JPH0481665A - 生体アミノ酸分析法 - Google Patents
生体アミノ酸分析法Info
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- JPH0481665A JPH0481665A JP2082277A JP8227790A JPH0481665A JP H0481665 A JPH0481665 A JP H0481665A JP 2082277 A JP2082277 A JP 2082277A JP 8227790 A JP8227790 A JP 8227790A JP H0481665 A JPH0481665 A JP H0481665A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（イ）産業上の利用分野
本発明は、高速液体クロマトグラフィによる生体アミノ
酸の分析方法に関し、特に蛋白質を構成しているアミノ
酸の高速液体クロマトグラフィによる分析方法に関する
。
酸の分析方法に関し、特に蛋白質を構成しているアミノ
酸の高速液体クロマトグラフィによる分析方法に関する
。
また、本発明は、食品、医薬品、生化学並びに医学の分
野における生体アミノ酸の分析方法に関する。
野における生体アミノ酸の分析方法に関する。
（ロ）従来の技術
例えば、蛋白質を構成するアミノ酸についての高速液体
クロマトグラフィによる分析は、アミノ酸が、β−メル
カプトプロピオン酸のような還元剤の存在下に、蛍光誘
導体化剤のオルト−フタルアルデヒドと反応して発蛍光
の誘導体を形成することを利用して、アミノ酸を前もっ
てラベル化しておき、このラベル化されたアミノ酸を高
速液体クロマトグラフィにより分離して、蛍光法により
夫々のアミノ酸を定量している。
クロマトグラフィによる分析は、アミノ酸が、β−メル
カプトプロピオン酸のような還元剤の存在下に、蛍光誘
導体化剤のオルト−フタルアルデヒドと反応して発蛍光
の誘導体を形成することを利用して、アミノ酸を前もっ
てラベル化しておき、このラベル化されたアミノ酸を高
速液体クロマトグラフィにより分離して、蛍光法により
夫々のアミノ酸を定量している。
くハ）発明が解決しようとする課題
しかし、蛍光誘導体化剤のオルト−フタルアルデヒドは
、−級アミノ酸について発蛍光の誘導体を形成するが、
二級アミノ酸については、発蛍光しないので、二級アミ
ノ酸については同時に分析することができず問題とされ
ている。
、−級アミノ酸について発蛍光の誘導体を形成するが、
二級アミノ酸については、発蛍光しないので、二級アミ
ノ酸については同時に分析することができず問題とされ
ている。
そこで、試料中の二級アミノ酸をＦＭＯＣ（９フルオレ
ニルメチルクロロ示ルマート）と反応させて発蛍光誘導
体を形成させて、高速液体クロマトグラフィ分析法によ
り、二級アミノ酸について分析する方法が提案されてい
る。
ニルメチルクロロ示ルマート）と反応させて発蛍光誘導
体を形成させて、高速液体クロマトグラフィ分析法によ
り、二級アミノ酸について分析する方法が提案されてい
る。
この方法は、−級アミノ酸をオルト−フタルアルデヒド
により発蛍光誘導体化させ、次いでＦＭ○Ｃにより、二
級アミノ酸を発蛍光の誘導体化させて、高速液体クロマ
トグラフィにより分離するものである。
により発蛍光誘導体化させ、次いでＦＭ○Ｃにより、二
級アミノ酸を発蛍光の誘導体化させて、高速液体クロマ
トグラフィにより分離するものである。
この方法では、まず−級アミノ酸の誘導体の夫々が順次
溶出し、次ぎに二級アミノ酸が溶出するので、まず−級
アミノ酸の誘導体について、励起波長３４０ｎｍ、検出
蛍光波長４５０ｎｍ ″Ｃ測定し、その後、二級アミノ
酸について、検出波長を、励起波長が２６６ ｎ、ｍ、
