JPH04502904A - 両親媒性ペプチドの投与方法およびその組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 両親媒性ペプチドの投与方法およびその組成物この発明は、生物学的に活性なペ プチドに関し、特に生物学的に活性なペプチドおよび陰種の陰イオンを含有する 組成物およびその使用方法に関する。

この発明の一見地においては、生物学的に活性な両親媒性ペプチド、および／ま たは生物学的に活性なタンパク質、並びに毒性陰イオンが提供される。

イオンチャンネル形成性ペプチドあるいはタンパク質、すなわちイオン透過担体 とは、天然あるいは合成脂質隔膜を通過するイオンの浸透性を促進するペプチド またはタンパク質のことを言う、ビー、クリステンセン等の文献には、ペプチド あるいはタンパク質がイオンチャンネル形成性を有するか否か、すなわちイオン 透過担体であるか否かを判定する方法が記載されている。この発明においてイオ ンチャンネル形成性ペプチドあるいはタンパク質とは、前記クリステンセン等の 方法で判定されたイオンチャンネル形成性を有するペプチドあるいはタンパク質 を意味するものとする。

さらに、この発明は、イオンチャンネル形成性ペプチドあるいはタンパク質層の 試料を試験あるいはスクリーニングする方法を提供する。

まず未知試料の第一の部分を、標的細胞を含む別の試料に接触させたのち、この 特定の標的細胞に対する生物学的活性をを測定する。＊二の部分には、まず一定 量の弗素イオンを添加したのち、第一の部分に接触させた同一のタイプの標的細 胞を含む他の試料を接触させる。この第二の部分および標的細胞に対する弗素イ オンの生物学的活性を測定する。その結果、第二の部分および弗素イオンの生物 学Ｉｔ）活性が、弗素イオンを添加しなかった第一の部分の活性よりも大である ならば、この未知試料はイオンチャンネル形成性ペプチドあるいはタンパク質を 含有する。細菌は標的細胞として好適である。

両親媒性ペプチドは、疎水性区域と親木性区域とから成るペプチドである。

毒性陰イオンとは、標的細胞内に導入された際に、標的細胞の成長を抑制、禁止 ないしは破壊する陰イオンのことである。

かかる毒性陰イオンは、イオンチャンネル形成性ペプチドあるいはタンパク質が 存在しない場合は、天然あるいは合成脂質隔膜、特に頼胞膜に交差できない陰イ オンであり、十分な量であれば細胞自体にも作用する。

この発明によれば、生物学的に活性なペプチドあるいはタンパク質および毒性イ オンは宿主に投与され、単一または分別組成物として投与され、さらに組成物は 、ペプチドあるいはタンパク質および毒性イオンの他に、活性または不活性物質 を添加することができる。

この発明に使用されるイオンチャンネル形成性ペプチドは、一般に少なくとも２ ０ｍｇ／ｍ４　の濃度まで中性ｐＨの水中に可溶性である。さらにこのペプチド は非溶血性であり、有効濃度において慮砿を破裂させない、またそのペプチドの ｆｌＩ造によりペプチド分子に屈曲性が付与される。水中に移行されると。

両親媒性構造を帯びなくなる。油性面あるいは膜に接するとペプチド鎖は、それ 自身の上に畳まれて棒状構造となる。

このペプチドは一般に少なくとも１６１１のアミノ酸を含むが。

最小２０種のアミノ酸が好適である。多くの場合、４０種を超えることはない。

一般に前記毒性陰イオンは、適当な化合物の一部として使用される。かかる毒性 陰イオンとして代表的な陰イオンは、塩素イオン、過酸化イオン、および２炭酸 イオンである。

イオンチャンネル形成性生物学的活性な両親媒性ペプチドあるいはタンパク質お よび毒性陰イオンは、それらが単一組成物。

個別組成物の何れとして投与あるいは調製される場合でも、標的細胞の成長を抑 制１Ｍ止、あるいは破壊するのに有効な量が使用される。陰イオンの効果は、ペ プチドあるいはタンパク質の作用を相乗強化させることにある。この「相乗強化 」とは。

