JPH04188045A - Specimen measuring apparatus - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To perform highly stable measurement by cancelling detection so as not to receive the signals when a plurality of specimens pass a plurality of light emitting positions at the approximately same time. CONSTITUTION:When the passing of specimens through positions 1a and 1b at the approximately same time is detected and the passing at the approximately same time is judged, the data from a detecting means is cancelled so as not to be latched. Such a means is provided. In details, when the generating timings of detecting pulses are agreed or very close in a memory operating means 16, it is judged that two particles to be detected pass both positions 1a and 1b at the approximately same time. The data of each photodetector at this time are cancelled and out received.

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は個々の検体に光を照射し光学的測定を行うこと
で検体の解析を行う検体測定の分野に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Field of Industrial Application] The present invention relates to the field of specimen measurement, in which specimens are analyzed by irradiating each specimen with light and performing optical measurements.

［従来の技術］ 検体検査装置の一例としてフローサイトメータが従来か
ら知られており、生物学分野や医療分野などで広（用い
られている。[Prior Art] Flow cytometers have been known as an example of sample testing devices, and are widely used in the biological and medical fields.

このフローサイトメータの典型的な構成を第６図に示す
。血液等のサンプル液を前処理として蛍光試薬等で染色
処理し適切な反応時間及び希釈濃度に調整する。そして
これをサンプル液容器１１５に入れる。また、蒸留水や
生理食塩水等のソース液はシース液容器１１４に入れる
。サンプル液容器１１５及びシース液容器１１４は各々
不図示の加圧機構により加圧される。そして、シースフ
ロー原理により、フローセル１０４内でサンプル液がシ
ース液に包まれて細い流れに収斂され、フローセル１０
４内の流通部のほぼ中央部を通過する。A typical configuration of this flow cytometer is shown in FIG. A sample liquid such as blood is pretreated by staining with a fluorescent reagent or the like and adjusted to an appropriate reaction time and dilution concentration. Then, put this into the sample liquid container 115. Further, a source liquid such as distilled water or physiological saline is placed in the sheath liquid container 114. The sample liquid container 115 and the sheath liquid container 114 are each pressurized by a pressurizing mechanism (not shown). Then, according to the sheath flow principle, the sample liquid is wrapped in the sheath liquid in the flow cell 104 and converged into a thin flow, and the flow cell 10
It passes through approximately the center of the flow section in 4.

この時、サンプル液に含まれる個々の被検粒子（細胞、
微生物、担体粒子など）すなわち検体は分離されて１粒
或いは１塊ずつ順次流れる。この被検粒子の流れに対し
て、レーザ光源１０１から出射されたレーザ光が、母線
方向が各々流通部方向、流通部方向と直交したシリンド
リカルレンズ１０２．１０３の組によって任意の形状に
収斂され照射される。被検粒子に照射される光ビームの
形状は、一般には流れに対して直交する方向に長径を有
する楕円形状であることが好ましい。これは個々の被検
粒子の流れの位置が流体中で若干変動しても、被検粒子
に均一の強度で光ビームが照射されるようにするためで
ある。At this time, individual test particles (cells,
(microorganisms, carrier particles, etc.), that is, the specimen is separated and sequentially flows one particle or one lump at a time. A laser beam emitted from a laser light source 101 is converged into an arbitrary shape by a pair of cylindrical lenses 102 and 103 whose generatrix directions are in the direction of the flow section and perpendicular to the direction of the flow section, respectively, and irradiate the flow of the particles to be detected. be done. Generally, it is preferable that the shape of the light beam irradiated onto the test particles is an ellipse having a major axis in a direction perpendicular to the flow. This is to ensure that the light beam is irradiated with uniform intensity onto the test particles even if the flow position of each test particle varies slightly in the fluid.

被検粒子に光ビームが照射されると散乱光が生じる。前
記散乱光の内、光路前方方向に発する前方散乱光は集光
レンズ１０５、光検出器１０６によって測光される。な
お照射された光ビームが直接、光検出器１０６に入射す
るのを防ぐため、光路中葉光レンズ１０５の手前には光
吸収性の微小なストッパ１００が設けられ、照射光源か
らの直接光、及び被検粒子を光透過した透過光を除去す
るようになっている。これにより被検粒子からの散乱光
のみを測光することができる。When a light beam is irradiated onto a particle to be examined, scattered light is generated. Of the scattered light, the forward scattered light emitted in the forward direction of the optical path is photometered by a condenser lens 105 and a photodetector 106. In order to prevent the irradiated light beam from directly entering the photodetector 106, a small light-absorbing stopper 100 is provided in the optical path in front of the optical lens 105, so that the direct light from the irradiation light source and It is designed to remove the transmitted light that has passed through the test particles. This makes it possible to photometer only the scattered light from the test particles.

また前記散乱光の内、レーザ光軸及び被検粒子の流れに
それぞれ直交する側方方向に発する光は集光レンズ１０
７で集光される。集光された光はダイクロイックミラー
１０８で反射され、散乱光の波長即ちレーザ光の波長（
Ａｒ＋レーザであれば４８８ｎｍ）を選択的に透過させ
るバンドパスフィルタ１２１を経て光検出器１１１にて
側方散乱光が測光される。また被検粒子が蛍光染色され
ている場合には、散乱光と共に発生する複数色の蛍光を
測光するため、集光レンズ１０７によって集光され、ダ
イクロイックミラー１０８を通過した蛍光の内、ダイク
ロイックミラー１０９、緑色蛍光波長用（５３０ｎｍ付
近）のバンドパスフィルタ１２２、光検出器１１２の組
によって緑色蛍光が検出され、また全反射ミラ−１１０
１赤色蛍光波長用（５７Ｏｎｍ付近）のバンドパスフィ
ルタ１２３、光検出器１１３の組によって赤色蛍光が検
出される。光検出器１０６．１１１．１１２．１１３の
信号は各々演算回路１１６に人力され、該演算回路１１
６において、粒子の種類や性質等の解析、あるいは抗原
抗体反応の測定等の演算が行なわれる。Of the scattered light, light emitted in the lateral direction perpendicular to the laser optical axis and the flow of the particles to be detected is transmitted through the condenser lens 10.
The light is focused at 7. The focused light is reflected by the dichroic mirror 108, and the wavelength of the scattered light, that is, the wavelength of the laser light (
The side scattered light is measured by the photodetector 111 through a bandpass filter 121 that selectively transmits light (488 nm in the case of an Ar+ laser). In addition, when the test particles are fluorescently dyed, in order to photometer the fluorescence of multiple colors generated together with the scattered light, among the fluorescence that is collected by the condenser lens 107 and passed through the dichroic mirror 108, the dichroic mirror 109 , green fluorescence is detected by a set of a bandpass filter 122 for green fluorescence wavelength (near 530 nm) and a photodetector 112, and a total reflection mirror 110
Red fluorescence is detected by a bandpass filter 123 for one red fluorescence wavelength (near 57 Onm) and a photodetector 113. The signals of the photodetectors 106, 111, 112, and 113 are respectively input to the arithmetic circuit 116, and the arithmetic circuit 11
In step 6, calculations such as analysis of particle types and properties, measurement of antigen-antibody reactions, etc. are performed.

〔発明が解決しようとしている課題］ しかしながら、従来は複数色の蛍光を測光するのに各蛍
光毎に専用の光検出器を使用している。[Problems to be Solved by the Invention] However, conventionally, a dedicated photodetector is used for each fluorescence to measure fluorescence of a plurality of colors.

