JPH02292222A - エイズ処置に有用な薬物調製用ジピリド［４．３―ｂ］［３．４―ｆ］インドールの用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、ヒト免疫欠損症、それはまたエイズとして知
られている、の処置に有用な薬物の調製のためのジピリ
ド［４．３−ｂコ［３．４−ｆ］インドールの用途に関
する。

エイズ、または後天性免疫不全症候群、は、最近、流行
割合で拡っている疾病の末端相で、その応答剤は、ヒト
免疫不全レトロウィルスの一つまたはＨ■■ウィルス（
ＨＩＶ１またはＨ［Ｖ２）である。

ＨＩＶウィルス、これは特に性行動または汚染された血
液での輸血の間に伝わるが、は、その表面に、ＣＤ４表
面分子またはＣＤ４レセプターとして知られている抗原
レセプターを有する細胞を標的とする。Ｔ４リンバ球、
これは免疫系の基本的役割を育する、は、ＣＤ４レセプ
ターを所Ｈし、それゆえＨＩＶウィルスにとって標的細
胞である。

それゆえＨＩＶウィルスによる感染は、ウィルス粒子、
より詳しくは、ウィルスエンベローブのｇｐｔ２ｏ蛋白
がＴ４リンパ球のＣＤ４レセプターに結合することで始
まる。それは、ウィルスエンベロープと細胞膜との溶解
で継続し、ウィルス遺伝子のＲＮＡは、次いで特異的酵
素の助けで耘写し、逆転写酵素（これは正常細胞には存
在しない）を二本鎖ＤＮＡに呼び、細胞遺伝子に組込ま
れる。

この順路で感染した細胞は、次いでウィルス蛋白、特に
、ｇｐｌ２０蛋白を合成し、これは、細胞膜上に位置す
る。ｇｐｌ２０蛋白はＣＤ４レセブターに高親和性であ
るため、この感染細胞は、健康Ｔ４リンパ球と結合して
シンシチウムを形成することができ、シンシチウムは、
延命の能力かない。

単一感染細胞は、それゆえ、多くの健康Ｔ４リンパ球を
死に導くことができる。

それゆえ、分離されたｇｐｌ２０ウイルス蛋白は、時々
血液およびリンパ内を循環し、免疫系での標的細胞とな
る健康Ｔ４リンパ球のＣＤ４レセブターに結合する。

ＨＩＶウィルスは、また単核球、マクロファージおよび
関連細胞内で増殖し、多分それらの作用を妨害する。Ｈ
ＩＶウィルスによる感染は、ある順路において、活性化
マクロファージおよび活性化リンパ球により生成された
サイトカインの量または構造を修飾することができ、こ
れらのサイトカインは、次いで副Ｔ４リンパ球に毒性を
示す。

上記機構のどの一つも、Ｔ４リンバ球を破壊に導き、同
時に免疫系の崩壊に導く。

ＨｒＶウィルスを攻撃する異なる手段が、これまで特に
ウィルスが標的細胞に結合する相内で、またはウィルス
が増殖する時に考えられてきた。

それゆえ、特に、エフ・バールーシヌシ等による研究、
表題、ル・シダ・アン・クエスチオン（エイズ・イン・
クェッション）．コレクテイ才ン・デモクン・ドジュル
ジュイ．ブａン出版（＋９８７）、お上びアール・セル
ショアン等による、論文、表題ル・トレトーマン・デュ
・シダ（トリートメント・フォア・エイズ）雑誌プール
・ラ・シアンス，Ｉ９８８年１２月、９４−１０４頁が
引用される。

最近エイズ処置に用いられる逆転写酵素インヒビターは
、ジデオキシヌクレオシドで、これはヌクレオシド類似
体、特にアジドチミジン（ＡＺＴ）である。

これらのインヒビターについての問題は、これらが、総
合的に特異的ではなく、ある用量で、それらが非感染細
胞の***を阻止し、それにより明らかな毒性効果を生じ
、そして処置を継続できなくすることである。

またウィルスメッセンジャーＲＮＡの部分に相浦の才リ
ゴヌクレ才シドを用いることが提案されている。

発明の目的 ジビリド［４　．３−ｂ］［３．４−ｆｌイ：／ドール
がエイズ処置に用いうろことが見いだされた。

このジピリド［４．３−ｂ］［３．４−ｒ］インドール
は、式 Ｅ式中、Ｒ１は、水素、水酸基、ｃ．−ｃｅアルキル基
、ＣＩ一０６アルキルチオ基、ｃ，−Ｃ．アルコキシ基
、ハロゲン、好ましくは塩素、または式Ｒ， ／ Ｃ　Ｈ　　（Ｃ　Ｈ　ｔ）ｎ−　Ｎ ＼ Ｒ　ｓ　　　　　　　　　Ｒ　４ （式中、Ｒ，およびＲ４は、同一または異なって、それ
ぞれハロゲンまたはｃ．−Ｃ．アルキル基、Ｒ，は、水
素またはｃ＋−Ｃ＊アルキル基およびｎはｌから１０の
整数である） の基で置換されまたはされないアミノ基およびＲ，は、
水素またはＣ．−Ｃ．アルキル基である。

のジピリド［４．３−ｂコ［３．４−ｒ］インドールお
よびその薬理学的に許容されうる塩の、エイズ処置に有
用な薬物調製のための用途を有する。

これらの化合物は、明らかな細胞傷害性と抗腫瘍作用を
有し、最初に、フランス特許第２，３８７，２２９号に
記載され、多くの発表の課題を構成している。

これらの化合物のＬ１２１０白血病への抗腫瘍活性は、
特に、 ジェイ・シー・チェアマン等．シー・アール・アカド・
スク．パリ，１９７７，２８５，シリーズＤ９４５−８
４８； アール・リデリュ一等．プル・キャンサー（ハリ）１９
８０．６７．１．１−８および ジエイ・シー・チェアマン等．プロク・クス・インター
ン・コングル・ケモセル，１９７８．１巻，に記載され
ている。

これらの化合物の抗腫瘍作用は、またフロインド白血病
．ＢＩ６メラノーマ，ルーイス癌およびマウス肉腫ウィ
ルスのモロニー株により導入される腫瘍のケースに観察
される。

本シリーズの特に価値のある化合物は、式Ｉ中、Ｒ，が
式−ＮＨ　　（ＣＨｙ）ａ　　Ｎ　　（ＣｔＨｓ）ｔお
よびＲ，が水素の化合物で、本化合物は、１−［（γジ
エチルアミノブロビル）アミノ］−５−メチルジピリド
［４．３−ｂコ［３．４｛］インドールと名付けられ、
またＢＤ４０の名でよく知られている。

本化合物は、またｔｏ−［３−ジエチルアミノ）プロビ
ルアミノコ−６−メチル−５Ｈ−ピリド［３．４’，４
．５］ビロロ［２．３−ｇ］イソキノリンと命名され、
国際一般名称パゼリプチンを有する。

ＢＤ４０の効力は、また培養株の細胞について研究され
ている（エム・ジエイ・ヴラレン等バイオキミ，１９８
２，６４，９２３−９３２参照）。細胞（マウスセルラ
インＤ５５およびマウス線維芽細胞ＮＩＨ−３Ｔ３）の
生存度および形態は、０．１０μＭまたはそれ以上の濃
度でＢＤ４０による２４時間処置により不可逆的に影響
を及ぼされることが見出された。

このような性質は、挿入によりＤＮＡに結合する、ＢＤ
４０の能力によるとみられる（特に、イー・モウスタッ
チ等．キャンサー・リサーチ，１９８３，４３．３７０
０−３７０６およびトウルベズーバーリン等．プル・キ
ャンサー（パリ）＋　９　８　０６７．１．９−１３参
照）。

発明の効果 驚くべきことに、ＢＤ４０および関連化合物が、特にＨ
ＩＶウィルスの逆転写酵素、これはエイズに関連する因
子であり、またＨＩＶウィルスにより感染した末梢リン
パ球の生成物である、を阻止することが見出された。

また、ＢＤ４０は、マクロファージ自身内のＨＩＶウィ
ルスの増殖を阻止することも明らかにされ、これはこれ
ら細胞粒子内のＨＩＶウィルスの繁殖を制限するのを助
ける効果である。

かくして、本発明は、上で定義された式Ｉのジピリド［
４　．３　−ｂ］［３　．４−ｆ］インドール．または
それらの薬理学的に許容されうる塩の、エイズ処置に有
用な薬物の調製のための使用に関する。

上記式■の化合物、式中、 Ｒ１は水素、塩素、または式 Ｒ３ ／ Ｒ　ｓ　　　　　　　　　　　　Ｒ　４式中、ｎは、ｌ
および４の間の整数、Ｒ３および４は、同一または異っ
て、水素またはＣ　Ｉ−　Ｃ　ａ、好ましくはＣ．−Ｃ
．アルキル基で、Ｒ，は、水素またはＣ　，−　Ｃ．ア
ルキル基、好ましくはメチル基である、そして Ｒ，は、水素またはＣｒ　　０４アルキル基、好ましく
はメチル基である およびそれらの薬理学的に許容されうる塩は、本発明の
目的にかなった化合物が好ましく、ＢＤ４０．特に三マ
レイン酸塩または三塩化水素の形、が好ましい。

これらの化合物は、フランス特許第２；３８７，２２９
号に記載された方法により特に得ることができる。

疾病の発達段階に従って用いられるべき用量ジビＩＪ　
Ｆ［４．３−ｂ］［３．４−ｆコインドールは、有利に
は静脈内投与される、例えばカボジ肉腫の形で述べられ
る確立されたエイズにかかった患者の場合、３週間の間
隔で、３日連続投与処置で５０から３００１９／Ｉ″／
日のがん流の形でＢＤ４ｏ三塩化水素の注射が好ましい
。

本発明は、以下の試験の手法により、より詳しく記載さ
れる。

！　逆転写酵素の決定 ＢＤ４０三塩化水素（以下、ＢＤ４０として引用する塩
）、これは水性相中、ＢＤ４０塩基を塩酸水溶液と反応
させて得た、を第一段階で、ＨＩＶｌウィルスの逆転写
酵素の酵素活性の直接インヒビターとして試験した。

酵素活性は、合成インヒビターおよびＨ３一放、射標式
基質を用い、インビトロで、異なる用量のＢＤ４０の存
在下に試験した。沈澱し、１分当りのカウントで表示し
た放射標式物質の量は、逆転写酵素の活性に比例する。

得られた結果は、第１図のグラフに示され、放射標式物
質の量は、縦座標上に分当りのカウント（ＲＴ　ｉｎ　
ｃｐＩＩ）でプロットし、試験したＢＤ４０の塁は、横
座標上にプロットした。

ＨＩＶウィルスの逆転写酵素の活性は、ｌｙ／ｙ（ｌか
ら５０μ９／Ｍ（ｌの最高濃度で、ＢＤ４０により総合
的に阻止される。

５μ９／酎のＢＤ４　０４１度以上で、酵素の活性は、
インヒビターの存在しない場合と同レベルであることが
明らかにされる。

■　末梢リンパ球の感染性試験 シトフエレシス（ｃｙＬｏｐｈｅｒｅｓｉｓ）を起源と
する細胞のＰＨＡ（フイトヘマグルチニン）による刺激
後得られたリンパ球を、ＨＩＶウィルスの適当な溶液で
感染し、感染後約１４日でウィルス生産か最高になるよ
うにした。異なる用量のＢＤ４　０を、培養培地に、感
染時および培養の間ずっと、毒性および保護用量を決定
することを目的に加えた。

作用の機構を決定するため、化合物は、培地に感染前、
細胞のプレインキュベーションの間か、または感染に続
く培養期間ずっと加えた。

リンパ球のウィルス生成は、培養中、３または４日毎に
、逆転写酵素の活性決定により追跡した。

１　２　．　５　ｎ９，／ｒＱ濃度でＢＤ４０より得ラ
レタ結果は、第２図の異なる曲線で示され、それは日数
で数えた時間の関数として、逆転写酵素の活性（縦座標
上のＲＴ）を表わす。

第２ａ図：ＢＤ４０は感染前、細胞のプレインキュベー
シジンの期間加えた、 第２ｂ図：ＢＤ４０は感染から続く培養の間、加えた、 第２ｃ図：ＢＤ４０は、感染後、培養にのみ加えた。

第２ｄ図：ＢＤ４０なし、ＨｒＶｔ：］：ｚトロール、
これらの曲線の試験は、感染Ｍ１時間のプレインキュベ
ーションの間、Ｉ　２．５１１１Ｆ／Ｊ！ρの濃度でＢ
Ｄ４０を存在させると（第２ａ図）、感染リンパ球のウ
ィルス生成を総合的に阻止するのに十分である。同様の
結果は、ＢＤ４０が、また、感染から続く培養の間、存
在した場合に得られる（第２ｂ図）。ＢＤ４　０を感染
後に、培養に添加すると（第２ｃ図）、ウィルス生成ピ
ークが上り、それは、インヒビターが存在しない場合に
得られるピーク（第２ｄ図）より低レベルを維持する。

■　末梢リンパ球によるＨＩＶウィルスの生成に対する
ＢＤ４０の作用 この試験は、次の手法で実施された。

ヒトリンパ球を、血性反応陰性のドナーの末梢血液から
フイコール勾配によって分離した。処置のｍｌに、リン
パ球を、フイトヘマグルチニンＰ（ＰＨＡ−ＰＸディフ
コ）で３日間刺激した。次いで、１０％のウシ胎児血清
（フロウ、２９．１０１，７１１参照）、１％グルタミ
ン（シグマ，０４３．０５０３０参照）、１％の抗生物
質（ジブコ，ＰＳＮ，０４３．０５６４０｝｛参照）、
１０％のインターロイキンー２（バイオテスト，８１．
１０２０参照）および２ｇ／ｘＱのボリブレン（シグマ
，３６Ｆ’，３６８６，Ｐ４５１５参照）を含む、ＲＰ
ＭＩ１６４０グルタミン不含培地（ジブコ，０４　１，
０　１８７０Ｍ参照）で培養する。

ＢＤ４０三塩化水素（以下、ＢＤ４０として弓用する塩
）を３．２から２　５　ｎｙ／ｘ（！ｋ非毒性用量で加
え、同時に、ウィルス感染を実施した。上清中のウィル
スの生成は、超遠心分離による感染細胞のａ′ａ後、逆
転写酵素活性として測定した。

得られた結果は、第３図の曲線で示され、これは、ＢＤ
４０の与えられた量に対する時間の関数として逆転写酵
素活性（縦座標上ＲＴ）を与える。

２　５　ｎｙ／ｚ（ｌから０　．　２　５　ｎ９／ｚＱ
の化合物ＢＤ４０の非毒性濃度で、感染末梢リンパ球の
ウィルス生成の非常に明白な阻止が観察された。３．ｌ
２ｎ９／ばのｉｌｌ！で、ウィルス生成ピークが、イン
ヒビターの不存在下で得られた値よりも低レベルで表れ
る。

異なる型の実験で得られた結果は、化合物ＢＤ４０がＨ
ＩＶＥの逆転写酵素の強力なインヒビタ一であることを
示す。

さらに、この化合物は、非常に低濃度で、ＨＩＶｌウィ
ルスにより感染した末梢リンパ球のウィルス生成を阻止
しうる。

最高で非毒性の用潰で、４２日まで生成されるウィルス
が全く存在しないこと、および感染ｍＢＤ４０による細
胞のプレインキュベーションを含む試験から、化合物Ｂ
Ｄ４０はＨｉＶＩウィルスによる感染の非常に初期の段
階から作用することが判る。

逆転写酵素の活性に阻害的に作用するにもがかわらず、
ウィルスＲＮＡの転写、および、従って、その細胞ゲノ
ムへの取込みを阻止することが考えられうる。

■　マクロファージ中のＨＩＶＩウィルスの増殖に対す
るＢＤ４０の阻止作用 マクロファージは、アドへッションにより末梢血液から
分離した。それらをＨＩＶＩウィルス（５０００から２
　５　，　０　０　０　ｃｐｍ（ＲＴ　ｉｎ　ｃｐｔｇ
　ｐｅｒ　ｍｌ）で感染し、３から７日後、マクロファ
ージを凍結／融解によりバーストし、ウィルスをリンパ
芽球ライン（ＯＥＭまたは末梢血液リンパ球）と共生培
養して発達させた。

異なる用量のＢＤ４０三塩化水素（以下、ＢＤ４０）を
試験し、生成物を感染時に培養培地に添加した。

これらの実験条件下で、コントロールウィルス感染は、
共生培養後３から７日間ウィルス生成を示すが、ＢＤ４
０で処理したマクロファージについては、逆転写酵素活
性測定によるウィルス数の減少、およびかくしてウィル
ス複製の部分阻止を確認しての遅延化出現か見い出され
た。この阻止は、ＢＤ４０の１０および１　５　ｎｇ／
ｘ（ｌの非毒性用量で２日遅延する。

それゆえ、これらの結果は、ＨＩＶウィルス復製の阻止
についてのＢＤ４０の作用が、リンパ球に限らず、感染
マクロファージにもあてはまることを明白に示す。

Ｖ　　ＢＤ４０三塩化水素で処置した患者におけるＨＩ
Ｖウィルスの逆転写酵素の阻止 カボジ肉腫で確立エイズにかかった１２人の患者に対す
る臨床試験において、５０および３００ｕ／ｍ”／日の
間の用量で魔流形でＢＤ４０三塩化水素注射を、３週間
隔で３日連続の処置のコースで、血液細胞中の逆転写酵
素（ＲＴ）活性の測定を、投与前および各処置コース開
始後４ならびに５日に行った。

測定技術は、上記■および■で用いたのと同じである。

下記の結果が得られる。

８つの処置コースが採用された基準に関し、即ち、逆転
写酵素が問題の患者に測定されうろ限りにおいて、そし
て処置コースの４日目の値が、その前の処置コースの！
５日目および問題の処置コースの！５日目の値のいずれ
の側の値を有する限りにおいて、評価することができる
。

評価されうる８つの処置コースの、７ケース中４日目の
値は、逆転写酵素の明らかな阻止の存在を示している、
その両側の値よりも小さい。

これら７ケースの４つで、逆転写酵素活性は０に減少す
る（またはＯから明白に異ならない無視しうる値）。

これら７ケースの、得られた値が問題の患者で測定され
た最高値の％で表示されることにより標準化される場合
、次の平均値が得られる。

前の処置コースの０１５についてのＲＴ　　７２．３問
題の処置コースのＤ４についてのＲＴ　　９．７問題の
処置コースのＤ１５についてのＲＴ　　６２．４それゆ
え、阻止は処置コースの４日目で明白である。

これら７ケースは下記の用量（ａ９／ｍ″／投与）に相
当する，２ケースは５０．３ケースは２００．１ケース
は２５０そして１ケースは３００。

これら全ての用量は、完全に臨床トレランスを阻止する
。

これらの結果は、全体として、臨床試験で、ＢＤ４０三
塩化水素の投与が、事実、ウィルスの複製に必須の酵素
である逆転写酵素９明白な阻止を生じさせうるむのであ
ること、およびＢＤ４　０が、それゆえＨＩＶウィルス
による感染に基づく異常条件の処置に適した薬物であり
うることを示す。

続く研究は、得られるべき最善の治療目的を可能にする
最高の処置手段を特定することであろう。

従ってＢＤ４０は、すぐれた抗ウィルス剤であり、その
ＨＩＶウィルスに対する作用は、ヒトに観察される比較
的低毒性と結びついて、エイズの処置に用いうろことを
正当化する。

以下に定義される式Ｉの化合物も、本質的に類似の結果
を与える。

Ｒ２：．Ｈ Ｒ２　　：　　Ｈ 皿コ：ｌｌ）Ｒｚ：Ｈ Ｒ２　：　ＣＨｓ ｍ　　Ｒｉ　：　ＣＩ Ｒ２　：　Ｈ Ｒ２　　：　　Ｈ ＢＩ）９２ Ｒ１：　ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２ Ｒ２　　：　　Ｈ

【図面の簡単な説明】

第１図は、試薬ＢＤ４０によるＨＶＩの逆転写酵素の阻
止を示す図面である。 第２図は、ＨＶＩによる末梢血液リンパ球の感染に対す
るＢＤ４　０の作用機構を示す図面であり、第２ａ図は
プレインキュベーション！時間、第２ｂ図はプレインキ
ュベーンヨン！時間培養、第２ｃ図は培養、第２ｄ図は
ＨＶＩコントロールである。 ＲＴ＋ｎｃ；ｍ 第３図は、末梢リンパ球によるＨＶＩウィルスの生成に
対するＢＤ４０の作用を示す図面である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ I 式中、Ｒ＿１は、水素、水酸基、Ｃ＿１−Ｃ＿６アルキ
   ル基、Ｃ＿１−Ｃ＿６アルキルチオ基、Ｃ＿１−Ｃ＿８
   アルコキシ基、ハロゲン、好ましくは塩素、または式▲
   数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿３およびＲ＿４は、同一または異なって、
   それぞれハロゲンまたはＣ＿１−Ｃ＿６アルキル基、Ｒ
   ＿５は、水素またはＣ＿１−Ｃ＿６アルキル基およびｎ
   は１から１０の整数である） の基で置換されまたはされないアミノ基およびＲ＿２は
   、水素またはＣ＿１−Ｃ＿４アルキル基である。 のジピリド［４，３−ｂ］［３，４−ｆ］インドールお
   よびその薬理学的に許容されうる塩の、エイズ処置に有
   用な薬物調製のための用途。 ２、ジピリド［４，３−ｂ］［３，４−ｆ］インドール
   が、式 I ［式中、Ｒ＿１は水素、塩素または式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｎは１および４の間の整数、Ｒ＿３およびＲ＿
   ４は、同一または異なって、水素またはＣ＿１−Ｃ＿６
   、好ましくはＣ＿１−Ｃ＿４アルキル基およびＲ＿５は
   、水素またはＣ＿１−Ｃ＿４アルキル基、好ましくはメ
   チル基） の基、そしてＲ＿２は水素またはＣ＿１−Ｃ＿４アルキ
   ル基、好ましくはメチル基である。］ の化合物およびその薬理学的に許容されうる塩である、
   請求項１の用途。 ３、ジピリド［４，３−ｂ］［３，４−ｆ］インドール
   が、１−［（γ−ジエチルアミノプロピル）アミノ］−
   ５−メチルジピリド［４，３−ｂ］［３，４−ｆ］イン
   ドール（ＢＤ４０）である、請求項１また２の用途。 ４、ＢＤ４０が三塩化水素の型である、請求項３の用途
   。