may be appropriately determined, but if it is too small, the effect of high sensitivity cannot be obtained, and if it is too large, disadvantages such as insufficient turbidity difference between uncoagulated and coagulated occur. A few% (W / V) is appropriate. In the above-mentioned first step, the polymer substance may be directly mixed with the sample plasma, or the liquid containing the polymer substance may be mixed with the sample plasma.
【０００７】凝固因子活性化物質を含有する試薬として
は次のものがある。 （ａ） 組織トロンボプラスチン含有試薬 プロトロンビン時間試薬、ビタミンＫ由来酵素活性測定
用試薬（複合因子測定用試薬） （ｂ） リン脂質含有試薬 部分トロンボプラスチン時間、活性化部分トロンボプラ
スチン時間 （ｃ） トロンビン含有試薬 フィブリノーゲン測定用試薬、ＡＴ−III測定用試薬 組織トロンボプラスチン含有試薬としては、プロトロン
ビン時間試薬（ＰＴ試薬、図３において外因系凝固反応
を総合的に測定する試薬）が米国ＤＡＤＥ社、ＯＲＴＨ
Ｏ社、ＧＤ社、独国Ｂｅｒｉｎｇ社、ＢＭ社等から販売
されている。ビタミンＫ由来酵素活性測定用試薬（複合
因子測定用試薬）としてはエーザイ（株）よりトロンボ
テスト、ヘパプラスチンテスト（いずれも商品名）とし
て、また国際試薬（株）より複合因子Ｈ、複合因子Ｔ
（いずれも商品名）として販売されている。リン脂質含
有試薬としてはＡＰＴＴ試薬またはＰＴＴ試薬（図３に
おいて内因系凝固反応を総合的に測定する試薬）が米国
ＤＡＤＥ社、ＯＲＴＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅｒｉｎｇ
社、ＢＭ社等から販売されている。トロンビン含有試薬
としては、フィブリノーゲン測定用試薬、トロンビンタ
イム測定用試薬、あるいは、ＡＴ−III測定用試薬とし
て、米国ＤＡＤＥ社、ＯＲＴＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅ
ｒｉｎｇ社、ＢＭ社、国際試薬（株）等から販売されて
いる。上記のように、本発明においては、凝固因子活性
化物質を含有する試薬として、組織トロンボプラスチン
含有試薬、リン脂質含有試薬、トロンビン含有試薬から
なる群より選ばれた試薬を用いる。また、混合しようと
する試薬を次の１〜３の内、少なくとも１つの条件を満
たす状態にしておくとさらに感度が高くなる（３つの条
件を満たした時が最良）。 １．電気伝導度を４．０〜１５mSに調整する（より好適
には６．５〜１１．０mS）。 ２．ｐＨを６．７〜８．２に調整する（より好適には
７．２〜７．５）。 ３．浸透圧を１００〜７００mOsm／kgcm2に調整する
（より好適には３５０〜７００mOsm／kgcm2）。 電気伝導度の調整には電解質を用いれば良い（例えば食
塩）。また、ｐＨの調整には酸あるいはアルカリを用い
れば良い（例えば塩酸、水酸化ナトリウム）。また、浸
透圧の調整には、非電解質であり同時に水溶性である物
質を使用すれば良い（例えば糖類や尿素）。The reagents containing a coagulation factor activator are as follows. (A) Tissue thromboplastin-containing reagent Prothrombin time reagent, vitamin K-derived enzyme activity measurement reagent (complex factor measurement reagent) (b) Phospholipid-containing reagent partial thromboplastin time, activated partial thromboplastin time (c) Thrombin-containing reagent fibrinogen measurement As a reagent for AT-III assay, a reagent containing tissue thromboplastin, a prothrombin time reagent (PT reagent, a reagent for comprehensively measuring an extrinsic coagulation reaction in FIG. 3) is ORTH
It is sold by O company, GD company, Bering company in Germany, BM company and the like. As a reagent for measuring vitamin K-derived enzyme activity (reagent for measuring complex factor), thrombotest and hepaplastin test (both are trade names) from Eisai Co., Ltd., and complex factor H and complex factor T from International Reagents Co., Ltd.
