JPH0213394A - 非ａ非ｂ型肝炎関連抗原、それに対する特異抗体、およびそれを用いた非ａ非ｂ型肝炎関連抗原の免疫学的検出法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的
に関連する抗原、該抗原に特異的に結合することのでき
るモノクローナル抗体、および該抗体を用いた該抗原の
検出法に関する。

（従来の技術および発明が解決しようとする課題）急性
ウィルス性肝炎の診断は、充分明確になった一連の身体
的所見（たとえば黄だん、肝臓の圧痛など）を患者が臨
床的に示したときに行なわれる普通の生化学実験室試験
の結果に基づいて行なわれる。血清学的には急性ウィル
ス性肝炎は、アラニンアミノトランスフェラーゼとアス
パラギン酸アミノトランスフェラーゼレベルの顕著な上
昇を伴うが、アルカリホスファターゼおよび乳酸脱水素
酵素レベルの上昇は最小限に止どまる。急性ウィルス性
肝炎がＡ型、Ｂ型またはデルタ（Ｄ）型のウィルス性発
症因子の感染の結果によるものであるのかどうかを決定
するために、さらに別の特異的な血清学的イムノアッセ
イがしばしば行なわれている。もし、これらの試験およ
びエプスタイン−バーウィルスおよびサイトメガロウィ
ルスのための別の試験が陰性であると、上記のものでは
なく非Ａ非Ｂ型肝炎であると診断される。すなわち、ヘ
リングス（Ｈｅｌｌｉｎｇｓ、　Ｖ、　Ａ、）のＶｏｘ
　Ｓａｎｇｓ５１：（補遺１）６３〜６６（１９８６）
にも記載されているように、非Ａ非Ｂ型肝炎は、血液お
よび血液製剤由来のくすなわち非経口的に伝播した）非
Ａ非Ｂ型肝炎の病因に対する特異的な抗体が単離された
り、あるいはそれを実施するような確固とした証拠がな
いことが特徴である。

免疫学的に特徴付けられた各肝炎誘発性ウィルスＣＡ型
肝炎ウィルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）
およびＤ型肝炎ウィルス（ＨＤ　Ｖ）］は別々のウィル
スの科に属し、特有のウィルス構成、タンパク構造およ
び複製様式を示す。知られた肝炎ウィルスの１種とのゲ
ノムの類似性に基づいた非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスを同定
しよとする試みは失敗に終わり、このことにより非Ａ非
Ｂ型肝炎ウィルスもまた特有の構成と構造を有すること
が示唆された［フォウラー（Ｆ　ｏｗｌｅｒ）らのＪ、
Ｍｅｄ、Ｖｉｒｏｌ、、１２：２０５〜２１３（１９８
３）およびワイナー（Ｗｅｔｎｅｒ）らのＪ　、Ｍｅｄ
、　Ｖｉｒｏｌ、、　２１　：２３９〜２４７（１９８
７）参照］。

非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的な抗体調製物の開発および特徴
付けにおける進歩は、非Ａ非Ｂ型肝炎に関連する抗原を
正確に同定することが困難であるということにより太き
（阻害されている。当初、非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ
型肝炎ウィルスおよびその関連抗原の「同定」が数多く
存在したが、それらはすべて誤りであることがわかった
。

たとえばウオンズ（Ｗａｎｄｓ、　Ｊ　、　）らは、Ｐ
ＣＴ／ＵＳ８３１０１４１２号（ＷＯ８４０１１０７と
して１９８４年３月２９日公表）において、弱毒化もし
くは不活化した形態のＤＮＡウィルスであると信じられ
た非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスの同定、単離、特徴付け、精
製および利用について記載している。この著者らは非Ａ
非Ｂ型肝炎ウィルスをＨＡＶおよびＨＢＶから区別した
と主張したが、この主張された非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルス
を特徴付は検出するために用いたモノクローナル抗体は
、事実、ＨＢＶ抗原と交差反応性を示した［ウオンズら
のＰ　ｒｏｃ、　Ｎ　ａｔ’　１．　Ａ　ｃａｄ、　Ｓ
　ｃｉｌ、８３：６６０８〜６６１２（１９８６）も参
照のこと：該文献において、ウオンズらの公表出願のウ
ィルス試料には、ＨＢＶと長さが同じでＨＢＶ抗コア免
疫反応を引き起こすことのできるウィルス性核酸配列が
含まれているが示されたコ。

