JPH02160726A - ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な経口及び／又は非経口投与用ワクチンに
係る。

多くの病気例えば大腸菌（Ｅ　５ｃｈｅｒｉｃｈｉａ　
ｃｏｌｉ　）の如ぎ細菌が原因となる病気に対する哺乳
動物の防ｔｌｌｔａ構は、免疫グロブリンとして知られ
ている抗体の産生を含む。複数の異なるクラスの免疫グ
ロブリンが同定されており、特にＩｇＡ、ＩＱＧ。

ＩｇＭ、ｌｑＤ及びＩＱＥがよく知られている。

哺乳動物の全ての種が同じタイプの免疫グロブリンを産
生ずるのではなく、成る種の哺乳動物では１つの特定免
疫グロブリンに大きく依存しており、哺乳動物の別の種
の防ｍＲ構では別のタイプの免疫グロブリンが重要であ
ると考えられている。

複合タンパク質構造体である免疫グロブリンは、１涌乳
動物の血流中を循環しており授乳ｆ！ｉｖＪ物のミルク
、特に出産後の最初の数日間に産生される初乳中の重要
な成分を構成する。授乳期の子供はこれらの免疫グロブ
リンを経口摂取し、これにより、特に賜疾患起病性細菌
に対する受動免役を獲得する。子供自身の免疫機構が十
分に刺激されて自身の抗体を有効間で産生じ得るまで数
日又は数週間を要するかも知れないので、前記の如き受
動免疫は極めて重要である。このように、母乳がかなり
の最の適当な免疫グロブリンを含有しているため、母乳
栄養のヒト乳児は胃腸管感染に対する受動免疫を獲得す
る。

母乳栄養の代りとしては一般に人乳の代ｍ品として牛乳
が使用されている。牛乳はそのままの形状又は牛乳をベ
ースとする合成ミルク例えば脱脂粉乳の形状で使用され
る。世界の多くの地域では別の哺乳動物例えばヤギから
のミルクが使用されている。

天然牛乳もまた、同様にして仔牛を防御するように本来
殺到された免疫グロブリンを含有している。しかし乍ら
、牛乳中の種々の免疫グロブリンの相対濃度は人乳の場
合と等しくない。人乳に於いては免疫グロブリン（１０
Ａ）が主であり、これは乳児の腸管粘膜を覆い極めて有
効な長Ｉｌ１問防御を与えるが、牛乳に含まれるＩＯＡ
のレベルは低い。牛乳及び一般の反異動物のミルクは免
疫グロブリンＩｑＧ１に富む。この免疫グロブリンＩ　
ＱＧｌは人乳中に受画存在する免疫グロブリンＩｇＧに
極めて類似しているが等しくはない。

ＩＱＧはｌＩＩ管の内股に残留しヒトの胃腸管感染に対
して比較的短期間の防御を与えるだけである。

更に、牛乳中に存在する特異的免疫グロブリンは、ウシ
自身の病原体に対してウシによって有効に産生されるが
、普通はヒトに感染する病原体に対しては有効ではない
。

別の問題は、西欧諸国で通常行なわれる牛乳の加工処理
例えば全乳の場合のパスツール殺菌又は滅菌及び粉乳の
場合の噴霧乾燥に於いて、通常原料乳中に存在する免疫
グロブリンの優れた活性を破壊してしまう程の極端な温
度条件が使用されることである。従って普通の場合、こ
れらの免疫グロブリンによって与えられる天然の防御が
失われる。

活性形の天然ウシ免疫グロブリンを含有する牛乳由来の
濃縮物を添加してヒト用のミルク又はミルク代用物の免
疫予防活性を補充することが提案された。これにより確
かに成る程度の受動免疫が与えられるであろうが、この
濃縮物は所望の免疫グロブリン以外に、天然ミルクの他
の多くの微憬成分を含有するであろう。更に、すでに指
摘した如く、牛乳中に存在する免疫グロブリンはヒト乳
児にとっては基本的に重要な免疫グロブリンではない。

このような状況を改善するために、公知のヒト腸病原体
からＸｌ’ｌｉされたワクチンを用いて乳産生動物特に
畜生を超免疫しこれによりヒト病原体に特異的であり従
ってヒト病原体に対してより有効である抗体を該動物に
産生させる方法が提案された。この方法は英国特許第１
５７３９９５号明細書（Ｓｏｃｉｅｔｅ　ｄｅｓ　　Ｐ
ｒｏｄｕｉｔｓ　Ｎｅ５ｔｌｅ　ＳＡ、発明者Ｈｉｌｐ
ｅｒｔ）に記載されている。Ｈｉｌｐｃｒｔにより使用
されたワクチンは異なる１５種のＥ、ｃｏｌｉ菌株を含
んでいる。これらの菌株は、ヒト胃腸病の発症に関与す
ることが文献中で常識として確認されているという理由
で選択されたものであろう。

成人及びヒト小児の胃腸疾患については広く研究されて
きたが、このような疾患の発症に主として関与する微生
物の菌株に関しては業界の専門家の間でも見解が一致し
ていないことは科学文献を読めば明らかである。関与す
ると思われる細菌株の数が多くしかもこれに関して科学
文献に発表された見解を読むと混乱が生じるため、広い
範囲の腸内微生物に対して免疫を与えるためのワクチン
のベースになり得る主細菌株の狭い選択範囲を確認する
ことは容易でない。経済的見地からは、選択範囲に含ま
れる菌株の数が最小に維持される必要がある。効力の見
地からは、ワクチンができるだけ多数の腸感染性微生物
菌株に対する免疫を与える必要がある。科学文献に収載
されている現在の知識からは前記の如き選択を容易に行
なうことはできない。逆に、公表データから判断すると
、ヒトに広い免疫を与えるには極めて多数の異なる菌株
が含まれる必要があると考えられる。このことはト１ｉ
１ｐｅｒｔの採用した方法と一致する。

本発明の方法では、菌株のごルレンス特性に基いて適当
な菌株が選択される。

本発明によれば、ヒトの胃腸病の発症に関与するｌ：、
ｃｏｌｉ菌に対する受動防御を与えるべく有用な免疫グ
ロブリンを製造するために、染色体媒介付着因子（ピリ
即ち線毛）とプラスミド媒介付着因子（ピリ）とを集合
的に発現する少なくとも２種のＥ、ｃｏ＋＋菌株の抗原
を含むワクチンで宿主哺乳動物を免疫し、前記抗原に対
して特異的な免疫グロブリンをかなりの唐で宿主哺乳動
物に産生けしめ、この免疫グロブリンを機能形で回収す
る方法が提供される。

本発明のワクチンを誘導する細菌株の少な（とも１つに
よって発現される染色体媒介付着因子（ｃｈｒｏｍｏｓ
ｏｍｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｐｉｌｉ）はＴｙｐｅＩピ
リを含む。

