JPH03505087A - ハイブリッドペプチド及びその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ハイブリッドペプチド及びその使用方法玖紅鼠風り曵丑区皿工盗碧貝 本発明は、部分的にナショナル・インスティチュート・オブ・ヘルス、米国大衆 健康局からの研究認可ＨＬ−３３０１４の下での研究過程でなされたものである 。

及里り茸旦 本発明は、蛋白における活性部位の合成ペプチド同族体及びその使用に関するも のである。より詳細には本発明は、リセプタ部位、たとえば血小板上におけるフ ィブリノーゲンのためのリセプタ部位を有する蛋白の少なくとも２種の相互作用 部位に類似した部位を有するハイブリッド線状ペプチドに関するものである。

血小板と、たとえばフィブリノーゲンとのような血漿蛋白との間の相互作用が広 範に研究されている。別々の血小板リセプタ認識ドメイン若しくは相互作用部位 はフィブリノーゲンのγ鎖及びα鎖に存在している［Ｊ、ハビガー、Ｓ、チモン ス、Ｍ、クロツェビア、Ｄ、Ｄ、ストロング及びＲ，Ｆ。

トウーリトル、プロシーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエンス・ＵＳ Ａ、第７９巻、第２０６８頁（１９８２）参照］。

γ鎖における血小板リセプタ認識ドメインは残基４００〜４１１（γ４００〜４ １１）の間（位置し、α鏡面小板すセプタ認識ドメインは２つの部位（α９５〜 ９７及びα５７２〜５７５）に関連すると思われる。γ鎖（ＨＨＬＧＧＡＫＱＡ ＧＤＶ＞　にｃｌ−；ける配列は、α鎖における配列ＲＧＤに整列する共通領域 に対し相同でない。

残基α５１５〜５８４を包含する天然ヒトフィブリノーゲンα鎖断片と残基γ鎖 ３８５〜４１１を包、含するγ鎖断片とは、それぞれ独立して血小板におけるグ リコ蛋白フィブリノーグンリセプタとフィブリノーゲンとの間のＡＤＰ−若しく はスロンビンー誘発相互作用を阻止することができる。しかしながら、α血小板 リセプタ認識ドメインとγ血小板リセプタ認識ドメインとの間には構造上の差が 存在するため、機能的な交差特異性試験は行なわれていなかった。ここに示され るように、α鎖の合成ペプチド同族体はγ鎖結合を阻止することができ。

或いはその逆も成立する。血小板結合系、並びにその医薬用途における合成ペプ チド同族体の使用が本発明者等の出願に基づく米国特許第４，６６１，４７１号 、第４，６６６．８８４号及び第４、７０３．０３９号で検討されている。

止血性血小板血栓の形成及び血栓病巣の開始にはフィブリノーゲン、フィブリン 及びフォノ・ウィレブランド因子が重要である。これら血栓によりもたらされる 閉塞及び血栓病巣によりもたらされる損傷が、心臓病及び発作における主たる因 子で必る。既に形成された血餅を溶解ざぜる薬剤を開発することに多くの研究が 向けられているが、これら薬剤（たとえばス１−レプトキナーゼ及び組織プラス ミノーゲン活性化剤の使用に関する最近の報告参照）の多くは欠点を有する。血 餅を溶解される酵素法は心臓発作の後遺症を最小化させるのに役立つが、血小板 付着及び凝集を阻止する医薬製剤は心筋梗塞若しくは脳梗塞の原因となる血管の 初期閉塞を防止する。

或いは、血小板凝集又は血管に対する付着を促進する分子の製造及び使用は各種 の用途を有する。たとえば、血友病患者のような多くの患者は、遺伝子欠陥によ り或いは循環の際の過剰消費によりフィブリノーゲン又はフォノ・ウィレブラン ド因子を喪失することがおる。合成の血小板凝集若しくは付着促進分子は、血小 板血栓形成及び血管に対する血栓付着を促進して出血を止めると共に、これら患 者をその正常な生活に導くよう促進しうる。