これまでは赤色蛍光と緑色蛍光の２色、あるいはこれに
黄色蛍光を加えた３色を同時に測光する構成が一般的で
あったが、近年、更なる多色化の要望が高まり、新たな
蛍光剤の開発も進んでいる。Until now, it was common to have a configuration that simultaneously measured two colors, red fluorescence and green fluorescence, or three colors with yellow fluorescence added, but in recent years there has been an increasing demand for even more colors, and new fluorescence Development of drugs is also progressing.

これにより同時に使用する蛍光チャンネル数が増加する
と、それに応じて光検出器の数も増加してしまうことに
なる。即ち、光学配置が複雑化し、フォトマル等の高価
な光検出器が多数必要となってしまう問題点があった。As a result, if the number of fluorescence channels used simultaneously increases, the number of photodetectors will also increase accordingly. That is, there is a problem in that the optical arrangement becomes complicated and a large number of expensive photodetectors such as photomultipliers are required.

そこで本願出願人は特願平１−３２５００１号等におい
て、複数の種類の光を共通の光検出器で時系列に検出す
ることで、光検出器の数量上の測定パラメータが得られ
る装置を提案した。本発明は該提案した装置の更なる改
良を目的とする。Therefore, in Japanese Patent Application No. 1-325001, the applicant proposed a device that can obtain quantitative measurement parameters of the photodetector by detecting multiple types of light in time series using a common photodetector. did. The present invention aims at further improvements to the proposed device.

［目的を達成するための手段］ 上記目的を達成する本発明の検体測定装置は、個々の検
体を順次移動させる手段と、第１の照射光を生成し、検
体が移動する第１の位置に照射する第１照射手段と、第
２の照射光を生成し、前記第１の位置とは異なる第２の
位置に照射する第２照射手段と、前記第１、第２の位置
を通過する検体から発する第１１第２の光学特性の光を
同一光検出器で時系列に検出する光検出手段と、前記第
１１第２のそれぞれの位置に複数の検体がほぼ同時に通
過したことを判断する判断手段と、該判断手段の判断に
基づいて、前記光検出手段での検出をキャンセルする手
段とを有することを特徴とする。[Means for Achieving the Object] The sample measuring device of the present invention that achieves the above object includes a means for sequentially moving each sample, and a means for generating a first irradiation light to move the sample to a first position. a first irradiation means for irradiating; a second irradiation means for generating second irradiation light and irradiating it to a second position different from the first position; and a specimen passing through the first and second positions. a light detection means for detecting light having an eleventh second optical characteristic emitted from the eleventh and second optical characteristics in time series using the same photodetector; and a judgment for determining that a plurality of specimens have passed through each of the eleventh and second positions at approximately the same time. and means for canceling the detection by the light detection means based on the judgment of the judgment means.

［実施例］ 以下、本発明の実施例を図面を用いて詳細に説明する。[Example] Embodiments of the present invention will be described in detail below with reference to the drawings.

第１図、第２図は第１の実施例の構成図を表わす。第１
図は実施例の基本的な構成図であり、前方の光学系、流
体系、制御系等を有する全体システムを表わす。同図に
おいて１はサンプル液中の被検粒子（例えば生体細胞や
担体粒子）をシース液で包み込むようにして１個ずつ分
離して順に流す、いわゆるシースフローを形成するため
のフローセルで、フローセルｌ内の流通部を被検粒子が
紙面上方から下方に向けて流れる。シースフローを形成
するための流体系の構成は、血液試料や免疫反応液等の
サンプル液を蓄積するサンプル液容器１５０、それを加
圧するためのポンプ１５２、サンプル液の流量を調節す
る電気式レギュレータ１５４、生理食塩水等のシース液
を蓄積するシース液容器１５１、それを加圧するポンプ
１５３、シース液の流量を調節する電気式レギュレータ
１５５、そしてこれらを流体的に接続しフローセルｌ内
に導（ためのチューブから成る。サンプル液容器１５０
内をポンプ１５２によって加圧してサンプル液を押出し
、一方、ンース液容器１５１内をポンプ１５３で加圧し
てシース液を押出し、レギュレータ１５４．１５５の各
々による流量調節によりフローセルｌ内での状態、すな
わち流れ速度や個々の粒子の流れ間隔等が設定される。FIGS. 1 and 2 show configuration diagrams of the first embodiment. 1st
The figure is a basic configuration diagram of the embodiment, and represents the entire system including a front optical system, a fluid system, a control system, etc. In the same figure, 1 is a flow cell for forming a so-called sheath flow in which test particles (for example, biological cells or carrier particles) in a sample liquid are separated one by one so as to be wrapped in a sheath liquid and flowed in order. The particles to be tested flow through the internal flow section from above to below the page. The fluid system for forming a sheath flow includes a sample liquid container 150 that accumulates sample liquid such as a blood sample or immune reaction liquid, a pump 152 that pressurizes the container, and an electric regulator that adjusts the flow rate of the sample liquid. 154, a sheath liquid container 151 that accumulates a sheath liquid such as physiological saline, a pump 153 that pressurizes it, an electric regulator 155 that adjusts the flow rate of the sheath liquid, and a sheath liquid container 154 that fluidly connects these and guides them into the flow cell l ( Sample liquid container 150
The inside of the sheath liquid container 151 is pressurized by the pump 153 to push out the sheath liquid, and the flow rate adjustment by each of the regulators 154 and 155 changes the state in the flow cell l, i.e. The flow speed, flow interval of individual particles, etc. are set.

なお上記のようなポンプとレギュレータによる加圧機構
に限らず、特開昭２−２１３７４４号公報に示されるよ
うなシリンジを用いた構成を採用して、シリンジの押出
し速度を調節するようにしても良い。In addition to the above-mentioned pressurizing mechanism using a pump and regulator, it is also possible to adopt a configuration using a syringe as shown in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-213744 and adjust the extrusion speed of the syringe. good.

さて、次に前方の光学系について説明する。２゜３は波
長の異なるレーザ光源であり、この分野では一般的なＡ
ｒ＋レーザ、Ｈｅ−Ｎｅレーザ、色素レーザ、半導体レ
ーザ等のレーザ、更にはレーザに限らず様々な光源が利
用できる。なお第５図（Ｄ）のように、レーザ光源を３
つ以上用意して各光源からのレーザビームを測定条件に
応じて選択的に照射光路に導くようにすれば、更に多目
的な測定が可能な汎用性の高いシステムとなる。第５図
（Ｄ）において、７４は全反射ミラー、７５はハーフミ
ラ−１７６は光シャッタである。Now, the front optical system will be explained next. 2゜3 is a laser light source with different wavelengths, which is commonly used in this field.
Lasers such as an r+ laser, a He-Ne laser, a dye laser, and a semiconductor laser, as well as various light sources other than lasers, can be used. As shown in Figure 5(D), the laser light source is
If more than one light source is prepared and the laser beam from each light source is selectively guided to the irradiation optical path according to the measurement conditions, a highly versatile system capable of performing even more versatile measurements can be obtained. In FIG. 5(D), 74 is a total reflection mirror, 75 is a half mirror, and 176 is an optical shutter.