本発明のワクチンを誘導する細菌株によって発現される
プラスミド媒介付着因子はＣＦＡＩピリ及び／又はＣＦ
ＡＩ［ピリを含む。

本発明の特に好ましい実ＩＭ態様に於いては、ワクチン
がＴｙｐｅＩピリとＣＦＡＩピリとＣＦＡＩＩピリとに
８８ピリとを集合的に発現する複数種の細菌株の抗原を
含む。

好ましくは使用ワクチンが、理想的には耐熱性（ＳＴ）
及び非耐熱性（しＴ）の双方のタイプのエンテロトキシ
ンを産生ずる少なくとも１ｆ！の細菌株の抗原を含む。

この要件は、前記のピリ発現基準に次ぐ要件である。好
ましくは選択された細菌株の少なくとも１種はエンテロ
トキシンをも産生ずる。

本発明の重要な製品は、ヒトの胃腸病発症に関与し、Ｔ
ｙｐｅ　Ｉ、ＣＦＡＩ及びＣＦＡＩＩのタイプのピリを
集合的に発現する複数種のＥ、ｃｏ＋＋菌株に対して活
性の免疫グロブリンを添合した人工栄養ミルクである。

本発明の別の製品は、前記に記載の如く調製される免疫
グロブリン物質である。このような免疫グロブリン物質
は腸感染細菌に対する受動免疫を与えるためにヒト食品
に添加され得る。この免疫グロブリン物質は、濃縮、沈
澱又はり０マドグラフイー等を用いる従来の方法で免疫
ミルクから回収され得る。又は、免疫ミルクはど好まし
くはないが、宿主動物から誘導された血清から免疫グロ
ブリン物質を回収することも可能である。この場合には
、ミルクを出さない〈即ち雄の）宿主動物を使用するこ
とらできる。

本発明の別の実施態様は、前記の如く回収された免疫グ
ロブリン物質を含有するヒｉ・用食品特にヒト乳児用に
配合された人工栄養ミルクに係り、このようなミルク代
用物は液体状で製造販売されることもできるが、一般に
は、水で復元して用いられる乾燥粉末の形状で供給され
る。

本発明の重要な目的は、 ａ　）Ｔｙｐｅ　　Ｉピリ、 ｂ）ＣＦＡＩピリ及び／又はＣＦＡＩ［ピリ、Ｃ）Ｋ８
８ｔ’ｌＪ及ヒ／又ハ０１５９　Ｅ、　ｃｏｌｉ［′！
１ａＥ２９８５／　７６により発現される抗原型のプラ
スミド媒介ピリ（ｐｌａｓｍｉｄ−ｍｅｄｉａｔｅｄ　
ｐｉｌ＋）、のグループの各々から選択された少なくと
も１つのごルレンス特性を集合的に発現する複数種の旦
ｌＣｏ１１菌株の抗原を、薬剤的に許容し得るキャリア
（担体）又は希釈剤中に含む経口投与用ワクチン及び／
又は非経口投与用ワクチンを提供することである。

本発明の別の重要な実施態様は、ヒトの胃腸病発症に関
与する［：、ｃｏｌｉ菌株に対する受動防御を与え得る
ヒト用経口製品の製法を提供することであり、この方法
では、 ａ　）　Ｔｙｐｅ　Ｉピリを発現する血清型０１８及び
０１２５のＥ、ｃｏｌｉｌ ｂ）ＣＦＡＩピリを発現する血清型０２５及び０７８の
Ｅ、ｃｏｌｉ、 ｃ）ＣＦＡＩｒピリを発現する血清型０６及び０８のＥ
、ｃｏｔｌ。

のグループの各々から選択された少なくと５１つのｌ：
、Ｃ０１ｉ株の抗原を含むワクチンを用い、ウシ科（３
ｏｖｉｄａｅ）から成るグループから選択された乳産生
宿主咄乳動物を前記ワクチンで免疫してかなりのｍの抗
原特異的免疫グロブリンを産生せしめ、宿主哺乳動物か
らミルクを収集し、免疫グロブリンを機能形でミルクか
ら回収し、受動防御を与えるべく十分な量で経口摂取製
品に配合する。

ピリは細菌細胞の表面に存在するタンパク質様構造であ
り生きた［ｌ菌のＷ；Ａ壁付着能力に成る程度関与する
。電子顕微鏡によればピリは細菌表面のトゲ状突起とし
てＩＱ察される。ＣＦＡ　（コロニ化因子抗原、　Ｃｏ
１ｏｎｉｓａｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ　ＡｎｔＬｏｅｎ
）■及びＣＦＡＩ及びに８８のタイプのピリの発現はプ
ラスミドが担う遺伝情報によって指令されると考えられ
ており、このため、この特性は１つの菌株から別の菌株
に伝達可能であると考えられる。

しかし乍ら、知見された限りでは１、所与の旦ｌＣｏ１
１菌株はＣＦＡＩピリ又はＣＦＡＩＩピリ又はに８８ピ
リのいずれか１つを発現するが２つ以上のタイプのピリ
を同時に発現することはない。多くのＥ、ｃｏｌｉ＠株
はこれらのタイプのいずれをも発現しない。この特性は
伝達可能な性質であり、従って、例えばＣＦＡＩピリを
発現することが以前にはｆｌｒ認された筈の所与のＥ、
ｃｏ＋＋菌株からプラスミドが担う該当遺伝情報が後に
失われ、前記の如きピリの発現が停止する可能性がある
。このため、例えば後述の如き抗血清を使用する定期的
テストによって、ワクチン製造に使用される当該菌株が
実際に自身の本質的特性を維持しているか否かを確実に
検査することが重要である。

ＴｙｐｅＩピリの発現は染色体遺伝情報によって指令さ
れると考えられており、この特性は１つの菌株から別の
菌株に伝達可能でない。成る種の旦。

ｃｏｌｉ菌株はＴｙｐｅＩピリのみを発現し、通常はＣ
ＦＡＩ、ＣＦＡＩＩ又はに８８ピリを発現する成る種の
Ｅ、ｃｏｌｉ株は、同時にＴｙｐｅＩピリを発現する（
又は少なくとも発現する能力を有する）。当業界ではＴ
ｙｐｅＩピリは、最初に同定されたとぎ１種以上のＥ、
ｃｏｌｉ血清型に共通であることが知見されたので、時
には“コモンピリ”とも指称される。

これらの４つのタイプのピリ（Ｔｙｐｅ　１．　ＣＦＡ
Ｉ／ｎ及びに８８）はよく知られたＩｎ１Ｍ特性であり
科学文献に十分に記載されている。例えば、ＴｙｐｅＩ
ピリはＣ，Ｃ，Ｂｒ１ｎｔｏｎによりＮａｔｕｒｅ　。