(Both are trade names). As the phospholipid-containing reagent, an APTT reagent or a PTT reagent (a reagent that comprehensively measures an endogenous coagulation reaction in FIG. 3) is DADE, ORTHO, GD, Bering, Germany.
And BM, etc. As the thrombin-containing reagent, a fibrinogen measuring reagent, a thrombin time measuring reagent, or an AT-III measuring reagent such as DADE, ORTHO, GD, Be, Germany
It is sold by Ring Co., BM Co., Kokusai Reagent Co., Ltd., etc. As described above, in the present invention, a reagent selected from the group consisting of a tissue thromboplastin-containing reagent, a phospholipid-containing reagent and a thrombin-containing reagent is used as the reagent containing the coagulation factor activator. Further, if the reagent to be mixed is set in a state satisfying at least one of the following 1 to 3, the sensitivity is further enhanced (the best condition is when 3 conditions are satisfied). 1. The electric conductivity is adjusted to 4.0 to 15 mS (more preferably 6.5 to 11.0 mS). 2. Adjust the pH to 6.7-8.2 (more preferably 7.2-7.5). 3. The osmotic pressure is adjusted to 100 to 700 mOsm / kgcm 2 (more preferably 350 to 700 mOsm / kgcm 2 ). An electrolyte may be used to adjust the electric conductivity (for example, salt). Further, acid or alkali may be used to adjust the pH (for example, hydrochloric acid, sodium hydroxide). For adjusting the osmotic pressure, a substance that is a non-electrolyte and is also water-soluble may be used (for example, sugar or urea).
【０００８】[0008]
【作用】検体血漿に高分子物質含有液が混合される。こ
の血漿に凝固因子活性化物質が混合されると、血漿中の
凝固因子が次々に活性化されてゆき、最終的にフィブリ
ノーゲン（繊維素原）がフィブリンに転化し凝固反応が
終了する。その最終過程においては、まずフィブリンの
モノマーができ、そのモノマーは次々に重合してポリマ
ー（繊維状）を形成することによりフィブリンは繊維状
になる。フィブリン繊維は網のように絡み合うことによ
り混合液は濁り、かつ、ゲル化する。凝固因子活性化物
質混合から逐次混合液の光学的特性（例えば散乱光強
度）を追跡することにより、凝固時間の測定をすること
ができる。本発明の方法では、凝固因子活性化物質の混
合前に高分子物質を混合しているので、フィブリン繊維
と高分子物質の共存により絡み合いはより複雑なものと
なり、凝固因子活性化物質混合直後（凝固前）と凝固終
了時の光学的特性の差は従来より大きくなる。つまり高
感度になる。[Function] A polymer-containing liquid is mixed with the sample plasma. When this plasma is mixed with a coagulation factor activator, coagulation factors in the plasma are sequentially activated, and finally fibrinogen (fibrinogen) is converted into fibrin to complete the coagulation reaction. In the final step, fibrin monomers are first formed, and the monomers are polymerized one after another to form a polymer (fibrous), whereby fibrin becomes fibrous. When the fibrin fibers are entangled like a net, the mixture becomes cloudy and gels. The coagulation time can be measured by tracing the optical properties (for example, scattered light intensity) of the mixed solution sequentially from the coagulation factor activator mixture. In the method of the present invention, since the polymer substance is mixed before the coagulation factor activator is mixed, the entanglement becomes more complicated due to the coexistence of the fibrin fiber and the polymer substance, and immediately after the coagulation factor activator mixture ( The difference in optical characteristics between before solidification) and at the end of solidification is larger than before. In other words, it has high sensitivity.
【０００９】[0009]
【実施例】以下、本発明の実施例を挙げて説明する。 実施例１ 血漿に高分子物質として０．１％（Ｗ／Ｖ）デキストラ
ン（分子量２００，０００）を添加したものと、なにも
混合しない血漿とを使用して、プロトロンビン時間測定
を行なった、結果、図１に示すような凝固曲線を得た。
それらの凝固曲線を比較すると、高分子物質を混合した
血漿では、これを混合しなかった血漿に比べ散乱光の変
化量が大きくなり、凝固反応をより精密に解析できるこ
とがわかる。なお、凝固因子活性化物質を含有する試薬
として、ＤＡＤＥ社トロンボプラスチンＣ（商品名）を
検体０．１mlに対して、試薬０．２mlを添加・混合し
た。EXAMPLES Examples of the present invention will be described below. Example 1 Prothrombin time measurement was carried out using plasma to which 0.1% (W / V) dextran (molecular weight 200,000) was added as a high molecular weight substance and plasma to which nothing was mixed. As a result, a solidification curve as shown in FIG. 1 was obtained.
