JPH01502593A - Ａｄｃｃ療法を高める組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＡＤＣＣｍ法を高める組成物 本発明は人間患者における腫瘍細胞の成育を選択的に抑制することのできる医薬 組成物およびその用途に関し、特に腫瘍細胞を破壊するある種の単クローン抗体 とＭ−ＣＳＦおよび／ま几はＧＭ−ＣＳＦとの結合した用途に関する。

抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の認識および用途は、抗体単独で使用するかあ るいはがんの部位へ意図する化学療法剤を指向させる抗体の使用によりがん療法 の開発に用いられてきた。例えば、β−１，３−グルカンレンチナンにつづき抗 腫瘍単クローン性抗体の投与で患者を処理しているヨーロッパ特許公報第１９４ ，８５１号参照。国際特許出願番号ＷＯ８７／　０００５４号では、γ−インタ ーフェロンおよび／またはＩＬ−２で感作（ｐｒｉａｅ）　したエフェクター細 胞に単クローン性抗体を付着させ、この組合わせを患者に再注入することを示し ているｅＡＤＣＣ反応の一般的情報については、Ａ。

Ｆ５０ベツら、ジャーナル・オン・イムノロジー、１・３１（６）巻、２９８３ −２９８８頁（１９８３年）、・Ｍ、Ａ、バダスる、ジャーナル・オン・イムノ ロジー、１３０（２）巻、７９５−７９９頁（１９８３年）、Ｔ、Ｊ、キップス ら、ジャーナル・オン・イクスペリメンタル・メディシン、１６１巻、１−１７ 頁（１９８５年）をも参照。

類似し１；結合療法は、ホートンらにより企画され、フインターフェロン、イン ターロイキン−２、腫瘍壊死因子および他のリンフ才力インは、ＭＡｂｓ（モノ クローン抗体類）に上り腫瘍を指向し１ニエフエクター細胞の活性化を増大させ ることができる」と推測した。［ホートン、Ａ、Ｎ、、＆Ｄ、Ａ、シャインバー ク、セミナー・イン・オンコロジー、１３巻、１６５−１７９頁（１９８４年） 。

この一般的楽観的にもかかわらず、ホートンらが引用しにこれらの多くの因子は 実際には免疫−媒介腫瘍破壊の増加に：よ無効であることが証明された。

発　明 発明者はＭ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦがＡＤＣＣプロトコールの単球によって 腫瘍細胞の細胞溶解を増強させる効果をもつことを驚異的に発見した。具体的に 述べると、Ｍ−ＣＳＦお上びＧＭ−ＣＳＦを、先生方で腫瘍を選択的に溶解する ことが可能となるようにマクロファージを感作する医薬組成物に製剤化した。組 成物は、空間的に分離した２つの製剤からなる。一方の製剤は、コロニー刺激因 子（”ＣＳ　Ｆ”）Ｍ−ＣＳ　Ｆおよび／またはＧＭ−ＣＳＦである。他方の製 剤は溶解しようとするＵＳ細胞に結合し１；抗原を指向する単クローン性抗体で ある。本発明は更に、生体内または生体外のどちらかでマクロファージを感作す ることに対するＭ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦの利用を意図する。

本発明の好ましい態様は、コロニー刺激因子として、Ｍ−ＣＳＦ（ＣＳＦ−１、 単球コロニー刺激因子およびマクロファージコロニー刺激因子として知られてい る）を使用する。Ｍ−ＣＳＦは主としてマクロファージを含むコロニーを誘導す る。このことは、ウオンよびＥ、Ｒ，シ二タンレイによる刊行物に記載されてい る。モの組み換えＤＮＡ技術による製法は、アメリカ特許出願８６０，３７７号 に記載されている。省略化した説明はＰＣＴ／ｌ、Ｓ　８６１００２３８号に記 載されている。

本発明の範囲内の他のＣ５ＦはＧＭ−Ｃ５Ｆであり、顆粒球−マクロファージ刺 激因子として知られている。これは、ウォンら、サイエンス、２２８＠、８１０ −８１５頁（３９８５年）およびその中の参考文献で詳細に記載されている。ウ ォンらは組み換えＤＮＡ技術を用いた製造を教えている。ＧＭ−ＣＳＦが様々な 造血前駆細胞において試験管内で重要な活性をあられすことが認識されていたが 、臨床症状の処置における用途は、推測の範囲内であった。ヨーロッパ公開番号 ０．１８３，３５０号および国際特許出願ＷＯ３７１０２０６０号参照。

