JPH04116460A - アルブミンの分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アルブミンを分析するための方法に関し、よ
り特定的には、血清中または血漿中の糖化アルブミンを
、液体クロマトグラフィを用いて分析する方法に関する
。

〔従来の技術〕

糖尿病の指標の一つとして、血液中の糖化ヘモグロビン
、特にヘモグロビンＡｌｃが知られており、その測定が
行われている。また、ヘモグロビンと同様に生体中の他
の蛋白質も糖化を受けることがわかっている。これらの
蛋白質の中でも、アルブミンの半減期は２週間とヘモグ
ロビンよりも短いため、糖化アルブミンがヘモグロビン
Ａｌｃよりも短期の血糖状態を反映する指標になると言
われている。

糖化アルブミン値（アルブミンの糖化度）は、試料中の
アルブミン量に対する糖化されたアルブミン量の相対的
な割合として、次の式（１）のように定義されている。

糖化アルブミンを分析する方法及び分析装置は、特開昭
６２−２２６９９９号、特開昭６４−７８１５４号、特
開平１−２５７２５７号、特開平１２６２４６９号、特
開平２−４５７５９号等に開示されている。

上記のような先行技術の糖化アルブミンの分析方法は液
体クロマトグラフィを用いるものである。

すなわち、試料を移動相と共に蛋白質分離用のカラムに
導き、アルブミンを他の蛋白質から分離し、次に、分離
されたアルブミンをアフィニティヵラムに導き、糖化ア
ルブミンと非糖化アルブミンとに分離することにより、
試料中の糖化アルブミン値を測定するものである。

そして、上記蛋白質分離カラムの好ましい例として、ア
ルブミンとの親和性の高い色素シバクロンブルーＦ　３
　（、−Ａ等を結合させたゲルを充填したカラム、血清
中の大量成分であるＩｇＧとアルブミンとを分離し得る
ゲル濾適用分離カラム、アミノ基を有するイオン交換ゲ
ル充填カラム等が挙げられている。これらのゲルのうち
、親水性架橋共重合体にアミノ基を導入したゲルが特に
好ましい旨も記載されている。

他方、アフィニティ力ラムの好ましい例とじては、’ｉ
Ｌ＊　ｌＥ＝’［換チル吐Ｅ　ｔジヒドロキシボロニル
基を有するゲルを充填したカラム等が挙げられている。

特に、親水性架橋共重合体にジヒドロキシボロニル基を
導入したゲルが好ましい旨記載されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、上述した各先行技術に記載の分析方法で
は、以下のような問題があった。

すなわち、蛋白質分離カラムにおける試料中からの蛋白
質の分離に際しては、グロブリン、アルブミンの順でカ
ラムから溶出される。従って、糖化アルブミンを測定す
る場合、アルブミンをアフィニティカラムに導入する前
に、グロブリンの溶出を待たねばならず、その分だけ測
定時間が余分にかかっていた。

よって、本発明は、上述した従来のアルブミン分析方法
についての問題点を解消するものであり、その目的とす
るところは、試料中の糖化アルブミンをその他の蛋白質
成分に影響されることなく迅速に分析することが可能な
分析方法を提供することにある。

〔課題を解決するだめの手段及び作用〕上述した各先行
技術では、分析に際しての流路等の構成を改良すること
により分析時間の短縮が図られていたのに対し、本願発
明者は、上記の問題点に鑑み、蛋白質分離カラムの充填
剤を工夫すれば分析時間を短縮し得るのではないかと考
え、蛋白質分離カラムに用いられる充填剤を鋭意検討し
た結果、蛋白質分離カラムとしてヒドロキシアパタイト
充填カラムを用いれば分析時間を短縮し得ることを見出
し、本発明をなすに至った。

すなわち、本発明のアルブミン分析方法は、試料中のア
ルブミンを他の蛋白質成分から分離するために、移動相
と共に試料を蛋白質分離カラムに導（工程と、上記蛋白
質分離カラムで分離されたアル）゛ミンをアフィニティ
カラムに導き、８亥アフイニテイカラムにて非糖化アル
ブミンと糖化アルブミンとを分離する工程とを備えるア
ルブミンの分析方法において、蛋白質分離カラムとして
、ヒドロキシアパタイト充填カラムを用いることを特徴
とするものである。