他の例としては、オーホリ（Ｏｈｏｒｉ、　Ｈ）らの特
開昭６０−８９４３０号明細書に、非Ａ非Ｂ型肝炎患者
の血清および尿とは強力な凝集反応を引き起こすが、正
常直情またはＨＢＶ患者の血清とは凝集反応を引き起こ
さない非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗原（Ｓｏ−抗原と言及され
ている）が記載されている。しかし、ＨＤＶのような他
の肝炎からの試料については試験されていない。関連す
る刊行物においてオーホリらは、Ｓｏ−抗原は非経口的
に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎よりもむしろ非Ａ非Ｂ型肝炎
の流行性形態と関連するものとして特徴付けられるとし
ている［オーホリらのＪ　、　Ｍｅｄ、　　Ｖ　１ｒｏ
１．　＋１２：１６１〜１７８（１９８３）参照］。

最近の報告［ブラッドリ−（Ｂ　ｒａｄｌｅｙ）らによ
り要約されたＰ　ｒｏｅ、　Ｎａｔ’　１．　Ａｃａｄ
、　Ｓ　ｃｉ、、　８４　：６２７７〜６２８１（１９
８７）コにより、小腸伝播性非Ａ非Ｂ型（ＥＴ−ＮＡＮ
Ｂ）肝炎として示された流行性形態がヒトにおいて小腸
経由で自然感染する新しい形態のウィルス性肝炎である
ことがさらに確立された。ＥＴ−ＮＡＮＢは非経口的に
伝播する非Ａ非Ｂ型肝炎とは関係ない。

数多（の研究者が、非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関連する
ものとして抗原（ＡＮ６５２０として示した）を正確に
同定したと信じた。アカツカ（Ａ　ｋａｔｓｕｋａｓ　
Ｔ　、）らは、ヨーロッパ特許出願第００９２２４９号
明細書（１９８３年１０月２６日公開）において非Ａ非
Ｂ型肝炎関連モノクローナル抗体、培養組成物、および
それを含有する診断試薬を記載している。種々の肝炎関
連抗体（ＨＡＶ抗体、抗ＨＢｓ、抗ＨＢｃ、抗ＨＢｅ、
抗デルタ）とも正常なヒト肝臓上清抗体や正常なヒト血
漿抗体とも反応しなかったので、この抗原は非Ａ非Ｂ型
肝炎に関連する特異的な抗原であると信じられた。続い
てトーマツ（Ｔ　ｏｈｍａｔｓｕＳＪ　、　）らはＪ　
、　Ｍｅｄ、　Ｖ　１ｒｏ１．　。

１５：３５７〜３７１（１９８５）において非Ａ非Ｂ型
肝炎ウィルスに感染した肝臓からのＡＮ６５２０抗原の
精製を記載しており、アカツカらはＪ。

Ｍｅｄ、　Ｖｉｒｏｌ、、　２０　：３３〜４２（１９
８６）においてＡＮ６５２０の検出を記載している。し
かしながら、アカツカらのＪ　、Ｍｅｄ、　Ｖ　１ｒｏ
１．２０　：４３〜５６（１９８６）において、ＡＮ６
５２０は非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスに感染した肝臓と同様
に正常な未感染の肝臓においても見出だされるタンパク
質であることが示された。従って、ＡＮ６５２０抗原を
利用することによって得られたモノクローナル抗体は、
非Ａ非Ｂ型肝炎の存在を確認するのに有用ではない。

非Ａ非Ｂ型肝炎に対してのみ特異性を有すると信じられ
たが後になってＨＤＶとの交差反応性が示されたモノク
ローナル抗体に関して他の文献が存在する。）（ＤＶの
複製は、ＨＢＶとの同時感染に依存していると思われる
（または他のヘパドナ（Ｈｅｐａｄｎａ）ウィルスの実
験動物モデルにおいて認められるようである）。インビ
ボにおいて、ＨＤ■感染は非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルス感染
と共通する幾つかの同一とみなされる特徴を有する。光
学および電子顕微鏡を用いてＨＤＶおよび非Ａ非Ｂ型肝
炎ウィルス感染肝臓を調べると同様の構造上の異常が見
つかり、これは正常な肝臓にも他の型の肝炎の肝臓にも
観察されない。非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスに感染した肝臓
に特異的であるとして初めに記載されたモノクローナル
抗体［シミズ（Ｓ　ｈｉｍｉｚｕ、亡）らのＰｒｏｃ、
Ｎａｔ’１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）、８２／７
：２１３８〜２１４２（１９８５）コは、　ＨＤＶ感染
肝臓と非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルス感染肝臓との両方に存在
するこれら構造上の異常のうちの１つの成分を認識する
ことか示された。