蛍光波長が３０５ｎｍ に切り替えて測定が行われる。
溶出し、次ぎに二級アミノ酸が溶出するので、まず−級
アミノ酸の誘導体について、励起波長３４０ｎｍ、検出
蛍光波長４５０ｎｍ ″Ｃ測定し、その後、二級アミノ
酸について、検出波長を、励起波長が２６６ ｎ、ｍ、
蛍光波長が３０５ｎｍ に切り替えて測定が行われる。
しかし、この方法は、二級アミノ酸の溶出が一級アミノ
酸の溶出の後であるために、分析時間が長くなり、また
、二級アミノ酸の発蛍光誘導体の検出波長が一級アミノ
酸誘導体の場合より著しく短波長側であり、夾雑物によ
り影響を受は易く問題が残っている。
酸の溶出の後であるために、分析時間が長くなり、また
、二級アミノ酸の発蛍光誘導体の検出波長が一級アミノ
酸誘導体の場合より著しく短波長側であり、夾雑物によ
り影響を受は易く問題が残っている。
本発明は、高速液体クロマトグラフィによるアミノ酸分
析における二級アミノ酸の分析に基づく課題を解決する
ことを目的としている。
析における二級アミノ酸の分析に基づく課題を解決する
ことを目的としている。
（ニ）課題を解決するための手段
本発明は、試料中の一級アミノ酸及び二級アミノ酸につ
いて、プレカラム法で異なる検出波長で同時に測定する
ことができるアミノ酸分析法を提案するものである。
いて、プレカラム法で異なる検出波長で同時に測定する
ことができるアミノ酸分析法を提案するものである。
即ち、本発明は、試料中の一級アミノ酸を βメルカプ
トプロピオン酸の存在下にオルト−フタルアルデヒドと
反応させて発蛍光誘導体化させ、次いで、試料中の二級
アミノ酸を４−クロロ−７二トロベンゾー２−オキサ−
１，３−ジアゾールと反応させて発蛍光誘導体化させ、
この発蛍光誘導体化された試料を逆相クロマトグラフィ
相に通し、該逆相クロマトグラフィ相から溶出する発蛍
光誘導体について、異なる二つの波長帯域において同時
に蛍光検出することを特徴とする生体アミノ酸分析方法
にある。
トプロピオン酸の存在下にオルト−フタルアルデヒドと
反応させて発蛍光誘導体化させ、次いで、試料中の二級
アミノ酸を４−クロロ−７二トロベンゾー２−オキサ−
１，３−ジアゾールと反応させて発蛍光誘導体化させ、
この発蛍光誘導体化された試料を逆相クロマトグラフィ
相に通し、該逆相クロマトグラフィ相から溶出する発蛍
光誘導体について、異なる二つの波長帯域において同時
に蛍光検出することを特徴とする生体アミノ酸分析方法
にある。
本発明は、−級アミノ酸を β−メルカプトプロピオン
酸の存在下にオルトフタルアルデヒドにより発蛍光誘導
体化させ、次いで二級アミノ酸を２−オルト−フタルア
ルデヒドにより発蛍光誘導体化させることによって、二
級アミノ酸を一級アミノ酸と共に、高速液体クロマトグ
ラフィ法、特に逆相クロマトグラフィ法により測定する
ものである。
酸の存在下にオルトフタルアルデヒドにより発蛍光誘導
体化させ、次いで二級アミノ酸を２−オルト−フタルア
ルデヒドにより発蛍光誘導体化させることによって、二
級アミノ酸を一級アミノ酸と共に、高速液体クロマトグ
ラフィ法、特に逆相クロマトグラフィ法により測定する
ものである。
本発明において、試料中の一級アミノ酸の発誘導体化は
、従来法と同様にプレカラム法により、オルトフタルア
ルデヒドを、β−メルカプトプロピオン酸の存在下に試
料中の一級アミノ酸に反応させて行われる。この場合、
反応液のｐＨ値を８乃至１０とすると反応が円滑に進行
するので好ましい。
、従来法と同様にプレカラム法により、オルトフタルア
ルデヒドを、β−メルカプトプロピオン酸の存在下に試
料中の一級アミノ酸に反応させて行われる。この場合、
反応液のｐＨ値を８乃至１０とすると反応が円滑に進行
するので好ましい。
また、本発明において、試料中の二級アミノ酸の発誘導
体化は、誘導体化剤として４−クロロ７−ニトロベンゾ