したがって本発明の目的は、血小板におけるリセブタ部位と相互作用する少なく とも２種の異なる蛋白ドメインに類似したハイブリッド線状ペプチド同族体を提 供することにある。

本発明の他の目的は、付着性蛋白の相互作用ドメインのハイブリッド線状ペプチ ド同族体を用いることによりフィブリノーゲン、フォノ・ウイレブランド因子及 び他の付着性蛋白と血小板との間の相互作用を阻止する方法を提供することにあ る。

さらに本発明の目的は、フィブリノーゲン又は７オン・ウィレブランド因子にお ける少なくとも２種の相互作用ドメインのハイブリッド線状ペプチド同族体のマ ルチマーで形成された合成の凝集若しくは付着促進分子を提供することにある。

本発明のこれら及びその他の目的、並びに特徴は、以下の説明及び図面から明ら かとなろう。

発明の要点 本発明は、天然蛋白における相互作用部位に対し同族でおる相互作用部位を持っ たハイブリッド線状ペプチドを特徴とする。天然蛋白上のこれら相互作用部位は リセプタ認識部位、たとえば蛋白のための血小板リセブタ認識部位と反応する。

これら相互作用部位は天然蛋白において物理的に異なる。

特に本発明は、Ｘｌが蛋白の第１リセプタドメインのための蛋白における第１相 互作用部位の同族体であり、かつＸ２が第２リセプタドメインのための蛋白にお ける第２相互作用部位の同族体であるＸｌ−Ｘ２型のハイブリッド線状ペプチド を特徴とする。リセプタは、線状蛋白断片と反応するグリコ蛋白又はその他任意 の種類のリセプタとすることができる。

ドメイン又は相互作用部位は天然型の蛋白において相違する。

好適リセプタはフィブリノーゲン、フィブリン、フォノ・ウィレブランド因子又 は他の付着性蛋白のためのヒト血小板にお（ブるグリコ蛋白リセブタ部位である 。

フィブリノーゲンが好適蛋白であって、その部位は同族体の基礎を構成し、ｘｌ 及び×２は好ましくはそれぞれγ鎖及びα鎖における血小板のための相互作用部 位の同族体である。

したがって、Ｘｌ−Ｘ２の好適ハイブリッドペプチドはγ鎖からのそのアミノ末 端に近い血小板リセプタ認識ドメインの少なくとも１部と、α鎖からのそのカル ボキシル末端に近い血小板認識リセプタドメインの１部とを有する。或いは、こ れらドメインの配置は逆転することもできる。フィブリノーゲン−血小板同族体 系のための最も好適なＸ２若しくはカルボキシル末端部分ハＲＧ　Ｄ　Ｖ　、　 ＲＧ　Ｄ　Ｎ　、　ＲＧ　Ｄ　Ｆ、ＲＧＤＹ、ＲＧＤＳ、ＲＧＤＭ及びＲＧＤＣ よりなる群から選択されるテトラペプチドである。最も好適なＸ１部分は、配列 ＨＨＬ　Ｇ　Ｇ　Ａ　Ｋ　Ｑ　Ａ　Ｇ　Ｄ　Ｖ若しくはその置換同族体の活性部 分からなる２〜１３個の残基の線状ペプチド断片である。