辱性陰イオンの量が、標的細胞の成長を禁止するためのペプチドあるいはタンパ ク質の最小有効濃度を低減させるのに有効であることを意味する。

一般に、前記ペプチドあるいはタンパク質の全身投与の場合は、宿主重量の１キ ログラム当り工ないし５００ｍｇのペプチド投与量となる量だけ使用される０局 所投与の場合は、０．０５％ないし５％の濃度において使用される。

毒性イオンの投与濃度は一般に１局所用の場合、０．０５ないし２％、全身用で は、宿主重量の１キログラム当り１ないしＩ　Ｑ　ｍ　ｇとする。

毒性イオンとの混用は、抗菌性として有効であり、ＩＩ菌、かび、その他の菌性 生物の増殖を抑制、禁止、あるいは破壊するために使用することができる。同様 にウィルスの増殖を抑制。

ＭＬ　あるいは破壊する抗ウイルス組成物としても使用できる。

前記組成物は、***の作用を抑制、禁止、あるいは破壊するための殺***剤とし ても使用できる。

また腫瘍を抑制、禁止、あるいは破壊するための抗腫瘍剤としても使用できる。

さらに、寄生虫の成長を抑制、禁止、あるいは破壊するための寄生虫予防薬とし ても使用できる。

毒性アニオンと併泪されるペプチドは、少なくとも１６個のアミノ酸よりなる基 本（正に帯電した）ポリペプチドを提供し、このポリペプチドは、少なくとも８ 個の疎水性アミノ酸と、少なくとも８個の親木性アミノ酸とから成る。さらに前 記疎水性アミノ酸は２１１の隣接するアミノ酸の群内に含まれ、２個の疎水性ア ミノ酸の各群は、疎水性アミノ酸以外の少なくとも１個のアミノｉｌ（好ましく は少なくとも２１１のアミノ酸）により。

一般には４個のアミノ酸よりは多くないアミノ酸によって、相互に隔離されてお り、一対の疎水性アミノ酸の間にあるアミノ酸は親水性ではないものである。

また親木性アミノ酸の方も２（［の隣接したアミノ酸の群から成り、少なくとも その一方のアミノ酸は塩基性親水性アミノ酸であり、これら２個の親水性アミノ 酸は、親水性アミノ酸ではない少なくとも１個のアミノ酸によって互いに隔離さ れ（好ましくは少なくとも２ＩＩのアミノ酸）、一般には４個を超火なし１数の アミノ酸で隔離されている。親水性アミノ酸の各対の間のアミノ酸は、必ずしも 疎水性でなくてもよい。

特に好適な実施例においては、ポリペプチドは少なくとも４群のア友ノ酸より成 り、その各群が４１１のアミノ酸より成るものである。

特に好適な実施例におけるポリペプチドは、少なくとも４＃のアミノ酸より成る ものであり、！＃の各々が４１１のアミノ酸より成るものである。それらの各群 内の４１１のアミノ酸のうち、の２ｓＩは疎水性アミノ酸であり、他の２個は親 水性アミノ酸である。

前記疎水性アミノ酸は、Ａｌａ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、工ｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍ ｅｔ、Ｔｒｙ、およびＴｙｒより成る級から選択することができる。また中性親 水性アミノ酸は、Ｓｅｒ。

Ａｇｎ、Ｇｉｎ、Ｔｈｒより成る級から選択することができる。

４１１のアミノ酸群の各々は、ＡＢＣＤ、ＢＣＤＡ、ＣＤＡＢあるいはＤＡＢＣ のいずれかより成り、ＡとＢはいずれも疎水性アミノ酸で、同種の、あるいは異 種のアミノ酸でもよい、ＣとＤのいずれか一方は塩基性アミノ酸であり、他の一 方は塩基性または中性の親木性アミノ酸であり、同種または異種のアミノ酸であ る。好適な実施例としてはポリペプチド鎖がこの配列の５または６群より成るも のである。その各群においては、／ＬＢ、ＣおよびＤは、若干の群あるいは全群 中において同種であってもよく、または若干の詳あるいは全群中において異種の アミノ酸であってもよい。