−２−オキサ−１，３−ジアゾールを使用して、プレカ
ラム法により行われる。
体化は、誘導体化剤として４−クロロ７−ニトロベンゾ
−２−オキサ−１，３−ジアゾールを使用して、プレカ
ラム法により行われる。
この二級アミノ酸の発蛍光誘導体化反応はｐＨ８乃至９
で行われるのが、反応の進行が円滑になって好ましい。
で行われるのが、反応の進行が円滑になって好ましい。
逆相クロマトグラフィにより第１級アミノ酸及び第２級
アミノ酸の分離を行うのに、使用される固定相がオクタ
デシル基を有しており、移動相としてｐＨ６乃至７の緩
衝液と有機溶媒の混合液を使用するのが、第２級アミノ
酸を第１級アミノ酸と同時に検出することができるので
好ましい。
アミノ酸の分離を行うのに、使用される固定相がオクタ
デシル基を有しており、移動相としてｐＨ６乃至７の緩
衝液と有機溶媒の混合液を使用するのが、第２級アミノ
酸を第１級アミノ酸と同時に検出することができるので
好ましい。
（ホ）作用
本発明は、−級アミノ酸の発誘導体化を、従来法と同様
に、β−メルカプトプロピオン酸の存在下においてオル
トフタルアルデヒドにより行い二級アミノ酸の発誘導体
化を、４−クロロ−７ニトロベンゾー２−オキサル１．
３−ジアゾールにより行うので、二級アミノ酸の保持時
間を一級アミノ酸の保持時間の範囲内に設定することが
できることとなり、二級アミノ酸の検出蛍光波長と一級
アミノ酸の検出蛍光波長帯域を異ならせることにより、
二級アミノ酸を一級アミノ酸と同時に蛍光検出すること
ができる。
に、β−メルカプトプロピオン酸の存在下においてオル
トフタルアルデヒドにより行い二級アミノ酸の発誘導体
化を、４−クロロ−７ニトロベンゾー２−オキサル１．
３−ジアゾールにより行うので、二級アミノ酸の保持時
間を一級アミノ酸の保持時間の範囲内に設定することが
できることとなり、二級アミノ酸の検出蛍光波長と一級
アミノ酸の検出蛍光波長帯域を異ならせることにより、
二級アミノ酸を一級アミノ酸と同時に蛍光検出すること
ができる。
したがって、本発明によると、高速液体クロマトグラフ
ィ法により、−級アミノ酸の蛍光検出する時間内に二級
アミノ酸の蛍光検出を行うことができる。
ィ法により、−級アミノ酸の蛍光検出する時間内に二級
アミノ酸の蛍光検出を行うことができる。
くホ）実施例
以下、添付図面を参照して、本発明の実施の態様の−に
ついて説明するが、本発明は、以下の説明及び例示によ
って何等限定されるものではない。
ついて説明するが、本発明は、以下の説明及び例示によ
って何等限定されるものではない。
第１図は本発明の一実施例の高速液体クロマトグラフィ
装置の一例を示す概略の説明図であり。
装置の一例を示す概略の説明図であり。
第２図は第１図に示される実施例のクロマトクラムを示
す図である。
す図である。
第１図の高速液体クロマトグラフィ分析装置１において
、メインカラム２は、内径６．００ ｍｗで長さ１５０
ｍｍの逆相クロマトグラフィ用カラムＳｈｉｍ−ｐａ
ｃｋ ＣＬＣ−ＯＤＳ（商品名：株式会社島津製作所製
）が、高温槽ＣＴＯ−６＾（商品名８株式会社島津製作
所製）３内に収容されて使用された。このメインカラム
２の溶出口４の下流側には、二基の蛍光分光光度計ＲＦ
−５３５（商品名１株式会社島津製作所製）５及び６が
設けられている。本例において、蛍光分光光度計５は一
級アミノ酸の検出用であって、励起波長か３４０ ｎｍ
で、検出蛍光波長は４６０ ｒ＋ｎに設定されており、
蛍光分光光度計６は二級アミノ酸の検出用であって、励
起波長が４９０ ｎｍで、検出蛍光波長５３０ ｎｍに
設定されている。
、メインカラム２は、内径６．００ ｍｗで長さ１５０
ｍｍの逆相クロマトグラフィ用カラムＳｈｉｍ−ｐａ
ｃｋ ＣＬＣ−ＯＤＳ（商品名：株式会社島津製作所製
）が、高温槽ＣＴＯ−６＾（商品名８株式会社島津製作
