JPH04352724A - Immunomodulation type therapeutic agent - Google Patents
Immunomodulation type therapeutic agentInfo
- Publication number
- JPH04352724A JPH04352724A JP17805891A JP17805891A JPH04352724A JP H04352724 A JPH04352724 A JP H04352724A JP 17805891 A JP17805891 A JP 17805891A JP 17805891 A JP17805891 A JP 17805891A JP H04352724 A JPH04352724 A JP H04352724A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sequence
- acid
- dna
- therapeutic agent
- type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title claims abstract description 36
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- LTFMZDNNPPEQNG-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 LTFMZDNNPPEQNG-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 21
- LTFMZDNNPPEQNG-UHFFFAOYSA-N deoxyguanylic acid Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1CC(O)C(COP(O)(O)=O)O1 LTFMZDNNPPEQNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- NCMVOABPESMRCP-SHYZEUOFSA-N 2'-deoxycytosine 5'-monophosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NCMVOABPESMRCP-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims description 17
- KHWCHTKSEGGWEX-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyadenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 KHWCHTKSEGGWEX-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 12
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims description 12
- GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N dTMP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 12
- KHWCHTKSEGGWEX-UHFFFAOYSA-N deoxyadenylic acid Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(O)=O)O1 KHWCHTKSEGGWEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 5
- 101100175482 Glycine max CG-3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 23
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 abstract description 11
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 abstract description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 6
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 abstract description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 abstract description 4
- 108010086123 Macrophage-Activating Factors Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000007436 Macrophage-Activating Factors Human genes 0.000 abstract description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 2
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 158
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 134
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 129
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 129
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 75
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 70
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 42
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 18
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 18
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 230000001031 immunopharmacological effect Effects 0.000 description 11
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 5
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 101100005765 Arabidopsis thaliana CDF1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100007579 Arabidopsis thaliana CPP1 gene Proteins 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 3
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 3
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- -1 levamisole Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000003211 trypan blue cell staining Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101000981253 Mus musculus GPI-linked NAD(P)(+)-arginine ADP-ribosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940057324 biore Drugs 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- SSJJWVREPZVNBF-DGXVIIAXSA-N dG10 Chemical compound C1=NC(C(NC(N)=N2)=O)=C2N1[C@H](O[C@@H]1COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CO)C[C@@H]1OP(O)(=O)OC[C@@H](O1)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 SSJJWVREPZVNBF-DGXVIIAXSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical compound [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000025036 lymphosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
【０００１】0001
【産業上の利用分野】本発明は免疫系の働きを変化させ
ることによって、免疫薬理活性を有する薬剤に感受性の
ある疾患、即ち悪性腫瘍、感染症、免疫不全疾患及び自
己免疫疾患等の進行を防止し、かつ治療する免疫調節型
治療剤に関する。[Industrial Application Field] The present invention inhibits the progression of diseases sensitive to drugs with immunopharmacological activity, such as malignant tumors, infectious diseases, immunodeficiency diseases, and autoimmune diseases, by changing the function of the immune system. The present invention relates to immunomodulatory therapeutic agents for prevention and treatment.
【０００２】0002
【従来の技術】悪性腫瘍、感染症、免疫不全疾患あるい
は自己免疫疾患に対する免疫調節型治療剤としては、各
種の細菌製剤、多糖、レバミゾール等の種々の合成低分
子化合物、またはインターフェロン等の種々のサイトカ
インなどが用いられ、または研究されている。しかしな
がら、これらの治療剤の効果は必ずしも充分なものでな
く、いずれも様々な副作用を呈する。このため、さらに
効果の高く副作用の少ない治療剤が求められている。[Prior Art] Immunomodulatory therapeutic agents for malignant tumors, infectious diseases, immunodeficiency diseases, and autoimmune diseases include various bacterial preparations, polysaccharides, various synthetic low-molecular compounds such as levamisole, and various synthetic low-molecular compounds such as interferon. Cytokines and the like are being used or studied. However, the effects of these therapeutic agents are not always sufficient, and all of them exhibit various side effects. Therefore, there is a need for therapeutic agents that are more effective and have fewer side effects.
【０００３】他方、核酸を上記の目的に応用しようとす
試みも散見される。合成されたポリリボヌクレオチド（
以下ＲＮＡ）であるポリイノシン酸とポリシチジル酸の
複合体はマウスの免疫系を構成する一員であるナチュラ
ルキラー細胞（以下ＮＫ細胞）の活性を増強し、また免
疫系のシグナル物質であるインターフェロン（以下ＩＦ
Ｎ）の産生を促す。更に実験腫瘍に対して有効であるこ
とが証明されており、その実験腫瘍に対する有効性は免
疫系を介するものと推定されている〔Ｄｊｅｕ，Ｊ．Ｙ
．ｅｔ ａｌ：Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２２巻，１
７５頁−１８１頁（１９７９年）、Ｌｅｖｙ，Ｈ．Ｂ．
ｅｔ ａｌ．：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，６２巻，３５７頁−３６１頁（１９
６９年）〕。また同じく合成されたＲＮＡであるポリア
デニル酸とポリウリジル酸の複合体も実験腫瘍に対して
有効であることが報告されている〔Ｌａｃｏｕｒ，Ｆ．
ｅｔａｌ．：Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，３２巻，６４
８頁−６４９頁（１９７２年）〕。しかしながらこれら
のＲＮＡも発熱等の強い副作用を有するため、現在まで
治療薬として実用化されるに至っていない。On the other hand, there have been some attempts to apply nucleic acids to the above-mentioned purposes. Synthesized polyribonucleotides (
A complex of polyinosinic acid and polycytidylic acid, which are RNA), enhances the activity of natural killer cells (NK cells), which are members of the mouse immune system, and interferon (IF), which is a signal substance for the immune system.
Promotes the production of N). Furthermore, it has been proven to be effective against experimental tumors, and its effectiveness against experimental tumors is presumed to be mediated by the immune system [Djeu, J. et al. Y
．． et al: J. Immunol. , 122 volumes, 1
75-181 (1979), Levy, H. B.
et al. :Proc. Natl. Acad. Sc
i. U. S. A. , Vol. 62, pp. 357-361 (19
1969)]. It has also been reported that a complex of similarly synthesized RNA, polyadenylic acid and polyuridylic acid, is effective against experimental tumors [Lacour, F.
etal. :Cancer Res. , vol. 32, 64
8-649 (1972)]. However, since these RNAs also have strong side effects such as fever, they have not been put into practical use as therapeutic agents until now.
【０００４】本発明者らは先に合成ポリデオキシリボヌ
クレオチド（以下ＤＮＡ）にも合成ＲＮＡと同様の免疫
薬理活性があり、悪性腫瘍に対して有効性を示すことを
見いだした（特開昭５９−３３２２２）。合成ＤＮＡは
合成ＲＮＡと異なり発熱等の副作用が極めて軽微である
ため、有用な治療剤となり得るものと考えられる。しか
しながらこれらの合成ＤＮＡは以下の問題点を有してい
た。
（１）十分な薬理活性を発現するためには高分子量（３
００００以上）であることが必要であり、これを達成す
るには酵素的に合成する必要がある。しかし医薬とする
場合に、酵素が残存する可能性があり、安全性の観点か
らみて極めて好ましくない。
（２）酵素を用いた製造法によるため、製品の分子量分
布を正確に制御することが難しく、製造ロット毎の分子
量分布は一般的に異なる。このことは医薬品としての規
格設定の観点からみて好ましくない。
従ってＤＮＡを医薬とする場合には、酵素を用いず化学
的に合成したものが最も望ましいが、現在の技術水準に
おいては分子量が３００００以上であるＤＮＡを製造す
ることは難しい。一方、化学的に容易に合成できる低分
子量のＤＮＡは一般に薬理活性が低く、医薬品としての
有用性が不十分であった。The present inventors have previously discovered that synthetic polydeoxyribonucleotides (hereinafter referred to as DNA) have the same immunopharmacological activity as synthetic RNA and are effective against malignant tumors (Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 1983-1972). 33222). Unlike synthetic RNA, synthetic DNA has extremely minimal side effects such as fever, and is therefore considered to have the potential to be a useful therapeutic agent. However, these synthetic DNAs had the following problems. (1) In order to express sufficient pharmacological activity, high molecular weight (3
0000 or more), and to achieve this it is necessary to enzymatically synthesize it. However, when used as a medicine, the enzyme may remain, which is extremely undesirable from a safety standpoint. (2) Since the production method uses enzymes, it is difficult to accurately control the molecular weight distribution of the product, and the molecular weight distribution generally differs from production lot to production lot. This is unfavorable from the viewpoint of setting standards for pharmaceutical products. Therefore, when using DNA as a medicine, it is most desirable to synthesize it chemically without using enzymes, but with the current state of the art it is difficult to produce DNA with a molecular weight of 30,000 or more. On the other hand, low molecular weight DNAs that can be easily synthesized chemically generally have low pharmacological activity and are insufficiently useful as pharmaceuticals.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明は化学的に合成
し得るＤＮＡを有効成分とし、高い安全性を有し、さら
に医薬としての有効性及び有用性が高められた免疫調節
型治療剤の提供を目的とする。Problems to be Solved by the Invention The present invention provides an immunomodulatory therapeutic agent that uses chemically synthesized DNA as an active ingredient, has high safety, and has enhanced efficacy and usefulness as a medicine. For the purpose of providing.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明者らはこの課題を
解決するため、種々の塩基配列を持つＤＮＡを合成しつ
つ鋭意検討を重ねた結果、ＤＮＡの構造中に特定の塩基
配列を含むものが優れた免疫調節作用を有することを見
いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明
は一般式（１）
５’−Ｘｎ ・・・Ｘ３ Ｘ２ Ｘ１ Ｙ１ Ｙ２ Ｙ
３ ・・・Ｙｎ −３’ （１）（式中、ｎ
は３から５０の整数であり、Ｘ１ 、Ｘ２ 、Ｘ３ 、
・・・、Ｘｎ 及びＹ１ 、Ｙ２ 、Ｙ３ 、・・・、
Ｙｎ はモノデオキシリボヌクレオチドであって、Ｘ１
、Ｘ２ 、Ｘ３ 、・・・、Ｘｎ は互いに同一でも
異なっていてもよい。またＸ１ とＹ１ 、Ｘ２ とＹ
２ 、Ｘ３ とＹ３ 、・・・、Ｘｎ とＹｎ の塩基
はそれぞれ互いにＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ的意味にお
いて相補性を有する。）で示される構造を１個または２
個以上含む塩基数１０〜１００の一本鎖直鎖状ポリデオ
キシリボヌクレオチドもしくはその塩、または二本鎖直
鎖状ポリデオキシリボヌクレオチドであって、少なくと
もその一方の一本鎖直鎖状ポリデオキシリボヌクレオチ
ドは一般式（１）で示される構造を１個または２個以上
含む二本鎖直鎖状ポリデオキシリボヌクレオチドまたは
その塩を有効成分とする免疫調節型治療剤である。[Means for Solving the Problem] In order to solve this problem, the present inventors synthesized DNA with various base sequences and made extensive studies, and as a result, they found that the structure of DNA contains a specific base sequence. The present invention was completed based on the discovery that this compound has an excellent immunomodulatory effect. That is, the present invention relates to general formula (1) 5'-Xn...X3 X2 X1 Y1 Y2 Y
3...Yn -3' (1) (in the formula, n
is an integer from 3 to 50, and X1, X2, X3,
..., Xn and Y1, Y2, Y3, ...,
Yn is a monodeoxyribonucleotide, and X1
, X2, X3,..., Xn may be the same or different. Also, X1 and Y1, X2 and Y
The bases 2, X3 and Y3, . . . , Xn and Yn are complementary to each other in the Watson-Crick sense. ) one or two structures
Single-stranded linear polydeoxyribonucleotides or salts thereof, containing 10 to 100 bases or more, or double-stranded linear polydeoxyribonucleotides, at least one of which is It is an immunomodulatory therapeutic agent containing as an active ingredient a double-stranded linear polydeoxyribonucleotide or a salt thereof containing one or more structures represented by general formula (1).
【０００７】本発明の一般式（１）で表される構造とは
いわゆるパリンドローム構造をなすモノデオキシリボヌ
クレオチドの配列であり、式中、Ｘ１ とＹ１ 、Ｘ２
とＹ２ 、Ｘ３ とＹ３ ・・・、Ｘｎ とＹｎ は
それぞれＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ的意味において相補
性を有する。パリンドロ−ム構造とは一般的には二本鎖
ＤＮＡ中の対称構造を示す言葉であり、多くの制限酵素
の認識部位はこのような構造である。本発明においては
、二本鎖ＤＮＡにおいて用いられる構造上の表現を、便
宜上一本鎖ＤＮＡにも適用することとし、一般式（１）
で表される構造を以下パリンドローム構造と呼ぶ。ただ
し、本発明における一本鎖または二本鎖直鎖状ＤＮＡは
、その全体が例えばＧ，ＣやＡ，Ｔの２種のモノデオキ
シヌクレオチドの結合の単なる繰り返しからなるものは
、本発明の目的を充分に達成することが出来ないので好
ましくない。このような構造を有するＤＮＡにおいては
一本鎖直鎖状、二本鎖直鎖状いずれも免疫調節作用を有
する。また、一般式（１）におけるｎは３〜５０の整数
である。The structure represented by the general formula (1) of the present invention is a sequence of monodeoxyribonucleotides forming a so-called palindromic structure, in which X1, Y1, X2
and Y2, X3 and Y3..., Xn and Yn each have complementarity in the Watson-Crick sense. The term "palindromic structure" generally refers to a symmetrical structure in double-stranded DNA, and many restriction enzyme recognition sites have such structures. In the present invention, the structural expression used for double-stranded DNA is also applied to single-stranded DNA for convenience, and the general formula (1)
The structure represented by is hereinafter referred to as a palindromic structure. However, the single-stranded or double-stranded linear DNA in the present invention, which is entirely composed of repeating bonds of two types of monodeoxynucleotides, for example, G, C or A, T, is not intended for the purpose of the present invention. This is not preferable because it cannot fully achieve the following. Among DNAs having such a structure, both single-stranded and double-stranded linear forms have immunomodulatory effects. Moreover, n in General formula (1) is an integer of 3-50.
【０００８】かかる構造の例として以下のような配列を
あげることが出来る。但し、Ｇはデオキシグアニル酸、
Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、Ｔ
はデオキシチミジル酸を示し、モノデオキシリボヌクレ
オチドの配列方向は左が５’末端、右が３’末端である
。
ＧＡＧＣＴＣ，ＴＡＧＣＴＡ，ＡＧＧＣＣＴ，ＣＡＴＡ
ＴＧ，ＴＧＴＡＣＡ，ＧＴＴＡＡＣ，ＧＡＴＡＴＣ，Ｇ
ＧＧＣＣＣ，ＴＴＧＣＡＡ （ｎ＝３）ＧＴＡＧＣＴ
ＡＣ，ＡＡＧＧＣＣＴＴ，ＧＧＡＴＡＴＣＣ，ＣＡＧＧ
ＣＣＴＧＧＣＡＴＡＴＧＣ，ＧＴＧＴＡＣＡＣ，ＡＧＴ
ＴＡＡＣＴ （ｎ＝４）ＡＧＴＡＧＣＴＡＣＴ，ＧＡ
ＡＧＧＣＣＴＴＣ，ＡＧＧＡＴＡＴＣＣＴ，ＧＣＡＧＧ
ＣＣＴＧＣ，ＡＧＣＡＴＡＴＧＣＴ （ｎ＝５）・・
・・・・An example of such a structure is the following arrangement. However, G is deoxyguanylic acid,
A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid, T
indicates deoxythymidylic acid, and the sequence directions of monodeoxyribonucleotides are the 5' end on the left and the 3' end on the right. GAGCTC, TAGCTA, AGGCCT, CATA
TG, TGTACA, GTTAAC, GATATC, G
GGCCC, TTGCAA (n=3) GTAGCT
AC, AAGGCCTT, GGATATCC, CAGG
CCTGGCATATGC, GTGTACAC, AGT
TAACT (n=4)AGTAGCTACT,GA
AGGCCTTC,AGGATATCCT,GCAGG
CCTGC, AGCATATGCT (n=5)...