Ｍ−ＣＳＦは、ＡＤＣＣ試験において単球およびマクロファージに影響を及ぼし 、これらの細胞に標的腫瘍細胞を溶解させるという、他のリンフ才力インに較べ て驚異的な効果を発揮する。本書において”マクロファージ゛を７感作する一： または「感作したことは、反応性マクロファージに対するリンフ才力イン暴露の 効果を！味する。マクロファージ：よ、単クローン性抗体に暴露されると、感作 され、それ故完全に細胞溶解性をもつ（ま几：よ活性化される）ことが可能にす る。

：例えばり、アダミス、アニュアル・レビユー・オン・イムノロジー（１９８４ 年）参照− Ｍ−ＣＳＦは他の免疫調節剤より著しく短かい時間でマクロファージを１瘍細胞 殺りく性１こ感作することができ、エフェクター細胞はより少ない単クローン性 抗体でこのような死をも―みすことができる。同様に、Ｇ　Ｍ　−ＣＳ　Ｆもま 几このようなプロトコールを効果的にもたらす。

溶解すべき腫瘍細胞と関連した抗原（例えば、細胞表面抗原）を指向する単クロ ーン性抗体からなる製剤は本発明のもう１つの重要な構成成分である。本革クロ ーン抗体はマウス抗体アイソタイプ１ｇＧ３．１　ｇ（、２Ａ、Ｉ　ｇＧ　２　 Ｂおよびヒトの抗体アイソタイプＩｇＧ１から選ぶことができる。

不発明の一方の態様では、Ｍ　−ＣＳ　Ｆおよび／またはＧ　Ｍ　−ＣＳＦとプ レインキュベートしたマクロファージを感作し、患者に腫瘍−関連抗原に対する 上記の単りローン住抗体と感作し几細胞を混合投与することによって＝トＯ患者 Ｏ＠瘍細胞を選択的に死滅させる方法を提供する。こＯ方法ではマクロファージ の感作は”−ＫＫでおこる。

もう１つの態様では対外的処置を必要とじないでヒト患者の腫瘍細胞を選択的に 死滅させる方法を提供する。これ：よ、Ｍ−ＣＳＦおよび／またはＧＭ−Ｃ５Ｆ の有効量および上記アイソタイプの中から選択された単クローン性抗体の有効量 を患者に直接的に併行投与することにより達成される。本方法ではマクロファー ジの感作は乳体内でおこる。

本発明に用いられるＭ−Ｃ５ＦおよびＧＭ−ＣＳＦは他の汚染タンパク質を含ま ない純粋なタンパク質であることが望ましい。上記Ｍ　−ＣＳ　ＦおよびＧＭ− ＣＳＦは、天然タンパク質、その組み換え翻訳体およびその誘導体および類似体 を含み、これはアミノ酸が欠損、置換および／または挿入され得るが、しかし特 徴のある生物学的活性を保持し、自然におきる翻訳のｃＤＮ、Ａとハイブリッド 形成できるｅＤＮｊ、によってコード化されているものである。また、異なっに ２種のタンパク質の発現から得られるタンパク質またはそのコード配列の自然に おこるアイソタイプまたは対立遺伝子変異体をも含む。

ヒトアイソタイプＩｇＧ１並びにマウス抗体アイソタイプＩ　ｇＧ　２およびＩ ｇＧ３の数種Ｏ特異単りローン性抗体は、ヨーロッパ特許１９４．８５１号に記 載されている。本方法によって破壊される腫瘍細胞の型は、単クローン性抗体が 指向する具体的；抗体によって異なる。例えば、ヒト肺がん腫瘍細胞に対して発 生し１；マウス１ｇＧ３抗体とＭ−ＣＳＦおよび／またはＧ　ｋ４−　ＣＳ　Ｆ 　Ｏ併行投与は感作したマクロファージをこのような肺腫瘍細胞のまわりに局在 化しそれ故溶解させるように指向する。マウスアイソタイプＩｇＧ２ＡおよびＩ 　ｇＧ　２　ＢまたはヒトアイソタイプＩｇＧ１０他の腫瘍たとえば胸、結腸お よび肝臓を指向する同様な抗体も入手することができ、または当業者により開発 することができる。本方法により役立ち得る現存の単クローン性抗体の例は、Ｐ Ｊｘ４４Ｅ９９１７、肝臓がん腫瘍細胞表面抗原に対して指向するマウスＩｇＧ ２ａ二Ｒ，カールソンら、ジャーナル・オン・インベスティゲーション、７６巻 、４０−４６頁（１９８５年）〕、７９１　Ｔ／３６、結腸腫瘍がん細胞表面抗 原に対して指向するマウスＩ　ｇＧ　２　ｂ：Ｌ　、　Ｇ　、デニラン、カンサ ー・リサーチ４６巻、３５４３−３５４９頁（１９８６年）二および０８３−１ ７−ＩＡ、結腸腫瘍がん細胞表面抗原に対して指向するマウス１ｇＧ２ａ：Ｈ， コブロウスキら、リマティック・セル・アンド・モレキュラー・ジェネティクス ５巻、９５７−９７２頁（１９７９年）二である。