ポリペプチド鎖は、少なくとも２０個のアミノ酸を含み、それは５０１１よりは 多くないことが好適である。ただしポリペプチドが、必ずしも全般にわたって前 記の群より成ることに限定されるわけではない、ポリペプチドが、ポリペプチド 鎖を構成する前記の詳の何れかの一端または両端から伸長されたアミノ酸を含み 、あるいはアミノ酸が少なくとも４１１１の群の目Ｉたは２個以上の詳の間に位 置するものでもよし１゜アミノ酸の詳が、アミノ酸の反復群であってもよく、ま た。

多くの群に属する各アミノ酸が、アミノ酸の少なくとも４個の群の各群内におい て、前記の如くに２個の疎水性アミノ酸と２個の親水性アミノ酸が存在するもの であってもよい。

換言すれば、生物学的活性なポリペプチドが、アミノ酸の少なくとも４１１の群 より成る鎖から成り、各群には４個のアミノ酸が含まれるものである。この各群 内の４１ｉｌのアミノ酸のうちの２１１１は疎水性アミノ酸で、少なくとも１個 は塩基性親水性であり、ポリペプチド鎖は、好ましくは少なくとも２０１［のア ミノ酸より成ると共に、その数は多くとも５０個を超えなし）ものである。

他の実施例においては、ペプチド鎖内にあるアミノ酸の少なくとも４＃の各群の 配列は、Ａ　−Ｂ　−Ｃ”−Ｄ、Ｂ　−Ｃ−Ｄ　−Ａ。

Ｃ−Ｄ−Ａ−Ｂ　あるいはＤ−Ａ−Ｂ−Ｃであり、この場合ＡとＢは疎水性、Ｃ とＤの一方は塩基性親木性で、他方は疎水性あるいは中性親水性である。よって 生じたポリペプチド銀杏よ、次の各配列のいずれかになる。

（Ｘ＋）−（Ａ　Ｂ−Ｃ−Ｄ）。（ｙ＋）ｂ（Ｘ２）　−（Ｂ　Ｃ−Ｄ−Ａ）。

（Ｙ２）ｂ（Ｘｌ）　−（ＣＤ−Ａ−Ｂ）　。（Ｙｉ）ｂ（ＸＪ）、（Ｄ−Ａ− Ｂ−Ｃ）　ｌ、（ｙｎ）ｂここで、 Ｘｌは、Ｄｌ　Ｃ−Ｄ−あるいは　Ｂ　−Ｃ−Ｄ　−。

Ｙｌは、−Ａ、−Ａ　−Ｂ、または　−Ａ　−Ｂ　−Ｃ。

Ｘ２は、Ａ−１Ｄ　−Ａ　１　または　Ｃ−Ｄ−Ａ−Ｙ２は、−Ｂ、−Ｂ　−Ｃ ，または　Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｘｌは、Ｂ−１Ａ−Ｂ−、または　Ｄ−Ａ−Ｂ−Ｙ３は 、−Ｃ１−Ｃ−ＩＩ　または　−Ｃ−Ｄ−ＡＸ４は、Ｃ＋、Ｂ　−Ｃ＋、または 　Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｙｉは、−Ｄ、−Ｄ−Ａ、または　−Ｄ−Ａ−Ｂａは、０あるい は１、ｂは、Ｏあるいは１．　ｎは、少なくとも４とする。

前記説明の４個のアミノ酸の群の間の間隔及びアミノ酸の電荷が、親水性および 正電荷を与えるペプチドの特性を変化させないこと、および４個のアミノ酸の群 が相互に間隔をとって（１ないような主鎖とは著しく異なる主鎖の折たたみ特性 に対して不利な影響を与えないことを前提とするならば、ペプチド鎖は、前記４ 個のアミノ酸の群の間に、アミノ酸を含むことが可能であることが理解される。

