JPH0365359B2 - - Google Patents
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Description
この発明は薬用ニンジンより単離された新規な
サポニン成分及びその単離法に関する。
薬用ニンジン中特にウコギ科に属するオタネニ
ンジン（パナツクス ギンゼング シーエー メ
イヤー，Panax ginseng C.A.Meyer）は一名チ
ヨウセンニンジンと呼ばれ、古来より強壮、強
精、消炎、利尿、抗糖尿用の薬剤として用いられ
てきたことは広く知られているところである。
近時薬用ニンジンの含有成分の研究が進めら
れ、トリテルペンのダンマラン系配糖体に属する
サポニンとしてギンゼノサイドRb1、Rb2、Rb3、
Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1及びRh2並び
にギンゼノサイド20−グルコ−Rfなどが知られ
ている（Chem Pharm.Bull.22（２），421〜428
（1974）および薬学雑誌94（２），252〜260（1794）
参照）。
従来上記のような公知のギンゼノサイド類は、
原料を水、低級アルコール類又は含水低級アルコ
ール類で抽出した後、その抽出物を水−ｎ−ブタ
ノールで分配抽出しそのｎ−ブタノール層から単
離精製して得られている。一方水層の方は何らか
えりみられることなく排棄されていた。この発明
の発明者らはこの従来排棄されていた水層に着目
し、これに文献未記載の特に水に易溶性の新規な
サポニン物質が含有されていることを見出し、こ
れを単離しその構造を確認してこの発明をなすに
至つた。
この発明による新規サポニン類は、下記式
（）で表すことができる。
すなわち式（）：
〔式中R1はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、α−Ｌ−ア
ラビノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピ
ラノシル基、α−Ｌ−アラビノフラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基又はβ−Ｄ−
グルコピラノシル基〕
で表される化合物である。
上式においてR1がβ−Ｄ−グルコピラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基の化合物
の名称は、３−Ｏ−〔６−Ｏ−マロニル−β−Ｄ
−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコ
ピラノシル〕−20−Ｏ−〔β−Ｄ−グルコピラノシ
ル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル〕20
（Ｓ）−プロトパナキサジオール，（以下マロニル
−ギンゼノサイドRb1と称す）；R1がα−Ｌ−ア
ラビノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピ
ラノシル基の化合物の名称は、３−Ｏ−〔６−Ｏ
−マロニル−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシル〕−20−Ｏ−〔α
−Ｌ−アラビノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル〕20（Ｓ）−プロトパナキサジオ
ール，（以下マロニル−ギンゼノサイドRb2と称
す）；R1がα−Ｌ−アラビノフラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基の化合物の名
称は、３−Ｏ−〔６−Ｏ−マロニル−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル〕−20−Ｏ−〔α−Ｌ−アラビノフラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル〕20（Ｓ）−
プロトパナキサジオール（以下マロニル−ギンゼ
ノサイドRcと称す）；及びR1がβ−Ｄ−グルコピ
ラノシル基の化合物の名称は３−Ｏ−〔６−Ｏ−
マロニル−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）
−β−Ｄ−グルコピラノシル〕−20−Ｏ−β−Ｄ
−グルコピラノシル20（Ｓ）−プロトパナキサジオ
ール（以下マロニル−ギンゼノサイドRdと称す
る）である。
この発明の新規サポニン類を含有するニンジン
としては、オタネニンジンが最も好ましいもので
ある。原料として用いられる他の植物としては、
オタネニンジンと類縁植物であるトチバニンジン
（パナツクス・ヤポニカス，シー・エー・メイヤ
ー、Panax japonicus C.A.MEYER）、アメリカ
ニンジン（パナツクス・キンキユホリウム，リン
ネ、Panax quinquefolium LINNE）、三七ニン
ジン（パナツクス・プソイド・ギンゼング，ワー
リツヒPanax pseudo−ginseng WALICHまた
はパナツクス・ノトギンゼング・バーキル、
Panax notoginseng BURKILL）が挙げられる。
この発明の新規サポニン物質は、上記のごとき
ニンジンの根部、地上部もしくはその乾燥物から
抽出分離、精製するか又は上記のごときニンジン
の根部切片を組織培養し、次いで抽出分離、精製
することによつて得ることができる。また具体的
な原料としてはオタネニンジンの生薬の白参、紅
参などが挙げられるがこのうち特に白参が好まし
い。
この発明の新規サポニン物質は上記のような原
料を用いて次のようにして得ることができる。す
なわち原料となるニンジンを脱脂せずにあるいは
通常の脂溶性有機溶媒を用いて脱脂後、水、メタ
ノールやエタノールやプロピルアルコールのよう
な低級アルコール、又はこれら低級アルコールを
含有する含水アルコールで抽出される。この抽出
は加温または加熱下に行うのが好ましい。得られ
た抽出液を蒸発濃縮して抽出エキスとする。
次いでこの抽出エキスを水と脂肪族エーテル及
び／又は脂肪族中級アルコールによつて分配抽出
される。脂肪族エーテルとしてはエチルエーテル
など用いられ脂肪族中級アルコールとしては、ｎ
−ブタノール、ｎ−ペンチルアルコールなどが用
いられる。
上記分配抽出で得られた水層を下記のようにシ
リカゲルカラムクロマトグラフイに付し分離精製
してこの発明のサポニンが得られる。すなわち上
記水層を、例えばボンダパツクC18のようなシリ
カゲルを用いメタノール／水混合溶媒で溶離する
逆相シリカゲルカラムクロマトグラフイに付され
る。この処理は複数回行つてもよい。そして薄層
クロマトグラフイ（TLC）を指標として１〜３
に分画する。そして分画２を、例えばシリカゲル
60（メルク社製，70〜230メツシユ）を用いクロロ
ホルム−メタノール−水（65：35：10）の下層で
溶離する順相のシリカゲルカラムクロマトグラフ
イに付してマロニル−ギンゼノサイドRb1及びマ
