JPH0269191A - Deacylation of nucleosides - Google Patents
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はリパーゼ及１プロテアーゼによるヌクレオシド
類の糖部アシル基の選択的脱アシル化方法に関し、本発
明により製造されるヌクレオシド類は医薬品又はその製
造中間体として有用である。Detailed Description of the Invention (Field of Industrial Application) The present invention relates to a method for selectively deacylating sugar acyl groups of nucleosides using lipase and protease. Useful as a manufacturing intermediate.
（従来の技術）
ヌクレオシド類の糖部水酸基の一般的保護基としてアシ
ル基が汎用されるが、それらの選択的保護、脱保護には
多段階の反応工程を必要とし、その際に、酸及びアルカ
リを泪いるなど製法上十分な解決をみていない。又、糖
水酸基の一級又は二級のエステルを位置選択的に認識し
、脱エステル化を行った例としてはヌクレオシドを基質
とした分野ではこれまで皆無である。(Prior art) Acyl groups are widely used as general protecting groups for the hydroxyl groups of sugar moieties of nucleosides, but their selective protection and deprotection require multi-step reaction steps, and at that time, acid and No satisfactory solutions have been found in terms of manufacturing methods, such as using alkali. Furthermore, there have been no examples in the field of nucleoside substrates in which primary or secondary esters of sugar hydroxyl groups are recognized regioselectively and deesterified.
（発明が解決しようとする課題）
本発明の目的は、酵素を用いた選択的な簡便でかつ容易
なヌクレオシド類の糖部アシル基の脱アシル化方法を提
供することにある。(Problems to be Solved by the Invention) An object of the present invention is to provide a method for selectively, simple and easy deacylation of sugar moiety acyl groups of nucleosides using an enzyme.
（課題を解決するための手段）
本発明は一般式
（式中、Ｂは置換又は非置換核酸塩基を、Ｒ，は水素原
子又は−０ＣＯＲを、Ｒはフルキル基、又は置換又は非
ｒＩｌ換のフェニル基を示す、）で表すされるヌクレオ
シド類をリパーゼ又はプロテアーゼと反応させ、一般式
（式中、Ｒ２は水素原子又は水酸基を、Ｂ及びＲは前記
と同一の意味を示す）で表わされる化合物又は一般式
（式中、Ｂ、Ｒ，及びＲは前記と同一の意味を示す）で
表わされる化合物に導くことを特徴とするヌクレオシド
類の脱アシル化方法に係る。(Means for Solving the Problems) The present invention relates to the general formula (wherein, B represents a substituted or unsubstituted nucleobase, R represents a hydrogen atom or -0COR, and R represents a fulkyl group or a substituted or unsubstituted nucleobase). A nucleoside represented by ) representing a phenyl group is reacted with lipase or protease to produce a compound represented by the general formula (wherein R2 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group, and B and R have the same meanings as above). or a method for deacylating nucleosides, which is characterized by leading to a compound represented by the general formula (wherein B, R, and R have the same meanings as above).
更に詳細には、一般式（］）で表わされる化合物に脱７
シル化Ｍとしてリパーゼを用いた場合には、糖部分の２
゛又は３゛位に置換されたアシル基−ＣＯＲが選択的に
脱離し、一般式（２）で表わされる化合物が製造される
。一方、脱アシル化剤としてプロテアーゼを用いた場合
には、糖部分の５゛位に置換された７シル基−ＣＯＲが
選択的に脱離し、一般式（３）で表わされる化合物が製
造される。このように、脱アシル化剤としてリパーゼ及
びプロテアーゼを使い分けることにより、糖アシル基の
脱離位置を制御することが可能である。More specifically, the compound represented by the general formula (]) is
When lipase is used as the sylation M, the sugar moiety 2
The acyl group -COR substituted at the `` or 3'' position is selectively eliminated, and a compound represented by general formula (2) is produced. On the other hand, when protease is used as a deacylating agent, the 7-syl group -COR substituted at the 5'-position of the sugar moiety is selectively eliminated, producing a compound represented by general formula (3). . In this way, by selectively using lipase and protease as deacylating agents, it is possible to control the position at which the sugar acyl group is eliminated.
一般式（１）、（２）及び（３）中、Ｂで表わされる置
換又は非ｆｉ１２換核酸塩も（としてはウラシル、５−
フルオロウラシル、５−トリフルオロメチルウラシル、
５−クロロウラシル、５−ブロモウラシル等の５−ｒ！
！換ウラシル、チミン、シトシン等のビリミノン塩基、
アテ°ニン、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチン等
のプリン塩基を、Ｒで表わされるアルキル基としては、
メチル、エチル、プロピル、１−プロピル、ブチル、ｔ
−ブチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、テ
トラデシル、オクタデシル等の炭素数１〜１８のアルキ
ル基を、置換フェニル基としては塩素、弗素、アルキル
が置換したフェニル、具体的には０−クロロフェニル、
ｐ−クロロフェニル、０−フルオロフェニル、ｐ−フル
オロフェニル、０−メチルフェニル、鋤−メチルフェニ
ル、ｐ−エチルフェニル、ｐ−ブチルフェニルである。In general formulas (1), (2) and (3), substituted or non-fi12 substituted nucleic acid represented by B (such as uracil, 5-
Fluorouracil, 5-trifluoromethyluracil,
5-r! such as 5-chlorouracil, 5-bromouracil, etc.
