JPH03503240A - トキソプラズマ・ゴンジの抗ｐ３０抗体によって認識される少なくとも１つのタンパク質をコードする核酸配列および／またはそのフラグメントと、その配列の発現産物と、その産物の製造方法と用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 トキソプラズマ・ゴンジの抗Ｐ３０抗体によって認識される少なくとも１つのタ ンパク質をコードする核酸配列および／またはそのフラグメントと、その配列の 発現産物と、その産物の製造方法と用途 この発明は、トキソプラズマ・ゴンジ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄｉｉ。

ＴＧ）の抗Ｐ３０抗体によって認識される少なくとも１つのタンパク質をコード する核酸配列および／またはそのフラグメントならびに上記配列の発現産物に関 する。またこの発明は、上記発現産物の製造方法、ならびに発現産物のトキソプ ラズマ病の早期診断、監視および免疫保護への用途に関する。

トキソプラズマ・ゴンジは、コシシア目（Ｃｏｃｃｉｄｉａ）　、スポロシア目 （５ｐｏｒｏｚｅａ　）に属する原虫類の寄生虫であり、哺乳類の宿主の広範囲 の種類の細胞内で繁殖する細胞内寄生虫である。

成人については、２種類の寄生虫が報告されている。ずなわら急性症状の疾叡の 場合に出会う増殖型のタキシイト（ｔａｃｈｙｚｏｉＬｅ）と、神経組織内に披 胞されて生存し、明６らかに再感染に対する永続的な免疫性の維持の原因になっ ている抵抗性のブラディゾイト（ｂｒａｙｚｏｉｔｅ）である。

上記の寄生虫は、ヒトのみならず家畜の医学において、重大な病原であるが、非 常に広範囲の地域にひろがっており、全世界でほぼ５億人が感染に対して正の血 清学的反応を示すであろうということが確認できたほどである。

ヒトの場合、トキソプラズマ症は、無症候性の場合が多く、はとんどの期間気付 かれず、症状が現れない。しかし、それでらある場合には、トキソプラズマ症は 、妊娠女性と免疫不全症の四番のようないわゆる危険な患者に対して重篤な症状 を示す場合がある。妊娠女性の場合、トキソプラズマに感染すると、ｆｌ）　Ｉ Ｉが治療を早期にうけてかつ治療を絶えず続けなければ、胎児と新生児の恐ろし い合併症の原因になる。特にトキソプラズマ症は、経胎盤が汚染された新生児の 重篤な生命にかかわる場合らある目や大脳の障害の原因である。また、このよう な合併症は免疫不全症の患者にも見られる。

この寄生虫の単離は進化した形態または先天的な形態でのみｉｉＪ能である。こ の単離を行うことはまれであり、通常は、血清学的な診断で充分である。この寄 生虫が存在すると、臨床上の症状は一般に現れにくいが、血清学的診断で特別な 値を与える。

抗原および／または抗体を用いる技術の中の多くのものは、この寄生虫の診断は 困難であり、特にＭ免疫グロブリン（ＩｇＭ）の特性決定を行って、最近の進化 した感染を証明することは困難である。

ある試験法は、肢検体内に存在している可能性がある抗体の検出によるものであ り、他の試験法は抗原自体の検出によるものである。

１１ｕｇｈｅｓ（“Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｌｏｐｉｃｓ　ｉｎ　ｏ＋ｉｃｒｏｂｉｏ ｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”１２０巻、　１９８５年３ｐｒｉｎ ｇｅｒｌ集、１０５〜１．３９頁）は、利用しうる、次のような種々の血清学的 試験法を概説している。

Ｓａｂ　ｉ　ｎとＦｅ１ｄａ＋ａｎのカラー試験法（Ｃｏｌｏｒ　ｔｅｓｔ）　 ：この方法はＢｅｖｅｒｌｅｙとＢｅａＬｔｉｅ　（１９５８年）に標準化され 、ＦｅｌｄｍａｎとＬａｍｂ　（１９６６年）　、　Ｗａｌｄｅｌａｎｄ−（１ ９７６年）およびＢａ１ｒｏｕｒら（１９８２年）によって完成された。この方 法には生きた寄生虫、大量の正常なヒトの１ｆ１【清およびその試験法の実施と 結果の解釈についてよく訓練された専門家が必要である。

免疫蛍光法による抗体検出試験法：この方法はＲｅｎｉｎｇＬｏｎ　（１９６８ 年）およびＫａｒｉｍとＬｕｄｌａｍ　（１９７５年）ｈ月ｇＭ抗体の検出に利 用したが、この抗体は非特異的反応（偽陽性）を与えることができる。

ヘモグロビン試験法：抗体の検出には時間がかかりずきる。

妊娠女性の場合特におそい。

トキソプラズマ抗体の検出用ＥＬＩＳＡ法：　ＩｇＭをその場で試験用マイクロ プレート上で単離する方法である（　ＮａｏｔとＲｅｍｉｎｇｔｏｎ。

１９８０年）。

可溶性抗原の検出を用いる血清学的試験法については、可溶性抗原は簡単な抽出 法［トキソプラズマ・タキシイトの水による溶解、凍結と解凍または超音波によ るバースティング（Ｂｕｒｓｔｉｎｇ）　１によって得られる。これらの方法は 、抗原が水もしくは緩衝液に容易に溶解するかまたは最終の遠心分離の段階で小 さな膜の断片が溶液中に墾濁して存続しえる場合に、試験系中に膜状抗原が存在 しているということを証明するだけである。

トキソプラズマ・ゴンジの異なる抗原を適切な抗体で検出することによる試験法 は、特異的なタキシイト抗体の作製が必要であった。

タキシイトの表面に対するモノク【ｌ−ナル抗体の大部分が［（ｌｌａｎｄｍａ ｎら、１９８０年、　　”ＤｅＬｅｃＬｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ ｚａｔｉｏｎ　ｏｒｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎＬｉｇｃｎｃｓ　ｏｆ　Ｔｏｘｏｐ ｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ、＾ｕｓｔ、Ｊ、ＥｓＩ）、Ｂｉｏｌ。

