JPH0314300B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]

本発明は、生理活性物質FA−5859、その誘導
体、それらの製法および製剤に関する。 従来、脂肪酸分解阻害作用を有する化合物とし
ては、４−ペンテノン酸（４−pentenoic acid）
〔P.C.Hollandら，バイオケミカル・ジヤーナル
（Biochemical Journal）136巻157頁及び173頁、
1973年、H.S.A.Sherrattら、バイオケミカル・フ
アーマコロジー（Biochemical Pharmacology）
25巻743頁、1976年参照）〕、ハイポグリシン
（Hypoglycin）〔H.S.A.Sherrattら、バイオケミ
カル・フアーマコロジー（Biochemical
Pharmacolgy）25巻743頁，1976年参照〕，デカ
ノイール・カルニチン（decanoyl−(十)−
carnitine及び２−ブロモパルミトイール・コエ
ンザイムＡ（２−bromopalmitoyl CoA）〔I.B.
Fritzら，プロシーデイングス・オブ・ザ・ナシ
ヨナル・アカデミー・オブ・サイエンス
（Proceedings of the National Academy of
Sciences）U.S.A.54巻1226頁，1965年参照〕など
が知られているが、毒性及び作用の点から臨床的
には使用されていない。メチル−２−テトラデシ
ルグリシデート及び２−テトラデシルグリシデー
ト（methl−２−tetradecylglycidate，２−
tetradecylglycidate）（G.F.Tutwilerら，デイア
ベーテス（Diabetes）28巻242頁，1979年及びメ
ソード・イン・エンザイモロジー（Methods in
Enzymology）72巻533頁，1981年参照〕は脂肪
酸分解阻害作用を有し、且つ経口で血糖低下作用
を示すことが知られている。 近年、次第に増加を続ける糖尿病及びその合併
症に対して、新しい作用機作に基き、且つより有
効な糖尿病治療薬の開発が期待されている。すな
わち、糖尿病においては、インスリン欠乏のため
脂肪組織での脂肪酸の遊離が促進されるので、肝
臓への脂肪酸供給が増加し、同時に脂肪酸の分解
も亢進するためケトン体の生成も上昇し、いわゆ
るケトン血症を呈する。また肝臓外組織ではグル
コースの利用が悪く、生成したケトン体をエネル
ギー源としている。したがつて脂肪酸の分解を阻
止すれば、ケトン体の減少にともないグルコース
の利用が亢進され、結果的に血糖値の低下をきた
すことが期待され、脂肪酸分解の特異的阻害剤は
新しい機作に基く新規糖尿病治療薬として利用し
うるものと考えられる。このような事情に鑑み、
本発明者らは新規糖尿病治療薬の開発を目的とし
て、種々検索したところ、エメリセラ属またはア
スペルギルス属に属する微生物の培養物中に脂肪
酸分解を阻害する物質を見い出し、これを単離し
たところ、該物質は新規物質であること、また優
れた脂肪酸分解阻害作用を有することを見い出
し、これを生理活性物質FA−5859と称すること
とした。 本発明者らは、生理活性物質FA−5859の化学
構造は、以下のとおりであると推定した。 本発明者らは、次いで該生理活性物質FA−
5859の誘導体を得る目的で種々研究したところ、
該生理活性物質FA−5859を加水分解して得られ
たデアセチル体は新規物質であり、しかも顕著な
脂肪酸分解阻害作用を有することを見い出し、こ
れを生理活性物質デアセチルFA−5859と称する
こととした。 本発明者らは、さらに生理活性物質デアセチル
FA−5859および生理活性物質FA−5859の化学合
成法について種々研究したところ、一般式〔２〕 ［式中、R₂はアセチル基以外の保護基を示す。］
で表わされる化合物またはその塩を保護基脱離反
応に付し、必要によりアセチル化反応に付すこと
により、また式〔３〕 で表わされる化合物またはその塩をトリメチル化
反応に付し、必要により加水分解反応に付するこ
とにより、有利に一般式〔１〕 ［式中、R₁は水素またはアセチル基を示す。］で
表わされる化合物またはその塩を製造することが
できることを見い出した。 本発明者らは、これに基づきさらに研究した結
果、本発明を完成した。 本発明は、(1) 一般式 ［式中、R₁は水素またはアセチル基を示す。］で
表わされる化合物またはその塩、 (2) エメリセラ属またはアスペルギルス属に属す
る生理活性物質FA−5859生産菌を培地に培養し、
培養物中に生理活性物質FA−5859を生成蓄積せ
しめ、これを採取することを特徴とする生理活性
物質FA−5859の製造法， (3) 式 で表わされる化合物またはその塩を加水分解反応
に付すことを特徴とする式 で表わされる化合物またはその塩の製造法、 (4) 一般式〔２〕 ［式中、R₂はアセチル基以外の保護基を示す。］
で表わされる化合物またはその塩を保護基脱離反
応に付し、必要によりアセチル化反応に付すこと
を特徴とする化合物〔１〕またはその塩の製造
法、 (5) 式〔３〕 で表わされる化合物またはその塩をトリメチル化
反応に付し、必要により加水分解反応に付すこと
を特徴とする化合物〔１〕またはその塩の製造
法、および (6) 化合物〔１〕を含有する糖尿病治療剤であ
る。 本明細書においては、化合物〔１〕において
R₁が水素である化合物を「生理活性物質デアセ
チルFA−5859」とあるいは単にデアセチルFA−
5859と、化合物〔１〕においてR₁がアセチル基
である化合物を「生理活性物質FA−5859」とあ
るいは単に「FA−5859」とそれぞれ称すること
もある。 上記一般式中、R₂で表わされるアセチル基以
外の保護基としては、たとえばｔ−ブチルオキシ
カルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メ
トキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベ
ンジルオキシカルボニルなどが挙げられる。 本発明のFA−5859（遊離形）は、次の理化学的
性質を有する。 （ａ） 元素分析（％）：（五酸化リン上で、60
℃、10時間減圧乾燥したもの） Ｃ 51.16±2.0 Ｈ 9.06±1.0 Ｎ 13.26±1.0 （ｂ） 分子量：2.4〜3.3×10²（H₂O） （VPO法による） （ｃ） 比旋光度：〔α〕D²³−17.4゜±3゜（ｃ＝１，
H₂O） （ｄ） 紫外線吸収スペクトル：特異吸収を示さ
ない。 （ｅ） 赤外線吸収スペクトル：〔臭化カリウム
錠による吸収スペクトルの主な吸収（波数）〕 1660，1590，1485，1400，1325，1292，
970，945（cm^-1） （ｆ） 溶剤に対する溶解性： 不溶：石油エーテル、ヘキサン、ジエルチル
エーテル、ベンゼン、酢酸エチル、クロロホル
ム 難溶：ピリジン、アセトン、ジメチルスルフ
オキシド、ジメチルホルムアミド 可溶：エタノール、メタノール 易溶：水 （ｇ） 呈色反応： 陽性：ヨード反応 陰性：グレイグ・リーバツク反応、ニンヒド
リン試薬、坂口反応、モーリツシユ試薬、エー
ルリツヒ試薬。 （ｈ） 塩基性、酸性、中性の区別：両性物質 （ｉ） 物質の色：無色 FA−5859は、エメリセラ属またはアスペルギ
ルス属に属する生理活性物質FA−5859生産菌を
培地に培養し、培養物中に生理活性物質FA−
5859を生成蓄積せしめ、これを採取することによ
り製造することができる。 該方法で用いることができる微生物としては、
エメリセラ（Emericella）属またはアスペルギ
ルス（Aspergillus）属に属し生理活性物質FA−
5859を生産する菌であればいずれでもよい。その
例としては、たとえばエメリセラ・カドリリネア
ター（E.quadrilineata），エメリセラ・ニードラ
ンス・バール・アクリスターター（E.nidulans
var.acristata），エメリセラ・クライストミヌタ
ー（E.cleistominuta），エメリセラ・ニードラン
ス・バール・ニードランス（E.nidulans var.
nidulans），エメリセラ・ニードランス・バー
ル・ラーター（E.nidulans var.lata），エメリセ
ラ・ルグローサー（E.rugulosa），エメリセラ・
ニードランス（E.nidulans），エメリセラ・サブ
ラーター（E.sublata），アスベルギルス・sp.No.
3704の属する種（species）などが挙げられ、さ
らに具体的には、エメリセラ・カドリリネアター
IFO5859，エメリセラ・カドリリネアター
IFO30911，エメリセラ・カドリリネアター
IFO30912，エメリセラ・カドリリネアター
IFO30850，エメリセラ・カドリリネアター
IFO30851，エメリセラ・ニードランス・バー
ル・アクリスターIFO 30063，エメリセラ・ニー
ドランス・バール・アクリスターターIFO 30844，エメリセラ・クライストミヌターIFO
30839，エメリセラ・ニードランス・バール・ニ
ードランスIFO 30872，エメリセラ・ニードラン
ス・バール・ラーターIFO 30847，エメリセラ・ルグローサーIFO 8626，エメリセラ・ルグローサーIFO 8629，エメリセラ・ルグローサーIFO 30913，エメリセラ・ルグローサーIFO 30852，エメリセラ・ルグローサーIFO 30853，エメリセラ・ニードランスIFO 5719，エメリセラ・ニードランスIFO 7077，エメリセラ・ニードランスIFO 30062，エメリセラ・サブラーターIFO 30906，アスペルギルス・sp.No.3704などが挙げら
れる。 上記IFO 5859，IFO 30063，IFO 8626，IFO
8629，IFO 5719，IFO 7077およびIFO 30062株
は、財団法人発酵研究所（IFO）発行のリスト・
オブ・カルチヤーズ第６版1978年（Institute
For Fermentation，Osaka，List of Cultures，
1978，Sixth Edition）に掲載されている。 また、IFO 30911，IFO 30912，IFO 30850，
IFO 30851，IFO 30844，IFO 30839，IFO 30872，IFO 30847，IFO 30913，IFO 30852，IFO 30853およびIFO 30906株は、財団法人発酵研究
所発行のリサーチ・コミユニケーシヨンズNo.10，
1981年（Institute For Fermentation，Osaka，
Research Communications，No.10，1981）に掲載されてい
る。 上記微生物において、エメリセラ・カドリリネ
アターの菌学的性状は日本菌学会会報第20巻第４
号481頁（1979年），トランスアクシヨンズ・オ
ブ・ザ・ミコロジカル・ソエイテイ・オブ・ジヤ
パン（Transactions of The Mycological
Society of Japan）vol.20，No.4481（1979）に、
エメリセラ・ニードランス・バール・アクリスタ
ーターの菌学的性状は菌〓研究所研究報告第12号
171頁（昭和50年西暦1975年），レポーツ・オブ・
ザ・トツトリ・ミコロジカル・インステイテユー
ト（Reports of The Tottori Mycologiacl
Institute）No.12171（1975）に、エメリセラ・クラ
イストミヌターの菌学的性状はトランスアクシヨ
ンズ・オブ・ブリテイツシユ・ミコロジカル・ソ
サイエテイ・（Transactions of The British
Mycological Society）vol.52，No.2331（1969）
に、エメリセラ・ニードランス・バール・ニード
ランスの菌学的性状はコーリヤン・ジヤーナル・
オブ・ミクロビオロジイ（Korean Journal of
Microbiology）vol.18，No.2104（1980）に、エメ
リセラ・ニードランス・バール・ラーターの菌学
的性状は、K.B.Raper，B.I.Fennell著ザ・ジー
ナス・オブ・アスペルギルス（The Genus of
Aspergillus）500頁，The Williams＆Wilkins
Company，Baltimore，1965に、エメリセラ・
ルグローサーの菌学的性状は日本菌学会会報第20
巻４号481頁（1978），トランスアクシヨンズ・オ
ブ・ザ・ミコロジカル・ソサエテイ・オブ・ジヤ
パン（Transactions of The Mycological
Society of Japan）vol.20，No.4481（1979）に、
エメリセラ・ニードランスの菌学的性状はK.B.
Raper，B.I.Fennell著ザ・ジーナス・アスペルギ
ルス（The Genus Aspergillus）495頁，The
Williams＆Wilkins Company，Baltimore，
1965に、エメリセラ・サブラーターの菌学的性状
は日本菌学会会報第20巻第４号，481頁（1979
年），トランスアクシヨンズ・オブ・ザ・ミコロ
ジカル・ソサイエテイ・オブ・ジヤパン
（Transactions of The Mycological Society
of Japan）volume20，No.4481（1979）にそれぞ
れ記載の菌学的性状と同一である。 アスペルギルス・sp.No.3704株は日本国兵庫県
川西市大和町の畑土壌より分離したかびで、以下
の菌学的性質を有する。 生 育： １） ツアペツク寒天培地 生育は遅く、24℃、２週間後のコロニーの大
きさは、1.4〜2.0cmであつた。中央がややもり
上がつたかたい菌〓よりなり、周辺は不規則
で、寒天下に深くもぐつている。表面の生育は
気菌糸が網状の拡りを呈する。黄色味を帯びた
淡青緑色を呈し、古くなるにつれて淡褐色を帯
びる。 分生子頭の数は少ない。 裏面の色は淡褐色ないし褐色を呈する。 古くなると淡褐色可溶性色素を生成する。 ２） 麦芽汁寒天培地 生育は旺盛で、24℃、２週間後のコロニーの
大きさは4.0〜5.0cmであつた。平坦で、周辺は
うすく、やや房状に縁取られている。 気菌糸はまばらである。 分生子頭の形成は非常によく、灰色を帯びた黄
緑色を呈する。 裏面は淡褐色ないし黄褐色を呈する。 可溶性色素の形成なし。 形態： 分生子頭：大きさは一定しないが、長さ75〜
100μ、直径20〜40μ、放射状であるがしだいに粗
な円筒形を呈する。 分生子柄：長さ40〜60μ，直径2.0〜4.5μ，壁面
は平滑，無色，やや湾曲する。 頂嚢：フラスコ形で頂端は平坦，直径4.5〜
7.5μ メトレ：円筒形，4.5〜6.2×2.4〜3.4μ フイアライド：〓棒形，4.5〜6.5×2.0×3.0μ 分生子：球形〜だ円形，暗緑色，直径2.5〜
3.5μ 以上の諸性質を、宇田川俊一ほか著「菌類図鑑」
（講談社，1978年）1006頁記載のアスペルギルス
属かびの諸性質と照合すると、本菌株がアスペル
ギルス属（AsPergillus）に属することは明らか
である。 上記アスペルギルス・sp.No.3704株は、財団法
人発酵研究所に昭和56年11月６日から受託番号
IFO 31171として寄託されている。また、本微生
物は、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究
所（ERI）に昭和56年11月18日から受託番号
FERM Ｐ−6224として寄託され、該寄託は、ブ
ダベスト条約に基づく寄託に切換えられて、受託
番号FERM BP−185として同研究所（FRI）に
保管されている。 エメリセラ属は分類学上アスペルギルス属のう
ち完全世代が明らかになつた株をまとめたもので
あるので、菌の有性世代や無性世代とは無関係に
FA−5859を生成する能力を有する菌株であれば、
用いることができることは言うまでもない。 エメリセラ属菌およびアスペルギルス属菌は、
微生物の一般的性質として自然的にまたは変異剤
によつて変異を起し得る。たとえばＸ線、ガンマ
ー線、紫外線等の放射線の照射、更には単胞子分
離、種々の薬剤による処理または薬剤を含有する
培地上での培養、その他の手段で変異させて得ら
れる多くの変異株、あるいは自然的に得られた突
然異株等であつても、FA−5859を生産する性質
を有するものはすべてFA−5859の製造方法に利
用し得る。 FA−5859の製造方法の培養に用いられる培地
は用いられる菌株が利用し得る栄養源を含むもの
なら、液状でも固状でもよいが、大量を処理する
ときには液体培地を用いるのがより適当である。
培地には同化し得る炭素源、消化し得る窒素源、
無機物質、微量栄養素が適宜配合される。炭素源
としては、たとえばブドウ糖，乳糖，シヨ糖，麦
芽糖，デキストリン，でん粉，グリセリン，マン
ニトール，ソルビトール，油脂類（例、大豆油，
オリーブ油，ヌカ油，ごま油，ラード油，チキン
油など）、各種脂肪酸類（例、ラウリン酸，ミリ
スチン酸，パルミチン酸，ステアリン酸，オレイ
ン酸など）、窒素源としては、たとえば肉エキス，
酵母エキス，乾燥酵母，大豆粉，コーン，スチー
プ，リカー，ペプトン，綿実粉，廃糖蜜，尿素，
アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウム，塩化
アンモニウム，硝酸アンモニウム，酢酸アンモニ
ウムなど）その他が用いられる。さらにナトリウ
ム，カリウム，カルシウム，マグネシウムなどを
含む塩類，鉄，マンガン，亜鉛，コバルト，ニツ
ケルなどの金属塩類，リン酸，ホウ酸などの塩類
や酢酸，プロピオン酸などの有機酸の塩類が適宜
用いられる。その他、アミノ酸（例、グルタミン
酸，アスパラギン酸，アラニン，リジン，バリ
ン，メチオニン，プロリン等），ペプチド（例、
ジペプチド，トリペプチド等），ビタミン類（例、
B₁，B₂，ニコチン酸，B₁₂，Ｃ等），核酸類（例、
プリン，ピリミジンおよびその誘導体）等を含有
させてもよい。もちろん培地のPHを調節する目的
で無機または有機の酸，アルカリ類，緩衝剤等を
加え、あるいは消泡の目的で油脂類，表面活性剤
等の適量が添加される。 培養の手段は静置培養でも、振盪培養あるいは
通気撹拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の
処理には、いわゆる深部通気撹拌培養によるのが
望ましいことはいうまでもない。培養の条件は培
地の状態，組成，菌株の種類，培養の手段等によ
つて一定しないのは当然であるが、それらは通常
約15℃〜37℃の温度で、初発PH約３〜８付近に選
択するのがよい。とりわけ、培養中期の温度は約
23℃〜32℃，また初発PHは約４〜６の条件が望ま
しい。培養期間も前記諸条件により一定しない
が、該生理活性物質濃度が最大となるまで培養す
るのがよい。これに要する時間は液体培地を用い
る振盪培養または通気撹拌培養の場合は通常約１
〜８日間程度である。 生成したFA−5859は主として培養液中に存
在するので、培養物を遠心分離あるいは過によ
つて上澄液と菌体とに分離し、その上清液から精
製するのが有利である。しかし培養地から、直接
に精製することも可能である。 さらにこのFA−5859を採取するには微生物が
生産する代謝産物を採取するのに通常用いられる
手段を適宜利用することが出来る。たとえば遠心
分離によつて菌体を除去したのち、その液から
一般に有効物質を分離，採取，精製する方法を用
いる。 すなわち適当な溶媒に対する溶解性および溶解
度の差、溶液からの析出法および析出速度の差、
種々の吸着親和力の差、イオン交換体によるイオ
ン交換クロマトグラフイー，あるいは減圧濃縮，
凍結乾燥，結晶化，再結晶，乾燥などの手段が単
独あるいは任意の順序に組合わせて、または反復
して利用される。 その一例を示すと次のとおりである。すなわ
ち、培養終了後培養液を過し得られる液を弱
酸性陽イオン交換樹脂たとえばアンバーライト
IR−120（H⁺）〔ローム・アンド・ハース社（米
国）製〕のカラムに通過させると、FA−5859は
樹脂に吸着させる。樹脂からの溶出はアンモニア
水，アルカリ水，あるいは鉱酸または無機塩（た
とえば食塩，塩化アンモニウム，硫酸ソーダ，硫
酸アンモニウム）の水溶液を使用することが出来
る。ここに得られた活性物質の溶出液の脱塩には
たとえば活性炭などの吸着剤を用い活性物質をこ
れに吸着せしめたのち親水性有機溶媒系を用いて
溶出させる。親水性有機溶媒系として用いられる
ものには、アセトン，メチルエチルケトン，メチ
ルイソブチルケトンなどの低級ケトン類，メタノ
ール，エタノール，イソプロパノール，プロパノ
ール，ブタノール，イソブタノール等の低級アル
コール類の単独または混合溶媒と水との混合溶液
があげられる。また水溶性高分子物質が混在して
いる場合、これを除去するには通常用いられる分
子ふるいの方法を利用するのがよい。すなわち
FA−5859が低分子であることから、たとえばセ
フアデツクスＧ−10〔フアーマシア・フアイン・
ケミカル（スエーデン）製〕などを用いて水溶性
高分子物質を除去することができる。このように
して得られた粗物質をさらに精製するには本品が
両性物質であることを利用して、緩衝化したカチ
オン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフイー
が有利に利用出来る。すなわち、担体としては強
酸性カチオン交換樹脂たとえばアンバーライト
IR−120，ダウエツクス50（X₂）〔ダウ・ケミカル
社（米国）製〕，ダイヤオン SKlA〔三菱化成
（日本）製〕等を適当なPHたとえばPH４の緩衝液
を用いて緩衝化したものを用いる。粗物質の溶液
を通過せしめて樹脂に吸着後、溶出には吸着時の
PH値より高いPH値の緩衝液を用いて溶出する。再
度この有効区分を強酸性カチオン交換樹脂を用い
て吸着・脱離を行つて、脱塩後、さらに混在する
不純物を除く目的で、強塩基性アニオン交換樹脂
たとえば、ダウエツクス１（OH^-）〔ダウ・ケミ
カル社（米国）製〕のカラムを通過せしめて通過
液を減圧濃縮後凍結乾燥を行い、得られたシロツ
プ状物質からFA−5859の吸湿性結晶が得られる。 FA−5859は、常套手段により薬理学的に許容
し得る塩とすることもできる。該塩を形成させる
場合の酸としては、たとえば塩酸，硫酸，硝酸，
蓚酸，酢酸，コハク酸，クエン酸，フマール酸な
どが挙げられる。 後述の実施例２で得られたFA−5859（遊離体）
の物理化学的性質を以下に記載する。 （ａ） 元素分析（％）（五酸化リン上で60℃，
10時間減圧乾燥したもの）： Ｃ ： 52.48％ Ｈ ： 9.04％ Ｎ ： 13.25％ （ｂ） 分子量：2.4〜3.3×10²（H₂O） （VPO法による） （ｃ） 推定分子式：C₉H₁₈N₂O₃ （ｄ） 比旋光度：〔α〕D₂₃−17.4゜（ｃ＝１，
H₂O） （ｅ） 紫外線吸収スペクトル：210nm以上に特
異吸収を示さない。 （ｆ） 赤外線吸収スペクトル：主な吸収（波
数）は次のとおりである。 3420（ｓ），3260（sh），3080（ｍ），1660（ｓ），
1590（ｓ），1485（ｓ），1400（ｓ），1325（ｍ），
1295（ｍ），1145（ｗ），1105（ｗ），1060（ｗ），
970（ｍ），945（ｍ），（cm^-1） ｗ：弱，ｍ：中，ｓ：強，sh：肩 第１図（臭化カリウム錠）参照。 （ｇ） 溶剤に対する溶解性： 不溶：石油エーテル，ヘキサン，ジエチルエー
テル，ベンゼン，酢酸エチル，クロロホルム 難溶：ピリジン，アセトン，ジメチルスルホキ