! biriminone bases such as uracil, thymine, and cytosine,
Purine bases such as atenine, guanine, xanthine, hypoxanthine, etc. are represented by R as an alkyl group,
Methyl, ethyl, propyl, 1-propyl, butyl, t
- C1-C18 alkyl groups such as butyl, hexyl, octyl, decyl, dodecyl, tetradecyl, octadecyl, substituted phenyl groups include chlorine, fluorine, alkyl-substituted phenyl, specifically 0-chlorophenyl,
p-chlorophenyl, 0-fluorophenyl, p-fluorophenyl, 0-methylphenyl, methylphenyl, p-ethylphenyl, p-butylphenyl.
又、本反応のリパーゼとしては、微生物巾米、動物由来
及び植物由来のものが使用可能である。Furthermore, as the lipase for this reaction, lipases derived from microorganisms, animals, and plants can be used.
微生物の具体的なものとしてはエンテロバクタ−属、ア
ルスロバクタ−属、ブレビバクテリウム属、シュードモ
ナス属、アルカリ土類金属、ミクロフッカス属、クロモ
バクテリウム属、コリネバクテリウム属、バシルス属、
ラクトバシル金属、トリフデルマ属、キャンデイダ属、
サツカロミセス属、ロドトルグ属、クリプトコツカス属
、トルロブンス属、ビヒア属、ペニシリウム属、アスペ
ルギルス属、リゾプス属、ムコール属、オーレオバシデ
イフム属、アクチノムコール属、メカルディア属、スト
レプトミセス属、ハンゼヌラ属、アクロモバクタ−属に
属する微生物が例示できる。これらリパーゼは市販され
ており、代表的なものとしては、豚膵臓リパーゼ（半片
化学）、シュードモナス属のリパーゼＰ（大野製薬）、
アスペルギルス属のリパーゼＡＰ（大野製薬）、リパー
ゼＢ（和光純薬）、キヤンヂイグ・ンリンドラツセのリ
パーゼＭＹ（名糖産業）、アルカリ土類金属のリパーゼ
ＰＬ（名糖産業）、アクロモバクタ−属のリパーゼＡＬ
（名糖産業）、アルスロバクタ−属のリパーゼ合同ＢＳ
Ｌ （合同酒製）、クロモバクテリウムのリパーゼ（東
洋醸造）、キャンデイグ（ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎ
ｄｒａｃｅａ）属のリパーゼ（半片化’Ｆ）、リゾプス
・デルマーのタリパーゼく田辺製薬）、リゾプス属のリ
パーゼサイケン（大阪ａｔ菌研究所）、植物白米のもの
としてはＷ ｌ＋ｅａＬ Ｇ ｒｅｒ＋ｍ（牛丼化学）
？Ｐが例示できる。取り分ケ、ンユードモナス フルオ
レッセンス由来のリパーゼＰ（大野製薬）が好適であっ
た。Specific microorganisms include Enterobacter, Arthrobacter, Brevibacterium, Pseudomonas, alkaline earth metals, Microfuccus, Chromobacterium, Corynebacterium, Bacillus,
Lactobacillus metal, Trifderma sp., Candida sp.
Satucharomyces, Rhodotorgue, Cryptococcus, Torlobus, Vichia, Penicillium, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, Aureobasidihum, Actinomucor, Mecardia, Streptomyces, Hansenula Examples include microorganisms belonging to the genus Achromobacter. These lipases are commercially available, and representative examples include porcine pancreatic lipase (Hanka Kagaku), Pseudomonas lipase P (Ohno Pharmaceutical),
Aspergillus lipase AP (Ohno Pharmaceutical Co., Ltd.), lipase B (Wako Pure Chemical Industries), Kyanzig.
(Meito Sangyo), Arthrobacter lipase joint BS
L (Godo Shusei), Chromobacterium lipase (Toyo Jozo), Candida (candida cylin)
lipase of the genus Rhizopus (Tanabe Seiyaku), lipase of the genus Rhizopus (Osaka Atomic Bacteria Research Institute), and lipase of the genus Rhizopus (Osaka Atomic Research Institute); )
? An example is P. Particularly, lipase P derived from Neudomonas fluorescens (Ohno Pharmaceutical Co., Ltd.) was suitable.