Ｍｅｄ、Ｓｃｉ、、　５９．３０３）　。

Ｃ３ｅＬｈｉら、１９８０年、　　”ｌｌｙｂｒｉｄｏｍａｓ　ｓｅｃｒｅｔｉ ｎｇ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔ−ｉｂｏｄｙ　ｗｉｔｈ　５ｐｅｃｉｆｉ ｃｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄｉｉ”　、　Ｊ、　Ｐａｒ ａｓｉＬｏｌ、、　　６．１９２）　、　　（Ｊｏｈｏｎｓｏｎら、１９８１年 、”ｌｌｙｂｒｉｄｏｍａｓ　ｓｅｃｒｅ−Ｌｉｎｇ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　 ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｏ　Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　ｃｌｌ　Ｍｅｍｂｒｏｎｅ　 ５ｕｒ−ｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｍ１ｃｅ　ｆｒｏｍ　 ｔｏｘｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ”　、　Ｊ、　ｒ’ｒｏＬｏｚｏｏ１．、３０．３ ５１）　、　　（Ｋａｓｐｅｒら、１９８３年、　　”Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏ ｎｏｆ　ａ　ｍａｊｏｎ　ｍｅｍｂｒａｎｃｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｔｏｘ ｏｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄｉｉ　ｂｙｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｐＬｉｏｎ　ｗｉ ｔｈ　ａ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｉｂｏｄｙ”、　Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏ ｌ、。

１３０．２４０７）　、　　（Ｒｏｄｒｉｇｕｃｚら、１９８５年、　’Ｍａｊ ｏｒ　５ｕｒｆａｃｅ　ｐｒｏＬａ：ｎｏｒ　　Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　　ｇｏ ｎｄ目（Ｐ２Ｏ）　　ｃｏｎｔａｉｎｓ　　ａｎ　　ｉｍｍｕｎｏ−ｄｏｍｉｎ ａｎｔｒｅｇｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ　ｅｐｉＬｏｐｃｓ−、 Ｅｕｒ、Ｊ、　ｉｍｍｕｎｏ１．、１５，７４７）］アクリルアミドゲル電気泳 動法（５ＤＳ−ＰＡＧＥ）で定義された２７〜３５ｋＤａのタンパク質であって 、Ｐ２Ｏと命名されたタンパク質を認識するということが明らかになってきた（ Ｋａｓｐｅｒ、　Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ）。部分的に精製されたＰ２Ｏによる疾病 の受動転移（ｐａｓｓｉｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ）　（Ｊｏｈｎｓｏｎ）らしく は活性免疫の実験（Ａｒａｕｊ。

ら、１９８４年、　　−ＰａｒＬｉａｌｌｙ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ａｎｔｉｇｅ ｎ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆＴｏｘｏｐｌａｓｍａ　ｇｏｎ（Ｉｉｉ　 ｐｒｏｔｅｃｔ　ａｇａｉｎｓｔ　１ｅｔｈａｌ　１ｎｒＣｃｔｉｏｎ　ｉｎｍ ｉｃｅ”、　１ｎｒｃｃＬ、Ｉｍｍｕｎ、、　４５，１２２）は、Ｐ２Ｏがトキ ソプラズマ症の免疫予防の役割をしていることを示している。

その上にトキソプラズマ症に最近かかったかまたは長期間かかっている信者の血 清中にＰ２Ｏの特異的な抗体が存在していることが証明されたＣ　Ｉｌａｎｄｍ ａｎら、１９８０年、　　”Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ ｉｚａＬｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｏｒ　Ｔｏｘｏ ｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄｉｉ。

Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　１２４．２５７８）　、　　（Ｋａｓｐｅｒら ）　、　　Ｃ３ｈａｒｍａら、１９８３年、　”Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ　ａ ｎａｌｙｓｅｓ　ｏｒｔｈｅ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｏｒ　Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ　ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ　ｂｙ　ｈｕｍａｎ　ＩｇＭ　ａｎｄ　Ｉ ｇＧ　　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”　。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　１３１，９７７）　　。

抗ＴＧ−抗体の検出の例としては、免疫酵素試験法がＣｅ５ｂｒ。

ｎらの１９８６年に発表された論文に記載されているが、これは抗Ｐ３０１ｇＭ の捕獲法に関する論文である。この試験法の原理は血清ＩｇＭの捕獲に基づいた もので、このＩｇＭは、Ｐ２Ｏに対する抗原／モノクローナル抗体の対によって 、２段階で間接的に明らかにされる。この試験法は診断の感度がすてに改善され 、先に述べた試験法よりも明らかに優れており、特に免疫蛍光法もしくは赤血球 凝集法より優れている。

現在利用できる、特異的な抗体によるＴＧ抗原の検出による試験法と、被検体が 産生じた抗ＴＧ抗体の検出による試験法とは、同様に、トキソプラズマ症のすべ ての症例に望ましい信頼性を示さない。

その結果、本願の発明者らは、トキソプラズマ症のタイプと段階にかかわらず信 頼性に優れ、特に進化した（　ｅｖｏｌｕｔｉｖｅ）トキソプラズマ症検出の特 異性と感度をさらに改善し、偽陰性および偽陽性の反応を回避できる試験法の開 発が不可欠であると考゛えてきたのである。

カくシて本馳発明者らは、特にトキソプラズマ・ゴンジの状態とは無関係に、す でに提案された方法の欠点をもたないトキソプラズマ症の診断に採用できる診断 剤を提供することを目的とするしのである。