・・・・・・
【０００９】本発明の目的を果たすためには、一般式（
１）で示される構造の内に５’−ＣＧ−３’なる構造を
含むことがより望ましい。このような構造の例として、
以下のような配列を挙げることが出来る。ただし符号の
記載方法はこれまでと同じである。
ＣＧＡＴＣＧ，ＡＴＣＧＡＴ，ＴＣＧＣＧＡ，ＡＡＣＧ
ＴＴ，ＧＣＧＣＧＣ，ＣＧＴＡＣＧ，ＡＧＣＧＣＴ，Ｃ
ＧＧＣＣＧ，ＧＡＣＧＴＣ，ＧＴＣＧＡＣ，ＣＧＣＧＣ
Ｇ，ＡＣＧＣＧＴ，ＣＡＣＧＴＧ （ｎ＝３）ＡＣＧ
ＡＴＣＧＴ，ＧＡＴＣＧＡＴＣ，ＡＴＣＧＣＧＡＴ，Ｃ
ＡＡＣＧＴＴＧ，ＡＧＣＧＣＧＣＴ，ＡＣＧＴＡＣＧＴ
，ＴＡＧＣＧＣＴＡ，ＡＣＧＧＣＣＧＴ，ＣＧＡＣＧＴ
ＣＧ，ＣＧＴＣＧＡＣＧ （ｎ＝４）ＧＡＣＧＡＴＣ
ＧＴＣ，ＣＧＡＴＣＧＡＴＣＧ，ＧＡＴＣＧＣＧＡＴＣ
，ＧＣＡＡＣＧＴＴＧＣ，ＣＡＧＣＧＣＧＣＴＧ，ＧＡ
ＣＧＴＡＣＧＴＣ，ＣＴＡＧＣＧＣＴＡＧ，ＧＡＣＧＧ
ＣＣＧＴＣ，ＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴ，ＡＣＧＴＣＧＡＣ
ＧＴ，ＡＣＡＡＣＧＴＴＧＴ （ｎ＝５） ・・・
・・・・In order to achieve the purpose of the present invention, the general formula (
It is more desirable that the structure shown in 1) includes a 5'-CG-3' structure. An example of such a structure is
The following arrays can be listed. However, the method of writing symbols remains the same as before. CGATCG, ATCGAT, TCGCGA, AACG
TT, GCGCGC, CGTACG, AGCGCT, C
GGCCG, GACGTC, GTCGAC, CGCGC
G, ACGCGT, CACGTG (n=3) ACG
ATCGT, GATCGATC, ATCGCGAT, C
AACGTTG, AGCGCGCT, ACGTACGT
,TAGCGCTA,ACGGCCGT,CGACGT
CG, CGTCGACG (n=4) GACGATC
GTC, CGATCGATCG, GATCGCGATC
, GCAACGTTGC, CAGCGCGCTG, GA
CGTACGTC, CTAGCGCTAG, GACGG
CCGTC, ACGACGTCGT, ACGTCGAC
GT,ACAACGTTGT (n=5)...
・・・・・・
【００１０】本発明の一本鎖直鎖状ＤＮＡとは、分子中
の全てのモノデオキシリボヌクレオチドが隣接するモノ
デオキシリボヌクレオチドと〔５’−３’〕リン酸ジエ
ステル結合を介して結合する、分岐鎖を有さないＤＮＡ
を示す。一本鎖直鎖状ＤＮＡの内、その長さが６塩基未
満であるものは一般式（１）を満たさないため、不適当
である。後述の実施例に示すとおり、一本鎖直鎖状ＤＮ
Ａの長さは長い方が望ましいが、その長さが長くなるほ
ど合成が困難であることと、塩基数４５以上では活性の
上昇がわずかであることから、通常は塩基数１０〜１０
０で充分目的を達し得る。[0010] The single-stranded linear DNA of the present invention is a branched chain in which all monodeoxyribonucleotides in the molecule are bonded to adjacent monodeoxyribonucleotides via [5'-3'] phosphodiester bonds. DNA that does not have
shows. Among single-stranded linear DNAs, those having a length of less than 6 bases do not satisfy general formula (1) and are therefore inappropriate. As shown in the examples below, single-stranded linear DN
The longer the length of A, the more difficult it is to synthesize, and the longer the length, the more difficult the increase in activity will be if the number of bases is 45 or more, so it is usually 10 to 10 bases.
0 is sufficient to achieve the purpose.
【００１１】この一本鎖直鎖状ＤＮＡはその構造の一部
として一般式（１）で示される配列を最低１つ含むが、
要すれば２個以上含むものも用い得る。２つ以上の一般
式（１）で示される配列を含む場合は、それらの一般式
（１）で示される配列は相互に同じ配列であっても異な
った配列であっても差し支えない。また複数の一般式（
１）で示される配列の間に介在配列があってもよく、ま
た介在配列がなくて、２つまたはそれ以上の連続した配
列であっても差し支えない。一本鎖直鎖状ＤＮＡにおけ
る一般式（１）以外の配列、即ち両側の配列あるいは介
在配列はどの様な配列であっても差し支えないが、実施
例に示すように発明の目的を達成するためには、デオキ
シグアニル酸の繰り返し構造であることが最も望ましい
。[0011] This single-stranded linear DNA contains at least one sequence represented by the general formula (1) as part of its structure,
If necessary, one containing two or more may also be used. When two or more sequences represented by the general formula (1) are included, the sequences represented by the general formula (1) may be the same or different. There are also multiple general formulas (
There may be an intervening sequence between the sequences shown in 1), or there may be no intervening sequence and there may be two or more consecutive sequences. Sequences other than general formula (1) in single-stranded linear DNA, that is, sequences on both sides or intervening sequences, may be any sequence, but in order to achieve the purpose of the invention as shown in the Examples A repeating structure of deoxyguanylic acid is most desirable.
【００１２】一本鎖直鎖状ＤＮＡの塩基組成は、実施例
に示すとおりその全体がＧＣあるいはＡＴというような
２種のモノデオキシリボヌクレオチドの結合の単なる繰
り返しは本発明の目的を達成することが出来ないので望
ましくない。かかる一本鎖直鎖状ＤＮＡの塩基数は６〜
１００、好ましくは１０〜１００、更に好ましくは１０
〜８０である。塩基数１００以上では化学的な合成が困
難であるため好ましくない。[0012] As shown in the examples, the base composition of single-stranded linear DNA is composed of GC or AT in its entirety, and simple repetition of the bonding of two types of monodeoxyribonucleotides can achieve the object of the present invention. It is not possible, so it is not desirable. The number of bases of such single-stranded linear DNA is 6 to
100, preferably 10-100, more preferably 10
~80. If the number of bases is 100 or more, it is difficult to chemically synthesize the base, which is not preferable.
【００１３】二本鎖直鎖状ＤＮＡとは、上述の如き一本
鎖直鎖状ＤＮＡ（これをＤＮＡ（Ａ）とする）の一部あ
るいは全部の配列について相補的な配列を持つ一本鎖直
鎖状ＤＮＡ（これをＤＮＡ（Ｂ）とする）がある時に、
ＤＮＡ（Ａ）とＤＮＡ（Ｂ）が塩基間の相補的相互作用
により二重らせん構造を形成した複合体をいう。ＤＮＡ
（Ａ）またはＤＮＡ（Ｂ）の少なくとも一方は前記の一
般式（１）で示される構造を１または２以上含む必要が
ある。かかる二本鎖直鎖状ＤＮＡは、後述の実施例に示
すように一本鎖直鎖状ＤＮＡ鎖と同等の免疫調節作用を
有する。なお、一本鎖及び二本鎖の直鎖状ＤＮＡよりな
る混合物も本発明の範囲内に含まれることは当然である
。[0013] Double-stranded linear DNA is a single-stranded DNA having a sequence complementary to part or all of the above-mentioned single-stranded linear DNA (this is referred to as DNA (A)). When there is linear DNA (this is called DNA (B)),
A complex in which DNA (A) and DNA (B) form a double helix structure due to complementary interactions between bases. DNA
At least one of (A) and DNA (B) must contain one or more structures represented by the above general formula (1). Such double-stranded linear DNA has an immunomodulatory effect equivalent to that of single-stranded linear DNA, as shown in the Examples below. It goes without saying that a mixture of single-stranded and double-stranded linear DNA is also included within the scope of the present invention.
【００１４】一本鎖直鎖状ＤＮＡは、例えばデオキシヌ
クレオシドβ−シアノエチルフォスファミダイト（例え
ばＭｉｌｌｉｐｏｒｅ社ＭｉｌｌｉＧｅｎ／Ｂｉｏｒｅ
ｓｅａｒｃｈ事業部製）を基質とし、ＤＮＡ合成装置（
例えばＭＯＤＥＬ３８０Ｂ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍ社製）を用いる公知の方法で合成すること
が出来る。合成されたＤＮＡはそののま用いてもよいが
、要すれば合成に際して生じる副産物や未反応物を除く
操作を行うことにより、さらに高純度のものが得られる
。例えば、合成されたＤＮＡの塩溶液に２倍量の冷エタ
ノールを加えて沈澱させ、乾燥させた後、水あるいは生
理的濃度の無機塩を含む中性緩衝液に溶解して用いる方
法などは簡便である。また合成されたＤＮＡをポリアク
リルアミドゲルなどを担体とする電気泳動法、あるいは
カラムを用いるクロマトグラフィ−等によって精製した
後用いるならば、目的とする塩基配列を持つＤＮＡが純
度よく得られるため更に望ましい。他の化学的合成方法
、例えばフォスフォトリエステル法によって一本鎖直鎖
状ＤＮＡを合成しても本明細書に述べると同じ結果が得
られる。即ち本発明の一本鎖直鎖状ＤＮＡの薬理活性は
その塩基配列のみに依存するものであって、合成方法に
は依存しない。[0014] Single-stranded linear DNA is, for example, deoxynucleoside β-cyanoethyl phosphamidite (for example, MilliGen/Biore manufactured by Millipore).
Search Division) was used as a substrate, and a DNA synthesizer (
For example, MODEL380B, Applied Bio
It can be synthesized by a known method using a commercially available product (manufactured by System Co., Ltd.). The synthesized DNA may be used as is, but if necessary, it can be further purified by removing by-products and unreacted substances generated during synthesis. For example, a simple method is to precipitate the synthesized DNA by adding twice the volume of cold ethanol to a salt solution, drying it, and then dissolving it in water or a neutral buffer containing an inorganic salt at a physiological concentration. It is. Furthermore, it is more preferable to use the synthesized DNA after it has been purified by electrophoresis using a carrier such as polyacrylamide gel or chromatography using a column, since DNA having the desired base sequence can be obtained with high purity. The same results described herein can be obtained by synthesizing single-stranded linear DNA by other chemical synthesis methods, such as the phosphorester method. That is, the pharmacological activity of the single-stranded linear DNA of the present invention depends only on its base sequence, and does not depend on the method of synthesis.
【００１５】二本鎖直鎖状ＤＮＡは、例えば一本鎖直鎖
状ＤＮＡ（Ａ）とＤＮＡ（Ｂ）を上述の方法で合成した
後、ＤＮＡ（Ａ）とＤＮＡ（Ｂ）を等モル混合して加熱
・冷却を行う公知の方法により得られる。あるいは一本
鎖直鎖状ＤＮＡ（Ａ）を鋳型として、ＤＮＡ合成酵素を
用いて二本鎖直鎖状ＤＮＡを得るという公知の方法も用
い得る。Double-stranded linear DNA can be obtained by, for example, synthesizing single-stranded linear DNA (A) and DNA (B) by the method described above, and then mixing equimolar amounts of DNA (A) and DNA (B). It can be obtained by a known method of heating and cooling. Alternatively, a known method may be used in which double-stranded linear DNA is obtained using a single-stranded linear DNA (A) as a template and a DNA synthase.
【００１６】これらのＤＮＡを塩として用いる際は、医
薬として許容される塩とすることが出来る。例えば水酸
化ナトリウムを本発明のＤＮＡ水溶液に加え、ｐＨを７
に調節した後凍結乾燥してナトリウム塩とすることが出
来る。またこれらのＤＮＡはポリ−Ｌ−リジン（以下Ｐ
ＬＬ）の様な公知のポリカチオン（例えばシグマ社製）
との複合体の形で用いることもできる。例えば本発明の
ＤＮＡ水溶液とＰＬＬ水溶液を混合し、ＤＮＡとＰＬＬ
の重量比を４：３とすることによってかかる複合体を調
製することが出来る。When these DNAs are used as salts, they can be pharmaceutically acceptable salts. For example, add sodium hydroxide to the aqueous DNA solution of the present invention and adjust the pH to 7.
After adjusting the sodium salt, it can be freeze-dried to obtain the sodium salt. In addition, these DNAs are poly-L-lysine (hereinafter P
Known polycations such as LL) (for example, manufactured by Sigma)
It can also be used in the form of a complex with For example, by mixing the DNA aqueous solution of the present invention and the PLL aqueous solution, the DNA and PLL aqueous solution are mixed.
Such a composite can be prepared by using a weight ratio of 4:3.
【００１７】本発明の免疫調節剤型治療剤は、免疫の働
きを介して発症を阻止し、あるいは症状の進行を阻止ま
たは減弱させ得るような疾患に対し、単独であるいは他
の治療法に併用して用いられる。これらの疾患の例とし
て、例えば悪性腫瘍、自己免疫疾患、免疫不全疾患及び
感染症があげられる。悪性腫瘍とは、胃癌、大腸癌、直
腸癌、乳癌、皮膚癌、肝癌、子宮癌、細網肉腫、リンパ
肉腫、白血病、リンパ腫等の疾患をさす。自己免疫疾患
とは、慢性関節リューマチ、ＳＬＥ，若年性糖尿病、多
発性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症等の
免疫系の自己認識機能における異常を原因とすると考え
られている疾患の総称であり、免疫薬理作用を有する薬
物による治療が有効であると考えられる。感染症とは、
細菌、ウィルス、原虫等の感染を原因として発症する疾
患の総称であり、免疫薬理作用を有する薬物（例えば、
インターフェロン）による治療が有効であるとされてい
る。The immunomodulating therapeutic agent of the present invention can be used alone or in combination with other treatments for diseases whose onset can be prevented or the progression of symptoms can be inhibited or attenuated through the action of immunity. It is used as Examples of these diseases include, for example, malignant tumors, autoimmune diseases, immunodeficiency diseases, and infectious diseases. Malignant tumors refer to diseases such as stomach cancer, colon cancer, rectal cancer, breast cancer, skin cancer, liver cancer, uterine cancer, reticular sarcoma, lymphosarcoma, leukemia, and lymphoma. Autoimmune diseases are thought to be caused by abnormalities in the self-recognition function of the immune system, such as rheumatoid arthritis, SLE, juvenile diabetes, multiple sclerosis, autoimmune hemolytic anemia, and myasthenia gravis. It is a general term for diseases, and treatment with drugs that have immunopharmacological effects is thought to be effective. What is an infectious disease?
A general term for diseases caused by infection with bacteria, viruses, protozoa, etc., and drugs with immunopharmacological effects (e.g.
Treatment with interferon is said to be effective.
【００１８】本発明のＤＮＡは実施例に示すようにイン
ターフェロンを誘発する作用を有するため、感染症、特
にウィルス性疾患に対する有効性が期待される。免疫不
全疾患とは、無ガンマグロブリン血症、後天性免疫不全
症候群等の免疫系の機能が低下または欠失する疾患の総
称である。免疫不全疾患の患者においては、感染症及び
悪性腫瘍の罹患率が高く、予後を悪化させる原因となっ
ている。本発明のＤＮＡは悪性腫瘍に有効であり、イン
ターフェロンを誘発する作用を有するため、免疫不全疾
患に併発し易い悪性腫瘍や感染症に対する治療効果を通
して、免疫不全疾患患者の予後を改善することが期待さ
れる。Since the DNA of the present invention has an effect of inducing interferon as shown in the Examples, it is expected to be effective against infectious diseases, especially viral diseases. Immunodeficiency disease is a general term for diseases in which the function of the immune system is reduced or absent, such as agammaglobulinemia and acquired immunodeficiency syndrome. Patients with immunodeficiency diseases have a high incidence of infectious diseases and malignant tumors, which is a cause of worsening prognosis. Since the DNA of the present invention is effective against malignant tumors and has an effect of inducing interferon, it is expected to improve the prognosis of patients with immunodeficiency diseases through its therapeutic effect on malignant tumors and infectious diseases that tend to occur concurrently with immunodeficiency diseases. be done.
【００１９】本発明の一本鎖または二本鎖直鎖状ＤＮＡ
を動物及びヒトに投与するに際しては、皮下、静脈内、
筋肉内、腫瘍内、経口投与及び直腸内投与等の投与経路
が用いられる。投与経路は疾患の種類、患者の状態によ
って適宜選択することが望ましい。例えば悪性腫瘍患者
に投与する場合は、腫瘍内投与または皮下投与などが好
適である。ヒトに対する投与量は、直腸内及び経口投与
の場合１日０．１〜１０００ｍｇ、皮下・静脈内・腫瘍
内・筋肉内投与の場合は１日０．０１〜１００ｍｇが適
当である。また投与は１〜７日に１〜２回、好ましくは
１〜２日に１回とし、必要に応じ増減し、また継続する
。Single-stranded or double-stranded linear DNA of the present invention
When administering to animals and humans, subcutaneous, intravenous,
Routes of administration such as intramuscular, intratumoral, oral and rectal administration are used. It is desirable to select the administration route appropriately depending on the type of disease and the condition of the patient. For example, when administering to a patient with a malignant tumor, intratumoral administration or subcutaneous administration is suitable. The appropriate dosage for humans is 0.1 to 1000 mg per day for rectal and oral administration, and 0.01 to 100 mg per day for subcutaneous, intravenous, intratumoral, and intramuscular administration. In addition, administration is carried out once or twice every 1 to 7 days, preferably once every 1 to 2 days, and the dose may be increased or decreased as necessary, or continued.