第１図、第２図に戻って、４ａ、４ｂは照射光ビームを
フローセル部の被検領域に結像する集光レンズであり、
レーザ光源２及び３からのレーザビームをそれぞれフロ
ーセル中のｌａ、ｌｂの位置に結像する。結像ビームの
形状としては流れに直交する方向に長径を持つ楕円形状
が好ましい。Returning to FIGS. 1 and 2, 4a and 4b are condenser lenses that image the irradiation light beam onto the test area of the flow cell section,
Laser beams from laser light sources 2 and 3 are imaged at positions la and lb in the flow cell, respectively. The shape of the imaging beam is preferably an ellipse with the major axis in the direction perpendicular to the flow.

ここで両照射位置１ａ、Ｉｂの間の距離は１００μｍ程
度であり、これは測定する粒子のサイズよりは大きく、
順次流れる粒子の流れ間隔よりは十分に短いものである
。ビーム直進方向に配置される部材５ａ、５ｂはレーザ
光源２．３からのレーザビームをそれぞれ遮断し暗視野
光学系を形成するための光ストッパであり、６は前方散
乱光を集光する集光レンズ、７は視野絞りで、ｌａ、ｌ
ｂの位置に対応する共役位置にそれぞれ開ロアａ。Here, the distance between both irradiation positions 1a and Ib is about 100 μm, which is larger than the size of the particles to be measured.
This is sufficiently shorter than the flow interval of particles flowing sequentially. Members 5a and 5b disposed in the beam straight direction are light stoppers for respectively blocking the laser beams from the laser light sources 2 and 3 to form a dark field optical system, and 6 is a condenser for condensing forward scattered light. Lens, 7 is field diaphragm, la, l
The open lower a is located at the conjugate position corresponding to the position of b.

７ｂが設けられる。８ａ、８ｂはｌａ、ｌｂ位位置らの
前方散乱光を検知する光検出器である。7b is provided. 8a and 8b are photodetectors that detect forward scattered light from positions la and lb.

なお２本のレーザビームを形成するのに必ずしも２個の
レーザ光源を用意する必要はない。例えば第５図（Ａ）
（Ｂ）（Ｃ）のように単一レーザ光源からのビームを、
ミラ一部材によって２本に分岐しても良い。この時、第
５図（Ｂ）（Ｃ）ような形態を取れば波長の異なる複数
のビームが得られる。第５図（Ａ）は短波長のシングル
モードレーザからのレーザビームをハーフミラ−７１と
全反射ミラー７２によって同−波長の２光束を作り出す
光学系である。又、第５図（Ｂ）はレーザビームをハー
フミラ−７１と全反射ミラー７２によって２光束に分岐
して、それぞれの分岐ビームを波長変換部材７７２．７
７ｂ　（非線形光学素子やＡＯなど）によって波長変換
することにより異なる波長の２光束を作り出す光学系で
ある。更に第５図（Ｃ）は複数波長のマルチモードレー
ザがらのレーザビームをダイクロイックミラー７３で興
なる波長の２光束に分岐して、異なる波長の２光束を作
り出す光学系である。Note that it is not necessarily necessary to prepare two laser light sources to form two laser beams. For example, Figure 5 (A)
(B) A beam from a single laser source as in (C),
It may be branched into two by a Mira member. At this time, if a configuration as shown in FIGS. 5(B) and 5(C) is adopted, a plurality of beams with different wavelengths can be obtained. FIG. 5(A) shows an optical system in which a laser beam from a short wavelength single mode laser is generated into two beams of the same wavelength using a half mirror 71 and a total reflection mirror 72. Further, in FIG. 5(B), the laser beam is split into two beams by a half mirror 71 and a total reflection mirror 72, and each branched beam is sent to a wavelength converting member 772.7.
7b (nonlinear optical element, AO, etc.) is an optical system that generates two beams of different wavelengths by converting the wavelength. Further, FIG. 5(C) shows an optical system that splits a laser beam from a multi-mode laser having a plurality of wavelengths into two light beams of different wavelengths by a dichroic mirror 73 to produce two light beams of different wavelengths.

第１図の構成において、レーザ光源２より出射されたレ
ーザ光は集光レンズ４ａにより集光され被検領域１ａに
照射される。この被検領域１ａに被検粒子が通過すると
該被検粒子によって光散乱が起き、この時、被検粒子が
蛍光染色されていれば蛍光も励起されて散乱光と共に発
生する。前記発生する散乱光の内の一部は光路前方方向
に進み前方散乱光となる。この前方散乱光は集光レンズ
６、及び視野絞り７の開口部７ａを経て、光検出器８ａ
により強度検出され第１の前方散乱信号が得られる。同
様にして、レーザ光源３より出射されたレーザ光は集光
レンズ４ｂにより集光され被検領域１ｂに照射される。In the configuration shown in FIG. 1, laser light emitted from the laser light source 2 is focused by a condenser lens 4a and irradiated onto the test area 1a. When the test particles pass through the test region 1a, the test particles cause light scattering, and at this time, if the test particles are fluorescently dyed, fluorescence is also excited and generated together with the scattered light. A part of the generated scattered light travels in the forward direction of the optical path and becomes forward scattered light. This forward scattered light passes through the condensing lens 6 and the aperture 7a of the field stop 7, and then passes through the photodetector 8a.
The intensity is detected and a first forward scattering signal is obtained. Similarly, the laser light emitted from the laser light source 3 is focused by the condenser lens 4b and irradiated onto the test region 1b.

この被検領域１ｂに被検粒子が通過すると、前方散乱光
は開口部７ｂを経て、光検出器８ｂにより強度検出され
第２の前方散乱信号が得られる。When the test particles pass through the test region 1b, the forward scattered light passes through the opening 7b, and the intensity is detected by the photodetector 8b to obtain a second forward scattered signal.

又、１６０は入力設定手段であり、システムの各種モー
ド、被検粒子の流速や通過間隔、使用する蛍光剤の種類
、測定項目等、様々な測定条件を入力設定する。１６１
は記憶演算回路であり、光検出器８ａ、８ｂの出力、お
よび後述の側方の光学系の光検出器２５．２３の出力が
、ゲイン切換え可能な増幅アンプ、ピークホールド回路
、積分回路、Ａ／Ｄコンバータ等を介して取込まれ、ピ
ーク値や積分値のデジタルデータが記憶手段に記憶され
る。このデータを基に後に粒子解析の演算がなされ、こ
の結果はＣＲＴやプリンタ等の出力手段に出力される。Reference numeral 160 denotes an input setting means for inputting and setting various measurement conditions such as various modes of the system, flow rate and passing interval of particles to be detected, type of fluorescent agent to be used, and measurement items. 161
is a storage arithmetic circuit, and the outputs of photodetectors 8a and 8b and the outputs of photodetectors 25 and 23 of the side optical system, which will be described later, are connected to a gain-switchable amplification amplifier, a peak hold circuit, an integration circuit, and /D converter etc., and digital data of peak values and integral values is stored in a storage means. Particle analysis calculations are later performed based on this data, and the results are output to output means such as a CRT or printer.