この発明の目的は、ヌクレオチド塩基の下記配列（＋）・１　　　　　　　　　 １ａ　　　　　　　　　　！・　　　　　　　　　！０　　　　　　　　　４０ 　　　　　　　　　　ｓ６人入ＧＧＧＧＡＧＡＣＣＧＧτＧＧＡＣＧＧＴＣＣＡ ＧＧＴＣτ丁ＣＧＴＧＧＡ入τ０ＣＴＣＧ’！’Ｃ”ｌ’ＴＧＣＧＣＧＣＡＣＣ ＧＧＣ＆ａ　　　　　　　　　　７１１　　　　　　　　　１６　　　　　　　 　　　Ｉｌｌ　　　　　　　　　　１０＠　　　　　　　　１１１P ＣＧ入入入丁ττＣＣＧＧτ丁Ｃτ入ＣＧＡＣＣＣＧＧＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧ ＡＧＣＣＴＣＧＴＧＧＴＣＡＣＧＧ入ＣττＣ入Ｇ１２１１１　　　　　　　１ ３＠　　　　　　　　１４０　　　　　　　１１０　　　　　　　　　Ａ暴・Ｔ ＣＧＣ（ＪＣ入ＴＧ（：ＴＣＣＧＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡ ＡＧＣＣＣτＣ入入Ｇ　　　　　　　（Ｉ）。

を６し、抗Ｐ３０抗体が認識するタンパク質をフードすることを特徴とする核酸 配列を提供することである。

本願の発明者らはこの配列をり〔Ｉ−ンＰ−３０，８と命名した。また、この発 明の目的は、上記式（１）の配列の少なくとも１つのフラグメントと、下記式（ １１） のヌクレオチド塩基の配列とを何することを特徴とする核酸配列を提案すること である。

本願の発明者らは上記の発明をクローンＧＰＰ５と命名したが、この配列は、本 朝発明者がＧ４２と命名した１、６００塩基対の挿入断片のフラグメントに相当 し、かつトキソプラズマ・ゴンジのゲノムＤＮへのフラグメントに相当する。

本願発明において、核酸配列とは、二重鎖ＤＮＡの配列、−重鎖ＯＮ＾の配列お よびいわゆるＤＮＡ配列の転写産物の各々を意味する。

またこの発明の目的は、この発明によるヌクレオチド配列のフラグメントで溝成 されていることを特徴とするオリゴヌクレオチドを提案するにある。

これらのフラグメントとしては、特に以下のものがあげられる。

下記式（［！＋　）・ ５’　ＣＡＧＣＴＧＣＧＡＴＡにＡＡＧＣＧＴＣにＣＡＧＴＧ　　　　　ＣＸエ エ）の配列を有することを特徴とするオリゴヌクレオチド（この配列は、特に式 （１１）の配列の３２〜５６の塩基の配列に相当する）：下記式（■）。

５’　ＧＧＧＧＡＧＡＣＣＧＧＴＧＧＡＣＧＧＴＣＣＡＧＧＴＣ（ＫＶ）の配列 を何することを特徴とするオリゴヌクレオチド（この配列は、特に式（ＩＩ）の 配列の１５５〜＋８０の塩基または式（１）の配列の３〜２８の塩基の配列に相 当する）：および下記式（Ｖ） ５’　ＧＣＡＧＧＴＣ：ＧＡＣＣＣＡＧＣＧＡＣＣＴＣＡＧＣ（Ｖ）の配列を何 することを特徴とするオリゴヌクレオチド（この配列は、特に式（ＩＪ　）の配 列の２７５〜２９８の塩基の配列に相当する）である。

この発明の有利な態様によって、前記のオリゴヌクレオチドは合成によって得る ことができる。

またこの発明の目的は、各ブライマーが上記定義と同じ配列らしくはヌクレオチ ド配列のフラグメントからなることを特徴と４゛るトキソプラズマ・ゴンノの核 酸の合成に用いるブライマーの対を提供することである。

かようなブライマーは、トキソプラズマ・ゴンノのＤＮＡもしくはＲＮＡの特異 的合成を行うことができる。

この発明によれば、１ｉｉｉ記ブライマーは、適切な手段［バイオヂニレーショ ン（１３ｉｏＬｉｎｙｌａｔｉｏｎ）　］によって標識をつけるのがｆｉ利であ る。

上記のブライマーの対の有利な態様によれば、このブライマ一対は、式（Ｖ）の オリゴヌクレオチドと対になった式（ＩＩＩ）のオリゴヌクレオチドで構成され 、前記核酸の合成に用いられる。

またこの発明の目的は、放射性同位元素、適切な酵素、蛍光色素のような適切な 標識、または他の化学的修飾もしくは抗体によって標識を付けることができる上 記定義のヌクレオチド配列らしくはそのフラグメントを育することを特徴とする ヌクＬ／オチドブローブを提供することである。

この発明の有利な態様によれば、ＭｉＪ記のプローブは上記式（■）のオリゴヌ クレオチドである。

またこの発明の目的は、抗Ｐ３０抗体によって認識され、そのアミノ酸配列（Ｖ Ｔ）が上記式（１）の配列由来の配列であり、下記配列： であることを特徴とする特許 またはそのフラグメントを提供ずることである。

またこの発明の目的は、アミノ酸の下記配列（■）：を￥ｆし、抗Ｐ３０抗体よ って認識され、上記式（Ｖｌ）のタンパク質のＣ末端フラクンコンに相当するこ とを特徴とするベブヂドを提供することである。

式（■）のペブヂドのベブヂドを修飾すれば、そのＮ末端アミノ酸はアセヂルノ ステインになり、ｆＩｉｊ記ベプヂドは、アミノ酸の下記配列（■）： ＡｃｅｔｙｌＣｙｓ−Ａｓｐ−　Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｌ ｅｕ−Ａｒｇ−　Ｌｙ＋ｓ−Ａｌｉ−　Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−ＬＹｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌ ｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ．　　　　　　　　　　　　　　　＋ＶＩＨ　Ｉを ｆイ４−る。

またこの発明の目的は、式（■）のペブヂドもしくは式（■）のべブチドで構成 され、輸送タンパク質と共有結合されていることを特徴とする抗原性を有する結 合体を提供することである。