シド，ジメチルホルムアミド 可溶：エタノール，メタノール 易溶：水 （ｈ） 呈色反応： 陽性：ヨード反応 陰性：グレイグ・リーバツク反応，ニンヒドリ
ン試薬，坂口反応，モーリツシユ試薬，エール
リツヒ試薬 （ｉ） 塩基性，酸性，中性の区別：両性物質 （ｊ） 物質の色：無色 （ｋ） 結晶の外観：無色吸湿性結晶状物質 （ｌ） 核磁気共鳴スペクトル：
（CD₃OD100MHz） 1.98（3H，ｓ），2.42（2H，ｄ），3.19（9H，ｓ），
3.56（2H，ｄ），4.7（1H，ｍ） ｓ：一重線，ｄ：二重線，ｍ：多重線 （ｍ） 安定性：PH３〜PH９の水溶液は100℃10
分加熱で安定。 後述の実施例３で得られたFA−5859塩酸塩の
理化学的性質を以下に記す。 （ａ） 元素分析（％）：（五酸化リン上で60℃，
10時間減圧乾燥したもの）： Ｃ ： 45.29％ Ｈ ： 8.18％ Ｎ ： 11.24％ Cl： 14.36％ （ｂ） 推定分子式：C₉H₁₈N₂O₃・HCl （ｃ） 融点：215℃（分解） （ｄ） 比旋光度：〔α〕D₂₃−20.5゜（ｃ＝１，
H₂O） （ｅ） 紫外線吸収スペクトル：210nm以上に特
異な吸収を示さない。 （ｆ） 赤外線吸収スペクトル：主な吸収（波
数）は次のとおりである。 3400（ｍ），3250（ｓ），3190（sh），3045（ｓ），
2600〜2400（ｗ），1730（ｓ），1660（ｓ），1530
（ｍ），1480（ｓ），1420（ｍ），1405（ｓ），1375
（ｍ），1290（ｍ），1205（ｍ），1160（ｓ），1140
（sh），1135（ｓ），1040（ｗ），960（ｗ），935
（ｍ），915（ｍ），865（ｗ），800（ｍ），665（ｍ）
，
625（ｗ），600（ｓ），560（ｗ）（cm^-1） （ｗ：弱，ｍ：中，ｓ：強） 第２図（臭化カリウム錠）参照。 （ｇ） 溶剤に対する溶解性： 不溶：石油エーテル，ヘキサン，ジエチルエー
テル，ベンゼン，酢酸エチル，クロロホルム 難溶：ピリジン，アセトン，ジメチルスルフオ
キシド，ジメチルホルムアミド 可溶：エタノール，メタノール 易溶：水 （ｈ） 呈色反応： 陽性：ヨード反応 陰性：グレイグ・リーバツク反応，ニンヒドリ
ン試薬，坂口反応，モーリツシユ試薬，エール
リツヒ試薬 （ｉ） 物質の色：無色 （ｊ） 結晶の外観：無色針状結晶 （ｋ） 安定性：PH３〜９の水溶液は、100℃，
10分加熱で安定。 FA−5859の分子式および核磁気共鳴スペクト
ルでみとめられるδ3.19ppm（9H，ｓ）のシグナ
ルからその分子中にトリメチルアンモニウム基の
存在が推定され、またδ1.98ppm（3H，ｓ）にア
セチルのメチルプロトン（CH₃CO−）2.42ppm
（2H，ｄ），3.56ppm（2H，ｄ）に２組のメチレ
ンプロトン（−CH₂−×２），δ4.7ppm（1H，ｍ）
にメチンプロトン The present invention relates to the physiologically active substance FA-5859, its derivatives, and their production methods and formulations. Conventionally, 4-pentenoic acid has been used as a compound that inhibits fatty acid decomposition.
[PC Holland et al., Biochemical Journal, Vol. 136, pp. 157 and 173,
1973, HSASherratt et al., Biochemical Pharmacology
25, p. 743, 1976)], Hypoglycin [HSASherratt et al., Biochemical Pharmacology
Pharmacolgy) Vol. 25, p. 743, 1976], decanoyl carnitine (decanoyl-(10)-
carnitine and 2-bromopalmitoyl Coenzyme A (2-bromopalmitoyl CoA) [IB
Fritz et al., Proceedings of the National Academy of Science.
Science) USA Vol. 54, p. 1226, 1965], but it is not used clinically due to toxicity and effects. Methl-2-tetradecylglycidate and 2-tetradecylglycidate
tetradecylglycidate) (GF Tutwiler et al., Diabetes 28, 242, 1979 and Methods in Enzymology)
Enzymology, Vol. 72, p. 533, 1981] is known to have an inhibitory effect on fatty acid decomposition and to exhibit a hypoglycemic effect when administered orally. BACKGROUND ART In recent years, the development of more effective antidiabetic agents based on new mechanisms of action has been expected to address diabetes and its complications, which have been increasing gradually. In other words, in diabetes, the release of fatty acids in adipose tissue is promoted due to insulin deficiency, which increases the supply of fatty acids to the liver. At the same time, the breakdown of fatty acids is also accelerated, leading to an increase in the production of ketone bodies, so-called ketone bodies. Shows bloodemia. Glucose is poorly utilized in extrahepatic tissues, and the produced ketone bodies are used as an energy source. Therefore, if fatty acid decomposition is inhibited, it is expected that glucose utilization will be enhanced as ketone bodies decrease, resulting in a decrease in blood sugar levels, and specific inhibitors of fatty acid decomposition may be used to develop a new mechanism. It is believed that this drug can be used as a new antidiabetic drug. In view of these circumstances,
The present inventors conducted various searches for the purpose of developing a new antidiabetic drug, and found a substance that inhibits fatty acid decomposition in a culture of a microorganism belonging to the genus Emericella or Aspergillus. We discovered that the substance is a new substance and has an excellent fatty acid decomposition inhibitory effect, and decided to name it the physiologically active substance FA-5859. The present inventors estimated that the chemical structure of the physiologically active substance FA-5859 is as follows. The present inventors then discovered that the physiologically active substance FA-
Various studies were conducted to obtain derivatives of 5859, and the results were as follows.
We discovered that the deacetyl compound obtained by hydrolyzing the physiologically active substance FA-5859 is a new substance and has a remarkable effect of inhibiting fatty acid degradation, and decided to name it the physiologically active substance deacetyl FA-5859. . The present inventors further discovered that the physiologically active substance deacetyl
After conducting various studies on chemical synthesis methods for FA-5859 and the physiologically active substance FA-5859, the general formula [2] [In the formula, R ₂ represents a protecting group other than an acetyl group. ]
By subjecting a compound represented by the formula or a salt thereof to a protecting group elimination reaction and, if necessary, an acetylation reaction, the compound represented by the formula [3] By subjecting a compound represented by the formula or a salt thereof to a trimethylation reaction and, if necessary, a hydrolysis reaction, the compound represented by the general formula [1] [In the formula, R ₁ represents hydrogen or an acetyl group. ] or a salt thereof can be produced. The present inventors completed the present invention as a result of further research based on this. The present invention provides (1) general formula [In the formula, R ₁ represents hydrogen or an acetyl group. ] or a salt thereof, (2) culturing in a medium a physiologically active substance FA-5859-producing bacterium belonging to the genus Emericella or the genus Aspergillus;
A method for producing the physiologically active substance FA-5859, which comprises producing and accumulating the physiologically active substance FA-5859 in a culture and collecting the same, formula (3) A formula characterized by subjecting a compound represented by or a salt thereof to a hydrolysis reaction A method for producing a compound represented by or a salt thereof, (4) General formula [2] [In the formula, R ₂ represents a protecting group other than an acetyl group. ]
A method for producing a compound [1] or a salt thereof, characterized in that the compound represented by the formula or a salt thereof is subjected to a protecting group elimination reaction and, if necessary, an acetylation reaction, (5) Formula [3] A method for producing a compound [1] or a salt thereof, which comprises subjecting the compound represented by or a salt thereof to a trimethylation reaction and, if necessary, a hydrolysis reaction, and (6) a diabetes mellitus containing the compound [1]. It is a therapeutic agent. In this specification, in compound [1]
A compound in which R ₁ is hydrogen is referred to as "bioactive substance deacetyl FA-5859" or simply deacetyl FA-5859.
5859 and the compound [1] in which R ₁ is an acetyl group may be respectively referred to as "physiologically active substance FA-5859" or simply "FA-5859." In the above general formula, protective groups other than the acetyl group represented by _R2 include, for example, t-butyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, and the like. FA-5859 (free form) of the present invention has the following physical and chemical properties. (a) Elemental analysis (%): (on phosphorus pentoxide, 60
℃, 10 hours under reduced pressure) C 51.16±2.0 H 9.06±1.0 N 13.26±1.0 (b) Molecular weight: 2.4-3.3×10 ² (H ₂ O) (by VPO method) (c) Specific optical rotation: [ α〕D ²³ −17.4゜±3゜(c=1,
H ₂ O) (d) Ultraviolet absorption spectrum: Shows no specific absorption. (e) Infrared absorption spectrum: [Main absorption (wave number) of absorption spectrum by potassium bromide tablet] 1660, 1590, 1485, 1400, 1325, 1292,
970,945 (cm ^-1 ) (f) Solubility in solvents: Insoluble: petroleum ether, hexane, diethyl ether, benzene, ethyl acetate, chloroform Slightly soluble: pyridine, acetone, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide Soluble: Ethanol, methanol Easily soluble: Water (g) Color reaction: Positive: Iodine reaction Negative: Greig-Lieback reaction, ninhydrin reagent, Sakaguchi reaction, Moritzhu's reagent, Ehrlich's reagent. (h) Distinction between basic, acidic, and neutral: Amphoteric substance (i) Color of substance: Colorless FA-5859 is produced by culturing a physiologically active substance FA-5859-producing bacterium belonging to the genus Emericella or Aspergillus in a medium. Physiologically active substances FA−
It can be manufactured by producing and accumulating 5859 and collecting it. Microorganisms that can be used in this method include:
FA- is a physiologically active substance belonging to the genus Emericella or Aspergillus.
Any bacterium that produces 5859 may be used. Examples include E.quadrilineata, E.nidulans var.
var.acristata), E.cleistominuta, E.nidulans var.
nidulans), E.nidulans var.lata, E.rugulosa, E.nidulans var.
E.nidulans, E.sublata, Asbergillus sp.No.
Species to which 3704 belongs are listed, and more specifically, Emericella quadrilineata.
IFO5859, Emericella quadrilineata
IFO30911, Emericella quadrilineata
IFO30912, Emericella quadrilineata
IFO30850, Emericera quadrilineata
IFO30851, Emericella Needlans Baal Acrystar IFO 30063, Emericella Needlans Baal Acrystar IFO 30844, Emericella Christminuta IFO
30839, Emericella Needrans Baar Needlans IFO 30872, Emericella Needlans Baar Larter IFO 30847, Emericella Legrocer IFO 8626, Emericella Legrocer IFO 8629, Emericella Legrocer IFO 30913, Emericella Legrocer IFO 30852, Emericella - Examples include Le Grocer IFO 30853, Emericella needlelans IFO 5719, Emericella needlelans IFO 7077, Emericella needlelans IFO 30062, Emericella sublator IFO 30906, and Aspergillus sp. No. 3704. Above IFO 5859, IFO 30063, IFO 8626, IFO
8629, IFO 5719, IFO 7077 and IFO 30062 shares are listed in the list published by the Institute of Fermentation (IFO).
of Cultures 6th Edition 1978 (Institute
For Fermentation, Osaka, List of Cultures,
1978, Sixth Edition). Also, IFO 30911, IFO 30912, IFO 30850,
IFO 30851, IFO 30844, IFO 30839, IFO 30872, IFO 30847, IFO 30913, IFO 30852, IFO 30853 and IFO 30906 shares are research communications No. 10 published by Fermentation Research Institute,
1981 (Institute For Fermentation, Osaka,
Research Communications, No. 10, 1981). Among the above microorganisms, the mycological properties of Emericella quadrilineata are reported in Bulletin of the Japanese Society of Mycology, Vol. 20, 4.