本発明の分析方法において、蛋白質分離カラムに試料を
導く工程、並びにアフィニティ力ラムにおいて非糖化ア
ルブミンと糖化アルブミンとに分離する工程の手順自体
は、上述したような従来から公知のアルブミン分析方法
を適宜用いることができる。

本発明の特徴は、上記したとおり、蛋白質分離カラムと
して、ヒドロキシアバタイ］・充填カラムを用いたこと
にある。ヒドロキシアパタイトを充填剤として用いた蛋
白質分離カラムでは、試料中の蛋白質は、トランスフェ
リン、アルブミン、グロブリンの順に溶出される。従っ
て、比較的時間のかかるグロブリンの溶出時間を待つま
でもなく、アルブミンを分離することができる。すなわ
ち、本発明では、ヒドロキシアパタイト充填カラムを蛋
白質分離カラムとして用いることにより、グロブリンの
溶出時間を待つ必要がないため、糖化アルブミンをより
短時間で測定することが可能となる 本発明において使用されるヒドロキシアパタイトは、液
体クロマトグラフィーに使用できるだけの機械的強度を
有していれば良く、その形状、Ｃａ／Ｐ比等の特性を特
には問わず、いずれも使用可能である。このようなヒド
ロキシアパタイトが充填されたカラムとしては、三井東
圧化学■製；ＨＣＡ−Ｃｏ　Ｉｕｍｎ■、東亜燃料工業
■製；セラミックアパタイトカラム等が市販されている
。

なお、本発明において、糖化アルブミンと非糖化アルブ
ミンとに分離するためのアフィニティカラムとしては、
蛋白質の非特異的吸着が少ないものであれば任意の充填
剤を充填したカラムを用い得る。特に、官能基としてジ
ヒドロキシボロニル基が導入された充填剤が好適に用い
られる。

〔実施例の説明〕

以下、非限定的な実施例を説明することにより本発明を
明らかにする。

まず、第１図のフロー図を参照して、本実施例の分析方
法を説明する。

第１図のアルブミン分析装置では、第１の流路１に、第
１．第２の溶離液Ａ、Ｂの何れかが選択的に供給される
ように構成されている。この第１第２の溶離液Ａ、Ｂの
選択的供給を可能とするために、例えば流路切り換え手
段２が第１の流路１の最上流部に接続される。

また、第１の流路１では試料注入部３と、ヒドロキシア
パタイトが充填された第１のカラム４とが直列に連結さ
れている。特に図示はないが、第１の流路１の途中の位
置に溶離液Ａ、Ｂを送液するためのポンプが配置される
。従って、第１の流路１では、溶離液Ａまたは溶離液Ｂ
が該送液ポンプにより流され、試料注入部３により注入
された試料が該溶離液と共に第１のカラム４に導かれる
ように構成されている。

他方、第２の流路５では、アルブミンを、非糖化アルブ
ミンと糖化アルブミンとに分離するための第２のカラム
６と、糖化アルブミン及び非糖化アルブミンを検出する
ための検出器７とが直列に連結されている。

また、第１の流路１の下流端は第１の流路切り換え手段
８の入口側の−のボートに接続されている。同様に、第
１の流路切り換え手段８の他の入口側ポートに、溶離液
供給流路９が接続されている。溶離液供給流路９は、第
３．第４の溶離液Ｃ１Ｄの何れかを選択的に供給し得る
ように構成されており、かつ溶離液供給流路９には、溶
離液の選択的な供給を可能とするための溶離液切り換え
手段１０が接続されている。

第１の流路切り換え手段８の出口側ポートには、分取用
流路１１及び第３の流路１２が接続されている。この分
取用流路１１には、第１のカラム４で分離されたアルブ
ミンを留め置くための部分として分取部１３が設けられ
ている。また、分取用流路１１及び第３の流路１２は、
それぞれ、第２の流路切り換え手段１４の入口側のボー
トに接続されている。すなわち、第３の流路１２に対し
て並列に分取用流路１１が接続されている。

そして、第２の流路切り換え手段１４の出口側ポートに
、前述した第２の流路５及びドレイン流路１５が接続さ
れている。

次に、第１図に示した分析装置を用いた本発明の分析方
法を説明する。

試料の注入 まず、第１の溶離液Ａが第１の流路１に流されている状
態において、試料注入部３から試料が注入される。それ
によって第１のカラム４に第１の溶離液Ａと共に試料が
導かれる。

