JPH02111729A - Activation of interferon - Google Patents
Activation of interferonInfo
- Publication number
- JPH02111729A JPH02111729A JP63263414A JP26341488A JPH02111729A JP H02111729 A JPH02111729 A JP H02111729A JP 63263414 A JP63263414 A JP 63263414A JP 26341488 A JP26341488 A JP 26341488A JP H02111729 A JPH02111729 A JP H02111729A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- interferon
- surfactant
- type
- deactivated
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims abstract description 48
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims abstract description 48
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims abstract description 46
- 230000004913 activation Effects 0.000 title claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 14
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 abstract description 7
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 6
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 abstract description 3
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical compound [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 abstract 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 abstract 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 abstract 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101001054334 Homo sapiens Interferon beta Proteins 0.000 description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- -1 cyanopropyl Chemical group 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、改良されたインターフェロンの活性化法に関
する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Field of Application] The present invention relates to an improved method for activating interferon.
［従来の技術］
失活したインターフェロンを活性化する方法としては、
従来次の方法が知られている。[Prior art] As a method for activating inactivated interferon,
Conventionally, the following method is known.
（１） いくつかの酵素において、塩酸グアニジンや
尿素などのタンパク質変性剤で完全変性させた後、希釈
や透析などによってタンパク質変性剤の濃度を下げるこ
とによって活性を回復させる方法（蛋白質・拡散・酵素
別冊Ｖｏ１．２７． Ｎｏ、 ６゜［タンパク質とは
何かＪ ｌ）、９１５ 、共立出版、１９８２年）。(1) A method of completely denaturing some enzymes with a protein denaturant such as guanidine hydrochloride or urea, and then restoring their activity by lowering the concentration of the protein denaturant through dilution or dialysis. Separate Volume Vol. 1.27. No. 6゜ [What is a Protein? Jl), 915, Kyoritsu Shuppan, 1982).
（２） ヒト白血球インターフェロンとヒト線維芽細
胞インターフェロンで、１００℃、２．５分で熱失活さ
せた後、１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ） 、１
％２−メルカプトエタノール（２ＭＥ）、５Ｍ尿素で変
性させてから希釈して活性を回復させる方法（Ｗ、 Ｅ
、 ＳｔｅｗａｒｔＩＩら、Ｊ、 ｇｅｎ。(2) Human leukocyte interferon and human fibroblast interferon were heat-inactivated at 100°C for 2.5 minutes, and then treated with 1% sodium dodecyl sulfate (SDS).
% 2-mercaptoethanol (2ME) and 5M urea and then diluted to recover the activity (W, E
, Stewart II et al., J. gen.
Ｖｉｒｏｌ、、 ２６．３２７．１９７５）。Virol, 26.327.1975).
（３） ヒト白血球インターフェロンとヒト線維芽細
胞インターフェロンを１００℃、２．５分で熱失活させ
た後、１．５Ｍチオシアン酸グアニジンにて変性させ、
透析により再活性化する方法（Ｒ，Ｊ、 Ｊａｒｉｗａ
ｌｌａら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉａ、 ３Ｂ、 １３
９０゜１９８０）。(3) Human leukocyte interferon and human fibroblast interferon were heat inactivated at 100°C for 2.5 minutes, and then denatured with 1.5 M guanidine thiocyanate.
Method of reactivation by dialysis (R, J, Jariwa
lla et al., Experimentia, 3B, 13
90°1980).
（４）インターフェロンをタンパク質変性剤で処理し、
鉱酸塩を含む緩衝液で希釈した後、無機吸着体に吸着さ
せ、次いで溶出剤で溶出することを特徴とするインター
フェロンの活性化法（特開昭６Ｏ−２５８１２９）。(4) Treating interferon with a protein denaturant,
1. A method for activating interferon, which comprises diluting with a buffer containing a mineral salt, adsorbing it onto an inorganic adsorbent, and then eluting it with an eluent (Japanese Patent Laid-Open No. 6O-258129).