又、本反応で使用されるプロテアーゼとしては微生物中
米、動物由来、植物白米のプロテアーゼが使用でさる６
市販されているプロテアーゼとしてはリゾプス・ニベウ
スのニューラーゼＦ（大野製薬）、アスペルギルス・オ
リザエのプロテアーゼＭ（大野製薬）、パシルス・サブ
チリスのプロテアーゼＮ（大野製薬）、アスペルギルス
・メルウスのプロテアーゼＰ、動物膵臓のバンクレアチ
ンＦ（大野製薬）、カリパ・パパインのパパインＷ−４
０（大野製薬）が例示でき、取り分はプロテアーゼＮが
好適である。本反応は通常、極性溶媒−水の混合溶媒系
で行う。極性溶媒としては、ツメチルホルムアミド、ピ
リジン、アセトニトリル、ツメチルスルホキシド、アセ
トン等が使用できる。上記混合溶媒系には、通常、ｐＨ
を常に一定に保つため、緩衝剤を添加する。本反応の至
適ｐＨは通常、６．５〜７．５、好ましくは６．８〜７
．２であり、緩衝剤としてはこれらｐＨの範囲内のもの
を使用すれば良い０本反応においては、ｐＨ７，０の場
合が最ら良好な結果を与えた。極性溶媒は単一又は、複
数混合して使用できる。水と極性溶媒の混合割合は脱ア
シル化反応に付する化合物の溶解性に応じ適宜選択され
、通常、１０〜５０％が好ましい。In addition, proteases used in this reaction include proteases from microbial Central Rice, animal origin, and plant white rice.
Commercially available proteases include Rhizopus niveus neurase F (Ohno Pharmaceutical), Aspergillus oryzae protease M (Ohno Pharmaceutical), Pacilus subtilis protease N (Ohno Pharmaceutical), Aspergillus meleus protease P, and animal pancreas. Vancreatin F (Ohno Pharmaceutical), Papain W-4 of Caripa Papain
An example is Protease N (manufactured by Ohno Pharmaceutical Co., Ltd.), and Protease N is preferred. This reaction is usually carried out in a mixed solvent system of polar solvent and water. As the polar solvent, trimethylformamide, pyridine, acetonitrile, trimethylsulfoxide, acetone, etc. can be used. The above mixed solvent system usually has a pH of
A buffer is added to keep it constant. The optimum pH for this reaction is usually 6.5 to 7.5, preferably 6.8 to 7.
．． 2, and in the reaction in which a buffer within these pH ranges could be used, a pH of 7.0 gave the best results. A single polar solvent or a mixture of a plurality of polar solvents can be used. The mixing ratio of water and polar solvent is appropriately selected depending on the solubility of the compound to be subjected to the deacylation reaction, and is usually preferably 10 to 50%.
反応温度は１０〜６０℃のＩｌ！囲が適用でさ、酵素活
性化の最適温度は２５〜３５℃である。反応時間は０．
５時間−２日間を要し、好収率で目的物である親アシル
化されたヌクレオシドを得ることができる。リパーゼ及
びプロテアーゼの使用割合はヌクレオシド！（１）１モ
ルに対し２０〜３００ｇ、好ましくは１００〜２００Ｆ
Ｋである。The reaction temperature was 10-60°C. The optimum temperature for enzyme activation is 25-35°C. The reaction time is 0.
It takes 5 hours to 2 days, and the desired parent acylated nucleoside can be obtained in good yield. The ratio of lipase and protease used is nucleoside! (1) 20 to 300g per mole, preferably 100 to 200F
It is K.
本反応で得られた化合物は、通常の分離手段、抽出、分
液、濃縮、再結品、カラムクロマトグラフィー等により
単離精製することができる。The compound obtained in this reaction can be isolated and purified by conventional separation means, extraction, separation, concentration, reconsolidation, column chromatography, etc.
（実 施 例） 以下に本発明の実施例を示す。(Example) Examples of the present invention are shown below.
実施例１
３’、５’−ノへキサメイル−２゛−デオキシウリジン
１４２ｕ６（０，１ｍ１Ｉｏｌｅ）を２０％ツメチルホ
ルムアミド−０，ＩＭ ’Ｊ ンＲＨ衝液（ｐＨ７，０
） １ ｎｌニＦＪ濁１１ｔ、次いで、リパーゼＰ（大
野製薬）４０Ｂを加え、室温で撹拌した。・を時間後、
薄層クロマトグラフィーにより原料のスポットが消失し
たことを確認後、酢酸エチル２０艶１を加え抽出した。Example 1 3',5'-Nohexamyl-2'-deoxyuridine 142u6 (0,1ml Iole) was mixed with 20% trimethylformamide-0,IM'J in RH buffer solution (pH 7,0
) 1 nl of FJ suspension 11t and then Lipase P (Ohno Pharmaceutical) 40B were added and stirred at room temperature.・After hours,
After confirming by thin layer chromatography that the spots of the raw material had disappeared, 20 ml of ethyl acetate was added for extraction.