所製）３内に収容されて使用された。このメインカラム
２の溶出口４の下流側には、二基の蛍光分光光度計ＲＦ
−５３５（商品名１株式会社島津製作所製）５及び６が
設けられている。本例において、蛍光分光光度計５は一
級アミノ酸の検出用であって、励起波長か３４０ ｎｍ
で、検出蛍光波長は４６０ ｒ＋ｎに設定されており、
蛍光分光光度計６は二級アミノ酸の検出用であって、励
起波長が４９０ ｎｍで、検出蛍光波長５３０ ｎｍに
設定されている。
一方、前記メインカラム２の流入ロアには、内径４．Ｏ
ｌ、長さ １０ ｍｍのガードカラムＳｈｉｍｐａｃｋ
Ｃ；−０ＤＳ （４） （商品名°株式会社島津製作
所製）８が接続されており、そのガードカラム８の流入
側９は、試料の注入及び前処理用のオートサンプラー５
ＩＬ−６Ｂ （商品名二株式会社島津製作所製）１０に
接続されている。オートサンプラー１０は、試料の導入
部と誘導体化を行うところであり、混合機能を備えてい
る。オートサンプラー１０の導入側１１には、メインカ
ラム２の保護用の、内径４．０ ｍｍ、長さ ２５０
ｍｍプレカラムＳｈ ｉｍｐａｃｋ ＧＲＤ−ＯＤＳ
（商品名６株式会社島津製作所製）１２が接続されてい
る。プレカラム１２の流入側１３は、ミキシングユニッ
ト１４の流出口１５に接続している。ミキシングユニッ
ト １４には、二つの流入口１６及び１７が形成されて
おり、夫々移動相送出ポンプＩ８及び１９の移動相流出
側２０及び２１に接続している。
ｌ、長さ １０ ｍｍのガードカラムＳｈｉｍｐａｃｋ
Ｃ；−０ＤＳ （４） （商品名°株式会社島津製作
所製）８が接続されており、そのガードカラム８の流入
側９は、試料の注入及び前処理用のオートサンプラー５
ＩＬ−６Ｂ （商品名二株式会社島津製作所製）１０に
接続されている。オートサンプラー１０は、試料の導入
部と誘導体化を行うところであり、混合機能を備えてい
る。オートサンプラー１０の導入側１１には、メインカ
ラム２の保護用の、内径４．０ ｍｍ、長さ ２５０
ｍｍプレカラムＳｈ ｉｍｐａｃｋ ＧＲＤ−ＯＤＳ
（商品名６株式会社島津製作所製）１２が接続されてい
る。プレカラム１２の流入側１３は、ミキシングユニッ
ト１４の流出口１５に接続している。ミキシングユニッ
ト １４には、二つの流入口１６及び１７が形成されて
おり、夫々移動相送出ポンプＩ８及び１９の移動相流出
側２０及び２１に接続している。
移動相送出ポンプ１８の移動相吸引側２２は、メチルセ
ロソルブ５ ｍｌを、くえん酸ナトリウム１０ ｍＭ浴
溶液ｐＨ６，８） ２容量とアセトニトリル１容量の溶
液に溶解して、全容を１１にした移動相２３に先端が浸
漬されている管路２４に接続している。
ロソルブ５ ｍｌを、くえん酸ナトリウム１０ ｍＭ浴
溶液ｐＨ６，８） ２容量とアセトニトリル１容量の溶
液に溶解して、全容を１１にした移動相２３に先端が浸
漬されている管路２４に接続している。
他方の移動相送出ポンプ１９の移動相吸引側２５は、流
路切換弁ＦＣＶ−３＾Ｌ（商品名・株式会社島津製作所
製）２６の流出路２７に接続している。
路切換弁ＦＣＶ−３＾Ｌ（商品名・株式会社島津製作所
製）２６の流出路２７に接続している。
流路切換弁２６の二つの流入側の流路２８及び２９の一
方の流路２８は、くえん酸ナトリウム１゜１溶液（ｐＨ
６，８）の移動相３０に先端が浸漬されている管路３１
に接続しており、他方の流入側流路２９は、洗浄用の８
０％アセトニトリル溶液３２に先端が浸漬されている管
路３３に接続している。この洗浄用のアセトニトリル溶
液は、分析終了時に分析装置内を清浄にするために流さ
れるものである。
方の流路２８は、くえん酸ナトリウム１゜１溶液（ｐＨ
６，８）の移動相３０に先端が浸漬されている管路３１
に接続しており、他方の流入側流路２９は、洗浄用の８