解析方法に関してはヒストグラムやサイトグラムを用い
た統計的処理が一般的であるが、詳細な説明はここでは
省略する。又、該記憶演算手段１６１は２つの前方散乱
光の検出出力タイミングから流速の算出、誤測定データ
の取込みキャンセル等を行なう機能も備えている。１６
２はコントロール手段でありシステムの各種動作手段の
総合的なコントロールを行なう。具体的には、ポンプ１
５２，１５３の駆動、電気式レギュレータ１５４，１５
５の調節、レーザ光源２，３の各々の０Ｎ１０ＦＦ制御
、後述する蛍光検出レベルの切換え等である。As for the analysis method, statistical processing using histograms and cytograms is common, but detailed explanation will be omitted here. The storage/calculation means 161 also has a function of calculating the flow velocity from the detection output timing of the two forward scattered lights, canceling the acquisition of erroneous measurement data, etc. 16
Reference numeral 2 denotes a control means that performs comprehensive control of various operating means of the system. Specifically, pump 1
52, 153 drive, electric regulator 154, 15
5, 0N10FF control of each of the laser light sources 2 and 3, and switching of the fluorescence detection level to be described later.

次に第２図を用いて側方の光学系の説明を行なう。第２
図は第１図を側方から見た図であり側方の光学系を詳細
に表わしている。図中、１１は集光レンズであり、レー
ザ光源２，３からの照射レーザビーム直進方向と直交す
る側方方向に発する光を集光する。１３は視野絞りで、
ｌａ、ｌｂの両位置に対応した共役位置に開口部１３ａ
、１３ｂが設けられる。１４ａ、１４ｂは平行平板、１
５ａ。Next, the lateral optical system will be explained using FIG. Second
The figure is a side view of FIG. 1 and shows the side optical system in detail. In the figure, reference numeral 11 denotes a condensing lens, which condenses light emitted from the laser light sources 2 and 3 in a lateral direction perpendicular to the rectilinear direction of the irradiated laser beams. 13 is the field aperture,
An opening 13a is provided at the conjugate position corresponding to both the la and lb positions.
, 13b are provided. 14a and 14b are parallel flat plates, 1
5a.

１５はレンズであり、両部材の組によってｌａｌ。15 is a lens, which is formed by a set of both members.

１ｂからのそれぞれの光が平行光束に変換される。Each light beam from 1b is converted into a parallel beam of light.

２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂは被検粒子より生じた
側方散乱光及び蛍光を色分解するためのダイクロイック
ミラー、２２ａ、２２ｂ、３２ａ。21a, 21b, 31a, and 31b are dichroic mirrors 22a, 22b, and 32a for color-separating the side scattered light and fluorescence generated by the test particles;

３２ｂはそれぞれの蛍光の波長を選択するバンドパスフ
ィルタであり、このダイクロイックミラーとバンドパス
フィルタの組合わせによりそれぞれの検出光波長が選択
される。２６ａ、２６ｂ、３６ａ。Reference numeral 32b represents a bandpass filter that selects the wavelength of each fluorescence, and the wavelength of each detection light is selected by the combination of this dichroic mirror and the bandpass filter. 26a, 26b, 36a.

３６ｂはそれぞれ所定の透過率を有するＮＤフィルタで
ある。２４．３４はレンズ、２５．３５は側方散乱光及
び蛍光を検知するための光検出器であり、該光検出器と
しては検出感度の高いフォトマルチプライヤが好適であ
る。該光検出器２５゜３５は記憶演算手段６１に接続さ
れている。ここで位置１ａから発した光は開口部１３ａ
で一旦結像し、ダイクロイックミラー２１ａ、３１ａ、
バンドパスフィルタ２２　ａ、３２　ａＳＮＤフィルタ
２６ａ、３６ａの光路を通って光検出器２５．２５に導
かれてここで再結像する。一方、１トから発した光は開
口部１３ｂで一旦結像し、ダイクロイックミラー２１ｂ
、３１ｂ、バンドパスフィルタ２２ｂ、３２ｂ、ＮＤフ
ィルタ２６ｂ、３６ｂの光路を通って光検出器２５．２
５に導かれて再結像する。36b are ND filters each having a predetermined transmittance. 24.34 is a lens, 25.35 is a photodetector for detecting side scattered light and fluorescence, and a photomultiplier with high detection sensitivity is suitable as the photodetector. The photodetector 25° 35 is connected to a storage/arithmetic means 61. Here, the light emitted from position 1a is transmitted through opening 13a.
Once the image is formed, dichroic mirrors 21a, 31a,
The light passes through the optical path of the bandpass filters 22a, 32a and the SND filters 26a, 36a, and is guided to the photodetector 25.25, where it is reimaged. On the other hand, the light emitted from the opening 13b is focused once on the dichroic mirror 21b.
, 31b, bandpass filters 22b, 32b, and ND filters 26b, 36b to the photodetector 25.2.
5 and re-image.

第３図は上記側方光学系の変形例であり、第１図を上方
から見た図である。なお、前方光学系は図では省略しで
ある。図中、先の図と同一の符号は同一あるいは同等の
部材を表わす。FIG. 3 shows a modification of the above-mentioned side optical system, and is a view of FIG. 1 viewed from above. Note that the front optical system is omitted in the figure. In the figures, the same reference numerals as in the previous figures represent the same or equivalent members.

レーザ光源２からのレーザの照射位置１ａから側方に発
する光は一旦、図中上方の光路に引き回され、コーナー
キューブやポロプリズム等の反射部材９９を経て、開口
絞り１３ａで一旦結像し、光検出器２５．３５で再結像
して入射する。一方レーザ光源３からのレーザの照射位
置１ｂから側方に発する光は図中下方の光路に導かれ、
開口絞り１３ｂで一旦結像し、共通の光検出器２５．３
５で再結像して検出される。本例は基本的には先の第２
図の光学系と同等であるが、１ａからの蛍光と１ｂから
の蛍光を検出する光路とを明確に分離して光学配置した
ところに特徴がある。The light emitted laterally from the laser irradiation position 1a from the laser light source 2 is once routed to an optical path in the upper part of the figure, passes through a reflection member 99 such as a corner cube or a porro prism, and is once imaged at the aperture stop 13a. , re-imaged by the photodetector 25.35 and then incident. On the other hand, the light emitted laterally from the laser irradiation position 1b from the laser light source 3 is guided to the optical path in the lower part of the figure.
Once the image is formed by the aperture stop 13b, the common photodetector 25.3
5, the image is re-imaged and detected. This example is basically the same as the second one above.
Although it is equivalent to the optical system shown in the figure, it is distinctive in that the optical path for detecting the fluorescence from 1a and the fluorescence from 1b are clearly separated and optically arranged.

第４図は被検粒子の通過に際して各光検出器で得られる
検出パルスの一例である。第４図（Ａ）、第４図（Ｂ）
はそれぞれ光検出器８ａ、８ｂで得れれる前方散乱光の
検出出力、第４図（Ｃ）、第４図（Ｆ）はそれらを所定
閾値と比較して作り出したタイミングパルス、第４図（
Ｅ）、第４図（Ｆ）はそれぞれ光検出器２５．３５で得
られる蛍光の検出出力を示す。各光検出器２５．３５に
よる蛍光の検出出力は被検粒子がｌａ、Ｉｂ位置を通過
する際に時系列的に得られ、これを先のタイミングパル
スを利用してそれぞれ別々に時系列に取込む。FIG. 4 is an example of a detection pulse obtained by each photodetector when a particle to be detected passes through. Figure 4 (A), Figure 4 (B)
are the detection outputs of the forward scattered light obtained by the photodetectors 8a and 8b, respectively, FIG. 4(C) and FIG. 4(F) are the timing pulses created by comparing them with a predetermined threshold, and FIG.
E) and FIG. 4(F) respectively show the fluorescence detection outputs obtained by the photodetectors 25 and 35. Fluorescence detection outputs from each photodetector 25.35 are obtained in time series when the test particle passes through positions la and Ib, and these are acquired separately in time series using the previous timing pulse. It's crowded.