この発明に関する代表的なペプチドの実例は、下記各々のペプチドがある。

Ｉ　Ａｌａ−Ｐｈａ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−＾１ａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌ ａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−、Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ａｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐ ｈｅ−５ｅｒ−ＬｙｓＩＩ　Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−＾１ａ−Ｐｈｅ −５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈａ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ −Ｌｙｓ−＾１ａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈａ−５ｅｒ−Ｌｙｓ ＩＩＩ　Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−＾１ａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ− Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−＾１ａ−Ｐｈｅ−５ｓｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ− ＩＶ　５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−＾１ａ−Ｐｈａ−５ ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈａ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌ ｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｖ　Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈａ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−＾１ａ −Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ −５ｅｒ これらのペプチドは、主鎖の両端から伸長された幾つかのアミノ酸を有すること が可能である６例えば、ペプチド主鎖は。

“Ａｌａ”末端の手前にある５ｅｒ−Ｌｙｓ配列、あるいは“Ｌｙｓ”末端のあ とに続＜Ａｌａ−Ｐｂｓ配列、またはそれらの両者を有することができる。その 他のアミノ酸配列が、′Ａｌａ”末端あるいはＬｙｓ末端にあっても、またはそ れらの両者があってもよい。

同様に前記配列のアミノ酸より成る少なくとも４個の残基を含むこの発明のポリ ペプチド鎖の中に１例えば第１のＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ群の前に一群のＣ−Ｄ配列を有 することも可能である。

また、これらのポリペプチド鎖のいずれか１つの”Ａ”または“Ｄ″末端、例え ばのアミノ酸配列を付加してもよい。あるいは前記説明の４１１ｉ１のアミノ酸 の１個または複数個を相互に隔離する幾つかのアミノ酸が、ポリペプチド鎖内に 存在してもよこれらのペプチドは、既知の方法によってほぼ純粋の形で生成され 採取することができる。！！たは自動的に合成することができる（米国化学会誌 Ｊ、Ａ、Ｃ，Ｓ、１９８３年、　ｖｏｌ　、８５．．１！　２１４９−５４頁参 照）６　あるいは遺伝子工学技術によっても生成することができる。

他の実施例として、前記毒性陰イオンと共用して使用される前記ペプチドは、マ ゲイニンペプチドが好適である６マゲイニンペプチドは、マゲイニン１．ＩＩあ るいはＩＩＩまたは類似体および誘導体が何れも使用できる。マゲイニンペプチ ドは、主として下記の基本ペプチド構造Ｘ＋２を備える。

−−Ｒｚ−Ｒ鵞１−ＸＩ２−ＸＩ３−Ｒ１１Ｒ１４Ｒ＋２−Ｒｕ−Ｒｕ−ＸＩ２ −Ｒ１１Ｒ１１−ＲローＲｚａ−（Ｒｚｓ）。−Ｒｚａ−Ｒ電−１−− かくして−例としてマゲイニンペプチドは、−Ｙ　Ｉ　２−　Ｘ　＋　２− の構造を取ることができ、ＸＩ２は前記の基本ペプチド構造であ（ｉ　ｉ　ｉ） 　ＲローＲ＋　ａ　ｍ　−Ｒ＋　２（ｉ　ｖ）　Ｒｚａ−Ｒ＋＋−Ｒｚ４ｍ−Ｒ ｚ２であり、Ｒｕ、Ｒ＋２．　Ｒ１７とＲ＋　ａ　、、は、前記定義の通りとす る。