ヱヱズｌヱ■分皇 第１のカラム４において試料中からアルブミンが分離さ
れる。この蛋白質の分離は、後述するように第１のカラ
ムに用いる充填剤が、ヒドロキシアパタイトであるため
、トランスフェリン、アルブミン、グロブリンの順とな
る。従って、グロブリンの溶出時間を待つまでもなく、
アルブミンを分離することができる。

第１のカラム４からアルブミンが溶出された際に、該ア
ルブミンを分取用流路１１の分取部１３に留め置く。そ
の状態で、第１の流路切り換え手段８及び第２の流路切
り換え手段１４を切り換える。すなわち、第１の流路切
り換え手段８を切り換えることにより、第１の流路１と
第３の流路１２とが連結し、溶離液供給流路９と分取用
流路１１とを連結して第３の溶離液Ｃを分取用流路１１
に導く。同時に、第２の流路切り換え手段１４の切り換
えにより、分取用流路１１と第２の流路５とを接続し、
分取用流路に満たされていたアルブミンを第２の流路５
の第２のカラム６に導く。

第２のカラム６において、アルブミンは糖化アルブミン
と非糖化アルブミンに分離され、非糖化アルブミンのみ
が第２のカラムから溶出される。

この非糖化アルブミンを検出器７で検出する。

次に、溶離液供給流路９から供給される溶離液を第４の
溶離液りに切り換える。そして、溶離液りを第２のカラ
ム６に導くことにより、第２のカラムに保持されている
アルブミンを溶出させ、該糖化アルブミンを検出器７で
検出する。

明化渡９１１ 検出器７で検出された非糖化アルブミン量及び糖化アル
ブミン量をもとに、前％ｅしだ式（１）から、糖化アル
ブミン値（アルブミンの糖化度）を計算する。

第１のカラムの再生 なお、上述した第１の流路切り換え手段８及び第２の流
路切り換え手段１４により、第１〜第３の流路１．５，
１２、溶離液供給流路９、分取用流路１１及びドレイン
流路１５を接続しているものであるため、この分析装置
では、非糖化アルフミン及び糖化アルブミンの検出工程
を実施している間に第１のカラム４の再生を行うことが
できる。

すなわち、非糖化アルブミン及び糖化アルブミンを検出
する工程においては、溶離液供給流路９分取用流路１１
−第２の流路５を第３．第４の溶離液ＣまたはＤが流れ
るように第１．第２の流路切り換え手段８，１４が切り
換えられている。この場合、第１の流路１は第３の流路
１２に接続され、かつ第３０流路１２は第２の流路切り
換え手段１４の出口側のドレイン流路１５に接続される
。

従って、上記非糖化アルブミン及び糖化アルブミンの検
出工程に際し、第１の流路１に第２の溶離液Ｂを流した
後、溶離液△を流すことにより、第ている。

部」ゴへ友う」ＪＮ１往− 糖化アルブミンを検出器７で検出した後に、溶離液供給
流路９から供給される溶離液を第３の溶離液Ｃとするこ
とにより、第２のカラム６を再生することができる。し
かも、この第２のカラム６の再生に際し、第１の流路切
り換え手段８及び第２の流路切り換え手段１４を、前述
した蛋白質分取の際の状態、すなわち第１の流路１−分
取用流路１１−ドレイン流路１５が接続され、他方、溶
離液供給流路９−第３の流路１２−第２の流路５が接続
される状態としておけば、前述したアルブミンの分取工
程と同時に、第２のカラムの再生を行うことができる。

従って、本実施例の分析方法では、第１．第２の流路切
り換え手段により第１〜第３の流路、溶離液供給流路、
分取用流路及びドレイン流路が上述した複数の接続状態
に切り換えられるように構成されているため、第１のカ
ラムにおＬｊる蛋白質の分離と第２のカラムの再生、並
びに第１のカラムの再生及び第２のカラムにおける糖化
・非糖化よって、糖化＠（９）質１の分析を極めて効率
よく行うことができる。

なお、上述した各溶離液Ａ−Ｄとしては、以下のような
組成のものが用いられる。

第１の溶離液Ａ 第１の溶離液Ａとしては、試料中のアルブミンを他の蛋
白質成分から分離することができる溶離液であれば、ど
のような組成でもよい。例えばｐＨが５．８〜９．０、
濃度が１〜１００ｍＭのリン酸緩衝液が用いられる。

