JPH01277484A - 抗腫瘍活性を有する乳酸菌株およびその培養物 - Google Patents
抗腫瘍活性を有する乳酸菌株およびその培養物Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野コ
本発明は、抗腫瘍活性を有する新規な乳酸菌株及び該乳
酸菌株を用いて得た抗腫瘍活性を有する培養物に関する
。
酸菌株を用いて得た抗腫瘍活性を有する培養物に関する
。
[従来の技術]
従来よりヨーグルト等の発酵乳製品に抗腫瘍活性がある
ことか知られており、その医薬や、腫瘍発生予防の分野
などへの利用が注目されつつある。
ことか知られており、その医薬や、腫瘍発生予防の分野
などへの利用が注目されつつある。
抗腫瘍活性を有する、すなわち抗腫瘍活性成分を菌体内
あるいは菌体外に産生ずる乳酸菌としては、ラクトバチ
ルス カゼイ(Lactobaci 1lus靜且叫)
、ラクトバチルス ヘルペチカス ハ −ユーグルティ
(Lactobacillus helveticus
varjugruti)、ラクトバチルス ブルカリ
カス(Lactobacillus bulgaric
us)、スタフィロコッカスサーモフィラス(Stap
hylococcus thermophilus)、
ストレプトコッカス ピオゲネス(針μm切−cocc
us pyogenes)などが知られている。
あるいは菌体外に産生ずる乳酸菌としては、ラクトバチ
ルス カゼイ(Lactobaci 1lus靜且叫)
、ラクトバチルス ヘルペチカス ハ −ユーグルティ
(Lactobacillus helveticus
varjugruti)、ラクトバチルス ブルカリ
カス(Lactobacillus bulgaric
us)、スタフィロコッカスサーモフィラス(Stap
hylococcus thermophilus)、
ストレプトコッカス ピオゲネス(針μm切−cocc
us pyogenes)などが知られている。
[発明が解決しようと1−る諜U]
上述のように、発酵乳製品に抗腫瘍活性があることが注
目され、その医薬や、腫瘍発生予防の分野への利用が検
討されているが、十分に満足できる結果がこれまでに得
られていないのが現状である。
目され、その医薬や、腫瘍発生予防の分野への利用が検
討されているが、十分に満足できる結果がこれまでに得
られていないのが現状である。
例えば、先に挙げた各微生物についての抗腫瘍活性の応
用が検討されているが、これらの菌から得られる抗腫瘍
活性成分は実用上必すしも満足すべきものではない。
用が検討されているが、これらの菌から得られる抗腫瘍
活性成分は実用上必すしも満足すべきものではない。
そこで、本発明者らは、上述したような発酵乳製品の抗
腫瘍活性の応用のために、実用上高い抗腫瘍活性を有す
る乳酸菌を得るべく鋭意検討を重ねた。
腫瘍活性の応用のために、実用上高い抗腫瘍活性を有す
る乳酸菌を得るべく鋭意検討を重ねた。
その結果、北欧系のヨーグルト中に高い抗腫瘍活性を有
する乳酸菌株の存在を見い出し、それを単離・同定する
ことに成功し本発明を完成した。
する乳酸菌株の存在を見い出し、それを単離・同定する
ことに成功し本発明を完成した。
本発明の目的は、実用上高い抗腫瘍活性を有する新規な
乳酸菌株及び該乳酸菌株を用いて調製された抗腫瘍活性
培養物を提供することにある。
乳酸菌株及び該乳酸菌株を用いて調製された抗腫瘍活性
培養物を提供することにある。
[課題を解決するだめの手段]
本発明の抗腫瘍活性を有する乳酸菌は、ラクトコッカス
(Lactococcus 、旧名ストレプトコッカス
(Stre tococcus) )属に属するラクト
コッカスラクチス サブスペシー ラクチス(1山−c
occus 1actis 5ubsp、Iactis
)及びラクトコッカス ラクチス サブスペシー り
レモ リ ス(Lactococcus Iactis
5ubsp、crcmoris)である。
(Lactococcus 、旧名ストレプトコッカス
(Stre tococcus) )属に属するラクト
コッカスラクチス サブスペシー ラクチス(1山−c