０％アセトニトリル溶液３２に先端が浸漬されている管
路３３に接続している。この洗浄用のアセトニトリル溶
液は、分析終了時に分析装置内を清浄にするために流さ
れるものである。
本例においては、各移動相の送出量を制御すると共に、
恒温槽３の温度等を制御するためにンステムコントロー
ラ５ＣＬ−６８（商品名３株式会社島津製作所製）３４
が設けられている。また、二基の蛍光分光光度計５及び
６の蛍光検出データを処理して分析値を算出するように
、蛍光分光光度計５及び６に接続してデータ処理装置Ｃ
−Ｒ４八（商品名株式会社島津製作所製）３５が設けら
れている。
恒温槽３の温度等を制御するためにンステムコントロー
ラ５ＣＬ−６８（商品名３株式会社島津製作所製）３４
が設けられている。また、二基の蛍光分光光度計５及び
６の蛍光検出データを処理して分析値を算出するように
、蛍光分光光度計５及び６に接続してデータ処理装置Ｃ
−Ｒ４八（商品名株式会社島津製作所製）３５が設けら
れている。
本例は、上記第１図に示される逆相クロマトクラフイ装
置を用いて、血清中のアミノ酸について分析が行われた
。
置を用いて、血清中のアミノ酸について分析が行われた
。
オートサンプラー１０に、血清試料１０μ！を吸引採取
し、これにβ−メルカプト試薬（β−メルカプトプロピ
オン酸１０μｌと １００ ｍＭはう酸塩緩衝液（ｐＨ
８，９＞ １０ ｍｌの混合液）２５０μｐを吸引混合
し、続いてオルト−フタルアルデヒド試薬〈オルト−フ
タルアルデヒド５ＩＩＩＩ？、エタノール３社及び１０
０ ＩＩＭのほう酸塩Ｍ樹液（ｐＨ８，９）１０ｍｌの
混合液）〈ＯＰΔ試薬＞２５０μＺを吸引混合して、第
一アミノ酸についての誘導体化が室温において行われた
。続いて、この試薬混合試料に、ＮＢＤ−ＣＩ試薬（４
−クロロ−７−ニトロベンゾ２−オキサ−１，３−ジア
ゾール１００ ｍｇとエタノール１０ ｍＲの混合液）
２５０μｌを加え混合する。混合操作は、混合液を吸引
し次いで吐出して行われた。４回混合後、混合液は、３
分間放置され注入された 一方、システムコントローラ３４により移動相送出用の
ポンプ１９を作動させ、移動相３０をメインカラム２に
送出する。
し、これにβ−メルカプト試薬（β−メルカプトプロピ
オン酸１０μｌと １００ ｍＭはう酸塩緩衝液（ｐＨ
８，９＞ １０ ｍｌの混合液）２５０μｐを吸引混合
し、続いてオルト−フタルアルデヒド試薬〈オルト−フ
タルアルデヒド５ＩＩＩＩ？、エタノール３社及び１０
０ ＩＩＭのほう酸塩Ｍ樹液（ｐＨ８，９）１０ｍｌの
混合液）〈ＯＰΔ試薬＞２５０μＺを吸引混合して、第
一アミノ酸についての誘導体化が室温において行われた
。続いて、この試薬混合試料に、ＮＢＤ−ＣＩ試薬（４
−クロロ−７−ニトロベンゾ２−オキサ−１，３−ジア
ゾール１００ ｍｇとエタノール１０ ｍＲの混合液）
２５０μｌを加え混合する。混合操作は、混合液を吸引
し次いで吐出して行われた。４回混合後、混合液は、３
分間放置され注入された 一方、システムコントローラ３４により移動相送出用の
ポンプ１９を作動させ、移動相３０をメインカラム２に
送出する。
前記の混合試料の１０μ！は、オートサンプラー １０
から分析装置１内に導入され、ガードカラム８を通して
移動相３０と共にメインカラム２内に流入し、分析が開
始される。
から分析装置１内に導入され、ガードカラム８を通して
移動相３０と共にメインカラム２内に流入し、分析が開
始される。
恒温槽３の温度は予め４５℃に、調整されている。移動
相の流量は１．０ ｍｅ ７分であり、システムコント
ローラ３４により、最初、移動相３０が分析装置内に流
され、次いで、グラジェント溶出が行われる。グラジェ
ント溶出のために、移動相送出ポンプ１８の作動が開始
され、移動相３０へ移動相２３の混合が開始される。移
動相３０と移動相２３の混合はミキシングユニット１６
