JPH03123863A - Immunoassay method and instrument - Google Patents
Immunoassay method and instrumentInfo
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- JPH03123863A JPH03123863A JP26333589A JP26333589A JPH03123863A JP H03123863 A JPH03123863 A JP H03123863A JP 26333589 A JP26333589 A JP 26333589A JP 26333589 A JP26333589 A JP 26333589A JP H03123863 A JPH03123863 A JP H03123863A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
この発明は免疫測定方法およびその装置に関し、さらに
詳細にいえば、先導波路内を全反射させながら励起光を
伝播させることにより発生するエバネッセント波成分に
より標識螢光体を励起し、標識螢光体から放射される螢
光の強度に基づいて免疫の９無、免疫の程度を測定する
ための方法およびその装置に関する。[Detailed Description of the Invention] <Industrial Application Field> The present invention relates to an immunoassay method and an apparatus thereof, and more specifically, to evanescent waves generated by propagating excitation light while undergoing total internal reflection within a leading waveguide. The present invention relates to a method and apparatus for exciting a labeled fluorophore with a component and measuring the degree of immunity based on the intensity of fluorescence emitted from the labeled fluorophore.
〈従来の技術、および発明が解決しようとする課題〉
従来からエバネッセント波成分により標識螢光体を励起
して免疫測定を行なうための装置として、測定用の光学
セルと参照用の光学セルとを用い、参照用の光学セルに
より得られる測定データをオフセット値として測定用の
光学セルにより得られる測定データに補正を施すダブル
・ビーム方式の装置と、測定用の光学セルのみを準備し
ておき、抗原−抗体反応を行なわせる前に緩衝液等を注
入してオフセット値の測定を行ない、次いで緩衝液を被
験液で置換して抗原−抗体反応を行なわせ、はぼ平衡し
た時点で測定データを得、オフセット値に基づく補正を
施す装置とが提供されている。<Prior art and problems to be solved by the invention> Conventionally, as a device for performing immunoassay by exciting a labeled fluorophore with an evanescent wave component, an optical cell for measurement and an optical cell for reference have been used. A double beam type device that corrects the measurement data obtained by the measurement optical cell using the measurement data obtained by the reference optical cell as an offset value, and the measurement optical cell are prepared. Before performing the antigen-antibody reaction, inject a buffer solution and measure the offset value, then replace the buffer solution with the test solution and perform the antigen-antibody reaction, and when the equilibrium is reached, measure the measured data. and an apparatus that performs correction based on an offset value.
そして、何れの装置においても、全く抗原−抗体反応が
行なわれていない状態でオフセット値を得ておき、抗原
−抗体反応測定データに対してオフセット値に基づく補
正を施すのであるから、がなり正確な免疫測定を行なう
ことができると期待されている。In both devices, the offset value is obtained before any antigen-antibody reaction takes place, and the antigen-antibody reaction measurement data is corrected based on the offset value. It is expected that it will be possible to perform effective immunoassays.
しかし、前者の装置においては測定用の光学セルと参照
用の光学セルとの特性が揃っていなければオフセット値
に基づく補正を行なっても測定精度が向上するという保
証がない。また、２つの光学セルが必要であることに伴
なって各光学セルにそれぞれ導かれる励起光を得るため
に複雑な光学系が必要になるという問題がある。However, in the former device, if the optical cell for measurement and the optical cell for reference do not have the same characteristics, there is no guarantee that measurement accuracy will improve even if correction is performed based on the offset value. Furthermore, since two optical cells are required, there is a problem in that a complicated optical system is required to obtain excitation light guided to each optical cell.
また、後者の装置においては被験液と緩衝液との置換が
必須になるため、処理工程数および処理所要時間が増加
するとともに、液を置換するための装置が複雑化すると
いう問題がある。そして、液の置換が１００％は行なわ
れなかった場合には、残留する緩衝液により被験液が希
釈されてしまうことになり、測定精度が低下することに
なる。さらに、実際上は反応開始時点とサンプリング・
タイミングとが一致するという保証が全くないとともに
、被験液注入直後は螢光標識抗体等の拡散等にある程度
の時間が必要であり、反応曲線がＳ字状になるのである
から、測定された値が正確なオフセット値であるという
保証がなく、かえって測定精度を損なってしまう可能性
が高いという問題がある。In addition, in the latter device, since it is necessary to replace the test solution with the buffer solution, there are problems in that the number of processing steps and the time required for processing increase, and the device for replacing the solution becomes complicated. If 100% of the solution is not replaced, the test solution will be diluted by the remaining buffer solution, resulting in a decrease in measurement accuracy. Furthermore, in practice, the starting point of the reaction and the sampling
There is no guarantee that the timing will match, and there is also a certain amount of time required for the diffusion of fluorescently labeled antibodies, etc. immediately after injection of the test solution, and the reaction curve will be S-shaped. There is a problem in that there is no guarantee that the offset value is an accurate offset value, and there is a high possibility that the measurement accuracy will be impaired.
さらに、何れの装置においても、抗原−抗体反応がほぼ
平衡した時点における測定データをオフセット値で補正
する、いわゆるエンドポイント測定法を採用しているの
であるから、免疫の程度に拘らず著しく長い時間が必要
になってしまう。Furthermore, because both devices use the so-called end-point measurement method, in which the measurement data at the point when the antigen-antibody reaction is almost at equilibrium is corrected using an offset value, it is possible to use the so-called end-point measurement method for a significantly long period of time, regardless of the degree of immunity. becomes necessary.
また、測定所要時間が長くかかるという不都合を解消さ
せるために、反応開始時刻以後における抗原−抗体反応
速度測定データを得、抗原−抗体反応速度測定データの
最大値に基づいて免疫の程度を測定するレート測定法が
提案されている。この方法によれば、測定所要時間を著
しく短くできることになるが、免疫の程度が著しく低い
場合にはＳ／Ｎ比が低下してしまい、この結果、十分な
測定精度が得られなくなってしまうという問題がある。In addition, in order to eliminate the inconvenience of a long time required for measurement, antigen-antibody reaction rate measurement data after the reaction start time is obtained, and the degree of immunity is measured based on the maximum value of the antigen-antibody reaction rate measurement data. A rate measurement method has been proposed. According to this method, the time required for measurement can be significantly shortened, but if the degree of immunity is extremely low, the S/N ratio will decrease, resulting in insufficient measurement accuracy. There's a problem.
〈発明の目的〉
この発明は上記の問題点に鑑みてなされたものであり、
エンド・ポイント測定法による測定精度を高めることが
できる免疫測定方法およびその装置を提供することを目
的としている。<Object of the invention> This invention was made in view of the above problems,
It is an object of the present invention to provide an immunoassay method and an apparatus for the same, which can improve measurement accuracy using an end point measurement method.
