JPH047832B2

JPH047832B2 -

Info

Publication number: JPH047832B2
Application number: JP59215269A
Authority: JP
Inventors: Yasuko Takashima
Original assignee: Mitsubishi Kagaku Iatron Inc
Current assignee: Mitsubishi Kagaku Iatron Inc
Priority date: 1984-10-16
Filing date: 1984-10-16
Publication date: 1992-02-13
Also published as: JPS6195247A

Description

【発明の詳細な説明】

「産業上の利用分野」本発明は分析用に供される血液試料の濁りを減
らす方法に関する。「従来の技術」臨床化学分析においてはあらゆる組織の変化を
反映している血液が最も重要な分析試料の１つと
なつており、その中でも主として分析の対象とな
る血清は数百種の成分から成る複雑な組成をも
ち、特に患者血清ではそれらの成分の含量が大幅
に異なり、しかもその変動範囲は様々である。臨床化学分析において分析の反応を妨害し、分
析誤差を招来するものの１つとして、血清中の濁
りが指摘され続けてきた。血清中の濁りは正常血
清よりも高脂肪血症の患者血清に多発し、又食物
摂取後の血清にその出現が多く見られ、血清成分
定量の正確度を著しく損なうものとなつている。
このため現在、濁りの生じた血清試料に対しては
検体ブランクを立てたり、試料を希釈したり、化
学物質を添加するなどの対策がとられている。ところが今日、広く臨床化学分析に利用されて
いる自動分析装置などを用いる場合には各血清試
料の濁りを１本ずつチエツクして検体ブランクを
立てることは困難であり、又全ての検体について
検体ブランクを立てることは手順が繁雑になり非
現実的である。又検体試料の希釈は単に濁りを散
らすのみの効果しか得られない。しかも希釈する
事によつて同時に目的とする分析成分をも希釈・
微量化するので、それだけ分析値への信頼性が薄
くなり又操作も煩わしくなる。更に現在検体試料
中の濁りを減らす事を目的として使われている化
学物質として第２級アルキル硫酸ナトリウム系
（陰イオン）、ポリオキシエチレンアルキルフエニ
ルエーテル系（非イオン）界面活性剤等がある
が、これらは濁りを消去する能力が低く、そのた
め最大効果を得ようとして高濃度とすると泡立ち
が激しくなり、分析操作がしにくくなるなどの不
都合が生じてくる。「発明が解決しようとする問題点」本発明の目的は血液試料の濁りを広範囲に、効
果的に減らし透明化する手段を見出し検体ブラン
クを立てたり試料を希釈するといつた煩雑な操作
を経ずに血液中の目的成分とくに微量成分を簡
便、正確かつ迅速に分析する事ができる方法を提
供することにある。以上の様な問題点を解決すべく本発明者は血液
試料の濁りを減らす物質について広範囲にその効
果を鋭意検索した結果、表１の様な陰イオン系，
陽イオン系，非イオン系界面活性剤及び両性界面
活性剤の様々な種類の検索から以下のようなこと
がわかつた。表１界面活性剤の種類陰イオン系アルキル硫酸塩ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩Ｎ−アシルメチルタウリン塩アルキルスルホこはく酸塩 α−オレフインスルホン酸塩アルキルリン酸塩アルキルリン酸エステル塩ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸
塩陽イオン系テトラアルキルアンモニウム塩非イオン系ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸
エステル〃ソルビツト脂肪酸エステル〃グリセリン脂肪酸エステル〃アルキルエーテル〃ポリオキシプロピレンアルキ
ルエーテル〃アルキルフエニルエーテル〃ヒマシ油〃硬化ヒマシ油〃ラノリン誘導体両性アルキルカルボキシベタイン形アルキルアミノカルボン酸形アルキルイミダゾリン形まず第一に液性に対する安定性という点から見
た場合、臨床化学分析用試薬の液性はPH２〜13と
幅広いため、強酸・強アルカリ性での溶解性と安
定性が求められ、更に重金属、塩などに対する安
定性やイオン解離しない事などが求められ、これ