１９５９年、１８３巻、　　７８２−７８６ページ及び
同じ著者によりＰｒｏｃ、　１３ｔｈ　Ｊｏｉｎｔ　　
ＵＳ／ＪａｐａｎＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　　Ｃｈ
ｏｌｅｒａ、　　（１９７８）　Ｎ　Ｉ　ＨＢｅｔｈｅ
ｓｄａ　７８−１５９０　、　３３−７０ページに記載
されている。ＣＦＡＩピリは、Ｑ、　Ｇ、　ＥＶａｎＳ
等によりＩ　ｎｒｅｃｔｔｏｎ　ａｎｄ　　Ｉ　ｍ１ｌ
ｔｌｎｉｔ■、　　１９７５年、１２巻。

６５６−６６７ページに記載されている。ＣＦＡＩ［ピ
リは、Ｄ、　Ｇ、　Ｅｖａｎｓ及びり、　Ｊ、　Ｅｖａ
ｎｓによりＩ　ｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　　Ｉ　ｇ＋
ｍｕｎｉｔｙ　、　　１９７８年、２１巻。

６３８−６４７ページに記載されている。Ｋ８８ピリは
、１　、０　ｒｓｋｏｖ及びＦ　、　Ｏｒｓｋｏｖによ
りＪ、Ｂａｃ−ｔｅｒｉｏｌ、　１９６６年、９１巻、
　　６６−７５ページ及び５ｔｉｒ１等によりＪ　、　
Ｂ　ａｃｔｅｒｉｏｌ、　１９６７年、９３巻、１４０
７４８ページに記載されている。

本文中での゛抗原′”なる用語は、生きた状態の細菌か
ら天然に産生されるいかなる抗原物質をも意味する。こ
のような物質は生きた生物により***される細菌の外部
にも存在し得るが、普通は生物の体内にのみ存在し得る
。ワクチンが生存可能な病原性生物を含んではならない
こと、従って、適当なワクチンを製造するための常法で
は病原体を殺すか又は少なくとも弱毒化して実質的に無
害にするステップが含まれることが理解されよう。

このステップではしばしば、かなりの抗原物質が細菌細
胞どの物理的結合から遊離するであろう。

例えば熱による殺菌によって多量のピリと内毒素とが細
菌細胞から遊離する。所望の場合、前記の如き遊離抗原
物質をワクチンの単独活性成分として使用し得るが、死
菌細胞又は弱毒細菌細胞の分１１１ｔＧよ厳密に必要で
はなく、細胞残骸は概してワクチンの抗原性に有効に貢
献するであろう。ワクチンの組成に関わりなく、ワクチ
ンがピリ物質を含むのが楡めて好ましい。

適当な抗体の産生を促進するために宿主動物を抗原に接
触させるには種々の方法が公知である。

１つの方法では、ヒトの胃腸感染症の発生に関与する１
種以上のＥ、ＣＯＩ＋菌株を宿主動物の胃腸系に感染さ
せる。しかし乍ら、多くのＩＩＩ菌株は種特異的であり
、また全身の健康にも良くないので、このような方法は
余り好ましいとは云えない。

第２の方法では、宿主の免疫系による適当な応答を促進
するために、死菌もしくは失活細菌及び／又は細菌から
遊離した抗原を適当な担体又は希釈剤に入れ宿主細胞に
経口投与し得る。例えば、内毒素は、加熱殺菌の際に当
該細菌から遊離され、例えば宿主動物用食品中に添合さ
れ得る。免疫応答を更に促進するために死菌も飼料に添
合され得る。又はワクチンが火剤、カプセル剤、粉末又
は液体の如ぎ経口薬剤の形状で与えられてもよい。

抗原性物質の水溶液又は水性懸濁液が使用され得る。比
較的多い処方用椿のワクチンを危険無く経口投与しｔｑ
る。

第３の方法では、薬剤的に許容され得る担体又は希釈剤
例えば水の中に死菌もしくは失活細菌及び／又はこれら
の細菌から遊離された抗原を含む注射可能な組成物を非
経口的に投与する。宿主の体内に該組成物が存在すると
きに６適当な免疫応答が促進されて所要の抗体が産生さ
れるであろう。

注射の場合、宿主動物の感受性によって用量を制限する
必要があるかも知れないが、応答はより迅速で効率が良
い。任意の適当な経路例えば静脈内。

筋肉内、皮下又は乳線内注射等を使用し得る。ワクチン
組成物は種々の注射可能ワクチン用標準アジュバント、
例えばゴム、タンパク、無機吸着剤例えば水酸化アルミ
ニウム、油水エマルシヨン例えばフロインドアジュバン
ト（好ましくは不完全形）を含有し得る。これらのアジ
ュバントはワクチン応答の効力を強化し、また注射の効
果を持続させる徐放性を与える。ワクチンは更に、フェ
ノール又μホルマリンの如き防腐剤を含み得る。

注射用ワクチン又は経口ワクチンを使用してミルク産生
哺乳動物に免疫を与え、この初物のミルクから所要の免
疫グロブリンを回収するためには、出産以前に免疫処置
を実行するか又は少なくとも開始するのが好ましい。理
想的には、宿主咄乳動物が初乳形成中に特異的抗体を高
レベル（力価）で産１するようにワクチン投与の時期を
選ぶ。雌ウシの場合の最適免疫処置スケジュールでは、
出り前好ましくは約２〜３週前に少なくとも１回の非経
口投与を与えるステップが含まれるであろう。

宿主動物に対するワクチンの有効な投与方法としては、
該動物をワクチン含有飼料で飼育し、非経口投与を追加
することによって免疫応答を定期的に刺１１５１（ブー
スト）する。

本発明のワクチンの製造に使用される細菌株は、胃腸病
の実際の症例の発生に関与した多くの菌株から選択され
るのが便利で経済的である。このような菌株の多数のサ
ンプルが、世界中の病院、研究機関及び公衆衛生研究所
に保存されており、善意の（ｂｏｎａ　ｒｉｄｅ　）当
業者はこのようなサンプルを容易に入手し得る。従って
、ワクチン製造用の適当な細菌株の人手は少しも難しく
ない。しかし乍ら、本発明では前記の如き天然発生病原
微生物を必ずしも使用しなくてもよい。最近はＩｌＩ菌
発酵及び遺伝子操作が発達したため、本発明で要求され
る必須基準を有する“°合成″微生物の製造が可能にな
った。プラスミドが担うピリの発現基準に関する限り、
このような基準を充足させるのは特に容易であろう。し
かし乍らワクチンの効力の見地からは、所要基準を有す
る天然発生１１１菌株の使用が好ましい。何故ならこの
場合、ワクチンは、細菌の起病性に関わりを持つ他の特
性特にエンテロトキシンに対しても特異性を有する抗体
を宿主に産生さぜ易いからである。このような付加的Ｉ
Ｆｉ性は゛合成″微生物に於いては欠如しているであろ
う。