この態様の有利な特徴によれば、ｎｆＩ記輸送タンパク質はランアルブミンで構 成されている。

さらにこの発明の目的は、抗Ｐ３０抗体によって認識され、そのアミノ酸配列（ ＩＸ）が上記配列（ＩＩ）由来の配列であり、下記配列。

であることを特徴とする抗原性を有するタンパク質および／またはそのフラグメ ン｝・を提供ずることである。

またこの発明の目的は、式（１）のＤＮＡ配列を挿入された組換え体発現ベクタ ーで発現され、１２０ｋＤａの分子量を有することを特徴とずる式（Ｖｌ）のタ ンパク質の発現産物を提供することである。

この態様の有利な特徴によれば、ｉ＋Ｑ記発現産物は、トキソプラズマ・ゴンノ の抗原タンパク質のタンパク質に相当する６　ｋＤａのベプヂドフラグメントを 有し、上記式（Ｖ［）のタンパク質と同一であり、かっ抗Ｐ３０抗体によって認 識される少なくとも１つの抗原決定基（エピトープ）を有する。

この発明の、タフバク質および／またはベプヂドおよび／または接合体の製造は 、メリフィールド（　ＭＥＲＲＩＦＩＥＬＤ）法の固相での合成による公知の方 法で行われる。

またこの発明の目的は、」二組式（＋）のＤＮＡ挿入断片を有する組換え体プラ スミドを提供することである。

上記の組換え体プラスミドは、アンスティチュ　パスツール（ＩＮＳＴＩＴＵＴ 　ＰＡＳＴＥＵＲ）に所属するラ　コレクシオン　ナソオナル　ド　キュリチュ ール　ド　ミクローオーガニスム（ｌａＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ＮａＬｉｏｎａ ｌｅ　ｄａ　Ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｄｅ　Ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ）に 、１９８８年６月２４日付けで寄託番号１−７７３号として寄託された。

また、この発明の目的は、上記式（■）のＤＮＡフラグメントを含ａずるＤＮＡ 挿入断片を有する組換え体プラスミドを提供することである。

このＤＮＡ挿入断片は、本願発明音らが０４２と命名したトキソプラズマ・ゴン ジのゲノムＤＮＡの１，６００の塩基対のフラグメントである。

Ｅ組紐換え体プラスミドは、アノスティチュ　パスツールに所属するラ　コレク ツオン　ナンオナル　ド　キュリチュールド　ミクローオルガニスムに、１９８ ９年６月２２日付で寄託番号ｌ−８７６号で寄託された。

またこの発明は、活性成分として、抗Ｐ３０抗体によって認識されるこの発明の 、式（Ｖｌ）のタンパク質および／または式（ＩＸ）のタンパク質および／また は式（■）もしくは（■）のペプチドおよび／または接合体を含有することを特 徴とするトキソプラズマ症用の診断剤に関する。

またこの発明の目的は、活性成分として、この発明の核酸配列および／またはそ のフラグメントを含有することを特徴とするトキソプラズマ症用診断剤を提供す ることである。

またこの発明は、活性成分としてこの発明のタンパク質および／またはペプチド および／または接合体と、任意に少なくとし１つ適切な医薬賦形剤とを含有する ことを特徴とする、トキソプラズマ症に対して有意な防護を行うのに適切なワク チンに関する。

またこの発明の目的は、この発明の少なくとも１つ診断剤を用いることを特徴と する、トキソプラズマ症の特に急性トキソプラズマ症と先天的なトキソプラズマ 症の検出および／また監視する方法を提供することである。

１つの態様によれば、上記定義の抗原活性を有し、以後抗原画分と呼ぶ、タンパ ク質および／またはペプチドおよび／または接合体で表わされる診断剤を生物学 的被検試料と接触させ、抗Ｐ３０抗体が被検体が生物学的試料内に存在する場合 には、前記抗原画分が抗Ｐ３０抗体と結合するのを測定し、次いで、前記複合体 が適切に展開される。

他の態様によれば、この発明のプローブによって表される診断剤を、適切に処理 された生物学的種と接触させて、核酸がプローブに近づくことができて、さがし ているトキソプラズマが存在している場合は、有効に雑種形成がなされ、雑種形 成がなされなかったプローブを除去して、雑種形成よって残ったＤＮＡプローブ が適切に検出される。

この態様なイイ利な特徴によれば、雑種形成の前に、検出すべき核酸とこの発明 のプライマ一対とを適切な条件下で接触させ、［ｉ１ｊ記核酸の少なくともひと つのフラグメントを増幅させる。

実施される増幅法は、詳しくは、次のよなう遺伝子の増幅技術である。すなわち 、いわゆるＱββダブリカーゼ法　ＬｉｚｚａｒｄｉＰ、Ｍ、ら、Ｂｉｏｔｅｃ ｈｏｌ、、　１９３８年６月）、またはいわゆる連鎖重合反応法（Ｐ、Ｃ，Ｒ） 　　（ＧＥＴＵＳ　Ｃｏ、が出願したヨーロッパ特許願第２００．３６３号、同 第２０１，１８４号および同２２９，７０１号に記載されている）がある。

」−記の診断試験法には生物学的試料もしくは組織の稚内のトキソプラズマ・ゴ ンジのゲノムＤＮＡの特異的検出ができるという利点がある。

先天的トキソプラズマ症の場合は、胎盤コード血液もしくは胎盤組織の問題であ り、免疫不全のｔ者については、気管支肺胞の洗浄液と、脳を髄液もしくは脳を 髄血液の問題である。

またこの発明の目的は、この発明のタンパク質、および／またはペプチドおよび ／または接合体の適切な量、必要に応じて陽性の対照（Ｌｅｍｏｉｎ）　、陰性 の対称および他の適切な試薬を含有することを特徴とする、生物学的試料中のト キソプラズマ・ゴンジを検出するためのキットもし、＜は器具をＩｎ　（Ｊ４　 するものである。

