JPH03244367A - 免疫増強用食品添加剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ヒト特に乳幼児の免疫機能を増強する効果を
有し無毒性の免疫増強用食品添加剤に関するらのである
。

〔従来の技術〕

ヒト特に幼令期及び老令期においては、一般に免疫臓器
、免疫細胞の働きが弱く、下痢等の消化器系又は呼吸系
の感染症の発生が多く見られる。

現在、これらの疾病の予防、治療に種々の抗１゜ 生物質、サルファ剤等の抗菌剤が使用されているが、そ
の効果は必ずしも十分とは云えず、しかも近午抗性物質
等の抗菌剤はその残留や薬剤耐性菌の出現等により制限
される傾向にある。

そこで、これらの感染症の予防効果を有する抗性物質等
の抗菌剤ではない薬剤の開発は要望されているところで
ある。

近手、ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｃａｌｍａｔｔｅ−
Ｇｕｅｒｉｎ）又はノカルデア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）等
の微生物から分離された細胞壁成分に免疫増強作用があ
り、その成分がペプチドグリカンであることが見出され
た（’Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａ
ｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ”、第５２巻、１５７１
頁、１９７４年；　　”Ｃａｎｎ　　、第６９巻、６６
９頁、１９７６年：　　”Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ　ａｎｄ　１ｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ”第４
巻、第９５頁、１９７８手）、その後、自然界に広く分
布し、内毒素の存在の心配がないダラム陽性菌が注目さ
れ、既に一部のダラム陽性菌から得られたペプチドグリ
カンが子豚に対して免疫増強効果を有し、しかも体重増
加効果もあったことが見出されている（“Ｊａｐａｎｅ
ｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　
５ｃｉｅｎｃｅ　、第４９巻、第２３５頁、１９８７年
）。

〔発明が解決しようとする課題〕

上記の自然界に広く分布するダラム陽性菌を利用して、
ヒト特に乳幼児に対し免疫を増強する物質を得、このも
のを食品に添加してヒトの免疫を増強し、消化器系、呼
吸器系の感染症を予防する免疫増強用食品添加剤を提供
することが本発明の目的である。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者は先に、幼令期の家畜、家禽に対し優れた体重
増加効果と免疫増強効果を有し、しかちその物質はビフ
ィドバクテリウム属の菌体の莢膜を除去しただけのちの
で十分その効果を奏することを見出し、同物質を含む飼
料を特願昭６３−１６０９６９号として出願した。

本発明者は、この菌体の莢膜を除去しただけの菌体を家
畜でなくヒトに対する免疫増強に用いることにより更に
ヒトの健康の増進に寄与する目的で鋭意研究を重ねたと
ころ、大腸菌、サルモネラ食中毒菌並びにネズミチフス
菌などの病原性の強い微生物に対し、本莢膜除去菌体が
防御活性及び高い免疫増強活性を示すことを確認し、し
かも無毒性のある試験結果を得て、この物質を食品に添
加し、ヒトに喫食させて健康を保持する食品添加剤を完
成した。

本発明は、莢膜を除去した菌体を有効成分とする免疫増
強用食品添加剤である。

本発明の菌は、いずれの細菌及び酵母であってちよいが
、ビフィドバクテリウム・インファンテス（Ｂｉｆｉｄ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　１ｎｆａｎｔｉｓ）のようなビ
フィドバクテリウム属細菌、バチルス・サブチリス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）のようなバチルス
属細菌、コリネバクテリウム・オビス（Ｃｏｒｙｎｅｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ　ｏｖｉｓ）のようなコリネバクテリ
ウム属細菌、アクチノマイセス・ピオゲネス（Ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）のようなアクチノ
マイセス属細菌、ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌ
ａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）
のようなラクトバチルス属細菌、ストレプトコッカス・
フィカアレス（Ｓｔｒｅｐｚｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｃｃ
ａｌｉｓ）のようなストレプトコッカスｌＫ［ｉ及びス
タフィロコッカス・コーニイ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ　ｃｏｈｎｉｉ）のようなスタフィロコッカス属
に属する細菌並びにクルイベロミセス・ラクティス（Ｋ
ｌｕｙｖｅｒｓｍｙｃｅｓ　１ａｃｌｉｓ）、サツカロ
ミセス・セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃ
ｅｒｖｉｓｉａｅ）のような酵母が用いられる。特に好
ましい菌としてはビフィドバクテリウム属の細菌である
。