ロニル−ギンゼノサイドRb2、並びにマロニル−
ギンゼノサイドRb2、Rcの混合物を得る。次いで
マロニル−ギンゼノサイドRb2、Rcの混合物はさ
らに例えばシリカゲル60（メイク社製70〜230メツ
シユ）を用い、ｎ−ブタノール−酢酸エチル−メ
タノール−水（４：２：１：１）で溶離する順相
カラムクロマトグラフイに付してマロニルギンゼ
ノサイドRb2と同Rcが分離される。
なお分画１からは同様の順相シリカゲルカラム
クロマトグラフイ（クロロホルム−メタノール−
水及びｎ−ブタノール−酢酸エチル−メタノール
−水で溶離）に付して公知のギンゼノサイドRo、
Re、Rf及びRg1が得られる。
また分画３からは同様にして公知のギンゼノサ
イドRb1、Rb2、Rc、Rdが得られる。
このようにして得られる新規のサポニン物質
（）は細胞賦活作用を有する。そしてこれらの
物質は医薬そして用いる場合には、これらの混合
物を用いてもよく、又は個々のサポニン物質を有
効成分そして使用することができる。
次にこの発明を実施例によつて説明する。
人参からマロニル−ギンセノサイドRb1，Rb2，
Rc，Rdの抽出単離
実施例 １
人参（長野県産白参，125Kg，粉末）を80％含
水メタノール（３）と25℃で５時間、撹拌す
る。過してメタノール抽出液を得、残渣に新た
に80％含水メタノール（３）を加え、同様の抽
出操作を計５回行う。得られたメタノール抽出液
を合し、減圧下溶媒留去後、エーテルと水に分配
抽出する。エーテル移行部および水移行部をそれ
ぞれ減圧下溶媒留去して、エーテル移行部エキス
（6.7ｇ），水移行部エキス（282ｇ）を得る。
水移行部エキス（282ｇ）を逆相シリカゲルカ
ラムクロマトグラフイー〔担体：ボンダパツク
C18（ウオーターズ社製）100ｇ；溶出溶媒：メタ
ノール−水（１：３〜３：１）〕で分離し、人参
オリゴ配糖体混合物（77.6ｇ）を得た。
人参オリゴ配糖体混合物（77.6ｇ）を逆相シリ
カゲルカラムクロマトグラフイー〔ボンダパツク
C18，250ｇ；メタノール−水（１：２〜２：１）〕
で分画し、分画１（31.3ｇ），分画２（23.5ｇ）お
よび分画３（18.1ｇ）を得た。
分画２（23.5ｇ）をシリカゲルカラムクロマト
グラフイー〔担体：シリカゲル60（メルク社製，
70〜230メツシユ）1.2Kg；溶出溶媒：クロロホル
ム−メタノール−水（65：35：10，下層）〕で分
離し、マロニル−ギンセノサイドRb1（10.23ｇ），
マロニル−ギンセノサイドRd（1.45ｇ）およびマ
ロニル−ギンセノサイドRb2，Rc混合物（9.5ｇ）
を得た。マロニル−ギンセノサイドRb2、Rc混合
物（9.5ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフ
イー〔シリカゲル60（70〜230メツシユ）500ｇ；
ｎ−ブタノール−酢酸エチル−メタノール−水
（４：２：１：１）〕で分離し、マロニル−ギンセ
ノサイドRb2（5.10ｇ）およびマロニル−ギンセノ
サイドRc（3.81ｇ）を得た。
なお、分画１（31.1ｇ）からは、同様のシリカ
ゲルカラムクロマトグラフイー（クロロホルム−
メタノール−水およびｎ−ブタノール−酢酸エチ
ル−メタノール−水）を行い、ギンセノサイド
Ro（3.29ｇ），Re（11.56ｇ），Rf（2.74ｇ）および
Rg1（10.85ｇ）を得た。
分画３（18.1ｇ）からは、同様にしてギンセノ
サイドRb1（7.65ｇ）、Rb2（3.80ｇ），Rc（2.67ｇ），
Rd（1.16ｇ）を得た。
実施例 ２
長野県産白参（10Kg，粉末）をメタノール（70
）で３時間加熱還流する。過してメタノール
抽出液を得、残渣に新たにメタノール（70）を
加え、同様の抽出操作を計３回行う。メタノール
抽出液を合し、減圧下溶媒留去し、メタノール抽
出エキス（1.45Kg）を得る。メタノール抽出エキ
ス（1.45Kg）を水（４）に懸濁し、エーテル抽
出ついでｎ−ブタノール抽出する。エーテル抽出
液，ｎ−ブタノール抽出液および水移行部につい
て、それぞれ減圧下溶媒留去しエーテル抽出エキ
ス（210ｇ），ｎ−ブタノール抽出エキス（430
ｇ），水移行部エキス（810ｇ）を得た。
水移行部エキス（103ｇ）を逆相シリカゲルカ
ラムクロマトグラフイー〔ボンダパツクC18200
ｇ，メタノール−水（１：３〜３：１）〕ついで
シリカゲルカラムクロマトグラフイー〔シリカゲ
ル60（70〜230メツシユ）500ｇ；クロロホルム−
メタノール−水（65：35：10，下層）〕で分離し、
ギンセノサイドRo（2.68ｇ），マロニル−ギンセ
ノサイドRb1（7.82ｇ），マロニル−ギンセノサイ
ドRd（0.88ｇ）およびマロニル−ギンセノサイド
Rb2、Rc混合物（7.1ｇ）を得た。
マロニル−ギンセノサイドRb2，Rc混合物
（7.1ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフイー
〔シリカゲル60（70〜230メツシユ）500ｇ，ｎ−ブ
タノール−酢酸エチル−メタノール−水（４：
２：１：１）〕で分離して、マロニル−ギンセノ
サイドRb2（3.78ｇ）およびマロニル−ギンセノサ
イドRc（2.64ｇ）を得た。
なお、マロニル−ギンセノサイドRb1，Rb2，
Rc，Rdは薄層クロマトグラフイーによる比較か
ら、長野県産白参のほか、韓国産白参、長野県産
および中国産生干し人参、および島根県産オタネ
ニンジン（Panax ginseng C.A.MEYER）の新
鮮根中にも同様に存在することが認められた。
なお、マロニル−ギンセノサイドRb1、Rb2、
Rc及びRdの特性は次のとおりである。
マロニル−ギンセノサイド Rb1
１） mp 150〜152℃である。
２） 〔α〕23 D＋10.2゜（ｃ＝2.13，メタノール）の
旋光性を有する。
３） C57H94O26・3H2Oの分子組成を有する。
４） 赤外線吸収スペクトル（KBr，cm-1）は
3489（ブロード），2925，1730，1071（ブロード）
に特有の吸収極大を有す。
５） 210nmより長波長には紫外線吸収を示さな
い。
６） 二次イオン質量分析スペクトル（SIMS，
キセノン陽イオン，グリセロール マトリツク
ス）はｍ／ｚ 1217に分子イオンにナトリウム
の付加したピークが認められる。
７） 臭いはなく、無色の微細結晶（エタノール
から結晶化）である。
８） メタノール，水，ピリジン，ジメチルスル
ホキサイド，エタノールに可溶、クロロホル
ム，酢酸エチル，アセトン，エーテル，四塩化
炭素，ベンゼン，ヘキサンに不溶である。
９） 薄層クロマトグラフイー〔TLC，担体：
プレコートシリカゲル60 F254プレート，0.25
mm（メルク社製）；展開溶媒：ａ）クロロホル
ム−メタノール−水（６：４：１），ｂ）ｎ−
ブタノール−酢酸−水（４：１：５，上層）〕
においてRf値ａ）では0.30，ｂ）では0.20を示
す。
TLC上１％硫酸セリウム−10％硫酸水溶液
を噴霧し、加熱すると赤褐色を呈する。