No. 481 (1979), Transactions of the Mycological Society of Japan.
Society of Japan) vol.20, No.4481 (1979),
The mycological properties of Emericella needlans Baal Acrystata are Bacillus Laboratory Research Report No. 12
171 pages (1975 AD), Reports of
Reports of The Tottori Mycologiacl
The mycological properties of Emericella cleistominuta are described in Transactions of the British Mycological Society (1975) No. 12171 (1975).
Mycological Society) vol.52, No.2331 (1969)
The mycological properties of Emericella needlelans are based on the Corian journal.
of Microbiology (Korean Journal of
Microbiology) vol. 18, No. 2104 (1980), the mycological properties of Emericella needrans Barr Larter are described in The Genus of Aspergillus by KBRaper and BIFennell.
Aspergillus) 500 pages, The Williams & Wilkins
Company, Baltimore, 1965.
The mycological properties of Legrocer are published in the Bulletin of the Japanese Society of Mycology, No. 20.
Volume 4, page 481 (1978), Transactions of the Mycological Society of Japan.
Society of Japan) vol.20, No.4481 (1979),
Mycological properties of Emericella needrans are KB
Raper, BIFennell, The Genus Aspergillus, page 495, The
Williams & Wilkins Company, Baltimore
In 1965, the mycological properties of Emericella sublatora were published in Bulletin of the Japanese Society of Mycology, Vol. 20, No. 4, p. 481 (1979).
2010), Transactions of The Mycological Society of Japan
of Japan) volume 20, No. 4481 (1979). Aspergillus sp. No. 3704 is a mold isolated from field soil in Yamato-cho, Kawanishi City, Hyogo Prefecture, Japan, and has the following mycological properties. Growth: 1) Zapetsk agar medium Growth was slow, and the colony size after 2 weeks at 24°C was 1.4 to 2.0 cm. The center is made of hard, slightly swollen bacteria, and the periphery is irregular, and it is deeply submerged in the agar. Aerial mycelium grows on the surface in a network-like manner. It has a pale blue-green color with a yellowish tinge, and becomes pale brown as it ages. The number of conidial heads is small. The color of the underside is light brown to brown. As it ages, it produces a light brown soluble pigment. 2) Wort agar medium Growth was vigorous, and the colony size after 2 weeks at 24°C was 4.0 to 5.0 cm. It is flat, with thin edges and slightly tufted edges. Aerial hyphae are sparse. Conidial heads are very well formed and have a grayish-yellow-green color. The underside is pale brown to yellowish brown. No soluble pigment formation. Morphology: Conidial head: size is not constant, but length is 75~
100μ, diameter 20-40μ, radial but gradually becoming rougher and cylindrical. Conidiophore: length 40-60μ, diameter 2.0-4.5μ, wall smooth, colorless, slightly curved. Apical capsule: Flask-shaped with flat apex, diameter 4.5~
7.5μ Metare: Cylindrical, 4.5~6.2×2.4~3.4μ Phialide: Rod-shaped, 4.5~6.5×2.0×3.0μ Conidia: Spherical to oval, dark green, diameter 2.5~
The various properties of 3.5 μ or more are described in the “Illustrated Encyclopedia of Fungi” by Shunichi Udagawa et al.
(Kodansha, 1978) When compared with the various properties of the Aspergillus mold described on page 1006, it is clear that this strain belongs to the Aspergillus genus. The above-mentioned Aspergillus sp.
Deposited as IFO 31171. In addition, this microorganism has been deposited with the Microbial Research Institute (ERI), Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, with accession number
The deposit was deposited as FERM P-6224, and the deposit was converted into a deposit under the Budapest Treaty and is held at the FRI under accession number FERM BP-185. The genus Emericella is a taxonomic collection of strains of the genus Aspergillus for which complete generations have been clarified, so it is independent of the sexual and asexual generations of the fungus.
If the strain has the ability to produce FA-5859,
Needless to say, it can be used. Emericella spp. and Aspergillus spp.
It is a general property of microorganisms that they can mutate naturally or by using mutagens. For example, there are many mutant strains obtained by irradiation with radiation such as X-rays, gamma rays, and ultraviolet rays, monospore isolation, treatment with various drugs or cultivation on media containing drugs, and other methods. Alternatively, any naturally obtained mutant strain that has the property of producing FA-5859 can be used in the method for producing FA-5859. The medium used for culturing in the method for producing FA-5859 may be either liquid or solid as long as it contains a nutrient source that can be used by the strain used, but it is more appropriate to use a liquid medium when processing large quantities. .
The medium contains an assimilable carbon source, a digestible nitrogen source,
Inorganic substances and micronutrients are appropriately blended. Examples of carbon sources include glucose, lactose, sucrose, maltose, dextrin, starch, glycerin, mannitol, sorbitol, oils and fats (e.g., soybean oil,
Olive oil, bran oil, sesame oil, lard oil, chicken oil, etc.), various fatty acids (e.g. lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, etc.), nitrogen sources such as meat extract,
Yeast extract, dried yeast, soybean flour, corn, steep, liquor, peptone, cottonseed flour, molasses, urea,
Ammonium salts (eg, ammonium sulfate, ammonium chloride, ammonium nitrate, ammonium acetate, etc.) and others are used. Furthermore, salts containing sodium, potassium, calcium, magnesium, etc., metal salts such as iron, manganese, zinc, cobalt, nickel, etc., salts such as phosphoric acid, boric acid, and salts of organic acids such as acetic acid, propionic acid, etc. are used as appropriate. . Other amino acids (e.g., glutamic acid, aspartic acid, alanine, lysine, valine, methionine, proline, etc.), peptides (e.g.,
dipeptides, tripeptides, etc.), vitamins (e.g.
B ₁ , B ₂ , nicotinic acid, B ₁₂ , C, etc.), nucleic acids (e.g.
Purines, pyrimidines and their derivatives), etc. may also be included. Of course, inorganic or organic acids, alkalis, buffers, etc. are added for the purpose of adjusting the pH of the medium, and appropriate amounts of oils and fats, surfactants, etc. are added for the purpose of defoaming. The culturing method may be static culture, shaking culture, or aeration/agitation culture. It goes without saying that for large-scale treatment, it is desirable to use so-called deep aeration agitation culture. It goes without saying that culture conditions vary depending on the condition and composition of the medium, the type of strain, the culture method, etc., but they are usually at a temperature of about 15℃ to 37℃ and an initial pH of about 3 to 8. It is better to select In particular, the temperature during the middle stage of the culture is approximately
Conditions of 23°C to 32°C and an initial pH of about 4 to 6 are desirable. The culture period also varies depending on the conditions described above, but it is preferable to culture until the concentration of the physiologically active substance reaches its maximum. The time required for this is usually about 1 hour in the case of shaking culture or aerated agitation culture using a liquid medium.
It takes about 8 days. Since the produced FA-5859 mainly exists in the culture solution, it is advantageous to separate the culture into a supernatant and bacterial cells by centrifugation or filtration, and then purify the supernatant. However, it is also possible to purify directly from the culture medium. Furthermore, in order to collect this FA-5859, any means commonly used for collecting metabolites produced by microorganisms can be used as appropriate. For example, after removing bacterial cells by centrifugation, effective substances are generally separated, collected, and purified from the resulting solution. That is, differences in solubility and solubility in appropriate solvents, differences in precipitation methods and precipitation rates from solutions,
Differences in adsorption affinity, ion exchange chromatography using ion exchangers, vacuum concentration,
Means such as freeze-drying, crystallization, recrystallization, and drying may be used alone, in combination in any order, or repeatedly. An example of this is as follows. That is, after the culture is completed, the culture solution is filtered and the resulting solution is treated with a weakly acidic cation exchange resin such as Amberlite.
When passed through an IR-120 (H ⁺ ) column (manufactured by Rohm and Haas (USA)), FA-5859 is adsorbed onto the resin. For elution from the resin, aqueous ammonia, alkaline water, or aqueous solutions of mineral acids or inorganic salts (eg, common salt, ammonium chloride, sodium sulfate, ammonium sulfate) can be used. To desalt the eluate of the active substance obtained here, an adsorbent such as activated carbon is used to adsorb the active substance thereto, and then the active substance is eluted using a hydrophilic organic solvent system. Hydrophilic organic solvents used include lower ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, and methyl isobutyl ketone, lower alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol, propanol, butanol, and isobutanol, and water. A mixed solution of Furthermore, if water-soluble polymer substances are present, it is preferable to use a commonly used molecular sieving method to remove them. i.e.
Since FA-5859 is a low molecule, for example, Cephadex G-10 [Pharmacia Fine
Water-soluble polymeric substances can be removed using a chemical (manufactured in Sweden). To further purify the crude substance thus obtained, column chromatography using a buffered cation exchange resin can be advantageously used, taking advantage of the fact that this product is an amphoteric substance. That is, as a carrier, a strongly acidic cation exchange resin such as Amberlite is used.
Use IR-120, Dowex 50 (X ₂ ) [manufactured by Dow Chemical Company (USA)], Diaon SKlA [manufactured by Mitsubishi Kasei (Japan)], etc., buffered with a buffer solution of an appropriate pH, for example, PH4. . After passing the crude substance solution and adsorbing it to the resin, elution involves the adsorption process.
Elute using a buffer with a PH value higher than the PH value. This effective classification is again adsorbed and desorbed using a strongly acidic cation exchange resin, and after desalting, a strongly basic anion exchange resin such as Dowex 1 (OH ^-・The filtrate is passed through a column manufactured by Chemical Co., Ltd. (USA), and the passed liquid is concentrated under reduced pressure and freeze-dried. Hygroscopic crystals of FA-5859 are obtained from the resulting syrupy substance. FA-5859 can also be converted into a pharmacologically acceptable salt by conventional means. Examples of the acid used to form the salt include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid,
Examples include oxalic acid, acetic acid, succinic acid, citric acid, and fumaric acid. FA-5859 (educt) obtained in Example 2 described below
The physicochemical properties of are described below. (a) Elemental analysis (%) (60°C on phosphorus pentoxide,
(Dried under reduced pressure for 10 hours): C: 52.48% H: 9.04% N: 13.25% (b) Molecular weight: 2.4-3.3×10 ² (H ₂ O) (by VPO method) (c) Estimated molecular formula: C ₉ H ₁₈ N ₂ O ₃ (d) Specific rotation: [α] D ₂₃ −17.4° (c=1,
H ₂ O) (e) Ultraviolet absorption spectrum: Shows no specific absorption above 210 nm. (f) Infrared absorption spectrum: The main absorptions (wave numbers) are as follows. 3420 (s), 3260 (sh), 3080 (m), 1660 (s),
1590 (s), 1485 (s), 1400 (s), 1325 (m),
1295 (m), 1145 (w), 1105 (w), 1060 (w),
970 (m), 945 (m), (cm ^-1 ) w: weak, m: medium, s: strong, sh: shoulder See Figure 1 (potassium bromide tablets). (g) Solubility in solvents: Insoluble: petroleum ether, hexane, diethyl ether, benzene, ethyl acetate, chloroform Slightly soluble: pyridine, acetone, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide Soluble: ethanol, methanol Easily soluble: water (h) Presentation Color reaction: Positive: Iodine reaction Negative: Greig-Lieback reaction, ninhydrin reagent, Sakaguchi reaction, Moritzhu's reagent, Ehrlich's reagent (i) Distinction between basic, acidic, and neutral: Amphoteric substance (j) Color of substance: Colorless (k ) Crystal appearance: Colorless hygroscopic crystalline substance (l) Nuclear magnetic resonance spectrum:
(CD ₃ OD100MHz) 1.98 (3H, s), 2.42 (2H, d), 3.19 (9H, s),
3.56 (2H, d), 4.7 (1H, m) s: singlet, d: doublet, m: multiplet (m) Stability: Aqueous solution with PH3 to PH9 at 100℃10
Stable after heating for a minute. The physicochemical properties of FA-5859 hydrochloride obtained in Example 3 described below are described below. (a) Elemental analysis (%): (60°C on phosphorus pentoxide,
