JPH0322994A

JPH0322994A - 抗腫瘍活性物質ｓａｔｓ６５０４

Info

Publication number: JPH0322994A
Application number: JP1155883A
Authority: JP
Inventors: Kazuyoshi Yazawa; 一良矢澤; Kaoru Yamada; 薫山田; Kunikazu Sakai; 酒井　邦和; Sei Kondo; 近藤　聖
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1989-06-20
Filing date: 1989-06-20
Publication date: 1991-01-31

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本物質は、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属に属する黴生物
の生産する新規な抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０４誼物
質を生産する微生物、及び譲物質の製造方法に関する．〔従来の技術〕癌治療の分野において化学療法剤の進歩はめざましいも
のがあるが、まだ不満足な点が多い．かような段階にあ
る現在、癌治療剤の開発をめざして、天然からの抗腫瘍
活性物質の単離は重要な課題となっている．ビブリオ馬から分離された抗！ｌ！瘍活性物質について
は、い《つかの報告（Ｏｋｕｔａｎｉ　Ｉｔ．Ｂｕｌｌ
．Ｊａｐａｎ，Ｓｏｃ．Ｓｃｉ．Ｆ１ｓｈ．．４３．３
２３−３２８　（１９７７）はか）があるが、それらの
活性については、十分満足の行くものではない．〔発明が解決しようとする課題〕従って本発明は、抗腫瘍活性物質源として従来ほとんど
研究されていなかった海洋性微生物から高活性の新しい
タイプの抗腫瘍活性物質を得ようとするものである．本発明者等は、海洋性微生物を扱う際にしばしば遭遇す
る種々の困難を解決し、広く海洋性微生物を研究した結
果、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属に属する新ｍ微生物が
新しいタイプの抗膳瘍活性物質を生産することを見出し
、かつ本活性物質の活性が、従来のビブリオ（Ｖｉｂｒ
ｉｏ）ｒＩＡより分離された物質より１００〜１０００
倍も高いこと、また化学的賭性状も異なる物質であるこ
とを見出し、本発明を完威した．従って本発明は、ビプリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の黴生物
により生産される新規抗謙瘍活性物質ＳＡＴ３６５０４
、該物質を生産するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の新ｍ
ｌｋ生物、及びｔｔ微生物を培養し、この培養物から前
記抗腫瘍活性物質を採取することを特徴とする該抗謙瘍
活性物質の製造方法を提供しようとするものである．本発明の抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ　　６５０４は次の性
質を有する．１．分解点；ｚｉｏ〜２８０℃の間で褐変し分解する．
２．比旋光度：　〔α）　Ｈｅ鵬＋２９１　”　（　ｃ
　−０．０２．ＩＩｓ’）　．３，紫外吸収スペクトル：　０．０２％水溶液のスペク
トルに２２０〜３６０ｎ一で特徴的な吸収を示さない．
このチャートを第Ｆ図に示す．４．赤外吸収スペクトル＋　ｊ［Ｂｒディスクによる測
定において３３００．　１６４０ｃｍ−付近にペプチド
による吸収を示し、８４０３−’付近に糖による吸収を
示す．このチャートを第２図に示す．５．塩基性、酸性、中性の区別＋０．２■／ｍｌの水溶
液はｌｌｌｉｌ性を示す．６．物質の色：わずかに褐色を帯びた白色．ＬｔＩ剤へ
の溶解度：水に可溶性であり、アルコール類、アセトン
、エーテル、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル等の
有機溶剤にｌ［溶又は不溶である．８．分子量：ゲル濾過法による測定では１００，０００
以上を示す．９．呈色反応ビエーレフト反応　　　　十ニンヒドリン反応フォリン反応　　　　　　十アンスロン硫酸反応　　　十システイン硫酸反応　　　十以上の知見により物質ＳＡＴＳ　　６５０４は糖及び蛋
白により構或されていると推定される．後に具体的に示
すごとく、この物質ＳＡＴＳ６５０４はマウスリンパ性
白ｍｖ４細胞Ｐ３８８を用いるＩｎ　ｖｌｔｒｏ活性賦
験において、５０％増殖阻止濃度Ｉ　Ｃｓｅ　　ａ．ｓ
ｘ　１　０−’μｇ／ｍｌを持つ極めて強力な抗腫瘍剤
である．本発明において使用する微生物は、ビブリオ（Ｖｉｂｒ