有ｌｆｉ層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５ｋ Ｉ
Ｘ ２ ）、飽和食塩水（５０＋ａｌ Ｘ ２ ）で洗
浄した後、芒硝で乾燥した。有機層を減圧濃縮した後、
シリカゾルカラムクロマトグラフィーにて単離精製する
と目的物である５゛−へキサメイル−２゛−デオキシウ
リジン３０ｍｇ（収率９４％）を得た。The lfi layer was diluted with saturated sodium bicarbonate solution (5k I
X 2 ) and saturated saline (50+al X 2 ), and then dried with Glauber's salt. After concentrating the organic layer under reduced pressure,
Isolation and purification by silica sol column chromatography gave 30 mg (yield 94%) of the target product, 5'-hexamyl-2'-deoxyuridine.
Ｈ’ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｉ）
０．９５ （３Ｈ，３，−ＣＨ−）
１．００〜１．７０ （６Ｈ２Ｉ１１．（ＣＨ２）３
）２．００−２．５０ （４Ｈ，ｍ、 Ｉ
イ − ２ °、 −ＣＨ２ＣＯ−）３．８０〜４
．４０（４）（、繭、Ｈ−３’、Ｈ−４’Ｈ−５“）
５．３５ （Ｉ Ｈ，ｄ、 ３ ’−０Ｈ）５．６
５ （Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｈ−５）６．１５ （Ｉ
Ｈ，ｔ、 Ｈ−１°）７．８２ （Ｉ Ｈ，ｄ、
Ｈ−６）１１．４０ （Ｉ Ｈ，ｓ、 Ｎ ３
Ｈ）実施−例２〜７
実施例１と同様の繰作により下記化合物を得た。H' NMR (DMSO-di) 0.95 (3H,3,-CH-) 1.00-1.70 (6H2I11.(CH2)3
)2.00-2.50 (4H, m, I
i-2°, -CH2CO-)3.80~4
．． 40(4) (, cocoon, H-3', H-4'H-5") 5.35 (I H, d, 3'-0H) 5.6
5 (I H, d, H-5) 6.15 (I
H, t, H-1°) 7.82 (I H, d,
H-6) 11.40 (I H,s, N 3
H) Implementation-Examples 2 to 7 The following compounds were obtained in the same manner as in Example 1.
５°−ブチリル−２°−デオキシウリジン収率９０％
）１’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）
０．９０ （３＋４ 、 ｓ、 ＣＨ３）
１．０５〜１．８８ （２Ｈ、ｍ 、 −ＣＨ２−
）２、ＯＯ〜２．４０ （４Ｈ，ＩＩ、 Ｔ−１−２°
、 −Ｃ８２Ｃｏ−）４、ＯＯ〜４．２０ （３Ｈ、
論、）（−３’、ｔ」−５’）４．３０ （Ｉ ＋
（、ｌｊ、 Ｈ−４’）５．４０＜ＩＨ，ｄ、３’−
０トＩ）
５．６０ （Ｉ Ｈ、ｄ、 Ｔ（−５）６．１５
（Ｉ Ｈ，Ｌ、 Ｈ−１’）７．６０ ＜１ １
４． ｄ、 Ｈ−６）１１．３０ （Ｉ Ｈ，Ｓ
、 Ｎ ３−Ｈ）５′−オクタ／イル−２゛−デオキ
シツリノン収率８２９６
ＩＩ”−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）
０．９０ （３Ｈ，！ｉ、 −Ｃ１１，）１．０３〜１
．９５ （ＩＯＨ，釦、−（ＣＨ２）５−）２．００−
２．６０ （４８９ｍ、Ｈ２’、 ＣＨ２Ｃ０−）３
．８５〜４．３５ （４Ｈ、噂、Ｈ−３’、Ｈ−４゜Ｈ
−５“）
５．４０ （Ｉ Ｈ，ｄ、 ３°−０Ｈ）５．６０ （
Ｉ Ｈ＋ ｄ、Ｈ−５）
６．２０ （Ｉ Ｈ，Ｌ、 Ｈ−１’）７．６０ （Ｉ
Ｈ，ｄ、 Ｈ−（ｉ ）１１．２０ （Ｌ Ｈ，ｓ、
Ｎ ３−Ｈ）５゛−へキサメイル−２°−デオキシウ
リノン収率８４％
！１ ’−Ｎ Ｍ Ｒ（ｒ） Ｍ Ｓ〇−ｄＳ）０．９
０ （３Ｉ（、ｓ、 −ＣＩ−１３）１．８０ （３Ｈ
、ｄ、 −ＣＩ（））１．０５〜１．６０ （Ｇ Ｈ、
＋ｓ、（ＣＩ−１２）） ）２．００〜２．４０ （
４Ｈ、Ｉｆｉ、 Ｈ−２’、 Ｃ）−（□Ｃｏ−１３
，９０（Ｉ ＨｌＬ ＩＩ ４ ’）４．０５−４．
２５ （３Ｈ，ｍ、 ト１− ３ ’、
Ｈ−５’）５．３９ （Ｉ Ｈ，ｄ、 ３ ’−０Ｈ