などがインターフェロンの活性化法として報告されてい
る。これらの方法に共通していることは、活性を有しな
い、あるいは失活したインターフェロンをいずれも塩酸
グアニジンや尿素などのカオトロピック塩のタンパク質
変性剤で変性させてから、そのタンパク質変性剤濃度を
希釈や透析によって低下させ、インターフェロンを再活
性化させるという点である。etc. have been reported as methods for activating interferon. What these methods have in common is that inactive or inactivated interferon is denatured with a protein denaturant such as a chaotropic salt such as guanidine hydrochloride or urea, and then the concentration of the protein denaturant is reduced by dilution or The point is that it is lowered by dialysis and reactivated by interferon.
また、ヒト線維芽細胞インターフェロンへの界面活性剤
に対する影響はＳｅｄ＋＋＋ａｋら（Ａｄｖ、 Ｅｘｐ
。In addition, the effect of surfactants on human fibroblast interferon was reported by Sed+++ak et al. (Adv, Exp
.
Ｍｅｄ、 Ｂｉｏｌ、、 ｖｏｌ、 １１０．”Ｈｕｍ
ａｎ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ” （Ｗ。Med, Biol, vol. 110. ”Hum
An Interferon” (W.
Ｒ，Ｓｔｉｎｅｂｒｌｎｇ ａｎｄ Ｐ、 Ｊ、 Ｃｈ
ａｐｐｌｅ、 ｅｄｓ、）、ｐｐ。R, Stinebrlng and P, J, Ch.
apple, eds,), pp.
１３３−１５２． Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ、 １９７８）によって広範に調べられて
いるが、それらはインターフェロンの安定化に対する効
果を調べているものであり、インターフェロンの活性化
を類推させるような知見は見当らない。133-152. Plenum Press, Ne
(York, 1978), but they investigated the effect on stabilization of interferon, and no findings analogous to the activation of interferon were found.
さらにＰｒ１ｅｓｅｎら（Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ
、 Ｂｉｏｐｙｓ、。Furthermore, Pr1esen et al. (Arch, Biochem
, Biopys.
２０６、４３２．１９８１）は保存中に失活したヒト線
維芽細胞インクフエロンが０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ
−１００で一部活性化されたと報告しているが、有機塩
や〜１２．５％２−プロパツールと〜３゜５％ｎブタノ
ールが共存していること、また水で希釈後、さらに０．
１％ＳＤＳで希釈した場合には活性化がほとんど起こっ
ていないことなど、界面活性剤の効果のみだけでインタ
ーフェロンの活性化を示唆するには十分な知見ではない
。また、界面活性剤の濃度も０．１％であって、実用的
にインターフェロンの活性化に十分な濃度ではない。206, 432.1981), human fibroblast inkferon inactivated during storage was incubated with 0.1% Triton
-100, but it was found that organic salts, ~12.5% 2-propanol, and ~3.5% n-butanol coexisted, and that after dilution with water, it was further activated. ．．
The effect of the surfactant alone is not sufficient to suggest activation of interferon, such as the fact that almost no activation occurred when diluted with 1% SDS. Further, the concentration of the surfactant was also 0.1%, which is not a concentration sufficient for practical activation of interferon.
［発明が解決しようとする課題］
従来の技術で用いられてきたタンパク質変性剤による変
性後の再活性化では、タンパク質変性剤の濃度を下げて
再活性化する際の条件の設定が必ずしも容易ではなく、
すなわち希釈や透析に用いる溶液のｐＨ，塩組成、温度
、また処理時間などの微妙な設定が再活性化率を左右す
る。さらに、システィン残基をもつタンパク質をジチオ
スレイトールや２−メルカプトエタノールなどの存在下
の還元条件下で変性させた場合、そのタンパク質の再活
性化の際に、誤ったジスフィト結合の発生が起こる危険
性もある。このような点から、タンパク質や変性剤や還
元剤を用いない簡便な再活性化法の発明が期待されてい
る。[Problems to be solved by the invention] In reactivation after denaturation using a protein denaturant that has been used in conventional technology, it is not always easy to set conditions for reactivation by lowering the concentration of the protein denaturant. Without,
That is, delicate settings such as pH, salt composition, temperature, and treatment time of the solution used for dilution and dialysis affect the reactivation rate. Furthermore, if a protein with cysteine residues is denatured under reducing conditions in the presence of dithiothreitol or 2-mercaptoethanol, there is a risk that erroneous disphite bonds may occur upon reactivation of the protein. There is also gender. From this point of view, the invention of a simple reactivation method that does not use proteins, denaturants, or reducing agents is expected.