マゲイニンペプチドは、下記のＩＩ造も取りうる。

−Ｘ＋ａ−ＸＩ２− ここで、ＺＩｓは、下記の（ｉ）あるいは（ｉ　ｉ）とする。

（ｉ）Ｒｚｓ：　塩基性、疎水性アミノ酸、アスパラギンあるいはグルタミン。

（ｉ　ｉ　）　Ｒ１６Ｒ１７：　このＲｚｖは中性親水性アミノ酸、疎水性アミ ノ酸または塩基性親木性アミノ酸である。中でも中性親水性アミノ酸が好適であ る。

さらに他のマゲイニンペプチドは、下記の構造を有する：（Ｙ　＋２）　−−Ｘ 　１２−　（Ｚ　＋２）　ｂここで、ＸＩ２−　ＹＩ２およびＩＩ２は前記定義 の通りとし、　ａは０か１．ｂも０か１とする。

さらに他のマゲイニンペプチドは、下記の基本構造ＸＩ３を有するニ ー　−Ｒｚｊ−Ｒ＋＋−ＲＩａｍ−ＸＩ２−　Ｒ１１−Ｒ＋＋　−ＸＩ２−　Ｒ １３−Ｒ盲＋−Ｒ盲ａ−Ｒｚ２−Ｒ＋＋−Ｒｕ−Ｒ１２式中、Ｒｕ、ＸＩ２．　 Ｒｚ３．　Ｒｕ、ＲＩａｍは、いずれも前記定義のアミノ酸である。

さらに他のマゲイニンペプチドは、下記の基本構Ｊ１ｉＸ　＋　３−ＸＩ３を有 し、ＩＩ３は前記の基本ペプチド構造であり、ＺＩｓは（Ｒ冨　１　）　。　− （Ｒ＋＋）　−−（Ｒｚｎ−）　−−（Ｒ電　６）　−−（Ｒｚ　４−）　。

−（Ｒ１，）　。　−（Ｒ鵞ｇ）−（Ｒｚ　７）式中、Ｒ＋＋、Ｒ＋ａ、ＲＩａ ｍ、Ｒ＋ｓ、Ｒ＋６、　Ｒｚ７は、いずれも前記定義のアミノ酸であり、ｎはＯ か１で、各ｎは同数あるいは興なる数である。

マゲイニンペプチドは、一般に少なくとも１４ｍあるいはＩ５側以上のアミノ酸 より成るが、２２か２３が好適である。なおアミノ酸末端、カルボキシル末端あ るいは両末端に、さらにアミノ酸を有することができる。

マゲイニンペプチドの代表的な例としては１次の一次配列を有するペプチド（単 一文字コードという）および適切な類似体と誘導体を例示できる。

（ａ）　（ＸＩ２）ＧＩＧＫＦＬＩ（Ｓ＾ＧＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＫＳ（０） １）あるいは　（Ｎ　Ｈ２）（マゲイニン　エ） （ｂ）　（ＸＩ２）ＧＩＧＫＦＬＨ５ＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＫＳ（Ｏ）Ｉ ）アロ　イハ（Ｎ　Ｈ２）（マゲイニン　ＩＩ） （ｅ）　（ＸＩ２）ＧＩＧＫＦＬＨ５ＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＫ（ＯＨ）あ るいは　（Ｎ　Ｈ２）（マゲイニン　ＩＩＩ） （ｄ）　（ＸＩ２）　ＩＧＫＦＬＨ５ＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＫＳ（ＯＨ） あるいは　（ＸＩ２）（ｅ）　（ＸＩ２）　ＧＫＦＬＨ５ＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧ ＥＩＭＫＳ（ＯＮ）あるいは　（Ｎ　Ｈ２）（ｆ）　（ＸＩ２）　ＫＦＬＨ５Ａ ＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＫＳ（ＯＨ）ｊＦ＋るいは　（ＸＩ２）マゲイニンペ プチドは、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　Ｖｏｌ、８４　ｐｐ、　５４４９−５３　（Ａｕｇ ｕｓｅ　１９１１７）に記述されている。　「マゲイニンペプチド」の名称は、 マゲイニン構造ならびに、その誘導体、類似体をも包含するものとする。