また、この発明は、免疫の程度に応じてレート測定法ま
たはエンド・ポイント測定法を選択することができる新
規な免疫測定方法およびその装置を提供することを目的
としている。Another object of the present invention is to provide a novel immunoassay method and an apparatus for the same, in which a rate measurement method or an end point measurement method can be selected depending on the degree of immunity.
く課題を解決するための手段〉
上記の目的を達成するための、この発明の免疫測定方法
は、レート測定法に基づいて反応速度測定データを得、
得られた反応速度測定データに基づいて反応時刻におけ
るオフセット値を算出し、算出されたオフセット値を用
いてエンド・ポイント測定法に基づく免疫測定を行なう
方法である。Means for Solving the Problems> In order to achieve the above object, the immunoassay method of the present invention obtains reaction rate measurement data based on a rate measurement method,
In this method, an offset value at the reaction time is calculated based on the obtained reaction rate measurement data, and the calculated offset value is used to perform an immunoassay based on an end point measurement method.
第２の発明の免疫測定方法は、レート測定法に基づく免
疫測定を行なって反応速度測定データを得、十分な測定
精度が得られるか否かを判別して、十分な１ＴｌｌＪ定
結果が得られると判別された場合には得られた反応速度
測定データをそのまま用い、逆に、十分な測定精度が得
られないと判別された場合には、レート測定法により得
られた反応速度測定データに基づいて反応開始時刻にお
けるオフセット値を算出し、オフセット値を用いてエン
ド・ポイント測定法に基づく反応測定データを用いる方
法である。The immunoassay method of the second invention performs an immunoassay based on the rate measurement method to obtain reaction rate measurement data, and determines whether or not sufficient measurement accuracy is obtained, thereby obtaining a sufficient 1TllJ determination result. If it is determined that the reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method is used as is, and if it is determined that sufficient measurement accuracy cannot be obtained, then the reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method is used. In this method, an offset value at the reaction start time is calculated, and the offset value is used to use reaction measurement data based on the end point measurement method.
但し、回帰区間を反応時定数よりも十分に短くしておき
、レート測定法により得られた反応速度測定データに基
づいて反応開始時刻まで直線回帰を行なってオフセット
値を算出する方法であってもよい。However, even if the regression interval is made sufficiently shorter than the reaction time constant and the offset value is calculated by performing linear regression up to the reaction start time based on the reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method, good.
また、レート測定法に基づく免疫測定結果が所定の閾値
よりも小さい場合に、十分な測定精度が得られないと判
別する方法であってもよい。Alternatively, a method may be used in which it is determined that sufficient measurement accuracy cannot be obtained when the immunoassay result based on the rate measurement method is smaller than a predetermined threshold.
上記の目的を達成するための、この発明の免疫測定装置
は、レート測定法に基づいて抗原−抗体反応速度測定デ
ータを得るレート測定手段と、レート測定手段により得
られた抗原−抗体反応速度測定データを用いて反応開始
時刻まで抗原−抗体反応曲線を外挿してオフセット値を
算出するすフセット値算出手段と、抗原−抗体反応がほ
ぼ平衡した時点で反応測定データを得、得られた反応測
定データとオフセット値との差を算出して抗原−抗体反
応測定データとして出力するエンドポイント測定手段と
を有している。To achieve the above object, the immunoassay device of the present invention includes a rate measuring means for obtaining antigen-antibody reaction rate measurement data based on a rate measuring method, and an antigen-antibody reaction rate measurement data obtained by the rate measuring means. offset value calculation means for calculating an offset value by extrapolating the antigen-antibody reaction curve up to the reaction start time using the data; and a offset value calculation means for calculating an offset value by extrapolating the antigen-antibody reaction curve up to the reaction start time; It has an end point measuring means that calculates the difference between the data and the offset value and outputs it as antigen-antibody reaction measurement data.
第６の発明の免疫測定装置は、レート測定法に基づいて
抗原−抗体反応速度測定データを得るレート測定手段と
、レート測定手段により得られた抗原−抗体反応速度測
定データに基づいて測定精度が十分か否かを判別する精
度判別手段と、測定精度が不十分であると判別されたこ
とを示す精度判別手段からの出力信号が供給されたこと
を条件として、レート１ｌＰＪ定手段により得られた抗
原−抗体反応速度測定データを用いて反応開始時刻まで
抗原−抗体反応曲線を外挿してオフセット値を算出する
すフセット値算出手段と、抗原−抗体反応がほぼ４ろ衡
した時点で反応測定データを得、得られた反応測定デー
タとオフセット値との差を算出して抗療−抗体反応測定
データとして出力するエンドポイント測定手段と、レー
ト測定手段からの出力データに基づいて抗原−抗体反応
測定データを得る変換手段と、精度判別手段からの出力
信号に基づいて変換手段からの出力データ、またはエン
ドポイント測定手段からの出力データを選択する選択手
段とを有している。The immunoassay device of the sixth invention includes a rate measuring means for obtaining antigen-antibody reaction rate measurement data based on a rate measurement method, and a measurement accuracy based on the antigen-antibody reaction rate measurement data obtained by the rate measuring means. The rate 1lPJ was obtained by the rate 1lPJ determination means on the condition that an output signal was supplied from the accuracy determination means for determining whether the measurement accuracy was sufficient and the output signal from the accuracy determination means for indicating that the measurement accuracy was determined to be insufficient. offset value calculation means for calculating an offset value by extrapolating the antigen-antibody reaction curve up to the reaction start time using the antigen-antibody reaction rate measurement data; an endpoint measurement means that calculates the difference between the obtained reaction measurement data and the offset value and outputs it as antitherapy-antibody reaction measurement data; and an antigen-antibody reaction measurement based on the output data from the rate measurement means. It has a conversion means for obtaining data, and a selection means for selecting output data from the conversion means or output data from the endpoint measurement means based on the output signal from the accuracy determination means.
く作用〉
以上の免疫Δ−１定方法であれば、先導波路の反応面と
接するように被験液を注入した後、レート測定法により
抗原−抗体反応速度測定データを得るので、この抗原−
抗体反応速度測定データに基づいて抗原−抗体反応開始
時点におけるオフセット値を算出することができる。し
たがって、その後は、エンド・ポイント測定法により、
はぼ飽和した時点における測定データを得、オフセット
値との差分を算出することにより抗原−抗体反応に起因
する真の測定データを得ることができる。In the above immune Δ-1 determination method, the test solution is injected so that it comes into contact with the reaction surface of the leading waveguide, and then the antigen-antibody reaction rate measurement data is obtained by the rate measurement method.
An offset value at the start of the antigen-antibody reaction can be calculated based on the antibody reaction rate measurement data. Therefore, after that, by the end point measurement method,
By obtaining measurement data at the time of saturation and calculating the difference from the offset value, true measurement data resulting from the antigen-antibody reaction can be obtained.