本発明は、失活したインターフェロンを界面活性剤を含
む溶液に溶解することにより、上記の問題点を解決する
ことを目的とする。The present invention aims to solve the above problems by dissolving deactivated interferon in a solution containing a surfactant.
［課題を解決するための手段］
上記目的は以下の本発明により達成される。すなわち、
本発明はインターフェロンを界面活性剤を含む溶液に溶
解することを特徴とするインターフェロンの活性化法で
ある。本発明者らは、インターフェロンの活性化法を鋭
意研究の結果、本発明を完成した。[Means for Solving the Problems] The above objects are achieved by the following present invention. That is,
The present invention is a method for activating interferon, which is characterized by dissolving interferon in a solution containing a surfactant. The present inventors completed the present invention as a result of intensive research into a method for activating interferon.
本発明に使用されるインターフェロンは動物槽およびそ
の生産方法に特に限定されず、またα。The interferon used in the present invention is not particularly limited to animal tanks and methods for producing the same, and can also be used in α.
β、γのいずれの型のインターフェロンにも適用するこ
とが可能であるが、本発明方法はインターフェロン、特
にヒトインターフェロンβに効果的である。Although it can be applied to either β or γ interferon, the method of the present invention is effective for interferon, particularly human interferon β.
また本発明方法は、活性が３０％以下に失活したインタ
ーフェロン、特に２０％以下に失活したインターフェロ
ンを再活性化、する場合に有効である。たとえば、不純
物を含まないヒトインターフェロンβの場合は、比活性
が１〜５Ｘ８ＩＵ／ｍｇのものが活性のあるものとされ
ているが、それか３０％以下に失活しても本発明方法に
よればかなり活性を回復させることができる。Furthermore, the method of the present invention is effective in reactivating interferon whose activity has been deactivated to 30% or less, particularly interferon whose activity has been deactivated to 20% or less. For example, human interferon β that does not contain any impurities is said to be active if its specific activity is 1 to 5×8 IU/mg, but even if the specific activity is 30% or less, the method of the present invention can It is possible to recover the activity.
失活したインターフェロンは界面活性剤を含む溶液に溶
解することによって再活性化される。Deactivated interferon is reactivated by dissolving it in a solution containing a surfactant.
用いる界面活性剤としては、イオン性界面活性剤あるい
は非イオン性界面活性剤のいずれでもかまわないが、イ
オン性界面活性剤がより好ましい。The surfactant used may be either an ionic surfactant or a nonionic surfactant, but an ionic surfactant is more preferred.
イオン性界面活性剤では炭素数１２以上のアルキル鎖を
もつスルホン酸塩、具体的にはドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）あるいはドデシル硫酸リチウム（ＬＤＳ）な
どが好ましく、また非イオン性界面活性剤ではアルキル
エーテル類あるいはソルビタン類、具体的にはＮｏｎ１
ｄｅｔ Ｐ−４０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｔ
ｗｅｅｎ２Ｑなどが好ましい。For ionic surfactants, sulfonates having an alkyl chain with 12 or more carbon atoms are preferred, specifically sodium dodecyl sulfate (SDS) or lithium dodecyl sulfate (LDS), and for nonionic surfactants, alkyl ethers are preferred. or sorbitans, specifically No. 1
det P-40, Triton X-100, T
Ween2Q etc. are preferable.
界面活性剤の濃度としては、活性化を十分に起こさせる
濃度で、かつタンパク質分子に強度に変性させない濃度
の実用的には０．５〜２％で用いられ、０．７〜１．５
％が好ましく用いられる。The concentration of the surfactant is practically used at a concentration of 0.5 to 2%, which is a concentration that sufficiently causes activation and does not cause strong denaturation of protein molecules, and is 0.7 to 1.5%.
% is preferably used.
０．１％以下では十分に活性化させることはではない。If it is less than 0.1%, sufficient activation will not be achieved.
また、界面活性剤を含む溶液のｐＨはｐＨ２〜１１が用
いられ、インターフェロンα、インターフェロンβに対
してはｐＨ２〜８、インターフェロンγに対してはｐＨ
４〜８が好ましく用いられる。In addition, the pH of the solution containing a surfactant is pH 2 to 11, pH 2 to 8 for interferon α and interferon β, and pH 2 to 8 for interferon γ.