）６．１２ （１ｆ−ｉ、 Ｌ、 Ｈ−１’）７．４０
（ｌ Ｈ，ｄ、 Ｈ−６）
１１．４０ （Ｉ Ｈ，Ｓ、 Ｎ ３ Ｈ）５゛−ヘ
キサフィル−２゛−デオキシ−５−ブロムクリノン
収率６７％
Ｈ’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）
０．９５ （３Ｈ、ｓｔＣ＋−１３）
１．１０−１．７０ （６Ｈ２ｍ、（ＣＨ２）−）１．
９５〜２．５０ （４Ｈ、Ｊ ｌ−（−２°、−Ｃ
１（、Ｃ０−）３．８５〜４．２５ （４Ｈ，ｕａ、
Ｈ−３’、Ｈ４’Ｈ−５°）
５．４５ （Ｉ ＩＩ、 ｄ、 ３ ’−〇ｌ−
（）６．１５ （Ｉ ＩＩ、 Ｌ、 Ｈ−１’）
７．６０ （１ｔｌ、 ｄ、 Ｈ−６）１１．４
５ （Ｉ Ｈ，ｓｔ Ｎ ３−Ｈ）５゛−へキサメ
イル−２゛−デオキシ−５−フルオロウリジン
収率９２％
Ｈ’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）
０．９２ （３Ｈ、ｍ、ＣＨｄ
ｌ、００〜１．７０ （Ｇ Ｉ（、Ｊ −（ＣＨ２）ｐ
−）２．０５〜２．４０ （４Ｈ，１ｍ、Ｈ−２’、
−Ｃ８２ＣＯ）４．００〜４．２０（３Ｈ，鎮、Ｈ
−３’、Ｈ−５°）３．９０ （Ｉ Ｈ、論、Ｈ−６１
）
５．４０ （Ｉ Ｈ，ｂ、 ３ ’−ＯＨ）６．１０
（Ｉ Ｈ，Ｌ、 Ｈ−１’）７．８０ （Ｉ Ｈ、ｄ、
ＨＧ ）
１１．７０ （Ｉ Ｈ、ｂｓ＋ Ｎ ３＋（）５°−へ
キサメイル−２°−デオキシアゾ７シン収率７２％
Ｈ’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）
０．９８ （３Ｈ、ｓ、 −ＣＨ））１．００〜１
．７０ （Ｇ Ｈ，ｎ−（ＣＨ２）） ）２．０５
〜２．４５ （４Ｈ，＋ＩＩ、Ｈ２°、−ＣＨ２Ｃ０
−）３．９０〜４，４０ （４１−１、Ｉｎ、Ｈ−３
°、）（−，１’Ｈ−５’）
５．２８ （Ｉ Ｈ，ｄ、 ３ ’−〇Ｈ）６．１
０ （Ｉ Ｈ，ｔ、 ＋−１−１’）７．３０
（２Ｈ、ｓ、Ｎ Ｈ２）
８．１２ （Ｉ Ｈ，ｓ、 ｃ−８）８．３１
（Ｉ Ｈ２Ｓｔ Ｃ２）実施例８
３°、５°−ノへキサ／イル−２゛−デオキシウリノン
１４２ｍｇ（０，１ｍ＋６ｏｌｅ）を２０％ツメチルホ
ルムアミド−Ｏｊ、Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０） １
ｍｌに懸濁させ、次いで、プロテアーゼＮ（大野製薬
）４０ｍｇを加え、室温で撹拌した。・を時間後、薄層
クロマトグラフィーにより原料のスポットが消失したこ
とを確認後、酢酸エナル２０＋ａｌを加え抽出した。有
８！層を飽和炭酸水素す） ｌ）ラム溶液（５ｋｌＸ２
）、飽和食塩水（５０【ΩＩ×２）で洗浄した後、芒硝
で乾燥した。ａ成層を減圧濃縮した後、シリカゾルカラ
ムクロマトグラフィーにて単離精製すると目的物である
３゛−へキサメイル−２゛−デオキンウリジン３１＋ｎ
Ｈ（収率９６％）を得た。5°-Butyryl-2°-deoxyuridine Yield 90%) 1'-NMR (DMSO-d,) 0.90 (3+4, s, CH3)
1.05-1.88 (2H, m, -CH2-
)2, OO~2.40 (4H, II, T-1-2°
, -C82Co-)4,OO~4.20 (3H,
theory, ) (-3', t''-5') 4.30 (I +
(,lj, H-4')5.40<IH,d,3'-
0 to I) 5.60 (I H, d, T(-5) 6.15
(I H, L, H-1') 7.60 <1 1
4. d, H-6) 11.30 (I H, S
, N3-H) 5'-octa/yl-2'-deoxyturinone Yield 8296 II''-NMR (DMSO-d6) 0.90 (3H,!i, -C11,) 1.03-1
．． 95 (IOH, button, -(CH2)5-)2.00-
2.60 (489m, H2', CH2C0-)3
．． 85~4.35 (4H, rumor, H-3', H-4゜H
-5") 5.40 (I H, d, 3°-0H) 5.60 (
I H+ d, H-5) 6.20 (I H, L, H-1') 7.60 (I
H,d, H-(i)11.20 (L H,s,
N3-H) 5'-hexamyl-2'-deoxyurinone yield 84%! 1'-NMR(r)MS〇-dS)0.9
0 (3I(,s, -CI-13)1.80 (3H
, d, -CI()) 1.05-1.60 (G H,
+s, (CI-12)) )2.00~2.40 (
4H, Ifi, H-2', C)-(□Co-13
, 90 (I HIL II 4') 4.05-4.