occus 1actis 5ubsp、Iactis
)及びラクトコッカス ラクチス サブスペシー り
レモ リ ス(Lactococcus Iactis
5ubsp、crcmoris)である。
これらの本発明の乳酸菌は、主にスウェーデンにおいて
生産されている粘質タイプのヨーグルトであるロングフ
ィル(rLANGF I LJという一般名で販売され
ている)から単離されたものであり、表3及び表4に示
したような蘭学的性質を有する。
生産されている粘質タイプのヨーグルトであるロングフ
ィル(rLANGF I LJという一般名で販売され
ている)から単離されたものであり、表3及び表4に示
したような蘭学的性質を有する。
特に、これらの菌は、粘着性の莢膜多糖を生産する点に
おいて特徴的てあり、これは顕微鏡によって容易に観察
できる。例えば、第1図の顕微鏡写真では、菌体の周辺
に白く見える部分が粘着性の莢膜多糖の生産を示してい
る。
おいて特徴的てあり、これは顕微鏡によって容易に観察
できる。例えば、第1図の顕微鏡写真では、菌体の周辺
に白く見える部分が粘着性の莢膜多糖の生産を示してい
る。
これら本発明の乳酸菌は、Sarcoma 180の腹
水腫瘍及び固型腫瘍に対し高い腫瘍抑制効果を示し、更
に肺転移性のルイス肺癌に対しても抑制効果があるなど
優れた抗腫瘍活性を有する。
水腫瘍及び固型腫瘍に対し高い腫瘍抑制効果を示し、更
に肺転移性のルイス肺癌に対しても抑制効果があるなど
優れた抗腫瘍活性を有する。
本発明の乳酸菌の優れた抗腫瘍活性を利用することによ
り、医薬や、腫瘍発生予防等において有用な抗腫瘍活性
成分を提供てきる。
り、医薬や、腫瘍発生予防等において有用な抗腫瘍活性
成分を提供てきる。
本発明の乳酸菌を利用する形態としては、該菌体自体ま
たは該菌の培養から得られる培養物、あるいは菌体や培
養物から分解、抽出、精製等の各種処理を経て得られる
調製物としての利用が挙げられる。
たは該菌の培養から得られる培養物、あるいは菌体や培
養物から分解、抽出、精製等の各種処理を経て得られる
調製物としての利用が挙げられる。
例えば、菌体自体あるいは菌の培養物を利用する場合に
は、適当な培地でこれらの菌をそれぞれ個別に、あるい
は混合して培養し、得られた培養菌体あるいは培養物を
、直接あるいは例えば製剤化などの必要に応じた処理を
して利用することができる。
は、適当な培地でこれらの菌をそれぞれ個別に、あるい
は混合して培養し、得られた培養菌体あるいは培養物を
、直接あるいは例えば製剤化などの必要に応じた処理を
して利用することができる。
その際の培地や培養条件は、所望の抗腫瘍活性が得られ
ように設定し、また得られる培養物の所望の形態に応じ
て適宜変更すれば良い。
ように設定し、また得られる培養物の所望の形態に応じ
て適宜変更すれば良い。
例えば、菌体自体や培養物を利用する場合には、菌の良
好な増殖及び所望の抗腫瘍活性が得られる条件を設定す
れば良く、また培養物を発酵乳、乳酸飲料等の食品の形
態で利用する場合には、得られる製品の風味、テクスチ
ャー等を考慮した条件を設定すれば良い。
好な増殖及び所望の抗腫瘍活性が得られる条件を設定す
れば良く、また培養物を発酵乳、乳酸飲料等の食品の形
態で利用する場合には、得られる製品の風味、テクスチ
ャー等を考慮した条件を設定すれば良い。
なお2、莢膜多糖を生産させる場合には、培養温度をl
O℃〜37℃の範囲に設定するのが好ましく、特に15
℃〜25℃が好ましい。
O℃〜37℃の範囲に設定するのが好ましく、特に15
℃〜25℃が好ましい。
また、本発明の乳酸菌に粘着性の莢膜多糖を生産させる
ことにより、得られる発酵乳等の食品に独特の粘着性の
テクスチャーを付与することができる。
ことにより、得られる発酵乳等の食品に独特の粘着性の
テクスチャーを付与することができる。
本発明の乳酸菌の培養に用いる培地や培養条件としては
、通常乳酸菌を培養する際に用いられている培地などか
ら選択して用いることができる。
、通常乳酸菌を培養する際に用いられている培地などか
ら選択して用いることができる。