4 to 8 are preferably used.
このように調製された界面活性剤を含む溶液にインター
フェロンを溶解させることによって、インターフェロン
の活性化が可能になる。Activation of interferon becomes possible by dissolving interferon in a solution containing a surfactant prepared in this way.
本発明において、界面活性剤処理によって活性化された
インターフェロンは、通常、イオン交換基、疎水基、ア
ルキル基、抗体、色素、金属等をリガンドとするカラム
でクロマトグラフィーを行うことにより、界面活性剤と
インターフェロン分子を分離することができる。なかで
も、アルキル基をリガンドとする逆相系の高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）は有効で、シアノプロピル
、Ｃ４、Ｃ８およびＣ１０などのアルキル鎖を導入した
シリカゲルに吸着させることにより効率的な分離が可能
となる。In the present invention, interferon activated by surfactant treatment is usually treated with a surfactant by chromatography using a column with ion exchange groups, hydrophobic groups, alkyl groups, antibodies, dyes, metals, etc. as ligands. and interferon molecules can be separated. Among these, reversed-phase high performance liquid chromatography (HPLC) using an alkyl group as a ligand is effective, and efficient separation can be achieved by adsorption to silica gel into which alkyl chains such as cyanopropyl, C4, C8, and C10 are introduced. It becomes possible.
［実 施 例コ 以下に実施例を挙げてさらに説明する。[Implementation example] Further explanation will be given below with reference to Examples.
実施例１
ヒト線維芽細胞より生産され、さらに精製された不純物
を含まないヒト・インターフェロンβを、０．１５Ｍ塩
化ナトリウムを含む１０ｍＭ塩酸（ｐ Ｈ２）に溶かし
、３７℃で保存すると、３日目にインターフェロン活性
が５％以下に低下した。Example 1 Human interferon β produced from human fibroblasts and further purified and containing no impurities is dissolved in 10 mM hydrochloric acid (pH 2) containing 0.15 M sodium chloride and stored at 37°C. interferon activity decreased to less than 5%.
この失活したインターフェロンβ０．１ｍｌを、１％の
濃度の各種界面活性剤を含む１０ｍＭ塩酸（ｐＨ２）ｏ
、９ｍｌに室温下で加え、３０分放置後、インターフェ
ロン活性を測定すると、表１に示したようにインターフ
ェロンの活性化が認められた。0.1 ml of this inactivated interferon β was added to 10 mM hydrochloric acid (pH 2) containing various surfactants at a concentration of 1%.
, at room temperature, and after standing for 30 minutes, interferon activity was measured. As shown in Table 1, interferon activation was observed.
界面活性剤とインターフェロンの分離を行うため、活性
化されたインターフェロン（１５μｇ／ｍ１．１０ｍ１
）を５ｅｎｓｈｕ Ｐａｋ ＶＰ−３１８〜１２５
１カラム（４，６Ｘ２５０ｍｍ、３００人、センシュー
科学）に吸着させ、０．１％トリフルオロ酢酸（ｐ Ｈ
２）存在下でアセトニトリル濃度勾配により溶出させた
。収率９０％で活性化されたインターフェロンが回収さ
れた。To separate surfactant and interferon, activated interferon (15μg/ml, 10ml
) to 5enshu Pak VP-318~125
1 column (4.6 x 250 mm, 300 people, Senshu Kagaku), and 0.1% trifluoroacetic acid (pH
2) Elution was carried out by an acetonitrile concentration gradient in the presence of Activated interferon was recovered with a yield of 90%.
表１ 界面活性剤処理による
インターフェロンの活性化
９ｍｌに室温下で加え、３０分放置後、インターフェロ
ン活性を測定すると、活性の回復は認められなかった。Table 1 Activation of interferon by surfactant treatment When the interferon activity was measured after adding the mixture to 9 ml at room temperature and leaving it for 30 minutes, no recovery of the activity was observed.