アミノ酸を示す記号はペプチド化学における標準的なものであって、これらを第 工表に示す。

アミノ酸記号 アミノ酸　　　　　　　　　　記　号 アスパラギン酸　　　　　　　　Ｄ ＡＳｎ＋ＡＳｐ　　　　　　　　Ｂ グリシン　　　　　　　　　　　Ｇ 第１表（続き） アミノ酸　　　　　　　　　　記　号 ヒスチジン　　　　　　　　　　Ｈ メチオニン　　　　　　　　　　Ｍ トリプトファン　　　　　　　　Ｗ バリン　　　　　　　　　　　Ｖ ざらに本発明は、血小板と天然付着性蛋白、たとえばフィブリノーゲンとの相互 作用を主として凝集防止メカニズムとして阻止する方法を特徴とする。この方法 は、本発明のハイブリッド線状ペプチドを形成させ、このハイブーツ１〜ペプチ ドを血小板と反応させ、かつこれら血小板を付着性蛋白に露出する工程を有する 。ペプチドと血小板との予備培養又は予備反応、及び付着性蛋白に対するペプチ ドの露出はハイブリッドペプチドを血小板と相互作用させることにより、リセプ タ部位を埋めかつ付着性蛋白と血小板との相互作用を防止する。この種の手順を 用いてフィブリノーゲン、フィブリン、フォノ・ウィレブランド因子及びその他 の付着性蛋白と血小板との相互作用を阻止し、これにより止血性血栓形成及び血 管壁部に対する血小板の付着を阻止することができる。

ざらに本発明は、止血性血栓形成過程の１部として血小板の凝集及び（又は）付 着を促進する方法を特徴とする。この方法は、合成の凝集若しくは付着促進性分 子を形成するための本発明によるハイブリッドペプチドのマルチマーの使用に基 づいている。これらマルチマーは架橋した複数のハイブリッドのコピーであるか 、或いは複数のハイブリッドを蛋白又は他の同族骨格に結合させることもできる 。いずれの場合にも、マルチマーは別々の分子におけるリセプタと反応する能力 を有し、これら分子を架橋させる。本発明の方法は、これら合成の凝集若しくは 付着促進分子を製造することがら開始し、次いで血小板をこれら分子と共にリセ プタと合成分子との間の相互作用を促進する条件下で培養する。この種の付着相 互作用を促進させるよう作用する条件はＡＤＰ、スロンビン、エビネフィリン又 は他のアゴニストによる血小板の活性化を包含する。

図面の簡単な説明 第１図はα鎖における血小板リセプタ認識部位に対応する断片（ＲＧＤＳ）とγ 鎖にあける血小板リセプタ認識部位に対応する断片（γ４００〜４１１）との両 者がγ鎖若しくはα鎖マルチマーにより血小板の凝集を阻止することを示し、第 ２図はγ鎖断片と共に（第２Ａ図）及びα鎖断片と共に（第２８−Ｄ図）培養す ることによるヒト血小板に対する１１２５−フィブリノーゲンの結合阻止を示し 、第３図は本発明の範囲内における７種の異なるハイブリッドペプチドによる１ １２５−フィブリノーゲンの結合阻止を示している。

λ肌立用員皇碧贋 本発明は、部分的にヒトフィブリノーゲンのγ鎖及びα鎖に位置する血小板リセ ブタ認識ドメインが、相同アミノ酸配列を欠如するにも拘らず、これら連鎖から 誘導された合成ペプチドにより機能的に交差阻止されるという知見に基づいてい る。第１図は、γ鎖及びα鎖に存在する配列の合成ペプチド同族体によるこの交 差阻止の瑛象を示している。第１Ａ図は血小板とγ鎖マルチマーとの間の相互作 用の阻止を示す一方、第１Ｂ図は血小板とα鎖マルチマーとの相互作用の阻止を 示している。より詳細には、第１Ａ図は血小板を緩衝剤、フィブリノーゲンのα 鏡面小板すセプタ認識ドメインに相当する断片（ＲＧＤＳ）又はフィブリノーゲ ンのγ預血小板リセプタ認識ドメイン（γ４００〜４１１）と予備混合した実験 を示している。ＡＤＰ処理の俊、この処理された血小板に５μＭのγ鎖マルチマ ーを添加し、透過率％を測定した。図面から明らかなように、緩衝剤は透過率％ に影響を与えないのに対し、γ４００〜４１１断片は明らかにγ鎖マルチマーと 血小板との間の相互作用を阻止した。これは、γ４００〜４１１断片がγ鎖にお ける相互作用部位であるため予想される。驚くことに、α鎖断片（ＲＧＤＳ＞も γ鎖マルチマーとの相互作用を阻止するのに同等に有効であった。他の並列実験 は、第１Ｂ図に示すように、α鎖及びγ鎖断片もα鎖マルチマーとＡＤＰ処理血 小板との間の相互作用を阻止することを示す。