(dry under reduced pressure for 10 hours): C: 45.29% H: 8.18% N: 11.24% Cl: 14.36% (b) Estimated molecular formula: C ₉ H ₁₈ N ₂ O ₃ · HCl (c) Melting point: 215°C (decomposition) (d) Specific rotation: [α]D ₂₃ −20.5° (c=1,
H ₂ O) (e) Ultraviolet absorption spectrum: Does not exhibit specific absorption above 210 nm. (f) Infrared absorption spectrum: The main absorptions (wave numbers) are as follows. 3400 (m), 3250 (s), 3190 (sh), 3045 (s),
2600-2400 (w), 1730 (s), 1660 (s), 1530
(m), 1480 (s), 1420 (m), 1405 (s), 1375
(m), 1290 (m), 1205 (m), 1160 (s), 1140
(sh), 1135 (s), 1040 (w), 960 (w), 935
(m), 915 (m), 865 (w), 800 (m), 665 (m)
，
625 (w), 600 (s), 560 (w) (cm ^-1 ) (w: weak, m: medium, s: strong) See Figure 2 (potassium bromide tablets). (g) Solubility in solvents: Insoluble: petroleum ether, hexane, diethyl ether, benzene, ethyl acetate, chloroform Slightly soluble: pyridine, acetone, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide Soluble: ethanol, methanol Easily soluble: water (h ) Color reaction: Positive: Iodine reaction Negative: Greig-Lieback reaction, ninhydrin reagent, Sakaguchi reaction, Moritzhu's reagent, Ehrlich's reagent (i) Color of substance: Colorless (j) Crystal appearance: Colorless needle-shaped crystals (k) Stable Temperature: Aqueous solution with pH 3 to 9 is heated at 100℃,
Stable after heating for 10 minutes. From the molecular formula of FA-5859 and the signal at δ3.19ppm (9H, s) observed in the nuclear magnetic resonance spectrum, the presence of a trimethylammonium group in the molecule is presumed, and the methyl acetyl group is present at δ1.98ppm (3H, s). Proton (CH ₃ CO−) 2.42ppm
(2H, d), 3.56ppm (2H, d) has two sets of methylene protons (-CH ₂ - x 2), δ4.7ppm (1H, m)
methine proton

【式】の存在がみとめられ る。また該２組のメチレンプロトンはδ4.7ppmの
メチンプロトンとそれぞれカツプリングしている
ことがデカツプリングにより明らかにされ、
The existence of [Formula] is recognized. Furthermore, it was revealed by decoupling that the two sets of methylene protons were each coupled with a methine proton of δ4.7ppm,

【式】の部分式の存在が推定さ れる。その分子式からカルボン酸の存在が推定さ
れ、これは遊離体で1590cm^-1に、塩酸塩で1730cm
^−１にＣ＝Ｏの吸収がみとめられることからも明ら
かである。 したがつて、FA−5859の平面構造として が推定されるとともに、FA−5859は新規化合物
であると判断される。 次に生理活性物質FA−5859の脂肪酸分解阻害
能の測定を、ラツト肝臓ホモジネートを用い、日
本生化学会編「生化学実験講座」第９巻脂質の代
謝，75頁（1975年，東京化学同人）記載の方法に
準じて以下に記載の方法で行つた。すなわち、
SD系ラツト（７周令，雄）を２日間絶食後、放
血によつて〓殺し、直ちに肝臓を取り出し10倍量
（Ｗ／Ｖ）の5mMトリス−塩酸緩衝液（PH7.5）
を含む0.25M蔗糖溶液を加え、テフロン棒付ホモ
ジナイザーでホモジナイズする。600×ｇ，20分
間の遠心上澄みを30000×g30分間遠心し、生じ
たペレツトを上記の蔗糖溶液に、肝臓湿重量0.2
ｇ／0.5ml溶液となる濃度に懸濁し、その0.5mlを
酵素液として反応に用いた。 リン酸カリウム緩衝液（PH7.5）30μmole，
KCl300μmole，ATP 3μmole，MgCl₂3μmole，
蔗糖120μmole，１−¹⁴Cパルミチン酸（0.1μCi，
牛血清アルブミンをモル比１：５になるように添
加した溶液PH7.5）0.6μmole，Ｌ−カルニチン
（Ｌ−carnitin）0.6μmole，コエンザイムＡ（Co
enzyme Ａ）0.6μmole，オキサル酢酸0.2μmole，
水又は阻害剤を含有する水溶液0.1ml及び酵素溶
液0.5mlから成る反応混液3.0mlをハイアミンハイ
ドロオキサイド10−Ｘ〔パツカード社（オランダ）
製〕を浸した紙をつるした密閉試験管中に入
れ、37℃20分間好気的に振盪反応した。70％過塩
素酸0.4mlを添加して反応を止めた後、生成した
¹⁴CO₂を測定することによつて酵素活性の測定を
した。該化合物FA−5859の阻害活性は、阻害剤
無添加の場合に比較して、250μg／mlで17％，
500μg／mlで25％，1000μg／mlで36％阻害であつ
た。 FA−5859の急性毒性LD₅₀値は、マウス静脈内
注射で400mg／Kg以上であつた。 FA−5859またはその塩は、たとえば脂肪酸分
解阻害剤として有用である。FA−5859またはそ
の塩を脂肪酸分解阻害剤として用いるには、たと
えば哺乳動物（例、マウス，ラツト，人など）の
糖尿病の治療を目的として、FA−5859として約
0.2ないし200mg／Kgを１日投与量として投与す
る。また、FA−5859またはその塩を投与するに
あたつては、常套手段によつてそれ自体あるいは
適宜の薬理的に許容される担体，賦形剤，希釈剤
と混合し、たとえば錠剤，顆粒剤，カプセル剤，
液剤などの剤型にして経口的に、またたとえば注
射剤として非経口的に投与することができる。 上記経口製剤、例えば錠剤を製造する際には、
結合剤（例、ヒドロキシプロピルセルロース，ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース，マクロゴー
ルなど），崩壊剤（例、デンプン，カルボキシメ
チルセルロースカルシウムなど），賦形剤（例、
乳糖，デンプンなど，滑沢剤（例、ステアリン酸
マグネシウム，タルクなど）などを適宜配合する
ことができる。 また、非経口製剤、たとえば注射剤を製造する
際には、等張化剤（例、ブドウ糖，Ｄ−ソルビト
ール，Ｄ−マンニトール，塩化ナトリウムなど），
防腐剤（例、ベンジルアルコール，クロロブタノ
ール，パラオキシ安息香酸メチル，パラオキシ安
息香酸プロピルなど），緩衝剤（例、リン酸塩緩
衝液，酢酸ナトリウム緩衝液など）などを適宜配
合することができる。 また、FA−5859は、脂肪酸の代謝を解明する
上での生化学的試薬として使用することができ
る。たとえば、FA−5859を反応液中に添加する
ことによつてカルニチン欠乏状態を容易に作りう
るので、脂肪酸酸化におけるカルニチンの役割を
より一層明確にすることができる。また、脂肪酸
酸化におけるミトコンドリアとベルオキシゾーム
との生理的役割はほとんど明らかにされていない
ので、ミトコンドリアへの脂肪酸の取り込みを
FA−5859を添加して阻害することによつて、ペ
ルオキシゾームの役割およびペルオキシゾームと
ミトコンドリアで酸化過程とのかかわりを明らか
にすることが可能である。これらの場合、脂肪酸
酸化反応で通常用いられる反応系を用いて、細胞
内顆粒成分の濃度によつても異なるが、一般的に
はFA−5859約0.5mg／ml〜50mg／ml濃度が有利に
用いられる。 FA−5859は、さらに有利な脂肪酸分解阻害作
用を示す化合物の合成中間体としても有用な物質
である。 デアセチルFA−5859またはその塩は、FA−
5859またはその塩を加水分解に付すことにより得
ることができる。 該加水分解反応は、アミド結合を分解するすべ
ての方法を適用することができる。たとえば、
酸，塩基，イオン交換樹脂などを用いることによ
り行なうことができる。該酸としては、たとえば
硫酸，塩酸などの無機酸が挙げられ、該塩基とし
ては、たとえば水酸化カリウム，水酸化ナトリウ
ム，水酸化バリウムなどが挙げられ、該イオン交
換樹脂としては、たとえばダウエツクス−50（ダ
ウケミカル社製，米国），アンバーライトIR−
120（ローム・アンド・ハース・コンパニー社製，
米国），ダイヤイオン−SK1A，SK1B（三菱化成
工業株式会社製，日本）などが挙げられる。 上記の酸を用いる場合には、水溶液中で該反応
を行なうのが好ましく、また含水溶媒としてたと
えば水とメタノール，エタノール，ブタノール等
との混合溶媒中で行なうのが好ましい。反応は、
通常約60〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃
で、約30分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16
時間で行なわれる。 上記の塩基を用いる場合には、水溶液中で行な
うのが好ましく、さらに含水溶媒、例えば水とメ
タノール，エタノール，ブタノール等との混合溶
媒中で行なうのが好ましい。該反応は、通常約60
〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃で、約30
分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16時間で行
なわれる。 上記のイオン交換樹脂を用いる場合には、原料
化合物の水溶液に該イオン交換樹脂を懸濁させた
状態で加温することにより行なわれる。該反応は
通常約60〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃
で約30分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16時
間で行なわれる。 反応液からデアセチルFA−5859またはその塩
を得るには、通常用いられる手段、たとえばイオ
ン交換樹脂，吸着，濃縮，結晶化などが用いられ
る。反応液から目的物を採取する場合には、遊離
形あるいは塩のいずれでも単離できるが、塩の形
で分離採取する方が容易である。 反応終了液から目的物質を得る具体例として
は、たとえば強酸性イオン交換樹脂等を利用し、
目的物質を吸着させ、例えば塩酸等を利用して溶
出を行いニンヒドリン反応で陽性を示す区分を集
めることによつて目的物質を得ることが出来る
が、例えば塩酸による加水分解反応液からは更に
簡単に反応液を減圧濃縮し過剰の塩酸を留去した
後、メタノール，エタノール，ジエチルエーテル
等の溶媒を加え結晶として本物質の塩酸塩を得る
ことが出来る。 このようにして、遊離または塩の形のデアセチ
ルFA−5859が得られる。 デアセチルFA−5859の塩を遊離形に変換する
こともできる。この方法は、たとえばイオン交換
樹脂等を利用して、該塩を形成している酸または
塩基をイオン交換樹脂に吸着させればよい。 デアセチルFA−5859遊離形は、塩を形成し得
るので、常套手段により薬理的に許容し得る塩と
することができる。該塩を形成させる酸として
は、たとえば塩酸，硫酸，蓚酸，酢酸，コハク
酸，クエン酸，フマール酸などが挙げられる。 次に生理活性物質デアセチルFA−5859の脂肪
酸分解阻害能を、ラツト肝臓ホモジネートのミコ
ンドリア画分を用い、日本生化学会編「生化学実
験講座」第９巻、脂質の代謝、75頁（1975年東京
化学同人）記載の方法、及びI.B.Fritzら、プロシ
ーデイングス・オブ・ザ・ナシヨナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンス（Proceedings of the
National Academy of Sciences，U.S.A.）54巻
1226頁，1965年に記載の方法に準じて測定した。
すなわち、SD系ラツト（７周令，雄）を24時間
絶食後、放血によつて屠殺し、直ちに肝臓を取り
出し10倍量（Ｗ／Ｖ）の5mMトリース塩酸緩衝
液（PH7.5）を含む0.25M蔗糖溶液を加え、テフ
ロン棒付ホモゲナイザーでホモジナイズした。
600×ｇ，20分間の遠心上澄みを30000×ｇ，30分
間遠心し、生じたペレツトを上記の蔗糖溶液に、
肝臓湿重量0.2ｇ／0.5ml溶液となる濃度に懸濁
し、その0.5mlを酵素液として反応に用いた。リ
ン酸カリウム緩衝液（PH7.5）30μmole，
KCl300μmole，MgCl₂3μmole，蔗糖120μmole，
Ｌ−リンゴ酸0.03μmole，ATP 3μmole，Ｌ−カ
ルニチン3μmole，コエンザイムＡ（Co
enzymeA）0.6μmole，NAD7.5μmole，１−¹⁴C
−パルミチン酸（0.2μCi，牛血清アルブミンをモ
ル比１：５になるように添加した溶液PH7.5）
0.6μmole，水又は阻害剤を含有する水溶液0.1ml
及び酵素溶液0.5mlからなる反応混液2.5mlをハイ
アミンハイドロオキサイド10−Ｘ〔パツカード社
製（オランダ）〕を浸した紙をつるした密閉試
験管中に入れ、37℃、20分間好気的に振盪反応し
た。70％過塩素酸0.4mlを添加して反応を止めた
後生成した¹⁴CO₂を測定することによつて活性の
測定をした。該化合物デアセチルFA−5859の阻
害活性すなわち阻害剤無添加の場合に比較して分
解活性を50％阻害する濃度は４〜8μg／mlであつ
た。 デアセチルFA−5859の急性毒性LD₅₀値は、マ
ウス静脈内注射で400mg／Kg以上であつた。 本発明のデアセチルFA−5859またはその塩は、
たとえば脂肪酸分解阻害剤として有用である。デ
アセチルFA−5859またはその塩を脂肪酸分解阻
害剤として用いるには、たとえば哺乳動物（例、
マウス，ラツト，人など）の糖尿病の治療を目的
として、デアセチルFA−5859として約0.2ないし
200mg／Kgを１日投与量として投与する。また、
デアセチルFA−5859またはその塩を投与するに
あたつては、常套手段によつてそれ自体あるいは
適宜の薬理的に許容される担体，賦形剤，希釈剤
と混合し、たとえば錠剤，顆粒剤，カプセル剤，
液剤などの剤型にして経口的に、またたとえば注
射剤として非経口的に投与することができる。 上記経口製剤、例えば錠剤を製造する際には、
結合剤（例、ヒドロキシプロピルセルロース，ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース，マクロゴー
ルなど），崩壊剤（例、デンプン，カルボキシメ
チルセルロースカルシウムなど），賦形剤（例、
乳糖，デンプンなど，滑沢剤（例、ステアリン酸
マグネシウム，タルクなど）などを適宜配合する
ことができる。 また、非経口製剤、たとえば注射剤を製造する
際には、等張化剤（例、ブドウ糖，Ｄ−ソルビト
ール，Ｄ−マンニトール，塩化ナトリウムなど），
防腐剤（例、ベンジルアルコール，クロロブタノ
ール，パラオキシ安息香酸メチル，パラオキシ安
息香酸プロピルなど），緩衝剤（例、リン酸塩緩
衝液，酢酸ナトリウム緩衝液など）などを適宜配
合することができる。 また、本発明のデアセチルFA−5859は、脂肪
酸の代謝を解明する上での生化学的試薬として使
用することができる。たとえば、デアセチルFA
−5859を反応液中に添加することによりカルニチ
ン欠乏状態を容易に作りうるので、脂肪酸酸化に
おけるカルニチンの役割をより一層明確にするこ
とができる。また、脂肪酸酸化におけるミトコン
ドリアとベルオキシゾームとの生理的役割はほと
んど明らかにされていないので、ミトコンドリア
への脂肪酸の取り込みをデアセチルFA−5859を
添加して阻害することによつて、ペルオキシゾー
ムの役割およびペルオキシゾームとミトコンドリ
アでの酸化過程とのかかわりを明らかにすること
が可能である。これらの場合、脂肪酸酸化反応で
通常用いられる反応系を用いて、細胞内顆粒成分
の濃度によつても異なるが、一般的にはデアセチ
ルFA−5859約0.1μg／ml〜1000μg／ml濃度が有利
に用いられる。 本発明のデアセチルFA−5859は、さらに有利
な脂肪酸分解阻害作用を示す化合物の合成中間体
としても有用な物質である。 本発明方法である化合物〔２〕またはその塩を
保護基脱離反応に付し化合物〔１〕を得るには、
たとえば加水分解，又は接触還元，酸処理等の従
来ペプチド合成反応に適用されている手段を適用
しうる。該加水分解反応は、アミド結合を分解す
るすべての方法を適用することができる。たとえ
ば、酸，塩基，イオン交換樹脂などを用いること
により行なうことができる。該酸としては、たと
えば硫酸，塩酸などの無機酸が挙げられ、該塩基
としては、たとえば水酸化カリウム，水酸化ナト
リウム，水酸化バリウムなどが挙げられ、該イオ
ン交換樹脂としては、たとえばダウエツクス−50
（ダウケミカル社製，米国），アンバーライトIR
−120（ローム・アンド・ハース・コンパニー社
製，米国），ダイヤイオン−SK1A，SK1B（三菱
化成工業株式会社製，日本）などが挙げられる。 上記の酸を用いる場合には、水溶液中で該反応
を行なうのが好ましく、また含水溶媒としてたと
えば水とメタノール，エタノール，ブタノール等
との混合溶媒中で行なうのが好ましい。反応は、
通常約60〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃
で、約30分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16
時間で行なわれる。 上記の塩基を用いる場合には、水溶液中で行な
うのが好ましく、さらに含水溶媒、例えば水とメ
タノール，エタノール，ブタノール等との混合溶
媒中で行なうのが好ましい。該反応は、通常約60
〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃で、約30
分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16時間で行
なわれる。 上記のイオン交換樹脂を用いる場合には、原料
化合物の水溶液に該イオン交換樹脂を懸濁させた
状態で加温することにより行なわれる。該反応は
通常約60〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃
で約30分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16時
間で行なわれる。 該接触還元反応は、水又はメタノール，エタノ
ール等のアルコール中で、又は水とアルコールと
の混合溶媒中、パラジウム黒，パラジウム炭素等
の触媒の存在下水素ガスを導入し、必要に応じて
加圧して行なわれる。該接触還元反応の温度は、
約０〜50℃、好ましくは約20〜30℃で、反応時間
は約0.5〜５時間、さらに好ましくは約１〜３時
間で行なわれる。該酸処理に用いられる酸として
は、たとえば臭化水素−酢酸，塩酸−酢酸，塩酸
−ジオキサン，トリフルオロ酢酸，メタンスルホ
ン酸，トリフルオロメタンスルホン酸等があげら
れる。酸処理の温度は約−10℃から50℃、好まし
くは約０℃から25℃で、反応時間は約30分から24
時間の間で、用いた酸により適当に変えるのが望
ましい。 化合物〔２〕またはその塩を保護基脱離反応に
付し得られた化合物をアセチル化するには、たと
えば上記化合物と、無水酢酸，アセチルクロライ
ド又は酢酸をクロル炭酸メチル，クロル炭酸エチ
ル，クロル炭酸ブチル，クロル炭酸プロピル，ク
ロル炭酸イソブチル等のアルコキシカルボニルク
ロライドと反応して得られる酢酸の無水物とを、
水又は水とアセトン，ジオキサン，アセトニトリ
ル，ジメチルホルムアミド，テトラハイドロフラ
ン等の有機溶媒との混合溶媒中反応させることに
よつて達成される。反応に際してはピリジン，ト
リエチルアミン，トリメチルアミン等の有機塩基
又はナトリウム，カリウム，カルシウム等のアル
カリ金属，アルカリ土類金属の水酸化物，酸化
物，重炭酸塩等を脱酸剤として供存させてもよ
い。反応温度としては約−10℃から50℃，好まし
くは約０℃から25℃である。 本発明方法である化合物〔３〕またはその塩を
トリメチル化反応に付すには、たとえば化合物
〔３〕またはその塩とジメチル硫酸，メチルブロ
マイド，メチルクロライドまたはメチルヨーダイ
ドとを水中又は水とアセトニトリル，ジオキサ
ン，テトラハイドロフラン，ジメチルホルムアミ
ド等の有機溶媒中で反応させることによつて行な
われる。反応に際しては必要に応じてナトリウ
ム，カリウム，カルシウム等のアルカリ金属，ア
ルカリ土類金属の水酸化物，酸化物等を共存させ
てもよい。反応温度は約−10℃から50℃，好まし
くは約０℃から20℃である。 上記の各反応によつて生成した各目的物は、通
常用いられる分離，精製手段，たとえばクロマト
グラフイー，再結晶などの方法によつて採取，精
製することができる。 化合物〔３〕またはその塩をトリメチル化反応
い付し、ついで必要により行なわれる加水分解反
応は、アミド結合を分解するすべての方法を適用
することができる。たとえば、酸，塩基，イオン
交換樹脂などを用いることにより行なうことがで
きる。該酸としては、たとえば硫酸，塩酸などの
無機酸が挙げられ、該塩基としては、たとえば水
酸化カリウム，水酸化ナトリウム，水酸化バリウ
ムなどが挙げられ、該イオン交換樹脂としては、
たとえばダウエツクス−50（ダウケミカル社製，
米国），アンバーライトIR−120（ローム・アン
ド・ハース・コンパニー社製，米国），ダイヤイ
オン−SK1A，SK1B（三菱化成工業株式会社製，
日本）などが挙げられる。 上記の酸を用いる場合には、水溶液中で該反応
を行なうのが好ましく、また含水溶媒としてたと
えば水とメタノール，エタノール，ブタノール等
との混合溶媒中で行なうのが好ましい。反応は、
通常約60〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃
で、約30分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16
時間で行なわれる。 上記の塩基を用いる場合には、水溶液中で行な
うのが好ましく、さらに含水溶媒、例えば水とメ
タノール，エタノール，ブタノール等との混合溶
媒中で行なうのが好ましい。該反応は、通常約60
〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃で、約30
分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16時間で行
なわれる。 上記のイオン交換樹脂を用いる場合には、原料
化合物の水溶液に該イオン交換樹脂を懸濁させた
状態で加温することにより行なわれる。該反応は
通常約60〜200℃、さらに好ましくは約90〜120℃
で約30分〜30時間、さらに好ましくは約３〜16時
間で行なわれる。 反応液からデアセチルFA−5859またはその塩
を得るには、通常用いられる手段、たとえばイオ
ン交換樹脂，吸着，濃縮，結晶化などが用いられ
る。反応液から目的物を採取する場合には、遊離
形あるいは塩のいずれでも単離できるが、塩の形
で分離採取する方が容易である。 反応終了液から目的物質を得る具体例として
は、たとえば強酸性イオン交換樹脂等を利用し、
目的物質を吸着させ、例えば塩酸等を利用して溶
出を行いニンヒドリン反応で陽性を示す区分を集
めることによつて目的物質を得ることが出来る
が、例えば塩酸による加水分解反応液からは更に
簡単に反応液を減圧濃縮し過剰の塩酸を留去した
後、メタノール，エタノール，ジエチルエーテル
等の溶媒を加え結晶として本物質の塩酸塩を得る
こてが出来る。 このようにして、遊離または塩の形のデアセチ
ルFA−5859またはFA−5859が得られる。 デアセチルFA−5859またはFA−5859の塩を遊
離形に変換することもできる。この方法は、たと
えばイオン交換樹脂等を利用して、該塩を形成し
ている酸または塩基をイオン交換樹脂に吸着させ
ればよい。デアセチルFA−5859遊離形またはFA
−5859遊離形は、塩を形成し得るので、常套手段
により薬理的に許容し得る塩とすることができ
る。該塩を形成させる酸としては、たとえば塩
酸，硫酸，硝酸，蓚酸，酢酸，コハク酸，クエン
酸，フマール酸などが挙げられる。 本発明方法において原料化合物として用いられ
る化合物〔２〕は、たとえば以下の反応工程によ
り製造することができる。 上記化合物〔４〕は、たとえばシンセシス
（Synthesis）第266頁，1981年に記載された方法
によりあるいはそれと同様の方法により製造する
ことができる。 化合物〔３〕は、たとえば以下に示す反応工程
により製造することができる。 上記式中、R₂は前記と同意義を有する。R₃は、
R₂で示される保護基と脱離の際の性質を異にす
る保護基を示す。該R₃で示される保護基として
は、たとえばベンジルオキシカルボニル，ｔ−ブ
トキシカルボニル，ｐ−ニトロベンジルオキシカ
ルボニル，ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニ
ル，トリチル，トシル，ｔ−アミルオキシカルボ
ニル，イソボニルオキシカルボニル，ジフエニル
ホスフイニル，ｏ−ニトロフエニルスルフエニ
ル，フタロイルなどが挙げられる。 化合物〔４〕から化合物〔５〕を製造するに
は、たとえば化合物〔４〕にクロル炭酸エチル，
クロル炭酸メチル，クロル炭酸プロピル，クロル
炭酸ブチル，クロル炭酸イソブチル等の酸クロラ
イドを酢酸エチル，酢酸メチル，ジオキサン，テ
トラハイドロフラン，アセトニトリル等の有機溶
媒中で作用させることによつて行なわれる。この
反応の際、Ｎ−メチルモルホリン，Ｎ−エチルモ
ルホリン，トリエチルアミン，トリメチルアミ
ン，ピリジン等の有機塩基を共存させてもよい。
反応温度は約−20℃から30℃，好ましくは約−10
℃から０℃である。 化合物〔６〕は、化合物〔５〕にジアゾメタン
を反応させることにより製造される。たとえば、
化合物〔５〕を酢酸エチル，酢酸メチル，テトラ
ハイドロフラン，ジオキサン，アセトニトリル，
ジエチルエーテル等の有機溶媒中約−20℃から30
℃で好ましくは約−10℃から25℃で約１時間から
24時間ジアゾメタンと反応させる。ジアゾメタン
は反応液に直接吹きこむか、又はジエチルエーテ
ル，酢酸エチル等の有機溶媒に飽和させた溶液を
反応液に加えても良い。 化合物〔６〕から化合物〔７〕を製造するに
は、たとえば化合物〔６〕のメメタノール溶液に
安息香酸，酢酸等の銀塩をトリメチルアミン，ト
リエチルアミン，Ｎ−メチルモルホリン，Ｎ−エ
チルモルホリン，ピリジン等の有機塩基に溶かし
た溶液を約−５℃から50℃で好ましくは約０℃か
ら27℃で、暗所で約30分から10時間作用させるこ
とによつて行なわれる。 化合物〔７〕をケン化することにより化合物
〔８〕を製造することができる。該ケン化は、た
とえば水，又はメタノール，エタノール，ジオキ
サン，テトラハイドロフラン，アセトニトリル等
の有機溶媒中で、又は水とこれら有機溶媒との混
合溶媒中で、化合物〔７〕とナトリウム，カリウ
ム，バリウム等の水酸化物とを約−10℃から50
℃，好ましくは約０℃から27℃で約１時間から５
時間反応させることによつて行なわれる。 化合物〔８〕から化合物The existence of a subexpression of [Formula] is presumed. The existence of a carboxylic acid was estimated from its molecular formula, and this amount was 1590 cm ^-1 in the free form and 1730 cm -1 in the hydrochloride.