また、発酵乳等の食品の製造に用いる原料や製造工程と
しても、通常の発酵乳等の製造に用いられているものな
どが利用できる。
しても、通常の発酵乳等の製造に用いられているものな
どが利用できる。
例えは、原料に用いる乳成分としては、ウシ、ヤギ、ヒ
ツジ等に由来する乳や、脱脂粉乳、粉乳、製乳などを用
いて調整された乳などが利用できる。
ツジ等に由来する乳や、脱脂粉乳、粉乳、製乳などを用
いて調整された乳などが利用できる。
なお、得られる培養物の形態に応じては、他の菌との混
合状態で本発明の乳酸菌を用いてもよい。例えは、発酵
乳の製造においては、スターターに、本発明の乳酸菌の
他に、得られる製品の風味やテクスチャーの調製のため
の他の乳酸菌等を含むものを利用しても良い。また、通
常用いられているスターターに本発明の乳酸菌を追加し
て発酵乳を得ることによって本発明の発酵乳を得ること
かてきる。
合状態で本発明の乳酸菌を用いてもよい。例えは、発酵
乳の製造においては、スターターに、本発明の乳酸菌の
他に、得られる製品の風味やテクスチャーの調製のため
の他の乳酸菌等を含むものを利用しても良い。また、通
常用いられているスターターに本発明の乳酸菌を追加し
て発酵乳を得ることによって本発明の発酵乳を得ること
かてきる。
[実施例]
以下参考例および実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
なお、以下において用いられる「%」は特に断わらない
限り重量/容量%を示す。
限り重量/容量%を示す。
参考例1
10%のスキムミルク培地(115℃、15分加熱滅菌
処理したもの) 180m1に、ロングフィルの20m
1を無菌的に加え、20℃で48時間培養し、得られた
発酵乳を凍結乾燥し、−30℃で保存した。
処理したもの) 180m1に、ロングフィルの20m
1を無菌的に加え、20℃で48時間培養し、得られた
発酵乳を凍結乾燥し、−30℃で保存した。
また、同様の加熱滅菌処理スキムミルクに、ロツピーヨ
ーグルト[メンケン(MENKEN)社(オランダ)製
]の20m1を無菌的に加え、40℃で5時間培養し、
得られた発酵乳を凍結乾燥し、−30℃で保存した。
ーグルト[メンケン(MENKEN)社(オランダ)製
]の20m1を無菌的に加え、40℃で5時間培養し、
得られた発酵乳を凍結乾燥し、−30℃で保存した。
次に、C57BL/6 (B6)マウス(雄、5週齢、
静岡県実験動物農業協同組合より人手)の腋下部皮下に
2 X 10”個のルイス肺癌細胞(東北大学附属抗酸
菌病研究所より人手)を移植し、上記のようにして得ら
れた2種の発酵乳の凍結乾燥試料をそれぞれ個々に用い
、9日間第1日目から毎日(50mg/kg10.1m
l生理食塩水)腹腔内投与した。
静岡県実験動物農業協同組合より人手)の腋下部皮下に
2 X 10”個のルイス肺癌細胞(東北大学附属抗酸
菌病研究所より人手)を移植し、上記のようにして得ら
れた2種の発酵乳の凍結乾燥試料をそれぞれ個々に用い
、9日間第1日目から毎日(50mg/kg10.1m
l生理食塩水)腹腔内投与した。
なお、対照マウスには、生理食塩水のみを投与した。
用いた試料の抗腫瘍活性は、以下の項目において対照群
と投与群を比較することによって評価した。得られた結
果を表1及び表2に示す。
と投与群を比較することによって評価した。得られた結
果を表1及び表2に示す。
移植局所腫瘍体積;
下記式(1)により移植局所腫瘍体積を算出した。
移植局所腫瘍体積V (cm”) == 1 / 2
a b2・・・(I) (a・腫瘍巣長径 b 腫瘍巣短径)移植局所腫瘍湿
重量及び肺への転移腫瘍巣数:投与後21ローに移植局
所腫瘍及び肺を摘出し、移植局所腫瘍湿重量及び肺への
転移腫瘍単数を測定した。
a b2・・・(I) (a・腫瘍巣長径 b 腫瘍巣短径)移植局所腫瘍湿
重量及び肺への転移腫瘍巣数:投与後21ローに移植局
所腫瘍及び肺を摘出し、移植局所腫瘍湿重量及び肺への
転移腫瘍単数を測定した。
表 1
亀
表 2
のマウスを用いた(N=6)。
実施例1
(本発明の乳酸菌の単離・同定)
ロングフィルを試料として用い以下の操作を行なった。