この知見に基づき、「チェッカーボード」分析実験を行い、α及びγ鎖断片の種 々の濃度を試験して物理的混合物が相互作用したかどうかを決定した。第■表は この実験の結果を示寒工麦 血小板に対する■１２５−フィブリノーゲン結合に向けられるドデカペプチド Ｔ４００〜４１１とＲＧＤＳとの組合せの阻止能力に関するチェッカーボード分 析５〜６（）μＭの範囲の濃度のドデカペプチド（７４００〜４１１）と５〜１ ５μＭの範囲の濃度のテトラペプチド（ＲＧＤＳ）とを、示したように混合して 血小板に対する放射能標識されたフィブリノーゲン結合の阻止につき試験した。

標準沃素モノクロライト法を用いて３Ｘ１０７　ＣｐｌＩＩ　／ｌ１ｌ（ｌの比 放射能を有する■１２５で沃素化された精製フィブリノーゲンを使用した。

血漿蛋白からから分離されかつＩ−ＩＥＰＥＳ均衡塩緩衝液（ｐＨ，７，３５） に懸濁されたヒト血小板を所定濃度のペプチドと５分間混合した。標識されたフ ィブリノーゲン（３３周／　０．５ｄ）を添加した後、５μＭのＡＤＰを添加し た。結合実験を、空温にて撹拌することなく１ｘ１０８個の血小板を含有する最 終容積０．５ｇｌ１にて行なった。第■表の結果は、全くペプチド断片を添加し ない試験により決定された比較値の結合％として示される。

第■表から明らかなように、阻止は低濃度のペプチドにて純粋に加算的であるの に対し、高濃度においては加算作用が減少する。いずれの場合にも、相乗作用は 示されない。

上記実験の結果は、ヒト血小板のためのフィブリノーゲンにあける結合ドメイン の構造に関する本発明者等による伯の実験に導いた。この実験の１部として、本 発明の基礎を構成するハイブリッドペプチドを製造しかつ試験した。以下の実施 例から明らかなように、同一分子内にフィブリノーゲンのα鎖とγ鎖とからの結 合ドメインを有する比較的短いハイブリッドペプチドを生成ざぜた場合、驚異的 な結果が得られた。

Ｘ四Ｂ この実施例においては、フィブリノーゲンのα鎖及びγ鎖からのリセプタドメイ ンの各種同族体を有する一連のハイブリッドペプチドを、ＡＤＰ処理されたヒト 血小板に対する１１２５−フィブリノーゲンの結合阻止及びＡＤＰ処理された血 小板リッチな血漿の凝集に対するペプチドの阻止作用につき試験した。これらの 結果は明らかに、本発明のハイブリッドペプチドがフィブリノーゲン−血小板相 互作用の驚異的に良好な阻止を与えることを示した。

同相法により手作業で［クロツエウイアーク等、バイオケミストリー、第２３巻 、第１７６７頁（１９８４）　］又はビオサーチ９５００型ペプチド合成装置に よりペプチドを合成した。これらペプチドをＨＦにより樹脂から分離させ、かつ 標準法を用いて濃度を同定した［クロツエウィアーク等、同上参照］。血。

小板リッチな血漿の凝集阻止をペイトン・シュアル・チャンネル凝集計［ペイト ン・アソシエーツ社、バッファＯ−、ニューヨーク州］にて光学測定法により測 定した。最大透過率（Ｔｍａｘ）の比率及び光透過率における最急激増加に対す る接線に沿った１分間の変化を示す割合（傾斜値）を用いて、ＡＤＰ　（５μＭ ）の添加の後に凝集を測定した［チモンス等、Ｔｒａｎｓ、　Ａｓ５ｏｃ、　Ａ ｍ、　Ｐｈｙｓ、　、第９９巻、第２２６頁（１９８６）　］。