以上のように本実施例では側方２個の検出器で４チヤン
ネル検出が可能で、これに２つの前方散乱光を加えた計
６種類の異なる光学特性の光が検出可能となる。As described above, in this embodiment, four-channel detection is possible with two side detectors, and two forward scattered lights are added to this, making it possible to detect a total of six types of light with different optical characteristics.

なお、以上の説明では側方の光検出器の数が２個の実施
例を示したが、検出器の個数はこれに限定されるもので
は無い。１個であれば一般的な従来例と同様、２色の蛍
光を単一の光検出器で得ることができ　　　　　　　　
　　　　　　−一装置構成が非常に簡略なものとな る。又、光検出器の数が３個以上であれば更に多くのパ
ラメータを得ることができる。又、側方の光検出器で検
出するのは蛍光には限らず側方散乱光を検出するように
しても良い。In addition, although the above description has shown an example in which the number of side photodetectors is two, the number of detectors is not limited to this. If there is only one, two-color fluorescence can be obtained with a single photodetector, similar to the conventional example.
- The device configuration becomes very simple. Further, if the number of photodetectors is three or more, even more parameters can be obtained. Further, what is detected by the side photodetectors is not limited to fluorescence, but may also detect side scattered light.

さて以上はシステムの基本的な形態の説明であるが、次
に実施例のシステムの特徴的な機能についてそれぞれ説
明する。Now, the basic form of the system has been explained above, and next, the characteristic functions of the system of the embodiment will be explained.

（１）１　　　に、じたレーザ 本実施例のシステムを多目的に使用する場合、測定目的
や使用する蛍光剤の種類によっては、必ずしも２つのレ
ーザ光波長は必要ではなく片方だけで事足りる場合もあ
る。あるいは第１１図（Ｄ）のように３種類以上の光源
からのレーザービームを選択的に照射する形態を取った
場合は、使用しないレーザ光波長は不必要である。(1) 1. When using the system of this example for multiple purposes, two laser light wavelengths are not necessarily necessary, and only one may be sufficient depending on the purpose of measurement and the type of fluorescent agent used. . Alternatively, if a configuration is adopted in which laser beams from three or more types of light sources are selectively irradiated as shown in FIG. 11(D), unused laser beam wavelengths are unnecessary.

そこで本実施例のシステムでは、使用用途に応じて複数
の測定モードを切換え、使用しないレーザ光源をＯＦＦ
にする機能を有している。具体的には２本のレーザ光を
同時に照射して時系列的な測定を行なう第１のモードと
、どちらが一方のレーザ光を照射して他方を非作動にす
る第２のモードとに切換えることができる。これは入力
設定手段１６０において設定された測定条件に応じて、
コントロール手段１６２が各レーザ光源の照射の０Ｎ１
０ＦＦを独立して行ない、非使用のレーザ光源をスリー
ブモードにするか、あるいはレーザ光源の電源を遮断す
る。これによってシステムの低電力消費化およびレーザ
寿命の延長を達成している。Therefore, in the system of this embodiment, multiple measurement modes are switched depending on the intended use, and the laser light source that is not in use is turned off.
It has the function of Specifically, switching between a first mode in which two laser beams are irradiated simultaneously to perform time-series measurements, and a second mode in which one of the laser beams is irradiated and the other is inactive. I can do it. This depends on the measurement conditions set in the input setting means 160.
The control means 162 controls the irradiation of each laser light source to 0N1.
0FF is performed independently to put the unused laser light source into sleeve mode or cut off the power to the laser light source. This results in lower system power consumption and longer laser life.

（２）流］し２二つ【化 ２つのレーザ照射位ｆｉｌ　１　ａと１ｂの両地点間の
距離は一定値（約１００μｍ）であるので、前方散乱光
検出器８ａ、８ｂの出力から作られる第４図（Ｃ）、第
４図（Ｄ）に示す両タイミングパルスの発生タイミング
を比較し、その時間差から被検粒子の通過速度すなわち
流速を求めることができる。このタイミングの比較と流
速の算出は記憶演算回路１６１で行ない、コントロール
手段１６２ではこの流速を常時フィードバックして、入
力設定手段１６０で設定された流速となるように電気式
レギュレータ１５４，１５５の調節を行なう。(2) Since the distance between the two points fil 1 a and 1 b is a constant value (approximately 100 μm), the distance between the two laser irradiation positions fil 1 a and 1 b is a constant value (approximately 100 μm). The generation timings of both timing pulses shown in FIG. 4(C) and FIG. 4(D) are compared, and the passing velocity, that is, the flow velocity of the particles to be detected can be determined from the time difference. The comparison of timing and calculation of the flow velocity are performed by the memory calculation circuit 161, and the control means 162 constantly feeds back this flow velocity to adjust the electric regulators 154 and 155 so that the flow velocity is set by the input setting means 160. Let's do it.

これにより設定された流速に常に正確に保つことができ
、安定性及び測定精度を向上させることができる。This allows the set flow rate to be maintained accurately at all times, improving stability and measurement accuracy.

なおポンプと電気式レギュレータとによる加圧機構には
限らず、シリンジを用いた加圧機構を用いても良い。そ
の場合シリンジの押出し速度を調節するようにする。Note that the pressurizing mechanism is not limited to a pump and an electric regulator, and a pressurizing mechanism using a syringe may be used. In that case, adjust the extrusion speed of the syringe.

（３）；データの　゛みキャンセル 次々と流れる被検粒子の流れ間隔は、２か所の照射位置
１ａ、ｌｂの間隔（１００μｍ程度）よりは十分に大き
く設定されているが、稀にあまり間隔を置かずに流れて
くる場合もあり、両位置にほぼ同時にそれぞれの粒子が
差し掛かることもあり得る。この場合には両位置からそ
れぞれ散乱光及び蛍光が発生して共通の光検出器に混在
して入射し混在データ検出されてしまう。(3); Cancellation of data The flow interval of the test particles flowing one after another is set to be sufficiently larger than the interval (about 100 μm) between the two irradiation positions 1a and lb, but in rare cases the interval is too large. In some cases, particles may flow without placing a particle, and particles may approach both positions almost at the same time. In this case, scattered light and fluorescence are generated from both positions and enter the common photodetector in a mixed manner, resulting in mixed data being detected.

そこでこれを防ぐために本実施例では、ｌａ。Therefore, in order to prevent this, in this embodiment, la.

Ｉｂの位置に検体がほぼ同時に通過したことを検知して
、はぼ同時に通過したと判断されたら、検出手段からの
データをキャンセルして取込まないような手段を設けて
いる。具体的には、記憶演算手段１６１において、第４
図（Ｃ）、第４図（Ｄ）に示すタイミングパルスの発生
タイミングがもし一致あるいは非常に接近している場合
は、ｌａ。A means is provided for detecting that the specimens have passed through the position Ib at almost the same time and canceling the data from the detection means and not capturing it if it is determined that the specimens have passed at almost the same time. Specifically, in the storage calculation means 161, the fourth
If the generation timings of the timing pulses shown in FIG. 4(C) and FIG. 4(D) match or are very close to each other, la.

Ｉｂの両位置に２個の被検粒子がほぼ同時に通過したと
判断して、この時の各光検出器のデータはキャンセルし
て取込まないようにしている。It is determined that two test particles have passed through both positions of Ib almost simultaneously, and the data of each photodetector at this time is canceled and not captured.