らの点と表１の検索の結果から非イオンのポリオ
キシエチレン（POEと略）系の界面活性剤が最
も適しているといえる。表１の検索の結果からHLB12〜14の範囲にあ
るPOE系界面活性剤の濁りの消去効果をみたと
ころ、これらの中には数％の水溶液として濁つた
血清試料と37℃で混合させ10分後の340nmの吸光
度を測定すると、界面活性剤を全く含まない水だ
けの場合のそれに比較して、吸光度の減少の見ら
れるものの中から特に優れたものを見出し本発明
に至つた。「問題点を解決するための手段」すなわち本発明は血液試料中に式 CH₃(CH₂)_x−Ｏ−(CH₂CH₂O)_oＨ ……〔〕（ｘは７〜13の整数、ｎは３〜14の整数）で示されHLBが10〜15であるポリオキシエチレ
ン第一級アルキルエーテルを存在させることを特
徴とする血液試料の濁りを減らす方法である。以下、本発明を詳細に説明する。本発明に用いられるポリオキシエチレン第一級
アルキルエーテルは、HLBが一定範囲で、且つ
ｘおよびｎが上記HLBを可能とする一定の範囲
のものである。本発明で用いられる式〔〕のポリオキシエチ
レン第一級アルキルエーテルのHLBが10未満に
なるようなｘ，ｎの組合せでは、親油性が強くな
るために水溶液としたときに溶解性が減少し白濁
する。またHLBが15を越えるようなｘ，ｎの組
合せでは、血清の濁りの消去効果のより低い物質
になる。その結果、ｘは７〜13の整数であり、ｎは３〜
15の整数となる。なお、ｘが７未満ではエチレン
オキサイドの付加は可能であるが分子がかなり小
さくなるために界面活性剤としての性質がなくな
る。事実ｘ＝５にエチレンオキサイドを付加した
ものは濁りを消去しない。また、ｘが13を越える
と濁りを消去する効果が低下する。ｎはｘと
HLBによつて算出される。式〔〕で示される化合物を血液試料に存在さ
せる方法としては臨床化学分析用試薬と混合、な
いしは水溶液や緩衝溶液として添加するのが実用
的である。何れの場合にも濁りを減らす効果は十
分に発揮される。水溶液、又は緩衝溶液として加える場合は、そ
の量を全混合物の0.1〜20％（ｖ／ｖ）の範囲と
する。すなわち、血液試料に対して一定濃度（ｖ／
ｖ）の式〔〕のポリオキシエチレン第一級アル
キルエーテルの水溶液や緩衝溶液を加えて、所定
の容量とすることにより検体を作成し、該検体中
のポリオキシエチレン第一級アルキルエーテルの
濃度を上記範囲とすればよい。血液試料は多くの
場合μ単位であるので、上記の濃度範囲と近似
の濃度の水溶液や緩衝溶液を加えることによつ
て、上記目的は達成されうる。「実施例」次に実施例によつて本発明を更に具体的に説明
する。実施例１式〔〕のうちｘ＝７〜11、ｎ＝平均6.5、
HLB12.8であるPOE第一級アルキルエーテル
（以下Ａと言う）を0.2，0.5，１，２，５，10％
（ｖ／ｖ）の水溶液とし、各％水溶液1.5mlずつに
ヒトの非常に濁つた血清試料25μを添加混合
し、37℃340nmでの吸光度の変化を測定した。結
果は第１図のようであつた。なお、図中、D.W.は蒸留水、ａは0.2％、ｂは
0.5％、ｃは１％、ｄは２％、ｅは５％、ｆは10
％のグラフである。第１図より界面活性剤の濃度
が高くなるにつれて同レベルの効果を得るのに要
する時間が短かくなつていることがわかる。この
事は同時に、界面活性剤の濃度を一定にして血清
試料の濁りの程度を変えると、濁りの強いものほ
ど混合時間が長く必要になることも意味する。
又、水溶液と血清試料の容量の比を変えると、例
えば水溶液1.5mlに10μの場合は混合時間は25μ
の場合より短かくてすむし、50μの場合は逆
に長くなる。血清試料の濁りがかなり強くても反
応温度が37℃の場合には２％濃度で20分間の混合
時間で十分消去が可能である。実施例２式〔〕のうちＡとｘ＝11〜13、ｎ＝６〜７、
HLB13.2であるPOE第一級アルキルエーテル
（以下Ｂという）の各種緩衝液の２％（ｖ／ｖ）
溶液1.5mlにヒトの５種類の濁つた血清試料50μ
を混合し、37℃で20分間混合後の340nmにおける
吸光度を測定したところ表２のようであつた。表
２からＡ，Ｂともに血清の濁りの程度に関係なく
血清試料の吸光度を同レベルにまで減少させるこ
とができ、かつ緩衝液の種類やPHによつてその効
果の本質は影響を受けないといえる。なお清澄血
清の上記条件での吸光度は約0.030程度である。