１つの改変例のキットは、発明のプローブの適切な量と、必要に応じて、少なく とも１つの適切なブライマーの対の適切な重を組合イ〕せ、および必要に応じて 、トキソプラズマ・ゴンジの核酸の対照製剤およびその他の適切な試薬を含有し ている。

１−記の特徴の外に、この発明は、以下に述べるように、Ｐ２Ｏをコード−４る 遺伝子をクローン化する実施例と、ワクチンとしてＰ２Ｏの用途による別の特徴 を有するしかしこれらの実施例は、この発明を例証するだけのものであり、この 発明を限定するものではない。

害Ｆｍｆｆｊｌｌ−−−匹服犯蔗俸−←−火二ユニー櫂Ｊ東盗−ハる表面Ｕ男系 １１ｋａ）タキシイトの膜抗原の抽出法： トキソプラズマ・ゴンノのビルレント菌株Ｒ１−（は、スイスマウスに１週間に ２回継代させて保持されている。寄生虫はすでに３日間感染させたマウスの腹膜 から採取する。それを３＃１１（Ｎｕｃｌｅｐｏｒｃ）のポリカーボネートフィ ルタで濾過し、ＰＢＳ　（リン酸ナトリウム緩衝液１０ｍＭ　ｐＨ７，２，Ｎａ Ｃ１１５ｈ＋Ｍ）で３回洗浄する。最終ベレットを０．５％のＮｏｎ１ｄｅＬ　 　ＮＰ４０　（Ｓｉｇｍａ）と１００単位／ｊ＋１２のアプロチニン（Ｓｉｇ＋ ｌ１ａ）を含有するＰＢＳで再懸濁さＵる。１時間９１℃で保温した後、４℃で ２０分間、ｉｏ、ｏｏｏｇで遠心シ〕離する。次いで上澄み液を抗Ｐ３０抗体で 認識される抗原の原料として用いる。

ｂ）抗Ｐ３０抗体によって認識される抗原のＩＩＰＬｃによる精製；タキシイト の全抽出物（５００μＱ）を、３００人の多孔度で５４Ｉ１１のマイクロビーズ からなるＶｙｄａｃ　Ｃ＋。（４，６Ｘ　２５０ｉｘ）カラムに注入する。溶離 は、ＣＩＩａＣＮ／　ｌ１ｔｏ／　ＣＦａＣＯＯＨ！合物（５／９５１０．０５ ／体積）を用いて１２分間行い、次いで直線勾配法で１８０分間、８０％ＣＩＩ 、ＣＮまで行う。なお最終の８０％ＣＩ１．ＣＮは５分間保持する。抗Ｐ３０抗 体で認識される抗原を含有するピークは、９０分後、３４．４％濃度のＣＩｌ、 ＣＮで溶離される。

Ｃ）抗Ｐ３０抗体で認識される抗原の免疫親和性クロマトグラフィーによる精製 。

抗Ｐ３０抗体によって認識される抗原を。５ａｎＬｏｒｏらの報告（１９８５年 ）どおりにして精製した。モノクローナル抗体（＋＊Ａｂ）を、メーカーの推薦 によってグルタルアルデヒドで活性化した親和性支持体に固定する。（Ｂｏｅｈ ｒｉｎｇｅｒ、　Ｍａｎｎｋｅｉ＋ｍ、　Ｒ，Ｆ、Ａ、）　ｏ手早く、親和性吸 着剤口１）をｍＡｂを２０ｕ／ｚＱ含有するＮａＣ１０，９％（５ｘ＋り中に再 懸濁させる。撹拌しながら室温で４時間保温した後、ゲルをデカニットしてクロ マトグラフィのカラムに入れ、溶出液の光学濃度（０，Ｄ、）が０．００５以下 になるまでＮａＣｌ１．５％で洗浄する。残留遊離アルデヒド基を、エタノール アミン−１１ＣＩ。

０．０３Ｍ　（ｐｉ−１７，５）　’Ｔ：　１時間飽和サセル。０．９％ＮａＣ １を５０ｘＱ、　０．５Ｍグリノンｐ１（３，７５の５０１および０．９％Ｎａ Ｃ１１００３１１２で順に洗浄した後、得られた免疫吸着剤を４℃で保管する。

Ｐ２Ｏの精製は、トキソプラズマ・ゴンジ（２００１９）のタキシイトの全抽出 物（ｌｏＩｆ２）を、閉回路の免疫吸着剤のカラムを２ｘ（１／ｈｏｕｒの流速 で循環させることにより、−夜４℃で行う。次いでクロマトグラフ系を開いて、 カラムを０．９％ＮａＣ１で洗浄する。

免疫吸着剤に特異的に結合した抗原をトリエチルアミン０．１Ｍ（ｐｉ（Ｉｌ、 、５）によって溶離し、迅速にＩＭＨｃＩで中和する。ＰＢＳｐ８７．２にたい して透析した後、得られた純品のＰ２Ｏを一７０℃で保管する。

ａ）全ＲＮ＾の抽出。

ＡｕｒｒｒａｙとＲｏｕｇｅｏｎの方法（Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　１ ９８０年、　１０７．３０３）を用いた。３ＭＬｉＣ１、ヘパリン２００μｇ／ ｘＱ、酢酸ナトリウム１０ｍＭＩ）Ｔ−１５、ＳＤＳ　Ｏ，１％の溶液を添加し てタキシイトを溶解した。

ボブター（Ｐｏｔｔｅｒ）のホモジナイゼーンヨンを行い、−夜保存してＲＮＡ を沈澱させた後、ライゼートを４℃で４０分間、１６．３００９で遠心分離する 。得られたベレットを２回洗浄し、４　Ｍ　ＬｉＣ１，８Ｍ尿素の溶液中に再＠ 濁させ、次いで再度、４℃で４０分間、１６．３００９で遠心分離する。次にベ レットを水で溶解し、溶液を、ｐＨ５の酢酸ナトリウム中で０．１Ｍにし、次い でＳＤＳ中でｏ、ｔｍとして、次いで水で飽和させた同体積のフェノールと同体 積のフェノール−クロロホルムで順に抽出する。最後に水相を、酢酸ナトリウム ｐＨ５中で０．２Ｍとし、次いで２．５倍の体積のエタノールを用いて、ＲＮＡ を一２０℃で一夜沈澱させた。