マロニル−ギンセノサイド Rb2
１） mp 148〜150℃である。
２） 〔α〕23 D＋11.5゜（ｃ＝1.32，メタノール）の
旋光性を有する。
３） C56H92O25・2H2Oの分子組成を有する。
４） 赤外線吸収スペクトル（KBr，cm-1）は
3381（ブロード），2928，1730，1067（ブロード）
に特有の吸収極大を有す。
５） 210nmより長波長には紫外線吸収を示さな
い。
６） 二次イオン質量分析スペクトル（SIMS，
キセノン陽イオン，グリセロール マトリツク
ス）はｍ／ｚ 1187に分子イオンにナトリウム
の付加したピークが認められる。
７） 臭いはなく、無色の微細結晶（エタノール
から結晶化）である。
８） メタノール，水，ピリジン，ジメチルスル
ホキサイド，エタノールに可溶、クロロホル
ム，酢酸エチル，アセトン，エーテル，四塩化
炭素，ベンゼン，ヘキサンに不溶である。
９） 薄層クロマトグラフイー〔TLC，担体：
プレコートシリカゲル60 F254プレート，0.25
mm（メルク社製）；展開溶媒：ａ）クロロホル
ム−メタノール−水（６：４：１），ｂ）ｎ−
ブタノール−酢酸−水（４：１：５，上層）〕
においてRf値ａ）では0.35，ｂ）では0.20を示
す。
TLC上１％硫酸セリウム−10％硫酸水溶液
を噴霧し、加熱すると赤褐色を呈する。
マロニル−ギンセノサイド Rc
１） mp 150〜152℃である。
２） 〔α〕23 D＋1.7゜（ｃ＝1.28，メタノール）の
旋光性を有する。
３） C56H92O25・H2Oの分子組成を有する。
４） 赤外線吸収スペクトル（KBr，cm-1）は
3381（ブロード），2934，1733，1071（ブロード）
に特有の吸収極大を有す。
５） 210nmより長波長には紫外線吸収を示さな
い。
６） 二次イオン質量分析スペクトル（SIMS，
キセノン陽イオン，グリセロール マトリツク
ス）はｍ／ｚ 1187に分子イオンにナトリウム
の付加したピークが認められる。
７） 臭いはなく、無色の微細結晶（エタノール
から結晶化）である。
８） メタノール，水，ピリジン，ジメチルスル
ホキサイド，エタノールに可溶、クロロホル
ム，酢酸エチル，アセトン，エーテル，四塩化
炭素，ベンゼン，ヘキサンに不溶である。
９） 薄層クロマトグラフイー〔TLC，担体：
プレコートシリカゲル60 F254プレート，0.25
mm（メルク社製）；展開溶媒：ａ）クロロホル
ム−メタノール−水（６：４：１），ｂ）ｎ−
ブタノール−酢酸−水（４：１：５，上層）に
おいてRf値ａ）で0.35，ｂ）で0.30を示す。
TLC上１％硫酸セリウム−10％硫酸水溶液
を噴霧し、加熱すると赤褐色を呈する。
マロニル−ギンセノサイド Rd
１） mp 158〜161℃である。
２） 〔α〕23 D＋16.4゜（ｃ＝0.50，メタノール）の
旋光性を有する。
３） C51H84O21・2H2Oの分子組成を有する。
４） 赤外線吸収スペクトル（KBr，cm-1）は
3363（ブロード），2925，1738，1074（ブロード）
に特有の吸収極大を有す。
５） 210nmより長波長には紫外線吸収を示さな
い。
６） 二次イオン質量分析スペクトル（SIMS，
キセノン陽イオン，グリセロール マトリツク
ス）はｍ／ｚ 1055に分子イオンにナトリウム
の付加したピークが認められる。
７） 臭いはなく、無色の微細結晶（エタノール
から結晶化）である。
８） メタノール，水，ピリジン，ジメチルスル
ホキサイド，エタノールに可溶、クロロホル
ム，酢酸エチル，アセトン，エーテル，四塩化
炭素，ベンゼン，ヘキサンに不溶である。
９） 薄層クロマトグラフイー〔TLC，担体：
プレコートシリカゲル60 F254プレート，0.25
mm（メルク社製）；展開溶媒：ａ）クロロホル
ム−メタノール−水（６：４：１），ｂ）ｎ−
ブタノール−酢酸−水（４：１：５，上層）〕
においてRf値ａ）では0.45，ｂ）で0.35を示
す。
TLC上１％硫酸セリウム−10％硫酸水溶液
を噴霧し、加熱すると赤褐色を呈する。
参考例 １
マロニル−ギンセノサイド Rb1の化学構造の
検討（各化合物は後記の式（）級び（）で
表される）
マロニル−ギンセノサイドRb1（１）をアルカ
リ加水分解すると、ギンセノサイドRb1およびマ
ロン酸が得られる。１をジアゾメタンでメチル化
すると、マロニル−ギンセノサイドRb1メチルエ
ステル（1a）〔mp 178〜182℃（エタノールから
結晶化，無色微細結晶），〔α〕23 D＋9.8゜（ｃ＝0.86
，
メタノール），C58H96O26・3H2O，赤外線吸収ス
ペクトル（KBr，cm-1）：3402，2926，1737，
1072〕が得られる。
1aをβ−グリコシダーゼ〔アーモンドから分
離（シグマ社製）〕で酵素分解すると、マロニル
−ギンセノサイドRdメチルエステル（4a）〔mp
182〜183℃（エタノールから結晶化，無色微細結
晶），〔α〕23 D＋20.8゜（ｃ＝1.89，メタノール），
C52H86O21・2H2O，赤外線吸収スペクトル
（KBr，cm-1）：3390，2933，1744，1077〕が得ら
れる。4aをアルカリ加水分解するとギンセノサ
イドRdおよびマロン酸が得られる。
また、1aを40％酢酸水溶液と75℃、３時間加
熱すると、マロニル−ギンセノサイドRg3メチル
エステル〔5a，20（Ｒ，Ｓ）混合物〕が得られ
た。5aをアルカリ加水分解すると、ギンセノサ
イドRg3〔20（Ｒ，Ｓ）混合物〕およびマロン酸が
得られる。
以上の検討の結果および1a，4a，5aの炭素13
核磁気共鳴スペクトル等の物理データの考察から
１はギンセノサイドRb1の３位に結合したオリゴ
糖〔β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−
Ｄ−グルコピラノシル〕における一級水酸基のい
ずれかに、マロン酸の結合した構造を有すること
が判明した。
5aにおける１個の一級水酸基をｐ−アニシル
クロロジフエニルメタン−ピリジンで処理し5b
に導く。5bをアルカリ加水分解して脱マロニル
化後、ヨウ化メチル−ジメチルスルホキサイド−
水素化ナトリウムでメチル化して5cを得る。5cを
９％塩化水素−乾燥メタノールでメタノリシスす
ると、メチル化糖として、メチル２，３，４，６
−テトラ−Ｏ−メチルグルコピラノサイドおよび
メチル−３，４−ジ−Ｏ−メチルグルコピラノサ
イドが検出同定されたことから、5a，5b，5cに
おけるマロニル基は6″位であることが判明した。
以上、得られた知見を総合することによつて、
マロニル−ギンセノサイドRb1の化学構造は１式
で現わされる。
参考例 ２
マロニル−ギンセノサイド Rb2，Rc及びRd
の化学構造の検討
マロニル−ギンセノサイドRb2（２）をアルカ
リ加水分解すると、ギンセノサイドRb2およびマ
ロン酸が得られる。２をジアゾメタンでメチル化
すると、マロニル−ギンセノサイドRb2メチルエ
ステル（2a）〔mp 179〜182℃，（エタノールから
結晶化，無色微細結晶），〔α〕23 D＋11.2゜（ｃ＝