1)試料中の総画数の測定
ブリート(Breed)法を用いて菌塊法により測定し
た。その結果、総画数は4.3]X 108個/mlで
あった。
た。その結果、総画数は4.3]X 108個/mlで
あった。
2)試料中の生菌数の測定
以下の組成のM17培地に寒天(八gar No、l、
0xoid社製)を1.5重量/容量%の割合で加えた
M17寒天培地、及びに、生理食塩水で希釈したロング
フィル(希釈率: 10−’、1O−5及びI(1−6
)を塗抹し、30℃、2日間、ガスバック法(BBL社
製)で嫌気培養し、生じたコロニーの数と希釈倍率から
生菌数を算出した。その結果、生菌数は2.95X 1
08個/mlであった。
0xoid社製)を1.5重量/容量%の割合で加えた
M17寒天培地、及びに、生理食塩水で希釈したロング
フィル(希釈率: 10−’、1O−5及びI(1−6
)を塗抹し、30℃、2日間、ガスバック法(BBL社
製)で嫌気培養し、生じたコロニーの数と希釈倍率から
生菌数を算出した。その結果、生菌数は2.95X 1
08個/mlであった。
M1717培地:
ポリペプトン
(Po1ypeptone、B B L社製)
・5.[1gヒュトンペプトン (Phytone peptone、 B B L社製
) ・5.0g酵母エキストラクト (Yeast extract、大玉栄養化学社製)・
5.0gビーフエキストラクト (Beef extract、極東社製) −
2、5gD−グルコース
・・・5.0gアスコルビン酸
・・・0.5gβ−ジソディウム ダリセロホスフェー
ト(β−Disodium glycerophosp
hate ) =49.01、OM MgSO4・7H
20=弓、Omu水
・・・1 立(pH7,1) 3)菌株の分離 生菌数の測定において得られた寒天培地上のコロニーか
ら性状(コロニー形状は円形で半円形状に盛り上がって
おり、またその表面にツヤを有し、更に乳白色で糸を引
く粘性を有する)の同じ孤立コロニーを、釣菌分離した
。
・5.[1gヒュトンペプトン (Phytone peptone、 B B L社製
) ・5.0g酵母エキストラクト (Yeast extract、大玉栄養化学社製)・
5.0gビーフエキストラクト (Beef extract、極東社製) −
2、5gD−グルコース
・・・5.0gアスコルビン酸
・・・0.5gβ−ジソディウム ダリセロホスフェー
ト(β−Disodium glycerophosp
hate ) =49.01、OM MgSO4・7H
20=弓、Omu水
・・・1 立(pH7,1) 3)菌株の分離 生菌数の測定において得られた寒天培地上のコロニーか
ら性状(コロニー形状は円形で半円形状に盛り上がって
おり、またその表面にツヤを有し、更に乳白色で糸を引
く粘性を有する)の同じ孤立コロニーを、釣菌分離した
。
分離した株を構成する菌を顕微鏡で観察したところ、桿
菌の存在は認められず、いずれも第1図に示すように球
菌であった。
菌の存在は認められず、いずれも第1図に示すように球
菌であった。
得られた各株を個々に上述のM]7培地で30℃、72
時間培養し、更にM17培地を用いた30℃、2週間の
継代培養を行ない保存株とした。
時間培養し、更にM17培地を用いた30℃、2週間の
継代培養を行ない保存株とした。
4)菌株の同定
上記3)項て分離した各株のそれぞれを以下の同定試験
に供した。
に供した。
なお、試験はすべて二連で行なった。また、以下におけ
る各培養における温度は特に断らないかきり、分離の際
の培養と同じ温度(30℃)で行なった。更に、培地の
オートクレーブでの滅菌処理条件は、還元脱脂乳培地て
は、115℃、15分間、その他の培地では121℃、
15分間とし、液体培養は静置培養で行なった。
る各培養における温度は特に断らないかきり、分離の際
の培養と同じ温度(30℃)で行なった。更に、培地の
オートクレーブでの滅菌処理条件は、還元脱脂乳培地て
は、115℃、15分間、その他の培地では121℃、
15分間とし、液体培養は静置培養で行なった。
同定のための基準株は以下のとおりである。