【００２０】本発明の一本鎖または二本鎖直鎖状ＤＮＡ
を動物及びヒトに皮下、静脈内、筋肉内、及び腫瘍内投
与するに際しては、生理的浸透圧を有する、水素イオン
濃度が中性付近（ｐＨ５〜８）である水溶液に溶解した
注射剤の形とすることが望ましい。この様な注射剤を製
造するに適当な水溶液として例えば、日本薬局方に示す
生理食塩液があるが、他の医薬として容認される塩類ま
たは化合物、添加物、賦型剤を含む水溶液であってもよ
い。本発明の一本鎖または二本鎖直鎖状ＤＮＡを注射用
製剤とする場合は、上記の形の水溶液であるか、または
それらの凍結乾燥品であってもよい。本発明の一本鎖ま
たは二本鎖直鎖状ＤＮＡを動物及びヒトに経口投与する
場合には、通常の医薬と同様の剤型、即ち、カプセル剤
、顆粒剤、丸剤、細粒剤、錠剤、シロップ剤などとして
用いることが出来る。[0020] Single-stranded or double-stranded linear DNA of the present invention
When administered subcutaneously, intravenously, intramuscularly, or intratumorally to animals and humans, it is necessary to use an injectable form dissolved in an aqueous solution with physiological osmotic pressure and a hydrogen ion concentration near neutrality (pH 5 to 8). It is desirable to do so. Examples of aqueous solutions suitable for producing such injections include physiological saline as shown in the Japanese Pharmacopoeia, but aqueous solutions containing other pharmaceutically acceptable salts or compounds, additives, and excipients are also suitable. Good too. When the single-stranded or double-stranded linear DNA of the present invention is used as an injectable preparation, it may be an aqueous solution in the form described above or a lyophilized product thereof. When the single-stranded or double-stranded linear DNA of the present invention is orally administered to animals and humans, it can be administered in the same dosage form as ordinary pharmaceuticals, such as capsules, granules, pills, fine granules, It can be used as tablets, syrup, etc.
【００２１】[0021]
【実施例】以下に試験方法及び実施例を詳細に説明する
。尚、以下の記述において、核酸塩基であるグアニン、
アデニン、シトシン、チミンはそれぞれＧ，Ａ，Ｃ，Ｔ
と略記し、ＤＮＡ内のヌクレオチドの配列方向は左が５
’末端、右が３’末端である様に記述した。実施例中に
用いたＤＮＡの塩基配列は配列表として本明細書の末尾
に添付した。対照薬剤として用いた合成ＲＮＡであるポ
リイノシン酸とポリシチジル酸の複合体（以下ｐｏｌｙ
Ｉ：Ｃ）はヤマサ醤油社から購入した。[Example] Test methods and examples will be explained in detail below. In the following description, guanine, which is a nucleic acid base,
Adenine, cytosine, and thymine are G, A, C, and T, respectively.
It is abbreviated as, and the sequence direction of nucleotides in DNA is 5 on the left.
' end, and the right side is the 3' end. The DNA base sequences used in the examples are attached as a sequence list at the end of this specification. The synthetic RNA used as a control drug was a complex of polyinosinic acid and polycytidylic acid (hereinafter referred to as polycytidylic acid).
I:C) was purchased from Yamasa Soy Sauce Company.
【００２２】試験方法１（試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ）におけるマウスのＮＫ細胞活性増強試験、インター
フェロン産生試験、およびマクロファージ活性化因子産
生試験）
次の文献に示される公知の方法で行った。
Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．：Ｊｐｎ．Ｊ．
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７９巻，８６６頁−８７３
頁（１９８８年）
但しＮＫ細胞活性は５１Ｃｒ標識ＹＡＣ−１細胞を標的
とする４時間の５１Ｃｒ放出試験で測定し、結果は３重
測定の平均と標準偏差で表した。また特に断わらない限
り、原則としてエフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比
は１００：１とした。Test method 1 (in vitro
Mouse NK cell activity enhancement test, interferon production test, and macrophage activating factor production test in (o)) were carried out using the known methods shown in the following literature. Yamamoto, S. et al. : Jpn. J.
Cancer Res. , vol. 79, pp. 866-873
(1988) However, NK cell activity was measured by a 4-hour 51Cr release test targeting 51Cr-labeled YAC-1 cells, and the results were expressed as the average and standard deviation of triplicate measurements. In addition, unless otherwise specified, the effector:target (E:T) ratio was, in principle, 100:1.
【００２３】試験方法２（コロニー刺激因子力価の測定
）
ＤＮＡを投与したＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウスの血清のコ
ロニー刺激因子力価を次の文献に示されるような公知の
方法で測定した。
Ｂｒａｄｌｅｙ，Ｔ．Ｒ．ａｎｄ Ｍｅｔｃａｌｆ，
Ｄ：Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，４４巻
，２８７頁−３００頁（１９６６年）Test Method 2 (Measurement of Colony Stimulating Factor Titre) The colony stimulating factor titer of the serum of BALB/c female mice to which the DNA had been administered was measured by a known method as described in the following literature. Bradley, T. R. and Metcalf,
D:J. Exp. Biol. Med. Sci. , vol. 44, pp. 287-300 (1966)
【００２４】試験
方法３（リンパ球増殖の促進活性の測定）
ＢＡＬＢ／ｃ系マウス（雌性、６週齢、Ｓｐｅｃｉｆｉ
ｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ）を購入し、１日以
上予備飼育する。ＤＮＡをＰＢＳに溶解して皮下投与す
る。１、２、３、７日後に頚椎脱臼によって屠殺し、直
ちに脾臓を無菌的に摘出して、２％ＦＣＳ含むＨＢＳＳ
中に移す。脾臓を８０メッシュまたは１００メッシュの
ステンレススティールスクリーンを通すことによって単
細胞浮遊液とし、これを回収して１４００回転で５分間
遠心することにより細胞を沈渣として集める。上清を除
いた後、細胞を１０％ＦＣＳと２５μＭの２−メルカプ
トエタノールを含むＲＰＭＩ１６４０培地（以下これを
ＭＥ培地という）に懸濁し、１４００回転で５分間遠心
して細胞を沈渣として集める。細胞をＭＥ培地に懸濁し
、その一部を採ってトリパンブルー色素排除法により生
細胞濃度を測定する。ＭＥ培地で細胞懸濁液を希釈し、
コンカナバリンＡ（カルビオケム社製、以下ＣｏｎＡ）
を加えて、各々の最終濃度を、５×１０５ 個／ｍｌ及
び４μｇ／ｍｌとする。この０．２ｍｌを平底９６穴プ
ラスチックマイクロプレートに播種し、３７℃、５％Ｃ
Ｏ２ の条件で４８時間培養する。各ウェルに２０μｌ
の〔 ３Ｈ〕−チミジン（０．３７ＭＢｑ／ｍｌ、ＮＥ
Ｔ−０２７Ａ、ニューイングランドニュークリアー社製
）をくわえ、更に２０時間培養する。細胞をセルハーベ
スター装置（スキャトロン社製）によってグラスフィル
ター上に集め、乾燥した後、液体シンチレーター（Ｅｃ
ｏｎｏｆｌｕｏｒ、ＮＥＦ−９４１、ニューイングラン
ドニュークリアー社製）を用いて、液体シンチレーショ
ンカウンターにより細胞に取り込まれた放射能を測定す
る。ＣｏｎＡ存在下、及び非存在下各々について３ウェ
ルの実験を行い、その平均の比をＳｔｉｍｕｌａｔｉｏ
ｎ Ｉｎｄｅｘ （Ｓ．Ｉ．）とする。即ちTest method 3 (measurement of lymphocyte proliferation promoting activity) BALB/c mouse (female, 6 weeks old, Speci
c pathogen-free) and preliminarily reared for at least one day. DNA is dissolved in PBS and administered subcutaneously. After 1, 2, 3, and 7 days, they were sacrificed by cervical dislocation, and the spleen was immediately removed aseptically and treated with HBSS containing 2% FCS.
Move inside. The spleen is passed through an 80 mesh or 100 mesh stainless steel screen to obtain a single cell suspension, which is collected and centrifuged at 1400 rpm for 5 minutes to collect the cells as a pellet. After removing the supernatant, the cells are suspended in RPMI 1640 medium (hereinafter referred to as ME medium) containing 10% FCS and 25 μM 2-mercaptoethanol, and centrifuged at 1400 rpm for 5 minutes to collect the cells as a pellet. Cells are suspended in ME medium, aliquots of which are taken, and the concentration of viable cells is measured by the trypan blue dye exclusion method. Dilute the cell suspension with ME medium,
Concanavalin A (manufactured by Calbiochem, hereinafter referred to as ConA)
to give a final concentration of 5 x 10 cells/ml and 4 μg/ml, respectively. Seed 0.2 ml of this in a flat-bottomed 96-well plastic microplate at 37°C and 5% C.
Culture for 48 hours under O2 conditions. 20 μl in each well
[3H]-Thymidine (0.37MBq/ml, NE
T-027A (manufactured by New England Nuclear) and cultured for an additional 20 hours. Cells were collected on a glass filter using a cell harvester device (manufactured by Scatron), dried, and then liquid scintillator (Ec
onofluor, NEF-941 (manufactured by New England Nuclear), and the radioactivity incorporated into the cells is measured using a liquid scintillation counter. Experiments were conducted in 3 wells each in the presence and absence of ConA, and the average ratio was calculated using Stimulation.
n Index (S.I.). That is,
【００
２５】試験方法４（マウス腫瘍に対する抗腫瘍活性の測
定）
ＣＤＦ１マウス（雌性、６週齢、Ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｐａｔｈｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ）を購入し、１日以上予備
飼育する。右側腹部の体毛を５ｍｍ四方にわたって切り
除く。ＣＤＦ１マウスにおいて腹水型で継代維持したＩ
ＭＣカルシノーマ細胞をＨＢＳＳで遠心洗浄し、トリパ
ンブルー色素排除法によって、生細胞数を計数し、ＨＢ
ＳＳで希釈して５×１０６ 個／ｍｌとする。その０．
１ｍｌを除毛したマウスの右側腹部皮内に注入する。移
植後４日目から、１日おきに計６回、ＰＢＳに溶解した
ＤＮＡを腫瘍内及び腫瘍周辺部に投与する。移植後３０
日目に動物を屠殺し、腫瘍を切り出して、重量を測定す
る。00
25] Test method 4 (measurement of antitumor activity against mouse tumors) CDF1 mice (female, 6 weeks old, Specific
pathogen-free) and preliminarily reared for at least one day. Hair on the right side of the abdomen was removed over a 5 mm square area. I maintained for passage in ascites type in CDF1 mice.
MC carcinoma cells were centrifugally washed with HBSS, and the number of viable cells was counted by trypan blue dye exclusion method.
Dilute with SS to 5 x 106 cells/ml. Part 0.
Inject 1 ml intradermally into the right flank of a dehaired mouse. From day 4 after transplantation, DNA dissolved in PBS is administered into the tumor and around the tumor a total of 6 times every other day. 30 years after transplantation
On day 1, animals are sacrificed and tumors are excised and weighed.
【００２６】試験方法５（ラットのアジュバント関節炎
に対する有効性試験）
雄性ＳＤ系ラットを１週間予備飼育する。Ｍｙｃｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（青山Ｂ株）
凍結乾燥死菌体（ディフコ社製）を滅菌した流動パラフ
ィン（メルク社製）に５ｍｇ／ｍｌの濃度に懸濁し、そ
の０．１ｍｌを７週齢に達した動物の片方の後肢足蹠内
にエーテル麻酔下で注射することによりアジュバント関
節炎を惹起する。ＤＮＡはＰＢＳに溶解して、アジュバ
ント投与後１、３、５、７、９、１１の各日に皮下投与
する。二次炎症の程度を足蹠の体積によって測定する。
即ち、アジュバントを注射しなかった後肢の膝関節から
７ｍｍ上の位置をマークし、その部位までを水銀体積変
化計の水銀槽に浸すことにより体積を測定する。アジュ
バント投与日の足蹠体積を基準として、体積の増加率（
％）をＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘとする
。Test method 5 (Efficacy test for adjuvant arthritis in rats) Male SD rats are preliminarily bred for one week. Mycoba
cterium tuberculosis (Aoyama B strain)
Freeze-dried killed bacterial cells (manufactured by Difco) were suspended in sterilized liquid paraffin (manufactured by Merck & Co., Ltd.) to a concentration of 5 mg/ml, and 0.1 ml of the suspension was injected into the footpad of one hind limb of an animal that had reached 7 weeks of age. Adjuvant arthritis is induced by injection under ether anesthesia. DNA is dissolved in PBS and administered subcutaneously on days 1, 3, 5, 7, 9, and 11 after adjuvant administration. The degree of secondary inflammation is measured by footpad volume. That is, a position 7 mm above the knee joint of the hind leg on which no adjuvant was injected is marked, and the volume is measured by immersing the animal up to that point in a mercury bath of a mercury volume change meter. Based on the footpad volume on the day of adjuvant administration, the rate of increase in volume (
%) is the Inflammation Index.
【００２７】試験方法６（ＭＲＬ／ＭＰＪ−ｌｐｒマウ
スの自己免疫疾患モデルに対する有効性試験）ＭＲＬ／
ＭＰＪ−ｌｐｒマウス（雌性、６週齢）の皮下にＰＢＳ
に溶解したＤＮＡを週３回の頻度で投与する。
尿中蛋白量を、１６時間の間に***される尿容量と尿中
蛋白濃度から求める。Test method 6 (MRL/MPJ-lpr mouse efficacy test on autoimmune disease model) MRL/
MPJ-lpr mice (female, 6 weeks old) were subcutaneously injected with PBS.
Administer the DNA dissolved in 3 times a week. The amount of protein in the urine is determined from the volume of urine excreted over a 16-hour period and the protein concentration in the urine.
【００２８】試験方法７（マウスに対する急性毒性試験
）
１群１０頭のＩＣＲマウスにＤＮＡまたはＲＮＡを静脈
内（ｉｖ）または腹腔内（ｉｐ）投与し、２４時間後の
生存動物数を数える。投与ＤＮＡ（ＲＮＡ）量と生存動
物数の比率をグラフにプロットし、半数の動物が死亡す
る体重当りのＤＮＡ（ＲＮＡ）量を推定してＬＤ５０（
ｍｇ／ｋｇ）とする。Test Method 7 (Acute Toxicity Test on Mice) DNA or RNA is administered intravenously (iv) or intraperitoneally (ip) to 10 ICR mice per group, and the number of surviving animals is counted 24 hours later. Plot the ratio of the amount of DNA (RNA) administered and the number of surviving animals on a graph, estimate the amount of DNA (RNA) per body weight that would cause half of the animals to die, and calculate the LD50 (
mg/kg).
【００２９】試験方法８（ＬＰ−ＢＭ５ウィルス感染マ
ウスに対する有効性の評価）
５週齢のＣ５７ＢＬ／１０系マウスの腹腔内に０．５ｍ
ｌのＬＰ−ＢＭ５ウィルス原液を接種する。翌日から対
照薬のアジドチミヂン（ＡＺＴ）は０．５ｍｇ／ｍｌの
濃度で飲料水として投与し、ＤＮＡはＰＢＳに溶解して
１ｍｇを連日腹腔内投与する。ウィルス感染後５週目の
マウス脾臓細胞を１×１０７ ／ｍｌの濃度で１０％Ｆ
ＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁し、ＩＬ−２（
１０００Ｕ／ｍｌ、ジェンザイム社）存在下、３７℃、
５％炭酸ガスの条件で２０時間培養した後、ＮＫ細胞活
性を測定する。Test method 8 (Evaluation of effectiveness against LP-BM5 virus infected mice) Inject 0.5 m into the abdominal cavity of 5-week-old C57BL/10 mice.
Inoculate with 1 LP-BM5 virus stock solution. From the next day, a control drug, azidothymidine (AZT), was administered in drinking water at a concentration of 0.5 mg/ml, and DNA was dissolved in PBS and 1 mg was administered intraperitoneally every day. Mouse spleen cells 5 weeks after virus infection were incubated with 10% F at a concentration of 1 x 107 cells/ml.
Suspended in RPMI1640 medium containing CS, IL-2 (
1000 U/ml, Genzyme) at 37°C.
After culturing for 20 hours under 5% carbon dioxide conditions, NK cell activity is measured.
【００３０】試験方法９（ＤＮＡの定量）ＤＮＡを０．
２ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、同緩衝液
を対照として２６０ｎｍにおける吸光度を測定する。吸
光度１を与えるＤＮＡ濃度を２０μｇ／ｍｌとして、Ｄ
ＮＡ濃度を決定する。Test method 9 (quantification of DNA) DNA was measured at 0.
Dissolve in 2mM phosphate buffer (pH 7.0) and measure absorbance at 260 nm using the same buffer as a control. Assuming that the DNA concentration that gives an absorbance of 1 is 20 μg/ml, D
Determine the NA concentration.