25 (3H, m, t1-3',
H-5') 5.39 (I H, d, 3'-0H
)6.12 (1f-i, L, H-1')7.40
(l H, d, H-6) 11.40 (I H, S, N 3 H) 5'-hexaphyll-2'-deoxy-5-bromocrinone Yield 67% H'-NMR (DMSO-d, ) 0.95 (3H, stC+-13) 1.10-1.70 (6H2m, (CH2)-)1.
95-2.50 (4H, J l-(-2°, -C
1(, C0-) 3.85-4.25 (4H, ua,
H-3', H4'H-5°) 5.45 (I II, d, 3'-〇l-
()6.15 (I II, L, H-1')
7.60 (1tl, d, H-6) 11.4
5 (I H, st N 3-H) 5'-hexamyl-2'-deoxy-5-fluorouridine Yield 92% H'-NMR (DMSO-d,) 0.92 (3H, m, CHd l ,00~1.70 (GI(,J-(CH2)p
-)2.05~2.40 (4H, 1m, H-2',
-C82CO) 4.00-4.20 (3H, Chin, H
-3', H-5°) 3.90 (I H, theory, H-61
) 5.40 (I H, b, 3'-OH) 6.10
(I H, L, H-1') 7.80 (I H, d,
HG) 11.70 (I H, bs+ N 3+ () 5°-hexamethyl-2°-deoxyazo7sine yield 72% H'-NMR (DMSO-d,) 0.98 (3H, s, -CH )) 1.00~1
．． 70 (GH, n-(CH2)) )2.05
~2.45 (4H, +II, H2°, -CH2C0
-) 3.90 to 4,40 (41-1, In, H-3
°, ) (-, 1'H-5') 5.28 (I H, d, 3'-〇H) 6.1
0 (I H, t, +-1-1')7.30
(2H, s, N H2) 8.12 (I H, s, c-8) 8.31
(I H2St C2) Example 8 142 mg (0,1m+6ole) of 3°, 5°-nohex/yl-2′-deoxyurinone was added to 20% trimethylformamide-Oj, M phosphate buffer (pH 7,0 ) 1
ml, and then 40 mg of Protease N (Ohno Pharmaceutical Co., Ltd.) was added and stirred at room temperature.・After confirming by thin layer chromatography that the spot of the raw material had disappeared, enal acetate 20+al was added for extraction. There are 8! 1) Rum solution (5 kl x 2
), washed with saturated saline (50 [ΩI x 2), and dried with Glauber's salt. After concentrating the a layer under reduced pressure, the target product 3'-hexamyl-2'-deokyneuridine 31+n was isolated and purified by silica sol column chromatography.
H (yield 96%) was obtained.
＋１’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）
０．９２ （３Ｈ、ＩＩＩ、ＣＨ、）
１．００１，７０ （Ｇ ＩＩ、 ｍ、
（ＣＨ２）３ ）２．００〜２８．ｉＱ
（４Ｉ−１、噴、 ）ｌ−２’、 −Ｃ
Ｈ２ＣＯ−）３．５０〜３．６５ （３ｔ（、ＩＩｌ、
Ｈ４°、Ｈ−５°）５．３５ （ＩＨ，ｂｓ、 Ｈ−
３’）５．２０ （Ｉ Ｈ９ｂｓ、５ ’ Ｏｌ−１
）５．６５（１トｆ、 ｄ、 Ｈ−５）６．１
２ （Ｉ Ｈ，Ｌ、 Ｉｌ −１’）７．８５ （Ｊ
Ｈ，ｄ、 Ｈ−６）
Ｉｌ、３０ （Ｉ Ｈ，Ｓ、 Ｎ ３−１−１）実施例
９〜１２
以下、実施例８と同様の操作により下記の化会物を製造
した。+1'-NMR (DMSO-d,) 0.92 (3H, III, CH,) 1.001,70 (G II, m,
(CH2)3)2.00~28. iQ
(4I-1, jet, )l-2', -C
H2CO-)3.50-3.65 (3t(, IIl,
H4°, H-5°) 5.35 (IH, bs, H-
3') 5.20 (I H9bs, 5' Ol-1
) 5.65 (1t f, d, H-5) 6.1
2 (I H, L, Il -1') 7.85 (J
H, d, H-6) Il, 30 (I H, S, N 3-1-1) Examples 9 to 12 The following compounds were produced in the same manner as in Example 8.