この発明において重要なＣＰＦペプチドは１次の配列より成る（単一文字アミノ 酸コード）。

（１）ＧＦＧＳＦＬＧＬＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＡＬＧＧＡＰＱ （２）ＧＬＡＳＦＬＧＫＡＬＫＡＧＬＫＩＧＡＨＬＬＧＧＡＰＱ （３）ＧＬＡＳＬＬＧＫＡＬＫＡＧＬＫＩＧＴＨＦＬＧＧＡＰＱＱ （４）ＧＬＡＳＬＬＧＫＡＬＫＡＴＬＫＩＧＴＨＦＬＧＧＡＰＱ （５）ＧＦＡＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＭＬＧＧＴＰＱ （６）ＧＦＧＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＡＬＧＧＡＰＱ （７）ＧＦＧＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＡＬＧＧＳＰＱ （８）ＧＦＡＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＬＬＧＧＴＰＱ このＲ明に使用されるＣＰＦＩ［似のペプチドの代表的な例としては１次式のペ プチド（単一文字アミノ酸コード）を列挙でき　る。

Ｇ１２３ＬＧ４ＡＬＫＡ５ＬＫｒＧ６７８ＬＧＧ９　（１０）ＱＱ １＝Ｆ、　Ｌ　２＝Ｇ、　Ａ ３＝Ｆ、　Ｌ　４＝に、　Ｌ ５＝Ａ、　Ｇ、　Ｔ　６＝Ａ、　Ｔ ７＝Ｈ，Ｎ　８＝Ａ、　Ｍ、　Ｆ、　Ｌ９＝Ａ、　Ｓ、　Ｔ　１０＝Ｐ、　Ｌ 番号付与されたアミノ酸は１組合せの各々に記載されたように、基本ＣＰＦペプ チド構造あるいは！［包体または誘導体としても使用できる。ＣＰＦペプチドと 言う場合は、基本構造の他に類似体または誘導体を包含するものとする。

さらに毒性陰イオンと併用するペプチドの実例として紘セクロピンがあり、その Ｉ［包体、誘導体と共に文献に開示されており、セクロビンは、その類似体、誘 導体をも含めた名称である。

さらに毒性陰イオンと併用される他のペプチドの実例としてサイトリシンがあり 、やはりＩ［包体と誘導体とを包括した名称である。

イオンチャンネル形成性タンパク質を、毒性陰イオンと併用することができる。

使用可能なこの種のタンパク質は、デフエンジンと称する抗菌性ペプチド、主要 な塩基性タンパク質、細１透過性促進タンパク質、しばしばパーフォリンと称せ られる空孔形成性サイトトキシン、サイトリシン、あるいは空孔形成性タンパク 質がある。

イオンチャンネル形成性タンパク質とは、その基本構成体とＷ包体と誘導体を包 含する名称である。

以下この発明の実施例について説明するが、この発明はこれらに限定されない。

１１表 両親媒性ペプチド対エンテロバクタ・クロアカニの最小抑ｌ１ｊ１度Ｃμｇ／ｍ 　ｌ　） （パネルＡ：　ＮａＦを使用せず）（パネルＢ：　ＮａＦ　５０ｍＭ添加）ＭＧ Ｎ２　（マケーイニンＩＩ）　＞５００　ｍ１ｃｒｏ　ｇ／ｍｌ　１８０−１２ ５ＰＧＬａ　２５０−５００　６Ｏ−１２５Ｚ−４４＞　５００　３０−６０ 第２表 両親媒性ペプチド対シュードモナス・アエルギノサの最小抑制濃度（２ｇ　／　 ｍ　ｌ　） （パネルＡ：　ＮａＦを使用せず）　（パネルＢ：　ＮａＦ　５０ｍＭ添ｍ）Ｍ ＧＮ２（ｖケーイニンＨ）　２５０−５００　５ｉｃｒｏ　ｇ／ｍｌ　１６０− １２５ＰＧＬａ　＞　５００　６Ｏ−１２５ Ｚ−４４３０−６０６−１５ 約１０００個の細菌を２００μｍのトリプティカーゼ大豆ブロース上に移植した 。マゲイニン２カルボキシ、　ターミナル、アミドのＰＧＬａ、あるいはｚ−４ ４を添加し、ＮａＦ無添加および５０■Ｎ添加の下に、濃度を増加した０表示の 通り、ＮａＦｓ添加の場合、エンテロバクタ・クロアカニに対するＭＩＣ（最小 抑制濃度）は、１ＩＧＮ２　については　５（１０ｉ＋１ｃｒｏ　ｇ／ｍｌを履 え、ＰＧＬａについては２５０　ｍ１ｃｒｏ　Ｋ／Ｉｌｌ、ｚ−４４については ５００■１ｃｒｏ　ｇ／醗ｌより大となった。ＮａＦの添加により同一の生体に 対するＭＩＣは表の通り、低下した。類似の結果はシュードモナス・アエルギノ サについて得られた（策２表）。