［発明の効果］
本発明の方法によりインターフェロンは顕著に活性化さ
れ、失活したインターフェロンはほぼ完全に活性を回復
される。これにより、天然型、遺伝子組換え型インター
フェロンを問わず、従来、抽出過程、精製過程、保存過
程などで失活したインターフェロンに対し、カオトロピ
ック塩などのタンパク質変性剤を使わない簡便な手法と
して、本発明はインターフェロンの活性化法として極め
て有用な手法となる。[Effects of the Invention] Interferon is significantly activated by the method of the present invention, and the activity of deactivated interferon is almost completely restored. As a result, this study provides a simple method that does not use protein denaturants such as chaotropic salts to treat interferons that have been deactivated during conventional extraction, purification, and storage processes, regardless of whether they are natural or recombinant interferons. The invention becomes an extremely useful method for activating interferon.
特許出願人 東 し 株 式 会 社比較例１
実施例１で用いられた活性が低下ｌ−たヒト・インター
フェロンβ０．１ｍｌを、ＩＭあるいは２Ｍ塩酸グアニ
ジンを含む１０ｍＭ塩酸（ｐＨ２）Ｏ。Patent Applicant: Toshi Co., Ltd. Comparative Example 1 0.1 ml of the human interferon β with reduced activity used in Example 1 was added to IM or 10 mM hydrochloric acid (pH 2) containing 2M guanidine hydrochloride (O).
Claims (1)
ェロンを溶解させることを特徴とするインターフェロン
活性化法。(1) An interferon activation method characterized by dissolving interferon in an aqueous solution consisting essentially of a surfactant.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63263414A JPH02111729A (en) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | Activation of interferon |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63263414A JPH02111729A (en) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | Activation of interferon |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02111729A true JPH02111729A (en) | 1990-04-24 |
Family
ID=17389165
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63263414A Pending JPH02111729A (en) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | Activation of interferon |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02111729A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8512691B2 (en) | 1996-12-24 | 2013-08-20 | Biogen Idec Ma Inc. | Stable liquid interferon-beta formulations |
-
1988
- 1988-10-19 JP JP63263414A patent/JPH02111729A/en active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8512691B2 (en) | 1996-12-24 | 2013-08-20 | Biogen Idec Ma Inc. | Stable liquid interferon-beta formulations |
| US8512692B2 (en) | 1996-12-24 | 2013-08-20 | Biogen Idec Ma Inc. | Methods of treating multiple sclerosis with stable liquid interferon-beta formulations |
| US8932574B2 (en) | 1996-12-24 | 2015-01-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Stable liquid interferon beta formulations |
| US9522174B2 (en) | 1996-12-24 | 2016-12-20 | Biogen Ma Inc. | Stable liquid interferon beta formulations |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8084032B2 (en) | Purification method which prevents denaturation of an antibody | |
| CA2220515C (en) | Process for producing erythropoietin containing no animal proteins | |
| Jorpes et al. | Further purification of cholecystokinin and pancreozymin | |
| EP0315968B1 (en) | Plasma and recombinant protein formulations in low ionic strength media | |
| AU691692B2 (en) | Process for purifying factor VIII | |
| WO1989008702A1 (en) | Improved methods for recovery of tissue plasminogen activator using chaotropic agents | |
| RU2014107743A (en) | PURE PROTEINS | |
| JPH05279396A (en) | Method for purification of factor viii and preparation obtained by the method | |
| KR100436857B1 (en) | Methods for Producing Factor Nine from Biological Sources | |
| JPH02111729A (en) | Activation of interferon | |
| EP0331464A2 (en) | Method of refolding urokinase precursor-like protein | |
| IE860888L (en) | Purifying growth hormone-like materials | |
| US5731186A (en) | Method for the production of rDSPA α1 | |
| Ishibashi et al. | In vitro phage-inactivating action of D-glucosamine on Lactobacillus phage PL-1 | |
| JP2004057064A (en) | Method for preventing degradation of nucleic acid, method for extracting nucleic acid, and method for storing nucleic acid | |
| JPS63132898A (en) | Separation and purification of protein | |
| JP2019163212A (en) | Concentration method and purification method of spheroid formation accelerator | |
| IL112236A (en) | Process for minimizing degradation of activated protein c | |
| JP2004244348A (en) | Method for haptoglobin purification | |
| JPH0260316B2 (en) | ||
| JPH03244390A (en) | Method for removing substance derived from escherichia coli | |
| JPS6150925A (en) | Purification of antigen or antibody | |
| JPH04126092A (en) | Removing of protein derived from escherichia coli | |
| JPS63145297A (en) | Purification of protein | |
| JPH03277274A (en) | Removal of substance originated from escherichia coli |