1.59，メタノール），C57H94O25・2H2O，赤外線
吸収スペクトル（KBr，cm-1）：3382，2940，
1739 1074〕が得られた。また2aを酢酸部分加水
分解すると、マロニル−ギンセノサイドRg3メチ
ルエステル（5a）〔20（Ｒ，Ｓ）混合物〕が得ら
れることおよび2aの炭素13核磁気共鳴スペクト
ル等の物理データの考察から、マロニル−ギンセ
ノサイドRb2は２式で現わされることが判明し
た。
マロニル−ギンセノサイドRc（３）をアルカリ
加水分解すると、ギンセノサイドRcおよびマロ
ン酸が得られる。３をジアゾメタンでメチル化す
ると、マロニル−ギンセノサイドRcメチルエス
テル（3a）〔mp 15〜18℃，（エタノールから結晶
化，無水微細結晶），〔α〕23 D＋1.6゜（ｃ＝1.90，メ
タノール），C57H94O25・2H2O，赤外線吸収スペ
クトル（KBr，cm-1）：3392，2945，1736，1071〕
が得られた。3aを酢酸部分加水分解すると、マ
ロニル−ギンセノサイドRg3メチルエステル
（5a）〔20（Ｒ，Ｓ）混合物〕が得られることおよ
び3aの炭素13核磁気共鳴スペクトル等の物理デ
ータの考察から、マロニル−ギンセノサイドRc
の化学構造は３式で現わされることが判明した。
マロニル−ギンセノサイドRd（４）をジアゾメ
タンでメチル化すると、マロニル−ギンセノサイ
ドRb1メチルエステル（1a）を酵素分解して得ら
れ、すでに構造の明らかとなつている4aが得ら
れたことから、その化学構造が判明した。
なお上記参考例に記載の化合物1a，2a，3a，
4a，5a，5b及び5cは下記式（）及び（）で
表される。
１：R2＝β−Ｄ−グルコピラノシル，R3＝Ｈ
1a：R2＝β−Ｄ−グルコピラノシル，R3＝CH3
２：R2＝α−Ｌ−アラビノピラノシル，R3＝Ｈ
2a：R2＝α−Ｌ−アラビノピラノシル，R3
＝CH3
３：R2＝α−Ｌ−アラビノフラノシル，R3＝Ｈ
3a：R2＝α−Ｌ−アラビノフラノシル，R3
＝CH3
４：R2＝R3＝Ｈ，4a：R2＝Ｈ，R3＝CH3
5a：R4＝R5＝Ｈ，
This invention relates to a novel saponin component isolated from medicinal ginseng and a method for isolating the same. Among medicinal ginseng, Panax ginseng (Panax ginseng CAMeyer), which belongs to the Araliaceae family, is known as Panax ginseng and has been used as a tonic, tonic, anti-inflammatory, diuretic, and antidiabetic drug since ancient times. This is widely known. Recently, research has been carried out on the components contained in medicinal ginseng, and ginsenosides Rb 1 , Rb 2 , Rb 3 ,
Rc, Rd, Re, Rf, Rg 1 , Rg 2 , Rh 1 and Rh 2 and ginzenoside 20-gluco-Rf are known (Chem Pharm. Bull. 22 (2), 421-428
(1974) and Pharmaceutical Journal 94(2), 252-260 (1794)
reference). The conventionally known ginsenosides as mentioned above are
It is obtained by extracting the raw material with water, lower alcohols, or water-containing lower alcohols, partitioning the extract with water and n-butanol, and isolating and purifying the n-butanol layer. On the other hand, the aqueous layer was being disposed of without being examined in any way. The inventors of this invention focused on this conventionally discarded aqueous layer and found that it contained a novel saponin substance that was not described in any literature and was particularly easily soluble in water. After confirming the structure, this invention was made. The novel saponins according to the present invention can be represented by the following formula (). i.e. the expression (): [In the formula, R 1 is β-D-glucopyranosyl (1→
6) -β-D-glucopyranosyl group, α-L-arabinopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosyl group, α-L-arabinofuranosyl (1→
6) -β-D-glucopyranosyl group or β-D-
glucopyranosyl group] In the above formula, the name of the compound in which R 1 is β-D-glucopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosyl group is 3-O-[6-O-malonyl-β-D
-Glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-20-O-[β-D-glucopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranosyl]20
(S)-Protopanaxadiol, (hereinafter referred to as malonyl-ginzenoside Rb 1 ); The name of the compound in which R 1 is α-L-arabinopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosyl group is: 3-O-[6-O