This is also clear from the fact that C=O absorption is observed at ^-1 . Therefore, the planar structure of FA-5859 It is estimated that FA-5859 is a new compound. Next, the ability of the physiologically active substance FA-5859 to inhibit fatty acid degradation was measured using rat liver homogenate, ``Biochemistry Experimental Course,'' edited by the Japanese Biochemical Society, Volume 9, Lipid Metabolism, p. 75 (1975, Tokyo Kagaku Dojin). It was carried out according to the method described below. That is,
After fasting for 2 days, SD rats (male, 7 weeks old) were killed by exsanguination, and the livers were immediately removed and diluted with 10 times the volume (W/V) of 5mM Tris-HCl buffer (PH7.5).
Add 0.25M sucrose solution containing 0.25M sucrose and homogenize with a homogenizer equipped with a Teflon rod. Centrifugation at 600 x g for 20 minutes The supernatant was centrifuged at 30,000 x g for 30 minutes, and the resulting pellet was added to the above sucrose solution to give a liver wet weight of 0.2.
The enzyme solution was suspended at a concentration of g/0.5 ml, and 0.5 ml of the suspension was used as an enzyme solution in the reaction. Potassium phosphate buffer (PH7.5) 30μmole,
KCl 300μmole, ATP 3μmole, MgCl ₂ 3μmole,
120 μmole of sucrose, ^1-14 C palmitic acid (0.1 μCi,
A solution containing bovine serum albumin at a molar ratio of 1:5 (pH 7.5) 0.6 μmole, L-carnitine (L-carnitin) 0.6 μmole, coenzyme A (Co
enzyme A) 0.6μmole, oxalacetic acid 0.2μmole,
3.0 ml of a reaction mixture consisting of 0.1 ml of water or an aqueous solution containing an inhibitor and 0.5 ml of an enzyme solution was mixed with hyamine hydroxide 10-X [Paccard (Netherlands)].
The test tube was placed in a sealed test tube with paper soaked in it and subjected to an aerobic shaking reaction at 37°C for 20 minutes. After stopping the reaction by adding 0.4ml of 70% perchloric acid, the produced
Enzyme activity was measured by measuring ¹⁴ CO ₂ . The inhibitory activity of the compound FA-5859 was 17% at 250 μg/ml compared to the case without the addition of inhibitor.
The inhibition was 25% at 500 μg/ml and 36% at 1000 μg/ml. The acute toxicity LD ₅₀ value of FA-5859 was 400 mg/Kg or more when intravenously injected into mice. FA-5859 or a salt thereof is useful, for example, as a fatty acid degradation inhibitor. To use FA-5859 or a salt thereof as a fatty acid degradation inhibitor, for example, for the purpose of treating diabetes in mammals (e.g., mice, rats, humans, etc.), approximately
The daily dose is 0.2 to 200 mg/Kg. In addition, when administering FA-5859 or a salt thereof, it can be administered by itself or mixed with appropriate pharmacologically acceptable carriers, excipients, and diluents, such as tablets or granules. , capsules,
It can be administered orally in the form of a liquid or parenterally, for example, as an injection. When manufacturing the above oral preparations, such as tablets,
Binders (e.g., hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, macrogol, etc.), disintegrants (e.g., starch, carboxymethylcellulose calcium, etc.), excipients (e.g.,
Lactose, starch, and other lubricants (eg, magnesium stearate, talc, etc.) can be added as appropriate. In addition, when manufacturing parenteral preparations, such as injections, tonicity agents (e.g., glucose, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.),
Preservatives (eg, benzyl alcohol, chlorobutanol, methyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, etc.), buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.), and the like can be added as appropriate. Additionally, FA-5859 can be used as a biochemical reagent in elucidating fatty acid metabolism. For example, by adding FA-5859 to the reaction solution, a carnitine-deficient state can be easily created, so that the role of carnitine in fatty acid oxidation can be further clarified. Furthermore, since the physiological role of mitochondria and peroxisomes in fatty acid oxidation is largely unknown,
By adding and inhibiting FA-5859, it is possible to clarify the role of peroxisomes and the relationship between peroxisomes and oxidative processes in mitochondria. In these cases, using a reaction system commonly used in fatty acid oxidation reactions, it is generally advantageous to use a concentration of FA-5859 of about 0.5 mg/ml to 50 mg/ml, although it also depends on the concentration of intracellular granule components. used. FA-5859 is also a useful substance as an intermediate for the synthesis of compounds that exhibit an advantageous effect of inhibiting fatty acid degradation. Deacetyl FA-5859 or its salt is FA-
It can be obtained by subjecting 5859 or a salt thereof to hydrolysis. All methods for decomposing amide bonds can be applied to the hydrolysis reaction. for example,
This can be done by using acids, bases, ion exchange resins, etc. Examples of the acid include inorganic acids such as sulfuric acid and hydrochloric acid, examples of the base include potassium hydroxide, sodium hydroxide, barium hydroxide, etc., and examples of the ion exchange resin include Dowex-50. (manufactured by Dow Chemical Company, USA), Amberlite IR-
120 (manufactured by Rohm and Haas Company,
Diaion-SK1A, SK1B (manufactured by Mitsubishi Chemical Industries, Ltd., Japan), etc. When using the above acid, the reaction is preferably carried out in an aqueous solution, and preferably in a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, etc. as a water-containing solvent. The reaction is
Usually about 60-200℃, more preferably about 90-120℃
for about 30 minutes to 30 hours, more preferably about 3 to 16 hours.
done in time. When the above-mentioned base is used, it is preferably carried out in an aqueous solution, and more preferably in a water-containing solvent, for example, a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, etc. The reaction usually takes about 60
~200℃, more preferably about 90-120℃, about 30℃
It is carried out for a period of minutes to 30 hours, more preferably about 3 to 16 hours. When using the above ion exchange resin, the ion exchange resin is suspended in an aqueous solution of the raw material compound and then heated. The reaction is usually carried out at about 60 to 200°C, more preferably about 90 to 120°C.
This is carried out for about 30 minutes to 30 hours, more preferably for about 3 to 16 hours. To obtain deacetyl FA-5859 or its salt from the reaction solution, commonly used means such as ion exchange resin, adsorption, concentration, crystallization, etc. are used. When collecting a target product from a reaction solution, it can be isolated in either free form or salt form, but it is easier to separate and collect it in salt form. As a specific example of obtaining the target substance from the reaction-completed liquid, for example, using a strongly acidic ion exchange resin, etc.
The target substance can be obtained by adsorbing the target substance, eluting it using hydrochloric acid, etc., and collecting the fractions that show a positive result in the ninhydrin reaction. After the reaction solution is concentrated under reduced pressure and excess hydrochloric acid is distilled off, a solvent such as methanol, ethanol, diethyl ether, etc. is added to obtain the hydrochloride salt of this substance as crystals. In this way deacetyl FA-5859 is obtained in free or salt form. Deacetyl FA-5859 salts can also be converted to the free form. In this method, for example, an ion exchange resin may be used to adsorb the acid or base forming the salt onto the ion exchange resin. Since deacetyl FA-5859 free form can form a salt, it can be converted into a pharmacologically acceptable salt by conventional means. Examples of the acid that forms the salt include hydrochloric acid, sulfuric acid, oxalic acid, acetic acid, succinic acid, citric acid, and fumaric acid. Next, we investigated the ability of the physiologically active substance deacetyl FA-5859 to inhibit fatty acid degradation using the mychondria fraction of rat liver homogenate. Proceedings of the National Academy of Sciences, IBFritz et al.
National Academy of Sciences, USA) 54 volumes
It was measured according to the method described on page 1226, 1965.
Specifically, after fasting for 24 hours, SD rats (male, 7 weeks old) were sacrificed by exsanguination, and the livers were immediately removed and added with 10 times the volume (W/V) of 5mM Tries-HCl buffer (PH7.5). A 0.25M sucrose solution was added and homogenized using a homogenizer equipped with a Teflon rod.
Centrifuge the supernatant after centrifuging at 600 x g for 20 minutes at 30,000 x g for 30 minutes, and add the resulting pellet to the above sucrose solution.
The suspension was suspended at a concentration of 0.2 g liver wet weight/0.5 ml solution, and 0.5 ml of the suspension was used as an enzyme solution in the reaction. Potassium phosphate buffer (PH7.5) 30μmole,
KCl 300μmole, MgCl ₂ 3μmole, sucrose 120μmole,
L-malic acid 0.03μmole, ATP 3μmole, L-carnitine 3μmole, coenzyme A (Co
enzymeA) 0.6μmole, NAD7.5μmole, ^1-14C
-Palmitic acid (0.2 μCi, solution PH7.5 with bovine serum albumin added at a molar ratio of 1:5)
0.6 μmole, water or 0.1 ml of an aqueous solution containing the inhibitor
2.5 ml of the reaction mixture consisting of 0.5 ml of the enzyme solution and 0.5 ml of the enzyme solution were placed in a sealed test tube suspended from paper soaked with hyamine hydroxide 10-X [manufactured by Patskard (Netherlands)], and aerobically heated at 37°C for 20 minutes. A shaking reaction occurred. Activity was determined by measuring ^{the 14} CO ₂ produced after stopping the reaction by adding 0.4 ml of 70% perchloric acid. The inhibitory activity of the compound deacetyl FA-5859, that is, the concentration at which the decomposition activity was inhibited by 50% compared to the case where no inhibitor was added was 4 to 8 μg/ml. The acute toxicity LD ₅₀ value of deacetyl FA-5859 was greater than 400 mg/Kg when intravenously injected in mice. Deacetyl FA-5859 or a salt thereof of the present invention is
For example, it is useful as a fatty acid degradation inhibitor. To use deacetyl FA-5859 or its salt as a fatty acid degradation inhibitor, for example, mammals (e.g.
Deacetyl FA-5859 is used for the treatment of diabetes in mice, rats, humans, etc.
Administer as a daily dose of 200 mg/Kg. Also,
When administering deacetyl FA-5859 or a salt thereof, it can be administered by itself or mixed with appropriate pharmacologically acceptable carriers, excipients, and diluents, such as tablets, granules, etc. capsules,
It can be administered orally in the form of a liquid or parenterally, for example, as an injection. When manufacturing the above oral preparations, such as tablets,
Binders (e.g., hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, macrogol, etc.), disintegrants (e.g., starch, carboxymethylcellulose calcium, etc.), excipients (e.g.,
Lactose, starch, and other lubricants (eg, magnesium stearate, talc, etc.) can be added as appropriate. In addition, when manufacturing parenteral preparations, such as injections, tonicity agents (e.g., glucose, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.),
Preservatives (eg, benzyl alcohol, chlorobutanol, methyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, etc.), buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.), and the like can be added as appropriate. Furthermore, deacetyl FA-5859 of the present invention can be used as a biochemical reagent for elucidating fatty acid metabolism. For example, deacetyl FA
Since a carnitine-deficient state can be easily created by adding -5859 to the reaction solution, the role of carnitine in fatty acid oxidation can be further clarified. Furthermore, since the physiological role of mitochondria and peroxisomes in fatty acid oxidation is largely unknown, we investigated the role of peroxisomes by inhibiting the uptake of fatty acids into mitochondria by adding deacetyl FA-5859. It is also possible to clarify the relationship between peroxisomes and oxidation processes in mitochondria. In these cases, using a reaction system commonly used in fatty acid oxidation reactions, it is generally advantageous to have a concentration of deacetyl FA-5859 of about 0.1 μg/ml to 1000 μg/ml, although it also depends on the concentration of intracellular granule components. used for. Deacetyl FA-5859 of the present invention is also a useful substance as an intermediate for the synthesis of compounds that exhibit an advantageous effect of inhibiting fatty acid decomposition. In order to obtain compound [1] by subjecting compound [2] or its salt, which is the method of the present invention, to a protecting group elimination reaction,
For example, means conventionally applied to peptide synthesis reactions such as hydrolysis, catalytic reduction, and acid treatment can be applied. All methods for decomposing amide bonds can be applied to the hydrolysis reaction. For example, this can be done by using acids, bases, ion exchange resins, etc. Examples of the acid include inorganic acids such as sulfuric acid and hydrochloric acid, examples of the base include potassium hydroxide, sodium hydroxide, barium hydroxide, etc., and examples of the ion exchange resin include Dowex-50.