強化の効果は、１１表の通りである。一定の濃度における抗生物質性の効果的な 低減は、弗素イオンの添加により、１００万フオールド以上に強化された。

第３表 添加＊　ＣＦＵ　ＥＯＰ 添加せず　１０’　１００ ＭＧＮ２（ＮＨ２） （６０μｇ／ｍｌ）　１０’　９０ ＭＧＮ２　（ＮＨ２） （６０μｇ／ｍｌ） ＋ＮａＦ　２５　ｍＭ　Ｏ０ ＮａＦ　２５ｍＭ　１０７　１００ 解説：　生体は、　トリプテイカーゼ大豆ブロースで１ｍｌの体積で培養された ０分割量を希釈し、・　プレート上で生物の育成個数を判定した。

弗素イオンの強化剤としての効果は、ｌ１ｌｌＩＩＩＩＩ胞に対して確認できる 。にＧＮ２またはｚ−４４ペプチドが、１０％の仔牛血清を含む最少イーグル媒 液に添加され、ベーａ細胞の存在下で培養されると、頼胞の約５０％が、３０分 以内にトリパンブルー浸透性となる。ＩＩ胞破壊の程度は、以後の２４時間３７ ′″Ｃ後もほぼ一定である。培養基にＮ　ａ　Ｆが添加さ九ると、５０％の側胞 破壊が認められる。

ペプチドまたはタンパク質と毒性陰イオンは、多くの宿主の手当に使用できるが 、宿主としては動物が好適で、人体あるいはそれ以外でもよい、ペプチドまたは タンパク質と毒性陰イオンは、単一または個別組成物として使用できる。また経 口その他種々の方法で投与できる。

ペプチドまたはタンパク質と毒性陰イオンは、フィラー、無毒Ｓ＊＊液、生理的 食塩水等と混合した薬剤組成物に混入して使用してもよい、ｌＩ剤組成物として は１局所用あるいは全身用として、また液体、固体、半固体、注射液１錠剤、軟 膏、洗浄液、ペースト、カプセル、その他適宜の形態でよい、、原生動物、ウィ ルス、その他の有害微生物による感染症の制御に有効と見なされる場合は、補助 剤、プロテアーゼ挿刺剤その他の薬剤と組み合わせて使用される。

この発明のペプチドあるいはタンパク質は、特に動物に対して、抗性、抗腫瘍性 、抗ウイルス性、抗***性あるいは抗寄生虫性の量において、ペプチドあるいは タンパク質の活性を強化するための毒性陰イオンと併用して使用される。

局所用として投与する代表的な例としては、ペプチドが、　１％までの量で投与 され、毒性陰イオンは約５０ｍＭ（約１．０％）の用で使用される。あるいは、 弗化ナトリウム等の塩の形で経口投与される１例えばペプチドまたはタンパク質 は、皮下または腹腔投与により、　１ミリリツトルあたり１００マイクログラム の血清投与量に達することができる。