第２の発明の免疫測定方法であれば、先導波路の反応面
と接するように被験液を注入した後、し＝ト測定法によ
り抗原−抗体反応速度測定データを得るので、この測定
データに基づいてレート測定法で十分な測定結果が得ら
れるか否かを判別することができる。したがって、十分
な測定精度が得られると判別された場合には、得られた
抗原−抗体反応速度データに基づいて抗原−抗体反応量
を示す測定データを得ることができる。逆に、十分な測
定精度が得られないと判別された場合には、レート測定
法により得られた抗原−抗体反応速度測定データに基づ
いて抗原−抗体反応開始時点におけるオフセット値を算
出することができる。したがって、その後は、エンド・
ポイント測定法により、はぼ飽和した時点における測定
データを得、オフセット値との差分を算出することによ
り抗原−抗体反応に起因する真の測定データを得ること
ができる。In the immunoassay method of the second invention, the test solution is injected so as to be in contact with the reaction surface of the leading waveguide, and then the antigen-antibody reaction rate measurement data is obtained by the plasma measurement method, and based on this measurement data. It can be determined whether sufficient measurement results can be obtained using the rate measurement method. Therefore, when it is determined that sufficient measurement accuracy can be obtained, measurement data indicating the amount of antigen-antibody reaction can be obtained based on the obtained antigen-antibody reaction rate data. On the other hand, if it is determined that sufficient measurement accuracy cannot be obtained, it is possible to calculate the offset value at the start of the antigen-antibody reaction based on the antigen-antibody reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method. can. Therefore, after that, the end
By the point measurement method, measurement data is obtained at the time of saturation, and by calculating the difference from the offset value, true measurement data resulting from the antigen-antibody reaction can be obtained.
そして、回帰区間を反応時定数よりも十分に短くしてお
き、レート測定法により得られた反応速度測定データに
基づいて反応開始時刻まで直線回帰を行なってオフセッ
ト値を算出する方法である場合には、演算所要時間を短
くして実時間処理に適合させることができる。Then, if the regression interval is made sufficiently shorter than the reaction time constant, and the offset value is calculated by performing linear regression up to the reaction start time based on the reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method, can be adapted to real-time processing by shortening the calculation time required.
また、レート測定法に基づく免疫測定結果が所定の閾値
よりも小さい場合に、十分な測定精度が得られないと判
別する方法である場合には、判別処理を簡素化できる。Further, if the method determines that sufficient measurement accuracy cannot be obtained when the immunoassay result based on the rate measurement method is smaller than a predetermined threshold value, the determination process can be simplified.
以上の構成の免疫測定装置であれば、先導波路の反応面
と接するように被験液を注入した後、レート測定手段に
より抗原−抗体反応速度測定データを得るので、この抗
原−抗体反応速度測定データに基づいてオフセット値算
出手段により抗原−抗体反応開始時点におけるオフセッ
ト値を算出することができる。したがって、その後は、
エンド・ポイント測定手段により、はぼ飽和した時点に
おける測定データを得、オフセット値との差分を算出す
ることにより抗原−抗体反応に起因する真の測定データ
を得ることができる。With the immunoassay device having the above configuration, after the test liquid is injected so as to be in contact with the reaction surface of the leading waveguide, antigen-antibody reaction rate measurement data is obtained by the rate measuring means, so this antigen-antibody reaction rate measurement data is obtained. Based on this, the offset value calculation means can calculate the offset value at the start of the antigen-antibody reaction. Therefore, after that,
The end point measuring means obtains measurement data at the point of saturation, and by calculating the difference from the offset value, true measurement data resulting from the antigen-antibody reaction can be obtained.
第６の発明の免疫測定装置であれば、先導波路の反応面
と接するように被験液を注入した後、レート測定手段に
より抗原−抗体反応速度測定データを得るので、この測
定データに基づいて精度判別手段によりレート測定法で
十分な測定結果が得られるか否かを判別することができ
る。In the immunoassay device of the sixth invention, after the test liquid is injected so as to be in contact with the reaction surface of the leading waveguide, the antigen-antibody reaction rate measurement data is obtained by the rate measuring means, so the accuracy is based on this measurement data. The determining means can determine whether or not sufficient measurement results can be obtained using the rate measurement method.
そして、精度判別手段により十分な測定精度が得られる
と判別された場合には、得られた抗原−抗体反応速度デ
ータに基づいて変換手段および選択手段により抗原−抗
体反応量を示す測定データを得ることができる。逆に、
十分な測定精度が得られないと判別された場合には、レ
ート測定手段により得られた抗原−抗体反応速度測定デ
ータに基づいてオフセット値算出手段により抗原−抗体
反応開始時点におけるオフセット値を算出することがで
きる。したがって、その後は、エンド・ポイント測定手
段により、はぼ飽和した時点における測定データを得、
オフセット値との差分を算出することにより抗原−抗体
反応に起因する真の測定データを得ることができる。If the accuracy determination means determines that sufficient measurement accuracy is obtained, the conversion means and selection means obtain measurement data indicating the amount of antigen-antibody reaction based on the obtained antigen-antibody reaction rate data. be able to. vice versa,
If it is determined that sufficient measurement accuracy cannot be obtained, the offset value at the start of the antigen-antibody reaction is calculated by the offset value calculation means based on the antigen-antibody reaction rate measurement data obtained by the rate measurement means. be able to. Therefore, after that, the end point measurement means obtains measurement data at the point of saturation.
By calculating the difference from the offset value, true measurement data resulting from the antigen-antibody reaction can be obtained.
〈実施例〉 以下、実施例を示す添付図面によって詳細に説明する。<Example> Hereinafter, embodiments will be described in detail with reference to the accompanying drawings showing examples.
第７図はこの発明の免疫測定方法において使用される光
学的測定装置の概略構成を示す斜視図であり、両端に光
入出射部としてのプリズム部（２１ａ）が一体成形され
たスラブ型先導波路（２１）を包囲するようにケーシン
グ（２２）が設けられている。そして、スラブ型先導波
路（２１）の表面に抗体（２３）が予め固定されている
。また、ケーシング（２２）に包囲された空間が反応槽
（２２ａ）である。FIG. 7 is a perspective view showing a schematic configuration of an optical measurement device used in the immunoassay method of the present invention, in which a slab-type leading waveform is integrally formed with prism portions (21a) as light input/output portions at both ends. A casing (22) is provided to surround (21). An antibody (23) is fixed in advance on the surface of the slab-type leading waveguide (21). Further, a space surrounded by the casing (22) is a reaction tank (22a).