(manufactured by Dow Chemical Company, USA), Amberlite IR
-120 (manufactured by Rohm & Haas Company, USA), Diaion -SK1A, SK1B (manufactured by Mitsubishi Chemical Industries, Ltd., Japan), etc. When using the above acid, the reaction is preferably carried out in an aqueous solution, and preferably in a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, etc. as a water-containing solvent. The reaction is
Usually about 60-200℃, more preferably about 90-120℃
for about 30 minutes to 30 hours, more preferably about 3 to 16 hours.
done in time. When the above-mentioned base is used, it is preferably carried out in an aqueous solution, and more preferably in a water-containing solvent, for example, a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, etc. The reaction usually takes about 60
~200℃, more preferably about 90-120℃, about 30℃
It is carried out for a period of minutes to 30 hours, more preferably about 3 to 16 hours. When using the above ion exchange resin, the ion exchange resin is suspended in an aqueous solution of the raw material compound and then heated. The reaction is usually carried out at about 60 to 200°C, more preferably about 90 to 120°C.
This is carried out for about 30 minutes to 30 hours, more preferably for about 3 to 16 hours. The catalytic reduction reaction is carried out by introducing hydrogen gas in water or an alcohol such as methanol or ethanol, or in a mixed solvent of water and alcohol in the presence of a catalyst such as palladium black or palladium carbon, and applying pressure if necessary. It is done. The temperature of the catalytic reduction reaction is
The reaction time is about 0-50°C, preferably about 20-30°C, and about 0.5-5 hours, more preferably about 1-3 hours. Examples of acids used in the acid treatment include hydrogen bromide-acetic acid, hydrochloric acid-acetic acid, hydrochloric acid-dioxane, trifluoroacetic acid, methanesulfonic acid, and trifluoromethanesulfonic acid. The temperature of the acid treatment is about -10°C to 50°C, preferably about 0°C to 25°C, and the reaction time is about 30 minutes to 24°C.
It is desirable to vary the time accordingly depending on the acid used. In order to acetylate the compound obtained by subjecting compound [2] or a salt thereof to a protecting group elimination reaction, for example, the above compound and acetic anhydride, acetyl chloride, or acetic acid are mixed with methyl chlorocarbonate, ethyl chlorocarbonate, chloroethyl carbonate, etc. Acetic anhydride obtained by reacting with alkoxycarbonyl chloride such as butyl, propyl chlorocarbonate, isobutyl chlorocarbonate, etc.
This is achieved by reaction in a mixed solvent of water or water and an organic solvent such as acetone, dioxane, acetonitrile, dimethylformamide, or tetrahydrofuran. During the reaction, organic bases such as pyridine, triethylamine, and trimethylamine, or hydroxides, oxides, bicarbonates, etc. of alkali metals such as sodium, potassium, and calcium, and alkaline earth metals may be present as deoxidizing agents. . The reaction temperature is about -10°C to 50°C, preferably about 0°C to 25°C. In order to subject compound [3] or its salt, which is the method of the present invention, to a trimethylation reaction, for example, compound [3] or its salt and dimethyl sulfuric acid, methyl bromide, methyl chloride, or methyl iodide are mixed in water or water and acetonitrile. This is carried out by reaction in an organic solvent such as dioxane, tetrahydrofuran, or dimethylformamide. During the reaction, hydroxides, oxides, etc. of alkali metals such as sodium, potassium, and calcium, alkaline earth metals, etc. may be allowed to coexist as required. The reaction temperature is about -10°C to 50°C, preferably about 0°C to 20°C. Each target product produced by each of the above reactions can be collected and purified by commonly used separation and purification means, such as chromatography and recrystallization. For the trimethylation reaction of compound [3] or a salt thereof and the subsequent hydrolysis reaction, which is carried out if necessary, any method for decomposing an amide bond can be applied. For example, this can be done by using acids, bases, ion exchange resins, etc. Examples of the acid include inorganic acids such as sulfuric acid and hydrochloric acid, examples of the base include potassium hydroxide, sodium hydroxide, barium hydroxide, etc., and the ion exchange resin includes:
For example, Dowex-50 (manufactured by Dow Chemical Company,
(United States), Amberlite IR-120 (manufactured by Rohm & Haas Company, United States), Diaion-SK1A, SK1B (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation,
Japan), etc. When using the above acid, the reaction is preferably carried out in an aqueous solution, and preferably in a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, etc. as a water-containing solvent. The reaction is
Usually about 60-200℃, more preferably about 90-120℃
for about 30 minutes to 30 hours, more preferably about 3 to 16 hours.
done in time. When the above-mentioned base is used, it is preferably carried out in an aqueous solution, and more preferably in a water-containing solvent, for example, a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, etc. The reaction usually takes about 60
~200℃, more preferably about 90-120℃, about 30℃
It is carried out for a period of minutes to 30 hours, more preferably about 3 to 16 hours. When using the above ion exchange resin, the ion exchange resin is suspended in an aqueous solution of the raw material compound and then heated. The reaction is usually carried out at about 60 to 200°C, more preferably about 90 to 120°C.
This is carried out for about 30 minutes to 30 hours, more preferably for about 3 to 16 hours. To obtain deacetyl FA-5859 or its salt from the reaction solution, commonly used means such as ion exchange resin, adsorption, concentration, crystallization, etc. are used. When collecting a target product from a reaction solution, it can be isolated in either free form or salt form, but it is easier to separate and collect it in salt form. As a specific example of obtaining the target substance from the reaction-completed liquid, for example, using a strongly acidic ion exchange resin, etc.
The target substance can be obtained by adsorbing the target substance, eluting it using hydrochloric acid, etc., and collecting the fractions that show a positive result in the ninhydrin reaction. After concentrating the reaction solution under reduced pressure and distilling off excess hydrochloric acid, a solvent such as methanol, ethanol, diethyl ether, etc. is added to obtain the hydrochloride of the substance as crystals. In this way deacetyl FA-5859 or FA-5859 is obtained in free or salt form. Deacetyl FA-5859 or a salt of FA-5859 can also be converted to the free form. In this method, for example, an ion exchange resin may be used to adsorb the acid or base forming the salt onto the ion exchange resin. Deacetyl FA-5859 free form or FA
Since the -5859 free form can form salts, it can be converted into pharmacologically acceptable salts by conventional means. Examples of the acid that forms the salt include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, oxalic acid, acetic acid, succinic acid, citric acid, and fumaric acid. Compound [2] used as a raw material compound in the method of the present invention can be produced, for example, by the following reaction steps. The above compound [4] can be produced, for example, by the method described in Synthesis, p. 266, 1981, or by a method similar thereto. Compound [3] can be produced, for example, by the reaction steps shown below. In the above formula, R ₂ has the same meaning as above. _R3 is
Indicates a protecting group that has different properties upon elimination from the protecting group represented by R ₂ . Examples of the protecting group represented by _R3 include benzyloxycarbonyl, t-butoxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbonyl, trityl, tosyl, t-amyloxycarbonyl, isobornyloxycarbonyl, Diphenylphosphinyl, o-nitrophenylsulfenyl, phthaloyl and the like can be mentioned. To produce compound [5] from compound [4], for example, compound [4] is added with ethyl chlorocarbonate,
This is carried out by reacting an acid chloride such as methyl chlorocarbonate, propyl chlorocarbonate, butyl chlorocarbonate, or isobutyl chlorocarbonate in an organic solvent such as ethyl acetate, methyl acetate, dioxane, tetrahydrofuran, or acetonitrile. During this reaction, an organic base such as N-methylmorpholine, N-ethylmorpholine, triethylamine, trimethylamine, pyridine, etc. may be allowed to coexist.
The reaction temperature is about -20°C to 30°C, preferably about -10°C.
℃ to 0℃. Compound [6] is produced by reacting compound [5] with diazomethane. for example,
Compound [5] was converted into ethyl acetate, methyl acetate, tetrahydrofuran, dioxane, acetonitrile,
-20℃ to 30℃ in organic solvent such as diethyl ether
℃ preferably from about -10℃ to 25℃ for about 1 hour
React with diazomethane for 24 hours. Diazomethane may be directly blown into the reaction solution, or a solution saturated with an organic solvent such as diethyl ether or ethyl acetate may be added to the reaction solution. To produce compound [7] from compound [6], for example, a silver salt such as benzoic acid or acetic acid is added to a memethanol solution of compound [6], such as trimethylamine, triethylamine, N-methylmorpholine, N-ethylmorpholine, pyridine, etc. The reaction is carried out by allowing a solution of the organic base to react at about -5°C to 50°C, preferably about 0°C to 27°C, in the dark for about 30 minutes to 10 hours. Compound [8] can be produced by saponifying compound [7]. The saponification is carried out by combining compound [7] with sodium, potassium, barium, etc., in water or an organic solvent such as methanol, ethanol, dioxane, tetrahydrofuran, acetonitrile, etc., or in a mixed solvent of water and these organic solvents. and other hydroxides from about -10°C to 50°C.
℃, preferably about 0℃ to 27℃ for about 1 to 5 hours.
This is done by a time reaction. Compound [8] to compound

〔９〕を製造するに
は、R₃を選択的に脱離する方法が適用される。
その方法はペプチド合成に通常用いられる方法
で、前記した化合物〔２〕を保護基脱離反応に付
す反応と同様に行なうことができる。 化合物To produce [9], a method of selectively eliminating R ₃ is applied.
The method is a method commonly used for peptide synthesis, and can be carried out in the same manner as the above-mentioned reaction in which compound [2] is subjected to a protecting group removal reaction. Compound

〔９〕をトリメチル化反応に付すことに
より化合物〔２〕を製造することができる。該ト
リメチル化反応は、前記した化合物〔３〕をトリ
メチル化反応に付す際の反応と同様に行なうこと
ができる。 化合物〔８〕を化合物〔10〕に変換するには、
前記した化合物〔２〕を保護基脱離反応に付す反
応と同様に行なうことができる。 化合物〔10〕をアセチル化反応に付すことによ
り、化合物〔11〕を製造することができる。該ア
セチル化反応は、前記した化合物〔２〕を保護基
脱離反応に付し、必要によりアセチル化反応に付
す反応における該アセチル化反応と同様に行なう
ことができる。 化合物〔11〕を保護基脱離反応に付することに
より、化合物〔３〕を製造することができる。該
保護基脱離反応としては、前記した化合物〔８〕
から化合物Compound [2] can be produced by subjecting [9] to a trimethylation reaction. The trimethylation reaction can be carried out in the same manner as the reaction in which compound [3] is subjected to the trimethylation reaction described above. To convert compound [8] to compound [10],
The reaction can be carried out in the same manner as the above-mentioned reaction in which compound [2] is subjected to a protecting group elimination reaction. Compound [11] can be produced by subjecting compound [10] to an acetylation reaction. The acetylation reaction can be carried out in the same manner as the acetylation reaction in which the compound [2] is subjected to a protecting group elimination reaction and, if necessary, an acetylation reaction. Compound [3] can be produced by subjecting compound [11] to a protecting group elimination reaction. For the protecting group elimination reaction, the above-mentioned compound [8]
compound from

〔９〕を製造する際の反応と同様に行
なうことができる。 上記各反応によつて生成した各目的物は、通常
用いられる分離，精製手段、たとえばクロマトグ
ラフイー，再結晶などの方法によつて採取，精製
することができる。 上記から明らかなごとく、化合物〔８〕は、有
用な化合物を製造する際の合成中間体として用い
ることができる。 上記反応工程において、それらの化合物の塩を
用いてもよい。該塩としてはたとえば、ナトリウ
ム，カリウム，カルシウム，バリウム，トリエチ
ルアミン，ピリジン，塩化水素，臭化水素，ヨウ
化水素などの塩が挙げられる。 以下に参考例および実施例を挙げて本発明をさ
らに具体的に説明する。なお、以下の実施例にお
いて、培地の組成物のパーセントは、重量／容量
パーセントを示す。 実施例 １ ポテト・シユークロズ寒天からなる斜面培地上
に予め十分に生育し胞子を形成したエメリセラ・
カードリリネアターIFO 5859の一白金耳を、グ
ルコース2.0％，マルトース3.0％，生大豆粉1.5
％，コンスチープリカー1.0％，ポリペプトン0.5
％，酵母エキス0.3％及び食塩0.3％，PH6.0からな
る種培養培地500mlを分注滅菌した２容坂口フ
ラスコに接種して、往復振盪機上、28℃で２日間
培養した。この培養液の1.5を、オレイン酸3.0
％，生大豆粉0.5％，麦芽エキス0.5％，ポリペプ
トン0.5％，酵母エキス0.2％，KH₂PO₄0.1％，
FeSO₄・7H₂O 0.05％，MnSO₄・nH₂O 0.05％及
びMgSO₄・7H₂O 0.05％，PH4.5からなる主培養
培地100を注入，滅菌した200容醗酵槽に移植
した。この主醗酵は28℃，通気（100／min），
撹拌（200r.p.m.）して114時間，内圧1.0Kg／cm²下
で培養した。同様にして得られた主醗酵液の２バ
ツチ分を合わせて、過によつて除菌体して、
FA−5859を含有する培養液を得た。 実施例 ２ 実施例１で得られた培養液のうちの125を
アンバーライトIR−120（H⁺型）（20）のカラ
ムに通し、水40でカラムを洗滌後Ｎ−アンモニ
ア水60で溶出した。溶出液を30まで減圧濃縮
してアンモニアを留去した後、クロマトグラフイ
ー用活性炭カラム（30）に通し、水60でカラ
ムを洗滌後、50％メタノール水90で溶出した。
溶出液を10宛分画し、有効区分フラクシヨンNo.