【００３１】実施例１
（本発明の一本鎖直鎖状ＤＮＡを有効成分とする錠剤の
製造法）一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列１）のナトリウム塩
５ｇ、乳糖５３ｇ、トウモロコシデンプン５０ｇ及び結
晶セルロース ３５ｇをよく混合し、これをヒドロキシ
プロピルセルロース ５ｇを水 １００ｍｌに溶解し
た液で練合造粒し、５０℃で４時間乾燥する。これにス
テアリン酸マグネシウム２ｇを加えよく混合し、打錠機
を用いて１錠あたり２００ｍｇの重量で打錠し錠剤を得
る。Example 1 (Process for producing tablets containing the single-stranded linear DNA of the present invention as an active ingredient) 5 g of sodium salt of the single-stranded linear DNA (sequence 1), 53 g of lactose, 50 g of corn starch, and 35 g of crystalline cellulose is thoroughly mixed, kneaded and granulated with a solution of 5 g of hydroxypropyl cellulose dissolved in 100 ml of water, and dried at 50° C. for 4 hours. Add 2 g of magnesium stearate to this, mix well, and press into tablets using a tablet machine at a weight of 200 mg per tablet.
【００３２】実施例２
（本発明の一本鎖直鎖状ＤＮＡを有効成分とするカプセ
ル剤の製造法）一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列１）のナトリ
ウム塩５ｇ，乳糖１２４ｇ、トウモロコシデンプン９０
ｇ、結晶セルロース７０ｇ及びステアリン酸マグネシウ
ム１１ｇをよく混合する。これをカプセル充填機にて硬
カプセルに３００ｍｇずつ充填し、カプセル剤を得る。Example 2 (Production of capsules containing the single-stranded linear DNA of the present invention as an active ingredient) 5 g of sodium salt of the single-stranded linear DNA (sequence 1), 124 g of lactose, 90 g of corn starch
g, 70 g of crystalline cellulose, and 11 g of magnesium stearate are thoroughly mixed. This is filled into hard capsules in an amount of 300 mg each using a capsule filling machine to obtain capsules.
【００３３】実施例３
（本発明の一本鎖直鎖状ＤＮＡを有効成分とする注射剤
の製造法）一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列１）のナトリウム
塩１ｇ、及び塩化ナトリウム０．５ｇを１ｌの注射用蒸
留水に溶解し、濾過滅菌して注射剤を得る。Example 3 (Process for producing an injection containing the single-stranded linear DNA of the present invention as an active ingredient) 1 g of sodium salt of the single-stranded linear DNA (sequence 1) and 0.5 g of sodium chloride. Dissolve in 1 liter of distilled water for injection and sterilize by filtration to obtain an injection.
【００３４】実施例４
パリンドローム構造を有するＤＮＡがパリンドロームを
有さないＤＮＡに比べて強い免疫学的薬理作用を示すこ
とを以下の実験で証明した。１つのパリンドローム構造
（ＧＡＣＧＴＣ）を有する塩基数４５の一本鎖直鎖状Ｄ
ＮＡ（配列１）はマウスＮＫ細胞活性増強作用を有して
いた（表１）。パリンドローム構造を有さない塩基数４
５の一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列２）のＮＫ細胞活性増強
作用は配列１に比べて弱かった（表１）。
表１
──────────────────────
検体 塩基数 濃
度 ＮＫ細胞活性
──────────────────────
対照
０ １４．３±１．３
配列１ ４５ １０
２６．４±２．６
５０ ５６
．８±３．４
１００ ６５．３±４．
１
５００ ６０．４±３．９
配列２ ４５ １０
１４．１±１．１
５０
１５．０±２．０
１００ ２０．０±
２．２
５００ １７．９±２．１
─────────────
───────── 濃度はマウス脾細胞との培養時
のＤＮＡ最終濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。対照とは、Ｄ
ＮＡを含まない培地で脾細胞を培養した場合を示す。配
列１の部分配列である塩基数３０のＤＮＡ（配列３及び
配列４）のＮＫ細胞活性増強作用を比較すると、パリン
ドローム構造を有するＤＮＡ（配列３）の方がパリンド
ローム構造を有さないＤＮＡ（配列４）より強かった（
表２）。
表２
─────────────────
検体
塩基数 ＮＫ細胞活性
──────────────
───
対照 １４．８±０．４
配列１
４５ ５７．１±２．２
配列３ ３０ ４５．９
±２．１
配列４ ３０ １５．０±１．４
──────────
───────ＤＮＡは６０μｇ／ｍｌの最終濃度にな
るように脾細胞に加えた。配列３のＤＮＡのパリンドロ
ーム構造を構成するヌクレオチドの内、隣接する２つの
ヌクレオチド（ＧＴ）の順序を交換してＴＧとしたＤＮ
Ａ（配列５）のＮＫ細胞活性増強作用は配列３のそれよ
りも著しく弱かった（表３）。しかし配列３のＤＮＡの
塩基配列の内、パリンドロームを構成しない箇所におい
てヌクレオチドの順序をＧＴからＴＧに変更したＤＮＡ
（配列６）のＮＫ細胞活性増強作用は配列３と同様強か
った（表３）。配列３のＤＮＡのパリンドローム構造を
構成するヌクレオチドの内、１つのヌクレオチド（Ｃ）
を欠いたＤＮＡ（配列７）のＮＫ細胞活性増強作用は配
列３のＤＮＡに比べて著しく弱かった（表３）。しかし
配列３のＤＮＡの塩基配列のうち、パリンドロームを構
成しない箇所において１つのヌクレオチド（Ｃ）を欠い
たＤＮＡ（配列８）のＮＫ細胞活性増強作用は配列３と
同様強かった（表３）。配列３のＤＮＡに含まれるパリ
ンドローム構造を５’−末端に移動させたＤＮＡ（配列
９）は配列３のＤＮＡと同等のＮＫ細胞活性増強作用を
示したが、中央に移動させたＤＮＡ（配列１０）はより
強いＮＫ細胞活性増強作用を示した（表４）。
表３
─────────────────
──
検体 塩基数 ＮＫ細胞活性
──────
─────────────
対照
１４．１±２．０
配列３ ３０
４８．８±２．６
配列５ ３０ １５．８±
１．５
配列６ ３０ ４５．３±２．３
配列７
２９ １５．４±１．４
配列８ ２
９ ５０．９±１．９
───────────────
────ＤＮＡは５０μｇ／ｍｌの最終濃度になるよう
に脾細胞に加えた。
表４
─────────────────
── 検
体 塩基数 ＮＫ細胞活性
────────────
───────
対照 １４．２±
０．９
配列３ ３０ ４３．４±２．１
配列９
３０ ４５．８±２．６
配列１０ ３０ ５１
．４±２．８
───────────────────ＤＮＡは５
０μｇ／ｍｌの最終濃度になるように脾細胞に加えた。
以上の実験結果から、ＤＮＡによるＮＫ細胞活性増強活
性に対し、パリンドローム構造（ＧＡＣＧＴＣ）の有無
が重大な影響を与えること、またパリンドローム構造の
位置はＤＮＡ鎖の中央であることによってより強い活性
が得られることが証明された。Example 4 The following experiment demonstrated that DNA with a palindromic structure exhibits stronger immunological and pharmacological effects than DNA without a palindrome. Single-stranded linear D with 45 bases and one palindromic structure (GACGTC)
NA (sequence 1) had an activity-enhancing effect on mouse NK cell activity (Table 1). Number of bases without palindromic structure: 4
The NK cell activity enhancing effect of the single-stranded linear DNA of No. 5 (sequence 2) was weaker than that of sequence 1 (Table 1).
Table 1
──────────────────────
Sample Number of bases Concentration NK cell activity
──────────────────────
contrast
0 14.3±1.3
Array 1 45 10
26.4±2.6
50 56
．． 8±3.4
100 65.3±4.
1
500 60.4±3.9
Array 2 45 10
14.1±1.1
50
15.0±2.0
100 20.0±
2.2
500 17.9±2.1
──────────────
───────── The concentration indicates the final concentration of DNA (μg/ml) during culture with mouse splenocytes. The control is D
The case where splenocytes were cultured in a medium containing no NA is shown. When comparing the NK cell activity enhancing effect of DNA with 30 bases (Sequence 3 and Sequence 4), which is a partial sequence of Sequence 1, it was found that DNA with a palindromic structure (Sequence 3) was better than DNA without a palindromic structure. (Sequence 4) was stronger than (
Table 2).
Table 2
──────────────────
specimen
Number of bases NK cell activity
──────────────
───
Control 14.8±0.4
array 1
45 57.1±2.2
Array 3 30 45.9
±2.1
Array 4 30 15.0±1.4
──────────
────────DNA was added to splenocytes at a final concentration of 60 μg/ml. Among the nucleotides constituting the palindromic structure of the DNA of sequence 3, the order of two adjacent nucleotides (GT) is exchanged to make TG.
The NK cell activity enhancing effect of A (sequence 5) was significantly weaker than that of sequence 3 (Table 3). However, in the DNA base sequence of Sequence 3, the nucleotide order is changed from GT to TG at a location that does not constitute a palindrome.
The NK cell activity enhancing effect of (sequence 6) was as strong as that of sequence 3 (Table 3). One nucleotide (C) among the nucleotides constituting the palindromic structure of the DNA of sequence 3
The NK cell activity-enhancing effect of DNA lacking sequence 7 (sequence 7) was significantly weaker than that of DNA sequence 3 (Table 3). However, among the DNA base sequences of Sequence 3, the DNA lacking one nucleotide (C) at a non-palindromic site (Sequence 8) had a strong NK cell activity enhancing effect, similar to Sequence 3 (Table 3). The DNA in which the palindromic structure contained in the DNA in Sequence 3 was moved to the 5'-end (Sequence 9) showed the same effect of enhancing NK cell activity as the DNA in Sequence 3; 10) showed a stronger NK cell activity enhancing effect (Table 4).
Table 3
──────────────────
──
Sample Number of bases NK cell activity
──────
──────────────
contrast
14.1±2.0
array 3 30
48.8±2.6
Array 5 30 15.8±
1.5
Array 6 30 45.3±2.3
array 7
29 15.4±1.4
Array 8 2
9 50.9±1.9
────────────────
---DNA was added to splenocytes at a final concentration of 50 μg/ml.
Table 4
──────────────────
─ Sample Number of bases NK cell activity
────────────
───────
Control 14.2±
0.9
Array 3 30 43.4±2.1
Array 9
30 45.8±2.6
Array 10 30 51
．． 4±2.8
────────────────────DNA is 5
It was added to splenocytes at a final concentration of 0 μg/ml. From the above experimental results, we found that the presence or absence of a palindromic structure (GACGTC) has a significant effect on the NK cell activity enhancing activity of DNA, and that the position of the palindromic structure in the center of the DNA strand results in stronger activity. It has been proven that it can be obtained.
【００３５】実施例５
実施例１に示したパリンドローム構造（ＧＡＣＧＴＣ）
以外のパリンドロームについても、これらを構造の一部
として有する一本鎖直鎖状ＤＮＡが、これらを有さない
ＤＮＡに比べて強い免疫薬理学的作用を有することが以
下の実験によって示された。配列３のＤＮＡのパリンド
ローム（ＧＡＣＧＴＣ）を他のパリンドローム（ＡＡＣ
ＧＴＴ及びＡＧＣＧＣＴ）と交換した配列のＤＮＡ（配
列１１及び配列１２）は配列３と同等のＮＫ細胞活性増
強作用を有していた（表５）。
表５
──────────────────
検体
塩基数 ＮＫ細胞活性
──────────────────
対照
１４．１±２．０
配列３ ３０ ４
８．８±２．６
配列１１ ３０ ５２．８±３．３
配列１２ ３０
４３．７±２．３
──────────────────ＤＮ
Ａは５０μｇ／ｍｌの最終濃度になるように脾細胞に加
えた。パリンドローム構造を含まずＮＫ細胞活性増強作
用の弱い一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列１３）の塩基配列の
一部を種々のパリンドローム構造に交換した配列のＤＮ
Ａ（配列１４〜２０）は強いＮＫ細胞活性増強作用を示
した（表６）。
表６ ──
──────────────────────
検体 パリンドローム
ＮＫ細胞活性 ──
──────────────────────
対照
１４．３±０．４
配列３ ＧＡＣＧＴＣ
４６．２±１．５
配列１３ なし １４
．４±１．０ 配列１４
ＧＡＣＧＴＣ ４９．１±１．６
配列１５ ＣＧＡＴＣＧ
４８．７±０．９
配列１６ ＡＴＣＧＡＴ ４３．５±１．
２ 配列１７ ＴＣ
ＧＣＧＡ ４４．３±０．９
配列１８ ＧＣＧＣＧＣ ４８
．４±０．５ 配列１９
ＣＧＴＡＣＧ ４２．９±０．７
配列２０ ＣＧＧＣＣＧ
４３．５±０．９ ──
──────────────────────ＤＮＡ
は５０μｇ／ｍｌの最終濃度になるように脾細胞に加え
た。Example 5 Palindromic structure (GACGTC) shown in Example 1
Regarding other palindromes, the following experiments showed that single-stranded linear DNA that has these palindromes as part of its structure has stronger immunopharmacological effects than DNA that does not have them. . The DNA palindrome of sequence 3 (GACGTC) is combined with other palindromes (AAC
The DNA sequences replaced with GTT and AGCGCT (Sequence 11 and Sequence 12) had the same NK cell activity enhancing effect as Sequence 3 (Table 5).
Table 5
────────────────────
specimen
Number of bases NK cell activity
────────────────────
contrast
14.1±2.0
Array 3 30 4
8.8±2.6
Array 11 30 52.8±3.3
array 12 30
43.7±2.3
──────────────────DN
A was added to splenocytes at a final concentration of 50 μg/ml. DNA with a sequence in which a part of the base sequence of a single-stranded linear DNA (sequence 13) that does not contain a palindromic structure and has a weak NK cell activity enhancing effect is replaced with various palindromic structures.
A (sequences 14 to 20) showed a strong NK cell activity enhancing effect (Table 6).
Table 6 ──
──────────────────────
specimen palindrome
NK cell activity ──
──────────────────────
contrast
14.3±0.4
Array 3 GACGTC
46.2±1.5
Array 13 None 14
．． 4±1.0 array 14
GACGTC 49.1±1.6
Array 15 CGATCG
48.7±0.9
Array 16 ATCGAT 43.5±1.
2 Array 17 TC
GCGA 44.3±0.9
Sequence 18 GCGCGC 48
．． 4±0.5 Array 19
CGTACG 42.9±0.7
Array 20 CGGCCG
43.5±0.9 ──
──────────────────────DNA
was added to splenocytes at a final concentration of 50 μg/ml.
【００３６】実施例６
塩基数が８及び１０であるパリンドローム構造を有する
ＤＮＡも同様の免疫薬理活性を有することが以下の実験
で示された。あるパリンドローム構造（ＧＡＣＧＴＣ）
を含むＤＮＡ（配列２１）とそれを拡大した構造のパリ
ンドローム構造（ＧＧＡＣＧＴＣＣ，ＣＧＧＡＣＧＴＣ
ＣＧ）を含む配列のＤＮＡ（配列２２、２３）は強いＮ
Ｋ細胞活性増強作用を示した（表７）。しかしＧＡＣＧ
ＴＣを縮小した構造のパリンドローム構造（ＡＣＧＴ）
を含むＤＮＡ（配列２４）の活性は弱かった。
表７ ──
───────────────────────
配列 パリンドローム
ＮＫ細胞活性
────────────────────────
─ 対照
１４．９±１．
０ 配列２４
ＡＣＧＴ １５．０±０．８
配列２１ ＧＡＣＧＴＣ
４２．３±１．１ 配
列２２ ＧＧＡＣＧＴＣＣ ４５．５±２
．２ 配列２３ ＣＧＧＡＣ
ＧＴＣＣＧ ５２．６±１．５
───────────────────────
──ＤＮＡは５０μｇ／ｍｌの最終濃度になるように脾
細胞に加えた。Example 6 The following experiment showed that DNAs having a palindromic structure with 8 and 10 bases also have similar immunopharmacological activity. A palindromic structure (GACGTC)
DNA containing (sequence 21) and its expanded palindromic structure (GGACGTCC, CGGACGTC
CG) is a strong N
It showed K cell activity enhancing effect (Table 7). However, G.A.C.G.
Palindromic structure (ACGT) with reduced TC structure
The activity of the DNA containing (sequence 24) was weak.
Table 7 ---
────────────────────────
Sequence Palindrome NK cell activity
────────────────────────
─ contrast
14.9±1.
0 array 24
ACGT 15.0±0.8
Array 21 GACGTC
42.3±1.1 Array 22 GGACGTCC 45.5±2
．． 2 Array 23 CGGAC
GTCCG 52.6±1.5
────────────────────────
---DNA was added to splenocytes at a final concentration of 50 μg/ml.
【００３７】実施例７
パリンドローム構造を有するＤＮＡの免疫学的薬理活性
が分子の長さに依存することを以下の実験により見いだ
した。配列の中央に１つのパリンドローム構造（ＧＡＣ
ＧＴＣ）を有し、全分子長が塩基数６から８０までであ
る種々のＤＮＡ（配列２５〜３２）のＮＫ細胞活性増強
作用を比較すると、活性は塩基数１０以上のＤＮＡにの
み認められ、塩基数の増加と共に増加し、塩基数４５以
上では活性に殆ど変化はなかった（表８）。
表８
──────────────────
検体
塩基数 ＮＫ細胞活性
──────────────────
対照
１４．０±１．０
配列２５ ６
１４．５±０．８
配列２６ １０ ２５．１±
１．２
配列２７ １５ ２８．８±１．３
配列２８ ２０
３７．９±１．２
配列２９ ３０ ４５．６
±２．１
配列３０ ４５ ５５．３±１．８
配列３１ ６
０ ５５．０±２．０
配列３２ ８０ ５７．
１±２．４
──────────────────ＤＮＡは５０μ
ｇ／ｍｌの最終濃度になるように脾細胞に加えた。Example 7 It was discovered through the following experiment that the immunological and pharmacological activity of DNA having a palindromic structure depends on the length of the molecule. One palindromic structure (GAC
When comparing the NK cell activity-enhancing effects of various DNAs (sequences 25 to 32) with a total molecular length of 6 to 80 bases, the activity was observed only in DNA with 10 or more bases; The activity increased as the number of bases increased, and there was almost no change in activity when the number of bases was 45 or more (Table 8).