において行われる。移動相３０への移動相２３の混合比
は、順次増加され、グラジェント溶出か行われる。
相の流量は１．０ ｍｅ ７分であり、システムコント
ローラ３４により、最初、移動相３０が分析装置内に流
され、次いで、グラジェント溶出が行われる。グラジェ
ント溶出のために、移動相送出ポンプ１８の作動が開始
され、移動相３０へ移動相２３の混合が開始される。移
動相３０と移動相２３の混合はミキシングユニット１６
において行われる。移動相３０への移動相２３の混合比
は、順次増加され、グラジェント溶出か行われる。
グラジェント溶出の移動相３０と移動相２３の混合比の
調整は、システムコントローラ３４により移動相送出ポ
ンプ１８及び１９の送出液量を制御して行われた。最終
的には、移動相送出ポンプ２６の作動が停止されて、移
動相２３のみがメインカラム２に送液された。
調整は、システムコントローラ３４により移動相送出ポ
ンプ１８及び１９の送出液量を制御して行われた。最終
的には、移動相送出ポンプ２６の作動が停止されて、移
動相２３のみがメインカラム２に送液された。
メインカラム２の溶出口４からの溶出液についての蛍光
検出は、蛍光分光光度計５及び６により行われた。−級
アミノ酸については、励起波長が３４０ ｎｍで、検出
蛍光波長が４６０ ｒｕｎで、蛍光分光光度計５により
測定された。二級アミン酸については、励起波長が４９
０ ｎｍで、検出蛍光波長が５３０ ｎｍで蛍光分光光
度計６により測定された。これらの測定結果は、データ
処理装置３３によりデータ処理されて、第２図に示され
るクロマトグラムが得られた。
検出は、蛍光分光光度計５及び６により行われた。−級
アミノ酸については、励起波長が３４０ ｎｍで、検出
蛍光波長が４６０ ｒｕｎで、蛍光分光光度計５により
測定された。二級アミン酸については、励起波長が４９
０ ｎｍで、検出蛍光波長が５３０ ｎｍで蛍光分光光
度計６により測定された。これらの測定結果は、データ
処理装置３３によりデータ処理されて、第２図に示され
るクロマトグラムが得られた。
第２図において、上段のクロマトグラムは一級アミノ酸
についてのクロマトグラムであり、下段は二級アミノ酸
についてのクロマトグラムである。
についてのクロマトグラムであり、下段は二級アミノ酸
についてのクロマトグラムである。
本例に示されるように、二級アミノ酸の溶出は、−級ア
ミノ酸の溶出と平行して、同時に測定されている。
ミノ酸の溶出と平行して、同時に測定されている。
本例において、二級アミノ酸の蛍光検出波長は、５３０
ｎｍであり、従来法における蛍光検出波長の３０５
ｎｍに比較して長波長であり夾雑物の影響を受は難い。
ｎｍであり、従来法における蛍光検出波長の３０５
ｎｍに比較して長波長であり夾雑物の影響を受は難い。
（ト）発明の効果
本発明は、−級アミノ酸の発話導体化を、従来法と同様
に、β−メルカプトプロピオン酸の存在下においてオル
トフタルアルデヒドにより行うが、二級アミノ酸の発話
導体化を、４−クロロ−７二トロベンゾー２−オキサ−
１３−ジアゾールにより行うので、従来の逆相クロマト
グラフィ法と比較して、アミノ酸−級及び二級アミノ酸
の分析時間を著しく短縮することができる。
に、β−メルカプトプロピオン酸の存在下においてオル
トフタルアルデヒドにより行うが、二級アミノ酸の発話
導体化を、４−クロロ−７二トロベンゾー２−オキサ−
１３−ジアゾールにより行うので、従来の逆相クロマト
グラフィ法と比較して、アミノ酸−級及び二級アミノ酸
の分析時間を著しく短縮することができる。
第１図は本発明の一実施例の高速液体クロマトグラフィ
装置の一例を示す概略の説明図であり。 第２図は第１図に示される実施例のクロマトグラフィ 符号については、１は高速液体クロマトグラフィ分析装
置、２はメインカラム、３は恒温槽、４はメインカラム
の溶出口、５及び６は蛍光分光光度計、７はメインカラ
ムの流入口、８はガードカラム、９はガードカラムの流
入側、１０はオートサンプラー、１１はオートサンプラ
ーの導入側、１２はプレカラム、１３はプレカラムの流
入側、１４ミキシングユニツト、１５はミキシングユニ
ットの流出側、１６及び１７ミキシングユニツトの流出
口、１８及び１９は移動相送出ポンプ、２０及び２１は
移動相送出ポンプの流出側、２２及び２５は移動相流出
ポンプの移動相吸引側、２３は移動相、２４．３１及び
３３は管路、２６は流路切換弁、２７は流出路、２８及
び２９は流路切換弁の流路、３０は移動相、３２は洗浄
用のアセトニトリル溶液、３４はシステムコントローラ
、３５はデータ処理装置、である。 代 埋入
装置の一例を示す概略の説明図であり。 第２図は第１図に示される実施例のクロマトグラフィ 符号については、１は高速液体クロマトグラフィ分析装
置、２はメインカラム、３は恒温槽、４はメインカラム
の溶出口、５及び６は蛍光分光光度計、７はメインカラ
ムの流入口、８はガードカラム、９はガードカラムの流
入側、１０はオートサンプラー、１１はオートサンプラ
ーの導入側、１２はプレカラム、１３はプレカラムの流
入側、１４ミキシングユニツト、１５はミキシングユニ
ットの流出側、１６及び１７ミキシングユニツトの流出
口、１８及び１９は移動相送出ポンプ、２０及び２１は
移動相送出ポンプの流出側、２２及び２５は移動相流出
ポンプの移動相吸引側、２３は移動相、２４．３１及び
３３は管路、２６は流路切換弁、２７は流出路、２８及
び２９は流路切換弁の流路、３０は移動相、３２は洗浄
用のアセトニトリル溶液、３４はシステムコントローラ
、３５はデータ処理装置、である。 代 埋入
Claims (1)
- （１）試料中の一級アミノ酸をβ−メルカプトプロピオ
ン酸の存在下にオルト−フタルアルデヒドと反応させて
発蛍光誘導体化させ、次いで、試料中の二級アミノ酸を
４−クロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−
ジアゾールと反応させて発蛍光誘導体化させ、この発蛍
光誘導体化された試料を逆相クロマトグラフィ相に通し
、該逆相クロマトグラフィ相から溶出する発蛍光誘導体
について、異なる二つの波長帯域において同時に蛍光検
出することを特徴とする生体アミノ酸分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2082277A JPH0481665A (ja) | 1990-03-29 | 1990-03-29 | 生体アミノ酸分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2082277A JPH0481665A (ja) | 1990-03-29 | 1990-03-29 | 生体アミノ酸分析法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0481665A true JPH0481665A (ja) | 1992-03-16 |
Family
ID=13770006
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2082277A Pending JPH0481665A (ja) | 1990-03-29 | 1990-03-29 | 生体アミノ酸分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0481665A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006038674A (ja) * | 2004-07-28 | 2006-02-09 | Kazuaki Kakehi | 糖たん白質糖鎖の分析方法及び非標識糖鎖の製造方法 |