a ) Lactococcus 1actis 5u
bsp、 1actis GIFLI8591”
(−NCDD 804−八TCC: ]9435)
b ) Lactococcus 1actis 5u
bsp、cremoris GIFu8590” (=
NCDO607) c )Stre tococcus 5aliva
rjs 5ubsp、thermo−1川1↓旦下
GIFU 8593” (=NCD0 573−八
TGC19258)[a ”−cはいずれも岐阜大学医
学部微生物教室から人手] d ) Lactococcus 1actis 5u
bsp、 1actis NCD017ti (=St
re tococcus 1actis 5ubsp、
di−基a刃A晧U) [AFRCIn5titute of Food Re
5earch、ReadjngLaboratory、
5hinfield、 Reading 、 Eng
landから人手] e ) Lactobacillus delbrue
ckii 5ubsp。
bsp、 1actis GIFLI8591”
(−NCDD 804−八TCC: ]9435)
b ) Lactococcus 1actis 5u
bsp、cremoris GIFu8590” (=
NCDO607) c )Stre tococcus 5aliva
rjs 5ubsp、thermo−1川1↓旦下
GIFU 8593” (=NCD0 573−八
TGC19258)[a ”−cはいずれも岐阜大学医
学部微生物教室から人手] d ) Lactococcus 1actis 5u
bsp、 1actis NCD017ti (=St
re tococcus 1actis 5ubsp、
di−基a刃A晧U) [AFRCIn5titute of Food Re
5earch、ReadjngLaboratory、
5hinfield、 Reading 、 Eng
landから人手] e ) Lactobacillus delbrue
ckii 5ubsp。
bularicus JCI41002T(=ATCC
11842) [理化学研究所微生物系統保存施設から
入手1 なお、l”T]はtype 5trainを示す。aと
eの培養は37℃て、またb−dは30℃で行なった。
11842) [理化学研究所微生物系統保存施設から
入手1 なお、l”T]はtype 5trainを示す。aと
eの培養は37℃て、またb−dは30℃で行なった。
(1)ダラム染色
保存株から採取した菌体を、M17培地て、72時間培
養して得られた培養液から菌体をスライドグラスに一白
金耳取り、Huckerの変力性によるグラム染色を行
なった。なお、比較対照のため、ダラム陰性菌(−)で
あるEscherichia並旦を用いて同様の操作を
行なった。
養して得られた培養液から菌体をスライドグラスに一白
金耳取り、Huckerの変力性によるグラム染色を行
なった。なお、比較対照のため、ダラム陰性菌(−)で
あるEscherichia並旦を用いて同様の操作を
行なった。
(2)カタラーゼ試験
スライドグラスに3%過酸化水素水を取り、これに保存
株から採取した菌体をM17培地で72時間培養して得
た培養液から菌体を一白金耳加え、気泡の発生の有無を
観察し、気泡を発生した場合をカタラーゼ陽性菌性(+
)と判定した。
株から採取した菌体をM17培地で72時間培養して得
た培養液から菌体を一白金耳加え、気泡の発生の有無を
観察し、気泡を発生した場合をカタラーゼ陽性菌性(+
)と判定した。
なお、比較対照のため、カタラーゼ陽性菌(+)である
Escherichia coliを用いて同様の操作
を行なった。
Escherichia coliを用いて同様の操作
を行なった。
(3) Haugh−LaifsonのO−F試験以下
に示ず組成のYeast Glucose Lemco
Agarを5mlずつ150 x 16mmの試験管
2本に入れ滅菌後、これらの試験管を直ちに氷水に入れ
て冷却し、培地を凝固させた。
に示ず組成のYeast Glucose Lemco