５〜６をあつめて減圧濃縮するとシロツプ状の粗
物質25.5ｇが得られた。この粗物質をPH4.0酢酸
緩衝液（0.05M）100mlに溶解し、これをPH4.0の
酢酸緩衝液（0.1M）で緩衝化したダウエツクス
50×２（500ml）のカラムに通した。同緩衝液PH
4.01，PH4.3 1.5，PH4.6 1.5，PH5.0 1.5を
用いて順次溶出を行つた。溶出液を100ml宛分画
しフラクシヨンNo.32〜63を集めてアンバーライト
IR−120（H⁺型）（300ml）のカラムに通し、水
600mlで洗滌後0.5N−アンモニア水1.5で溶出し
た。溶出液を500mlまで減圧濃縮し、濃縮液をダ
ウエツクス１×２（OH^-型）（200ml）に通し、水
200mlで洗滌した。この通過液および洗滌液を合
わせて減圧濃縮後、凍結乾燥を行つた。ここに得
られたシロツプ状物質を室温放置すると無色吸湿
性結晶状のFA−5859遊離体10.7ｇが得られた。
この物質の赤外線吸収スペクトルを第１図に示
す。 実施例 ３ 実施例２で得られたFA−5859遊離体210mgを水
10mlに溶解し氷冷しながら1N−塩酸１mlを加え
減圧濃縮後エタノール10mlを加えて室温に放置し
て得られた結晶を水，エタノールから再結晶する
と無色針状晶のFA−5859の塩酸塩225mgが得られ
た。m.p.215℃（分解）。この物質の赤外線吸収ス
ペクトルを第２図に示す。 実施例 ４ 実施例１に記載の方法に準じ以下に示す微生物
を用い培養した結果、FA−5859が生産されてい
ることを確認した。 エメリセラ・カドリリネアターIFO 30911， エメリセラ・カドリリネアターIFO 30912， エメリセラ・カドリリネアタ−IFO 30850， エメリセラ・カドリリネアターIFO 30851， エメリセラ・ニードランス・バール・アクリス
ターターIFO 30063， エメリセラ・ニードランス・バール・アクリス
ターターIFO 30844， エメリセラ・クライストミヌターIFO 30839， エメリセラ・ニードランス・バール・ニードラ
ンスIFO 30872， エメリセラ・ニードランス・バール・ラーター
IFO 30847， エメリセラ・ルグローサーIFO 8626， エメリセラ・ルグローサーIFO 8629， エメリセラ・ルグローサーIFO 30913， エメリセラ・ルグローサーIFO 30852， エメリセラ・ルグローサーIFO 30853， エメリセラ・ニードランスIFO 5719， エメリセラ・ニードランスIFO 7077， エメリセラ・ニードランスIFO 30062， エメリセラ・サブラーターIFO 30906 実施例 ５ アスペルギルスsp.No.3704株（IFO31171，
FERM BP−185）を、実施例１と同様の種培養
培地500mlを分注滅菌した２容坂口フラスコに
接種して、往復振盪培養機上で28℃で２日間培養
した。この培養液の1.5を、大豆油3.0％，生大
豆粉0.5％，麦芽エキス0.5％，ポリペプトン0.5
％，酵母エキス0.2％，KH₂PO₄0.1％，FeSO₄・
7H₂O 0.05％，MnSO₄・nH₂O0.05％及び
MgSO₄・7H₂O 0.05％，PH4.5からなる主培養培
地100を注入し、滅菌した200容醗酵槽に移植
した。この主醗酵は28℃，通気（100／min），
撹拌（200r.p.m.）の条件下114時間，内圧1.0Kg／
cm²で培養した。得られた培養液を過につて除菌
体すると、FA−5859を含有する培養液80が
得られた。 実施例 ６ 実施例５で得られた液80を実施例２と同様
に処理，精製し得られたシロツプ状のFA−5859
遊離体3.15ｇを水150mlに溶解し、氷冷しながら
Ｎ−塩酸15mlを加え減圧濃縮後エタノール150ml
を加えて放置して得られた結晶を水，エタノール
から再結晶すると、無色針状晶のFA−5859塩酸
塩3.3ｇが得られた。m.p.214℃（分解） 元素分析値Ｃ 45.39；Ｈ 7.73；Ｎ 11.50；Cl
14.77％ 実施例 ７ FA−5859遊離体1.60ｇを定沸点塩酸40mlに溶
解し、95℃で16時間放置した。反応液を減圧濃縮
し、残留物に少量の水を加えて再び減圧濃縮し
た。残留物にメタノールとジエチルエーテルとの
混合溶媒を加え、析出する結晶をろ取した。メタ
ノールより再結晶すると、1.20ｇのデアセチル
FA−5859の２塩酸塩が得られた。融点 219〜
220℃，〔α〕D²²＋6.3゜（ｃ＝1.0，Ｎ−AcOH） 元素分析：C₇H₁₈O₂N₂Cl₂ 理論値：Ｃ 36.05；Ｈ 7.77；Ｎ 12.01；Cl
30.40％ 実測値：Ｃ 36.09；Ｈ 7.72；Ｎ 11.81；Cl
29.80％ 吸収スペクトル：210nmから700nmまでの紫外お
よび可視領域には特徴的な吸収は示さない。 参考例 １ (1) （Ｌ）−α−ベンジルオキシカルボニルアミ
ノ−β−ｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピ
オン酸6.1ｇを酢酸エチル100mlに溶解し、−10
℃に冷却してこれをＮ−メチルモルホリン1.8
ｇとクロル炭酸エチル1.9ｇとを加えて−10℃
で１時間かきまぜた。不溶部をろ別し、ろ液に
大過剰のジアゾメタン−ジエチルエーテル溶液
を加え０℃で１時間ついで室温で12時間かきま
ぜた。溶媒を減圧留去し、残留物をメタノール
50mlに溶解し、これに安息香酸の銀塩200mgの
トリエチルアミン溶液２mlを加え室温ついで暗
所で４時間かきまぜた。不溶物をろ別してろ液
を減圧濃縮し、残留物を酢酸エチル100mlに溶
解した。この酢酸エチル溶液を10％クエン酸
水，５％炭酸水素ナトリウム，水の順で洗い無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。酢酸エチルを留
去すると、（Ｌ）−β−ベンジルオキシカルボニ
ルアミノ−γ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ
酪酸メチルエステルの結晶が析出した。酢酸エ
チル−石油エーテルより再結晶した。収量4.8
ｇ（73％）。 融点 100−101℃，〔α〕D²⁴＋6.0゜（ｃ＝１，
ジメチルホルムアミド中） 元素分析：C₁₈H₂₆O₆N₂として 計算値：Ｃ，59.00；Ｈ，7.15；Ｎ，7.65（％） 実測値：Ｃ，59.30；Ｈ，7.07；Ｎ，7.74（％） (2) 上記で得た（Ｌ）−β−ベンジルオキシカル
ボニルアミノ−γ−ｔ−ブトキシカルボニルア
ミノ酪酸メチルエステル3.60ｇをメタノール20
mlに溶解し、０℃で1N−水酸化ナトリウム12
mlを加えた。室温で３時間かきまぜた後、クエ
ン酸で中和し、酢酸エチル100mlを加えた。酢
酸エチル溶液を水洗し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥後減圧濃縮した。析出した結晶をろ取し、
酢酸エチルより再結晶し、（Ｌ）−β−ベンジル
オキシカルボニルアミノ−γ−ｔ−ブトキシカ
ルボニルアミノ酪酸の結晶を得た。収量2.96ｇ
（85％）。 融点 136−137℃，〔α〕D²⁴＋12.2゜（ｃ＝１，
ジメチルホルムアミド中）。 元素分析：C₁₇H₂₄O₆N₂として 計算値：Ｃ，57.94；Ｈ，6.87；Ｎ，7.95（％） 実測値：Ｃ，57.97：Ｈ，6.76：Ｎ，8.13（％） 参考例 ２ 参考例１で得られた（Ｌ）−β−ベンジルオキ
シカルボニルアミノ−γ−ｔ−ブトキシカルボニ
ルアミノ酪酸0.75ｇをトリフルオロ酢酸10mlに溶
解し、室温で10分間放置した。反応液を減圧乾燥
し残留物をさらに減圧下乾燥した。これを10％水
酸化ナトリウム７mlに溶解し、０℃に冷却してジ
メチル硫酸0.65mlを加え０℃で１時間ついで室温
で１時間かきまぜた。反応液をアンバーライト
IR−120（H⁺型）のカラムクロマトグラフイー
（60ml）に付し、水洗後Ｎ−アンモニア水で溶出
し、150mlから220mlまでの溶出画分を集めて減圧
濃縮し、残留物を減圧乾燥して0.44ｇの（Ｌ）−
β−ベンジルオキシカルボニルアミノ−γ−トリ
メチルアミノ酪酸をアメ状物質として得た。薄層
クロマトグラフイー（担体：シリカゲル60F₂₅₄，
メルク社西ドイツ） １） Rf＝0.13（ｎ−プロパノール：水＝４：１） ２） Rf＝0.26（ｎ−プロパノール：水：15N−
アンモニア＝70：28：２）。 参考例 ３ (1) 参考例１で得られた（Ｌ）−β−ベンジルオ
キシカルボニルアミノ−γ−ｔ−ブトキシカル
ボニルアミノ酪酸1.4ｇを80％メタノール水30
mlに溶かし、パラジウム黒の存在下接触還元を
行つた。触媒をろ別してメタノールを留去し、
残留物に840mgの炭酸水素ナトリウムと水10ml
とを加えて溶かした。この溶液に０℃でアセト
ニトリル10mlと無水酢酸0.5mlとを加え、０℃
で１時間室温で12時間かきまぜた。アセトニト
リルを留去して、残留物にジエチルエーテル50
mlを加えて洗い、水層を0.1N塩酸で中和した。
酢酸エチル50mlで３回抽出し、酢酸エチル層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥した。酢酸エチルを
留去して石油ベンジンで結晶化し、酢酸エチル
から再結晶し、（Ｌ）−β−アセチルアミノ−γ
−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ酪酸の結晶を
得た。収量0.88ｇ（86％）。融点140−141℃。 〔α〕D²⁴＋26.0゜（ｃ＝0.9，ジメチルホルムア
ミド中）。 元素分析：C₁₁H₂₀O₅N₂として 計算値：Ｃ，50.75；Ｈ，7.75；Ｎ，10.76
（％） 実測値：Ｃ，50.53；Ｈ，7.35；Ｎ，10.68
（％） (2) 上記で得られた（Ｌ）−β−アセチルアミノ
−γ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ酪酸700
mgをトリフルオロ酢酸10mlに溶解し室温で30分
間放置した。トリフルオロ酢酸を留去して残留
物を減圧下乾燥し、100mlの水に溶解しダウエ
ツクス50×２（H⁺型）のカラム（300ml）に流
した。水洗した後0.5Nアンモニアで溶出し、
溶出液を減圧濃縮した。析出した結晶をろ取し
てメタノールより再結晶し、（Ｌ）−β−アセチ
ルアミノ−γ−アミノ酪酸の結晶を得た。収量
348mg。融点177−178℃（分解），〔α〕D²⁴−
15.4゜（ｃ＝0.7，0.1N−塩酸） 元素分析：C₆H₁₂O₃N₂として 計算値：Ｃ，44.99；Ｈ，7.55；Ｎ，17.49
（％） 実測値：Ｃ，44.83；Ｈ，7.62；Ｎ，17.22
（％） 実施例 ８ (1) 参考例２で得られた（Ｌ）−β−ベンジルオ
キシカルボニルアミノ−γ−トリメチルアミノ
酪酸0.39ｇを5.7N塩酸５mlに溶解し、溶液を90
℃で30分間加温した。反応液を減圧濃縮し、残
留物に少量の水を加えて再び減圧濃縮した。残
留物にメタノールとジエチルエーテルとの混合
溶媒を加え、析出する結晶をろ取して228mgの
（Ｌ）−γ−トリメチルアミノ−β−アミノ酢酸
（デアセチルFA−5859）を得た。融点219−220
℃（分解），〔α〕D²⁴＋6.7゜（ｃ＝１，Ｎ−酢酸
中）。 元素分析：C₇H₁₈O₂N₂Cl₂として 計算値：Ｃ，36.05；Ｈ，7.77；Ｎ，12.01；
Cl，30.40（％） 実測値：Ｃ，35.96；Ｈ，7.58；Ｎ，11.88；
Cl，30.13（％） (2) 実施例７で得られたデアセチルFA−5859の
２塩酸塩699mgを水20mlに溶かし０℃でかきま
ぜながら重炭酸ナトリウム1.1ｇ，無水酢酸
0.45mlをアセトニトリル10mlに溶かした溶液を
加えた。０℃で１時間，室温で終液かきまぜ
た。アセトニトリルを留去し、ダウエツクス50
×２（H⁺型）のカラム（80ml）に流した。水
300mlでカラムを洗い、0.5Nアンモニアで溶出
した。220mlから240mlの溶出画分をあつめて減
圧濃縮し、残渣を50mlの水に溶かして凍結乾燥
した。得られたアメ状物質を1N−塩酸2.8mlに
溶かし、減圧乾固した。残渣をメタノール−ジ
エチルエーテルを用いて結晶化し、（Ｌ）−γ−
トリメチルアミノ−β−アセチルアミノ酪酸・
塩酸塩（FA−5859・塩酸塩）の結晶を得た。
収量510mg。融点 222〜223℃（分解），〔α〕
D²⁴−20.0゜（ｃ＝0.75，水） 元素分析：C₉H₁₉O₃N₂Clとして 計算値：Ｃ，45.28；Ｈ，8.02；Ｎ，11.73；
Cl，14.85（％） 実測値：Ｃ，45.13；Ｈ，8.24；Ｎ，11.79；
Cl，14.73（％） 実施例 ９ (1) 参考例３で得られた（Ｌ）−β−アセチルア
ミノ−γ−アミノ酪酸288mgを10％水酸化ナト
リウム８mlに溶解した。この溶液を０℃に冷却
してジメチル硫酸0.8mlを加え、０℃で30分間
ついで室温で30分間かきまぜた後ダウエツクス
50×２（H⁺型）のカラムクロマトグラフイー
（80ml）に付した。カラムを水洗後0.5N−アン
モニア水で溶出し、205mlから240mlまでの溶出
画分をあつめて減圧濃縮した。残留物をＮ−塩
酸1.5mlに溶解し再び減圧乾固した。乾固物を
メタノール−ジエチルエーテルから結晶化し、
（Ｌ）−γ−トリメチルアミノ−β−アセチルア
ミノ酪酸・塩酸塩（FA−5859・塩酸塩）の結
晶を得た。収量220mg。融点 217−218℃（分
解），〔α〕D²⁴−30.2゜（ｃ＝0.96，水中） 元素分析：C₉H₁₉O₃N₂Clとして 計算値：Ｃ，45.28；Ｈ，8.02；Ｎ，11.73；
Cl，14.85（％） 実測値：Ｃ，44.97；Ｈ，8.02；Ｎ，11.49；
Cl，14.84（％） (2) 上記で得られた（Ｌ）−γ−トリメチルアミ
ノ−β−アセチルアミノ酪酸・塩酸塩（FA−
5859塩酸塩）100mgを5.7N塩酸５mlに溶解し、
100℃で６時間処理した。反応液を減圧濃縮し、
残留物に少量の水を加えて再び減圧濃縮した。
残留物にメタノールとジエチルエーテルとの混
合溶媒を加え、析出する結晶をろ取して95mgの
（Ｌ）−γ−トリメチルアミノ−β−アミノ酪
酸・２塩酸塩（デアセチルFA−5859・２塩酸
塩）の結晶を得た。融点 218−219℃（分解），
〔α〕D² ₄＋6.3゜（ｃ＝１，1N−酢酸中） 元素分析：C₇H₁₈O₂N₂Clとして 計算値：Ｃ，36.05；Ｈ，7.77；Ｎ，12.01；
Cl，30.40（％） 実測値：Ｃ，36.12；Ｈ，7.88；Ｎ，11.85；
Cl，30.11（％） 実施例 10 下記の成分を用いて、常套手段により錠剤を製
造する。 FA−5859 300mg コーン・スターチ 50mg ラクトース 28mg ヒドロキシプロピルセルロースＬ 20mg マグネシウム・ステアレート ２mg 400mg （１錠あたり） 成人一人あたり一日４〜８錠を毎食後（一日３
回）服用する。 実施例 11 下記の成分を用いて、常套手段により錠剤を製造
する。 デアセチルFA−5859 300mg コーン・スターチ 50mg ラクトース 28mg ヒドロキシプロピルセルロース−Ｌ 20mg マグネシウム・ステアレート ２mg 400mg （１錠あたり） 成人一人あたり一日２〜４錠を毎食後（一日３
回）服用する。The reaction can be carried out in the same manner as in the production of [9]. Each target product produced by each of the above reactions can be collected and purified by commonly used separation and purification means, such as chromatography and recrystallization. As is clear from the above, compound [8] can be used as a synthetic intermediate in producing useful compounds. In the above reaction step, salts of these compounds may be used. Examples of such salts include salts of sodium, potassium, calcium, barium, triethylamine, pyridine, hydrogen chloride, hydrogen bromide, hydrogen iodide, and the like. The present invention will be explained in more detail with reference to Reference Examples and Examples below. In addition, in the following examples, the percentage of the composition of the medium indicates the weight/volume percentage. Example 1 Emericellae that had grown sufficiently in advance to form spores on a slant medium made of potato sucrose agar.
One platinum loop of curd lineator IFO 5859, glucose 2.0%, maltose 3.0%, raw soybean flour 1.5
%、Consteep liquor 1.0%、Polypeptone 0.5
%, yeast extract 0.3%, salt 0.3%, pH 6.0 was inoculated into a sterilized 2-volume Sakaguchi flask and cultured for 2 days at 28°C on a reciprocating shaker. 1.5 of this culture solution, oleic acid 3.0
%, raw soybean flour 0.5%, malt extract 0.5%, polypeptone 0.5%, yeast extract 0.2%, KH ₂ PO ₄ 0.1%,
A main culture medium consisting of 0.05% FeSO ₄ .7H ₂ O, 0.05% MnSO ₄ .nH ₂ O, and 0.05% MgSO ₄ .7H ₂ O, PH 4.5 was injected and transferred to a sterilized 200-volume fermentor. This main fermentation is carried out at 28℃, aeration (100/min),
The mixture was stirred (200 rpm) and cultured for 114 hours under an internal pressure of 1.0 Kg/cm ² . Two batches of the main fermentation liquid obtained in the same manner were combined and sterilized by filtration.
A culture solution containing FA-5859 was obtained. Example 2 125 of the culture solution obtained in Example 1 was passed through a column of Amberlite IR-120 (H ⁺ type) (20), and after washing the column with 40% of water, it was eluted with 60% of N-ammonia water. . After the eluate was concentrated under reduced pressure to 30% to remove ammonia, it was passed through an activated carbon column for chromatography (30), and after washing the column with 60% of water, it was eluted with 90% of 50% methanol water.
Fractionate the eluate into 10 fractions and select effective fraction fraction no.
5 and 6 were collected and concentrated under reduced pressure to obtain 25.5 g of a syrupy crude substance. This crude substance was dissolved in 100 ml of PH4.0 acetate buffer (0.05M), and this was buffered with PH4.0 acetate buffer (0.1M).
It was passed through a 50×2 (500 ml) column. Same buffer pH
Elution was performed sequentially using 4.01, PH4.3 1.5, PH4.6 1.5, and PH5.0 1.5. Fractionate the eluate into 100ml portions, collect fractions No. 32 to 63, and add Amberlite.
Pass through a column of IR−120 (H ⁺ type) (300 ml) and add water.
After washing with 600 ml, it was eluted with 1.5 ml of 0.5N aqueous ammonia. Concentrate the eluate under reduced pressure to 500 ml, pass the concentrated solution through Dowex 1 x 2 (OH ^- type) (200 ml), and add water.
Washed with 200ml. The filtrate and washing solution were combined and concentrated under reduced pressure, followed by freeze-drying. When the resulting syrupy substance was allowed to stand at room temperature, 10.7 g of colorless hygroscopic crystalline FA-5859 educt was obtained.
The infrared absorption spectrum of this material is shown in FIG. Example 3 210 mg of FA-5859 educt obtained in Example 2 was added to water.
Dissolve in 10 ml of water, add 1 ml of 1N hydrochloric acid while cooling on ice, concentrate under reduced pressure, add 10 ml of ethanol, and let stand at room temperature. Recrystallize the obtained crystals from water and ethanol to obtain the hydrochloride of FA-5859 as colorless needle crystals. 225 mg was obtained. mp215℃ (decomposition). The infrared absorption spectrum of this material is shown in FIG. Example 4 As a result of culturing the following microorganisms according to the method described in Example 1, it was confirmed that FA-5859 was produced. Emericella quadrilineata IFO 30911, Emericella quadrilineata IFO 30912, Emericella quadrilineata IFO 30850, Emericella quadrilineata IFO 30851, Emericella needlans bur acristarter IFO 30063, Emericella needlans bur acristarter IFO 30844, Mericela・Christminuta IFO 30839, Emericella Needlans Baal Needlans IFO 30872, Emericella Needlans Baal Larter
IFO 30847, Emericella Legrocer IFO 8626, Emericella Legrocer IFO 8629, Emericella Legrocer IFO 30913, Emericella Legrocer IFO 30852, Emericella Legrocer IFO 30853, Emericella Needlans IFO 5719, Emericella Needlans IFO 7077, Emericella Need Lance IFO 30062, Emericella sublator IFO 30906 Example 5 Aspergillus sp.No.3704 strain (IFO31171,
FERM BP-185) was inoculated into a sterilized 2-volume Sakaguchi flask by dispensing 500 ml of the same seed culture medium as in Example 1, and cultured at 28° C. for 2 days on a reciprocating shaking incubator. Add 1.5% of this culture solution to 3.0% soybean oil, 0.5% raw soybean flour, 0.5% malt extract, and 0.5% polypeptone.