第１図はこの発明の免疫測定方法の一実施例を示すフロ
ーチャートであり、ステップ■においてスラブ型先導波
路（２１）に対する励起光の導入を開始し、ステップ■
において、予め設定されたサンプリング時間でのレート
測定法に基づく測定を開始する。そして、ステップ■に
おいて、抗原（２３ａ）を含む被験液を希釈し、螢光標
識抗体（２３ｂ）を混合した溶液で反応槽（２２ａ）の
緩衝液を置換すれば、抗原−抗体反応が進行するので反
応速度に対応する信号が得られる。この信号は抗原−抗
体反応曲線の接線傾きに基づいて定まるのであるから、
ステップ■において、得られた信号を外挿することによ
り反応開始時点における信号のレベル、即ちオフセット
値を算出できる。したがって、その後はステップ■にお
いてエンド・ポイント測定法に基づく測定を開始し、ス
テップ■において測定信号のレベルが殆ど変化しなくな
るまで待ってから、ステップ■において、レベルが殆ど
変化しなくなった測定信号とオフセット値との差分を得
、ステップ■において、差分に基づいて抗原−抗体反応
量を得ることができる。FIG. 1 is a flowchart showing an embodiment of the immunoassay method of the present invention, in which the introduction of excitation light to the slab-type leading waveguide (21) is started in step (2), and in step (2)
, a measurement based on a rate measurement method is started at a preset sampling time. Then, in step (2), the antigen-antibody reaction proceeds by diluting the test solution containing the antigen (23a) and replacing the buffer in the reaction tank (22a) with a solution containing the fluorescently labeled antibody (23b). Therefore, a signal corresponding to the reaction rate can be obtained. This signal is determined based on the tangent slope of the antigen-antibody reaction curve, so
In step (2), by extrapolating the obtained signal, the signal level at the start of the reaction, that is, the offset value can be calculated. Therefore, after that, in step (2), measurement based on the end point measurement method is started, in step (2), wait until the level of the measurement signal hardly changes, and in step (2), the measurement signal whose level has hardly changed is measured. The difference between the offset value and the offset value is obtained, and in step (2), the amount of antigen-antibody reaction can be obtained based on the difference.
第２図は得られる測定信号の時間的変化を示す図であり
、当初は緩衝液のみが反応槽（２２ａ）に収容されてい
るにも拘らず、スラブ型先導波路（２１）自体の発する
螢光、ラマン散乱等によりある程度のレベルの測定信号
（スラブ型先導波路によるオフセット値）が得られる（
第２図中領域Ｒ１参照）。そして、緩衝液を螢光標識抗
体が混合された被験液で置換した当初は、抗原−抗体反
応は行なっていないがスラブ型先導波路（２１）の反応
面近傍に存在する螢光標識抗体に起因するすフセット値
だけ急激に測定信号が立上り（第２図中時点Ｒ２参照）
、その後は被験液中に存在する抗原の量に基づいて定ま
る割合いで測定信号のレベルが徐々に増加しく第２図中
領域Ｒ３参照）、ある程度の時間が経過すれば、測定信
号のレベルが殆ど変化しない平衡状態になる（第２図中
領域Ｒ４参照）。FIG. 2 is a diagram showing the temporal change in the obtained measurement signal, and even though only the buffer solution is initially contained in the reaction tank (22a), the light emitted from the slab-type leading waveguide (21) itself A measurement signal of a certain level (offset value due to the slab-type leading waveguide) can be obtained by light, Raman scattering, etc. (
(See region R1 in FIG. 2). Initially, when the buffer solution was replaced with a test solution mixed with a fluorescently labeled antibody, no antigen-antibody reaction occurred, but the reaction occurred due to the fluorescently labeled antibody present near the reaction surface of the slab-type leading waveguide (21). The measurement signal suddenly rises by the offset value (see point R2 in Figure 2).
After that, the level of the measurement signal gradually increases at a rate determined based on the amount of antigen present in the test solution (see region R3 in Figure 2), and after a certain amount of time, the level of the measurement signal becomes almost zero. An unchanging equilibrium state is reached (see region R4 in FIG. 2).
したがって、抗原−抗体反応開始当初においてレート測
定法に基づく測定を行ない、この測定データに基づいて
線形回帰法、非線形回帰法、区分的補間法等により、抗
原−抗体反応開始時点におけるオフセット値を得ること
ができる。さらに詳細に説明すると、免疫反応当初にお
ける信号強度５（ｔ）（第３図参照）は、第１次近似と
して指数関数で次のように表現できる。Therefore, measurements are performed based on the rate measurement method at the beginning of the antigen-antibody reaction, and based on this measurement data, an offset value at the beginning of the antigen-antibody reaction is obtained by a linear regression method, a nonlinear regression method, a piecewise interpolation method, etc. be able to. To explain in more detail, the signal intensity 5(t) (see FIG. 3) at the beginning of the immune reaction can be expressed as a first approximation using an exponential function as follows.
Ｓ （ｔ）−ａ＋ｂ ｃｘｐ（−ｔ／ｒ）（但し、ａ
、ｂは定数、τは反応の活性に依存する反応時定数で十
数秒から数百秒の値をとり得る）また、上記指数関数以
外にも、
Ｓ （ｔ） −ａ＋ｂ ｅｘｐ（−ｔ／ｒ） ＋ｃ ｅ
ｘｐ（−ｔ／τ′）
のような関数による近似表現も可能である。しかし、こ
れらの近似表現を用いて回帰演算を行なうと非線形故に
計算に多大の時間がかかるのみならず、収束させるため
に必要な時間が予測困難であるから、実時間処理には到
底適用し得ない。このような点を考慮して鋭意研究を重
ねた結果、回帰区間Ｔが反応時定数τに対して特定の関
係を充足すれば、線形回帰によっても得られるオフセッ
ト値の精度低下を抑制できることを見出した。即ち、Ｔ
〈くτであればＳ （ｔ）−ａ ｔ＋ｂの直線回帰が可
能であり、Ｔ〜τであればｓ＜ｔ＞ −ａＪｔ十すの放
物線回帰等の線形多項式による回帰が可能である。計算
の安定性、容品さ等を考慮すれば直線回帰が最も好まし
いが、回帰区間が著しく短くなり、結果的に精度が低下
する可能性がある。S (t)-a+b cxp(-t/r) (however, a
, b is a constant, and τ is a reaction time constant that depends on the activity of the reaction and can take values from tens of seconds to hundreds of seconds) In addition to the above exponential function, S (t) −a+b exp(−t/r ) +c e
Approximate expression using a function such as xp(-t/τ') is also possible. However, performing regression calculations using these approximate expressions not only takes a large amount of time to calculate due to non-linearity, but also makes it difficult to predict the time required for convergence, so it cannot be applied to real-time processing. do not have. As a result of intensive research taking these points into consideration, we found that if the regression interval T satisfies a specific relationship with the reaction time constant τ, it is possible to suppress the decrease in accuracy of the offset value obtained by linear regression. Ta. That is, T
If <<[tau], linear regression of S(t)-a t+b is possible, and if T~[tau], regression using a linear polynomial such as parabolic regression of s<t>-aJt is possible. Linear regression is the most preferable in terms of calculation stability, elegance, etc., but the regression interval may become significantly shorter, resulting in lower accuracy.