］１１２５−フィブリノーゲの結合を上記したように行ない、その際ＨＥＰ’Ｅ Ｓ緩笥液にてペプチド及び血漿フリーの血小板の５分間培養を行なった後、ＡＤ Ｐ及びフィブリノーゲンで処理した。

標準の固相ペプチド合成法を用いてペプチドを合成したが、組換法を用いて本発 明の範囲内でハイブリッドペプチドを形成させることもできるでおろう。したが って本明細書中に用いる「ハイブリッドペプチド」若しくは「合成ペプチド」と いう用語は、古典的なペプチド合成及び組換技術を包含する任意の方法を用いて 作成されたハイブリッド若しくは合成ペプチドを意味しかつ包含する。

第２図は、フィブリノーゲンのγ鎖及びα鏡面小板すセプタ認識ドメインに相当 する２種のペプチド断片γ４００〜４１１及びＲＧＤＳによる■１２５−フィブ リノーゲン結合の阻止を示している。第２Ａ図及び第２Ｂ図により示されるよう に、これらの実験はそれぞれ３０μＭ及び１０μＭのＩＣ５ｏ値を与える。ＩＣ ５ｏ値は、フィブリノーゲン結合の５０％阻止を与えるペプチドの濃度である。

同じ実験の結果を、第■表にて１１２５−フィブリノーゲン結合の欄に示した最 初の２つの線として見ることもできる。

ざらに、第■表は同じペプチドによるＡＤＰ処理された血小板リッチな血漿の凝 集に関するＩＣ５０をも示している。これ第ｍ表 とｌ〜フィブリノーゲンのγ鎖及びα鎖の配列を有する合成ペプチドの凝集防止 能力 Ｊｉ２５　　　　　　　　　ＡＤＰ処理されたペプチド　　フィブリノーゲン　 　　血小板リッチな血漿結合　　　　　　　　　における凝集 ＩＣ５０ＩＣ５０ ，３０３００ ＲＧＤＳ　　　　　　　　　　　　　　　１０　　　　　　　　　　　　　　　 　　　５０ＹＲＧＤＳＱ　　　　　　　　　　　３０　　　　　　　　　　　　 　　　１２０ＲＧＤＶ　　　　　　　　　　　　　　　　６　　　　　　　　　 　　　　　　　　　５０ＳＲＧＤＶ　　　　１０　　　　　　　　　　　　　　 　１ｏ。

ＶＧＲＧＤＶ　　　２８　　　　　　　　　　　　　　　１５０σＱ上−σジα Ω′Ｒ区１７　　　　　５　　　　　　　　　　　　　　　１５０ＲＧＤＦ　　 　　　　　　　　　　　　　　２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４Ｏ ＥＡＲ１１３ｍ２５ ＡＫＱ′ＲΩＱＦ　　　　　　　　　　　９　　　　　　　　　　　　　　　　 ７５■…二ａぽＱＲ’Ｊ２Ｆ　　　　　　　　６　　　　　　　　　　　　　　 　　１００γ鎖若しくはその同族体の血小板リセプタ認識ドメインの少なくとも １部と、α鎖からの血小板リセプタ認識ドメインのＲＧＤ部分とを有する各種の ハイブリッドを標準固相法により作成した。成る種のハイブリッドにａ３いては 、α鎖ドメインの大端ノーｒニルアラニン（Ｆ）若しくはピリン（Ｓ）をバリン （Ｖ）で置換した。何故なら、γ４００〜４１１ドメインの末端にてバリンの効 果が知られているからである。

第３Ａ−Ｇ図は、本発明による各種のハイブリッドペプチドを用いた試験を示し ている。第３Ａ図において、示したペプチドはカルボキシル末端でなくアミノ末 端に６けるα鎖からのドメインの同族体を有する。他の結果と比較して、特に工 １２５−フィブリノーゲン結合の阻止に基づき、この種のハイブリッドペプチド は天然ペプチドγ４００〜４１１と同程度に有効であると思われた。