最初の研究結果によれば、非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関
連する抗体を産生ずるチンパンジーおよびヒト白血球の
連続的な細胞株が開示されたが、後の研究によって４８
−１およびＳ−１と命名されたこれらの抗体はＨＤＶ感
染肝臓とも反応することが示された［シミズらのへパト
ロジ−（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ）（米国）、６：１３２
９〜３３（１９８６）；オノ（Ｏｎｏ、Ｙ、）らのヨー
ロッパ特許出願第０１９０９７２号明細書（１９８６年
８月１３日公開）、およびシミズらの出版物の共著者に
よる対応する２つの日本特許出願ＪＰ６１０５６１９６
およびＪＰ６１０２５４８４参照コ。

今日、非Ａ参照型肝炎に特異的な抗原も抗体もともに明
白には示されていない。従って、当該技術分野において
非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスに感染した肝臓組織にのみ反応
性の抗体に対する必要性が存在する。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは、上記情況のもとて鋭意研究を重ねた結果
、非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関連する抗原を見出だし本
発明を完成するに至った。すなわち、本発明は非経口的
に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関連する抗原の１
種または２種以上に選択的に免疫結合することのできる
抗体、非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関
連し、該抗体と選択的に免疫結合する特徴を有する抗原
、非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関連す
る抗原の１種または２種以上と選択的に免疫結合する抗
体を産生ずることのできる細胞株、および特異的な抗体
との選択的な免疫反応に基づ（非経口的に伝播した非Ａ
非Ｂ型肝炎に特異的に関連する抗原の検出のための免疫
学的アッセイ法において、上記抗体を用いることを特徴
とする方法に関するものである。

本発明の抗体は、非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎感
染の免疫学的検出に非常に有用である。

非Ａ非Ｂ型肝炎関連抗原との免疫結合に関して本発明に
いう「選択的」とは、たとえば実施例２に説明する免疫
蛍光染色法により決定されるように、ＨＢＶ感染肝臓組
織、ＨＤＶ感染肝臓組織および正常肝臓組織に関連する
抗原を除外して、該抗原と免疫結合することのできるこ
とをいう。これと対応して、非Ａ非Ｂ型肝炎抗原に関し
て本発明にいう「特異的に関連する」とは、ＨＢＶ感染
肝臓組織、ＨＤＶ感染肝臓組織および正常肝臓組織に関
連する抗原を除外して（すなわち、共通のエピトープを
有さないで）、非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関連する抗原
をいう。

現在好ましいモノクローナル抗体としては、非Ａ非Ｂ型
肝炎に感染したチンパンジーの細胞に由来するものが挙
げられる。特に好ましいのはｒａＰｔ−Ｎとして示され
るＩｇＭであり、これは本発明のＥＢＶ形質転換チンパ
ンジー白血球細胞株である細胞株ａＰｔ−１の増殖培養
の上清から得られたものである。この細胞株は、受託番
号ＣＲＬ９６７９でアメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクション、１２３０１バークローン・ドライブ、ロ
ックビル、メリーランド、２０８５２に１９８８年３月
２９日に寄託しである。

つぎに実施例に基づいて本発明をさらに詳しく説明する
が、本発明はこれらに限られるものではない。以下の実
施例では、ＥＢＶ形質転換抗体産生細胞株の調製のため
の非Ａ非Ｂ型肝炎感染チンパンジーからの白血球の単離
、非Ａ非Ｂ型肝炎感染に特異的に関連する抗原と選択的
に結合することのできるモノクローナル抗体の製造、お
よび非Ａ非Ｂ型肝炎感染に特異的に関連する抗原の同定
に本発明を実施することを説明する。

さらに詳しくは、実施例１は、非Ａ非Ｂ型肝炎感染処理
および組織学的スクリーニングに用いる肝臓生検試料の
調製に関する。実施例２は、白血球由来細胞株の調製お
よび免疫学的スクリーニングならびに非Ａ非Ｂ型肝炎ウ
ィルスに特異的なモノクローナル抗体の検出に用いる免
疫蛍光アッセイおよび免疫グロブリンアッセイに関する
。