ｂ）メツセンジャーＲＮ＾の精製： Ａｒｎｅｍｏｎｎらの方法（Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、、　１９７７年１ ４巻、４０２３〜４０２６頁）を用いた。この方法は、ポリ＾”ＲＮＡを、全Ｒ Ｎ＾からオリゴ（αＴ）セルロースの２つの連続クロマトグラフィで分離する方 法で構成されている。

実施例３：発現産物のクローン化 ａ）タキシイトのｍＲＮＡからのｃＤＮ＾ＤＮＡラリーの製造：ｃＤＮＡの合成 を、ＧｕｂｌｅｒとＩｌｏ［Ｔｍａｎの方法（Ｇｅｎｅ、　１９８３年、２５巻 、２６３頁）で実施する。第１の相捕的ＤＮＡのストランドを、＾ＭＹ逆転酵素 の作用で合成する。ＲＮ　アーゼＨとポリメラーゼＩの共同作用によって２重鎖 にされたＤＮＡは、次いでＴ　、ＤＮＡポリメラーゼで処理して平滑断片を得る 。酵素のＥｃｏＲＩメチラーゼでメチル化した後、ＥｃｏＲｌ　“リンカ−”を 、Ｔ　４　ＤＮＡリガーゼの作用で叶＾の末端に付加する。次に得られたｃＤＮ ＡＧＲｃｏＲｌ酵素で消化し、Ａｃ＾３４とＵｌｔｒｏｇｅｌ　（０，２Ｘ　３ ０ｃｌｌ）のクロマトグラフィを用い、ＷａｔｓｏｎとＪａｅｋｓｏｎの方法（ Ｃ１ｏｖｅｒ　Ｄ、Ｍ、編、　”ＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇ”　Ｖｏｌ、１．＾、　 ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ　：　０ｘｆｏｒｄ、　Ｗａｓｈｉｎｇ ｔｏｎＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、　４９頁、　１９８５年）で精製する。得られたｃ ＤＮＡ　（５００〜７，０００塩基対）を次に、λｇＬ＋ファージのＥｃｏＲ１ 部位に挿入する（Ｉｌｕｙｎｈら、　ｔ９ｇ５年、　Ｇｌｏｖｅｒ　Ｄ、Ｍ、編 ：“ＤＮＡ　　ｃｌｏｎｉｎｇ″Ｖｏｌ。

１、＾、　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ　：　０ｘｆｏｒｄ、　Ｗａ ｓｈｉｎｇｔｏｎ　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ。

４９年）。連結した後、組換え体ファージのライブラリーが構築される。

１）　）ライブラリーのスクリーニングと“Ｐ３０″候補の選択＝λｇ【、１の 誘導体は、ｃＤＮＡと、イー・コリ（Ｅ、Ｃｏ１１）のβ−ガラクトノダーゼの 遺伝子が融合した後、Ｌａｃプロモーターの制御下で異種遺伝子を発現すること ができる（　ＹｏｕｎｇとＤａｖｉｓ、　１９８３年）。

λｇＬ＋＋のライブラリーの試料を、イー・コリＹ　１．０９０の菌株に９０ｃ −直径の皿当り１０’フアージの希釈度で接種する。Ｌａｃプロモーターの制御 下でのタンパク質の発現の誘発がイソプロビルヂオーβ−ガラクトンド（ＩＰＴ Ｇ）の存在下、４２℃でトリガーされる。合成されたタンパク質をニトロセルロ ースに吸着させ、実施例１に従ってラビット抗Ｐ３０抗体の存在下で培養する。

固定された抗体をペルオキシダーゼで標識をつけた２番目のラビット抗１ｇＧ抗 体で検出し、次に複合体を、Ｈｔ　Ｏｔの存在下４−クロロ−１−ナフトールで 染色することによって展開される。組換え体ファージのｃＤＮＡの挿入断片が、 抗Ｐ３０抗体によって認識される抗原決定基を有するタンパク質もしくはタンパ ク質フラグメントの合成を命令する場合、上記の検出法によってそのファージを 同定することができる。

Ｐ２Ｏ−８クローンを精製した後、ファージを大量に製造し、精製し、ＤＮＡを 標準法（１＋ＢＩｉａｔｉｓら、　１９８２年）で抽出する。次にＤＮＡをＥｃ ｏＲｌ酵素で加水分解し、挿入断片を２％アガロースゲル上の電気泳動法で分離 し、次いでエレクトロエリュージュン（ｅｌｅｃｔｒｏｅｌｕＬｉｏｎ）で回収 する。挿入断片を、Ｔ　４　ＤＮＡリガーゼの作用によってｐｕｃｉａプラスミ ド（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）のＲｃｏＲ１部位にサブクローン化し、次いで得られ た組換え体プラスミドを、この発明によって、イー・コリ　ＪＭ１０９菌株を形 質転換するのに用いる。組換え体プラスミドは、ＢｉｒｎｂｏｉｎとＤｏｌｙの 方法（１９７９年）で大量に製造され、挿入断片を上記のようにしてＲｃｏＲＩ によって加水分解した後、再製造する。ファジク（ｐｈａｇｉｑｕｅ）ベクター ＭＩａｍｐｌＯ内のサブクローニングを、メーカー（Ａ＋ｍｅｒｓｈａ＊）の指 示にしたがって行い、−重鎖ファージＤＮＡが、Ｓａｎｇｅｒらの方法によって 配列の決定をするのに用いられる。

実施例５　ペプチド類の合成 りローンのＣ末端配列に対応するペプチドを固相で合成しくＭｅｒｒｉｒｉｅｌ ｄ、　１９６３年）、活性基を保護する。ＨＦで開裂させた後、ペプチドを、Ｈ ｅ１ｐＨ２の存在下、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ　ＴＳＫ−ＨＩＩＵＯ−８（Ｍｅｒｃ ｋ）を用いるゲル濾過法で精製し、次いで凍結乾燥する。