第３８−Ｇ図に示した実験は全て、ペプチドのアミン領域にγ鎖結合部位の断片 若しくは同族体を有すると共にカルボキシル領域にα鎖部分を有するハイブリッ ドペプチドで行なった試験に関するものである。これらの結果は、γ鎖領域の１ 部をα鎖領域で置換すればこのα鎖領域が１１２５−フィブリノーゲン結合の阻 止を促進したことを示している。しかしながら、この作用はγ鎖ドメインから２ 個若しくは３個の残基の下でのみ減少する。

第■表に戻って、この減少作用は■１２５−フィブリノーゲン結合だけでなくＡ ＤＰ−処理された血小板リッチな血漿による血小板凝集についても示される。し かしながら、第■表は、α鎖及びγ鎖の両成分の両者を有するハイブリッドを用 いた驚異的結果の１つを示している。γ鎖成分の大部分、タトえば１−ＩＨＬＧ ＧＡＫＱＡＧＤＳＲＧＤＶ若しくはＨＨＬＧＧＡＫＱＡＧＤＶ（３ＲＧＤＶを有 するバイア’）ｙドペプチドは、１１２５−フィブリノーゲン結合を阻止するの に必要な量と血小板凝集を阻止するのに必要な量との比における改善（減少）を もたらす。事実、凝集防止量はαテトラペプチドだけと同程度又はそれより低く 、驚異的な知見である。これは極めて重要である。何故なら、α断片だけを用い る問題は、テトラペプチド断片が他の細胞マトリックスとの相互作用に関し血管 内皮の一体性に対し顕著な作用を及ぼすからである［チェノ等、ジャーナル・セ ル・バイオロジー、第１０５巻、第１８８５頁（１９８７）　］。インビボにお いて、この作用は剥離された血管表面の内皮デスクワメーション（ｄｅｓｇｕａ ｍａｔ　ｉ　ｏｎ　）及び（又は）阻害された内皮形成をもたらしうる。しかし ながら、ドデカペプチド（γ４００〜４１１）とα鎖断片との融合生成物を作成 することにより、得られるハイブリッドは血管内皮に対するその反応性を喪失し 、したがって向上した阻止能力を有すると共にγ鎖ドメインの顕著な特徴、たと えばフィブリノーゲン及び血小板の特異性、並びに血管内皮の保護を保持するハ イブリッドを作成することができる。

第■表に示したデータから明らかなように、ハイブリッドペプチドの能力は末端 近くにシスチンを含む場合にもγ鎖ペプチド単独より大である。シスチンは蛋白 に対しジスルフィド架橋を形成するため使用することができ、或いは三量化させ てマルチマーを形成することもできるので、合成フィブリノーゲンは本発明のハ イブリッドを用いて形成されうろことが判る［たとえば米国特許第４．７０３． ０３９＠参照］。同様に、フィブリノーゲンとフィン・ウイレブランド因子との 間の結合ドメインの近似した物理的構造関係［米国特許第４、６６１．４７１号 及び第４．６６６、８８４号参照］は、同じ手順を用いてフィン・ウイレブラン ド因子、フィブリノーゲン又は他の付着性蛋白／血小板の相互作用を阻止する分 子を作成しうるという可能性を与え、事実合成の付着性蛋白の形成を可能にする 。実際に、各ドメインを混合し、たとえば異なるペプチドからのドメインを同じ ハイブリッドに導入して、新たな異なる作用を得ることもできる。

以上の実施例は単に例示の目的であって、本発明の範囲を限定することを意味し ない。当業者は、本発明の範囲内において他の方法又はペプチドを決定すること ができるであろう。