３°−ヘキサフィル−２゛−デオキシチミノン収率８６
％
Ｈ’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｃ１６）
０．９０ （３Ｈ，ｓ、ＣＩ＋ｚ）
１．００−１．６８ （Ｇ Ｈ、Ｉｎ、 −（ＣＨ□）
３− ）１．８２ （３＋（、ｄ、 −ＣＩ−（、）２
．０５〜２．６０（４Ｆ（、ｗ、Ｈ−２°、 −Ｃ
Ｉ−１、ＣＯ−）３．６０〜３．７０ （３１−（、鋤
、Ｈ−４’、Ｈ−５’）５．３０ （Ｉ Ｈ，ｂＳ、
Ｈ−３’）５．１０ （Ｉ Ｈ，Ｌ、 ５’−０Ｈ）６
．１５ （１）（、ｔ、 Ｈ−１’）７．６０ （Ｉ
Ｈ，ｄ、 Ｈ−６）
１１．４０ （１，Ｈｌｓ、 Ｎ ３ ）（）３゛−
ヘキサ／イル−２゛−デオキシ−５−フルオロウリノン
収率８８％
Ｈ’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）
０．８５ （３１４、ｓ、ＣＨ３）
１．００〜１．８０ （６Ｈ、誦、−（ＣＨ，）、−）
２．０５２．６０ （４Ｈ９ｍ、Ｈ２’、 ＣＨ２
Ｃ０）３．８０〜４．１０ （３Ｈ，Ｊ Ｈ４’、
ｌ−１５’）５．１０ （１）（、ｂ、 Ｈ−
３°）５．１５ （１１１，ｔ、 ５ ’−
０Ｈ）６．１０ （Ｉ Ｈ，Ｌ、 Ｈ−１’）７
．７７ （ｌ Ｈ，ｄ、 Ｈ−６）１１．６
５ （Ｉ Ｉ−１，ｂｓ、 Ｎ ３−１４）２’、
３’−ノへキサメイル−５−フルオロウリノン収率４０
％
１（’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ）
０．８２．０．８５ （６ｔ−１、Ｓ、 ＣＩ−（３
）１．００〜１．８０ （１２Ｈ１Ｉ１１． （ＣＨ
２）、）２、ＯＯ〜 ２．４０ （４１−１、鵠、！
（−２°、 −ＣＨ２ＣＯ−）３．６０ （２Ｈ，
ｂ、 Ｈ−５’）
４．０５ （Ｉ Ｈ２ｂ＋ Ｈ４’）
５．２０〜５．５０ （３Ｈ，ｍ、 Ｈ−２°、Ｈ−３
’５’Ｏ）＋）
５．７０ （Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｈ−５）
６．００ （Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｈ−１’）７．８５ （Ｉ
Ｈ，ｄ、 Ｈ−６１
１１，２８（Ｉ Ｈ，ｓ、 Ｎ ３ Ｈ）３°−ヘキ
サ／イル−２°−デオキシアゾ／シン収率８２％
Ｈ’−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）
０．９０ （３Ｈ、ｓ、ＣＨｚ）
１．０３〜１．７５ （６Ｈ，Ｉｎ、 （ｃ＋−１２
）） ）２．００〜２．４５ （４Ｈ＋ ｕ＋、Ｈ２
’、Ｃｌ−１２ｃｏ ）３．７０〜３．８５（３Ｈ，
城、Ｈ−４”、Ｈ−５’）５．２８ （Ｉ Ｈ，ｂ、
Ｈ−３’）５．２０ （５’−ＯＨ）
６．１５ （Ｉ Ｈ，ｔ、 Ｈ−１’）７．３］、 （
２Ｈ＝ ｓ、Ｎ Ｈ２）８．１４ （Ｉ Ｈ，ｓ、 ｌ
−［−８）８．３２（ＩＨ，ｓ、 Ｈ−２）
（以 上）
出 願 人 大鵬薬品工業株式会社
代 理 人 弁理士 １）村 巌
手
続
補
正置
平成元年１０月 ６ 日
昭和６３年特許願第２２２０５９号
発明の名称
ヌクレオシド類の脱アシル化方法
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
大鵬薬品工業株式会社
７、補正の内容
（１）明細書中温９頁第１３行
「４時間後」を「２４時間後」に訂正します。3°-hexaphyll-2′-deoxythyminone yield 86
% H'-NMR (DMSO-c16) 0.90 (3H, s, CI+z) 1.00-1.68 (GH, In, -(CH□)
3- )1.82 (3+(,d, -CI-(,)2
．． 05~2.60(4F(, w, H-2°, -C
I-1, CO-) 3.60-3.70 (31-(, plow, H-4', H-5') 5.30 (I H, bS,
H-3')5.10 (I H, L, 5'-0H)6
．． 15 (1)(,t, H-1')7.60 (I
H, d, H-6) 11.40 (1, Hls, N 3 ) ()3゛-
Hexa/yl-2'-deoxy-5-fluorourinone Yield 88% H'-NMR (DMSO-d,) 0.85 (314, s, CH3) 1.00-1.80 (6H, recited, -(CH,),-)
2.052.60 (4H9m, H2', CH2
C0) 3.80-4.10 (3H, J H4',
l-15')5.10 (1)(, b, H-
3°) 5.15 (111,t, 5'-
0H) 6.10 (I H, L, H-1') 7
．． 77 (l H, d, H-6) 11.6
5 (I I-1, bs, N 3-14) 2',
3'-Nohexamyl-5-fluorourinone yield 40
% 1('-NMR(DMSOda) 0.82.0.85 (6t-1, S, CI-(3
)1.00~1.80 (12H1I11. (CH
2),)2,OO~ 2.40 (41-1, Mouse,!