従って本発明の好ましい特徴は、少なくとし１種好まし
くは２種以上のワクチン製造用細菌株が、と１−の胃腸
病の発生に関与する天然由来の菌株から成ることである
。

本発明の好ましい実施態様は、薬剤的に♂１容され１ｑ
る担体又は希釈剤中にＴｙｐｅＩピリ発現性の血清型０
１８及び／又は０１２５のＥ、ｃｏ＋ｒ菌株少なくとも
１種の抗原を含む注０４ワクヂン又は経口ワクチンにあ
る。

好ましくはワクチンは更に ａ）ＣＦＡＩピリ発現性の血清型０２５及び／又は　０
７８のＥ、ｃｏｌｉ、 ｂ）ＣＦＡＩＩピリ発現性の血清型０６及び／又は０８
のｌ：、ｃｏｌｉ。

のグループの１つ（より好ましくは双方）から選択され
た少なくとも１ｇ！の細菌株の抗原を含む。

本発明の特に好ましい実施態様は、薬剤的に許容され得
る担体又は希釈剤中に、ＴｙｐｅＩピリを発現する０１
８Ｅ　、　ｃｏｌｉ、　ＣＦ　Ａ　Ｉピリを発現する０
７８Ｅ　、　ｃｏｌｉ、　ＣＦ　Ａ　ＩＩビピリ発現す
る０６Ｅ。

ｃｏｌｉの各々の抗原を含む注射用ワクチン又は経口ワ
クチンにある。

好ましくはワクチンが、Ｋ８８付着囚子を発現する０１
４９Ｅ　、　ｃｏｌｉの抗原を含む。この抗原を含むこ
とにより付加される利点は、０１４９Ｅ　、　ｃｏｌｉ
が一般にＬＴ及びＳＴの双方の毒素を強力に産生ずるこ
とが知られており従って該抗原を含むワクチンが毒素産
生細菌株に特に有効な抗体を誘発し得ることである。

更に好ましくはワクチンがヒト腸付着性０１５９旦。

ｃｏｌｉ又は抗原的に等しいピリタイプを発現する別の
血清型のＥ、ｃｏｌｉの抗原を含む。この血清型は、細
菌に於ける航記の如き表面構造は明らかであるが、前記
のピリタイプのいずれとも抗原的に対応させることがで
きない腸付春状態を示す。この未同定のピリタイプは明
らかにプラスミド媒介性であり、従って恐らく伝達可能
である。本発明でのωＩ究に使用した特定菌株０１５９
Ｅ　、　ｃｏｌｉは中央公衆ｍ生研究所（Ｃｅｎｔｒａ
ｌ　　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌ　ａｂｏ−ｒａ
ｔｏｒｙ）　、ロンドン、から入手されたものであり、
Ｍ、　Ｍ、　Ｍｃ　Ｃｏｎｎｅｌｌ等によりＪ　、　Ｂ
　ａｃｔｅｒｌｏｌ。

１９７９年、１３９巻、　　３４Ｇ−３５５ページに記
載されている。Ｍｃ−Ｃｏｎｎｅｌｌによれば菌株はカ
ナダに於いて単離された。Ｍ　、　Ｊ　、　Ｑｕｒｗｉ
ｔｈ等のＡ　ｒｃｈ、　　Ｉｎ−ｔｅｒｎ、　　Ｍ　ｅ
ｄ、　、　　１９７７年、１３７巻、　　１４６１−１
４６４ページ参照。この特定株はＭｃ　Ｃｏｎｎｅｌｌ
によってＮａ口ｏｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ
　　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ（ＮＣＴＣ）、中央公
衆衛生研究所、１７５コリンダール・アブニュー、ロン
ドン　ＮＷ９　５ＨＴ。

英国、に寄託され、受託番号Ｅ　２９８５／　７６と指
定されている。

いかなる哺乳動物も本発明の目的を達成するための宿主
動物となり得るが、最も好ましいのはウシ科（３ｏｖｉ
ｄａｅ）のメンバー特に雌ウシ（ｃｏｗ）であり、次に
好ましいのは、従来からミルクがヒト食品として使用さ
れている他の家畜類、例えばヤギである。

宿主咄乳初物から得られた免疫ミルクは、ミルク中の免
疫グロブリンが利用されるように、ヒｌ−小児又は成人
に直接与えられ得る。ミルクは天然状態でもよく、又は
消費収面に処理されてもよい。

但し、このような処理は、免疫グロブリンの本質的機能
を破壊しないものでなりればならない。使用可能な従来
のミルク処理方法の例として調節パスツール殺菌及び濃
縮（蒸発）がある。ミルクは全乳、脱脂乳又は乳漿（ホ
エー）のいずれでもよい。宿主咄乳初物からの血清が免
疫グロブリンのソースとして回収されるならば、この免
疫血清もまたヒト小児又は成人に直接与えられ得る。所
望ならば免疫ミルク又は免疫血清は別の物質、特に別の
食物成分と混合して摂取され得る。実際、免疫グロブリ
ンの本質的機能が維持されている限り、従来から成分中
にミルクを含むいかなるヒトの食品にも免疫ミルク又は
免疫血清を添合し得る。

しかし乍ら通常は、免疫グロブリンが免疫ミルク又は免
疫血清から濃縮形で回収され次にこのような回収免疫グ
ロブリンが受動免疫を与えるために使用されるであろう
。当業界で現行の種々の方法を利用して免疫グロブリン
を回収し１！７る。このような方法の１つでは、ミルク
成分のバルクから免疫グロブリンに富む濃縮物を分離す
る。このようなプロセスの１例は英国特許第１５７３９
９５号明細書に記載されている。別の方法ではクロマト
グラフィーの方法でミルク又は血清から免疫グロブリン
を分離する。クロマトグラフィーによって免疫グロブリ
ンに富む両分が得られる。該両分中には免疫グロブリン
が比較的に純粋な（又は時には完全に純粋な）形で存在
する。免疫グ［１プリンが不溶化された抗体特に甲−特
異的抗体（例えば所謂°“モノクローナル′°抗体）に
結合されて回収されるアノイニティークロマトグラフィ
ーが好ましい。

このようなプロセスは、欧州特許出願第００５９５９８
号に記載されている。回収後の免疫グロブリン物質は、
使用まで木質的機能を維持するように慎重に保存される
必要がある。凍結乾燥は、回収した免疫グロブリン物質
を貯蔵安定性にするための有効な方法の一例である。