本発明は、以下のクレームにより規定される。

ペプチド濃度（μＭ） ペプチド濃度１１１ノ ペプチド濃度７１１１ノ ペプチド濃度（μＭ）　　　　　　　　　　　ペプチド濃度／／！ノ国際調査報 告 ＰＣＴ／ＬＩＳ　　Ｅｌタハ）１７４：但上り出工卸工り巳と二巳工」旦触λ■ 工巴肛上且・ＩＬ　　　Ｆｉｅｌｄｓ　　％＋ａｒｃｈｅｄ　　５ｅａｒｃｈ　 　を会ｒｍｓ＋ｐｌａｔ＋１＋ｔ　　ｒｅＩ：ｅｐｔＯｒ、ｈｙｂｒｉｄ　　ｐ ｒｏｔｅｉｎ、　　ｆ＋ｂｒｉｎｏｇ会ｎ、　　ｈｙｂｒｉｄ　　ｐｅｐｔ奄р ■B ＧＰＩＩＢ／ＺＩＩＡ、ｒ會ｃｃｇｎｉｔｉｃ：ｎ　ｄｏｍａｉｎ

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. １．Ｘ１が付着性蛋白のための第１リセプタドメインに関する前記蛋白における 第１相互作用部位の同族体からなり、かつＸ２が前記付着性蛋白における第２リ セプタドメインのための前記蛋白における第２相互作用部位の同族体からなり、 前記第１相互作用部位と前記第２相互作用部位とが天然型の前記付着性蛋白上で 異なることを特徴とするＸ１−Ｘ２型のハイブリッド線状ペプチド。
2. ２．前記第１及び第２リセプタドメインが血小板上に位置する請求の範囲第１項 記載のハイブリッドペプチド。
3. ３．付着性蛋白がフィブリノーゲン、フィブリン及びフォン・ウィレブランド因 子よりなる群から選択される請求の範囲第２項記載のハイブリッドペプチド。
4. ４．前記付着性蛋白がフィブリノーゲンであり、Ｘ１及びＸ２がフィブリノーゲ ンのγ鎖とα鎖とにおける血小板のための相互作用部位の同族体からなる請求の 範囲第３項記載のハイブリッドペプチド。
5. ５．Ｘ１がγ鎖血小板相互作用部位の同族体若しくは同族体断片からなり、かつ Ｘ２が天然フィブリノーゲンのα鎖血小板相互作用部位の同族体若しくは同族体 断片からなる請求の範囲第４項記載のハイブリッドペプチド。
6. ６．Ｘ２がＲＧＤＶ、ＲＧＤＮ、ＲＧＤＦ、ＲＧＤＹ、ＲＧＤＳ、ＲＧＤＭ及び ＲＧＤＣよりなる群から選択されるトラペプチドからなる請求の範囲第５項記載 のハイブリッドペプチド。
7. ７．Ｘ１が、配列ＨＨＬＧＧＡＫＱＡＧＤＶ若しくはその置換同族体の活性部分 からなる２〜１３個の残基の線状ペプチドである請求の範囲第６項記載のハイブ リッドペプチド。
8. ８．前記活性部分が配列ＨＨＬＧＧＡＫＱからなる請求の範囲第７項記載のハイ ブリッドペプチド。
9. ９．血小板と付着性蛋白との相互作用を阻止するに際し、前記血小板における相 互作用部位の少なくとも２つの異なるドメインと反応する前記付着性蛋白からの ペプチド配列の同族体を含有した線状ハイブリッドペプチドを形成させ、 前記ハイブリッドペプチドを前記血小板と反応させ、かつ前記血小板を前記付着 性蛋白に露出させることを特徴とする血小板と付着性蛋白との相互作用の阻止方 法。
10. １０．前記ハイブリッドペプチドがＸ１−Ｘ２型を有し、ここでＸ１が前記付着 性蛋白のための第１リセプタドメインに関する前記付着性蛋白における第１相互 作用部位の同族体であり、かつＸ２が前記付着性蛋白における第２リセプタドメ インのための前記付着性蛋白における第２相互作用部位の同族体である請求の範 囲第９項記載の方法。