実施例１ ［肝臓生検試料の調製コ 研究に用いたチンパンジー［パン・トログロダイテス（
Ｐ　ａｎ　Ｔ　ｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）］は、すべて］
ラボラトリーフォア・イクスベリメンタル・メディスン
・アンド・サージエリ−・イン・ブライメーツ（Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ　ｆｏｒ　Ｅ　ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　　Ｓ　ｕｒｇｅｒｙ　ｉ
ｎ　Ｐｒｉｍａｔｅｓ（Ｌ　ＥＭＳ　Ｉ　Ｐ）にニュー
ヨーク、タキシード）にて飼育されていたものである。

非Ａ非Ｂ型肝炎肝臓ホモジネートに接種する前に２つの
動物から外科肝臓生検（正常）組織を得た。

肝細胞の超微細構造変化［ブファイファ−（Ｐ　ｆｅｉ
ｆｅｒ）らのＣｅ１ｌ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、　３３　
：２３３〜２４３（１９８０）］および肝臓酵素（とり
わけアラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＴ）の血
清レベルの上昇により示されるように、続く疾患の急性
期の間に第二の（急性）外科生検を行った。一方の動物
の急性生検から調製したホモジネートを第二の動物に接
種するのに用いた。

さらに肝臓生検試料を以下のチンパンジーから得た。（
ｉ）慢性のＨＢＶキャリヤー、（ｉｉ）非Ａ非Ｂ型肝炎
関連肝細胞性癌を保持して死亡したチンパンジー［リン
グ（Ｌ　１ｎｋｅ）らのＩ　ｎ　Ｈｅｐａｄｎａ　Ｖ　
１ｒｕｓｅｓ、３５７〜３７０頁、ロビンスン（Ｒｏｂ
ｉｎｓｏｎ。

Ｗ、）ら編；アラン・アール・リス（Ａ　ｆａｎ　Ｒ，
Ｌ　１ｓｓ）、ニューヨーク；ムチュモア（Ｍｕｃｈｍ
ｏｒｅ）らのＪ、Ｍｅｄ、Ｖｉｒｏｌ、、２１：４９Ａ
（１９８７）コ、および（ｉｉｉ）ＨＤＶの重感染した
慢性のＨＢＶキャリヤー。デルタ抗原の血清レベルが最
大のときは生検物質は上記第三のチンパンジーから得た
。ＨＤＶに感染したヒト肝臓は剖検から得た。すべての
チンパンジーの生検から得た組織は、動物から除くと直
ちにスライスし液体窒素中に冷凍した。

実施例２ ［白血球由来細胞株の調製コ 非Ａ非Ｂ型肝炎感染の回復期であるがＨＢＶには依然慢
性感染の状態であるチンパンジーから全血を採取した。

フィコール−パック（Ｆ　１ｃｏｌ　−Ｐ　ａｑｕｅ；
ファルマシア、ビスカタウエー、ＮＪ）を用い製造業者
の使用説明書に従って白血球を精製し、Ｂ９５−８細胞
［ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）らのＰｒｏｃ、　Ｎａｔ’　
ｌ。

Ａｃａｄ、ｏｆ　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、７０：１９０〜１９
４（１９７３）、とりわけパンミール（ＶａｎＭｅｅｌ
）らのＪ。

ｏｆ　ｒ　ｍｍｕｎｏ、Ｍｅｔｈｏｄｓ、　８０　：２
６７〜２７６（１９８５）に記載］から分泌されたエプ
スタイン−バーウィルス（ＥＢＶ）を感染させた。２０
％ウシ胎仔血清（Ｆｅ２）を含有するＲＰＭＩ培地中に
マイクロタイターウェル当たり１〜４Ｘ１０’個の細胞
を接種した。すべてのウェルからの土浦流体を免疫蛍光
染色による最初の分析に供した後、細胞を一層大きな容
器に移した。その後、細胞株を減少させたＦ　ＣＳ　ａ
度（１％まで下げる）および１％ヌトランダムーヒｘ−
（Ｎｕｔｒａｎｄａｍ−Ｈｕ；ベーリンガー・マンハイ
ム・バイオケミカルズ、インデイアナポリス、ＩＮ）中
での増殖に適応させた。