したがって、精度の低下が顕著になる低信号時に回帰区
間Ｔを長くすればよいと思われる。このような対処は、
低信号時の精度低下の主因がデータと回帰曲線との不適
合によるものではなく、データの含まれるランダム・ノ
イズである場合に有効である。また、免疫反応は厳密に
は１次反応ではなく、１次反応近似とした場合の見かけ
上の反応時定数は低信号時に長くなる傾向があるので、
この点からも回部区間Ｔを適応するように変化させるこ
とが有効であることが分る。そして、この場合における
区間の判定としては、
■ 最初に短い回帰区間で回帰し、その回帰区間での係
数（勾配）が所定の閾値以下であれば回帰区間を予め定
めた長さに延長する方法、■ 最初の回帰区間での勾配
の大きさに基づいて、予め定めた換算表、式に対応させ
て回帰区間を延長する方法、
■ 回帰の残差平方和またはその平均が所定値以上にな
るまで回帰区間を延長する方法、および■ これらの方
法を適宜組合せた方法
か例示できる。Therefore, it seems to be appropriate to lengthen the regression interval T when the signal is low and the decrease in accuracy becomes noticeable. This kind of treatment is
This method is effective when the main cause of decreased accuracy at low signal times is not a misfit between the data and the regression curve, but random noise contained in the data. In addition, the immune reaction is not strictly a first-order reaction, and the apparent reaction time constant when approximating the first-order reaction tends to be long when the signal is low.
From this point as well, it can be seen that it is effective to adaptively change the rotation section T. The method of determining the interval in this case is as follows: ■ A method of first performing regression in a short regression interval, and extending the regression interval to a predetermined length if the coefficient (slope) in that regression interval is less than a predetermined threshold. , ■ A method of extending the regression interval based on the magnitude of the slope in the first regression interval in accordance with a predetermined conversion table or formula, ■ A method in which the sum of squared residuals of the regression or its average exceeds a predetermined value. Examples include methods for extending the regression interval to
また、レート測定法に基づく測定を行なっている間は測
定信号のレベルは飽和していないのであるから、以上の
ようにしてオフセット値を得た後にエンド・ポイント法
に基づく測定を行なえばよく、はぼ飽和した測定信号と
オフセット値との差分を算出することにより、抗原−抗
体反応量に対応する信号を得ることができる。Furthermore, since the level of the measurement signal is not saturated while performing measurements based on the rate measurement method, it is only necessary to perform measurements based on the end point method after obtaining the offset value as described above. By calculating the difference between the saturated measurement signal and the offset value, a signal corresponding to the amount of antigen-antibody reaction can be obtained.
また、反応槽（２２ａ）に予め緩衝液を収容しておく代
わりにスラブ型光導波路（２１）の反応面を乾燥状態に
しておくことも可能であり、この場合には当初の測定信
号が第２図中破線で示すようにハイレベルになるが、螢
光標識抗体を混合して被験液を注入した後は測定信号が
上記と同様に変化するのであるから、同様に高精度のエ
ンド・ポイントａｌｌＪ定結果を得ることができる。そ
して、この場合には液の置換が不要になる分だけ装置お
よび操作を簡素化できることになる。Furthermore, instead of storing a buffer solution in the reaction tank (22a) in advance, it is also possible to keep the reaction surface of the slab type optical waveguide (21) in a dry state, and in this case, the initial measurement signal is Although the level is high as shown by the broken line in Figure 2, the measurement signal changes in the same way as above after mixing the fluorescently labeled antibody and injecting the test solution, so it is also a highly accurate end point. AllJ constant results can be obtained. In this case, the apparatus and operation can be simplified by eliminating the need for liquid replacement.
〈実施例２〉
第４図は免疫測定方法の他の実施例を示すフローチャー
トであり、ステップ■においてスラブ型先導波路（２１
）に対する励起光の導入を開始し、ステップ■において
、予め設定されたサンプリング時間でのレート測定法に
基づくａ１定を開始する。<Example 2> FIG. 4 is a flowchart showing another example of the immunoassay method, in which a slab-type leading waveguide (21
), and in step (2), a1 constant is started based on the rate measurement method at a preset sampling time.
そして、ステップ■において、抗原（２３ａ）を含む被
験液を希釈し、螢光標識抗体（２３ｂ）を混合した溶液
で反応槽（２２ａ）の緩衝液を置換すれば、抗原−抗体
反応が進行するので反応速度に対応する信号が得られる
。したがって、ステップ■において、所定タイミングに
おける信号または信号の最大値に基づいてレート測定法
で十分な測定精度が得られるか否かを判別する。このス
テップ■においてレートａ９１定法で十分な測定精度が
得られると判別された場合には、ステップ■において、
得られた信号の最大値に基づいて所定の演算を行なうこ
とにより免疫測定結果を得る。Then, in step (2), the antigen-antibody reaction proceeds by diluting the test solution containing the antigen (23a) and replacing the buffer in the reaction tank (22a) with a solution containing the fluorescently labeled antibody (23b). Therefore, a signal corresponding to the reaction rate can be obtained. Therefore, in step (2), it is determined whether or not sufficient measurement accuracy can be obtained by the rate measurement method based on the signal or the maximum value of the signal at a predetermined timing. If it is determined in this step (■) that sufficient measurement accuracy can be obtained using the rate a91 standard method, in step (2),
An immunoassay result is obtained by performing a predetermined calculation based on the maximum value of the obtained signal.
逆に、ステップ■においてレート測定法では十分な測定
精度が得られないと判別された場合には、ステップ■に
おいて、得られた測定信号を外挿することにより反応開
始時点における信号のレベル、即ちオフセット値を算出
できる。したがって、その後はステップ■において測定
信号のレベルが殆ど変化しなくなるまで待ってから、ス
テップ■において、レベルが殆ど変化しなくなった測定
信号とオフセット値との差分を得、ステップ■において
、差分に基づいて所定の演算を行なうことにより抗原−
抗体反応量を得ることができる。On the other hand, if it is determined in step (2) that sufficient measurement accuracy cannot be obtained with the rate measurement method, in step (2), the level of the signal at the start of the reaction, i.e., is determined by extrapolating the obtained measurement signal. Offset values can be calculated. Therefore, after that, in step (2), wait until the level of the measurement signal hardly changes, then in step (2) obtain the difference between the measurement signal whose level has hardly changed and the offset value, and in step (2), based on the difference. By performing predetermined calculations, the antigen-
The amount of antibody reaction can be obtained.