Table 8
────────────────────
specimen
Number of bases NK cell activity
────────────────────
contrast
14.0±1.0
array 25 6
14.5±0.8
Array 26 10 25.1±
1.2
Array 27 15 28.8±1.3
array 28 20
37.9±1.2
Array 29 30 45.6
±2.1
Array 30 45 55.3±1.8
array 31 6
0 55.0±2.0
Array 32 80 57.
1±2.4
──────────────────DNA is 50μ
was added to splenocytes at a final concentration of g/ml.
【００３８】実施例８
同一の分子内に複数のパリンドローム構造が存在しても
ＤＮＡの免疫薬理作用が認められる。塩基数４５のＤＮ
Ａ（配列１）の構造の一部をパリンドローム構造（ＧＡ
ＣＧＴＣ）と交換したＤＮＡ（配列３３〜３６）のＮＫ
細胞活性増強作用を比較すると、複数のパリンドローム
構造を有するＤＮＡにも活性がみとめられた（表９）。
表９ ──
───────────────────────
検体 パリンドロ
ーム数 ＮＫ細胞活性
───────────────────────
── 対照
１４．２±０
．６ 配列１
１ ２７．１±２
．３ 配列３３
２ ３２．３±２．
５ 配列３４
３ ３９．０±２．５
配列３５
４ ４６．１±３．０
配列３６
５ ５０．５±４．２
─────────────
────────────ＤＮＡは２０μｇ／ｍｌの最
終濃度になるように脾細胞に加えた。またパリンドロー
ム構造の繰り返しによって構成される配列のＤＮＡ（配
列３７〜３９）もＮＫ細胞活性増強作用を示した（表１
０）。
表１０ ───
──────────────────────
検体 パリンドローム
ＮＫ細胞活性 ──────
───────────────────
対照
１４．２±０．５
配列３７ ＧＡＣＧＴＣ ４５．１±
３．２ 配列３８ ＣＡ
ＣＧＴＧ ４７．６±２．９
配列３９ ＡＡＣＧＴＴ ４２．５
±３．２ ───────────
──────────────ＤＮＡは２０μｇ／ｍｌ
の最終濃度になるように脾細胞に加えた。Example 8 Immunopharmacological effects of DNA are observed even when multiple palindromic structures exist within the same molecule. DN with 45 bases
A part of the structure of A (sequence 1) is converted into a palindromic structure (GA
NK of DNA (sequences 33-36) exchanged with CGTC)
When comparing cell activity enhancing effects, activity was also found in DNAs having multiple palindromic structures (Table 9).
Table 9 ---
────────────────────────
Sample Palindrome number NK cell activity
────────────────────────
── contrast
14.2±0
．． 6 Array 1
1 27.1±2
．． 3 Array 33
2 32.3±2.
5 Array 34
3 39.0±2.5
array 35
4 46.1±3.0
array 36
5 50.5±4.2
──────────────
────────────DNA was added to splenocytes at a final concentration of 20 μg/ml. Furthermore, DNA sequences composed of repeating palindromic structures (sequences 37 to 39) also showed an effect of enhancing NK cell activity (Table 1
0).
Table 10 ---
──────────────────────
specimen palindrome
NK cell activity ──────
────────────────────
contrast
14.2±0.5
Sequence 37 GACGTC 45.1±
3.2 Array 38 CA
CGTG 47.6±2.9
Array 39 AACGTT 42.5
±3.2 ────────────
──────────────DNA is 20μg/ml
was added to the splenocytes at a final concentration of .
【００３９】実施例９
パリンドロームを含んでいても、構成塩基がグアニンと
シトシンのみであるＤＮＡ（配列４０）、及びアデニン
とチミンだけであるＤＮＡ（配列４１）のＮＫ細胞活性
増強作用は弱かった（表１１）。
表１１ ───
─────────────────────────
── 検体 パ
リンドローム 構成塩基 ＮＫ細胞活
性 ──────────────
────────────────
対照
１４．４±１．
６ 配列３ ＧＡＣ
ＧＴＣ Ｇ，Ａ，Ｃ，Ｔ ４６．３±２．５
配列４０ ＧＣＧＣＧＣ
Ｇ，Ｃ １４．９±１．３
配列４１ ＡＴＡＴＡＴ
Ａ，Ｔ １４．５±１．４
────────────────────
──────────ＤＮＡは５０μｇ／ｍｌの最終濃
度になるように脾細胞に加えた。以上の結果から、ＤＮ
Ａが上記の免疫薬理作用を示すには、長さが６塩基以上
であるパリンドロームを１つ以上含み、全分子長が１０
塩基以上である必要があること、また構成塩基が２種類
の連続した繰り返しだけであることは望ましくないこと
が判明した。Example 9 Even though it contained a palindrome, DNA whose constituent bases were only guanine and cytosine (sequence 40) and DNA whose constituent bases were only adenine and thymine (sequence 41) had a weak NK cell activity enhancing effect. (Table 11).
Table 11 ---
──────────────────────────
── Specimen Palindrome Constituent base NK cell activity ──────────────
──────────────────
contrast
14.4±1.
6 Array 3 GAC
GTC G, A, C, T 46.3±2.5
Sequence 40 GCGCGC
G, C 14.9±1.3
Array 41 ATATAT
A, T 14.5±1.4
────────────────────
──────────DNA was added to splenocytes at a final concentration of 50 μg/ml. From the above results, DN
In order for A to exhibit the above immunopharmacological effects, it must contain one or more palindromes with a length of 6 or more bases and have a total molecular length of 10
It has been found that it is necessary to have more than one base, and that it is undesirable for the constituent bases to be only two types of consecutive repeats.
【００４０】実施例１０
パリンドローム構造を有する一本鎖直鎖状ＤＮＡはイン
ターフェロン（以下ＩＦＮ）及びマクロファージ活性化
因子（以下ＭＡＦ）を誘発した。塩基数４５のパリンド
ローム構造を有するＤＮＡ（配列１）はｉｎ ｖｉｔ
ｒｏにおいてマウス脾細胞からＩＦＮ及びＭＡＦを誘発
する作用を示したが、パリンドローム構造を有さないＤ
ＮＡ（配列２）の作用は弱かった（表１２）。
表１２ ─────
───────────────────────
検体 塩基数 濃度 ＩＦ
Ｎ力価 ＭＡＦ活性（％）
（ＩＵ
／ｍｌ） ─────────────
───────────────
対照 ０ ＜５
８．０±０．５
配列１ ４５ １０ ５６
１５．２±１．１
１００ ３６２
２５．１±２．３ 配列２ ４５
１０ １０ ８．２
±０．７
１００ ２２ １０．９±
０．６ ──────────────
──────────────ＤＮＡ濃度はマウス脾細
胞に加えた最終濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。Example 10 Single-stranded linear DNA having a palindromic structure induced interferon (hereinafter referred to as IFN) and macrophage activating factor (hereinafter referred to as MAF). DNA with a palindromic structure of 45 bases (sequence 1) is in vitro
ro showed the effect of inducing IFN and MAF from mouse splenocytes, but D did not have a palindromic structure.
The effect of NA (sequence 2) was weak (Table 12).
Table 12 ──────
────────────────────────
Sample Number of bases Concentration IF
N titer MAF activity (%)
(IU
/ml) ──────────────
────────────────
Control 0 <5
8.0±0.5
Array 1 45 10 56
15.2±1.1
100 362
25.1±2.3 Array 2 45
10 10 8.2
±0.7
100 22 10.9±
0.6 ──────────────
──────────────DNA concentration indicates the final concentration (μg/ml) added to mouse splenocytes.
【００４１】実施例１１
パリンドローム構造を有する一本鎖直鎖状ＤＮＡはコロ
ニー刺激因子（以下ＣＳＦ）を誘発する作用を示した。
パリンドローム構造を有する塩基数４５のＤＮＡ（配列
１）静脈内に投与すると、６時間後をピークとして血清
のＣＳＦ力価が上昇した（表１３）。パリンドローム構
造を有さないＤＮＡ（配列２）ではこの作用は見られな
かった。
表１３
───────────────────────
検体 投与後の時間
コロニー数（×１０−５細胞）
────────────────────
─── 対照
０ ２
配列１ １
４
３
１０＊
６ ３５＊＊
１
２ １２＊
２４
３
配列２ １
２
３ ２
６
３
１２
５
２４
１ ──────────
─────────────
各々のＤＮＡ（５ｍｇ）を静脈内に投与し
た。
＊：ｐ＜０．０
５、 ＊＊：ｐ＜０．０１
（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔによる
）Example 11 A single-stranded linear DNA having a palindromic structure exhibited an effect of inducing colony stimulating factor (hereinafter referred to as CSF). When DNA with a palindromic structure and 45 bases (sequence 1) was administered intravenously, the serum CSF titer increased with a peak 6 hours later (Table 13). This effect was not observed with DNA that does not have a palindromic structure (sequence 2).
Table 13
────────────────────────
Sample Time after administration Number of colonies (×10-5 cells)
────────────────────
─── Contrast
0 2
array 1 1
4
3
10*
6 35**
1
2 12*
24
3
array 2 1
2
3 2
6
3
12
5
24
1 ──────────
──────────────
Each DNA (5 mg) was administered intravenously. *: p<0.0
5, **: p<0.01
(according to student's t-test)
【００４２】実施例１２
パリンドローム構造を有する塩基数４５のＤＮＡ（配列
１）を５ｍｇ皮下投与したマウスにおいては、脾細胞の
コンカナバリンＡ（以下ＣｏｎＡ）刺激による増殖が促
進された（表１４）。しかしパリンドローム構造をもた
ないＤＮＡ（配列２）の投与ではこの作用はみられなか
った。
表１４
───────────────────
検体 投与後日
数 Ｓ．Ｉ．
───────────────────
対照
４２．３
配列１ １ ７
６．１＊＊
２ ６６．７＊
３ ４７．９＊
配列２ １
４５．５
２ ４３．
１
３ ４２．０
───────────────
──── ＊：ｐ＜０
．０５、＊＊：ｐ＜０．０１
（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔによる
）以上の結果からパリンドローム構造を有するＤＮＡに
は種々の免疫薬理活性があることが判明した。Example 12 In mice subcutaneously administered 5 mg of a 45-base DNA having a palindromic structure (sequence 1), proliferation of splenocytes stimulated by concanavalin A (hereinafter referred to as ConA) was promoted (Table 14). However, this effect was not observed when DNA without a palindromic structure (sequence 2) was administered.
Table 14
────────────────────
Sample Days after administration S. I.
────────────────────
contrast
42.3
array 1 1 7
6.1**
2 66.7*
3 47.9*
array 2 1
45.5
2 43.
1
3 42.0
────────────────
──── *: p<0
．． 05, **: p<0.01
The above results (based on student's t-test) revealed that DNA having a palindromic structure has various immunopharmacological activities.
【００４３】実施例１３
パリンドローム構造を有する塩基数４５のＤＮＡ（配列
１）を、マウスのＩＭＣカルシノーマ腫瘍に腫瘍内投与
すると、用量に依存した腫瘍重量の抑制、即ち抗腫瘍活
性が認められた（表１５）。しかしパリンドローム構造
を持たない塩基数４５のＤＮＡ（配列２）の抗腫瘍活性
は弱かった（表１５）。
表１５ ─────
─────────────────────────
検体 投与量（μｇ）
腫瘍重量（ｇ±ＳＤ） 抑制率（％）
────────────────────────
────── 対照
０ ２．５５±１．２０
０ 配列１ １
０×６ １．８５±０．９１
２７ １００×
６ ０．２５±０．６２ ９
０ 配列２ １０×６
２．４６±１．３０ ４
１００×６
２．１５±１．１６ １６
─────────────────────
─────────ＩＭＣカルシノーマ細胞を１群８頭
のＣＤＦ１マウスに移植し、４日後から１日おきに計６
回検体を腫瘍内に投与した。腫瘍移植後３０日目に腫瘍
重量を測定した。Example 13 When a 45-base DNA having a palindromic structure (sequence 1) was intratumorally administered to a mouse IMC carcinoma tumor, dose-dependent suppression of tumor weight, that is, antitumor activity was observed. (Table 15). However, the antitumor activity of the 45 base DNA (sequence 2) without a palindromic structure was weak (Table 15).
Table 15 ──────
──────────────────────────
Sample dose (μg)
Tumor weight (g±SD) Suppression rate (%)
────────────────────────
────── Contrast
0 2.55±1.20
0 array 1 1
0×6 1.85±0.91
27 100×
6 0.25±0.62 9
0 array 2 10x6
2.46±1.30 4
100×6
2.15±1.16 16
──────────────────────
────────── IMC carcinoma cells were transplanted into 8 CDF1 mice per group, and 4 days later, a total of 6 cells were transplanted every other day.
The specimen was administered intratumorally. Tumor weight was measured 30 days after tumor implantation.
【００４４】実施例１４
パリンドローム構造を有する一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列
１）はラットのアジュバント関節炎の系において、二次
炎症を抑制する効果を示した（表１６）。 しかしパ
リンドローム構造をもたないＤＮＡ（配列２）にはこの
活性はみられなかった。
表１６ ─────────────
──────────────────────
Ｉｎｆｌａｍ
ｍａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ （％） 検体
──────────────────
──────────
１０日 １４日
１７日 ────
─────────────────────────
────── 対照 ９．８±２．０
４３．７±５．２ ５５．８±８．
１ 配列１ ２．１±１．３＊＊ ３０．３
±３．２＊ ３３．２±５．５＊ 配列２
８．２±２．５ ４２．２±５．３
５４．７±７．６ ───────────
────────────────────────
表１６（つづき） ─────────
─────────────────────────
─ Ｉｎ
ｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ （％）
検体 ──────────────
──────────────
２１日
２８日 ─────
─────────────────────────
───── 対照 ６５
．７±８．４ ５９．１±８．７
配列１ ４９．２±
５．６＊ ５２．８±９．３
配列２ ６２．２±８．２
５６．１±５．３ ──
─────────────────────────
──────── アジュバント注射後各時点に
於ける二次炎症の程度を、対側後肢の足蹠体積の増加率
で示す。ＤＮＡの投与量は２ｍｇ／ラット。 ＊
：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１ （Ｓｔｕｄｅ
ｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔ）Example 14 A single-stranded linear DNA having a palindromic structure (sequence 1) showed the effect of suppressing secondary inflammation in a rat adjuvant arthritis system (Table 16). However, this activity was not observed in DNA that does not have a palindromic structure (sequence 2).
Table 16 ──────────────
──────────────────────
Inflamm
mation Index (%) Sample
────────────────────
──────────
10th 14th
17th ────
──────────────────────────
────── Control 9.8±2.0
43.7±5.2 55.8±8.
1 Array 1 2.1±1.3** 30.3
±3.2* 33.2±5.5* Array 2
8.2±2.5 42.2±5.3
54.7±7.6 ────────────
────────────────────────
Table 16 (continued) ──────────
──────────────────────────
─ In
Flammation Index (%)
Specimen ──────────────
──────────────
21st
28th ──────
──────────────────────────
───── Control 65
．． 7±8.4 59.1±8.7
Array 1 49.2±
5.6* 52.8±9.3
Array 2 62.2±8.2
56.1±5.3 ──
──────────────────────────
──────── The degree of secondary inflammation at each time point after adjuvant injection is shown by the rate of increase in the footpad volume of the contralateral hind paw. The DNA dose was 2 mg/rat. *
:p<0.05, **:p<0.01 (Stude
nt's t-test)
【００４５】実施例１５
パリンドローム構造を有する一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列
１）を、自己免疫疾患のモデル動物であって、自己免疫
疾患様の症状を自然発症するＭＲＬ／ＭＰＪ−ｌｐｒマ
ウスに対して投与することにより、尿中に***される蛋
白量が抑制された（表１７）。しかしパリンドローム構
造をもたないＤＮＡ（配列２）にはこの作用はみられな
かった。
表１７ ─────
─────────────────────────
──
尿蛋白量（ｍｇ）
検体 用量 ─
─────────────────────
（ｍｇ／ｋｇ）
０週目 ４週目
────────────────────────
──────── 対照 ０
０．７±０．５
４．０±２．６ 配列１ ０．０
３ ０．７±０．５ ３
．１±１．８ ０．３
０．７±０．５
３．３±１．８ ３
０．６±０．４
３．５±１．３ 配列２ ０．
０３ ０．７±０．６
４．１±２．３ ０．
３ ０．５±０．４
３．５±１．６ ３
０．７±０．５
３．９±３．０ ────────
────────────────────────
表１７（つづき） ─
─────────────────────────
──────
尿蛋白量
（ｍｇ） 検体 用量
──────────────────────
（ｍｇ／ｋｇ）
８週目 １２週目
────────────────────
──────────── 対照
０ ７．１±１３．５
１３．６±２２．２ 配列１
０．０３ ２．５±３．１
４．５±６．１
０．３ １．７±１．１＊
８．６±１２．３
３ ３．２±５．８
９．７±１６．１ 配列２
０．０３ ７．３±９．５
１２．６±６．２
０．３ ５．８±５．２
１０．７±１２．３
３ ５．４±４．０
１３．０±１８．８ ─────
─────────────────────────
── 検体投与開始以後の各時点におけ
る尿中蛋白量。
＊：ｐ＜０．０５（Ｓｔｕｄｅｎｔ’
ｓ ｔ−ｔｅｓｔ）以上の結果から、パリンドローム
構造を有する化学合成ＤＮＡには免疫薬理作用ばかりで
なく、免疫薬理作用を持つ薬剤に対して感受性のあるこ
とが知られている種々の疾患に対して治療効果があるこ
とが判明した。Example 15 A single-stranded linear DNA having a palindromic structure (sequence 1) was used in the MRL/MPJ-lpr mouse, which is an autoimmune disease model animal and naturally develops autoimmune disease-like symptoms. The amount of protein excreted in the urine was suppressed by administration to the following (Table 17). However, this effect was not observed with DNA that does not have a palindromic structure (sequence 2).