回収免疫グロブリンはヒト食品に添合され得る。

機能性免疫グロブリンを変性させる可能性のある後処理
（例えば加熱調理）を要しないいかなる食品も担体とし
て使用され得る。本発明の特定実施態様は、人工゛ミル
クパ製品、待にヒト小児用の前記の如き製品にある。一
般にこのような製品は、乾燥粉末の形状で市販されてお
り、すぐに使えるミルク状液体にするために水で復元す
る必要がある。免疫グロブリン物質を添合すること以外
、食品の組成を従来の組成から変える必要は全く無い。

例えば、前記の如き組成物は、固体状ミルク例えば粉末
脱脂乳及び／又は粉末乳漿とノンミルク物質との双方を
ベースとしてもよく、又は完全にノンミルク物質から処
方されてもよい。後者のタイプの配合の１例が実施例７
に示されている。食品に添合される機能性免疫グロブリ
ン物質のＭは１界的ではなく、消化管の防御効果を生じ
せしめるに十分なｍであればよい。食品中での最小有効
含有量は、免疫グロブリン物質の機能性と食品の摂取予
定量とに左右されるであろう。当業者は、最小有効含有
量を容易に決定し得る。免疫グロブリン物質自体はタン
パク性であり、これを摂取するヒ１−に対して完全に無
害であるから、食品中に含まれるレベルの上限について
は、経済的制約以外の制限は全く存在しない。

人工ミルク製品の変形例として、免疫グロブリンを例え
ば清涼飲料（ソフトドリンク）製品の如き粉末飲料ベー
スに添合し１りる。前記の如き製品は水で復元されて、
例えば果実風味の飲料を提供する。典型的な配合として
は、オレンジ又はレモンの如き香味料に麦芽デキストリ
ンと糖とを加えたものがベースとなる。

免疫グロブリンは更に、例えば外国旅行中に罹る゛旅行
者下痢″症状に受動免疫を与えるために使用され得る。

実際このような場合、本発明の免疫グロブリン含有製品
は、前記の如き感染の影響を緩和するという治療的に単
質な利点を有する。

免疫グロブリン含有の経口製品例えば火剤又はカプセル
剤の形状の製品を指示通りに服用すると、旅行者の消化
管に防御レベルの免疫グロブリンが維持されるであろう
。従来の任意の医薬カプセル化方法を使用し、例えば糖
衣火剤又はゼラチンカプセルを形成し得る。

本発明の細菌性抗原ワクチンはまた、ヒトに直接投与さ
れヒトレシピエン１−の自然免疫系を刺激してヒトの能
動免疫を促進すべく使用され（ｑる。

このような１合、ワクチンは所与の目的に応じて種々の
方式で適用され得る。例えば、風土性又は流行性胃腸病
に対する処置としては、ワクチンは通常経口的及び／又
は非経口的に成人及び小児に投与され得る。旅行習が憤
れない土地で罹り易い胃腸病に対する予防としては、ワ
クチンは旅行以前の適当な時期の一回注射もしくは複数
回注射として投与されるか及び／又は経口接種され得る
。

ヒト小児の新生児感染症発生を減少さけるためには、ワ
クチンは妊娠期間の適当な時期に妊婦に一回以上投与さ
れ得る。これにより出産婦は増加量の抗体を産生じ、初
乳が非常に高レベルの抗体を含むであろう。本発明のこ
の態様では、ヒトに於いて抗体は胎盤を通して胎児に伝
達されるので、生まれる前の子供も増加レベルの抗体を
受容しているであろう。

本発明のワクチンのベースとして使用される適当な腸疾
患発現性細菌の菌株を同定するために以下のプロセスが
使用され得る。これらのプロセスは例として与えられた
だけであり、このようなプロセスの細部は個々の研究所
の事情に応じ装置及び他の設備のアベイラピリティに合
ｔｔｔ容易に変更され得ることは当業者に明らかであろ
う。

ピリの発現 最初に細菌の標本を電子顕微鏡で検査して所与の細菌株
に於けるピリの有無を判定する。約２０、０００倍の倍
率で、細菌により発現されたいかなるピリもはっきりと
見ることができ、細菌は特有の゛トゲ状″又は“毛髪状
′°の外観を示ずであろう。対照的にこのような倍率で
細菌が滑らかな外面を有するときは標本がピリを全く発
現していない証拠である。

ピリの存在の確認後に、所要のピリタイプのいずれが発
現しているか否かを判定する必要がある。

既知のピリタイプを識別するために精度の低い種々の方
法、例えばマンノース感受性テスｉ・及び他の赤血球凝
集反応プロセスが文献に記載されている。しかし乍ら、
これらのプロセスは本発明で使用し得るべく十分な精度
を有していない。例えばこれらのプロセスに於いては、
未だに同定されていない付着力を有する自然発生細菌株
が存在すると正確な結果が得られない場合がある。好ま
しい方法は、抗血清によるピリタイプの陽性同定（ｐｏ
ｓｉｔｉｖｅ　　１ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）であ
る。

実際に殆んどの研究者は、以後の菌株の同定をより容易
に行なうことができるように、ピリタイプに抗血清を接
触させるのが好ましいと考えるであろう。ピリタイプの
確定的サンプルが得られさえすれば適当な抗血清を容易
に調製し得る。以下の実施例は必要な基本的プロセスを
示す。

実施例１ 外部ｍｉコレクション又は別の標準ソースから得た既知
のピリを有する［：、ｃｏｌｉ菌株を用いて間装ピリを
以下の如く製造した。

ルーフラスコを用いＯＦ△寒天上で３７℃で４８時間細
菌を増殖させた。ＣＦＡ寒・天は、１％のカザミノ酸（
［）　Ｈｃｏ）と、０．１５％の酵母エキス（Ｄｉｒｃ
ｏ）ト、０．００５％ノｌｉ！！酸、マグネシウムと、
０、０００５％の塩化マンガンと、２％の寒天とから成
り、１）ｌ−１７，４である。この培地はＥ　ｖａｎｓ
等（ｌ　ｎｆａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　　ｌ　ｍｍｕｎｉ
ｔｙ　、　　１９７７年、２３巻。

３３０ページ）に記載されている。細菌を採取し、滅菌
リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。ＣＦＡ
１．ＣＦＡＩ［、に８８ピリ及び前出の０１５９Ｅ、　
ｃｏｌｉ菌株Ｅ　２９８５／　７Ｇで発現されるピリの
場合、６０℃で４５分子Ｊ！！維持してピリを細菌から
熱剥離した。ＴＶＩ）ｅＩビピリ場合、ホモゲナイザー
を用いて細菌懸濁液を更に１分間粉砕した。細菌と細胞
残骸との全部を１０００Ｘ　ＩＪで遠心し、上清液中に
ピリを残した。酢酸を添加して上清液をｐ＋−＋４．５
に調整し、４℃で数日間静置してピリを沈澱さ「た。得
られた沈澱物を３５．ＯＯＯｘｇで遠心して回収しＰＢ
Ｓに再度懸濁させた。電子顕微鏡検査により多数のピリ
の存在が判明した。

