JPH04230221A - 抗炎症剤としてのエフオマイシンａ、ｅおよびｇの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、急性および慢性の炎症の処置の
ための天然の物質のエフォマイシン（ｅｆｏｍｙｃｉｎ
）Ａ、ＥおよびＧの使用、ことに心筋梗塞の治療におけ
る薬物としてのそれらの使用に関する。

【０００２】天然の物質エフォマイシンＡ、ＥおよびＧ
が反芻動物における微生物に抗バクテリア作用を有し、
そして獣医学における生産および成長の促進剤として使
用することができることは、既に、開示された［参照、
欧州特許（ＥＰ）１９７，３６０号および欧州特許（Ｅ
Ｐ）２３６，８９４号］。

【０００３】エフォマイシンＥは、Ｘ線の構造の研究に
従い、抗生物質のエライオフィリン（ｅｌａｉｏｐｈｙ
ｌｉｎ）と同一であることは、さらに、開示され［参照
、ヘルベチカ・ヒミカ・アクタ（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ　
　Ｃｈｉｍｉｃａ　　Ａｃｔａ）、６４、４０７−４２
４（１９８１）；６５２６２−２６７］、これは抗生お
よび抗微生物作用をもつ、名称アザロマイシン（ａｚａ
ｌｏｍｙｃｉｎ）Ｂで米国特許第３，０７６，７４６号
において発表された。

【０００４】今回、一般式（Ｉ）

【０００５】

【化５】

【０００６】式中、Ｒ１はメチルであり、そしてＲ２は
式

【０００７】

【化６】

【０００８】の基であるか、あるいはＲ１はメチルであ
り、そしてＲ２は式

【０００９】

【化７】

【００１０】の基であるか、あるいはＲ１は水素であり
、そしてＲ２は式

【００１１】

【化８】

【００１２】である、の天然の物質のエフォマイシンＡ
、ＥおよびＧは、既知の生産および成長促進、抗生およ
び抗微生物の活性のほかに、驚くべきことには、また、
急性および慢性の炎症および急性の虚血状態における白
血球の付着に対して極めて強い阻害作用を有することが
発見された。

【００１３】本発明に従い使用すべき式Ｉの化合物の詳
細な化学的および物理学的特性およびそれらを調製する
方法は、開示された［参照、欧州特許（ＥＰ）１９７，
３６０号および欧州特許（ＥＰ）２３６，８９４号］。

【００１４】式Ｉの化合物は、急性および慢性の炎症の
プロセスおよび／または急性の血流の混乱（虚血）のた
めの薬物において活性化合物として使用することができ
る。

【００１５】それらの作用は、最初に、脈管の内皮への
白血球の付着の減少または完全な阻害、およびそれに関
連する、引き続く望ましくないプロセス、例えば、酸素
不含ラジカルの解放（多形核の好中球白血球による）ま
たは泡の細胞（単球）の形成の減少または弱化にある。

【００１６】それらは、好ましくは、急性心筋梗塞後の
組織の壊死の処置および予防に適する。さらに、それら
は、気道の、感染により引き起こされない、急性および
慢性の炎症、例えば、アレルギー性ぜん息、およびリウ
マチ、アテローム性動脈硬化症、変形性関節炎および胃
腸の炎症の処置および予防に使用することができる。