-malonyl-β-D-glucopyranosyl (1→
2) -β-D-glucopyranosyl]-20-O-[α
-L-arabinopyranosyl (1→6)-β-D-
glucopyranosyl] 20(S)-protopanaxadiol, (hereinafter referred to as malonyl-ginzenoside Rb 2 ); R 1 is α-L-arabinofuranosyl (1→
6) The name of the compound with -β-D-glucopyranosyl group is 3-O-[6-O-malonyl-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-20-O-[α -L-arabinofuranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosyl]20(S)-
Protopanaxadiol (hereinafter referred to as malonyl-ginzenoside Rc); and the name of the compound in which R 1 is β-D-glucopyranosyl group is 3-O-[6-O-
Malonyl-β-D-glucopyranosyl (1→2)
-β-D-glucopyranosyl]-20-O-β-D
-Glucopyranosyl 20(S)-protopanaxadiol (hereinafter referred to as malonyl-ginzenoside Rd). Panax ginseng is the most preferred carrot containing the novel saponins of the present invention. Other plants used as raw materials include:
Panax ginseng and related plants include Panax ginseng (Panax japonicus, C.A. Meyer, Panax japonicus CAMEYER), American ginseng (Panax quinquefolium, LINNE), Panax ginseng (Panax pseudo ginseng, Panax pseudo) -ginseng WALICH or Panax notoginseng barkill,
Panax notoginseng BURKILL). The novel saponin substance of the present invention can be obtained by extracting, separating, and purifying the above-mentioned carrot roots, aerial parts, or dried products thereof, or by culturing the above-mentioned carrot root sections and then extracting, separating, and purifying them. You can get it. Further, specific raw materials include white ginseng, red ginseng, etc., which are crude drugs of Panax ginseng, and among these, white ginseng is particularly preferred. The novel saponin substance of this invention can be obtained using the above-mentioned raw materials in the following manner. In other words, the raw material carrots are extracted without being defatted or after being defatted using a normal fat-soluble organic solvent, and then extracted with water, lower alcohols such as methanol, ethanol, and propyl alcohol, or hydrous alcohols containing these lower alcohols. . This extraction is preferably carried out at or under heating. The obtained extract is evaporated and concentrated to obtain an extract. This extracted extract is then partitioned and extracted with water and aliphatic ether and/or aliphatic intermediate alcohol. Ethyl ether is used as the aliphatic ether, and n is used as the aliphatic intermediate alcohol.
-Butanol, n-pentyl alcohol, etc. are used. The aqueous layer obtained by the above partition extraction is subjected to silica gel column chromatography to separate and purify it as described below to obtain the saponin of the present invention. That is, the aqueous layer is subjected to reverse phase silica gel column chromatography using silica gel such as Bondapak C18 and eluting with a methanol/water mixed solvent. This process may be performed multiple times. and 1 to 3 using thin layer chromatography (TLC) as an indicator.
fractionate into and fraction 2, for example on silica gel.