Table 17 ──────
──────────────────────────
──
Urine protein amount (mg)
Sample Dose ─
──────────────────────
(mg/kg)
Week 0 Week 4
────────────────────────
──────── Control 0
0.7±0.5
4.0±2.6 Array 1 0.0
3 0.7±0.5 3
．． 1±1.8 0.3
0.7±0.5
3.3±1.8 3
0.6±0.4
3.5±1.3 Array 2 0.
03 0.7±0.6
4.1±2.3 0.
3 0.5±0.4
3.5±1.6 3
0.7±0.5
3.9±3.0 ────────
────────────────────────
Table 17 (continued) ─
──────────────────────────
──────
Urine protein amount (mg) Sample Dose
──────────────────────
(mg/kg)
8th week 12th week
────────────────────
──────────── Contrast
0 7.1±13.5
13.6±22.2 Array 1
0.03 2.5±3.1
4.5±6.1
0.3 1.7±1.1*
8.6±12.3
3 3.2±5.8
9.7±16.1 Array 2
0.03 7.3±9.5
12.6±6.2
0.3 5.8±5.2
10.7±12.3
3 5.4±4.0
13.0±18.8 ──────
──────────────────────────
── Urinary protein amount at each time point after the start of sample administration. *: p<0.05 (Student'
From the above results, chemically synthesized DNA with a palindromic structure not only has immunopharmacological effects, but also has the ability to treat various diseases that are known to be sensitive to drugs that have immunopharmacological effects. It was found that there is a therapeutic effect.
【００４６】実施例１６
一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列１）とこれに相補的な配列を
持つ一本鎖直鎖状ＤＮＡによって構成される二本鎖直鎖
状ＤＮＡ（配列４２）のＮＫ細胞活性増強作用は殆ど変
わらなかった（表１８）。
表１８
──────────────────
───
検体 濃度 ＮＫ細胞活
性
（μｇ／ｍｌ）
───────────────────
── 対
照 ０ １４．２±０．
５ 配列
１ １０ ２１．６±１．２
１００ ４４．０±２．１
配列４２
１０ １９．９±１．５
１００ ４７．５±３．７
─────────────
────────Example 16 NK of a double-stranded linear DNA (sequence 42) composed of a single-stranded linear DNA (sequence 1) and a single-stranded linear DNA having a complementary sequence thereto There was almost no change in the cell activity enhancing effect (Table 18).
Table 18
────────────────────
───
Sample concentration NK cell activity
(μg/ml)
────────────────────
─ Control 0 14.2±0.
5 Array 1 10 21.6±1.2
100 44.0±2.1
array 42
10 19.9±1.5
100 47.5±3.7
──────────────
────────
【００４７】実施例１７
同じパリンドローム配列（ＧＡＣＧＴＣ）を有するＤＮ
Ａ（配列４３−４８）の内、パリンドローム外の配列と
してデオキシグアニル酸の繰り返し構造を持つもの（配
列４３）のＮＫ細胞活性増強効果が最も強かった（表１
９）。
表１９ ───
────────────────────
検体 パリンドローム外
ＮＫ細胞活性
配列の繰り返し単位 ───
────────────────────
対照
１３．３±０．９
配列４３ Ｇ
５４．４±２．４ 配列４４
Ａ ３２．１±１
．７ 配列４５ Ｔ
２８．９±１．２
配列４６ Ｃ
１６．５±０．９
配列４７ ＧＣ ２５．
０±１．０ 配列４８
ＧＡ ２６．８±１．１
──────────────────
─────ＤＮＡは５０μｇ／ｍｌの最終濃度になるよ
うに脾細胞に加えた。Example 17 DNs with the same palindromic sequence (GACGTC)
Among A (sequences 43-48), the one having a repeating structure of deoxyguanylate as a non-palindromic sequence (sequence 43) had the strongest NK cell activity enhancing effect (Table 1
9).
Table 19 ---
────────────────────
Specimen non-palindromic
NK cell activity
Repeating unit of array ────
────────────────────
contrast
13.3±0.9
Array 43 G
54.4±2.4 Array 44
A 32.1±1
．． 7 Array 45 T
28.9±1.2
Array 46C
16.5±0.9
Sequence 47 GC 25.
0±1.0 array 48
GA 26.8±1.1
────────────────────
──────DNA was added to splenocytes at a final concentration of 50 μg/ml.
【００４８】実施例１８
パリンドローム構造の内に５’−ＣＧ−３’なる構造を
含むＤＮＡは、同構造を含まないＤＮＡよりも強いＮＫ
細胞活性増強効果を示した（表２０）。
表２０ ───────────
─────────── 検体
パリンドローム ＮＫ細胞活性
─────────────
───────── 対照
１２．８±
０．６ 配列１１
ＡＡＣＧＴＴ ５０．０±１．８
配列１２ ＡＧＣＧＣＴ
４８．２±１．９ 配
列４９ ＣＧＡＴＣＧ ４７．７±１．４
配列５０ ＡＴＣＧＡ
Ｔ ４７．０±１．６
配列５１ ＴＣＧＣＧＡ ４７．０±
２．０ 配列５２
ＧＣＧＣＧＣ ４６．９±１．２
配列５３ ＣＧＴＡＣＧ
４６．６±１．９ 配
列５４ ＡＧＣＧＣＴ ４５．７±１．０
配列５５ ＣＧＧＣＣ
Ｇ ４４．２±１．７
配列３ ＧＡＣＧＴＣ ４２．１
±１．５ 配列５
６ ＧＴＣＧＡＣ ４２．０±１．３
配列５７ ＣＧＣＧＣＧ
４０．１±１．４
配列５８ ＡＣＧＣＧＴ ３９．５±１．
５ 配列５９ ＡＡＧＣ
ＴＴ ２０．１±０．８
配列６０ ＴＴＡＴＡＡ １９．９±０
．５ 配列６１ ＴＡＴ
ＡＴＡ １８．８±０．４
配列６２ ＡＧＴＡＣＴ １８．０±
０．７ 配列６３ ＧＡ
ＡＴＴＣ １７．７±０．６
配列６４ ＣＴＧＣＡＧ １７．５
±０．５ 配列６５ Ａ
ＡＡＴＴＴ １７．５±０．７
配列６６ ＣＣＴＡＧＧ １７．
０±０．７ ────────
──────────────ＤＮＡは５０μｇ／ｍｌ
の最終濃度になるように脾細胞に加えた。Example 18 DNA containing a 5'-CG-3' structure in the palindromic structure has a stronger NK than DNA that does not contain the same structure.
It showed a cell activity enhancing effect (Table 20).
Table 20 ────────────
──────────── Sample Palindrome NK cell activity
──────────────
────────── Contrast
12.8±
0.6 Array 11
AACGTT 50.0±1.8
Array 12 AGCGCT
48.2±1.9 Array 49 CGATCG 47.7±1.4
Array 50 ATCGA
T 47.0±1.6
Sequence 51 TCGCGA 47.0±
2.0 Array 52
GCGCGC 46.9±1.2
Array 53 CGTACG
46.6±1.9 Array 54 AGCGCT 45.7±1.0
Array 55 CGGCC
G 44.2±1.7
Sequence 3 GACGTC 42.1
±1.5 array 5
6 GTCGAC 42.0±1.3
Sequence 57 CGCGCG
40.1±1.4
Sequence 58 ACGCGT 39.5±1.
5 Array 59 AAGC
TT 20.1±0.8
Array 60 TTATAA 19.9±0
．． 5 Array 61 TAT
ATA 18.8±0.4
Array 62 AGTACT 18.0±
0.7 Array 63 GA
ATTC 17.7±0.6
Sequence 64 CTGCAG 17.5
±0.5 Array 65 A
AATTT 17.5±0.7
Sequence 66 CCTAGG 17.
0±0.7 ────────
──────────────DNA is 50μg/ml
was added to the splenocytes at a final concentration of .
【００４９】実施例１９
免疫不全疾患のモデル動物であるＬＰ−ＢＭ５ウィルス
感染マウスのリンパ球は、正常マウスと異なりＩＬ−２
で刺激してもＮＫ細胞活性が増強されないが、パリンド
ローム構造を有する一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列１）を投
与したウィルス感染マウスでは、ＩＬ−２のＮＫ細胞活
性増強効果が回復した（表２１）。その増強の程度は、
正常マウスリンパ球またはＡＺＴ（アジドチミジン、Ａ
ＩＤＳ治療薬）を投与したウィルス感染マウスリンパ球
をＩＬ−２で刺激した場合とほぼ同等であった。しかし
パリンドロームを有さない一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列２
）ではこの効果はみられなかった。
表２１ ───────────
───────────────────
マウス 投与薬物 ＩＬ−２添加
ＮＫ細胞活性 ───────
───────────────────────
正常 なし
− ７．０±０．９
＋ ２３．
５±１．５ 感染 対照（Ｐ
ＢＳ） − １．１±０
．４
＋
１．１±０．２ 感染
配列１ −
５．９±０．８
＋
２４．１±１．４ 感染
配列２ −
３．３±０．９
＋ ３．５±０．７
感染 ＡＺＴ
− １．９±１．０
＋ ２１．４±０
．６ ───────────────────
───────────Example 19 Lymphocytes of mice infected with LP-BM5 virus, which is a model animal for immunodeficiency disease, differ from normal mice in that they do not contain IL-2.
However, in virus-infected mice treated with single-stranded linear DNA with a palindromic structure (sequence 1), the NK cell activity-enhancing effect of IL-2 was restored ( Table 21). The degree of enhancement is
Normal mouse lymphocytes or AZT (azidothymidine, A
The results were almost the same as those obtained when virus-infected mouse lymphocytes administered with IDS therapeutic agent were stimulated with IL-2. However, single-stranded linear DNA without palindrome (sequence 2
), this effect was not observed.
Table 21 ────────────
────────────────────
Mouse Administered drug IL-2 addition NK cell activity ───────
────────────────────────
Normal None
−7.0±0.9
+23.
5±1.5 Infection Control (P
BS) - 1.1±0
．． 4
+
1.1±0.2 infection
Array 1 -
5.9±0.8
+
24.1±1.4 infection
Array 2 -
3.3±0.9
+3.5±0.7
Infection AZT
−1.9±1.0
+21.4±0
．． 6 ────────────────────
────────────
【００５０】実施例２０
パリンドローム構造を有する一本鎖直鎖状ＤＮＡ（配列
１）は重症複合免疫不全症のモデル動物であるＳＣＩＤ
マウスにおいてもＮＫ細胞活性を増強しインターフェロ
ンを誘発したが、パリンドローム構造を有さない一本鎖
直鎖状ＤＮＡ（配列２）ではこの効果はみられなかった
。（表２２）
表２２ ───────────
─────────────────────
マウス 検体 ＮＫ細胞
活性 ＩＦＮ力価（Ｕ／ｍｌ） ──────
─────────────────────────
─ ＢＡＬＢ／ｃ 対照
５．２±０．５ ＜４
配列１ １５．４±０
．７ １２８
配列２ ５．４±０．３
＜４ ＳＣＩＤ 対照
１８．３±１．０ １６
配列１
４３．９±１．５ ２５６
配列２ ２０．０±
１．１ １６ ────────
────────────────────────Ｄ
ＮＡは２０μｇ／ｍｌの最終濃度になるように脾細胞に
加えた。
ＮＫ細胞活性測定はＥ：Ｔ比＝２５：１で行なった。実
施例１９及び２０から本発明のパリンドローム構造を有
する一本鎖直鎖状ＤＮＡが免疫不全疾患の免疫機能の少
なくとも一部を回復することが証明された。Example 20 A single-stranded linear DNA (sequence 1) having a palindromic structure was used in SCID, a model animal for severe combined immunodeficiency disease.
It also enhanced NK cell activity and induced interferon in mice, but this effect was not observed with single-stranded linear DNA (sequence 2) that does not have a palindromic structure. (Table 22)
Table 22 ────────────
──────────────────────
Mouse sample NK cell activity IFN titer (U/ml) ──────
──────────────────────────
─ BALB/c control
5.2±0.5 <4
Array 1 15.4±0
．． 7 128
Array 2 5.4±0.3
<4 SCID control
18.3±1.0 16
array 1
43.9±1.5 256
Array 2 20.0±
1.1 16 ────────
──────────────────────────D
NA was added to splenocytes at a final concentration of 20 μg/ml. NK cell activity measurements were performed at an E:T ratio of 25:1. Examples 19 and 20 demonstrate that the single-stranded linear DNA having a palindromic structure of the present invention restores at least a portion of the immune function of immunodeficiency diseases.
【００５１】実施例２１
化学的に合成された塩基数４５のＤＮＡ（配列１）及び
塩基数３０のＤＮＡ（配列３）のマウスに対する急性毒
性は、対照とした合成ＲＮＡ（ｐｏｌｙＩ：Ｃ）よりも
著しく弱かった（表２３）。
表２３
──────────────────────
─── 検体
投与ルート ＬＤ５０（ｍｇ／
ｋｇ） ──────
───────────────────
ＤＮＡ 配列１ ｉ
ｖ ＞５００
ｉｐ ＞１０００
配列３ ｉ
ｖ ＞５００
ｉｐ ＞１０００
ｐｏｌｙＩ：Ｃ ｉｖ
８
ｉｐ ３０
────────────────
─────────また１群１０頭のＤＤＹマウスに１
ｇ／ｋｇの合成ＤＮＡ（配列１０，１１，１２，１４，
１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２
３，２４，２６，２７，２８，２９，３０，３１，３２
，３３，３４，３５，３６，３７，３８，３９，４２，
４３，４４，４５，４９，５０，５１，５２，５３，５
４，５５，５６，５７，５８）を腹腔内投与した後１週
間にわたって観察した結果、体重減少や死亡は認められ
なかった。Example 21 The acute toxicity of chemically synthesized DNA with 45 bases (sequence 1) and DNA with 30 bases (sequence 3) to mice was higher than that of synthetic RNA (polyI:C) used as a control. It was significantly weaker (Table 23).
Table 23
──────────────────────
─── Specimen
Administration route LD50 (mg/
kg) ──────
────────────────────
DNA sequence 1 i
v>500
ip >1000
array 3 i
v>500
ip >1000
polyI:Civ
8
ip 30
──────────────────
───────── Also, 1 for each group of 10 DDY mice
g/kg of synthetic DNA (sequences 10, 11, 12, 14,
15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 2
3, 24, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32
,33,34,35,36,37,38,39,42,
43, 44, 45, 49, 50, 51, 52, 53, 5
After intraperitoneal administration of 4,55,56,57,58), no weight loss or death was observed as a result of observation for one week.
【００５２】[0052]
【発明の効果】これまでＤＮＡ中の特定塩基配列がＤＮ
Ａの有する免疫調節作用に重要な影響を及ぼすことは全
く知られておらず、新しい知見である。本発明のＤＮＡ
はインタ−フェロンやマクロファ−ジ活性化因子の産生
を増強し、ＮＫ細胞やマクロファ−ジを活性化する。ま
たコロニ−刺激因子の産生を増強する作用やリンパ球の
増殖も促進することから、広範な免疫調節作用を有する
ものと推測される。更にこれらのＤＮＡは、それらの有
する免疫調節作用により実験腫瘍、免疫不全疾患実験モ
デル及び自己免疫疾患実験モデルに対して極めて有用な
治療剤であることが示された。しかもこれらのＤＮＡは
合成ＲＮＡと比べて急性毒性がきわめて低く、悪性腫瘍
、各種の自己免疫疾患、免疫不全疾患及び感染症の治療
剤等医薬としての有用性が期待される。[Effect of the invention] Until now, the specific base sequence in DNA was
It is completely unknown that A has a significant effect on the immunomodulatory effect, and this is a new finding. DNA of the present invention
enhances the production of interferon and macrophage activating factors, and activates NK cells and macrophages. It is also presumed to have a wide range of immunoregulatory effects since it enhances the production of colony-stimulating factors and promotes the proliferation of lymphocytes. Furthermore, these DNAs have been shown to be extremely useful therapeutic agents for experimental tumors, immunodeficiency disease experimental models, and autoimmune disease experimental models due to their immunomodulatory effects. Furthermore, these DNAs have extremely low acute toxicity compared to synthetic RNA, and are expected to be useful as medicines for treating malignant tumors, various autoimmune diseases, immunodeficiency diseases, and infectious diseases.