［免疫蛍光アッセイおよび免疫グロブリンアッセイコ 実施例１に従って調製した１、４４０の個々のマイクロ
タイターウェルからの細胞培養上清を、急性非Ａ非Ｂ型
肝炎ウィルス感染肝臓切片に対する免疫反応性のための
免疫蛍光により次のような手順に従ってアッセイした。

凍結肝臓のクリオスタット切片（厚さ４μｍ）を、ウシ
血清アルブミンで前辺てコーティングした顕微鏡のカバ
ーガラスに適用した。切片を未希釈細胞培養培地ととも
に室温で６時間インキュベートした。リン酸バッファー
食塩水（ＰＢＳ）ですすいだ後、ヒト１ｇＭおよびＩｇ
Ｇに対するフルオレセイン標識１ｇＧ（カプリン）とと
もに４℃で切片を一層インキユベートした。

切片をすすぎ、蛍光顕微鏡観察により評価するに先立っ
て５０％グリセリン／ＰＢＳ中に置いた。

これらのうち４２１（２９％）が陽性のシグナルを示し
、正常な肝臓切片および非Ａ非Ｂ型肝炎感染肝臓切片に
対して再スクリーニングした。このスクリーニングは、
３箇月の全培養時間の後に完了した。６２の上清（元の
１，４４０の４％）が持続的で特異なシグナルを示した
。

さらに再スクリーニングすることにより、ＨＢ■感染チ
ンパンジー感染肝臓の切片を正常試料および非Ａ非Ｂ型
肝炎感染試料の切片と比較した。

６２の細胞上清のうち２２が、非Ａ非Ｂ型肝炎感染肝臓
の切片に対してのみ陽性を示した。２２の細胞培養上清
のうち２はＩｇＧとＩｇＭの両方の抗体を含有していた
が、残りはＩｇＭ活性のみを示した。

固相ＥＬＩＳＡを用いて組織培養上清中に存在する免疫
グロブリンレベルを決定した。簡単Ｃと説明すると、市
販のアフィニティー精製抗ヒトＩｇＧまたはＩｇＭ（カ
プリン）を１７４インチ直径ポリスチレンビーズに吸着
させた。希釈培養上清（５０μＱ）および適当な希釈液
（２００μｅ）を固相とともに４０℃で１時間インキュ
ベートした。ビーズを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダ
ーゼに結合させた抗ヒトＩｇＧまたはＩｇＭ（２００μ
のを加え、４０°Ｃで２時間インキュベートした。

ビーズを再び洗浄し、色素生産性の基質として０−フェ
ニレンジアミンを加えた。発色を４９２ｎｍでモニター
した。増殖培地中に希釈した市販のヒトＩｇＧまたはＩ
ｇＧを用いて得られた標準曲線は目的の濃度範囲を通じ
て直線性であった。ＥＢ■形質転換培養土清中の免疫グ
ロブリンの濃度をこれらの標準曲線から決定した。

培養中で６箇月後、１３のＩｇＭ産生細胞株のみが安定
なままであった。これらの細胞株により産生されたモノ
クローナル様抗体の呼称およびすべてのアッセイを通じ
た染色パターンを第１表にまとめて示す。

ＮＡＮＢ：非Ａ非Ｂ型肝炎 ＨＤＶ　　：肝炎デルタ型ウィルス −：特別の免疫蛍光染色は観察されず ＋　　　；強い陽性の免疫蛍光染色 ＋／−：ボー：または弱い免疫蛍光染色ｎａ：アッセイ
せず １３の安定なａＰｔ細胞株のうち１２からの培養液を、
正常な肝臓、非Ａ非Ｂ型肝炎肝臓、およびヒトおよびチ
ンパンジーＨＤＶ感染肝臓に対して再アッセイした。第
１表に示すように、１２のアッセイしたモノクローナル
抗体のうち１つのモノクローナル抗体（ａＰｔ−１）以
外はすべてＨＤＶ感染組織と反応した。これら１２のモ
ノクローナル抗体は１以上の染色パターンを示すが、そ
れはおそらく非Ａ非Ｂ型肝炎感染肝臓とＨＤＶ感染肝臓
とで共通に表された異なる抗原に対してこれらモノクロ
ーナル抗体が反応性を示すためであろう。

細胞株ａＰｔ−１により産生されたモノクローナル抗体
は、非Ａ非Ｂ型肝炎感染肝臓片および非Ａ非Ｂ型肝炎感
染肝細胞性癌から得られた切片に両方において細胞質に
斑点状の染色を示す。正常な肝臓、ＨＢＶ感染肝臓また
はＨＤＶ感染肝臓からは陽性の蛍光は観察されなかった
。従って、本実施例においては、このモノクローナル抗
体ａＰｔ−１のみが非Ａ非Ｂ型肝炎感染を検出するため
に真に特異的であるといえる。