ペプチドまたは倉ンバク質は１口腔衛生学用の組成物の形で使用される１例えば 練り歯磨き５口洗浄剤、歯用ゲル、歯磨き粉等に混入して使用してもよい。

国際調査報告

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. １．少なくとも１種の生物学的に活性なペプチドおよび生物学的に活性なタンパ ク質を宿主に投与する方法であって、前記ペプチドまたはタンパク質は、イオン 連鎖を形成するペプチドまたはタンパク質、および毒性陰イオンであり、前記各 成分は、標的細胞の成長を抑制する量を宿主に投与することを特徴とする方法。
2. ２．ペプチドがマゲイニンペプチドであることを特徴とする請求項１記載の方法 。
3. ３．ペプチドがセクロピンであることを特徴とする請求項１記載の方法。
4. ４．ペプチドがサルコトキシンであることを特徴とする請求項１記載の方法。
5. ５．ペプチドがＸＰＦペプチドであることを特徴とする請求項１記載の方法。
6. ６．ペプチドがＦＧＬａペプチドであることを特徴とする請求項１記載の方法。
7. ７．ペプチドがＣＰＦペプチドであることを特徴とする請求項１記載の方法。
8. ８．毒性イオンが、弗素イオン、二炭酸イオン、過酸化イオンより成る群から選 択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
9. ９．陰イオンが弗素イオンであることを特徴とする請求項１記載の方法。
10. １０．ペプチドと弗素イオンとが個別に投与されることを特徴とする請求項１記 載の方法。
11. １１．弗素イオンが局所用として投与されることを特徴とする請求項９記載の方 法。
12. １２．ペプチドが局所用として投与されることを特徴とする請求項９記載の方法 。
13. １３．ペプチドと弗素イオンが局所用として投与されることを特徴とする請求項 ９記載の方法。
14. １４．ペプチドと弗素イオンの有効抗生物質量が投与されることを特徴とする請 求項９記載の方法。
15. １５．（ａ）少なくとも１種の生物学的活性両親媒性ペプチド、および／または 生物学的活性タンパク質であり、前記ペプチドあるいはタンパク質がイオンチャ ンネル形成性ペプチドおよびタンパク質であり、（ｂ）毒性陰イオンを含有する ことを特徴とする組成物。
16. １６．前記成分（ａ）および（ｂ）が標的細胞の成長を抑制する量だけ存在する ことを特徴とする請求項１５記載の方法。
17. １７．陰イオンが弗素イオンであることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
18. １８．ペプチドがマゲイニンペプチドであることを特徴とする請求項１７記載の 組成物。
19. １９．ペプチドがセクロピンであることを特徴とする請求項１７記載の組成物。
20. ２０．ペプチドがサルコトキシンであることを特徴とする請求項１７記載の組成 物。
21. ２１．ペプチドがＸＰＦペプチドであることを特徴とする請求項１７記載の組成 物。
22. ２２．ペプチドがＦＧＬａペプチドであることを特徴とする請求項１７記載の組 成物。
23. ２３．ペプチドがＣＰＦペプチドであることを特徴とする請求項１７記載の組成 物。
24. ２４．未知試料の第１の部分を、標的細胞の第１の試料と接触させる過程と、 前記標的細胞に対する第１の部分の生物学的活性を測定する過程と、 未知試料の第２の部分および一定量の弗素イオンを、標的細胞の第２の試料と接 触させる過程で、前記標的細胞の第２の試料は、前記第１の試料と同種の標的細 胞と接触し、標的細胞の第２の試料に対する未知試料および前記弗素イオンの生 物学的活性を測定する過程と、 前記未知試料の第１の部分、前記未知試料の第２の部分および前記弗素イオンの 各々が、前記標的細胞に対する生物学的活性を測定する過程、 とから成り、イオンチャンネル形成性ペプチドおよびタンパク質の存在を試験す ることを特徴とする未知試料の試験方法。
25. ２５．標的細胞が細胞であることを特徴とする請求項２４記載の試験方法。