【表】

【表】実施例３式〔〕のうちＡとｘ＝11〜13、ｎ＝５〜８、
HLB12であるPOE第一級アルキルエーテル（以
下Ｃという）と現在一般的に濁りの消去のために
使われているPOEオクチルフエニルエーテル
（POE9〜10モル付加、HLB13.5以下Ｇという）
の水溶液を使つて濁りの消去効果の比較を検討し
た。まず、Ａ，Ｃ，Ｇともに0.5，2.0％（ｖ／ｖ）
の水溶液とし、各々1.5mlにヒトの非常に濁つた
血清25μずつを加え20℃〜50℃で20分間混合し
た時の340nmでの吸光度の変化を見た。界面活性
剤を全く含まない蒸留水で同じ血清試料を使い、
同じ操作を行つた時の吸光度は0.520であつた。結果は第２〜４図のようであつた。なお、図中
A₁はＡの0.5％、A₂はＡの２％、C₁はＣの0.5％、
G₁はＧの0.5％、G₂はＧの２％の水溶液のグラフ
である。第２〜４図から本発明によるＡ及びＣは
20〜50℃の反応温度に於ていずれもＧよりはるか
に濁りを消去する効果が優れ、特に20℃ではその
効果の差は明瞭である。第３図のようにＧは２％
の濃度でも37℃、20分間では十分に濁りを消去で
きないが本発明ならば0.5％の低濃度でも10分間
でほぼ完全に消去可能である。以上から本発明で
ある式〔〕で示されるPOE第一級アルキルエ
ーテルは現在臨床化学分析用試薬に多く使われて
いるPOEオクチルフエニルエーテル（Ｇ）より
もかなり低濃度で満足すべき充分な効果が得ら
れ、又温度による影響が少ないといえる。実施例４式〔〕のうちＡ，Ｂ及び対照としてのＧの
Ｍ／15リン酸緩衝液PH7.0の２％溶液を各々作成
し、各々1.5mlに対してヒトの濁つた様々な血清
各25μを加え、37℃で20分間反応させた後の
340nmでの吸光度を測定した。結果は表３のよう
であつた。本発明であるＡ，Ｂは共に濁りの程度
に関係なく消去が20分間でほぼ完了しているが、
対照としてのＧは血清No.１〜３ぐらいの程度の濁
りならばＡ，Ｂと同じ効果が見られるがNo.４以上
の血清の濁りに対しては消去が不完全で、その上
血清による個体差がはつきり見られる。表３から
本発明である式〔〕で示されるPOE第一級ア
ルキルエーテルは、現在臨床化学分析用試薬に多
く使われている界面活性剤Ｇよりも血清の固体差
に関係なくかなりの強い濁りでも完全に消去でき
るといえる。