第２の溶離液Ｂ 第１のカラムに保持されているグロブリン等の試料中の
アルブミン以外の成分を溶出させることができる液であ
れば、どのような組成であってもよい。例えば、ｐ　Ｈ
が５．８〜９．０、濃度が２００〜１００．０ｍＭのリ
ン酸緩衝液が用いられる。

裏側４１すｌ順見 第３の溶離液Ｃは、アルブミンの非糖化成分を溶出させ
るために用いられるものであり、１，２シス−ジオール
基を存する物質を含有しておらず、かつ第２のカラムに
糖化成分のみを保持させ、非糖化成分を溶出させること
ができる液であれば、どのような組成であってもよい。

アフィニティーカラムの充填剤の官能基として好適であ
るジヒドロキシボロニル基と糖化アルブミンの糖鎖とは
、弱アルカリ性条件下で結合するため、ｐＨが８０〜１
０．０の緩衝液を用いることが好ましい。

例えば、塩化マグネシウム等の二価金属イオン塩を０〜
５０ｍＭの割合で含有するように調製された１０〜５０
０ｍＭの濃度の緩衝液が好適に用いられる。緩衝液用基
剤としては、酢酸アンモニウム、ＨＥＰＥＳ　［Ｎ−２
ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホ
ン酸ｊ等が用いられる。

また、エタノール、メタノールまたはアセトニトリル等
の有機溶媒を２０％の割合で含有させる方が好ましいこ
ともある。

第４の溶離液り 第４の溶離液りは、第２のカラムに吸着されている糖化
アルブミンを溶出させることができる液であれば、どの
ような組成であってもよい。例えば、１，２−シス−ジ
オール基を有する物質を１〜５００ｍＭ含有するか、ま
たは、第３の溶離液Ｃが二価金属イオンの塩を含むとき
はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等の金属キレー
ト剤を０〜１００ｍＭ含有したｐＨ＝７．０〜１０．０
の緩衝液が好ましい。

緩衝液用基剤としては、例えばＴｒｉｓ［ト’Ｊス（ヒ
ドロキシメチル）アミノメタン］、Ｂ１５ｔｒｉｓ　［
ビス−トリス（２−ヒドロキシエチル）イミノ−トリス
（ヒドロキシメチル）メタン」、またはＨＥＰＥＳ等が
用いられる。

１．２−シス−ジオール基を有する物質としては、例え
ば、ソルビトール、マンニトール等が用いられる。一般
に、一つのシス−ジオール基を有する化合物よりも、多
数のシス−ジオール基を有する化合物の方が溶出力に優
れている。

第１回に示した分析装置を用いた具体的な実験例につき
説明する。分析装置としては、第２図に示す分析装置を
用いた。第２図の分析装置は、第１図に示した分析装置
をより具体化したものであり、ここでは、第１の流路切
り換え手段及び第２の流路切り換え手段がボー１−　ａ
　−ｆを有する六方バルブ２１で構成されている。

第１の流路２２の上流端には流路切り換え装置２３が接
続されている。この流路切り換え装置２３は、第１の溶
離液Ａ及び第２の溶離液Ｂが貯留された溶離液槽２４，
２５に接続されており、第１の溶離液Ａ及び第２の溶離
液Ｂの何れかを選択的に第１の流路２２に供給し得るよ
うに構成されている。

２６は送液ポンプを示し、上記溶離液ＡまたはＢを送液
するために設けられている。送液ポンプ２６の下流側に
は、試料注入部としてのオートサンプラー２７が設けら
れている。また、オートサンプラー２７の下流側には第
１のカラム２８が設置６ けられている。そして、第１の流路２２の下流端は、六
方バルブ２１の入口ボー）ａに接続されている。

溶離液供給流路２９の上流端には流路切り換え装置３０
が接続されている。流路切り換え装置３０は、第３の溶
離液Ｃ及び第４の溶離液りが貯留された溶離液槽３１３
２から、何れかの溶離液ＣまたはＤを溶離液供給流路２
９に供給するために設けられている。なお、３３は送液
ポンプを示し、溶離液ＣまたはＤを送液するために設け
られている。溶離液供給流路２９は六方バルブ２１の入
口ポートＣに接続されている。

３４は分取用流路を示し、六方バルブ２１の出口ポート
ｂと入口ポートｅとの間に接続されている。分取用流路
３４の途中には、分取部として分取用ループ３５が設け
られている。この分取用ループ３５は流路を螺旋状に巻
回することにより、所望量の溶離液が貯留されるように
構成されている。