Malonyl-ginzenoside Rb 1 and malonyl- Ginsenoside Rb 2 and malonyl
A mixture of ginsenoside Rb 2 and Rc is obtained. Next, the mixture of malonyl-ginzenoside Rb 2 and Rc is further eluted with n-butanol-ethyl acetate-methanol-water (4:2:1:1) using, for example, silica gel 60 (Make Co., Ltd., 70-230 mesh). Malonylginzenoside Rb 2 and Rc are separated by phase column chromatography. Fraction 1 was analyzed using the same normal phase silica gel column chromatography (chloroform-methanol-
water and n-butanol-ethyl acetate-methanol-water) known ginsenoside Ro,
Re, Rf and Rg 1 are obtained. Also, from fraction 3, known ginsenosides Rb 1 , Rb 2 , Rc, and Rd are obtained in the same manner. The novel saponin substance () obtained in this way has a cell activating effect. These substances can then be used as medicaments and, when used, mixtures of these substances can be used, or individual saponin substances can be used as active ingredients. Next, the present invention will be explained with reference to examples. Malonyl-ginsenoside Rb 1 , Rb 2 , from carrot
Example of Extraction and Isolation of Rc and Rd 1 Ginseng (white ginseng from Nagano Prefecture, 125 kg, powder) is stirred with 80% aqueous methanol (3) at 25°C for 5 hours. A methanol extract is obtained by filtration, 80% water-containing methanol (3) is newly added to the residue, and the same extraction operation is performed a total of 5 times. The resulting methanol extracts are combined, the solvent is distilled off under reduced pressure, and the mixture is partitioned and extracted between ether and water. The solvents of the ether transition area and the water transition area were distilled off under reduced pressure to obtain an ether transition area extract (6.7 g) and a water transition area extract (282 g). Water transition extract (282g) was subjected to reverse phase silica gel column chromatography [Carrier: Bondapack
C 18 (manufactured by Waters) 100 g; elution solvent: methanol-water (1:3 to 3:1)] to obtain a ginseng oligoglycoside mixture (77.6 g). Carrot oligoglycoside mixture (77.6g) was subjected to reverse phase silica gel column chromatography [Bondapack
C 18 , 250g; methanol-water (1:2-2:1)]
Fraction 1 (31.3 g), fraction 2 (23.5 g) and fraction 3 (18.1 g) were obtained. Fraction 2 (23.5 g) was subjected to silica gel column chromatography [Carrier: Silica gel 60 (manufactured by Merck,
70-230 mesh) 1.2Kg; Elution solvent: chloroform-methanol-water (65:35:10, lower layer)] to separate malonyl-ginsenoside Rb 1 (10.23g),
Malonyl-ginsenoside Rd (1.45 g) and malonyl-ginsenoside Rb 2 , Rc mixture (9.5 g)
I got it. Malonyl-ginsenoside Rb 2 and Rc mixture (9.5 g) was subjected to silica gel column chromatography [500 g of silica gel 60 (70-230 mesh);
n-butanol-ethyl acetate-methanol-water (4:2:1:1)] to obtain malonyl-ginsenoside Rb 2 (5.10 g) and malonyl-ginsenoside Rc (3.81 g). In addition, from fraction 1 (31.1 g), similar silica gel column chromatography (chloroform-
methanol-water and n-butanol-ethyl acetate-methanol-water) to extract ginsenoside.
Ro (3.29g), Re (11.56g), Rf (2.74g) and
Rg 1 (10.85g) was obtained. From fraction 3 (18.1 g), ginsenoside Rb 1 (7.65 g), Rb 2 (3.80 g), Rc (2.67 g),
Rd (1.16g) was obtained. Example 2 White ginseng (10Kg, powder) from Nagano Prefecture was mixed with methanol (70Kg, powder).
) for 3 hours under reflux. A methanol extract is obtained by filtration, methanol (70) is added to the residue, and the same extraction operation is performed three times in total. Combine the methanol extracts and evaporate the solvent under reduced pressure to obtain a methanol extract (1.45Kg). The methanol extract (1.45 kg) was suspended in water (4), extracted with ether, and then extracted with n-butanol. For the ether extract, n-butanol extract, and water transfer part, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the ether extract (210 g) and n-butanol extract (430 g) were extracted.
g), water transition part extract (810 g) was obtained. Water transition extract (103 g) was subjected to reverse phase silica gel column chromatography [Bondapak C 18 200
g, methanol-water (1:3-3:1)] and then silica gel column chromatography [500 g of silica gel 60 (70-230 mesh); chloroform-
Separate with methanol-water (65:35:10, lower layer),
Ginsenoside Ro (2.68g), Malonyl-ginsenoside Rb 1 (7.82g), Malonyl-ginsenoside Rd (0.88g) and Malonyl-ginsenoside
A mixture of Rb 2 and Rc (7.1 g) was obtained. A mixture of malonyl-ginsenoside Rb 2 and Rc (7.1 g) was subjected to silica gel column chromatography [500 g of silica gel 60 (70-230 mesh), n-butanol-ethyl acetate-methanol-water (4:
2:1:1)] to obtain malonyl-ginsenoside Rb 2 (3.78 g) and malonyl-ginsenoside Rc (2.64 g). In addition, malonyl-ginsenoside Rb 1 , Rb 2 ,
Comparison using thin-layer chromatography revealed that Rc and Rd were found in white ginseng from Nagano, Korean white ginseng, dried ginseng from Nagano and China, and fresh roots of Panax ginseng (Panax ginseng CAMEYER) from Shimane Prefecture. was also found to exist. In addition, malonyl-ginsenoside Rb 1 , Rb 2 ,
The characteristics of Rc and Rd are as follows. Malonyl-ginsenoside Rb 1 1) mp 150-152°C. 2) It has an optical rotation of [α] 23 D +10.2° (c=2.13, methanol). 3) It has a molecular composition of C57H94O26・3H2O . 4) The infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ) is
3489 (broad), 2925, 1730, 1071 (broad)
It has a unique absorption maximum. 5) No UV absorption at wavelengths longer than 210nm. 6) Secondary ion mass spectrometry spectrum (SIMS,
For xenon cation, glycerol matrix), a peak with sodium added to the molecular ion is observed at m/z 1217. 7) It has no odor and is colorless fine crystals (crystallized from ethanol). 8) Soluble in methanol, water, pyridine, dimethyl sulfoxide, and ethanol, and insoluble in chloroform, ethyl acetate, acetone, ether, carbon tetrachloride, benzene, and hexane. 9) Thin layer chromatography [TLC, carrier:
Pre-coated silica gel 60 F 254 plate, 0.25
mm (manufactured by Merck); developing solvent: a) chloroform-methanol-water (6:4:1), b) n-
Butanol-acetic acid-water (4:1:5, upper layer)]
The Rf value a) is 0.30 and b) is 0.20. When a 1% cerium sulfate-10% sulfuric acid aqueous solution is sprayed on the TLC and heated, a reddish-brown color appears. Malonyl-ginsenoside Rb 2 1) mp 148-150°C. 2) It has an optical rotation of [α] 23 D +11.5° (c=1.32, methanol). 3) It has a molecular composition of C56H92O25・2H2O . 4) The infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ) is
3381 (broad), 2928, 1730, 1067 (broad)
It has a unique absorption maximum. 5) No UV absorption at wavelengths longer than 210nm. 6) Secondary ion mass spectrometry spectrum (SIMS,
For xenon cation, glycerol matrix), a peak with sodium added to the molecular ion is observed at m/z 1187. 7) It has no odor and is colorless fine crystals (crystallized from ethanol). 8) Soluble in methanol, water, pyridine, dimethyl sulfoxide, and ethanol, and insoluble in chloroform, ethyl acetate, acetone, ether, carbon tetrachloride, benzene, and hexane. 9) Thin layer chromatography [TLC, carrier:
Pre-coated silica gel 60 F 254 plate, 0.25
mm (manufactured by Merck); developing solvent: a) chloroform-methanol-water (6:4:1), b) n-
Butanol-acetic acid-water (4:1:5, upper layer)]
The Rf value a) is 0.35 and b) is 0.20. When a 1% cerium sulfate-10% sulfuric acid aqueous solution is sprayed on the TLC and heated, a reddish-brown color appears. Malonyl-ginsenoside Rc 1) mp 150-152°C. 2) It has an optical rotation of [α] 23 D +1.7° (c=1.28, methanol). 3) It has a molecular composition of C56H92O25・H2O . 4) The infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ) is
3381 (broad), 2934, 1733, 1071 (broad)
It has a unique absorption maximum. 5) It does not exhibit ultraviolet absorption at wavelengths longer than 210 nm. 6) Secondary ion mass spectrometry spectrum (SIMS,
For xenon cation, glycerol matrix), a peak with sodium added to the molecular ion is observed at m/z 1187. 7) It has no odor and is colorless fine crystals (crystallized from ethanol). 8) Soluble in methanol, water, pyridine, dimethyl sulfoxide, and ethanol, and insoluble in chloroform, ethyl acetate, acetone, ether, carbon tetrachloride, benzene, and hexane. 9) Thin layer chromatography [TLC, carrier:
Pre-coated silica gel 60 F 254 plate, 0.25
mm (manufactured by Merck); developing solvent: a) chloroform-methanol-water (6:4:1), b) n-
In butanol-acetic acid-water (4:1:5, upper layer), Rf values a) are 0.35 and b) are 0.30. When a 1% cerium sulfate-10% sulfuric acid aqueous solution is sprayed on the TLC and heated, a reddish-brown color appears. Malonyl-ginsenoside Rd 1) mp 158-161°C. 2) It has an optical rotation of [α] 23 D +16.4° (c=0.50, methanol). 3) It has a molecular composition of C51H84O21・2H2O . 4) The infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ) is
3363 (broad), 2925, 1738, 1074 (broad)
It has a unique absorption maximum. 5) No UV absorption at wavelengths longer than 210nm. 6) Secondary ion mass spectrometry spectrum (SIMS,
For xenon cation, glycerol matrix), a peak with sodium added to the molecular ion is observed at m/z 1055. 7) It has no odor and is colorless fine crystals (crystallized from ethanol). 8) Soluble in methanol, water, pyridine, dimethyl sulfoxide, and ethanol, insoluble in chloroform, ethyl acetate, acetone, ether, carbon tetrachloride, benzene, and hexane. 9) Thin layer chromatography [TLC, carrier:
Pre-coated silica gel 60 F 254 plate, 0.25
mm (manufactured by Merck); developing solvent: a) chloroform-methanol-water (6:4:1), b) n-
Butanol-acetic acid-water (4:1:5, upper layer)]
The Rf value a) is 0.45, and b) is 0.35. When a 1% cerium sulfate-10% sulfuric acid aqueous solution is sprayed on the TLC and heated, a reddish-brown color appears. Reference Example 1 Examination of the chemical structure of malonyl-ginsenoside Rb 1 (Each compound is represented by the following formulas () and ()) When malonyl-ginsenoside Rb 1 (1) is hydrolyzed with alkali, ginsenoside Rb 1 and malon are formed. Acid is obtained. When 1 is methylated with diazomethane, malonyl-ginsenoside Rb 1 methyl ester (1a) [mp 178-182°C (crystallized from ethanol, colorless fine crystals), [α] 23 D +9.8° (c = 0.86
，
methanol), C58H96O26・3H2O , infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ): 3402 , 2926, 1737,
1072] is obtained. When 1a is enzymatically decomposed with β-glycosidase [separated from almond (manufactured by Sigma)], malonyl-ginsenoside Rd methyl ester (4a) [mp
182-183°C (crystallized from ethanol, colorless fine crystals), [α] 23 D +20.8° (c = 1.89, methanol),
C 52 H 86 O 21 ·2H 2 O, infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ): 3390, 2933, 1744, 1077] is obtained. Alkaline hydrolysis of 4a yields ginsenoside Rd and malonic acid. Further, when 1a was heated with a 40% acetic acid aqueous solution at 75°C for 3 hours, malonyl-ginsenoside Rg 3 methyl ester [5a, 20 (R, S) mixture] was obtained. Alkaline hydrolysis of 5a yields ginsenoside Rg 3 [20(R,S) mixture] and malonic acid. As a result of the above studies and carbon 13 of 1a, 4a, and 5a
From consideration of physical data such as nuclear magnetic resonance spectra, 1 is an oligosaccharide [β-D-glucopyranosyl (1→2)-β-] bound to the 3-position of ginsenoside Rb 1 .
D-glucopyranosyl] was found to have a structure in which malonic acid was bound to any of the primary hydroxyl groups. One primary hydroxyl group in 5a was treated with p-anisylchlorodiphenylmethane-pyridine to form 5b.
lead to. After demalonylation by alkaline hydrolysis of 5b, methyl iodide-dimethyl sulfoxide-
Methylation with sodium hydride gives 5c. Methanolysis of 5c with 9% hydrogen chloride-dry methanol produces methyl 2,3,4,6 as methylated sugar.