ペプチドの純度を薄層クロマトグラフィと逆相ＨＰＬＣでチェックする。ペプチ ドの同一性は、酸加水分解した後アミノ酸を分析することによりチェックする。

得られたペプチドを、グルグルアルデヒドを用いてウシアルブミンに接合（ｃｏ ｎｊｕｇａｔｅ）させる。すなわちペプチド（１，５μ識ｏｌ）を、担体タンパ ク質（２１１！９）とともにリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７に溶解し、次ぎにｐ Ｈを重炭酸ナトリウムで８に調節する。２．５％グルタルアルデヒド溶液（２０ μＱ）を、常に撹拌しながら、３日間毎日添加する。４日後、混合物を０．１５ Ｍ　ＮａＣ１に対して透析する。

実施例６−：　Ｐ３０抗原の予防接種特性免疫吸着法もしくはＨＰＬＣ法で精製 された、抗Ｐ３０抗体で認識される抗原１５ｈｆを用い、Ｙａｉｔｕｋａｔｉｓ らの方法（１９７１年）によってラビットの免疫化を行う。１ケ月後に、追加免 疫の筋肉注射この発明によるプライマーｌと２をＰＣＲ法に用い、下記の３段階 で各々定義される増幅サイクルを３０回実施する。

＊ＤＮ＾を９４℃で１分間保持して変性させる；＊プライマーを、５５℃で２分 間、−重鎖ＤＮＡと雑種形成させる。

＊新しいストランドを７２℃で合成する。

この反応は、２Ｎのプライマー（０，５μＭ）のデスオキンクレオチド類（ｄＣ ＴＰ、　ｄＧＴＰ、　ｄＡＴｒ’、　ｄＴＴＰ、各々最終的に２００μＭ）、１ μ９のＤＮＡおよび２．５単位のＴａｇポリメラーゼ（ＧＥＴＵＳ）の混合物の 存在下で行う。これらの段階の自動化をＰｅｒｋｉｎ　Ｅ１ａ＋ｅｒ　ＣｅＬｕ ＋＋“ｃｙｃｌｅｒ”によって確実に行った。

２％アガロースゲルでの分析で大きさが２５０ｂｐと測定された一重鎖の増幅が 、上記の条件下で達成されたが、予想どおりのものである。式（ＩＶ）で定義さ れるこの発明のオリゴヌクレオチドプローブの用途は、同じバンドをサザン雑種 形成させて、この発明の特異性を証明することによって開発することができる。

ヒトＤＮＡのタキシイトＤＮＡの希釈実験によって、１０のタキシイトと当量の この技術の検出しきい値を決定することができる。

上記の反応は、ヒト、ミュレイン（ｍｕｒｉｎｅ）もしくはニシンのＤＮＡが増 幅産物を与えないことから、トキソプラズマ・ゴンノのＤＮＡに対して特異的で ある。

実施例８：挿入断片ＧＰＩ’　５のクローン化：ｃＤＮ＾クローンｐ　−３０， ８の挿入断片は、λｇｒｌｏベクター中のゲノムＤＮＡのライブラリーのスクリ ーニングに役立つ。トキソプラズマ・ゴンジのゲノムＤＮ＾のフラグメントに相 当するもので本願発明者らがＧ４２と命名した、１，６００塩基の挿入断片を有 するクローンを単離した。

フラグメントｐｓＬ　Ｉ　−ｐｓｔ　Ｉのサブクローニングによって、クローン ＧＰＰ　５の特定決定と配列の決定がなされる。

上記のことから分かるように、この発明は、より明確に述べた製法と用途につい ての実施例に限定するものではなく、また、当業者は、この発明の範囲から逸脱 することなく改変することができる。

国際調査報告 一肯一−１−−−−ｗａＫ＋ｒ／ＦＲ８９１００３２２

Claims (33)