あるいは別法として次のような方法でも良い。Alternatively, the following method may be used.

粒子が１ａからｉｂに移行するまでの時間はほぼ一定と
考えられる。そこで粒子が１ａを通過する時の検出パル
ス（光検出器８ａの出力）が発生してから、その粒子が
１ｂに移行して通過するだけの所定期間の間に、再びｌ
ａ（光検出器８ａの出力）から検出パルスが発生したら
、粒子が続けて流れてきたと判断して、データ取込みを
キャンセルする。It is considered that the time required for particles to move from 1a to ib is approximately constant. There, a detection pulse (output of photodetector 8a) is generated when a particle passes through 1a, and then again during a predetermined period of time during which the particle moves to and passes through 1b.
When a detection pulse is generated from a (output of photodetector 8a), it is determined that particles have continued to flow, and data acquisition is canceled.

以上のような手段を設けることにより、誤データの取込
みが無いため、より確実な測定が行なえる。By providing the above means, there is no possibility of capturing erroneous data, so more reliable measurements can be performed.

（４）　　　レベルの　　−１ 一般に蛍光と散乱光の強度レベルは大きく異なり、又、
蛍光色素の種類によっても発生する蛍光光量が太き（異
なる。よって、これらを共通の光検出器で時系列に検出
するためには非常にダイナミックレンジの広い検出器が
必要になってしまう。(4) Level -1 In general, the intensity levels of fluorescence and scattered light are very different, and
The amount of fluorescent light generated differs depending on the type of fluorescent dye. Therefore, in order to detect these in time series with a common photodetector, a detector with an extremely wide dynamic range is required.

そこで本実施例では光検出器に至る各光路中に、使用す
る蛍光の発光量に応じて通過光量を調節する通過光量調
節手段（ＮＤフィルタ２６ａ、２６ｂ。Therefore, in this embodiment, in each optical path leading to the photodetector, there are passing light amount adjusting means (ND filters 26a, 26b) for adjusting the amount of passing light according to the amount of fluorescent light used.

３６　ａ、　　３６　ｂ）をそれぞれ設け、光検出器に
入射するそれぞれの光量の差が小さ（なるようにしてい
る。これにより大きなダイナミックレンジを有する高価
な光検出器を使用する必要がなくなり、よりローコスト
なシステムとすることができる。36a and 36b), so that the difference in the amount of light incident on the photodetector is small.This eliminates the need to use an expensive photodetector with a large dynamic range, and makes it more efficient. A low-cost system can be achieved.

なお、ＮＤフィルタには限らず、光路の遮光面積を制限
する光マスクによって通過光量を調節するようにしても
良い。Note that the amount of passing light may be adjusted not only by the ND filter but also by an optical mask that limits the light-blocking area of the optical path.

又、ＮＤフィルタを交換できる機構を設けるかあるいは
通過光量を自由に可変調節できる機構を用い、使用する
蛍光色素に応じてこれを調節するようにすればより汎用
性の高いシステムとなる。Furthermore, if a mechanism for replacing the ND filter or a mechanism for freely adjusting the amount of light passing through is provided, and this is adjusted according to the fluorescent dye used, the system becomes more versatile.

（５）　　　レベルの　　え　２ 本実施例では上記強度レベルの切換えに関し、ＮＤフィ
ルタの他に更に光検出器の増幅率を測定光の種類によっ
て切換える回路も有している。これは記憶演算回路１６
１に光検出器２５．３５の出力を取込む際に、増幅アン
プのゲインをｌａ。(5) Level change 2 In this embodiment, regarding the above-mentioned intensity level switching, in addition to the ND filter, there is also a circuit for switching the amplification factor of the photodetector depending on the type of measurement light. This is the memory calculation circuit 16
When taking in the output of the photodetector 25.35 to 1, the gain of the amplification amplifier is set to la.

１ｂの粒子の通過に同期して切換える回路を設は光の発
光量に応じて検出感変を切換えるようにしている。この
ゲインは自由に調節することによって幅広い測定に対応
することができ、入力設定手段１６０から入力される測
定条件に応じて増幅のゲインを決定するようになってい
る。A circuit is provided to switch the detection sensitivity in synchronization with the passage of the particles 1b in accordance with the amount of light emitted. This gain can be adjusted freely to accommodate a wide range of measurements, and the amplification gain is determined in accordance with the measurement conditions input from the input setting means 160.

さて、以上の２つの実施例は本発明の基本的構成の例で
あるが、より具体的な幾つかの使用例を以下説明する。Now, although the above two embodiments are examples of the basic configuration of the present invention, some more specific usage examples will be explained below.

なお、使用できる蛍光色素の種類及び組合わせがこれら
に限定されるものではないことは言うまでもない。It goes without saying that the types and combinations of fluorescent dyes that can be used are not limited to these.

使」Ｌ皿」工 本例では、検体を３種類の蛍光色素で同時染色して、側
方光学系の２個の光検出器で４チヤンネル検出するもの
である。In this example, a specimen is stained with three types of fluorescent dyes at the same time, and four channels are detected using two photodetectors in the side optical system.

第１図、第２図において、レーザ光源２及び３に波長４
８８ｎｍの２個の同−Ａｒ＋レーザ光源を用いる。なお
、レーザ光源を２個用意せずに第１１図（Ａ）のように
単一の光源からのレーザビームをハーフミラ−と全反射
ミラーを用いて光学的に２光束に分けるような構成とし
ても良い。この時、２本のレーザビームの強度比を変え
て各蛍光剤の励起効率に適した強度とすると更に好まし
い。In Figures 1 and 2, laser light sources 2 and 3 have a wavelength of 4
Two 88 nm -Ar+ laser light sources are used. In addition, instead of preparing two laser light sources, the laser beam from a single light source can be optically split into two beams using a half mirror and a total reflection mirror as shown in Figure 11 (A). good. At this time, it is more preferable to change the intensity ratio of the two laser beams so that the intensity is suitable for the excitation efficiency of each fluorescent agent.

被検粒子を染色する蛍光色素の種類は波長４８８ｎｍの
励起光で励起される蛍光を選択する。例えばＦＩＴＣ（
５３０ｎ”）・ＰＥ（５７０°″）・Ｄ０虫１＝−（（
６１０Ｊｍ）の３種類の蛍光で染色するものとすると、
被検粒子からは４８８Ｊｍ、５３０Ｊｍ。As the type of fluorescent dye that stains the test particles, fluorescence excited by excitation light with a wavelength of 488 nm is selected. For example, FITC (
530n”)・PE(570°″)・D0bug1=-((
610Jm) is stained with three types of fluorescence:
488 Jm and 530 Jm from the test particles.

５７０Ｊｍ、６１０Ｊｍの４種類の波長の光が同時に発
生することになる。なお、ＤＣは直接４８８ｎｍの波長
では励起されないが、−旦ＰＥが励起されて発生する蛍
光（５７０Ｊｍ）でＤＣが励起されるという段階的な励
起過程を有する。Light of four different wavelengths, 570 Jm and 610 Jm, are generated simultaneously. Note that the DC is not directly excited by the wavelength of 488 nm, but has a stepwise excitation process in which the DC is excited by the fluorescence (570 Jm) generated when PE is excited.