六方バルブ２１の出口ボー）ｄには、第２の流路３６が
接続されている。第２の流路３６には第２のカラム３７
及び検出器３８が直列に接続されて設けられている。な
お、３９はドレインを示す。

また、六方バルブ２１の出口ポートｆにはドレイン流路
４０が接続されている。

次に、上述した第２図の分析装置における分析過程を第
３図のタイミングチャート図を参照して説明する。

六方バルブ２１は、当初、第２図の■で示す実線に沿っ
て各ボートが接続された状態にある。すなわち、入口ボ
ートロー出口ポートｂ、入ロボートｃ−出口ボートｄ、
及び入口ボー）ｅ−出口ボートｆがそれぞれ接続されて
いる状態にある。この状態で、第１の溶離液Ａが第１の
流路２２内を送液され、オートサンプラー２７により試
料が注入される。そして、第１のカラム２８においてア
ルブミンが溶出され、分取用流路３４に導かれる。

アルブミンが溶出され、分取用流路３４の分取用ループ
３５に満たされた状態を見計らって、六方バルブ２１を
接続状態Ｈに切り換える。

接続状態■では、六方バルブの各ボートは破線で示すよ
うに、入口ボートロー出口ボートｆ、入口ボーｈ　ｅ−
出口ボー１−　ｄ、入ロボートＣ−出ロポー）ｂが接続
される。従って、第１の流路２２から送液される溶離液
はドレイン流路４ｏがら排出される。

他方、溶離液供給流路２９−分取用流路３４第２の流路
３６が接続されることになる。この状態において、第３
の溶離液Ｃを溶離液供給流路２９から送液し、分取用流
路３４に貯留されていたアルブミンを第２の流路３６の
第２のカラム３７に導く。そして、第２のカラム３７に
おいてアルブミン中の非糖化成分を分離し、検出器３８
により検出する。

次に、上記接続状態のまま、溶離液供給流路２９に供給
される溶離液を第４の溶離液りとし、それによって第２
のカラム３７において糖化アルブミンを溶出させ、検出
器３８で検出する。

以上のようにして得られた非糖化アルブミン及び糖化ア
ルブミンの検出値に基づいて、式（１）に従って糖化ア
ルブミン値を測定する。

なお、上述した非糖化アルブミン及び糖化アルブミンの
検出工程においては、六方バルブ２］は接続状態■とさ
れている。その場合、前述したとおり、第１の流路２２
ばドレイン流路４０に接続されている。よって、非糖化
アルブミン及び糖化アルブミン検出工程において、第３
図に示すように第１のカラムに供給される溶離液を第２
の溶離液Ｂとするように流路切り換え手段２３を切り換
えることにより、該検出工程の間に第１のカラム２８を
再生ずることができる。

さらに、次回の測定に際し、六方バルブ２１を接続状態
■に切り換え、上述したアルブミンの分取工程を実施す
る際には、溶離液供給流路２９は第２の流路３６に接続
されている。従って、第３図に示すように、六方バルブ
の接続状態が■にされている間に、溶離液供給流路２９
に供給される溶離液を再度節３の溶離液Ｃとしておくこ
とにより、第２のカラム３７に第３の溶離液Ｃを導き、
第２のカラム３７を再生ずることができる。

次に、第２図に示した分析装置を用いた具体的な実験結
果につき説明する。なお、使用した各装置及び測定条件
は以下のとおりである。

（使用した装置） オートサンプラ−２７・・・■島原製作所製５ＩＬ６Ｂ
送液ポンプ２６，３３　　　・・■島原製作所製ＬＣ−
９Ａ検出器３８　　　　　　・・・■島原製作所製１？
Ｆ−５３５六方バルブ２１　　　　・・・積木化学工業
■製　ＭＳＣ−６２マタ、第１図には図示されていない
が、コントローラーとして■島原製作断裂Ｓ　ＣＬ−６
Ｂ及びデーター処理装置として■島原製作所製（、−Ｒ
６Ａを用いた。