【表】実施例５例１〜４で使用したＡ，Ｂ，Ｃはｘ＝７〜11又
はｘ＝11〜13の混合物であるので式〔〕のうち
ｘ＝７、ｎ＝平均5.3、HLB12.8であるPOE第一
級アルキルエーテル（以下Ｌとする）とｘ＝９、
ｎ＝平均6.5、HLB12.9であるPOE第一級アルキ
ルエーテル（以下Ｍとする）とｘ＝13、ｎ＝平均
7.6、HLB12.2であるPOE第一級アルキルエーテ
ル（以下Ｎとする）の水溶液での濁りの消去効果
を検討した。まず、Ｌ，Ｍ，Ｎを各々１％（ｖ／ｖ）の水溶
液とし、各々1.5mlにヒトの非常に濁つた血清を
25μずつ加え37℃で混合した時の340nmでの吸
光度の変化を見た（第５図）。なお、図中D.W.は
蒸留水である。第５図よりＬ，Ｍ，Ｎは各々濁りの消去効果が
みられるが、その効果はＮ＜Ｍ＜Ｌの順に強く、
ｘの数字が小さいほうがｙの能力が高いといえ
る。またＡはｘ＝８を18％、ｘ＝９を50％、ｘ＝10
を32％含むｘ＝８〜10の混合物であるがその消去
能力は第５図からＮ≪Ａ＜Ｍでありｘの割合でＡ
の消去効果が予測されうることを示している。なお、以上の実施例に用いられた界面活性剤、
HLBとｘ，ｎの関係を下記に示す。ポリオキシエチレン第一級アルキルエーテル
（商品名ノニデツドLE6T［登録商標］、シエル
化学(株)製）ｘ＝７〜11，HLB12.8 ｘ＝８，18（％mass）ｘ＝９，50（〃）ｘ＝10，32（〃）平均エチレンオキサイド付加モル数ｎ＝6.5モルポリオキシエチレン第一級アルキルエーテル
（商品名ノニポールソフトSS−90［登録商標］、
三洋化成工業(株)製）ｘ＝11〜13 HLB13.2 ｎ＝６〜７ポリオキシエチレン第一級アルキルエーテル
（商品名ドバノツクス23［登録商標］、ライオン
(株)製）ｘ＝11〜13 HLB12.0 ｎ＝５〜８ポリオキシエチレンオクチルフエニルエーテ
ル（商品名TritonX−100［登録商標］、ローム
アンドハース社、和光純薬工業(株)より購入） HLB13.5 Ｌｘ＝７ｎ＝5.3 HLB12.8 Ｍｘ＝９ｎ＝6.5 HLB12.9 Ｎｘ＝13 ｎ＝7.6 HLB12.2 実施例６今までに検体試料中の濁りを消去する目的で検
討されてきた界面活性剤として第２級アルキル硫酸ナトリウム（商品名
Teepol AB36［登録商標］、シエル化学(株)製、陰
イオン）＊、POEオクチルフエニルエーテル
（商品名TritonX−100、非イオン）、POE第１級
アルキルエーテル（商品名Brij35［登録商標］、ア
イシーアイ社、キシダ化学(株)より購入、式［］
のうちｘ＝１、ｎ＝23、HLB値16.9）、アルキル
フエノールポリエチレングリコール（商品名
Sterox SE［登録商標］、モンサント社、武藤化学
(株)より購入、非イオン）＊＊、POEラウリン酸
エステル（商品名ニツコールMYL−10［登録商
標］、日光ケミカルズ(株)製、非イオン）＊＊＊な
どがある。本発明である式〔〕のうちｘ＝７，ｎ＝5.3，
HLB12.8であるPOE第一級アルキルエーテル
（Ｌ）を上記界面活性剤との効果の差をイントラ
リピツドおよび乳ビ人血清を使つて明らかにし
た。１ 37℃での効果の比較まず各々２％（ｖ／ｖ）の水溶液とし、各々
1.5mlに対してイントラリピツド又は乳ビ人血清
を25μずつ添加し、37℃で混合した時の340nm
での吸光度の変化を見た（第６，７図）。なお、
図中、D.W.は蒸留水、TeはTeepol AB36、Tr
はTritonX−100、ＢはBrij35、ＳはSteroxSE、
MYLはMYL−10のグラフである。第６図よりO.D.＝1.550のイントラリピツドの
場合、Teepol AB36，Brij35，TritonX−100で
の効果は全く見られず、SteroxSEは効果はある
がMYL−10，Ｌに比べて消去速度がはるかに遅
い。図７よりO.D.＝0.550の人血清の場合、イント
ラピツドの場合と同様の結果であるが、MYL−
10はいつたんある程度消去がみられた後に吸光度
の上昇現象があり、非常に好ましくない。軽い乳
び血清ではこの現象は起こらなかつた。本発明で
あるＬはイントラリピツド、高乳び人血清とも１
分で消去が完了している。２ブランクの比較各々の界面活性剤の水溶液の340nmでの吸光度
を測定したところ表４のようであつた。Teepol
AB36，Sterox SE，MYL−10は２％では0.060
〜0.070，５％濃度では0.140〜0.170のBlankがあ
り、本発明であるＬは２％で0.006，５％でも
0.017であつた。