前処理として検体を上記３種の蛍光で染色した後に、本
実施例の装置で測定を行う。ここでダイクロイックミラ
ー２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂの光分側波長をそれ
ぞれ、５１０Ｊｍ、５９０Ｊｍ。After staining the specimen with the three types of fluorescence described above as pretreatment, measurement is performed using the apparatus of this example. Here, the optical wavelengths of the dichroic mirrors 21a, 21b, 31a, and 31b are 510 Jm and 590 Jm, respectively.

４５０Ｊｍ、６５０Ｊｍ程度に設定し、バンドパスフィ
ルタ２２　ａ、　２２　ｂ、　　３２　ａ、　　３２　
ｂとしてそれぞれ５３０Ｊｍ、４８８Ｊｍ、５７０Ｊｍ
。The band pass filters 22 a, 22 b, 32 a, 32 are set to about 450 Jm and 650 Jm.
b as 530Jm, 488Jm, and 570Jm, respectively.
.

６１０Ｊｍ付近の波長の光を選択的に透過させる特性の
ものを用いて、それぞれの光学系でＦＩＴＣ。FITC is used in each optical system using a material that selectively transmits light with a wavelength around 610 Jm.

ＳＳ（側方散乱光）、ＰＥ、ＤＣの強度検出を行なう。Intensity detection of SS (side scattered light), PE, and DC is performed.

被検粒子がｌａの位置を通過する時、上記４種類の光が
発生するが、この時９１０Ｔ亨４□　　。When the particle to be detected passes through the position la, the four types of light mentioned above are generated, and at this time, 910T+4□.

−−１−、検 出器２５においてはバンドパスフィルタ２２ａで選択さ
れたＦＩＴＣの蛍光強度が検出され、検出器３５におい
てはバンドパスフィルタ３２ａで選択されたＰＥの蛍光
強度が検出される。次に同一被検粒子がｌｂの位置を通
過する時には２＝＝；−一番−−−−閉−じ７Ｊ−”２
３　ｂ　、−−°　　　　　　　　、検出器２５におい
てはバンドパスフィルタ２２ｂで選択されたＳＳ強度が
検出され、検出器３５においてはバンドパスフィルタ３
２ｂで選択されたＤＣの蛍光強度が検出される。--1-, the detector 25 detects the fluorescence intensity of FITC selected by the bandpass filter 22a, and the detector 35 detects the fluorescence intensity of PE selected by the bandpass filter 32a. Next, when the same test particle passes through the lb position, 2==;-first---closed 7J-"2
3 b , --°, the detector 25 detects the SS intensity selected by the bandpass filter 22b, and the detector 35 detects the SS intensity selected by the bandpass filter 3
2b, the fluorescence intensity of the selected DC is detected.

こうして２個の検出器で４種類の異なる光学特性の光の
測定値を得ることができる。これに光検出器８ａ、８ｂ
で得られる２種類の前方散乱光強度を加えて、計６種類
の測定パラメータが得られる。In this way, measurements of light with four different optical characteristics can be obtained using two detectors. In this, photodetectors 8a and 8b
By adding the two types of forward scattered light intensities obtained in , a total of six types of measurement parameters can be obtained.

【見丘遣 次に側方光学系で４種類の蛍光色素で同時染色した検体
を測定できる、６チヤンネル検出が可能な使用例を説明
する。[Kari Mioka] Next, we will explain an example of use in which 6-channel detection is possible, in which specimens stained simultaneously with four types of fluorescent dyes can be measured using the side optical system.

第２図の構成に側方検出系をもう一つ付加して３個の光
検出器を有する光学系において、第２図でレーザ光源２
として波長４８８ｎｍのＡｒ＋レーザ光源を、またレー
ザ光源３として波長６００ｎｍの色素レーザ光源を用い
る。なお、第５図（Ｂ）あるいは第５図（Ｃ）のような
形態をとれば一層簡略な装置になる。In an optical system having three photodetectors by adding another side detection system to the configuration shown in Fig. 2, the laser light source 2 is
As the laser light source 3, an Ar+ laser light source with a wavelength of 488 nm is used, and as a laser light source 3, a dye laser light source with a wavelength of 600 nm is used. Note that if the configuration shown in FIG. 5(B) or FIG. 5(C) is adopted, the device will be even simpler.

被検粒子を染色する蛍光色素の種類は、波長４８８ｎｍ
の励起光で励起される蛍光、及び波長６００ｎｍで励起
される蛍光を選択する。例えば４８８Ｊｍに適したもの
としてＦＩＴＣ（５３０Ｊｍ）、ＰＥ（５７０Ｊｍ）を
用い、６００Ｊｍに適したものとしてＴＲ（６１０Ｊｍ
）、ＡＰＣ（６６０Ｊｍ）を用い、計４種類の蛍光で染
色する。The type of fluorescent dye that stains the test particles has a wavelength of 488 nm.
The fluorescence excited by the excitation light and the fluorescence excited by the wavelength of 600 nm are selected. For example, FITC (530Jm) and PE (570Jm) are suitable for 488Jm, and TR (610Jm) is suitable for 600Jm.
) and APC (660Jm), and stain with a total of four types of fluorescence.

前処理として検体を上記４種の蛍光で染色した後に、本
実施例の装置で測定を行う。ここで、ダイクロイックミ
ラー２１ａ、２１ｂ、３１ａ、３１ｂの光分側波長をそ
れぞれ、５７０Ｊｍ、６０５Ｊｍ。After staining the specimen with the four types of fluorescence described above as pretreatment, measurement is performed using the apparatus of this example. Here, the optical wavelengths of the dichroic mirrors 21a, 21b, 31a, and 31b are 570 Jm and 605 Jm, respectively.

５５０Ｊｍ、６３０Ｊｍ程度に設定し、バンドパスフィ
ルタ２２ａ、２２ｂ、３２ａ、３２ｂ、４２ａ。Bandpass filters 22a, 22b, 32a, 32b, 42a are set to about 550Jm and 630Jm.

４２ｂとしてそれぞれ４８８Ｊｍ、６００Ｊｍ。488Jm and 600Jm respectively as 42b.

５３０Ｊｍ、６１０Ｊｍ、５７０Ｊｍ、６６０Ｊｍ付近
の波長の光を選択的に透過させる特性のもの選択する。A material having a characteristic of selectively transmitting light having wavelengths around 530 Jm, 610 Jm, 570 Jm, and 660 Jm is selected.

被検粒子がＡｒ＋レーザ光が照射される１ａの位置を通
過する時、４８８Ｊｍの照射光でＦＩＴＣ。When the test particle passes the position 1a where the Ar+ laser beam is irradiated, FITC is performed with the irradiation light of 488 Jm.

ＰＥが励起され、４８８Ｊｍ、５３０Ｊｍ、５７０Ｊｍ
の３種類の光が発生する。この時 −−コ−てτ＝ど２−ｂ。PE is excited, 488Jm, 530Jm, 570Jm
Three types of light are generated. At this time, τ=d2-b.

゛　　　　　、検出器２５にてＳＳ（４８８Ｊｍ）が、
検出器３５でＦＩＴＣが、検出器４５でＰＥがそれぞれ
検出される。次に所定時間の後に同一の被検粒子が色素
レーザ光が照射される１ｂの位置を通過する時は、６０
０　ｎｍの照射光でＴＲ。゛, SS (488Jm) at detector 25,
The detector 35 detects FITC, and the detector 45 detects PE. Next, when the same test particle passes through the position 1b where the dye laser beam is irradiated after a predetermined time, 60
TR with 0 nm irradiation light.