Comparing the coagulation curves with each other, it can be seen that the plasma mixed with the polymer substance has a larger change in scattered light than the plasma not mixed with the polymer, and the coagulation reaction can be analyzed more precisely. As a reagent containing a coagulation factor activating substance, 0.2 ml of a reagent was added to and mixed with 0.1 ml of a sample of thromboplastin C (trade name) manufactured by DADE.
【００１０】実施例２ 検体血漿中のフィブリノーゲン濃度を知るためには、一
般的にクラウス（Ｃｌａｕｓｓ）法と呼称される方法が
採られる。この方法は、既知のフィブリノーゲン含有物
質と一定量のトロンビン試薬を混合した時に得られるフ
ィブリノーゲン量と凝固時間の関係から、検体血漿のフ
ィブリノーゲン量を算出する方法であるが、手順として
は、検体血漿２０μ1に対して１８０μlの緩衝液または
生理食塩水を混合・希釈した後、凝固因子活性化物質と
してトロンビン試薬（１００μl）を添加し、凝固せし
める。本測定過程において、すなわち、緩衝液または生
理食塩水を混合・希釈する過程において、本発明が主張
するところの高分子物質を添加する。高分子物質として
は、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、
ポリノキシリンなどの高分子ビニルや、デキストラン、
グリコーゲン、可溶性デンプン、デキストリン、アガロ
ースなどの高分子多糖などが使用できる。本実施例で
は、一例として、ポリエチレングリコール（分子量２
０，０００）のもの、０．６％（Ｗ／Ｖ）を添加した。
このとき、凝固反応による散乱光量の変化量を比較する
と表１のようになる。高分子物質を添加しない従来法の
散乱光の変化量に比較して、高分子物質を添加した本発
明の方法の場合では、検出限界点の拡大と各フィブリノ
ーゲン濃度における正確性の向上が認められる。なお、
表１において、＊印は測定不能を示している。Example 2 In order to know the fibrinogen concentration in the sample plasma, a method generally called the Clauss method is adopted. This method is a method for calculating the amount of fibrinogen in the sample plasma from the relationship between the amount of fibrinogen obtained when a known fibrinogen-containing substance and a certain amount of thrombin reagent are mixed and the coagulation time. After mixing and diluting 180 μl of a buffer solution or physiological saline, the thrombin reagent (100 μl) as a coagulation factor activator is added to coagulate. In the measurement process, that is, in the process of mixing / diluting the buffer solution or the physiological saline, the polymer substance claimed by the present invention is added. As the polymer substance, polyethylene glycol, polyvinyl alcohol,
Polymer vinyl such as polyoxyline, dextran,
Polymeric polysaccharides such as glycogen, soluble starch, dextrin and agarose can be used. In the present embodiment, as an example, polyethylene glycol (molecular weight 2
50,000), 0.6% (W / V) was added.
At this time, the amount of change in the scattered light amount due to the coagulation reaction is compared as shown in Table 1. In the case of the method of the present invention in which the polymer substance is added, the detection limit point is expanded and the accuracy in each fibrinogen concentration is improved as compared with the amount of change in scattered light in the conventional method in which the polymer substance is not added. .. In addition,
In Table 1, the mark * indicates that measurement is impossible.