【表】

【表】３ 25℃での効果の比較次に第６，７図で使用のイントラピツド，人血
清を使い、Sterox SE MYL−10，Ｌについて25
℃での吸光度の変化を見た。第８，９図から明ら
かなように、Sterox SEは25℃では効果は全く見
られず、MYL−10は37℃の場合よりもはるかに
消去速度が遅く本発明であるＬとの効果の差がよ
りいつそう明瞭となり、又人血清ではO.D.の上
昇現象がやはり起こつている。なお、図中D.W.
は蒸留水、ＳはSterox SE、MYL−10のグラフ
である。以上の実施例から本発明である式〔〕に表わ
される界面活性剤は、今までに濁りの消去効果が
あるとされてきた界面活性剤に比べてその効果の
強さははるかにすぐれたものといえる。＊血清総蛋白定量法の改良。臨床病理，19：427〜430，1971 ＊＊尿酸測定試薬の評価。（乳ビ血清の分類と
界面活性剤の効果）衛生検査，299，vol.32No.31983 ＊＊＊血液試料の濁りを減ずる方法。特許公報
昭58−15738 比較例乳び血清を試料として、下記試薬を用いて濁り
の減少を測定した。従来試薬１：３，４−ジクロロフエノール0.082重量％、ポ
リオキシエチレンラウリルエーテル（商品名
Brij35）0.4重量％及びデオキシコール酸ナトリ
ウム0.3重量％を含む0.2Mリン酸緩衝液（PH7.9）従来試薬２：ポリオキシエチレン第２級アルキルエーテル
（商品名ニツコールBT−９［登録商標］、エチレ
ンオキサイド９モル、HLB値13.5、日光ケミカ
ルズ(株)製）１重量％を含む50mMリン酸緩衝液
（PH7.0）本発明試薬：実施例６で用いた界面活性剤Ｌを２重量％含む
50mMリン酸緩衝液（PH7.0）操作法：乳び血清5μに上記の各試薬および蒸留水を
300μ加え、波長340nmにおける37℃、10分間の
吸光度変化を日立自動分析装置（7150型、日立製
作所）で測定した。その結果を第10図に示す。図
中D.W.は蒸留水での結果（ブランク値）を表す。第１０図から明らかなように、本発明試薬は、
従来試薬に比べて、乳び血清の濁りの減少に著し
い効果が見られる。「発明の効果」本発明が用いる式〔〕で示されるPOE第一
級アルキルエーテルは従来の第２級アルキル硫酸
ナトリウム系、POEアルキルフエニルエーテル
系などの界面活性剤と比べて濁りを消去する能力
は著しく高く、低濃度でも効果が充分であり、比
較的泡立ちもなく扱い易い優れた働きを有する。
特に自動分析装置を用いた血液成分の測定におい
てその効果が著しく発揮される。

【図面の簡単な説明】

第１〜１０図は、血液試料中の濁りを消す、本
発明及び他の方法による消去効果を測定した波長
340nmの吸光度測定グラフである。Ｘ…Ｘ軸（反応時間）、Ｙ…Ｙ軸（吸光度）。

Claims

【特許請求の範囲】１血液試料中に式 CH₃(CH₂)_x−Ｏ−(CH₂CH₂O)_oＨ ……〔〕（ｘは７〜13の整数、ｎは３〜14の整数）で示されHLBが10〜15であるポリオキシエチレ
ン第一級アルキルエーテルを存在させることを特
徴とする血液試料の濁りを減らす方法。