ＡＰＣが励起され、６００Ｊｍ、６１０Ｊｍ、６６０ｎ
ｍの３種類の光が発生する。この時点では、書各４検出
器２５にてＳＳ（６００ｎｍ）が、検出器３５でＴＲが
、検出器４５でＡＰＣがそれぞれ検出される。　以上の
ように本実施例では側方３個の検出器で側方散乱光２チ
ヤンネル、蛍光４チヤンネルの計６チヤンネル検出が可
能で、これに前方散乱光を加えた計７種類の異なる光学
特性の光が検出可能となる。APC is excited, 600Jm, 610Jm, 660n
Three types of light are generated. At this point, the four detectors 25 detect SS (600 nm), the detector 35 detects TR, and the detector 45 detects APC. As described above, in this example, it is possible to detect a total of 6 channels, 2 channels of side scattered light and 4 channels of fluorescent light, with the 3 side detectors, and a total of 7 types of different optical characteristics including forward scattered light. light becomes detectable.

【１丘ｌ 上記使用例２と同様に、側方光学系で４種類の蛍光色素
で同時染色した検体を測定できる、６チヤンネル検出が
可能な別の使用例を説明する。[1 hill l] Similar to the above usage example 2, another usage example will be described in which a specimen simultaneously stained with four types of fluorescent dyes can be measured using a side optical system and 6-channel detection is possible.

レーザ光源２として波長６３３ｎｍのＨｅ−Ｎｅレーザ
光源、また光源３として波長４８８ｎｍのＡｒ＋レーザ
光源を用い、被検粒子を染色する蛍光色素の種類は、６
３３ｎｍの励起光に適したものとしてＡＰＣ（６６０ｎ
ｍ）、ＵＬ＝キニ＝ヰ絆（６９５ｎｍ）を選択し、４８
８ｎｍの励起光に適したものとしてＦＩＴＣ（５３０ｎ
ｍ）、ＰＩ（６２０ｎｍ）を選択して、これら４種の蛍
光色素で検体を多重染色する。A He-Ne laser light source with a wavelength of 633 nm was used as the laser light source 2, and an Ar+ laser light source with a wavelength of 488 nm was used as the light source 3, and the types of fluorescent dyes used to stain the test particles were 6.
APC (660n) is suitable for 33nm excitation light.
m), select UL=Kini=I bond (695nm), 48
FITC (530n) is suitable for 8nm excitation light.
m), select PI (620 nm) and multiplex stain the specimen with these four types of fluorescent dyes.

そしてダイクロイックミラー２１ａ、２１ｂ。and dichroic mirrors 21a and 21b.

３１ａ、３１ｂの光分割波長をそれぞれ、６４０ｎｍ。The light splitting wavelengths of 31a and 31b are each 640 nm.

５００ｎｍ、６７０ｎｍ、５５０ｎｍ程度に設定し、バ
ンドパスフィルタ２２ａ、２２ｂ、３２ａ。Bandpass filters 22a, 22b, and 32a are set to approximately 500nm, 670nm, and 550nm.

３２ｂ、４２ａ、４２ｂとしてそれぞれ６３３ｎｍ。32b, 42a, and 42b are each 633 nm.

４８８ｎｍ、６６０ｎｍ、５２０ｎｍ、６９５ｎｍ。488nm, 660nm, 520nm, 695nm.

６２０ｎｍ付近の波長の光を選択的に透過させる特性の
もの用いる。A material having a characteristic of selectively transmitting light with a wavelength around 620 nm is used.

これにより、上記使用例２と同様に、３個の光検出器を
有する側方光学系で６チヤンネルの検出が行える。As a result, similarly to Usage Example 2, six channels can be detected using the side optical system having three photodetectors.

［発明の効果］ 以上本発明によれば、複数の光照射位置に複数の検体が
ほぼ同時に通過した場合には、検出をキャンセルして取
り込まないため、誤測定データの取り込みが無く、安定
性の高い測定が行える装置を提供することができる。[Effects of the Invention] As described above, according to the present invention, when multiple specimens pass through multiple light irradiation positions at almost the same time, detection is canceled and the data are not imported. Therefore, no erroneous measurement data is imported, and the stability is improved. It is possible to provide a device that can perform high-quality measurements.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図は本発明の実施例の構成図、 第２図は実施例の側方の光学系の構成図、第３図は側方
の光学系の変形例の図、 第４図は実施例の信号波形図、 第５図は照射光学系の変形例の図、 第６図は従来例の構成図、 であり、図中の主な符号は、 １・・・・フローセル、 ２．３・・・・レーザ光源、 ８・・・・光検出器、 ２２．３２・・・・バンドパスフィルタ、２５．３５・
・・・光検出器、 ２６．３６・・・・ＮＤフィルタ、 ￥九（３５） 喘５図Fig. 1 is a configuration diagram of an embodiment of the present invention, Fig. 2 is a configuration diagram of a side optical system of the embodiment, Fig. 3 is a diagram of a modification of the lateral optical system, and Fig. 4 is an embodiment. Figure 5 is a diagram of a modified example of the irradiation optical system, Figure 6 is a configuration diagram of a conventional example, and the main symbols in the diagram are: 1...flow cell, 2.3. ...Laser light source, 8...Photodetector, 22.32...Band pass filter, 25.35.
...Photodetector, 26.36...ND filter, ¥9 (35) Figure 5

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] （１）個々の検体を順次移動させる手段と、第１の照射
光を生成し、検体が移動する第１の位置に照射する第１
照射手段と、 第２の照射光を生成し、前記第１の位置とは異なる第２
の位置に照射する第２照射手段と、前記第１、第２の位
置を通過する検体から発する第１、第２の光学特性の光
を同一光検出器で時系列に検出する光検出手段と、 前記第１、第２のそれぞれの位置に複数の検体がほぼ同
時に通過したことを判断する判断手段と、 該判断手段の判断に基づいて、前記光検出手段での検出
をキャンセルする手段と、を有することを特徴とする検
体測定装置。(1) means for sequentially moving individual specimens;
irradiation means; a second irradiation means for generating a second irradiation light and a second position different from the first position;
a second irradiation means that irradiates the position, and a light detection means that detects light having first and second optical characteristics emitted from the specimen passing through the first and second positions in time series using the same photodetector. , a determining means for determining that a plurality of specimens have passed through each of the first and second positions almost simultaneously; and means for canceling detection by the light detecting means based on the determination by the determining means; A specimen measuring device characterized by having: （２）前記判断手段は、検体が前記第１の位置を通過す
るタイミングおよび前記第２の位置を通過するタイミン
グを独立に検出し、両者の発生タイミングを比較する手
段を有する請求項（１）記載の検体測定装置。(2) Claim (1) wherein the determining means includes means for independently detecting the timing at which the specimen passes through the first position and the timing at which the specimen passes through the second position, and comparing the timings of occurrence of both. The specimen measuring device described. （３）前記判断手段は、検体が前記第１の位置を通過す
るタイミングを検出する手段と、該タイミングの発生か
ら所定期間内に再び前記第１の位置に検体が通過するか
否かを検出する手段を有する請求項（１）記載の検体測
定装置。(3) The determining means includes means for detecting the timing at which the specimen passes through the first position, and detecting whether or not the specimen passes through the first position again within a predetermined period from the occurrence of the timing. The sample measuring device according to claim 1, further comprising means for: