JPH02196796A - マクロライド系抗生物質の精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、抗菌剤として有用なマクロライド系抗生物質
の精製法に関する。

従来の技術 従来、マクロライド系抗生物質の精製法としては、該化
合物がアルカリ側で有機溶剤に溶は易く、酸性側で水に
溶は易いという両親媒性的性質を利用した抽出法や、ア
ミノ糖の塩基性を利用したイオン交換法や、さらにはマ
クロライド骨格の疎水性を利用した逆相吸着剤を用いる
方法等が知られている。

また、マクロライド系抗生物質の製品を遊離塩基の形で
取得する場合には、それらが一般に水に難溶であるため
、上述の精製工程を経た後最終工程において、メチレン
クロライド、メタノール、アセトン、酢酸エチル等の有
機溶媒に溶解した形で精製し、溶媒を留去または再結晶
により遊離塩基の結晶または粉末を得るかあるいは水を
加えて溶解度を下げ沈殿化する等の方法が知られている
〔例えば、「抗生物質Ｊ住木論介編　東人出版会３６６
頁、５９３頁、９２６頁および１０５６頁等（１９６１
年〕参照〕。

発明が解決しようとする課題 しかしながらこれらの方法は、製品中に使用した有機溶
媒が残留し、医薬品または医薬品の原料として使用する
には必ずしも好ましいものではなく、有機溶媒を含まな
いマクロライド系抗生物質遊離塩基の精製法が望まれて
いる。

課題を解決するだめの手段 本発明によれば、マクロライド系抗生物質遊離塩基は低
温度で水に易溶で水に対する溶解性が温度に著しく影響
されるという知見のもとに、最終工程で有機溶媒を使用
せず、有機溶媒を含まない遊離塩基を取得する精製法が
提供される。

すなわち、本発明はマクロライド系抗生物質遊離塩基の
水溶液を昇温することにより、当該化合物を析出させる
ことを特徴とするマクロライド系抗生物質の精製法に関
する。

本発明方法を実施するに際しては、マクロライド系抗生
物質遊離塩基の水溶液をｌＯ℃以下好ましくは０〜５℃
の任意の温度から昇温させると、昇温速度によって異な
るけれど通常１０〜５０℃で析出が見られる。

ここでマクロライド系抗生物質としては、アミノ糖が結
合した塩基性マクロライド類であり、エリア、０？イシ
ン（Ｂｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）　、オレアンドマイシ
ン（Ｏｌｅａｎｄｏｍｙｃｉｎ）、カルボマイシン（Ｃ
ａｒｂｏｍｙｃｉｎ）、ジョサマイシン（Ｊｏｓａｍｙ
ｃｉｎ）　、スピラマイシン（Ｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ）
、タイロシン（Ｔｙｌｏｓｉｎ）およびロイコマイシン
（Ｌｅｕｃｏｍｙｃｉｎ）等が例示される。

精製に用いられるマクロライド系抗生物質の遊離塩基の
水溶液は、該抗生物質を含有する水溶液であればいずれ
も対象として用いられる。例えば当該抗生物質を含有す
る反応液、発酵液、粗精製液、粗精製固体等いずれもそ
のままもしくは必要に応じて有機溶媒を除去し、中和、
濃縮等を行って抗生物質の遊離塩基の１〜５００ｇ／ｉ
’を含有する水溶液とすればよい。

種々の原料から当該水溶液を得るには、例えば当該化合
物を含有する発酵液を、前述した抽出法、イオン交換法
あるいは逆相吸着法なとで粗精製されたものを例えば以
下の様に調製する。

上記発酵液から粗精製されたものが鉱酸（例えばリン酸
、塩酸、硫酸など）塩あるいは有機酸（例えばコハク酸
、ラクトビオン酸、プロピオン酸など）塩等の酸付加塩
を含有する水溶液の場合、この溶液を１０℃以下、より
望ましくは０〜５℃に冷却した後、水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、アンモニア等のアルカリ水溶液を用い
て中和し、当該マクロライドの遊離塩基を生成させるこ
とにより調製される。

また、粗精製されたものが遊離塩基を含有する有機溶媒
溶液である場合、それが水と混合しない溶媒であれば、
水を加えて前述したと同様の鉱酸あるいは有機酸を添加
し、酸付加塩として水層に転溶した当該化合物を含有す
る水溶液を得、以下前記と同様にして調製する。有機溶
媒が水と混合する溶媒であれば、水を加え同様に酸付加
塩とした後、濃縮により有機溶媒を留去し、得られた水
溶液は前記と同様にして調製する。

次に、粗精製されたものが結晶、沈殿、粉末等の固体の
場合、水を加え、遊離塩基であればそのまま、酸付加塩
であれば、得られた水溶液を以下前記と同様にして調製
する。

代表的マクロライド系抗生物質遊離塩基の水に対する溶
解度について検討した結果を第１表に示す。いずれのマ
クロライドも低温になる程溶解性が増し、特に１０℃以
下では著しく溶解性が上昇することがわかる。

第 表 タイロシン　　　　　１４３　９６．８　４７．８　２
３．１　１３．１エリスロマイシン　９．２　　４．７
　　３．５　　１．１　　１．０ジヨサマイシン　　６
，８５．８　　２，７　　１．６　　１．２当該マクロ
ライドの水溶液は、徐々に温度を上げて行くことにより
、結晶または沈殿として当該マクロライドが析出してく
る。昇温速度は早過ぎると析出する結晶または沈殿の粒
子が微細になるた約、速度は遅い方が好ましく、通常０
．５〜ｂの速度で約１０℃まで昇湿し、次いで５〜ｂの
速度で昇温させる。起晶点（水溶液が白濁して来た時点
）で３０分〜数時間熟成させることによっても結晶を大
きくすることができる。

析出した当該マクロライドは、遠心分離、濾過、洗浄、
乾燥等の通常の操作により、結晶あるいは粉末として得
ることができる。

以下に実施例および比較例により本発明の詳細な説明す
る。

実施例１ スピラマイシン発酵液１００４！　（スピラマイシン５
００ｇ含有）を２０分間遠心分離（５０００ｒ、ｐ、　
ｍ、）した後、上澄液８５１を採取した。この上澄液を
、陽イオン交換樹脂アンバーライト２００（ＮＨ，＋型
）（ローム・アンド・ハース社１）２０Ｊに２０ｆ／時
で通塔、スピラマイシンを吸着させた後、ｌ規定アンモ
ニア水でスピラマイシンを溶出した。この溶液を、２規
定硫酸でｐＨ７に調整し、スピラマイシン硫酸塩溶液４
０ｊ！　　（スピラマイシン４００ｇ含有）を得た。

上記スピラマイシン硫酸塩水溶液の内２０βを０、５　
Ｉ！まで減圧４Ｍ縮した後、５℃に冷却し、１５規定ア
ンモニア水でｐ　Ｈ９，５調整した。その後、徐々に温
度を上げ、１０℃付近で白濁し始約だので、この温度で
約１時間熟成した後、さらに徐々に３０℃まで昇温させ
た。得られたスラリーをバスケット分離機で分離し、夾
雑する硫酸アンモニウムを除去するため、２００−の水
で洗浄した。

分離機内に残っている固型物を５０℃で一夜真空乾燥し
、乾燥物１８０ｇを得た。

比較例１ 実施例１で得られるスピラマイシン硫酸塩水溶液２（ｉ
ｆに、メチレンクロライド１１を添加後、１０規定水酸
化ナトリウムでｐ　Ｈ９，５に調整し、スピラマイシン
をメチレンクロライド層へ転溶した。この溶液を減圧濃
縮乾固し、粉砕後、７０℃で一夜真空乾燥し、乾燥物１
９０ｇを得た。

実施例１および比較例１の双方から得られたスピラマイ
シン乾燥物について、ガスクロマトグラフィーで残留有
機溶媒量を測定したところ、実施例１乾燥物からは、全
く有機溶媒は検出されなかったが、比較例１乾繰物から
は、メチレンクロライド１１００ｐｐが検出された。

実施例２゜ エリスロマイシン発酵液１００４！　（エリスロマイシ
ンｌｏｏｇ含有）に、メチルイソブチルケトン３０１を
添加し、ｌＯ規定水酸化ナトリウムでｐ　）４１０．５
に調整し、エリスロマイシンをメチルイソブチルケトン
層へ転溶した。この有機層に１０１の水を添加した後、
２規定塩酸でｐ　Ｈ６，５に調整し、エリスロマイシン
を水層へ転溶し、エリスロマイシン塩酸塩水溶液１０１
　（エリスロマイシン８０ｇ含有）を得た。

上記エリスロマイシン塩酸塩水溶液の内５Ｉｌを５℃に
冷却し、１０規定水酸化ナトリウムでｐＨ９，０に調整
し、徐々に温度を上げ３０℃まで昇温させ結晶を析出さ
せた。得られたスラリーをヌッチェで濾過し、夾雑する
塩化す）　ＩＪウムを除去するため、４０−の水を用い
てメツチエ上で洗浄し、３０℃で一夜真空乾燥し、乾燥
物３４ｇを得た。

比較例２゜ 実施例２で得られるエリスロマイシン塩酸塩水溶液５Ｒ
に、メチレンクロライド２５０ｍ１を添加後、１０規定
水酸化す）Ｕラムでｐ　Ｈ９，０に調整し、エリスロマ
イシンをメチレンクロライド層へ転溶した。この溶液を
減圧濃縮乾固し、粉砕後５０℃で一夜真空乾燥し、乾燥
物３７ｇを得た。

実施例２および比較例２の双方から得られたエリスロマ
イシン乾燥物について、ガスクロマトグラフィーで残留
有機溶媒量を測定したところ、実施例２乾燥物からは、
全く有機溶媒は検出されなかったが、比較例２乾燥物か
らは、メチレンクロライド３００ｐｐｍが検出された。

実施例３゜ スピラマイシン発酵液１００１　（スピラマイシン５０
０ｇ含有）を２０分間遠心分離５０００　（ｒ、　ｐ、
　ｍ、　）した後、上澄液８５Ｒを採取した。この上澄
液を吸着樹脂ＨＰ−１０（三菱化成社製）２０１に２０
Ｒ／時で通塔、スピラマイシンを吸着させた後、メタノ
ールで溶出し、スピラマイシンのメタノール溶液２０１
（スピラマイシン４２０　ｇ　含有）を得た。

上記スピラマイシンメタノール溶液の内１０１に水９０
１を添加し、２規定硫酸でｐ　Ｈ７，０に調整した後、
１１まで減圧濃縮した。得られた濃縮液に９１１の水を
添加後、再び、１１まで濃縮した。

さらに、この濃縮液に水４１を添加し、０．５１まで濃
縮し、スピラマイシン硫酸塩溶液０．５１を得た。この
溶液を５℃に冷却し、１０規定水酸化ナトリウムでｐＨ
９，５に調整した。その後、徐々に温度を上げ、１０℃
付近で白濁し始めたので、この温度で約１時間熟成した
後、さらに徐々に３０℃まで昇温させた。得られたスラ
リーをバスケット分離機で分離し、夾雑する硫酸す）　
ＩＪウムを除去するため、２００−の水を用いて洗浄し
た。分離機内に残っている固型物を５０℃で一夜真空乾
燥し、乾燥物１９０ｇを得た。

比較例３゜ スピラマイシンのメタノール溶液１０１を減圧濃縮乾固
し、粉砕後、７０℃で一夜真空乾燥し、乾燥物２００ｇ
を得た。

実施例３および比較例３の双方から得られたスピラマイ
シン乾燥物について、ガスクロマトグラフィーで残留有
機溶媒量を測定したところ、実施例３乾燥物からは全く
有機溶媒は検出されなかったが、比較例３乾燥物からは
、メタノール１１０００ｐｐが検出された。

実施例４゜ タイロシンの遊離塩基粗精製品粉末１２０ｇを水１１に
懸濁し５℃で溶解した。この液の温度を徐々に上げ、８
℃付近で白濁し始めたので、この温度で、約１時間熟成
した後、さらに徐々に３０℃まで昇温させた。得られた
スラリーをバスケット分離機で分離し、分離機内に残っ
ている固型物を３０℃で一夜真空乾燥し、乾燥物９５ｇ
を得た。

比較例４゜ タイロシンの遊離塩基粗精製品粉末１２０ｇを水１１に
懸濁し、２規定硫酸を用いてｐＨ７，０に調整し、タイ
ロシン硫酸塩の水溶液を得た。この液に、メチレンクロ
ライド　４００−を添加し、２規定水酸化ナトリウムで
ｐＨ９，０に調整し、タイロシンをメチレンクロライド
層へ転溶した。この溶液を減圧濃縮乾固し、粉砕後５０
℃で一夜真空乾燥し、乾燥物１１０ｇを得た。

実施例４および比較例４の双方から得られたタイロシン
乾燥物について、ガスクロマトグラフィーで残留有機溶
媒量を測定したところ、実施例４乾燥物からは、全く有
機溶媒は検出されなかったが、比較例４乾燥物からは、
メチレンクロライド３００　ｐｐｍが検出された。

発明の効果 本発明の精製法により、有機溶媒を含有しないマクロラ
イド系抗生物質の遊離塩基が提供される。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）マクロライド系抗生物質遊離塩基の水溶液を昇温
   することにより、当該化合物を析出させることを特徴と
   するマクロライド系抗生物質の精製法。
2. （２）マクロライド系抗生物質遊離塩基の水溶液が、当
   該化合物酸付加塩を含有する水溶液を１０℃以下に冷却
   し、アルカリ溶液を加えて中和された水溶液である請求
   項１記載の精製法。
3. （３）該昇温が１０℃以下の温度から行われる請求項１
   記載の精製法。
4. （４）該水溶液がマクロライド系抗生物質遊離塩基含有
   物を０〜５℃で溶解した水溶液である請求項１記載の精
   製法。
5. （５）マクロライド系抗生物質がエリスロマイシン、オ
   レアンドマイシン、カルボマイシン、ジョサマイシン、
   スピラマイシン、タイロシンおよびロイコマイシンから
   選ばれる請求項１、２、３または４記載の精製法。