したがって、この実施例の場合には、免疫反応の程度が
高ければレート測定法により短時間で高精度の免疫測定
を行なうことができ、免疫反応の程度が低ければ、レー
ト測定法に基づいて得られた測定データで反応式を外挿
して反応開始時点における正確なオフセット値を得、こ
のオフセット値を用いてエンド・ポイント測定法により
高精度の免疫測定を行なうことができる。尚、外挿によ
り得られるオフセット値の精度は、反応曲線の傾きが緩
かな場合には高くなり、急な場合には低くなるが、オフ
セット値を用いてエンド・ポイント測定法に基づく測定
を行なうのは反応曲線の傾きが緩かな場合のみであるか
ら、全く不都合はない。Therefore, in the case of this example, if the degree of immune reaction is high, it is possible to perform a highly accurate immunoassay in a short time using the rate measurement method, and if the degree of immune reaction is low, it is possible to perform an immunoassay with high accuracy based on the rate measurement method. By extrapolating the reaction equation using the measured data obtained, an accurate offset value at the time of reaction initiation can be obtained, and this offset value can be used to perform highly accurate immunoassays using the end point measurement method. Note that the accuracy of the offset value obtained by extrapolation will be higher if the slope of the response curve is gentle, and lower if it is steep; however, measurements based on the end point measurement method are performed using the offset value. This is true only when the slope of the reaction curve is gentle, so there is no problem at all.
〈実施例３〉
第５図はこの発明の免疫測定装置の一実施例を示すブロ
ック図であり、抗原−抗体反応量に対応して変化する螢
光を受光して電気信号に変換する検出器（１）と、検出
器（１）から出力される信号をサンプリングするサンプ
リング回路（２）と、回帰区間Ｔを設定する回帰区間設
定部（３）と、サンプリングされた信号および設定され
た回帰区間Ｔに基づいて、設定された回帰区間Ｔにおけ
る直線の勾配を算出する勾配算出部（４）と、算出され
た勾配が予め設定された閾値以下であるか否かを判別す
る比較部（５）と、回帰区間Ｔ内のサンプリング信号に
基づいて直線回帰を行なってオフセット値を算出するす
フセット値算出部（６）と、サンプリング信号が平衡し
たか否かを判別する平衡判別部（７）と、平衡時のサン
プリング信号および算出されたオフセット値に基づいて
抗原−抗体反応量を算出する反応量算出部（８）と、比
較部（５）から閾値以下であることを示す判別結果が出
力されたことを条件として回帰区間設定部（３）により
設定されるべき回帰区間Ｔを予め設定されている回帰区
間に変化させ、変化させられた回帰区間に基づいてオフ
セット値算出部（６）を動作させる制御部（９）とを有
している。<Embodiment 3> FIG. 5 is a block diagram showing an embodiment of the immunoassay device of the present invention, which includes a detector that receives fluorescent light that changes depending on the amount of antigen-antibody reaction and converts it into an electrical signal. (1), a sampling circuit (2) that samples the signal output from the detector (1), a regression interval setting section (3) that sets the regression interval T, and a sampled signal and the set regression interval. a slope calculation unit (4) that calculates the slope of a straight line in a set regression interval T based on T; and a comparison unit (5) that determines whether the calculated slope is less than or equal to a preset threshold. , an offset value calculation unit (6) that calculates an offset value by performing linear regression based on the sampling signal within the regression interval T, and an equilibrium determination unit (7) that determines whether the sampling signal is balanced. , a reaction amount calculation unit (8) that calculates the antigen-antibody reaction amount based on the sampling signal at equilibrium and the calculated offset value, and a comparison unit (5) output a determination result indicating that the reaction amount is below the threshold value. Under this condition, the regression interval T to be set by the regression interval setting unit (3) is changed to a previously set regression interval, and the offset value calculation unit (6) is operated based on the changed regression interval. It has a control section (9) for controlling.
上記の構成の免疫７１ｐ］定装置の動作は次のとおりで
ある。The operation of the immune system 71p] configured as described above is as follows.
先ず、回帰区間設定部（３）により反応時定数τよりも
十分に短い回帰区間Ｔを設定する。そして、サンプリン
グ回路（２りによりサンプリングされる信号を順次取込
み、回帰区間Ｔの範囲におけるサンプリング信号に基づ
いて勾配算出部（４）により直線回帰式の勾配を算出し
、算出された勾配が予め設定された閾値以下であるか否
かを比較部（５）により判別する。First, the regression interval setting section (3) sets a regression interval T that is sufficiently shorter than the reaction time constant τ. Then, the signals sampled by the sampling circuit (2) are sequentially taken in, and the slope of the linear regression equation is calculated by the slope calculation unit (4) based on the sampling signals in the range of the regression interval T, and the calculated slope is set in advance. The comparison unit (5) determines whether or not it is less than or equal to the set threshold value.
そして、算出された勾配が閾値よりも大きいと判別され
た場合には、回帰区間Ｔ内のサンプリング信号に基づい
てオフセット値算出部（６）により直線回帰を行なって
オフセット値を算出する。その後は、平衡判別部（７）
によりサンプリング信号が平衡したか否かを判別し、平
衡したと判別された時点のサンプリング信号および算出
されたオフセット値に基づいて反応量算出部（８）によ
り抗原−抗体反応量を算出することができる。If it is determined that the calculated gradient is larger than the threshold value, the offset value calculation unit (6) performs linear regression based on the sampling signal within the regression interval T to calculate the offset value. After that, the equilibrium discriminator (7)
It is possible to determine whether the sampling signal is balanced or not, and to calculate the antigen-antibody reaction amount by the reaction amount calculation unit (8) based on the sampling signal at the time when it is determined that the sampling signal is balanced and the calculated offset value. can.
逆に、算出された勾配が閾値以下であると判別された場
合には、制御部（９）により回帰区間を予め設定されて
いる長い回帰区間に変更し、変更された回帰区間に基づ
いてオフセット値算出動作、平衡判別動作および反応量
算出動作を行なって抗原−抗体反応量を算出することが
できる。Conversely, if it is determined that the calculated slope is less than the threshold, the control unit (9) changes the regression interval to a preset long regression interval, and offsets the regression interval based on the changed regression interval. The antigen-antibody reaction amount can be calculated by performing a value calculation operation, an equilibrium determination operation, and a reaction amount calculation operation.
即ち、従来装置と比較してオフセット値を正確に算出す
ることができ、算出されたオフセット値を用いてエンド
・ポイント測定法により高精度の免疫ΔＩＩＩ定を行な
うことができる。That is, compared to the conventional apparatus, the offset value can be calculated more accurately, and the calculated offset value can be used to perform highly accurate immune ΔIII determination by the end point measurement method.