本発明の莢膜を除去した菌体を得るには菌体を酵母等を
使用せずに、界面活性剤で処理するか、または菌体を攪
拌又は振盪処理することにより得ることができる。界面
活性剤による処理は、菌体を界面活性剤溶液に懸濁する
ことによってち行うことができるし、また菌体を予め水
又は緩衝液に懸濁し、これに界面活性剤を加えることに
よってち行うことができる。また、攪拌又は振盪処理す
る場合は、本操作を行う前に自己融解酵素を不活化し、
菌体の細胞壁を保護しておくと好都合である。

以上のようにして得られた莢膜を除去した菌体は莢膜が
除去され細胞壁が露呈した菌体で、その細胞壁は例えば
ダラム陽性菌の細胞壁はペプチドグリカンと多糖あるい
はティコ酸等を主成分とするその菌特有の構造物とが共
有結合した袋状の構造物であって、細胞質膜に外接し、
菌体の形状保持と共に細胞質膜とその機能とを各種の外
部刺激から保護する作用をしている。

特にペプチドグリカン部分は、免疫増強効果の中心とし
重要であるばかりでなく、細菌細胞全体の形状維持に重
要な役割を担っている。すなわち、ペプチドグリカンは
Ｎ−アセチルグルコサミン及びＮ−アセチルムラミン酸
から成るグルカン鎖とペプチド鎖とが網目状に結合して
三次元構造を構築し、全体として水不溶性で、かつ物理
的に極めて堅固な巨大ポリマーを形成している。

以上のようにして得られる莢膜を除いた菌体は、そのま
＼使用してもよいが、更に凍結乾燥等により固体状にし
て本発明の有効成分とする。

以上のようにして得られる莢膜を除いた菌体は、これを
澱粉等の可食性増量剤により粉末又は細粒状にするか、
又は水溶液にした液状として本発明の免疫増強用食品添
加剤とする。

この免疫増強用食品添加剤は乳幼児の免疫増強に食品例
えばドリンク剤、清涼飲料、菓子、乳児用飲料、乳児用
菓子等に添加して使用される。

ヒトに対する使用量は、通常、体重１　ｋｇ　１日当り
１０μｇ乃至１ｍｇ程度摂取できるように適宜の方法に
より添加する。

次に本発明の実施例並びに有効成分である莢膜を除いた
菌の免疫増強効果、毒性について述べる。

〔実施例〕

ビフィドバクテリウム・インファンテス（Ｂｉｆｉｄｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　１ｎｆａｎｔｉｓ）ＡＴＣＣ１５
６９７を常法によって培養し、得られた湿菌体１０’Ｏ
ｇを０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，Ｏ）　１．５０
に懸濁し、７０℃で４５分間加熱し、菌自体が保有する
自己融解酵素を不活化させ、流水中で、急冷後、３７℃
で２４時間攪拌した。その後、３．５００ｒｐｍで２０
分間遠心して菌体を集め、更に１回精製水に懸濁し、８
．５０Ｏｒｐｍで１５分間遠心洗浄を行って菌体を回収
した。これを凍結乾燥し、乾燥物として莢膜を除いたビ
フィドバクテリウム・インファンテス菌体１３ｇを得た
。