ここに使用されている語句°併行投与“は他Ｏものを支持するにめの１つまには それ以上の成分を前投与することを含む、この方法の成分を連続または逐次投与 することを包含する。例えば、本発明の態様の１つには、単クローン性抗体が最 初段階として患者に投与され、ひきつづいてＭ−ＣＳＦおよび／またはＧＭ−Ｃ ＳＦが投与される。第２０態様では、ＣＳＦを最初に投与し、ひきつづき単クロ ーン性抗体および他のＣ９Ｆが投与されるｅ第３０態様では、Ｃ６Ｆは単クロー ン性抗体の投与よりも前に投与される。第４の態様では、単クローン性抗体およ びＣＳＦが同時に投与される。

すなわち、抗体および？〜４−ＣＳＦおよび／まにはＧ　Ｍ−ＣＳ　Ｆが患者に 別々に投与される場合、ＣＳＦは血止うマクロファージ感作を体内でひきおこし 、抗体はｉ癌細胞に調和するように；る。それから感作され１；マクロファージ は、特異的に腫！細胞／抗体複合体を認識する。

別法として、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦは試験管内で単球の感作に用いられ 、単球は抗体で前処置をした患者に再投与され、同様の細胞溶解が起こり得る。

この治療法では、抗体はＣＳＦによる単球の竺！買方感作物の再導入の後に与え 得る。

他の態様としては、Ｍ−ＣＳＦおよび／まＬはＧＭ−ＣＳＦはＣ９Ｆとインキュ ベートすることにより試験管内で単球を感作するのに使用され、ひきつづき抗体 の付着により試験管内で“武装（アーム）される°。試験管内での単クローン性 抗体に対する感作したマクロファージの結合（”武装（アーム）すること”）は 数々の常法で達成され得る。：例えば、Ｚ、シュテプレヴス本ら、サイエンス、 ２２１ｉｋ。

８６５−８６７頁（１９８３年）参照］、複合体は患者に再導入され、同様な特 異的腫瘍細胞溶解を得る。投与の他の順序もまたこの語句に包合される。

これら組成物は、原発性腫瘍の外科的除去につづく腫瘍細胞の転移拡散を制御す る療法として特に適する。ここで特に列挙した成分と同様に、本発明は腫瘍間連 単クローン性抗体に対して活性な他の物質を使用することができる。

本発明の成分は、非経口的に全身的に投与することができる。そのほかに、これ らの成分は静脈内投与することができる。処置のｋめに望まれる場合、本方法の １つまたはそれ以上の成分を皮下に投与することができる。全身的投与時におい て、単クローン性抗体およびＣＳＦ並びに所望により不発明で用いる他のＣＳＦ の治療組成物は、パイロジエンを含まない非経口投与に適切な水溶液の形とする ｃ　ｐ）（、等損性、安定性等について２要を注！を払っ乙非経口投与に適切ｔ タンパク溶液の製造は、当業者知識の範囲内にるる。

感受性腫瘍の抑制を目的とするこれらの組成物に関する用量処方は、にとえば症 状、体重、性および患者の常食、感染症がある場合の重ざ、投与回数および他の 臨床的因子のような薬物作用を修正する様々な因子を考慮して担当内科医により 決定される。ＣＳＦ成分は、エフニクター細胞の強化応答を誘発させるに充分で あるが、全身的な有毒反応をひきおこすには不充分な用量で投与されるべきであ るわ 一般に、日常の処方は、ＣＳＦポリペプチドが２００−１０００マイクログラム または５０から５０００単位の範囲内であるべきである（すなわち、１単位は試 験管内コロニー形成アッセイまたはマクロファージ活性化アッセイにおいて最大 応答の半分を誘発させるポリペプチドの濃度である）、Ｊ：記で引用し１こ用量 は、方法がＣ５Ｆ単独またはＣＳＦ混合物の使用のいずれを含むかによって補う ために調節することができる。単クローン性抗体の効果的な用量は、内科医が行 う腫瘍の大きさおよび転移の推測にもとづき毎日０．１からｌχ９／体重ｋｇの 範囲内にある。処置した患者の経過は、転移の定期的−評伝でモニターすること ができる。