ｉｏ）属に属し、物質ＳＡＴＳ　　６５０４を生産する
事ができるものであればよく、このような微生物は自然
界から新たに分離することができる．ビブリオ（Ｖｉｂ
ｒｉｏ）に属する微生物の例として、物質ＳＡＴＳ　　
６５０４産生能を持つ微生物として本発明者等が新たに
分離し、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）漠に属する新規微生
物と同定したＳＣＲＣ−６５０４を挙げることができる
．この新菌株ピブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）漠に属する新規
微生物ＳＣＲＣ−６５０４は工業技術院漱生物工業技術
研究所に徽工研菌寄１０７８９号として・寄托されてい
る．この新薗株は次のように分離した．次の表に示す＆ｌ威の培地を調整した．酵母エキス　　
　　０．５％ベブトン　　　　　１．０％ＮａＣＩ　　　　　　　　１．５％寒天　　　１．５％水道水　　　　　　ｐｎ７．ｏこの寒天平板培地に各地の海洋より採取した海洋性サン
プルを滅菌した生理食塩水で適度に希釈したものを接種
し、２５℃で１〜２日間培養した．この寒天平板培地に
出現したコロニーを同じ培地＆Ｉｌ戒の斜面培地に約薗
した．このようにして各地の海洋より採取した海洋性サンプル
から多数の菌株を分離した．次に表の培地より寒天を抜
いたものを試験管に５ｍｌずつ分注し、同様に滅菌した
．それぞれの菌株をこの培地で２５℃、１〜２日間培養
した．このようにして、物質ＳＡＴ３　　６５Ｇ４を生
産する下記の菌株を相模湾より採取した海洋性サンプル
より得た．この新規な菌株は、次のような菌学的性質を
有する．観察項目ａ）形態１　細胞の形大きさ２　多形性の有無３　運動性の有無鞭毛の着生状態胞子の有無ダラム染色抗酸性各培地に於ける生育状態肉汁寒天平板培養（２５℃．イ）　コロニーの形状（直径）短かん薗１　．Ｏｘ　２　．０／Ｊ　ｍ無有単極毛無陰性陰性２日間〉２．０〜３．０鶴コロニーの形コロニーの表面の形状コロニーの***状態コロニーの周縁コロニーの色調コロニーの透明度コロニーの光沢可溶性色素の生成２　肉汁寒天斜薗培養（２５℃，イ）　生育の良否ｏ）　　コロニーの光沢３　肉汁液体培地（２５℃．イ）表面の生育Ｅｌ）濁度ハ）沈澱二）　ガス発生４　肉汁ゼラチン（２５℃．ゼラチン液化円形平滑台状全縫黄褐色半透明光沢無２日間）良好光沢２日間）無濁る粉状無２日間）液化５　リトマスξルクＣ）生理学的性質１　硝酸塩の還元２脱窒３　　ＭＲ４　　ＶＰ５　インドール生或６　硫化水素の生威７　デンブンの加水分解８　クエン酸利用イ）　　　ｌｌｏｓｅｔＤ）　　Ｃｈｒｌｓｔｅｎｓｅｎ９　硝酸塩の利用１０　色素生或イ）ＫｉｎｇＡ　　培地Ｄ）　　Ｋｌａｇ　Ｂ　　培地ｌ１　ウレアーゼ１２　オキシダーゼ還元・凝固・液化＋十カタラーゼ　　　　　　　＋生育の範囲ｐＨ　　　　　　　　　　　４〜１１温度　　　　　　　　１０℃〜３７℃ 酸素に対する態度　　　　通性嫌気性０−Ｆテスト（グルコース）　　Ｆ糖頻から酸及びガス生或Ｌ−アラビノースＤ−キシａ−スＤ−グルコース　　　　　＋Ｄ−マンノース　　　　　　＋Ｄ−フラクトース　　　　＋Ｄ−ガラクトース麦芽糖　　　　　　　　　十シ１糖乳糖トレハロース　　　　　　　＋Ｄ−ソルビフト　　　　　士１２．Ｄ−マンニソト　　　　　＋１３．イノシフト１４．グリセリン１５．デンブン（ただしガスの生成　全項目　一）ｄ）その他の諸性質ｓｓｙｊ天培地での生育マソコンキー寒天培地での生育　　＋６．５％Ｎａ（：ｌ耐塩性　　　　　　　　十ＤＮ　Ｉ
ｌ　ｓｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋
オルニチンの分解アルギニンの分解Ｇ◆Ｃ含量　　　　　　　　　　５２．４％ゼラチンの
分解　　　　　　　　　十ＮａＣｌ９Ｌ！求性　　　　　　　　　　　十以上のよ
うな諸性質から、本菌株ＳＣＲＣ−６５０４は下記のよ
うな特徴を持つ． ■　ダラム陰性 ■　運動性を持つ ■　非胞子形威の遣性嫌気性かん菌 Φ　Ｏ−Ｆテスト陰性 ■　カタラーゼ、オキシターゼ陽性 ■　一本の極鞭毛を持つ ■　ゼラチン、ＤＮＡ分解能を持つ ■　グルコースからの酸度生（＋）、ガス産生（−）■
　ＭａＣ１または海水要求性＠　　Ｇ＋Ｃ含量　５２．４％０　硝酸塩還元能を持つ ■　オルチニン分解ｍ　（−）このような諸性質を有する本菌株ＳＣＲＣ６５０４株の
分類学的な位置は、バージイズ・マニュアル・オブ・デ
ィタ竃ナティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢ
ａｃｔｅｒ１ｏ１ｏｇｙ）第８版、１９７４年、及びバ
ージイズ・マニュアル・オブ・システマティク・バクテ
リオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　
ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒ１ｏ１ｏｇｙ）第１
巻、１９８４年の分類基準に従って、本菌株はビプリオ
ｎｉｂｒｉｏ）属に属する新規微生物であると同定した
．以上、自然界から分離したこの新菌株について詳細に記
載したが、この菌に変異を生じさせて一層生産性の高い
菌株を得ることも出来る．この発明の菌株は、常法に従
って保存することができ、例えば寒天スラント培地上で
、または凍結乾燥法により保存することができる．寒天
スラント培地としては、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属細
菌の保存に常用されている培地、例えば菌の分離に関し
て前記した培地を使用することができる．また、凍結乾
燥保存も常法に従って行うことができる．前記の微生物
を培養して本発明の物質ＳＡＴＳ６５０４を製造しよう
とする場合、基礎栄養培地として、この発明の微生物が
増殖しうるものであればいずれを使用しても良い．この培地は、窒素源として例えば酵母エキス、ペプトン
、肉エキス等の１種類または襟数種類を含有する．また
この培地には必要に応して炭素源として各種のｔ＊＊を
加えることができる．この培地には、塩化ナトリウム、
もしくは天然海水や人工海水を加えることが必要である
．培養は固体培地または液体壇地のいずれを用いても良い
が、目的とする物’ｊｊｓＡＴｓ　　６５０４を多量に
得る為には、液体培地を用い、静２培養もしくは振とう
培養、通気、攪拌培養等にょり好気条件下で培養を行う
のが好ましい．培養温度は菌が生育し、物質ＳＡＴＳ　
　６５０４が生産される温度範囲であればいずれの温度
でも良く、好ましくは１０〜３７℃であり、より好まし
くは２０〜３０℃である．ρＨは４〜】１、好ましくは
７〜８の範囲である．培養時間は採取し得る量の物賓Ｓ
Ａ”ｒＳ　　６５０４が生産される時間を選べば良く、
好ましくは８〜４８時間である．次に得られた培養物から例えば次のようにして本発明の
物１ｉｓＡＴｓ　　６５０４が採取される．上記の培養
液をまず遠心分離によって菌体を沈めた後の上澄を０．
２μｍの滅菌フィルターを通して菌体を除去した．つい
で限外濾過により活性物質をｉｌ＄ｌｉｌＬた．これを
硅酸アンモニウムによる分画を行い、５０％の飽和硫酸
アンモニウム溶液で沈降する部分を集めた．ついで七フ
アクリルＳ−３００を用いてゲル濾過し、０　．２Ｍ　
　ＮａＣＩ水溶液で溶出させ、Ｐ３８８を用いる活性試
験で活性を示す部分を集めた．半ｉ！ｉ膜を用いて脱塩
をした後、凍枯乾燥してＳＡＴＳ　　６５０４を得た．以下実施例、及び試験例によりさらに詳しく説明するが
、この方法にのみ限定されるものではない．去−１Ｌ」４一よ　ＳＣＲＣ−６５０４　の璽１セ」レ
１底盪瘍　　　ＳＡＴＳ　６５０４の酵母エキス０．５％、ペブトン１．０％、ＮａＣｒ　ｔ
　．５％を含有し、ｐＨ７．０に！ＩＮ！Ｉｔ，た培地
１０１を１２１℃、１５分間加熱殺薗した後、ビブリオ
属に属する新規微生物ＳＣＲＣ−６５０４　（微工研菌
寄第１０７８９号）を接種し、２５℃で２４時間培養し
た．培ＩＩ後、遠心分離機で上澄を採取した．こうして
得られた墳昇上澄（１１）を滅菌フィルター（０．２μ
ｍ）をかけた後分子量３０，０００の限外濾過膜（東ソ
ー，ＴＳ−３０）を用いて４０ｍｌにＩＩＩＩＬた．こ
の濃縮液に硫安を添加し，、５０％飽和度で沈降した百
分を遠心分離にまり分取、これを約５ｍｌの水溶液とし
、セフアクリルＳ−３００カラム（２　．５ｘ　４　７
　ｃｍ）にのせ、０　．２Ｍ　　ＮａＣ１で溶出し、培
養細胞Ｐ３８８に対して増殖明害活性のある内分（Ａ）
を分取した．溶出曲線を第３図に示す．八の活性画分溶
出液を透析膜で脱塩した後、凍結乾燥し、抗腫瘍活性物
質ＳＡＴＳ　　６５０４を７６■得た．試一』（一畳　　抗４３１３３　（死逢思本発明の物質
ＳＡＴＳ　　６５０４の抗膣瘍活性を次のようにしてｆ
ｌｌｔＬ！Ｌた．マウスリンパ性白血病細胞（Ｐ３ＢＢ）を１０％牛胎児
血清含有のＩ？ＰＭＩ−１６４０培養液に加え、培養細
胞を５Ｘ１０’個／ｍｌに調整し、実施例１で得られた
物ｌＪｒＳＡＴＳ　　６５０４を所定の濃度になるよう
にし、３７℃で２日間培養した．コールターカウンター
を用い、浮遊細胞数を計数して、対照群に対する増殖阻
害率から、５０％細胞増殖阻害濃度（ＴＣＩ＠）を求め
た．結果を次の表に示す．試料ＩＣｉｏ（μｇ／１０ＳＡＴＳ　　　６５０４８．５　　ＸＩＯ−’ ＡＤＭ　（既知物質）１．３　　ＸＩＯ−” ５−ＦＵ　（既知物質）４．９　　ＸＩＯ−” さらにＰ３８Ｂ担ガンマウスに９日間投与したところ、
０．１５ａｗ／ｋｇ体重の投与量において明らかな延命
効果が見られた．