11. １１．前記付着性蛋白がフィブリノーゲンからなり、Ｘ１がフィブリノーゲンの γ鎖における血小板のための相互作用部位の同族体からなり、かつＸ２がフィブ リノーゲンのα鎖における血小板のための相互作用部位の同族体からなる請求の 範囲第１０項記載の方法。
12. １２．Ｘ２がＲＧＤＶ、ＲＧＤＮ、ＲＧＤＦ、ＲＧＤＹ、ＲＧＤＳ、ＲＧＤＭ及 びＲＧＤＣよりなる群から選択されるテトラペプチドからなる請求の範囲第１１ 項記載の方法。
13. １３．Ｘ１が、配列ＨＨＬＧＧＡＫＱＡＧＤＶ若しくはその置換同族体の活性部 分からなる２〜１３個の残基の線状ペプチドである請求の範囲第１１項記載の方 法。
14. １４．前記活性部分が配列ＨＨＬＧＧＡＫＱからなる請求の範囲第１３項記載の 方法。
15. １５．前記付着性蛋白がフォン・ウィレプランド因子からなる請求の範囲第９項 記載の方法。
16. １６．ハイブリッド凝集促進分子を形成させ、このハイブリッド凝集促進分子は 血小板におけるリセプタ部位と反応する付着性蛋白における相互作用部位の線状 ハイブリッド同族体のマルチマーであり、前記線状ハイブリッド同族体のそれぞ れはＸ１−Ｘ２型を有し、ここでＸ１は前記付着性蛋白における第１相互作用部 位の少なくとも１部の同族体であり、かつＸ２は前記付着性蛋白における第２相 互作用部位の少なくとも１部の同族体であり；さらに前記ハイブリッド凝集促進 分子を血小板と共に、前記血小板と前記ハイブリッド凝集促進分子との相互作用 を促進する条件下で培養して血小板凝集を促進することを特徴とする血小板の凝 集の促進方法。
17. １７．相互作用を促進する前記条件が、前記血小板をアゴニストにより活性化す る工程からなる請求の範囲第１６項記載の方法。
18. １８．前記付着性蛋白がフィブリノーゲンからなり、前記第１相互作用部位がフ ィブリノーゲンのγ鎖における血小板相互作用部位の同族体からなり、かつ前記 第２相互作用部位がフィブリノーゲンのα鎖における血小板相互作用部位の同族 体からなる請求の範囲第１６項記載の方法。
19. １９．Ｘ２がＲＧＤＶ、ＲＧＤＮ、ＲＧＤＦ、ＲＧＤＹ、ＲＧＤＳ、ＲＧＤＭ及 びＲＧＤＣよりなる群から選択されるテトラペプチドからなる請求の範囲第１８ 項記載の方法。
20. ２０．Ｘ１が、配列ＨＨＬＧＧＡＫＱＡＧＤＶ若しくはその置換同族体の活性部 分からなる２〜１３個の残基の線状ペプチドである請求の範囲第１８項記載の方 法。
21. ２１．前記活性部分が配列ＨＨＬＧＧＡＫＱからなる請求の範囲第２０項記載の 方法。
22. ２２．ハイブリッド付着促進分子を形成させ、このハイブリッド付着促進分子は 血小板におけるリセプタ部位と反応する付着性蛋白における相互作用部位の線状 ハイブリッド同族体のマルチマーであり、前記線状ハイブリッド同族体のそれぞ れはＸ１−Ｘ２型を有し：さらに前記ハイブリッド付着促進分子を血小板と共に 、前記血小板と前記ハイブリッド付着促進分子との相互作用を促進する条件下で 培養して血小板付着を促進することを特徴とする血管壁部に対する血小板付着の 促進方法。
23. ２３．相互作用を促進する前記条件が、前記血小板をアゴニストにより活性化す る工程からなる請求の範囲第２２項記載の方法。