〈実施例４〉
第６図はこの発明の免疫測定装置の他の実施例を示すブ
ロック図であり、第５図の実施例と異なる点は、サンプ
リングされた信号に基づいて反応曲線の勾配を算出する
とともに、勾配の最大値を抽出する最大値抽出部００）
と、最大の勾配に基づいて抗原−抗体反応量を算出する
反応量算出部（１１）とをさらに設けた点、回帰区間を
予め設定された長さに変更された場合における直線回帰
式の勾配が所定の閾値以下であるか否かを判別すべ（制
御部（９）により比較部（５）を動作させるようにした
点、この場合の判別結果に基づいて何れかの反応量算出
部（８） （Ｉ ！、 ）からの算出量を選択する選択
部（１２）をさらに設けた点のみである。<Embodiment 4> FIG. 6 is a block diagram showing another embodiment of the immunoassay device of the present invention. The difference from the embodiment of FIG. 5 is that the slope of the reaction curve is determined based on the sampled signal. Maximum value extraction unit 00) that calculates and extracts the maximum value of the gradient.
and a reaction amount calculation unit (11) that calculates the antigen-antibody reaction amount based on the maximum slope, and the slope of the linear regression equation when the regression interval is changed to a preset length. is below a predetermined threshold (the control unit (9) operates the comparison unit (5), and based on the determination result in this case, one of the reaction amount calculation units (8) ) (I!, ) The only difference is that a selection section (12) for selecting the calculated amount from (I!, ) is further provided.
したがって、この実施例の場合には、反応時定数よりも
十分に短い回帰区間および予め設定されている長い回帰
区間の何れの場合にも直線回帰式の勾配が閾値よりも大
きければ、最大値抽出部（１０）により抽出された最大
の勾配に基づいて反応量算出部（１１）により算出され
た抗原−抗体反応量を選択部（１２）により選択すれば
よく、サンプリング信号が平衡するまで待つ必要がない
ので免疫測定所要時間を短くできる。そして免疫測定精
度も十分に高くできる。Therefore, in the case of this example, if the slope of the linear regression equation is greater than the threshold in both the regression interval sufficiently shorter than the reaction time constant and the preset long regression interval, the maximum value is extracted. The selection section (12) may select the antigen-antibody reaction amount calculated by the reaction amount calculation section (11) based on the maximum gradient extracted by the section (10), and there is no need to wait until the sampling signal is balanced. Since there is no need for immunoassay, the time required for immunoassay can be shortened. Furthermore, the accuracy of immunoassay can be made sufficiently high.
逆に、何れかの回帰区間において直線回帰式の勾配が閾
値以下であれば、上記実施例と同様にエンド・ポイント
測定法に基づき高精度の免疫ｉｎ＋＋定を達成できる。On the other hand, if the slope of the linear regression equation is below the threshold value in any regression interval, highly accurate immune in++ determination can be achieved based on the end point measurement method as in the above embodiment.
以上要約すれば、レート測定法では十分な測定精度が得
られない場合にのみエンド・ポイント測定法による免疫
測定を行なうことができ、多数の被験液の免疫測定を行
なう場合における所要時間の増加を短縮できるとともに
、十分な精度の免疫測定を達成できる。In summary, immunoassays using the end point assay can be performed only when sufficient measurement accuracy cannot be obtained using the rate assay method, and the increase in time required when performing immunoassays on a large number of test solutions can be avoided. It is possible to shorten the time and achieve immunoassay with sufficient accuracy.
尚、この発明は上記の実施例に限定されるものではなく
、例えば、回帰区間設定部（３）により設定される回帰
区間を当初の回帰区間での勾配の大きさに対応させて換
算表等に基づいて選択するように構成することが可能で
あるほか、回帰の残差平方和またはその平均が所定値以
上になるまで回帰区間を延長するように構成することが
可能であり、その他、この発明の要旨を変更しない範囲
内において種々の設ス１変更を施すことが可能である。It should be noted that the present invention is not limited to the above-mentioned embodiments. For example, the regression interval set by the regression interval setting unit (3) is made to correspond to the magnitude of the slope in the initial regression interval, and a conversion table or the like is created. The regression interval can be configured to be selected based on the regression interval, or can be configured to extend the regression interval until the regression residual sum of squares or its mean is greater than or equal to a predetermined value; Various changes can be made to the system without changing the gist of the invention.
〈発明の効果〉
以上のように第１の発明は、従来不正確になり勝ちであ
ったオフセット値をレート測定法で得られた反応速度測
定データに基づいて正確に算出することができ、ひいて
はエンド・ポイント測定法による測定精度を高めること
ができるという特有の効果を奏する。<Effects of the Invention> As described above, the first invention makes it possible to accurately calculate the offset value, which conventionally tends to be inaccurate, based on the reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method. This has the unique effect of increasing the measurement accuracy by the end point measurement method.
第２の発明は、レート測定法により十分な精度が得られ
る場合にはレートａｌｌ＋定法により測定を行ない、そ
の他の場合にはレート測定法で得られた測定データに基
づいて正確なオフセット値を得、エンド・ポイント測定
法による測定精度を高めることができるという特有の効
果を奏する。In the second invention, when sufficient accuracy can be obtained by the rate measurement method, measurement is performed using the rate all + standard method, and in other cases, an accurate offset value is obtained based on the measurement data obtained by the rate measurement method. , it has the unique effect of increasing the measurement accuracy by the end point measurement method.
第３の発明は、演算所要時間を短くして実時間処理に適
合させることができるという特有の効果を奏する。The third invention has the unique effect of being able to shorten the time required for computation and adapt to real-time processing.
第４の発明は、レート測定法かエンド・ポイント測定手
段液判別処理を簡素化できる。The fourth invention can simplify the process of determining whether the liquid is a rate measurement method or an end point measurement method.
第５の発明は、従来不正確になり勝ちであったオフセッ
ト値をレート測定法で得られた反応速度ΔＰｊ定データ
に基づいて正確に算出することができ、ひいてはエンド
・ポイント測定法による測定精度を高めることができる
という特有の効果を奏する。The fifth invention is that the offset value, which conventionally tends to be inaccurate, can be accurately calculated based on the reaction rate ΔPj constant data obtained by the rate measurement method, and the measurement accuracy by the end point measurement method can be improved. It has the unique effect of increasing the
第６の発明は、レート測定法により十分な精度が得られ
る場合にはレート測定法により測定を行ない、その他の
場合にはレート測定法で得られた測定データに基づいて
正確なオフセット値を得、エンド・ポイント測定法によ
るｉ＋ｐ１定精度を高めることができるという特有の効
果を奏する。In the sixth invention, if sufficient accuracy can be obtained by the rate measurement method, measurement is performed by the rate measurement method, and in other cases, an accurate offset value is obtained based on the measurement data obtained by the rate measurement method. , it has the unique effect of being able to improve the i+p1 determination accuracy by the end point measurement method.