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例１で得られた物質ＳＡＴＳ　　
６５０４の紫外線吸収スペクトル図である．第２図は本発明の実施例ｌで得られた物質ＳＡＴＳ　　
６５０４の赤外線吸収スペクトル図である．第３図はセフアクリルＳ−３００カラムを用いるクロマ
トグラフィーにおける本発明の実施例ｌで得られた物質
ＳＡＴＳ　　６５０４の溶出の様子を示すグラフである
．５ｔＪ．ｎｍ１１回２　ａ　８　＆　ミ　ａ　も　＊　　Ａ　　＝＜　　＠
智嘴咎

Claims

【特許請求の範囲】１、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属に属する微生物により
生産される下記の理化学的性質を有する抗腫瘍活性物質
ＳＡＴＳ６５０４。（１）分解点：２１０〜２８０℃の間で褐変し分解する
；（２）比旋光度：（α）■＝＋２９１゜（ｃ＝０．０２
、Ｈ＿２Ｏ）；（３）紫外線吸収スペクトル：０．０２％水溶液のスペ
クトルに２２０ｎｍ〜３６０ｎｍの範囲で特徴的な吸収
を示さない；（４）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒディスクによる測
定において３３００ｃｍ＾−＾１及び１６４０ｃｍ＾−
＾１付近にペプチドによる吸収を示し、８４０ｃｍ＾−
＾１付近に糖による吸収を示す；（５）塩基性、酸性、中性の別：０．２ｍｇ／ｍｌの水
溶液は弱酸性を示す；（６）溶剤への溶解性：水に可溶であり、アルコール類
、アセトン、エチルエーテル、ヘキサン、クロロホルム
、酢酸エチル等の有機溶剤に難溶又は不溶である；（７）分子量：ゲル濾過法により測定した場合、１００
，０００以上である；（８）次の呈色反応を示す：ビューレット反応＋ニンヒドリン反応− フォリン反応＋アンスロン硫酸反応＋システイン硫酸反応＋。２、請求項１に記載の抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０４
を生産するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属微生物。３、前記微生物がビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）ｓｐ、ＳＣ
ＲＣ６５０４（微工研菌寄第１０７８９号）である請求
項２に記載の微生物。４、請求項２に記載の微生物を培養し、その培養液から
請求項１に記載の抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０４を採
取することを特徴とする抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０
４の製造方法。