ピリの精製リンプルに対する抗血清をウサギによって調
製した。例えばＣＦＡＩピリの場合、７０インド完全ア
ジユバントを用い、各ウサギの多数の部位に合計２ｍｇ
の精製ピリを皮下注射しＩζ。

４週間後にブースター注射として　１ｍｇのピリをフロ
イント不完全アジュバントを用いて各ウナギの多数部位
に再度注射した。更に２週間後に部面を実施した。出発
物質たる精製ピリサンプルを与えた３種の細菌株のピリ
を持たない変異株のルーフラスコカルチャーを用いて単
一特異的抗ピリ血清を得るための吸収を実施した。この
プロセスでは、等容の遠心し洗浄した細菌とウサギから
１９だ血清とを一緒に室温で１５分間インキュベートし
次に撹拌して上溝を収集した。

得られた単一特異的抗ピリ血清を使用し、標準細菌スラ
イド凝集反応テストによって別の細菌株に於けるピリタ
イプを同定することが可能である。

エンテロトキシン産生 被検細菌から１ンテロトキシンの無細胞調製物を抽出し
次に哺乳マウスアッセイ及び中国産ハムスター卵巣細胞
アッセイを用いて毒素活性を検査することによって、多
量の毒素を産生ずる腸疾患発現性ｍｌ菌株を同定し得る
。

ａ）エンテロトキシンのｍ！１１ ＳＴｆｆｉ累は通常、培養上清から１９られ、ＬＴ毒素
は培養上清又は全細胞溶解物から得られる。Ｌ丁毒素及
びＳＴ毒素の精製に使用され得る周知のプロセスも存在
する。しかし乍ら、哺乳マウスアッセイ及び中国産ハム
スター卵巣細胞アッヒイによる［、ｃｏｌｉ菌株のＵＡ
Ｒ性を宣伝するには、エンテロトキシンの分離及び精製
は不要であり、以下の実施例に示す如く脳−心インフユ
ージョン（Ｂｒａｉｎ　　Ｈｅａｒｔ　　Ｉｎｆｕｓｉ
ｏｎ　）培地（ＯｘｏｉｄＣＭ　２２５）又は合成酵母
（５ｙｎｙｅａｓｔ　）培地の如き培地中で増殖した菌
株の１８時間培養上清が双方のテストに使用され得る。

実施例２ 合成酵母は、２０ｇのカザミノ酸と６．０ｇの酵母エキ
スと２，５ｇの塩化ナトリウムと８．７ＩＱのリン酸水
素二カリウム（０，０５Ｍ　）と　１ＯＩｄの微ｍ塩含
有溶液とをほぼ１１の蒸溜水に溶解し、０．１Ｎの水酸
化ナトリウムでｐｌ−１ｓ、ｓに調整し、最終音Ｉｔ　
１１にした半合成培地である。微邑塩混合物は５０％の
硫酸マグネシウムと０．５％の塩化マンガンと０．５％
の塩化第二鉄とを０．００１　Ｎの硫酸に溶解して成る
。

適当量の媒体をエルレンマイヤーフラスコに分取し、１
２１℃で１５分間殺菌した。フラスコにスターターブロ
スカルチャーを接種し、３７℃の撮盪水浴中で細菌を１
８１ｔ＠　閂好気性増殖した。次にカルチャーを遠心し
て細菌を除去し、エンテロトキシンを含む上清を傾ηし
て取出し、ミリポアフィルタ−によって殺菌した。

ｂ）耐熱性（ＳＴ）毒素 細菌株による５Ｔｆｆｉ素の産生は以下のプロセスで確
認され得る。この方法はＤ　ｅａｎ等（Ｊ。

ｌ　ｎｆｅｃｔ、　　［）　ｉｓ、　、　　１９７２年
、１２５巻、４０７ページ）の方法に基（。

実施例３ 生１！２３日目のマウスを使用直前に母親から離し、無
作為に　１群４匹ずつに分けた。幼マウスのミルクで満
たされた胃に０．１ｄの被検物質を体壁がら直接注射し
た。被検サンプルはＰＢＳで適当に希釈して用いた。接
種物０．６−毎に１％ボンタミンプルーのＰＢＳ溶液を
１滴ずつ添加し、剖検で消化管に色素を含まないマウス
の結果は無視した。

注射後、マウスを４時間維持し、次にクロロホルムで殺
した。各マウスの腹部を切開し、腸の拡張を検査し腸を
取出した。

１群４匹のマウスの腸を計量し、残りの全体用に対する
腸の総重量の比を計算した。比が０．０９より大きいも
のを陽性、０．０１より小さいものを陰性、０．０７と
０．０９との間を疑陽性とした。

Ｃ）非耐熱性（ＬＴ）毒素 ＬＴ毒素の産生は以下のプロセスで測定され得る。これ
はＧ　ｕｅｒｒａｎｔ等により記載されたプロセス（ｌ
　ｎｒｅｃＮｏｎ　ａｎｄ　　ｌ　ｎｕｎｕｎｉｔｙ　
、　　１９７７年、１０ｙｊ。

３２０ページ）の応用である。このプロセスは、中国産
ハムスターの卵巣クローンセルラインＣＨＯＫ１が、環
状アデノシンモノリン酸（ＡＭＰ）による処理後に独特
の形態学的及び生化学的変化によって応答するという、
Ｈｓｉｅ等による報告（Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔ、　Ａｃ
ａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ、　１９７１年。

６８巻、３５８ページ）に基いたものである。

実施例４ １０％の仔ウシ血清と　１％のグルタミンとを補給した
ＨａｍｓＦ１２培地を用い、５％の二酸化炭素を加えた
空気中で３７℃にてＣ）１０−Ｋｌのストックカルチャ
ーを増殖させた。カルシウム及びマグネシウムを含まな
いＥａｒｌｅｓ平衡塩溶液（Ｂ　ａｌａｎｃｅｄ　Ｓ　
ａｆｔ　Ｓ　ｏｌｕｔｉｏｎ、　　Ｂ　Ｓ　Ｓ　）で単
層を洗浄後、Ｅ　ａｒｌｅｓ　Ｂ　Ｓ　Ｓ溶液中の１０
（容量／８吊）％！・リブシン溶液を用いてセルライン
を３１℃で１５分間トリプシン消化した。トリプシン消
化した細胞を増殖培地に再懸濁させた。ＣＨＯ−Ｋｌ細
胞とＨａｍｓＦ１２培地とＥ　ａｒｌｅｓ　Ｂ　Ｓ　Ｓ
とはＦ　ｌｏｗ　Ｌ　ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手
し得る。検定のために１％の仔ウシ血清を加えたＦ１２
培地０．０２ｄ当り約ｉ、ｏｏｏ個の細胞を含む細胞懸
濁液を９６ウエルマイクロカルチヤープレートの各ウェ
ルに添加した。エンテロトキシン溶液（１０／Ｉｉ／ウ
エル）をブレーティング直後に添加した。５％の二酸化
炭素を加えた空気中３７℃でプレートを２０時間インキ
ュベートし、次にメタノールで２分間固定し、蒸溜水で
１：１に希釈したギムザで染色した。ＬＴエンテロトキ
シンの作用は、４０％以上の細胞で上皮状細胞から線雑
芽状細胞への形質転換を生起する。