【００５３】[0053]
【００５４】配列番号：１
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧ ＡＣＧＧＣＣＡＣＣＧ ＴＧＣＴＧSequence number: 1 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: ACCGATGACG TCGCCGGTGA CGG
CACCACCG ACGGCCACCCG TGCTG
【
００５５】配列番号：２
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：
配列：
ＡＡＡＡＧＡＡＧＴＧ ＧＧＧＴＧＣＣＣＣＣ ＡＣＧ
ＡＴＣＡＣＣＡ ＡＣＧＡＴＧＧＴＧＴ ＧＴＣＣＡ[
SEQ ID NO: 2 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: Sequence: AAAAGAAGTG GGGTGCCCCC ACG
ATCACCA ACGATGGTGT GTCCA
【
００５６】配列番号：３
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧ[
Sequence number: 3 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Containing sequence: ACCGATGACG TCGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【００５７】配列番号：４
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：
配列：
ＧＧＴＧＡＣＧＧＣＡ ＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣ ＣＡＣ
ＣＧＴＧＣＴＧSEQ ID NO: 4 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: Sequence: GGTGACGGCA CCACGACGGC CAC
CGTGCTG
【００５８】配列番号：５
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：
配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＴ ＧＣＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 5 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: Sequence: ACCGATGACT GCGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【００５９】配列番号：６
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 6 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: ACCGATGACG TCGCCGTGGA CGG
CACCACCG
【００６０】配列番号：７
配列の長さ：２９
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：
配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＧＴ ＣＧＣＣＧＧＴＧＡＣ ＧＧＣ
ＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 7 Sequence length: 29 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: Sequence: ACCGATGAGT CGCCGGTGAC GGC
ACCACG
【００６１】配列番号：８
配列の長さ：２９
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＧSequence number: 8 Sequence length: 29 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: ACCGATGACG TCGCCGGTGA CGG
CACCAG
【００６２】配列番号：９
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＧＡＣＧＴＣＧＣＣＧ ＧＴＧＡＣＧＧＣＡＣ ＣＡＣ
ＧＡＣＣＧＡＴSequence number: 9 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: GACGTCGCCG GTGACGGCAC CAC
GACCGAT
【００６３】配列番号：１０
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＡＣＧＡＣＣＧ ＡＴＧＡＣＧＴＣＧＣ ＣＧＧ
ＴＧＡＣＧＧＣSequence number: 10 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: ACCACGACCG ATGACGTCGC CGG
TGACGGC
【００６４】配列番号：１１
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＡＣＧＴＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＡＣＧ ＴＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 11 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (AACGTT) Sequence containing: ACCGATAACG TTGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【００６５】配列番号：１２
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＧＣＧＣＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＧＣＧ ＣＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 12 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (AGCGCT) Sequence containing: ACCGATAGCG CTGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【００６６】配列番号：１３
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：
配列：
ＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧ ＧＡＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSEQ ID NO: 13 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: Sequence: TCGGTGCAGG GAATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００６７】配列番号：１４
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＴＣＧＧＴＧＧＡＣＧ ＴＣＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSEQ ID NO: 14 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid chain type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: TCGGTGGACG TCATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００６８】配列番号：１５
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＡＴＣＧ）を含
む配列：
ＴＣＧＧＴＧＣＧＡＴ ＣＧＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSequence number: 15 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGATCG) Sequence containing: TCGGTGCGAT CGATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００６９】配列番号：１６
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＴＣＧＡＴ）を含
む配列：
ＴＣＧＧＴＧＡＴＣＧ ＡＴＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSEQ ID NO: 16 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (ATCGAT) Sequence containing: TCGGTGATCG ATATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００７０】配列番号：１７
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＴＣＧＣＧＡ）を含
む配列：
ＴＣＧＧＴＧＴＣＧＣ ＧＡＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSequence number: 17 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (TCGCGA) Sequence containing: TCGGTGTCGC GAATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００７１】配列番号：１８
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＣＧＣＧＣ）を含
む配列：
ＴＣＧＧＴＧＧＣＧＣ ＧＣＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSequence number: 18 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GCGCGC) Sequence containing: TCGGTGGCGC GCATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００７２】配列番号：１９
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＴＡＣＧ）を含
む配列：
ＴＣＧＧＴＧＣＧＴＡ ＣＧＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSEQ ID NO: 19 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGTACG) Sequence containing: TCGGTGCGTA CGATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００７３】配列番号：２０
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＧＣＣＧ）を含
む配列：
ＴＣＧＧＴＧＣＧＧＣ ＣＧＡＴＧＴＣＧＣＡ ＧＧＡ
ＣＣＣＧＧＴＣSequence number: 20 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGGCCG) Sequence containing: TCGGTGCGGC CGATGTCGCA GGA
CCCGGTC
【００７４】配列番号：２１
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＡＡＡＧＡＡＧＴＧ ＧＧＧＡＣＧＴＣＴＴ ＡＣＧ
ＡＴＣＡＣＣＡSequence number: 21 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: AAAAGAAGTG GGGACGTCTT ACG
ATCACCA
【００７５】配列番号：２２
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＧＡＣＧＴＣＣ）
を含む配列：
ＡＡＡＡＧＡＡＧＴＧ ＧＧＧＡＣＧＴＣＣＴ ＡＣＧ
ＡＴＣＡＣＣＡSEQ ID NO: 22 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GGACGTCC)
Sequence containing: AAAAGAAGTG GGGACGTCCT ACG
ATCACCA
【００７６】配列番号：２３
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＧＡＣＧＴＣＣ
Ｇ）を含む配列：
ＡＡＡＡＧＡＡＧＴＧ ＣＧＧＡＣＧＴＣＣＧ ＡＣＧ
ＡＴＣＡＣＣＡSEQ ID NO: 23 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGGACGTCC
G): AAAAGAAGTG CGGACGTCCG ACG
ATCACCA
【００７７】配列番号：２４
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＣＧＴ）を含む配
列：
ＡＡＡＡＧＡＡＧＴＧ ＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴ ＡＣＧ
ＡＴＣＡＣＣＡSequence number: 24 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (ACGT) Sequence containing: AAAAGAAGTG GGAACGTCTT ACG
ATCACCA
【００７８】配列番号：２５
配列の長さ：６
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＧＡＣＧＴＣSequence number: 25 Sequence length: 6 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: GACGTC
【００７９】配列番号：２６
配列の長さ：１０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＴＧＡＣＧＴＣＧＣSEQ ID NO: 26 Sequence length: 10 Sequence type: Nucleic acid chain type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: ATGACGTCGC
【００８０】配列番号：２７
配列の長さ：１５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＣＣＧＡＴＧＡＣＧＴ ＣＧＣＣＧSEQ ID NO: 27 Sequence length: 15 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: CCGATGACGT CGCCG
【００８１】配列番号：２８
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＧＡＣＣＧＡＴＧＡＣ ＧＴＣＧＣＣＧＧＴＧSequence number: 28 Sequence length: 20 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: GACCGATGAC GTCGCCGGTG
【００８
２】配列番号：２９
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＴＧＡＣＡＧＡＣＣＧ ＡＴＧＡＣＧＴＣＧＣ ＣＧＧ
ＴＧＧＡＣＧＧ008
2] Sequence number: 29 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid chain type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Containing sequence: TGACAGACCG ATGACGTCGC CGG
TGGACGG
【００８３】配列番号：３０
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＣＣＡＧＴＧＡＴＴＧ ＡＣＡＧＡＣＣＧＡＴ ＧＡＣ
ＧＴＣＧＣＣＧ ＧＴＧＧＡＣＧＧＣＴ ＣＡＧＴＧSEQ ID NO: 30 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: CCAGTGATTG ACAGACCGAT GAC
GTCGCCG GTGGACGGCT CAGTG
【
００８４】配列番号：３１
配列の長さ：６０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＴＧＣＧＡＣＣＣＣＡ ＧＴＧＡＴＴＧＡＣＡ ＧＡＣ
ＣＧＡＴＧＡＣ ＧＴＣＧＣＣＧＧＴＧ ＧＡＣＧＧＣ
ＴＣＡＧ ＴＧＡＴＡＡＴＴＴＡ[
Sequence number: 31 Sequence length: 60 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Containing sequence: TGCGACCCCA GTGATTGACA GAC
CGATGAC GTCGCCGGTG GACGGC
TCAG TGATAATTTA
【００８５】配列番号：３２
配列の長さ：８０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣ ＴＧＣＧＡＣＣＣＣＡ ＧＴＧ
ＡＴＴＧＡＣＡ ＧＡＣＣＧＡＴＧＡＣ ＧＴＣＧＣＣ
ＧＧＴＧ ＧＡＣＧＧＣＴＣＡＧ
ＴＧＡＴＡＡＴＴＴＡ ＧＡＴＡＧＴＡＣＡＣSEQ ID NO: 32 Sequence length: 80 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: CCTCAGTCAC TGCGACCCCA GTG
ATTGACA GACCGATGAC GTCGCC
GGTG GACGGCTCAG TGATAATTTA GATAGTACAC
【００８
６】配列番号：３３
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：２つのパリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ
）を含む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＣ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧ ＡＣＧＧＣＣＡＣＣＧ ＴＧＣＴＧ008
6] Sequence number: 33 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid chain type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Two palindromes (GACGTC
): ACCGATGACG TCGCGACGTC CGG
CACCACCG ACGGCCACCCG TGCTG
【
００８７】配列番号：３４
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：３つのパリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ
）を含む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＣ ＣＧＧ
ＡＣＧＴＣＣＧ ＡＣＧＧＣＣＡＣＣＧ ＴＧＣＴＧ[
Sequence number: 34 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid chain type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Three palindromes (GACGTC
): ACCGATGACG TCGCGACGTC CGG
ACGTCCG ACGGCCACCG TGCTG
【
００８８】配列番号：３５
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：４つのパリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ
）を含む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＣ ＣＧＧ
ＡＣＧＴＣＣＧ ＧＡＣＧＴＣＡＣＣＧ ＴＧＣＴＧ[
Sequence number: 35 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Four palindromes (GACGTC
): ACCGATGACG TCGCGACGTC CGG
ACGTCCG GACGTCACCG TGCTG
【
００８９】配列番号：３６
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：５つのパリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ
）を含む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＣ ＣＧＧ
ＡＣＧＴＣＣＧ ＧＡＣＧＴＣＡＣＣＧ ＡＣＧＴＣ[
Sequence number: 36 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Five palindromes (GACGTC
): ACCGATGACG TCGCGACGTC CGG
ACGTCCG GACGTCACCG ACGTC
【
００９０】配列番号：３７
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＧＡＣＧＴＣＧＡＣＧ ＴＣＧＡＣＧＴＣＧＡ ＣＧＴ
ＣＧＡＣＧＴＣ[
Sequence number: 37 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Containing sequence: GACGTCGACG TCGACGTCGA CGT
CGACGTC
【００９１】配列番号：３８
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＡＣＧＴＧ）を含
む配列：
ＣＡＣＧＴＧＣＡＣＧ ＴＧＣＡＣＧＴＧＣＡ ＣＧＴ
ＧＣＡＣＧＴＧSEQ ID NO: 38 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CACGTG) Sequence containing: CACGTGCACG TGCACGTGCA CGT
GCACGTG
【００９２】配列番号：３９
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＡＣＧＴＴ）を含
む配列：
ＡＡＣＧＴＴＡＡＣＧ ＴＴＡＡＣＧＴＴＡＡ ＣＧＴ
ＴＡＡＣＧＴＴSEQ ID NO: 39 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (AACGTT) Sequence containing: AACGTTAACG TTAACGTTAA CGT
TAACGTT
【００９３】配列番号：４０
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＣＧＣＧＣ）を含
む配列：
ＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣ ＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣ ＧＣＧ
ＣＧＣＧＣＧＣSequence number: 40 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GCGCGC) Sequence containing: GCGCGCGCGC GCGCGCGCGC GCG
CGCGCGC
【００９４】配列番号：４１
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＴＡＴＡＴ）を含
む配列：
ＡＴＡＴＡＴＡＴＡＴ ＡＴＡＴＡＴＡＴＡＴ ＡＴＡ
ＴＡＴＡＴＡＴSequence number: 41 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (ATATAT) Sequence containing: ATATATATAT ATATATATAT ATA
TATAATAT
【００９５】配列番号：４２
配列の長さ：４５
配列の型：核酸
鎖の型：二本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
５’−ＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧ ＴＣＧＣＣＧＧＴＧＡ
ＣＧＧＣＡＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＣＣＧ ＴＧＣＴ
Ｇ−３’
３’−ＴＧＧＣＴＡＣＴＧＣ ＡＧＣＧＧＣＣＡＣＴ
ＧＣＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＣＣＧＧＴＧＧＣ ＡＣＧＡ
Ｃ−５’Sequence number: 42 Sequence length: 45 Sequence type: Nucleic acid strand type: Double stranded Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: 5'-ACCGATGACG TCGCCGGTGA
CGGCACCACGACGGCACCCGTGCT
G-3'3'-TGGCTACTGC AGCGGCCACT
GCCGTGGTGCTGCCGGTGGC ACGA
C-5'
【００９６】配列番号：４３
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧ ＧＧＧＡＣＧＴＣＧＧ ＧＧＧ
ＧＧＧＧＧＧＧSequence number: 43 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: GGGGGGGGGG GGGACGTCGG GGG
GGGGGGG
【００９７】配列番号：４４
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＧＡＣＧＴＣＡＡ ＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡSequence number: 44 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: AAAAAAAAAAAA AAGACGTCAA AAA
AAAAAAAAA
【００９８】配列番号：４５
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ ＴＴＧＡＣＧＴＣＴＴ ＴＴＴ
ＴＴＴＴＴＴＴSequence number: 45 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: TTTTTTTTTTTT TTGACGTCTT TTT
TTTTTTT
【００９９】配列番号：４６
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ ＣＣＧＡＣＧＴＣＣＣ ＣＣＣ
ＣＣＣＣＣＣＣSEQ ID NO: 46 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: CCCCCCCCCC CCGACGTCCC CCC
CCCCCCCC
【０１００】配列番号：４７
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣ ＧＣＧＡＣＧＴＣＧＣ ＧＣＧ
ＣＧＣＧＣＧＣSEQ ID NO: 47 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: GCGCGCGCGC GCGACGTCGC GCG
CGCGCGC
【０１０１】配列番号：４８
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＣＧＴＣ）を含
む配列：
ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ ＧＡＧＡＣＧＴＣＧＡ ＧＡＧ
ＡＧＡＧＡＧＡSEQ ID NO: 48 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GACGTC) Sequence containing: GAGAGAGAGGA GAGACGTCGA GAG
AGAGAGA
【０１０２】配列番号：４９
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＡＴＣＧ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＣＧＡＴ ＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 49 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGATCG) Sequence containing: ACCGATCGAT CGGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１０３】配列番号：５０
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＴＣＧＡＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＴＣＧ ＡＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSequence number: 50 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (ATCGAT) Sequence containing: ACCGATATCG ATGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１０４】配列番号：５１
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＴＣＧＣＧＡ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＴＣＧＣ ＧＡＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSequence number: 51 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (TCGCGA) Sequence containing: ACCGATTCGC GAGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１０５】配列番号：５２
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＣＧＣＧＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＣＧＣ ＧＣＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSequence number: 52 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GCGCGC) Sequence containing: ACCGATGCGC GCGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１０６】配列番号：５３
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＴＡＣＧ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＣＧＴＡ ＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 53 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGTACG) Sequence containing: ACCGATCGTA CGGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１０７】配列番号：５４
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＧＣＧＣＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＧＣＧ ＣＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 54 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (AGCGCT) Sequence containing: ACCGATAGCG CTGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１０８】配列番号：５５
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＧＣＣＧ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＣＧＧＣ ＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSequence number: 55 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGGCCG) Sequence containing: ACCGATCGGC CGGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１０９】配列番号：５６
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＴＣＧＡＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＴＣＧ ＡＣＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 56 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GTCGAC) Sequence containing: ACCGATGTCG ACGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１０】配列番号：５７
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＧＣＧＣＧ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＣＧＣＧ ＣＧＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSequence number: 57 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CGCGCG) Sequence containing: ACCGATCGCG CGGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１１】配列番号：５８
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＣＧＣＧＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＣＧＣ ＧＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 58 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (ACGCGT) Sequence containing: ACCGATACGC GTGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１２】配列番号：５９
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＡＧＣＴＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＡＧＣ ＴＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 59 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (AAGCTT) Sequence containing: ACCGATAAGC TTGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１３】配列番号：６０
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＴＴＡＴＡＡ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＴＴＡＴ ＡＡＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 60 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (TTATAA) Sequence containing: ACCGATTTAT AAGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１４】配列番号：６１
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＴＡＴＡＴＡ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＴＡＴＡ ＴＡＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 61 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (TATATA) Sequence containing: ACCGATTATA TAGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１５】配列番号：６２