【００１１】[0011]
【表１】 [Table 1]
【００１２】[0012]
【発明の効果】本発明の方法により得られる高分子含有
凝固反応組成物は、従来の凝固反応条件に比較して、血
液凝固の最終産物であるフィブリン塊の形成状態が強固
であり、そのため、正確な凝固時間の検出ができるよう
になると共に、フィブリノーゲン量が少ない場合でも検
出できる範囲が拡大すると言う特性を持つ。粘張度検出
法を測定原理とする測定機器では、磁性物等の強弱に影
響されると言う欠点も解決でき、また、濁度検出法にお
いては透過光あるいは散乱光の変化量が増大し、より正
確な検出ができることになる。以上は、血液凝固の分野
において説明したが、凝固反応環境を整備し、反応を顕
在化させる方法は、本発明が示す凝固因子活性化物質を
使用した測定（プロトロンビン時間、ビタミンＫ由来酵
素活性群測定（複合因子測定）、部分トロンボプラスチ
ン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、フィブリ
ノーゲン測定、ＡＴ−III測定）等に限定されず、最終
的に凝固を発生せしめ、これを測定するもの全てに適用
できる。例としては、各凝固因子測定、ヘパリン測定、
異常フィブリノーゲン検出（トロンビン時間測定）、そ
の他凝固異常検出等が挙げられる。EFFECT OF THE INVENTION The polymer-containing coagulation reaction composition obtained by the method of the present invention has a stronger formation state of fibrin clot, which is the final product of blood coagulation, as compared with the conventional coagulation reaction conditions. It has the property that the coagulation time can be detected accurately and that the detectable range is expanded even when the amount of fibrinogen is small. With a measuring instrument that uses the stickiness detection method as the measurement principle, it is possible to solve the drawback that it is affected by the strength and weakness of magnetic substances, and in the turbidity detection method, the amount of change in transmitted light or scattered light increases, More accurate detection will be possible. The above is explained in the field of blood coagulation, but the method of preparing the coagulation reaction environment and eliciting the reaction is the measurement using the coagulation factor activator of the present invention (prothrombin time, vitamin K-derived enzyme activity group). The present invention is not limited to measurement (complex factor measurement), partial thromboplastin time, activated partial thromboplastin time, fibrinogen measurement, AT-III measurement) and the like, and can be applied to all those that finally cause coagulation and measure this. For example, each clotting factor measurement, heparin measurement,
Examples include abnormal fibrinogen detection (thrombin time measurement) and other abnormal coagulation detection.
【図１】本発明の方法により血液凝固を測定した場合
と、従来法により血液凝固を測定した場合の凝固曲線を
示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing coagulation curves when blood coagulation is measured by the method of the present invention and when blood coagulation is measured by a conventional method.
【図２】散乱光検出方式で得られる信号の変化と血液凝
固との関係を示すグラフである。FIG. 2 is a graph showing the relationship between changes in signals obtained by the scattered light detection method and blood coagulation.
【図３】血液凝固の機構を示すブロック図である。FIG. 3 is a block diagram showing a mechanism of blood coagulation.
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【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成４年１０月１９日[Submission date] October 19, 1992
【手続補正１】[Procedure Amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１２[Correction target item name] 0012
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００１２】[0012]
【発明の効果】 本発明の方法により得られる高分子含
有凝固反応組成物は、従来の凝固反応条件に比較して、
血液凝固の最終産物であるフィブリン塊の形成状態が強
固であり、そのため、正確な凝固時間の検出ができるよ
うになると共に、フィブリノーゲン量が少ない場合でも
検出できる範囲が拡大すると言う特性を持つ。粘張度検
出法を測定原理とする測定機器では、磁性物等の強弱に
影響されると言う欠点も解決でき、また、濁度検出法に
おいては透過光あるいは散乱光の変化量が増大し、より
正確な検出ができることになる。以上は、血液凝固の分
野において説明したが、凝固反応環境を整備し、反応を
顕在化させる方法は、本発明が示す凝固因子活性化物質
を使用した測定（プロトロンビン時間、ビタミンＫ由来
酵素活性群測定（複合因子測定）、部分トロンボプラス
チン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、フィブ
リノーゲン測定、ＡＴ−ＩＩＩ測定）等に限定されず、
最終的に凝固を発生せしめ、これを測定するもの全てに
適用できる。例としては、各凝固因子測定、ヘパリン測
定、異常フィブリノーゲン検出（トロンビン時間測
定）、その他凝固異常検出等が挙げられる。The polymer-containing coagulation reaction composition obtained by the method of the present invention has
The fibrin clot, which is the final product of blood coagulation, has a strong formation state, so that it is possible to accurately detect the coagulation time and to expand the detectable range even when the amount of fibrinogen is small. With a measuring instrument that uses the stickiness detection method as the measurement principle, it is possible to solve the drawback that it is affected by the strength and weakness of magnetic substances, and in the turbidity detection method, the amount of change in transmitted light or scattered light increases, More accurate detection will be possible. The above is explained in the field of blood coagulation, but the method of preparing the coagulation reaction environment and eliciting the reaction is the measurement using the coagulation factor activator of the present invention (prothrombin time, vitamin K-derived enzyme activity group). Measurement (complex factor measurement), partial thromboplastin time, activated partial thromboplastin time, fibrinogen measurement, AT-III measurement) and the like,
It finally causes coagulation and can be applied to anything that measures it. Examples include various coagulation factor measurements, heparin measurements, abnormal fibrinogen detection (thrombin time measurement), and other abnormal coagulation detection.