%, yeast extract 0.2%, KH ₂ PO ₄ 0.1%, FeSO ₄ .
7H ₂ O 0.05%, MnSO ₄・nH ₂ O 0.05% and
A main culture medium consisting of 0.05% MgSO ₄ .7H ₂ O and PH 4.5 was injected into the tube and transferred to a sterilized 200-volume fermentor. This main fermentation is carried out at 28℃, aeration (100/min),
114 hours under stirring (200r.pm), internal pressure 1.0Kg/
Cultured at ^cm2 . When the obtained culture solution was passed through to remove bacteria, a culture solution 80 containing FA-5859 was obtained. Example 6 Syrup-like FA-5859 obtained by treating and purifying the liquid 80 obtained in Example 5 in the same manner as in Example 2
Dissolve 3.15g of the educt in 150ml of water, add 15ml of N-hydrochloric acid while cooling on ice, concentrate under reduced pressure, and add 150ml of ethanol.
The resulting crystals were recrystallized from water and ethanol to obtain 3.3 g of FA-5859 hydrochloride in the form of colorless needles. mp214℃ (decomposition) Elemental analysis value C 45.39; H 7.73; N 11.50; Cl
14.77% Example 7 1.60 g of FA-5859 educt was dissolved in 40 ml of constant boiling point hydrochloric acid and left at 95°C for 16 hours. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, a small amount of water was added to the residue, and the mixture was concentrated again under reduced pressure. A mixed solvent of methanol and diethyl ether was added to the residue, and the precipitated crystals were collected by filtration. When recrystallized from methanol, 1.20g of deacetyl
The dihydrochloride of FA-5859 was obtained. Melting point 219~
220℃, [α]D ²² +6.3° (c=1.0, N-AcOH) Elemental analysis: C ₇ H ₁₈ O ₂ N ₂ Cl ₂ Theoretical value: C 36.05; H 7.77; N 12.01; Cl
30.40% Actual value: C 36.09; H 7.72; N 11.81; Cl
29.80% Absorption spectrum: No characteristic absorption is shown in the ultraviolet and visible regions from 210nm to 700nm. Reference example 1 (1) Dissolve 6.1 g of (L)-α-benzyloxycarbonylamino-β-t-butoxycarbonylaminopropionic acid in 100 ml of ethyl acetate,
Cooled to 1.8°C and converted to N-methylmorpholine.
g and 1.9 g of ethyl chlorocarbonate and heated to -10°C.
I stirred it for an hour. The insoluble portion was filtered off, and a large excess of diazomethane-diethyl ether solution was added to the filtrate, followed by stirring at 0°C for 1 hour and then at room temperature for 12 hours. The solvent was distilled off under reduced pressure and the residue was dissolved in methanol.
To this was added 2 ml of a triethylamine solution containing 200 mg of silver salt of benzoic acid, and the mixture was stirred at room temperature and then in the dark for 4 hours. Insoluble materials were filtered off, the filtrate was concentrated under reduced pressure, and the residue was dissolved in 100 ml of ethyl acetate. This ethyl acetate solution was washed with 10% citric acid, 5% sodium bicarbonate, and water in this order, and dried over anhydrous sodium sulfate. When ethyl acetate was distilled off, crystals of (L)-β-benzyloxycarbonylamino-γ-t-butoxycarbonylaminobutyric acid methyl ester were precipitated. It was recrystallized from ethyl acetate-petroleum ether. Yield 4.8
g (73%). Melting point 100-101℃, [α]D ²⁴ +6.0゜(c=1,
(in dimethylformamide) Elemental analysis: as C ₁₈ H ₂₆ O ₆ N ₂ Calculated value: C, 59.00; H, 7.15; N, 7.65 (%) Actual value: C, 59.30; H, 7.07; N, 7.74 (%) (2) Add 3.60 g of (L)-β-benzyloxycarbonylamino-γ-t-butoxycarbonylaminobutyric acid methyl ester obtained above to 20 g of methanol
ml of 1N sodium hydroxide at 0°C.
Added ml. After stirring at room temperature for 3 hours, the mixture was neutralized with citric acid and 100 ml of ethyl acetate was added. The ethyl acetate solution was washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. Filter the precipitated crystals,
Recrystallization from ethyl acetate gave crystals of (L)-β-benzyloxycarbonylamino-γ-t-butoxycarbonylaminobutyric acid. Yield 2.96g
(85%). Melting point 136-137℃, [α]D ²⁴ +12.2゜(c=1,
in dimethylformamide). Elemental analysis: As C ₁₇ H ₂₄ O ₆ N ₂ Calculated value: C, 57.94; H, 6.87; N, 7.95 (%) Actual value: C, 57.97: H, 6.76: N, 8.13 (%) Reference example 2 Reference 0.75 g of (L)-β-benzyloxycarbonylamino-γ-t-butoxycarbonylaminobutyric acid obtained in Example 1 was dissolved in 10 ml of trifluoroacetic acid and allowed to stand at room temperature for 10 minutes. The reaction solution was dried under reduced pressure, and the residue was further dried under reduced pressure. This was dissolved in 7 ml of 10% sodium hydroxide, cooled to 0°C, 0.65 ml of dimethyl sulfate was added, and the mixture was stirred at 0°C for 1 hour and then at room temperature for 1 hour. Amber light the reaction solution
Subjected to column chromatography (60 ml) using IR-120 (H ⁺ type), washed with water, eluted with N-ammonia water, collected eluted fractions from 150 ml to 220 ml, concentrated under reduced pressure, and dried the residue under reduced pressure. and 0.44g (L)-
β-Benzyloxycarbonylamino-γ-trimethylaminobutyric acid was obtained as a candy-like substance. Thin layer chromatography (carrier: silica gel 60F ₂₅₄ ,
Merck & Co., West Germany) 1) Rf = 0.13 (n-propanol: water = 4:1) 2) Rf = 0.26 (n-propanol: water: 15N-
Ammonia = 70:28:2). Reference Example 3 (1) 1.4 g of (L)-β-benzyloxycarbonylamino-γ-t-butoxycarbonylaminobutyric acid obtained in Reference Example 1 was added to 30 g of 80% methanol water.
ml and subjected to catalytic reduction in the presence of palladium black. The catalyst is filtered off and methanol is distilled off.
840 mg sodium bicarbonate and 10 ml water to the residue
was added and dissolved. Add 10 ml of acetonitrile and 0.5 ml of acetic anhydride to this solution at 0°C, and
Stir for 1 hour at room temperature for 12 hours. Distill the acetonitrile and add 50% diethyl ether to the residue.
ml was added for washing, and the aqueous layer was neutralized with 0.1N hydrochloric acid.
Extraction was performed three times with 50 ml of ethyl acetate, and the ethyl acetate layer was dried over anhydrous sodium sulfate. Ethyl acetate was distilled off, crystallized from petroleum benzine, recrystallized from ethyl acetate, and (L)-β-acetylamino-γ
Crystals of -t-butoxycarbonylaminobutyric acid were obtained. Yield 0.88g (86%). Melting point 140-141℃. [α]D ²⁴ +26.0° (c=0.9, in dimethylformamide). Elemental analysis: as C ₁₁ H ₂₀ O ₅ N ₂ Calculated values: C, 50.75; H, 7.75; N, 10.76
(%) Actual value: C, 50.53; H, 7.35; N, 10.68
(%) (2) (L)-β-acetylamino-γ-t-butoxycarbonylaminobutyric acid obtained above 700
mg was dissolved in 10 ml of trifluoroacetic acid and left at room temperature for 30 minutes. Trifluoroacetic acid was distilled off, and the residue was dried under reduced pressure, dissolved in 100 ml of water, and applied to a Dowex 50×2 (H ⁺ form) column (300 ml). After washing with water, elute with 0.5N ammonia,
The eluate was concentrated under reduced pressure. The precipitated crystals were collected by filtration and recrystallized from methanol to obtain crystals of (L)-β-acetylamino-γ-aminobutyric acid. yield
348 mg. Melting point 177-178℃ (decomposition), [α]D ²⁴ −
15.4゜ (c=0.7, 0.1N-hydrochloric acid) Elemental analysis: As C ₆ H ₁₂ O ₃ N ₂ Calculated value: C, 44.99; H, 7.55; N, 17.49
(%) Actual value: C, 44.83; H, 7.62; N, 17.22
(%) Example 8 (1) Dissolve 0.39 g of (L)-β-benzyloxycarbonylamino-γ-trimethylaminobutyric acid obtained in Reference Example 2 in 5 ml of 5.7N hydrochloric acid, and dilute the solution to 90%
Warmed at ℃ for 30 minutes. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, a small amount of water was added to the residue, and the mixture was concentrated again under reduced pressure. A mixed solvent of methanol and diethyl ether was added to the residue, and the precipitated crystals were collected by filtration to obtain 228 mg of (L)-γ-trimethylamino-β-aminoacetic acid (deacetyl FA-5859). Melting point 219−220
°C (decomposed), [α]D ²⁴ +6.7° (c=1, in N-acetic acid). Elemental analysis: as C ₇ H ₁₈ O ₂ N ₂ Cl ₂ Calculated values: C, 36.05; H, 7.77; N, 12.01;
Cl, 30.40 (%) Actual value: C, 35.96; H, 7.58; N, 11.88;
Cl, 30.13 (%) (2) Dissolve 699 mg of the dihydrochloride of deacetyl FA-5859 obtained in Example 7 in 20 ml of water and add 1.1 g of sodium bicarbonate and acetic anhydride while stirring at 0°C.
A solution of 0.45 ml dissolved in 10 ml of acetonitrile was added. The solution was stirred at 0°C for 1 hour and then at room temperature until the end. Distill the acetonitrile and use Dowex 50
It was applied to a ×2 (H ⁺ type) column (80 ml). water
The column was washed with 300ml and eluted with 0.5N ammonia. Elution fractions from 220 ml to 240 ml were collected and concentrated under reduced pressure, and the residue was dissolved in 50 ml of water and freeze-dried. The resulting candy-like substance was dissolved in 2.8 ml of 1N hydrochloric acid and dried under reduced pressure. The residue was crystallized using methanol-diethyl ether to give (L)-γ-
Trimethylamino-β-acetylaminobutyric acid
Crystals of hydrochloride (FA-5859/hydrochloride) were obtained.
Yield 510mg. Melting point 222-223℃ (decomposition), [α]
D ²⁴ −20.0° (c=0.75, water) Elemental analysis: C ₉ H ₁₉ O ₃ N ₂ Cl Calculated value: C, 45.28; H, 8.02; N, 11.73;
Cl, 14.85 (%) Actual value: C, 45.13; H, 8.24; N, 11.79;
Cl, 14.73 (%) Example 9 (1) 288 mg of (L)-β-acetylamino-γ-aminobutyric acid obtained in Reference Example 3 was dissolved in 8 ml of 10% sodium hydroxide. This solution was cooled to 0°C, 0.8 ml of dimethyl sulfate was added, stirred at 0°C for 30 minutes, then at room temperature for 30 minutes, and then dowexed.
It was subjected to 50×2 (H ⁺ type) column chromatography (80 ml). After washing the column with water, it was eluted with 0.5N aqueous ammonia, and the eluted fractions from 205 ml to 240 ml were collected and concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in 1.5 ml of N-hydrochloric acid and dried again under reduced pressure. The dry solid was crystallized from methanol-diethyl ether,
Crystals of (L)-γ-trimethylamino-β-acetylaminobutyric acid hydrochloride (FA-5859 hydrochloride) were obtained. Yield 220mg. Melting point 217-218℃ (decomposed), [α]D ²⁴ -30.2゜ (c=0.96, in water) Elemental analysis: C ₉ H ₁₉ O ₃ N ₂ Cl Calculated value: C, 45.28; H, 8.02; N, 11.73;
Cl, 14.85 (%) Actual value: C, 44.97; H, 8.02; N, 11.49;
Cl, 14.84 (%) (2) (L)-γ-trimethylamino-β-acetylaminobutyric acid hydrochloride (FA-
Dissolve 100mg of 5859 hydrochloride in 5ml of 5.7N hydrochloric acid,
It was treated at 100°C for 6 hours. Concentrate the reaction solution under reduced pressure,
A small amount of water was added to the residue, and the mixture was again concentrated under reduced pressure.
A mixed solvent of methanol and diethyl ether was added to the residue, and the precipitated crystals were collected by filtration to obtain 95 mg of (L)-γ-trimethylamino-β-aminobutyric acid dihydrochloride (deacetyl FA-5859 dihydrochloride). ) were obtained. Melting point 218-219℃ (decomposition),
[α]D ² ₄ +6.3° (c=1,1N-in acetic acid) Elemental analysis: as C ₇ H ₁₈ O ₂ N ₂ Cl Calculated value: C, 36.05; H, 7.77; N, 12.01;
Cl, 30.40 (%) Actual value: C, 36.12; H, 7.88; N, 11.85;
Cl, 30.11 (%) Example 10 Tablets are manufactured by conventional means using the following ingredients. FA-5859 300mg Corn starch 50mg Lactose 28mg Hydroxypropyl cellulose L 20mg Magnesium stearate 2mg 400mg (per tablet) 4 to 8 tablets per adult after each meal (3 per day)
times) to take. Example 11 Tablets are manufactured by conventional means using the following ingredients. Deacetyl FA-5859 300mg Corn starch 50mg Lactose 28mg Hydroxypropyl cellulose-L 20mg Magnesium stearate 2mg 400mg (per tablet) 2 to 4 tablets per adult after each meal (3 per day)
times) to take.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図は実施例２で得られた生理活性物質FA
−5859の赤外線吸収スペクトルを、第２図は実施
例３で得られた生理活性物質FA−5859の塩酸塩
の赤外線吸収スペクトルをそれぞれ表わす。 Figure 1 shows the physiologically active substance FA obtained in Example 2.
-5859, and FIG. 2 shows the infrared absorption spectrum of the hydrochloride of the physiologically active substance FA-5859 obtained in Example 3.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １ 一般式 ［式中、R₁は水素またはアセチル基を示す。］で
表わされる化合物またはその塩。 ２ エメリセラ属またはアスペルギルス属に属す
る式 ［式中、R₁はアセチル基を示す。］で表わされる
生理活性物質FA−5859生産菌を培地に培養し、
培養物中に生理活性物質FA−5859を生成蓄積せ
しめ、これを採取することを特徴とする生理活性
物質FA−5859の製造法。 ３ 式 で表わされる化合物またはその塩を加水分解反応
に付すことを特徴とする式 で表わされる化合物またはその塩の製造法。 ４ 一般式 ［式中、R₂はアセチル基以外の保護基を示す。］
で表わされる化合物またはその塩を保護基脱離反
応に付し、必要によりアセチル化反応に付すこと
を特徴とする一般式 ［式中、R₁は水素またはアセチル基を示す。］で
表わされる化合物又は塩の製造法。 ５ 式 で表わされる化合物またはその塩をトリメチル化
反応に付し、必要により加水分解反応に付すこと
を特徴とする一般式 ［式中、R₁は水素またはアセチル基を示す。］で
表わされる化合物またはその塩の製造法。 ６ 一般式 ［式中、R₁は水素またはアセチル基を示す。］で
表わされる化合物またはその塩を含有する糖尿病
治療剤。[Claims] 1. General formula [In the formula, R ₁ represents hydrogen or an acetyl group. ] or its salt. 2 Formulas belonging to the genus Emericella or Aspergillus [In the formula, R ₁ represents an acetyl group. ] A physiologically active substance FA-5859 producing bacterium represented by is cultured in a medium,
1. A method for producing a physiologically active substance FA-5859, which comprises producing and accumulating the physiologically active substance FA-5859 in a culture and collecting the same. 3 formulas A formula characterized by subjecting a compound represented by or a salt thereof to a hydrolysis reaction A method for producing a compound represented by or a salt thereof. 4 General formula [In the formula, R ₂ represents a protecting group other than an acetyl group. ]
A general formula characterized in that a compound represented by or a salt thereof is subjected to a protecting group elimination reaction and, if necessary, an acetylation reaction. [In the formula, R ₁ represents hydrogen or an acetyl group. ] A method for producing a compound or salt represented by 5 formula A general formula characterized in that a compound represented by or a salt thereof is subjected to a trimethylation reaction and, if necessary, a hydrolysis reaction. [In the formula, R ₁ represents hydrogen or an acetyl group. ] A method for producing a compound represented by or a salt thereof. 6 General formula [In the formula, R ₁ represents hydrogen or an acetyl group. ] A therapeutic agent for diabetes containing a compound represented by or a salt thereof.