従って細長い細胞の計数によって菌株が産生じた毒素の
推定値が得られる。

ワクチン製造 次の実施例は本発明で使用するだめのワクチンの製造を
示す。

実施例５ 胃腸病の発生に関与する相当数のＥ、Ｃ０Ｉｉ菌株を多
数のソースから入手した。善意の当業者はこのような菌
株を、病院、公衆衛生研究用及び大学から容易に入手し
得る。種々の菌株を前記のテストプロセスで処理し、こ
れらの菌株が特定のピリ型を発現するか否か及び優れた
毒素産生能を有するか否かを測定した。

ワクチンのベースとして以下の菌株が選択された。

表　　１ ５種の菌株全部を標準ブロスで培養し、次に６０℃で４
５分間の熱剥離処理を実施して投与されたワクチンに対
する応答が最大になるようにピリと別の有効な抗原性因
子とを遊離した。０．５％のホルマリンを添加してワク
チンを保存した。

妊娠ｌｌｌ１．ウシに対してワクチンを出産予定日直前
の６週間連続的に飼料の一部として投与した。日用経口
投与量としては、以下の組成のプレミクス５０Ｑ−を標
準濃厚飼料に混ぜて用いる。ブレミクスは、 ５７重量％の小麦粉（９％の水分）と ４７１吊％の粉末チーズホエーと ４重間％のクエン酸と ２重階％の遠心細菌スラリーと から成り、ブレミクス１ｇ１１当り各菌株を２０１（１
ユニット含む。

同じ時期に各雌ウシに対して臀部に筋肉内注射を３回（
出産６Ｎ前、４週前及び２週前）行なって、合計で２０
０白球凝集阻止単位（＠　ａｅＩｌａｇｇｌｕ−Ｎｎａ
ｔｉｏｎ　　Ｉ　ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｕｎｉｔｓ　）
の細菌性物質を含む注射用ワクチンを投与した。

授乳開始後４日間の各雌ウシのミルクの抗体力価を検定
し、各注射菌株に対する明らかなＯ抗原応答を［［ＪＬ
、た。この応答は、牛乳中の天然抗体の特異性がワクチ
ンで変性されたことを示す。結果を以下の表２に示す。

表　　２ 更に、免疫ミルクは静菌性であり、ｉｎ　ＶｉｔｒＯで
細菌付着を阻止することが判明した。

実施例６ 抗体に富む濃縮物を以下の如く調製した。

実施例５の如く得られた免疫牛乳にＪ！ｉ酸を加えてｐ
Ｈ３，５に調整し、カゼインを沈澱させた。遠心後、得
られた上清液に水酸化す１ヘリウムを加えて中性ｐ１１
に調整し、４０％の水性ｒａ　＊アンモニウムを加えて
免疫グロブリン画分を沈澱させた。沈澱物を遠心し、Ｐ
ＢＳに再懸濁させ、完全透析（ｅｘｈａｕｓｔｉｖｅ　
ｄｉａｌｙｓｉｓ　）でＩｔ！ＩＩアンモニウムを除去
し、凍結乾燥した。

実施例７ ヒト腸病原体に対して受動免疫を与え得る食用製品を以
下の如く調製しノだ。

実施例６で得られた抗体濃縮物を、以下の組成を有する
市販のと１−小児用粉末人工栄養ミルクに添加した。

成　　　分 コーンシロップ固形分 ショ糖 大豆タンパク甲離物 コーン油 ヤシ油 三基基リン酸カルシウム 重量部 １７．５ １３．９ １３．９ クエン酸カリウム　　　　　　　　　　０．７塩化カリ
ウム　　　　　　　　　　　０．６塩化マグネシウム　
　　　　　　　　０．３アスコルビン酸　　　　　　　
　　　　０１微吊元素、ビタミン等　　　　　　　０．
１抗体濃縮物は、（飲める形に水で復元、されたとき）
人工栄養ミルクに於いて２５６血清型のＯ抗原力価が１
になるべく十分なレベルで配合された。

多くのヒト病原性［：、ｃｏｌｉはマウスの腸内でコロ
ニー化し、増殖し得るのでヒト小児防御モデルとしてマ
ウスを使用することが可能である。０１８血清型Ｅ、ｃ
ｏｌｉはマウスの腸細胞（ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅ）に極
めて強力に付着し、自然に消滅することは殆んど無いと
考えられるので、テスト用に選択した。

マウスで感染を生じさせ、次にこれを除去するためにウ
シ血清抗体を投与した。抗体の経口投与には、血清がそ
のまま使用された。

材料及び方法 ウシ抗血清 仔ウシを使用し、実施例５で選択した１エ」止菌株の各
々に対して別々に超免疫血清を産生せしめた。生後約８
週間の仔ウシに週１回の割合で６週間に厘り６回の筋肉
内注射を行なって毎回０．１ｄの死菌を投与した（投与
量的２００１−１１　Ｕ　）。２週間後に頚静脈穿刺に
よって血液を採取した。血清を分離し一２０℃で保存し
た。

マウス 実験を通じて生後６乃至８週間の無菌３ａｌｂ−Ｃマウ
スを使用した。

手　　順 マウスの各群に、各菌株を１０８／ＩＩｌ含む一晩培養
した栄養培地０．　Ｌａｄを経口的に接種し、密ｍケー
ジ中で単一汚染状態で１０日間維持し、腸内に細菌を定
着させた。

糞便υンプルを採取し、維持期間中単一汚染状態を確認
するために生菌数を計数した。マウスを密閉ケージに７
８目まで維持し、７８目にサンプルを取り出してケージ
を開放して維持した。８８目に抗体処理を開始した。