【００１７】使用例１ 本発明による物質は、形成性の表面への活性化された白
血球の付着を阻害する。

【００１８】この試験はマイクロタイタープレート上で
実施する。各ウェル（ｗｅｌｌ）を１％のウシ血清アル
ブミンその中に溶解したリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）と３
０分間インキュベーションし、次いでＰＢＳで２回洗浄
した。１０％の胎児仔ウシ血清（ＦＣＳ）および試験す
べき物質を含有するＲＰＭＩ１６４０［ＲＰＭＩ　　１
６４０培地、グルタミンＮｏ．０４１−０１８７５Ｍ、
ギブコ・リミテッド（Ｇｉｂｃｏ　　Ｌｉｍｉｔｅｄ）
ＧＢ］培地の１００μｌのアリコートをピペットでウェ
ルに入れ、そしてプレートを３７℃において再インキュ
ベーションする。すべてのそれ以上のインキュベーショ
ンはこれらの条件下に実施する。ＰＭＮ［多形核の好中
球白血球、イングリッシュ（Ｅｎｇｌｉｓｈ）ら、ジャ
ーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ｍｅｔｈｏｄｓ）、５、２４
９−２５２（１９７４）の方法に従い分離した］をＲＰ
ＭＩ　　１６４０培地の中に懸濁し、そして５０μｌの
２×１０４細胞をピペットで各ウェルに入れる。１０分
間インキュベーション後、プレートを３０秒間震盪し、
そして細胞を５０μｌのホルボールミリステートアセテ
ート（最終濃度１０−６モル／ｌ］で活性化する。次い
で、この混合物を３０秒間震盪し、１時間インキュベー
ションし、再び３０秒間震盪し、そして非付着性細胞を
各回３００μｌのＰＢＳで２回洗浄することによって除
去する。付着性細胞を５ミリモルのリン酸塩緩衝液ｐＨ
７．４中の５％のセチルトリメチルアンモニウムブロミ
ドの３００μｌを添加し、それらを室温において１０分
間震盪することによって溶菌する。

【００１９】ＰＭＮの定量はミエオロペルオキシダーゼ
の活性の測定により実施する。このために、２７０μｌ
のリン酸塩緩衝液、５０ミリモルｐＨ６．０、オルト−
ダイアニシジヂン、０．２３ｍｇ／ｍｌ、およびＨ２Ｏ
２、１０−４モル／ｌの混合物を添加する。４６０ｎｍ
における吸光の増加を２分の間隔で４回測定する。

【００２０】

【表１】 使用例２ 本発明による物質は、また、活性化された内皮への非刺
激ＰＭＮＬの付着を阻害する。

【００２１】１、細胞集団の調製 ヒト内皮細胞を臍帯からコラゲナーゼ処理により取り、
そして必須の添加剤、例えば、ヘパリンおよび内皮細胞
の成長補助物質を有する培地中で２〜５の継代培養で培
養した。次いで、細胞をトリプシンにより分離し、マイ
クロタイタープレート中で１〜５×１０４細胞の密度で
接種し、そして全面成長に到達するまでさらに２日間イ
ンキュベーションした。

【００２２】ヒト多形核の顆粒球（ＰＭＮ）を、新鮮な
血液から、６％のデキストラン硫酸中の沈降および引き
続くフィコール（Ｆｉｃｏｌｌ）クッションを通る遠心
および赤血球の低張溶菌により調製した。

【００２３】２、付着試験 ２．５〜５×１０５細胞／ウェルの濃度の非刺激ＰＭＮ
、およびＤＭＳＯ中に溶解した試験物質を、内皮細胞に
添加した。３０インキュベーション（３７℃、１０％の
ＣＯ２）後、非特異的に結合したＰＭＮを倒立したプレ
ートの遠心により除去した［参照、チャロ（Ｃｈａｒｏ
）ら、血液（Ｂｌｏｏｄ）、６５、４７３−４７９（１
９８５）］。内皮細胞に結合したＰＭＮの数を、ＰＭＮ
中に存在するが、内皮細胞中に存在しない、酵素のミエ
ロペルオキシダーゼの活性により決定した。

【００２４】３、物質のエフォマイシンＥおよびエフォ
マイシンＧの作用 試験物質のエフォマイシンＥおよびエフォマイシンＧを
、記載する測定系において５×１０−６モル／ｌの最終
濃度で使用した。次いで、培養物中の溶媒は０．１％の
ＤＭＳＯであった。

【００２５】内皮へのＰＭＮの付着は、物質を添加しな
い対照と比較して、エフォマイシンＥおよびエフォマイ
シンＧにより２０％および２７％だけ減少した（それぞ
れ、ｎ＝６、ｐ＜０．０１およびｐ＜０．００１、ｔ−
検定による）。０．１％のＤＭＳＯを有する溶媒の対照
は、付着性ＰＭＮの数の有意の変化を示さなかった。