加えて、ヒト肝臓切片でのａｐｔ−ｉの特異性を評価す
るために予備的な研究が進行中である。これらの肝臓試
料には、正常肝臓、ＨＢ　Ｖ感染肝臓、ＨＢ　Ｖ／ＨＤ
　Ｖ感染肝臓、非Ａ非Ｂ型肝炎感染肝臓、アルコール疾
患の肝臓および自己免疫疾患の肝臓から得られたものが
含まれる。

本発明によるモノクローナル抗体は、非経口的に伝播し
た非Ａ非Ｂ型肝炎感染の検出、および体液流体、組織、
実験試薬および非経口的に投与しようとする流体中にお
ける感染因子の検出のためのアッセイに有用であること
が期待されている。

本発明のモノクローナル抗体はまた、非Ａ非Ｂ型肝炎に
特異性に関連する抗原をたとえばアフィニティークロマ
トグラフィーにより単離するのに用いることができる。

そのようにして免疫精製した抗原は、多数のエピトープ
特異性を有する抗体を得るためにたとえばヤギやウサギ
などの霊長類以外の種を免疫するのに用いることができ
る。別法としては、単離した抗原は、マウスやラットを
免疫してモノクローナル抗体を産生ずることのできるハ
イブリドーマ細胞株を調製するために用いることができ
る。

本発明により提供される抗体は、非Ａ非Ｂ型肝炎感染に
特異的に関連する抗原および感染因子の特徴付けを可能
にするであろう。この観点から、ａＰｔ−１に反応性の
抗原の分子量を決定するために、分析的およびプレバラ
ティブゲル電気泳動のような標準的な方法を用いること
ができる。こうして得られた反応性単離物は、還元剤、
プロテアーゼ、リパーゼ、グリコシダーゼなどを含む種
々の選択的な薬剤を使用することによりさらに特徴付け
してよい。従って、本発明により提供された抗原および
抗原断片を使用することに基づいた非Ａ非Ｂ型肝炎関連
抗体のアッセイ法もまた本発明に含まれるものである。

本発明のアッセイ法は、競合および非競合イムノアッセ
イ、ラジオイムノア／セイ、ＥＬＩＳＡ、ＦＩＡなどを
含む種々の形態で行うことができる。

以上、本発明を特定の方法および構成に従って説明した
が、本発明を考慮した上で当業者が種々の変更および改
変をなし得るであろうことは理解されなければならない
。

たとえば、非Ａ非Ｂ型肝炎に対する薬剤にさらした種々
のチンパンジー、ヒトまたは他の動物から得た不死化白
血球もまた本発明によるＩｇＭおよびｔｇｃイソタイプ
の抗体を提供するのに有効であるであろう。好ましいモ
ノクローナル抗体産生細胞株はエプスタイン−バーウィ
ルスを感染させることによって不死化したものであるが
、細胞融合や当業者に知られた他の有効な手段のような
モノクローナル抗体産生を安定化させるためのさらに別
の方法を本発明の範囲から除外することを意図するもの
ではない。本発明により産生されたさらに別のモノクロ
ーナル抗体が１ろ以上の非Ａ非Ｂ特異的エピトープおよ
び／または抗原を同定することができるであろうことも
本発明に包含される。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関
   連する抗原の１種または２種以上に選択的に免疫結合す
   ることのできる抗体。
2. （２）細胞株ａＰｔ−１（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ９６
   ７６）により産生される請求項（１）記載の抗体。
3. （３）非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関
   連し、請求項（１）記載の抗体と選択的に免疫結合する
   特徴を有する抗原。
4. （４）非経口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関
   連する抗原の１種または２種以上と選択的に免疫結合す
   る抗体を産生することのできる細胞株。
5. （５）細胞株ａＰｔ−１（ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ９６
   ７６）である請求項（４）記載の細胞株。
6. （６）特異的な抗体との選択的な免疫反応に基づく非経
   口的に伝播した非Ａ非Ｂ型肝炎に特異的に関連する抗原
   の検出のための免疫学的アッセイ法において、請求項（
   １）または（２）記載の抗体を用いることを特徴とする
   方法。