対照群−マウスにウシ抗体を与えなかった。

テスト群−各マウスにＯ，１ｒｒＩｆｌのウシ抗血清を
１日３回与えた。

感染の進行をモニターするために別の糞便サンプルを採
取し、生菌数を８１ａした。

適用量 ウシ抗血清は１０００１−１１　Ｕの血液凝集力価を有
していた。従って、０．１ａｔｅの経口投与を１日３回
行なったマウスの各群は３００ＨＩＬＩ／日を摂取した
。

結　　果 表３によれば、ウシ抗血清が１日３回投与されたマウス
の各群では５日以内に感染が除去された。

対照群は実験の間、終始高レベルの感染を維持していた
。

表　　３ いて血清が有し１９るいかなる抗毒素活性ら無意味であ
る。（血液凝集反応アッセイ及びスライド凝集反応テス
トの各々によって）血清が抗−Ｏ活性及び抗ピリ活性を
有することが判明した。全細菌のスラリーに対する抗血
清が産生されるので、種々の他の細菌成分に対する抗体
も存在すると考えることができる。除去現象は恐らく、
これらの効果の組合せによって生じたものであろう。

ウシ抗血清はｉｎ　ＶｉｔｒＯでマウスｓｕｎ胞に対す
る付着を阻止することが判明した。このことは、感染を
除去するとぎの重要なファクターであると考えられる。

成熟マウスは２種の毒素ＳＴ及びＬＴに感受性でない。

従って、マウス感染モデルに於Ｅ、ｃｏｌｉのヒト病原
性血清型の１秒０１４９はブタに於いても病原性である
。この血清型は実施例５のワクチンに含まれる血清型の
１つであり、ブタはこのワクチンに応答して産生される
ウシ抗体産生物を測定するための有用な動物モデルとな
り得る。以下の実験は、ウシ抗体で経口的に免疫してブ
タ新生仔を０１４９の感染から防御するためのテストで
ある。

状ウシを使用して０１４９に対する超免疫血清を産生さ
せた。生後約８週間の仔ウシに対して週１回の割合で６
週聞続けて６回の筋肉内注射を行なっＴ　０．１ｄ（７
）死菌（投与ｆｆ１＝約２００ＨＩ　Ｕ　）を与えた。

２週間後に頚静脈穿刺によって血液を採取した。血清を
分離し一２０℃で保存した。

血液凝集反応アッセイによれば血清は１０００の抗０１
４９力価を示していた。仔ブタ　１匹当りの投与量は５
−の血清即ら５０００）−１、Ａ　、ユニットであった
。

手　　順 雌ブタから血清及び初乳のサンプルを採取し、血液凝集
アッセイを実施して抗０１４９活性を測定した。両ザン
プルの抗０１４９力価は１６ＨＩ　Ｌｌであった。

この値は十分に低いのでこのサンプルを仔ブタに与えて
も仔ブタの血清の抗体力価は実験できない程高いレベル
にはならない。仔ブタを雌ブタと共に６時間放置した。

、８匹の仔ブタを選び４匹ずつの２群に分け、１群を対
照とし、残りの１群に抗０１４９血清を与えた。後者の
群には授乳期間中２時間旬に血清を与えた。

次に全部の仔ブタを雌ブタから離し、各々に１０の０１
４９Ｅ　、　ｃｏｌｉを経口感染した。１群の血清投与
を更に２日間２時間毎に継続した。次の３日間は投与の
間隔を次第に延ばし、以後投与を完全に中止した。糞便
スワブを毎日採取し、血液寒天上にプレートアウトした
。仔ブタの体重を毎日測定した。

結　　束 ウシ抗０１４９血清を与えた群は実験の開始から即ら離
乳のショックと新しい飼料への変化を経験しだ第１日日
でさえも体重増加を示した。しかし乍ら、対照群は２日
目印ら離乳翌日に体重が減少し、３日目には全部が死亡
した。スワブの検査によれば、死んだ仔ブタ全部の股に
多数の０１４９がコロニー形成していることが判明した
。同じ時期に投与１！丁から採取されたス１ノブに於い
ては０１４９は殆んど検出されなかった。仔ブタの死体
の１つを死後解剖すると、腸がＩｔ１１ｉ服して流体が
充満しており、成る程度の出血が見られた。これは胃腸
炎の典型的症状である。

抗体投与群では体重が増え続け、全てが正常で健康な様
子を示しでいた。スワブの検査によれば、感染の４日後
に感染は完全に消滅していた。従って、体重測定とスワ
ブ採取とを中止した。ブタを１ｆｉ週視診したが、ブタ
は健康で十分に発育していた。

表　　４ ５　　２．２０　　２．４５　２．００１．１０ 記号※は死亡を示す。

表　　５ この実験によれば、ウシ抗体はブタ新生仔に十分な保護
を与える。血清は抗毒素活性を右し得る。

これはブタの生存の説明になり得るが感染の消滅は説明
できない。抗付着活性は細菌の凝集能力を阻止するので
腸内のコロニー形成を阻止するであろう。従来の研究に
よれば、０１４９に対して産生されたウシ抗血清は、（
スライド凝集反応及び血液内に死亡した。これは正常ウ
シ血清が仔ブタに於ける防御作用を全くしたないことを
明らかに示すものである。

凝集反応アッセイの各々によれば）ｌＡＫ８８及び抗＼

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）薬剤的に許容され得る担体又は希釈剤と共に、 ａ）Ｔｙｐｅ I ピリ、 ｂ）ＣＦＡ I ピリ及び／又はＣＦＡIIピリ、並びに ｃ）Ｋ８８ピリ及び／又は０１５９大腸菌株Ｅ２９８５
   ／７６により発現される抗原型のプラスミド媒介ピリ を集合的に発現する複数種の大腸菌菌株の抗原を含む経
   口及び／又は非経口投与用ワクチン。
2. （２）薬剤的に許容され得る担体又は希釈剤と共に、 ａ）Ｔｖｐｅ I ピリを発現する血清型０１８及び０１
   ２５の大腸菌、 ｂ）ＣＦＡ I ピリを発現する血清型０２５及び０７８
   の大腸菌、並びに ｃ）ＣＦＡIIピリを発現する血清型０６及び０８の大腸
   菌、 の各グループから選択された少なくとも１種の大腸菌菌
   株の抗原を含む経口及び／又は非経口投与用ワクチン。
3. （３）更に、Ｋ８８ピリを発現する血清型０１４９の大
   腸菌と、０１５９大腸菌株Ｅ２９８５／７６により発現
   される抗原型のプラスミド媒介ピリを発現する大腸菌と
   から成るグループから選択された少なくとも１種の大腸
   菌菌株の抗原を含むことを特徴とする特許請求の範囲第
   ２項に記載のワクチン。
4. （４）ヒト胃腸病発症に関与する天然由来の少なくとも
   一つの菌株から製造することを特徴とする特許請求の範
   囲第１項〜第３項のいずれかに記載のワクチン。