【手続補正２】[Procedure Amendment 2]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】図面の簡単な説明[Name of item to be corrected] Brief description of the drawing
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]
【図１】 本発明の方法により血液凝固を測定した場合
と、従来法により血液凝固を測定した場合の凝固曲線を
示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing coagulation curves when blood coagulation is measured by the method of the present invention and when blood coagulation is measured by a conventional method.
【図２】 散乱光検出方式で得られる信号の変化と血液
凝固との関係を示すグラフである。FIG. 2 is a graph showing the relationship between changes in signals obtained by the scattered light detection method and blood coagulation.
【図３】 血液凝固の機構を示すブロック図である。FIG. 3 is a block diagram showing a mechanism of blood coagulation.
Claims (7)
なわせ、反応の進行に伴う混合液の光学的特性又は粘張
度を経時的に追跡し、検体血漿の凝固能を測定する方法
において、 検体血漿に、高分子物質を混合する第一過程と、 第一過程における混合液に、凝固因子活性化物質を含有
する試薬を混合する第二過程と、を包含することを特徴
とする血液凝固測定方法。1. A method for measuring the coagulation ability of a sample plasma by mixing a reagent into the sample plasma to cause a coagulation reaction and tracing the optical characteristics or the viscosity of the mixed solution with the progress of the reaction over time. In the above, the method includes a first step of mixing a polymer substance with a sample plasma, and a second step of mixing a reagent containing a coagulation factor activator with the mixed solution in the first step. Blood coagulation measurement method.
子多糖の少なくとも一方を用いることを特徴とする請求
項１記載の血液凝固測定方法。2. The blood coagulation measuring method according to claim 1, wherein at least one of polymer vinyl and polymer polysaccharide is used as the polymer substance.
ール、ポリビニルアルコール、ポリノキシリンからなる
群より選ばれた高分子ビニルを用いることを特徴とする
請求項１記載の血液凝固測定方法。3. The blood coagulation measuring method according to claim 1, wherein a polymer vinyl selected from the group consisting of polyethylene glycol, polyvinyl alcohol and polyoxyline is used as the polymer substance.
コーゲン、可溶性デンプン、デキストリン、アガロース
からなる群より選ばれた高分子多糖を用いることを特徴
とする請求項１記載の血液凝固測定方法。4. The method for measuring blood coagulation according to claim 1, wherein a polymeric polysaccharide selected from the group consisting of dextran, glycogen, soluble starch, dextrin and agarose is used as the polymeric substance.
直接混合する過程であることを特徴とする請求項１記載
の血液凝固測定方法。5. The blood coagulation measuring method according to claim 1, wherein the first step is a step of directly mixing a polymer substance into a sample plasma.
検体血漿に混合する過程であることを特徴とする請求項
１記載の血液凝固測定方法。6. The blood coagulation measuring method according to claim 1, wherein the first step is a step of mixing a liquid containing a high molecular substance with sample plasma.
て、組織トロンボプラスチン含有試薬、リン脂質含有試
薬、トロンビン含有試薬からなる群より選ばれた試薬を
用いることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載
の血液凝固測定方法。7. The reagent selected from the group consisting of a tissue thromboplastin-containing reagent, a phospholipid-containing reagent, and a thrombin-containing reagent is used as a reagent containing a coagulation factor activator. The method for measuring blood coagulation according to any one.
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|---|---|---|---|---|
| JP2005156482A (en) * | 2003-11-28 | 2005-06-16 | Sysmex Corp | Method for measuring blood coagulation ability, and reagent for measuring blood coagulation ability |
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| JP3074611B2 (en) | 2000-08-07 |
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