Agarを5mlずつ150 x 16mmの試験管
2本に入れ滅菌後、これらの試験管を直ちに氷水に入れ
て冷却し、培地を凝固させた。
次に、これら凝固培地に、保存株から採取した菌体なM
17培地で72時培養して得た培養液から菌体を白金線
に取り、穿刺植菌した。
17培地で72時培養して得た培養液から菌体を白金線
に取り、穿刺植菌した。
更に、2本の試験管の一方には、滅菌した流動パラフィ
ンを培地上に1〜2crrlの厚さの層となるように注
加した。
ンを培地上に1〜2crrlの厚さの層となるように注
加した。
7日間の培養後、菌体の生育及び培地の色の変化を観察
した。
した。
培地の色が紫色から黄色に変化した場合に酸の生成あり
、パラフィンを注加した試験管及び注加しない試験管の
両方で生育するものを発酵を行なう菌(F)、またパラ
フィンを注加していない試験管のみで生育するものを酸
化を行なう菌(0)と判定した。
、パラフィンを注加した試験管及び注加しない試験管の
両方で生育するものを発酵を行なう菌(F)、またパラ
フィンを注加していない試験管のみで生育するものを酸
化を行なう菌(0)と判定した。
Yeast Glucose Lemco Agar組
成:ペプトン(Trypticase peptone
、 −10,OgBBL社製) Lab−Lemco meat extract(La
b−Lemc。
成:ペプトン(Trypticase peptone
、 −10,OgBBL社製) Lab−Lemco meat extract(La
b−Lemc。
powder、 oxiod社製) −1
0,0g塩化ナトリウム ・・・ 5
.OgD−グルコース ・・・
5.0gイースト エキストラクト (大玉栄養化学社製) ・・・ 3.0g1
%ブロムクレゾール パープル (Bromcresol purple)溶tel
−4mJZ寒天 (Agar No、1,0xoid社製) ・
2.0g水
・・・ IJ2(pi(7,0) (4) llomoHomo型発酵I e t e r
o型発酵の判定150 X 16mmの試験管に、5
mlの以下に示す組成のGibson’ s Sem
1−5olid Tomato Juice Medi
umを入れて滅菌し、滅菌後は培地が凝固しないように
これを45℃に保温した。
0,0g塩化ナトリウム ・・・ 5
.OgD−グルコース ・・・
5.0gイースト エキストラクト (大玉栄養化学社製) ・・・ 3.0g1
%ブロムクレゾール パープル (Bromcresol purple)溶tel
−4mJZ寒天 (Agar No、1,0xoid社製) ・
2.0g水
・・・ IJ2(pi(7,0) (4) llomoHomo型発酵I e t e r
o型発酵の判定150 X 16mmの試験管に、5
mlの以下に示す組成のGibson’ s Sem
1−5olid Tomato Juice Medi
umを入れて滅菌し、滅菌後は培地が凝固しないように
これを45℃に保温した。
Gibson’ s Sem1−5olid Tom
ato Juice Medium組成: イースト エキストラクト (大玉栄養化学社製) ・・・2.5gD−グ
ルコース ・・・5Q、0gトマ
トジュース(pH6,5) −100mj
l!10%還元脱脂乳 (Reconst、1tuted skim m1lk
) −・・800muNutrient agar
−−−200+nJ2(pH6,
5) 次に、保存株から採取した菌体のM17培地ての72時
間前培養液(約0.5ml )を、上記の試験管中の培
地に加え攪拌後、冷水でこれを急冷した。
ato Juice Medium組成: イースト エキストラクト (大玉栄養化学社製) ・・・2.5gD−グ
ルコース ・・・5Q、0gトマ
トジュース(pH6,5) −100mj
l!10%還元脱脂乳 (Reconst、1tuted skim m1lk
) −・・800muNutrient agar
−−−200+nJ2(pH6,
5) 次に、保存株から採取した菌体のM17培地ての72時
間前培養液(約0.5ml )を、上記の試験管中の培