| JP2010071986A (ja) * | 2008-08-20 | 2010-04-02 | Kazuhiro Imai | 蛍光試薬 |
| WO2010046624A1 (en) * | 2008-10-22 | 2010-04-29 | Oxtox Limited | Assay method for detecting primary amines |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5776455A (en) * | 1980-10-30 | 1982-05-13 | Kazuhiro Imai | Novel method for detection and determination of amino acid and/or amine |
| JPS6180051A (ja) * | 1984-09-28 | 1986-04-23 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | アミノ酸分析方法 |
| JPS62209055A (ja) * | 1986-02-26 | 1987-09-14 | Yokogawa Hewlett Packard Ltd | アミノ酸分析のためのアミノ酸蛍光誘導体混合物とアミノ酸分析のためのアミノ酸蛍光誘導体混合物の製造方法とアミノ酸蛍光誘導体混合物をアミノ酸分析に使用する方法 |
-
1990
- 1990-03-29 JP JP2082277A patent/JPH0481665A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5776455A (en) * | 1980-10-30 | 1982-05-13 | Kazuhiro Imai | Novel method for detection and determination of amino acid and/or amine |
| JPS6180051A (ja) * | 1984-09-28 | 1986-04-23 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | アミノ酸分析方法 |
| JPS62209055A (ja) * | 1986-02-26 | 1987-09-14 | Yokogawa Hewlett Packard Ltd | アミノ酸分析のためのアミノ酸蛍光誘導体混合物とアミノ酸分析のためのアミノ酸蛍光誘導体混合物の製造方法とアミノ酸蛍光誘導体混合物をアミノ酸分析に使用する方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006038674A (ja) * | 2004-07-28 | 2006-02-09 | Kazuaki Kakehi | 糖たん白質糖鎖の分析方法及び非標識糖鎖の製造方法 |
| JP4568551B2 (ja) * | 2004-07-28 | 2010-10-27 | 一晃 掛樋 | 糖たん白質糖鎖の分析方法及び非標識糖鎖の製造方法 |
| JP2010071986A (ja) * | 2008-08-20 | 2010-04-02 | Kazuhiro Imai | 蛍光試薬 |
| WO2010046624A1 (en) * | 2008-10-22 | 2010-04-29 | Oxtox Limited | Assay method for detecting primary amines |
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