（測定条件） 試料注入量・・・５μＬ（血清） 第１のカラム２８ ・・・三井東圧化学■製　　ヒトＵキシアパタイト充填
カラム　、ＨＣＡ　−Ｃｏｌｕｍｎ■　（内径４ｍｍＸ
長さ７５ｍｍ）第２のカラム３７ ・・・東ソー■製アフィニティーカラムＴＳＫｇｅｌ　
　Ｂｏｒｏｎａｔｅ−５ＰＷ　　Ｇｌａｓｓ（内径５胴
×長さ５０皿） 溶離液Ａ・・・１０ｍＭ　リン酸カリウム緩衝液（ｐｔ
＋＝７．８）溶離液Ｂ・・・３００ｍＭリン酸カリウム
緩衝液（ｐＨ・７．８）溶離液Ｃ・・・２５０ｍＭ酢酸
アンモニウム＋水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ・８．５
）＋４０ｍＭ塩化マグネシウム 溶離液Ｄ−１００ｍＭＴ　ｒ　ｉ　ｓ−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝８．５）＋１００ｍＭソルビトール＋４０ｍＭのＥ
ＤＴＡ・２Ｎａ 送液ポンプ２６及び３３の流速・・・１ｍｌ／分分取用
ループ３５の容量　　　・・・３ｍｊ２検出器３８・・
・蛍光光度計（励起波長２８５ｎｍ、蛍光波長３４０ｎ
ｍ　） 実省Ｉ引１ 第３図に示すタイミングチャートに従って装置を駆動し
て測定を行った。第１のカラムとしてヒドロキシアパタ
イト充填カラムを用いてアルブミンを分離したときのク
ロマトグラムを第４図に、第２のカラム、即ちアフィニ
ティカラムでの非糖化アルブミンと糖化アルブミンを分
離したときのクロマトグラムを第５図にそれぞれ示す。

第４図において、Ｐｌはトランスフェリン、Ｐ２はアル
ブミン、Ｐ３はグロブリンのピークである。従って、グ
ロブリンよりも先にアルブミンが溶出されていることが
わかる。

また、第５図において、Ｐ４は非糖化アルブミン、Ｐ５
は糖化アルブミンのピークである。

式（１）の計算式をもとに、第５図のクロマトグラムの
Ｐ４ピーク面積を非糖化アルブミン量とし、Ｐ５ピーク
面積を糖化アルブミン量として糖化アルブミン値を計算
したところ、２１．９％であった。

〔発明の効果〕

以上のように、本発明によれば、試料から蛋白質成分を
分離するための蛋白質分離カラムとしてヒドロキシアパ
タイト充填カラムを用いるため、試料中に含まれている
グロブリンの溶出時間を待つまでもなく、アルブミンを
溶出することができる。従って、アルブミンを高精度に
かつ速やかに分離することができるため、糖化アルブミ
ン値を迅速に測定することが可能となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の一実施例の分析方法の概略を説明する
ためのフローダイヤグラム、第２図は本発明の一実施例
に用いられる分析装置の概略構成図、第３図は第１図の
装置を用いた分析方法のタイミングチャート図、第４図
は実施例１においてヒドロキシアパタイト充填カラムで
アルブミンを分離したときのクロマトグラム、第５図は
実施例１においてアフィニティ力ラムで非糖化アルブミ
ンと糖化アルブミンを分離したときのクロマトグラムで
ある。 １は第１の流路、３は試料注入部、４は第１のカラム、
５は第２の流路、６は第２のカラム、７は検出器、８は
第１の流路切り換え手段、９は溶離液供給流路、１１は
分取用流路、１２は第３の流路、１３は分取部、１４は
第２の流路切り換え手段、１５はドレイン流路、２１は
第１．第２の流路切り換え手段を構成するための六方バ
ルブ、２２は第１の流路、２７はオートサンプラー、２
８は第１のカラム、２９は溶離液供給流路、３４は分取
用流路、３５は分取用ループ、３６は第２の流路、３７
は第２のカラム、３８は検出器、４０はドレイン流路を
示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）試料中のアルブミンを他の蛋白質成分から分離す
   るために、移動相と共に試料を蛋白質分離カラムに導く
   工程と、 前記蛋白質分離カラムで分離されたアルブミンをアフィ
   ニティカラムに導き、該アフィニティカラムにおいて非
   糖化アルブミンと糖化アルブミンとに分離する工程とを
   備えるアルブミンの分析方法において、 前記蛋白質分離カラムとして、ヒドロキシアパタイト充
   填カラムを用いることを特徴とする、アルブミンの分析
   方法。