【００２６】使用例３ ヘラ（ＨｅＬａ）２２９細胞（ＡＴＣＣ　　ＣＣＬ２．
１）を内皮細胞の代わりに使用し、そして培養容器の表
面へ付着するように誘発した。これらの細胞へのヒトＰ
ＭＮの付着は、エフォマイシンＥおよびエフォマイシン
Ｇにより投与量依存性的に阻害することができる。

【００２７】

【表２】表２ エフォマイシンＥおよびエフォマイシンＧによりヘラ（
ＨｅＬａ） 細胞への白血球の付着の阻害 対　　照　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　０［％］エフォマイシンＥ １×１０−５モル／ｌ　　　　　　　　　　　　　　　
　５７３．３×１０−６モル／ｌ　　　　　　　　　　
　　　　　　４５．４１．１×１０−６モル／ｌ　　　
　　　　　　　　　　　　　２１．８３．７×１０−７
モル／ｌ　　　　　　　　　　　　　　　　１３．３１
×１０−７モル／ｌ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　３．０エフォマイシンＧ １×１０−５モル／ｌ　　　　　　　　　　　　　　　
　４９．５３．３×１０−６モル／ｌ　　　　　　　　
　　　　　　　　３２．６１．１×１０−６モル／ｌ　
　　　　　　　　　　　　　　　３２．１３．７×１０
−７モル／ｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　　４
．４使用例４ 微小血管中の虚血および非虚血の条件下の白血球の付着
を、ハムスターの頬の嚢のモデルにおいて定量すること
ができる。１．０ｍｇ／ｋｇのエフォマイシンＧの静脈
内の投与による対照と比較した付着の減少は、非虚血条
件下に４０％および虚血条件下に６０％である。この投
与量において、血圧への観測可能な作用は存在しない。

【００２８】新規な化合物は、既知の方法において、普
通の配合物、例えば、錠剤、被覆した錠剤、丸剤、顆粒
、エアゾール、シロップ剤、乳濁液、懸濁液および溶液
に、不活性の無毒の製剤学的に適当な賦形剤または溶媒
を使用して転化することができる。治療学的に活性な化
合物は、各場合において、合計の混合物の約０．５〜９
０重量％の濃度で、すなわち、適応する投与量の範囲を
達成するために十分な量で存在すべきである。

【００２９】配合物は、例えば、活性化合物を溶媒およ
び／または賦形剤で、適当ならば乳化剤および／または
分散剤を使用して調製し、ここで、例えば、希釈剤とし
て水を使用する場合、有機溶媒を必要に応じて補助溶媒
として使用することができる。

【００３０】投与は慣用方法で、好ましくは経口的また
は非経口的に、とくに経舌的または静脈内に実施する。

【００３１】一般に、静脈内投与において、約０．００
１〜１ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１〜０．５
ｍｇ／ｋｇ体重の量の活性化合物を投与して有効な結果
を達成することは有利であることが証明され、そして経
口的投与において、投与量は約０．０１〜２０ｍｇ／ｋ
ｇ体重、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である
。

【００３２】これにかかわらず、とくに体重または投与
の道筋のタイプ、薬物に対する個体の挙動、配合の性質
および投与の時点または間隔に依存して、前述の量から
逸脱することが必要なことがある。こうして、ある場合
において、前述の最小量より少ない量で管理することで
十分なことがあるが、他の場合において、前述の上限を
越えなくてはならないことがある。大量の投与の場合に
おいて、これらを１日の過程においていくつかの個々の
投与量に分割することがよいであろう。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　式Ｉ 【化１】 式中、Ｒ１はメチルであり、そしてＲ２は式【化２】 の基であるか、あるいはＲ１はメチルであり、そしてＲ
   ２は式 【化３】 の基であるか、あるいはＲ１は水素であり、そしてＲ２
   は式 【化４】 である、の抗炎症および抗虚血剤。