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＧＴＡＣＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＧＴＡ ＣＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSequence number: 62 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (AGTACT) Sequence containing: ACCGATAGTA CTGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１６】配列番号：６３
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＧＡＡＴＴＣ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＧＡＡＴ ＴＣＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 63 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (GAATTC) Sequence containing: ACCGATGAAT TCGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１７】配列番号：６４
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＴＧＣＡＧ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＣＴＧＣ ＡＧＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSEQ ID NO: 64 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CTGCAG) Sequence containing: ACCGATCTGC AGGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１８】配列番号：６５
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＡＡＡＴＴＴ）を含
む配列：
ＡＣＣＧＡＴＡＡＡＴ ＴＴＧＣＣＧＧＴＧＡ ＣＧＧ
ＣＡＣＣＡＣＧSequence number: 65 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (AAATTT) Sequence containing: ACCGATAAAAT TTGCCGGTGA CGG
CACCACCG
【０１１９】配列番号：６６
配列の長さ：３０
配列の型：核酸
鎖の型：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ
配列の特徴：Ｐ：パリンドローム（ＣＣＴＡＧＧ）を含
む配列：SEQ ID NO: 66 Sequence length: 30 Sequence type: Nucleic acid strand type: Single strand Topology: Linear Sequence type: Other nucleic acids Synthetic DNA Sequence characteristics: P: Palindrome (CCTAGG) Array containing:
Claims (1)
Ｙ３ ・・・Ｙｎ −３’ （１）（式中
、ｎは３から５０の整数であり、Ｘ１ 、Ｘ２ 、Ｘ３
、・・・、Ｘｎ 及びＹ１ 、Ｙ２ 、Ｙ３ 、・・
・、Ｙｎ はモノデオキシリボヌクレオチドであって、
Ｘ１ 、Ｘ２ 、Ｘ３ 、・・・、Ｘｎ は互いに同一
でも異なっていてもよい。またＸ１ とＹ１ 、Ｘ２
とＹ２ 、Ｘ３ とＹ３ 、・・・、Ｘｎ とＹｎ の
塩基はそれぞれ互いにＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ的意味
において相補性を有する。）で示される構造を１個また
は２個以上含む塩基数１０〜１００の一本鎖直鎖状ポリ
デオキシリボヌクレオチド、またはその塩を有効成分と
する免疫調節型治療剤。 【請求項２】 二本鎖直鎖状ポリデオキシリボヌクレ
オチドであって、少なくともその一方の一本鎖直鎖状ポ
リデオキシリボヌクレオチドは一般式（１）で示される
構造を１個または２個以上含む二本鎖直鎖状ポリデオキ
シリボヌクレオチド、またはその塩を有効成分とする免
疫調節型治療剤。 【請求項３】 一般式（１）で示されるＸ１ がデオ
キシグアニル酸またはデオキシシチジル酸である請求項
１または２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項４】 一般式（１）で示される構造が５’−
ＧＡＣＧＴＣ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸、
Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、Ｔ
はデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または２
記載の免疫調節型治療剤。 【請求項５】 一般式（１）で示される構造が５’−
ＡＧＣＧＣＴ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸、
Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、Ｔ
はデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または２
記載の免疫調節型治療剤。 【請求項６】 一般式（１）で示される構造が５’−
ＧＡＴＡＴＣ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸、
Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、Ｔ
はデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または２
記載の免疫調節型治療剤。 【請求項７】 一般式（１）で示される構造が５’−
ＡＧＧＣＣＴ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸、
Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、Ｔ
はデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または２
記載の免疫調節型治療剤。 【請求項８】 一般式（１）で示される構造が５’−
ＡＣＧＣＧＴ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸、
Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、Ｔ
はデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または２
記載の免疫調節型治療剤。 【請求項９】 一般式（１）で示される構造が５’−
ＣＧＡＴＣＧ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸、
Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、Ｔ
はデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または２
記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１０】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＡＴＣＧＡＴ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、
Ｔはデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または
２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１１】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＴＣＧＣＧＡ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、
Ｔはデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または
２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１２】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＡＡＣＧＴＴ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、
Ｔはデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または
２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１３】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＧＣＧＣＧＣ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ｃはデオキシシチジル酸を示す）である請求項１また
は２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１４】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＣＧＴＡＣＧ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、
Ｔはデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または
２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１５】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＣＧＧＣＣＧ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ｃはデオキシシチジル酸を示す）である請求項１また
は２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１６】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＧＴＣＧＡＣ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ａはデオキシアデニル酸、Ｃはデオキシシチジル酸、
Ｔはデオキシチミジル酸を示す）である請求項１または
２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１７】 一般式（１）で示される構造が５’
−ＣＧＣＧＣＧ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸
、Ｃはデオキシシチジル酸を示す）である請求項１また
は２記載の免疫調節型治療剤。 【請求項１８】 一般式（１）で示される構造以外の
部分がデオキシグアニル酸の繰り返し構造である請求項
１から請求項１７に記載の免疫調節型治療剤【請求項１
９】 一般式（１）で示される構造のうちに、５’−
ＣＧ−３’（式中、Ｇはデオキシグアニル酸、Ｃはデオ
キシシチジル酸を示す）なる構造を一個または二個以上
含む請求項１または２に記載の免疫調節型治療剤。 【請求項２０】 一般式（１）で示される構造以外の
部分がデオキシグアニル酸の繰り返し構造である請求項
１９に記載の免疫調節型治療剤。 【請求項２１】 悪性腫瘍、感染症、免疫不全疾患、
自己免疫疾患の治療に用いられる請求項１または２に記
載の免疫調節型治療剤。[Scope of Claims] [Claim 1] General formula (1) 5'-Xn...X3 X2 X1 Y1 Y2
Y3...Yn -3' (1) (where n is an integer from 3 to 50, X1, X2, X3
,...,Xn and Y1, Y2, Y3,...
・, Yn is a monodeoxyribonucleotide,
X1, X2, X3,..., Xn may be the same or different. Also, X1, Y1, X2
The bases of and Y2, X3 and Y3, . . . , Xn and Yn are complementary to each other in the Watson-Crick sense. ) An immunomodulatory therapeutic agent containing a single-stranded linear polydeoxyribonucleotide having 10 to 100 bases, or a salt thereof, as an active ingredient, and containing one or more structures represented by the following. 2. A double-stranded linear polydeoxyribonucleotide, wherein at least one of the single-stranded linear polydeoxyribonucleotides is a double-stranded linear polydeoxyribonucleotide containing one or more structures represented by general formula (1). An immunomodulatory therapeutic agent containing a linear polydeoxyribonucleotide or a salt thereof as an active ingredient. 3. The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein X1 in general formula (1) is deoxyguanylic acid or deoxycytidylic acid. Claim 4: The structure represented by general formula (1) is 5'-
GACGTC-3' (wherein G is deoxyguanylic acid,
A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid, T
represents deoxythymidylic acid).
The immunomodulatory therapeutic agent described. Claim 5: The structure represented by general formula (1) is 5'-
AGCGCT-3' (wherein G is deoxyguanylic acid,
A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid, T
represents deoxythymidylic acid).
The immunomodulatory therapeutic agent described. Claim 6: The structure represented by general formula (1) is 5'-
GATATC-3' (wherein G is deoxyguanylic acid,
A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid, T
represents deoxythymidylic acid).
The immunomodulatory therapeutic agent described. Claim 7: The structure represented by general formula (1) is 5'-
AGGCCT-3' (wherein G is deoxyguanylic acid,
A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid, T
represents deoxythymidylic acid).
The immunomodulatory therapeutic agent described. Claim 8: The structure represented by general formula (1) is 5'-
ACGCGT-3' (wherein, G is deoxyguanylic acid,
A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid, T
represents deoxythymidylic acid).
The immunomodulatory therapeutic agent described. Claim 9: The structure represented by general formula (1) is 5'-
CGATCG-3' (wherein G is deoxyguanylic acid,
A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid, T
represents deoxythymidylic acid).
The immunomodulatory therapeutic agent described. Claim 10: The structure represented by general formula (1) is 5'
-ATCGAT-3' (wherein, G is deoxyguanylic acid, A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid,
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein T represents deoxythymidylic acid. Claim 11: The structure represented by general formula (1) is 5'
-TCGCGA-3' (wherein, G is deoxyguanylic acid, A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid,
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein T represents deoxythymidylic acid. 12. The structure represented by general formula (1) is 5'
-AACGTT-3' (wherein, G is deoxyguanylic acid, A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid,
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein T represents deoxythymidylic acid. 13. The structure represented by general formula (1) is 5'
-GCGCGC-3' (in the formula, G represents deoxyguanylic acid and C represents deoxycytidylic acid), the immunomodulating therapeutic agent according to claim 1 or 2. 14. The structure represented by general formula (1) is 5'
-CGTACG-3' (wherein, G is deoxyguanylic acid, A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid,
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein T represents deoxythymidylic acid. Claim 15: The structure represented by general formula (1) is 5'
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, which is -CGGCCG-3' (wherein G represents deoxyguanylic acid and C represents deoxycytidylic acid). 16. The structure represented by general formula (1) is 5'
-GTCGAC-3' (wherein, G is deoxyguanylic acid, A is deoxyadenylic acid, C is deoxycytidylic acid,
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein T represents deoxythymidylic acid. 17. The structure represented by general formula (1) is 5'
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, which is -CGCGCG-3' (wherein G represents deoxyguanylic acid and C represents deoxycytidylic acid). 18. The immunomodulating therapeutic agent according to claims 1 to 17, wherein the moiety other than the structure represented by general formula (1) is a repeating structure of deoxyguanylic acid.
9] In the structure represented by general formula (1), 5'-
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, which contains one or more structures of CG-3' (in the formula, G represents deoxyguanylic acid and C represents deoxycytidylic acid). 20. The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 19, wherein the moiety other than the structure represented by general formula (1) is a repeating structure of deoxyguanylic acid. [Claim 21] Malignant tumor, infectious disease, immunodeficiency disease,
The immunomodulatory therapeutic agent according to claim 1 or 2, which is used for the treatment of autoimmune diseases.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17805891A JPH04352724A (en) | 1990-07-27 | 1991-07-18 | Immunomodulation type therapeutic agent |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19777890 | 1990-07-27 | ||
| JP2-197778 | 1990-07-27 | ||
| JP17805891A JPH04352724A (en) | 1990-07-27 | 1991-07-18 | Immunomodulation type therapeutic agent |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04352724A true JPH04352724A (en) | 1992-12-07 |
Family
ID=26498366
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17805891A Pending JPH04352724A (en) | 1990-07-27 | 1991-07-18 | Immunomodulation type therapeutic agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04352724A (en) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994018987A1 (en) * | 1993-02-19 | 1994-09-01 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Drug composition containing nucleic acid copolymer |
| JP2002539265A (en) * | 1999-03-19 | 2002-11-19 | アシスタンス ピュブリック−オピト ド パリ | Use of a Stabilized Oligonucleotide for the Preparation of a Drug with Antitumor Activity |
| JP2005502338A (en) * | 2001-08-17 | 2005-01-27 | コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド | Combinatorial motif immunostimulatory oligonucleotides with improved activity |
| WO2006035939A1 (en) * | 2004-09-30 | 2006-04-06 | Osaka University | Immune stimulating oligonucleotide and use thereof in pharmaceutical |
| JP2006512096A (en) * | 2002-12-23 | 2006-04-13 | ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of use thereof |
| WO2007139190A1 (en) | 2006-05-31 | 2007-12-06 | Toray Industries, Inc. | Immunostimulatory oligonucleotide and pharmaceutical application thereof |
| JP2008169216A (en) * | 1994-07-15 | 2008-07-24 | Univ Of Iowa Research Foundation | Immunoregulatory oligonucleotide |
| US7790189B2 (en) * | 2003-05-15 | 2010-09-07 | Mitsui Sugar Co., Ltd. | Immunostimulating agents |
| US8158768B2 (en) | 2002-12-23 | 2012-04-17 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
-
1991
- 1991-07-18 JP JP17805891A patent/JPH04352724A/en active Pending
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994018987A1 (en) * | 1993-02-19 | 1994-09-01 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Drug composition containing nucleic acid copolymer |
| JP2008169216A (en) * | 1994-07-15 | 2008-07-24 | Univ Of Iowa Research Foundation | Immunoregulatory oligonucleotide |
| JP2002539265A (en) * | 1999-03-19 | 2002-11-19 | アシスタンス ピュブリック−オピト ド パリ | Use of a Stabilized Oligonucleotide for the Preparation of a Drug with Antitumor Activity |
| JP2005502338A (en) * | 2001-08-17 | 2005-01-27 | コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド | Combinatorial motif immunostimulatory oligonucleotides with improved activity |
| US8158768B2 (en) | 2002-12-23 | 2012-04-17 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
| JP2006512096A (en) * | 2002-12-23 | 2006-04-13 | ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of use thereof |
| JP2012070757A (en) * | 2002-12-23 | 2012-04-12 | Dynavax Technologies Corp | Immunostimulatory sequence oligonucleotide and method for using the same |
| US8871732B2 (en) | 2002-12-23 | 2014-10-28 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
| US9422564B2 (en) | 2002-12-23 | 2016-08-23 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
| US10196643B2 (en) | 2002-12-23 | 2019-02-05 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
| US11312965B2 (en) | 2002-12-23 | 2022-04-26 | Trisalus Life Sciences, Inc. | Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same |
| US7790189B2 (en) * | 2003-05-15 | 2010-09-07 | Mitsui Sugar Co., Ltd. | Immunostimulating agents |
| WO2006035939A1 (en) * | 2004-09-30 | 2006-04-06 | Osaka University | Immune stimulating oligonucleotide and use thereof in pharmaceutical |
| WO2007139190A1 (en) | 2006-05-31 | 2007-12-06 | Toray Industries, Inc. | Immunostimulatory oligonucleotide and pharmaceutical application thereof |
| US8592566B2 (en) | 2006-05-31 | 2013-11-26 | Toray Industries, Inc. | Immunostimulatory oligonucleotides and use thereof in pharmaceuticals |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0468520A2 (en) | Immunostimulatory remedies containing palindromic DNA sequences | |
| CN103908468B (en) | Application of cyclic dinucleotide cGAMP in preparing anti-tumor medicaments | |
| JP3049258B2 (en) | New antiviral compounds | |
| US20050143337A1 (en) | Nucleic acid-based compounds and methods of use thereof | |
| IL217228A (en) | Nucleoside phosphoramidate prodrugs of 2'-deoxy-2'-fluoro-2'-c-methyluridine | |
| JP2007099747A (en) | Treatment for avian influenza infection | |
| JPH06508846A (en) | Treatment of chemotherapeutic and antiviral drug toxicity with acylated pyrimidine nucleosides | |
| WO2017155234A1 (en) | Peptide for preventing or treating inflammatory diseases and use thereof | |
| JPH04352724A (en) | Immunomodulation type therapeutic agent | |
| JPH10505578A (en) | Pyrimidine nucleotide precursors for the treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis | |
| CN105348345A (en) | Prodrug containing tiopronin structure, preparation method of prodrug, pharmaceutical composition and application of pharmaceutical composition | |
| BR112015016420B1 (en) | IMMUNORREGULATORY OLIGONUCLEOTIDE COMPOUND, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND USE OF THE IRO COMPOUND OR PHARMACEUTICAL COMPOSITION | |
| JPWO2016152767A1 (en) | CpG spacer oligonucleotide-containing complex having immunostimulatory activity and use thereof | |
| JP6536964B2 (en) | Application of nucleic acid polysaccharide complex having immunostimulatory activity as antitumor agent | |
| JPH08503699A (en) | Pyrimidine nucleotide precursors for the treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis | |
| CN1312254A (en) | Novel nucleoside | |
| JP7027448B2 (en) | Blood cancer therapeutic agent | |
| WO2010015148A1 (en) | Oligodeoxynucleotides with function of immunosuppression | |
| JP5359883B2 (en) | Hepatitis treatment or prevention | |
| CN106928298B (en) | Structural composition of cyclic dinucleotide cGAMP derivative, preparation method and application of cyclic dinucleotide cGAMP derivative in tumor resistance | |
| CN113827603B (en) | Application of adefovir in preparing medicine for treating glioma | |
| EP1421942A1 (en) | Use of glycyrrhizin and its derivatives as RANTES inducers | |
| CN106692967A (en) | Application of cyclic dinucleotide cGAMP combined PD1 antibody (Nivolumab) in preparation of antitumor drugs | |
| CN113827604A (en) | Application of Rudesiwei in preparing medicine for treating tumor or resisting tumor metastasis | |
| CN114225043A (en) | Application of stachyose modified substance in preparation of medicine for treating castration-resistant prostate cancer |