次の実施例は、本発明によるＡＤＣＣ反応におけるＭ−ＣＳＦの用途の重要な利 点を説明している。

口実施例１〕 抹消血液単球は、従来の方法で組織培養プレート付着により製造れる。およそ５ Ｘ１０’から５Ｘ１０”Ｄ付着単球／ウニルを、アミノ酸分析で測定して組織培 養媒体あ几り２０ｎｇの組み換えＭ−ＣＳＦ中で、２４．４８または７２時間の いずれかの間３７℃でインキュベートした。単球の対照プレートはＭ　−ＣＳ　 Ｆを添加しないで同条件および同時間下でインキュベートした。

ぞれぞれのプレートからの単球に、ヘーリンら前掲に記載のように実施しｙ：Ａ ＤＣＣプロトコールに、結腸がん表面抗原および結腸がん細胞系、Ｌ　Ｓ　−１ ７４（ＮｅｏＲｘ　１　ｎｃｊに対して製造し１ニマウスアイソタイプＴＥＧ３ の単クローン性抗体を用い加えた。ＡＤＣＣプロトコール中の標的細胞として用 いられる結腸がん細胞を［３：Ｈチミジンであらかじめラベルし、すべての細胞 死が二３二Ｈチミジンの遊離により測定される。ＡＤＣＣの反応は５日間続けろ ねた。

第１閣は、ＡＤＣＣ日数対標的細胞溶解Ｏ百分率で表しに、へＤＣＣ反応の結果 である。第１図の実験における標的細胞とエフェクター細胞の比は１：１００で ある、しかじながる同結果は標的：エフェクターの割合が】：１０でも結果が得 られる。第１図の抗体の濃度はｌ　００　ｎｇ／ａＱでめった。Ｍ−ＣＳＦ中で インキュベートした付着単球は、明らかに対照よりもすべてのプレーインキュベ ート時間でより多くの標的細胞の死をもたらす。一般に、単球で前処置したＭ− ＣＳＦは未処置の電球のおよそ２から１．５倍の標的細胞を死滅させるＣＭ−Ｃ ＳＦで約７２時間プレーインキュベートした付着単球は、ＡＤＣＣ反応でおこる 死滅速度が一番速く、２４時間以内で最高の死滅に達する。

第２図は、７２時間Ｍ−ＣＳＦで前処置した単球が、標的二二フェクターの割合 が１：１００を用いたＡＤＣＣプロトコール中で未処置単球よりも標的細胞を死 滅させるのに１０倍少ない抗体を必要とし１；ことを示すｅ類似した結果が、標 的：エフェクターの割合が１：ｌＯの低さでし証明された。

τ腔ｔＩｉ香報告 ｍｌ　Ａｍ１１１Ｍ　ｋｌｌ　、ご＋　、ｇ　Ｈｇεε１００６：ε

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒト患者における腫瘍細胞を選択的に溶解する医薬組成物であって、上記組 成物は、 （ａ）上記腫瘍細胞に関する抗原を指向し、マウス抗体アイソタイプＩｇＧ３、 ＩｇＧ２ＡおよびＩｇＧ２Ｂならびにヒト抗体アイソタイプＩｇＧ１からなる群 から選ばれた単クローン性抗体、および、（ｂ）Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ からなる群から選ばれたコロニー刺激因子 からなる物理的に分離された２つの製剤からなることを特徴とする組成物。
2. ２．コロニー刺激因子がＭ−ＣＳＦである請求の範囲１記載の組成物。
3. ３．コロニー刺激因子がＧＭ−ＣＳＦである請求の範囲１記載の組成物。
4. ４．組成物がＭ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦの両方を含む請求の範囲１記載の組 成物。
5. ５．がんの処置における単クローン性抗体およびコロニー刺激因子の別個の連続 使用に適した単クローン性抗体およびコロニー刺激因子の組合わせからなる医薬 製品の製造のための（ａ）腫瘍細胞に関する抗原を指向し、マウス抗体アイソタ イプＩｇＧ３、ＩｇＧ２ＡおよびＩｇＧ２Ｂならびにヒト抗体アイソタイプＩｇ Ｇ１からなる群から選ばれた単クローン性抗体、および（ｂ）Ｍ−ＣＳＦおよび ＧＭ−ＣＳＦからなる群から選ばれたコロニー刺激因子 の用途。
6. ６．コロニー刺激因子がＭ−ＣＳＦである請求の範囲５記載の用途。
7. ７．コロニー刺激因子がＧＭ−ＣＳＦである請求の範囲５記載の用途。