(-2°, -CH2CO-)3.60 (2H,
b, H-5') 4.05 (I H2b+ H4') 5.20-5.50 (3H, m, H-2°, H-3
'5'O)+) 5.70 (I H, d, H-5) 6.00 (I H, d, H-1') 7.85 (I
H, d, H-61 11,28 (I H, s, N 3 H) 3°-hexa/yl-2°-deoxyazo/syn Yield 82% H'-NMR (DMSO-d6) 0.90 ( 3H, s, CHz) 1.03 to 1.75 (6H, In, (c+-12
)) )2.00~2.45 (4H+ u+, H2
', Cl-12co) 3.70-3.85 (3H,
Castle, H-4", H-5') 5.28 (I H, b,
H-3') 5.20 (5'-OH) 6.15 (I H, t, H-1') 7.3], (
2H= s, N H2) 8.14 (I H, s, l
-[-8) 8.32 (IH, s, H-2) (and above) Applicant Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Agent Patent attorney 1) Iwao Mura procedural amendment dated October 6, 1989, 1988 Patent Application No. 222059 Name of the invention Method for deacylation of nucleosides 3 Relationship with the case by the person making the amendment Patent applicant Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. 7 Contents of the amendment (1) Specification Nakaon page 9 line 13 Correct "4 hours later" to "24 hours later".
（２）明細書中温１４真下から第３行 「４時間後」を「２４時間後」に訂正します。(2) 3rd line from right below 14 on the statement Correct "4 hours later" to "24 hours later".
（３）明細書中温１８頁第９行
［５，２０（５°−０Ｈ）Ｊを
「５，２０ （Ｉ Ｈ，Ｌ、 ５ ’−０Ｈ）Ｊに訂
正します。(3) In the specification, page 18, line 9 [5, 20 (5°-0H) J is corrected to "5, 20 (I H, L, 5'-0H) J.
４、代 埋入 〒５３０大阪府大阪市北区曽根崎１丁目２番８号（以 上）4, generation implantation Address: 1-2-8 Sonezaki, Kita-ku, Osaka-shi, Osaka 530 (hereinafter referred to as Up)
Claims (1)
原子又は−ＯＣＯＲを、Ｒはアルキル基、又は置換又は
非置換のフエニル基を示す。）で表わされるヌクレオシ
ド類をリパーゼ又はプロテアーゼと反応させ、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿２は水素原子又は水酸基を、Ｂ及びＲは前
記と同一の意味を示す）で表わされる化合物又は一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｂ、Ｒ＿１及びＲは前記と同一の意味を示す）
で表わされる化合物に導くことを特徴とするヌクレオシ
ド類の脱アシル化方法。(1) General formula ▲ Numerical formula, chemical formula, table, etc. ▼ (In the formula, B is a substituted or unsubstituted nucleobase, R_1 is a hydrogen atom or -OCOR, R is an alkyl group, or a substituted or unsubstituted phenyl The nucleosides represented by (representing a group) are reacted with lipase or protease, and the general formula ▲ has a mathematical formula, chemical formula, table, etc. ▼ (where R_2 is a hydrogen atom or a hydroxyl group, and B and R are the same as above). Compounds or general formulas (indicating meanings) ▲ There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc. ▼ (In the formulas, B, R_1 and R have the same meanings as above)
A method for deacylating nucleosides, which leads to a compound represented by:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22205988A JPH0269191A (en) | 1988-09-05 | 1988-09-05 | Deacylation of nucleosides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22205988A JPH0269191A (en) | 1988-09-05 | 1988-09-05 | Deacylation of nucleosides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0269191A true JPH0269191A (en) | 1990-03-08 |
Family
ID=16776460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22205988A Pending JPH0269191A (en) | 1988-09-05 | 1988-09-05 | Deacylation of nucleosides |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0269191A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0894868A3 (en) * | 1997-07-31 | 1999-04-21 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Process for producing nucleoside derivatives |
| WO2005111056A1 (en) * | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Fundacja Rozwoju Diagnostyki I Terapii | New esters of adenosine nucleosides and carboxylic acid |
-
1988
- 1988-09-05 JP JP22205988A patent/JPH0269191A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0894868A3 (en) * | 1997-07-31 | 1999-04-21 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Process for producing nucleoside derivatives |
| WO2005111056A1 (en) * | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Fundacja Rozwoju Diagnostyki I Terapii | New esters of adenosine nucleosides and carboxylic acid |
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