以上の如くして得られた菌体中に免疫増強物質であるヘ
キソサミン（主成分がＮ−アセチルグルコサミン及びＮ
−アセチルムラミン酸）がＭｏｒｇａｎ−Ｅｌｓｏｎ法
及びＤｉｓｃｈｅ−Ｂｏｒｄｅｎｆｒｅｕｎｄ法（イン
ドール・塩酸法）で分析したところ、それぞれ２．８９
％及び３．９８％であった。

このようにして得られた菌体を澱粉で希釈し食品添加剤
を得た。

この菌体を用いて大腸菌、サルモネラ食中毒菌及びネズ
ミチフス菌に対する免疫増強試験を行った。

試験例１ 試験動物はＩＣＲ系マウス維（６週令）で、各投与群及
び非投与群とｉ０匹供試した。攻撃微生物は大腸菌（Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ敗血症型）、サルモネ
ラ食中毒菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｅｏｔｅｒｉｔｄ
ｉｓ、食中毒由来株）、不ズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、　ＡＴＣＣ１３１
１株）である。

実施例で製造した凍結乾燥菌体の投与群は１匹当り菌体
量を１０００μｇ、５００μｇ、　１００μｇ、５０μ
ｇ、２５μｇの５群及び非投与群（対照群）とした。

乾燥菌体の投与は各微生物による攻撃７日前、２日前に
腹腔内に投与した。攻撃菌量は大腸菌が２．１　ｘ　１
０８ＣＦＵ／匹、サルモネラ食中毒菌が２．４Ｘ１０７
　ＣＦＵ／匹、ネズミチフス菌が２．９　Ｘ　１０’Ｃ
ＦＵ／匹で何れもマウスの腹腔内に接種した。効果の判
定はその生存率を指標として行い、生存率は次式により
算出した。

◎：　（≧７５％、極めて有効） Ｑ：（５０〜７５％、有効） ユニ（２５〜５０％、や＼有効） ×、（≦２５％、無効） とし、 生存率＝（乾燥菌体投与群生存区数一対照生存匹群）３
群のマウス区数×１００ 以上の結果を次の第１表に示す。

第１表 上記試験結果から明らかなように、大腸菌及びサルモネ
ラ食中毒菌（２５μｇの投与群の有効を除いて）におい
ては各投与群とも極めて有効であった。またネズミチフ
ス菌（（ＩＯＣＦＵ／匹でマウスが死亡）では５０μｇ
の投与群以下が無効であったが、１００μｇ以上の投与
群ではかなり有効であった。

なお、無投与対照群は各攻撃微生物による攻撃後１日か
ら５日の間に全て死亡した。

上記の試験から、本発明の有効成分である莢膜を除いた
菌体は、マウス試験で大腸菌、ナノ５モネラ食中毒菌及
びネズミチフス菌のような病原性の強い微生物に対し、
防御活性を有し、高い免疫増強活性を有することが明ら
かである。

次に毒性試験について述べる。

試験例２ 試験動物としてＩＲＣ系マウスの雄及び雌（６週令、体
重２１±２ｇ）を用いた。滅菌生理食塩水に懸濁した実
施例で得た菌体を体重１　ｋｇ当り５■、１０■及び１
００■の各投与量で１０日間連日投与した。１群ｌＯ匹
とし、投与後１ケ月観察し、死亡したマウスの数を調べ
た。

試験結果は第２表の通りであった。

（以下余白） 第２表 以上の試験結果より明らかなように、各投与量で死亡し
たマウスは見られず、しかも抗原性のある物質を連続投
与した際に見られる急性毒性の一種であるアナフラキシ
ーも観察されなかった。

〔発明の効果〕

本発明は、ヒト特に乳幼児の免疫を全く毒性なく増強し
、羅患し易い感染症の予防を食品に添加して為し得る極
めて有用な発明である。

特許出願入夫　挽　輝　武（外１名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、莢膜を除去した菌体を有効成分とする免疫増強用食
   品添加剤。 ２、菌体がビフィドバクテリウム属に属する細菌の菌体
   である請求項１記載の免疫増強用食品添加剤。