-Tetra-O-methylglucopyranoside and methyl-3,4-di-O-methylglucopyranoside were detected and identified, indicating that the malonyl group in 5a, 5b, and 5c is at the 6″ position. By integrating the knowledge obtained above,
The chemical structure of malonyl-ginsenoside Rb 1 is represented by formula 1. Reference example 2 Malonyl-ginsenoside Rb 2 , Rc and Rd
Examination of the chemical structure of malonyl-ginsenoside Rb 2 (2) is alkaline hydrolyzed to yield ginsenoside Rb 2 and malonic acid. When 2 is methylated with diazomethane, malonyl-ginsenoside Rb 2 methyl ester (2a) [mp 179-182°C, (crystallized from ethanol, colorless fine crystals), [α] 23 D +11.2° (c=
1.59, methanol) , C57H94O25・2H2O , infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ): 3382, 2940,
1739 1074] were obtained. In addition, from the fact that malonyl-ginsenoside Rg 3 methyl ester (5a) [20 (R, S) mixture] is obtained when 2a is partially hydrolyzed with acetic acid, and from the consideration of physical data such as the carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum of 2a, malonyl - It was found that ginsenoside Rb 2 is expressed by two formulas. Alkaline hydrolysis of malonyl-ginsenoside Rc (3) yields ginsenoside Rc and malonic acid. When 3 is methylated with diazomethane, malonyl-ginsenoside Rc methyl ester (3a) [mp 15-18°C, (crystallized from ethanol, anhydrous microcrystals), [α] 23 D +1.6° (c = 1.90, methanol ), C57H94O25・2H2O , infrared absorption spectrum (KBr, cm -1 ): 3392 , 2945 , 1736, 1071]
was gotten. From the fact that malonyl-ginsenoside Rg 3 methyl ester (5a) [20 (R,S) mixture] is obtained when 3a is partially hydrolyzed with acetic acid, and from consideration of physical data such as the carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum of 3a, malonyl-ginsenoside Rg 3 methyl ester (5a) [20 (R, S) mixture] is obtained. Ginsenoside Rc
It was found that the chemical structure of is expressed by the following three formulas. When malonyl-ginsenoside Rd (4) was methylated with diazomethane, 4a, which was obtained by enzymatic decomposition of malonyl-ginsenoside Rb 1 methyl ester (1a) and whose structure has already been clarified, was obtained. The structure has been revealed. In addition, compounds 1a, 2a, 3a, and
4a, 5a, 5b and 5c are represented by the following formulas () and (). 1: R 2 = β-D-glucopyranosyl, R 3 = H 1a: R 2 = β-D-glucopyranosyl, R 3 = CH 3 2: R 2 = α-L-arabinopyranosyl, R 3 = H 2a: R 2 = α-L-arabinopyranosyl, R 3 = CH 3 3: R 2 = α-L-arabinofuranosyl, R 3 = H 3a: R 2 = α-L-arabinofurano Sil, R 3 = CH 3 4: R 2 = R 3 = H, 4a: R 2 = H, R 3 = CH 3 5a: R 4 = R 5 = H,
【式】
5b：R4＝MMTr，R5＝Ｈ，
[Formula] 5b: R 4 = MMTr, R 5 = H,
【式】 5c：R4＝MMTr，R5＝R6＝CH3. （モノメトキシトリチル基）[Formula] 5c: R 4 = MMTr, R 5 = R 6 = CH 3 . (monomethoxytrityl group)
Claims (1)
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、α−Ｌ−ア
ラビノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピ
ラノシル基、α−Ｌ−アラビノフラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基又はβ−Ｄ−
グルコピラノシル基〕 で表される化合物。 ２ オタネニンジン（パナツクス ギンゼング
シーエー メイヤー）又はその類縁植物の根部、
地上部、もしくはその乾燥物、又は根部切片の組
織培養物を脱脂しないか又は通常の脂溶性有機溶
媒を用いて脱脂後、水、低級アルコール類又は含
水低級アルコールで抽出し、得られた抽出物を水
と脂肪族エーテル及び／又は脂肪族中級アルコー
ルによつて分配抽出し、得られた水移行部を分離
精製処理に付して式（）： 〔式中R1はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、α−Ｌ−ア
ラビノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピ
ラノシル基、α−Ｌ−アラビノフラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基又はβ−Ｄ−
グルコピラノシル基〕 で表される化合物又はその混合物を得ることを特
徴とするサポニンの単離法。[Claims] 1 Formula (): [In the formula, R 1 is β-D-glucopyranosyl (1→
6) -β-D-glucopyranosyl group, α-L-arabinopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosyl group, α-L-arabinofuranosyl (1→
6) -β-D-glucopyranosyl group or β-D-
A compound represented by glucopyranosyl group. 2 Panax ginseng (Panax ginseng)
root of C.A. Meyer) or its related plants;
An extract obtained by extracting the above-ground part, its dried product, or a tissue culture of a root section without defatting, or after defatting using a normal fat-soluble organic solvent, with water, lower alcohols, or hydrous lower alcohols. is partitioned and extracted with water and aliphatic ether and/or aliphatic intermediate alcohol, and the resulting water transfer portion is subjected to separation and purification treatment to obtain the formula (): [In the formula, R 1 is β-D-glucopyranosyl (1→
6) -β-D-glucopyranosyl group, α-L-arabinopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosyl group, α-L-arabinofuranosyl (1→
6) -β-D-glucopyranosyl group or β-D-
glucopyranosyl group] A method for isolating saponin, characterized by obtaining a compound represented by the following or a mixture thereof.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58197950A JPS6089496A (en) | 1983-10-22 | 1983-10-22 | Novel saponin substance and method for isolating the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58197950A JPS6089496A (en) | 1983-10-22 | 1983-10-22 | Novel saponin substance and method for isolating the same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6089496A JPS6089496A (en) | 1985-05-20 |
| JPH0365359B2 true JPH0365359B2 (en) | 1991-10-11 |
Family
ID=16382997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58197950A Granted JPS6089496A (en) | 1983-10-22 | 1983-10-22 | Novel saponin substance and method for isolating the same |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6089496A (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6287790A (en) * | 1985-10-11 | 1987-04-22 | Nippon Denso Co Ltd | Heat exchanger |
| US20060198908A1 (en) * | 2003-08-18 | 2006-09-07 | Ko Sung K | Ginseng preparation using vinegar and process for thereof |
-
1983
- 1983-10-22 JP JP58197950A patent/JPS6089496A/en active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6089496A (en) | 1985-05-20 |
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