【特許請求の範囲】
1. １．ヌクレオチド塩基の下記式（Ｉ）：【配列があります】（Ｉ） を有し、抗Ｐ３０抗体によって認識されるタンパク質をコードすることを特徴と する核酸配列。
2. ２．上記式（Ｉ）の配列の少なくとも１つのフラグメントを有し、および下記式 （ＩＩ）： 【配列があります】（ＩＩ） のヌクレオチド塩基の配列を有することを特徴とする核酸配列。
3. ３．請求項１もしくは２のヌクレオチド配列のフラグメントで構成されているこ とを特徴とするオリゴヌクレオチド。
4. ４．下記式（ＩＩＩ）： 【配列があります】（ＩＩＩ） の配列を有することを特徴とする請求項３のヌクレオチド。
5. ５．下記式（ＩＶ）： 【配列があります】（ＩＶ） の配列を有することを特徴とする請求項３のヌクレオチド。
6. ６．下記式（Ｖ）： 【配列があります】（Ｖ） の配列を有することを特徴とする請求項３のヌクレオチド。
7. ７．合成によって得られることを特徴とする請求項３〜６のいずれか１つに記載 のオリゴヌクレオチド。
8. ８．各プライマーが請求項１〜６のいずれか１つのヌクレオチド配列もしくはそ のフラグメントを有することを特徴とするトキソプラズマ・ゴンジの核酸合成用 のプライマーの対。
9. ９．適切ないずれかの手段で有利に標識をつけることができることを特徴とする 請求項８のプライマーの対。
10. １０．前記核酸の合成用に、請求項６の式（Ｖ）のオリゴヌクレオチドと対にな っている請求項４の式（ＩＩＩ）のオリゴヌクレオチドで構成されていることを 特徴とする請求項８もしくは９のプライマーの対。
11. １１．放射性同位元素、適切な酵素、蛍光色素のような標識またはその外の化学 的修飾もしくは抗体によって標識をつけることができる請求項１〜６のいずれか １つのヌクレオチド配列もしくはそのフラグメントを有することを特徴とするヌ クレオチドプローブ。
12. １２．請求項５の式（ＩＶ）のオリゴヌクレオチドによって構成されていること を特徴とする請求項１１のプローブ。
13. １３．抗Ｐ３０抗体によって認識され、そのアミノ酸の配列（ＶＩ）が、請求項 １の配列（Ｉ）由来のもので下記式：【配列があります】（ＶＩ） で表されることを特徴とする抗原性を有するタンパク質および／またはそのフラ グメント。
14. １４．アミノ酸の下記配列（ＶＩＩ）：【配列があります】（ＶＩＩ） を有し、抗Ｐ３０抗体によって認識され、請求項１３の式（ＶＩ）のタンパク質 のＣ末端画分に相当することを特徴とするペプチド。
15. １５．Ｎ末端アミノ酸がアセチルシステインで、前記ペプチドがアミノ酸の下記 配列（ＶＩＩＩ）：【配列があります】（ＶＩＩＩ） を有することを特徴とする請求項１４のペプチド。
16. １６．請求項１４もしくは１５のペプチドで構成され、輸送タンパク質に共有結 合していることを特徴とする抗原性を有する接合体。
17. １７．輸送タンパク質がウシのアルブミンで構成されていることを特徴とする請 求項１６の接合体。
18. １８．抗Ｐ８０抗体によって認識され、そのアミノ酸配列（ＩＸ）が請求項２の 配列（ＩＩ）由来のもので下記式：【配列があります】（ＩＸ） で表されることを特徴とする抗原性を有するタンパク質および／またはそのフラ グメント。
19. １９．式（Ｉ）のＤＮＡ配列を挿入された組換え体発現ベクターによって発現さ れ、分子量が１２０ｋＤａであることを特徴とする請求項１３のタンパク質の発 現産物。
20. ２０．トキソプラズマ・ゴンジの抗原タンパク質のタンパク質に相当する６ｋＤ ａのペプチドフラグメントを有し、請求項１３の式（ＩＶ）のタンパク質と同一 で、抗Ｐ３０抗体で認識される少なくともひとつの抗原決定基を有することを特 徴とする請求項１９の発現産物。
21. ２１．請求項１の式（Ｉ）のＤＮＡ挿入断片を有することを特徴とする組換え体 プラスミド。
22. ２２．アンスティテコパスツール所属のラコレクシオンナシオナルドキュリチュ ールドミクローオルガニスムに１９８８年６月２４日付けで寄託番号１−７７３ 号で寄託されたことを特徴とする請求項２１の組換え体プラスミド。
23. ２３．請求項２の式（ＩＩ）のＤＮＡフラグメントを含むＤＮＡ挿入断片を有す ることを特徴とする組換え体プラスミド。
24. ２４．アンスティテコパスツール所属のラ・コレクシオンナシオナルドキュリチ ュールドミクローオルガニスムに１９８９年６月２２日付けで寄託番号１−８７ ６号で寄託されたことを特徴とする請求項２３の組換え体プラスミド。
25. ２５．活性成分、請求項１３の式（ＶＩ）のタンパク質および／または請求項１ ８の式（ＩＸ）のタンパク質および／または請求項１４の式（ＶＩＩ）のペプチ ドもしくは請求項１５の式（ＶＩＩ）のペプチドおよび／または抗Ｐ３０抗体に よって認識される請求項１６ちしくは１７のいずれか１つの接合体を含有するこ とを特徴とするトキソプラズマ症の診断剤。
26. ２６．活性成分、請求項１〜６のいずれか１つの核酸配列および／またはそのフ ラグメントを含有することを特徴とする診断剤。
27. ２７．活性成分、請求項１３〜１８のいずれか１つの、タンパク質および／また はペプチドおよび／または接合体および任意に少なくとも１つの適切な医薬品賦 形剤を組合せることを特徴とするトキソプラズマ症に対して有意な防護を行うよ う構成されたワクチン。
28. ２８．請求項２５もしくは２６のいずれか１つの少なくとも１つの診断剤を用い ることを特徴とする、トキソプラズマ症の特に急性トキソプラズマ症と先天性ト キソプラズマ症を検出しおよび／または監視する方法。
29. ２９．以下に抗原画分と呼ぶ請求項２５の診断剤を、検査すべき生物学的試料と 接触させ、抗Ｐ３０抗体が試験すべき生物学的試料内に存在している場合、前記 抗原画分と抗Ｐ３０抗体との結合を測定し、前記複合体を適切に展開することを 特徴とする請求項２８の検出方法。
30. ３０．請求項１１のプローブで表される診断剤を、適切に処理された生物学的試 料と接触させ、その核酸がプローブに近付くことができ、さがしているトキソプ ラズマが存在している場合に有効な雑種形成を行えるようにし、雑種形成されて いないプローブを除去し、ＤＮＡプローブの適切な検出が雑種形成で維持される ことを特徴とする請求項２８の検出法。
31. ３１．雑種形成の前に、適切な条件下で、検出すべき核酸を、請求項８〜１０の いずれか１つの少なくともひとつのブライマーの対と接触させ、前記核酸の少な くとも１つのフラグメントを増幅させることを特徴とする請求項３０の検出法。
32. ３２．請求項１３〜１８のいずれか１つのタンパク質および／またはペプチドお よび／または接合体の適切な量および必要に応じて陽性のの対照、陰性の対照お よび他の適切な試薬を含有することを特徴とする生物学的試料中のトキソプラズ マ・ゴンジの検出に用いるキットもしくは器具。
33. ３３．請求項１１のプローブの適切な量と、任意に請求項８〜１０のいずれかひ とつの少なくとも１つの適切なプライマーの対の適切な量と、必要に応じてトキ ソプラズマ・ゴンジの核酸の対照製剤と他の適切な試薬を含有することを特徴と する生物的試料中のトキソプラズマ・ゴンジ検出用のキットもしくは器具。