第１図はこの発明の免疫測定方法の一実施例を示すフロ
ーチャート、
第２図は得られる測定信号の時間的変化を示す図、
第３図は反応初期の信号変化を詳細に示す図、第４図は
この発明の免疫測定方法の他の実施例を示すフローチャ
ート、
第５図はこの発明の免疫測定装置の一実施例を示すブロ
ック図、
第６図はこの発明の免疫測定装置の他の実施例を示すブ
ロック図、
第７図は免疫測定に用いられる光学的測定装置の概略構
成を示す斜視図。
（１１）・・・変換手段としての反応量算出部、（１２
）・・・選択部FIG. 1 is a flowchart showing an embodiment of the immunoassay method of the present invention, FIG. 2 is a diagram showing temporal changes in the obtained measurement signal, FIG. 3 is a diagram showing details of signal changes at the initial stage of the reaction, and FIG. FIG. 4 is a flowchart showing another embodiment of the immunoassay method of the present invention, FIG. 5 is a block diagram showing an embodiment of the immunoassay device of the present invention, and FIG. 6 is a flowchart showing another embodiment of the immunoassay device of the present invention. A block diagram showing an embodiment. FIG. 7 is a perspective view showing a schematic configuration of an optical measuring device used for immunoassay. (11)...Reaction amount calculation unit as a conversion means, (12
)...Selection section
Claims (1)
得られた測定データに基づいて反応時刻におけるオフセ
ット値を算出し、算出されたオフセット値を用いてエン
ド・ポイント測定法に基づく免疫測定を行なうことを特
徴とする免疫測定方法。 ２、レート測定法に基づく免疫測定を行なって反応速度
測定データを得、十分な測定精度が得られるか否かを判
別して、十分な測定結果が得られると判別された場合に
は得られた反応速度測定データをそのまま用い、逆に、
十分な測定精度が得られないと判別された場合には、レ
ート測定法により得られた反応速度測定データに基づい
て反応開始時刻におけるオフセット値を算出し、オフセ
ット値を用いてエンド・ポイント測定法に基づく反応測
定データを用いること特徴とする免疫測定方法。 ３、回帰区間を反応時定数よりも十分に短くしておき、
レート測定法により得られた反応速度測定データに基づ
いて反応開始時刻まで直線回帰を行なってオフセット値
を算出する上記特許請求の範囲第１項または第２項に記
載の免疫測定方法。 ４、レート測定法に基づく免疫測定結果が所定の閾値よ
りも小さい場合に、十分な測定精度が得られないと判別
する上記特許請求の範囲第２項記載の免疫測定方法。 ５、レート測定法に基づいて抗原−抗体反応速度測定デ
ータを得るレート測定手段（２）（４）と、レート測定
手段（２）（４）により得られた抗原−抗体反応速度測
定データを用いて反応開始時刻まで抗原−抗体反応曲線
を外挿してオフセット値を算出するすフセット値算出手
段（６）と、抗原−抗体反応がほぼ平衡した時点で反応
測定データを得、得られた反応測定データとオフセット
値との差を算出して抗原−抗体反応測定データとして出
力するエンドポイント測定手段（７）（８）とを有する
ことを特徴とする免疫測定装置。６、レート測定法に基
づいて抗原−抗体反応速度測定データを得るレート測定
手段（２）（４）（１０）と、レート測定手段（２）（
４）（１０）により得られた抗原−抗体反応速度測定デ
ータに基づいて測定精度が十分か否かを判別する精度判
別手段（５）と、測定精度が不十分であると判別された
ことを示す精度判別手段（５）からの出力信号が供給さ
れたことを条件として、レート測定手段（２）（４）に
より得られた抗原−抗体反応速度測定データを用いて反
応開始時刻まで抗原−抗体反応曲線を外挿してオフセッ
ト値を算出するオフセット値算出手段（６）と、抗原−
抗体反応がほぼ平衡した時点で抗原−抗体反応測定デー
タを得、得られた反応測定データとオフセット値との差
を算出して抗原−抗体反応測定データとして出力するエ
ンドポイント測定手段（７）（８）と、レート測定手段
からの出力データに基づいて抗原−抗体反応測定データ
を得る変換手段（１１）と、精度判別手段（５）からの
出力信号に基づいて変換手段（１１）からの出力データ
、またはエンドポイント測定手段（８）からの出力デー
タを選択する選択手段（１２）とを有することを特徴と
する免疫測定装置。[Claims] 1. Obtaining reaction rate measurement data based on a rate measurement method,
An immunoassay method characterized by calculating an offset value at a reaction time based on the obtained measurement data, and performing an immunoassay based on an end point measurement method using the calculated offset value. 2. Perform immunoassay based on the rate measurement method to obtain reaction rate measurement data, determine whether or not sufficient measurement accuracy can be obtained, and if it is determined that sufficient measurement results can be obtained, Using the reaction rate measurement data as is, conversely,
If it is determined that sufficient measurement accuracy cannot be obtained, an offset value at the reaction start time is calculated based on the reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method, and the offset value is used to perform the end point measurement method. An immunoassay method characterized by using reaction measurement data based on. 3. Make the regression interval sufficiently shorter than the reaction time constant,
The immunoassay method according to claim 1 or 2, wherein the offset value is calculated by performing linear regression up to the reaction start time based on the reaction rate measurement data obtained by the rate measurement method. 4. The immunoassay method according to claim 2, wherein if the immunoassay result based on the rate measurement method is smaller than a predetermined threshold value, it is determined that sufficient measurement accuracy cannot be obtained. 5. Using rate measurement means (2) (4) to obtain antigen-antibody reaction rate measurement data based on the rate measurement method and antigen-antibody reaction rate measurement data obtained by rate measurement means (2) (4). offset value calculation means (6) for calculating an offset value by extrapolating the antigen-antibody reaction curve up to the reaction start time, and obtaining reaction measurement data at the time when the antigen-antibody reaction is almost in equilibrium, An immunoassay device characterized by comprising endpoint measuring means (7) and (8) for calculating the difference between the data and the offset value and outputting the calculated difference as antigen-antibody reaction measurement data. 6. Rate measurement means (2) (4) (10) for obtaining antigen-antibody reaction rate measurement data based on the rate measurement method;
4) Accuracy determining means (5) for determining whether the measurement accuracy is sufficient based on the antigen-antibody reaction rate measurement data obtained in (10), and a means for determining whether the measurement accuracy is insufficient. The antigen-antibody reaction rate measurement data obtained by the rate measuring means (2) and (4) are used to determine the antigen-antibody reaction rate until the reaction start time, on the condition that the output signal from the accuracy determining means (5) shown in FIG. Offset value calculation means (6) for calculating an offset value by extrapolating the reaction curve;
Endpoint measurement means (7) that obtains antigen-antibody reaction measurement data when the antibody reaction is almost in equilibrium, calculates the difference between the obtained reaction measurement data and the offset value, and outputs the result as antigen-antibody reaction measurement data ( 8), a converting means (11) for obtaining antigen-antibody reaction measurement data based on the output data from the rate measuring means, and an output from the converting means (11) based on the output signal from the accuracy determining means (5). An immunoassay device characterized in that it has a selection means (12) for selecting data or output data from the endpoint measurement means (8).
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1989
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