地に加え攪拌後、冷水でこれを急冷した。
更に、試験管内の菌体が加えられた凝固培地上に以下の
組成のNutrient 八garを2〜3cmの層厚
となるように注加した。
組成のNutrient 八garを2〜3cmの層厚
となるように注加した。
7日間の培養後、培地に亀裂や気泡の発生が認められる
場合をHetero型発酵、亀裂や気泡の発生が認めら
れない場合をHomo型発酵と判定した。
場合をHetero型発酵、亀裂や気泡の発生が認めら
れない場合をHomo型発酵と判定した。
Nutrient Agar組成;
ペプトン(Trypticase peptone、
・・・10.OgBBL社製) Lab−Len+co meat extract(L
ab−1、emc。
・・・10.OgBBL社製) Lab−Len+co meat extract(L
ab−1、emc。
powder、 oxiod社製) −1
0,0g塩化ナトリウム ・・・ 5
.0g寒天 (八gar No、l、0xoid社製) ・
15.0g水
・・・ 1k(pH7,2) (5)生育温度 以下に示ずYeast Glucose Lemco
Broth (150X16mm試験管中、5m1)
に保存株から採取した菌体を接種して72時間の前培養
を行ない、得られた培養液から菌体を三白金耳同様の培
地(150X1Bmm試験管中、5m1)に接種し、1
0±0.]℃で7日間培養した。
0,0g塩化ナトリウム ・・・ 5
.0g寒天 (八gar No、l、0xoid社製) ・
15.0g水
・・・ 1k(pH7,2) (5)生育温度 以下に示ずYeast Glucose Lemco
Broth (150X16mm試験管中、5m1)
に保存株から採取した菌体を接種して72時間の前培養
を行ない、得られた培養液から菌体を三白金耳同様の培
地(150X1Bmm試験管中、5m1)に接種し、1
0±0.]℃で7日間培養した。
Yeast Glucose Lemco Broth
組成;ペプトン(Trypticase pepton
e、 =・10.OgBBL社製) Lab−Lemco meat extract(
Lab−Le+nc。
組成;ペプトン(Trypticase pepton
e、 =・10.OgBBL社製) Lab−Lemco meat extract(
Lab−Le+nc。
powder、 ox iod社製) ・
10.0g塩化ナトリウム ・・・
5.OgD−グルコース ・・・
5.0gイースト エキストラクト ・・・
3.0g(大玉栄養化学社製) 水 ・・・
1u(pH7,0) 培養終了後、培養液の520nmでの濁度を測定し、対
照(菌体を接種していない培地)よりも0.27以上高
い場合に菌生育あり(つ と判定した。
10.0g塩化ナトリウム ・・・
5.OgD−グルコース ・・・
5.0gイースト エキストラクト ・・・
3.0g(大玉栄養化学社製) 水 ・・・
1u(pH7,0) 培養終了後、培養液の520nmでの濁度を測定し、対
照(菌体を接種していない培地)よりも0.27以上高
い場合に菌生育あり(つ と判定した。
更に、前培養を1096還元脱脂乳培地で48時間行な
い、得られた培養液から菌体を三白金耳生育試験用培地
としての以下の組成のLitmus Milk150
X 18mm試験管中、51T11)に接種したものを
3種用意し、それぞれを37±0.1.48時間; 3
9.5±0.1.48時間及び45±0.1℃、24時
間の各条件で培養した。
い、得られた培養液から菌体を三白金耳生育試験用培地
としての以下の組成のLitmus Milk150
X 18mm試験管中、51T11)に接種したものを
3種用意し、それぞれを37±0.1.48時間; 3
9.5±0.1.48時間及び45±0.1℃、24時
間の各条件で培養した。
Litmus Milk組成:
IO主還元脱脂乳
(Reconstituted skim m1l
k) −1f14主リドマス(Li tmus)溶
液 −101[11培養終了後、酸凝固が観察され
る場合を菌の生育あり(つ と判定した。
k) −1f14主リドマス(Li tmus)溶
液 −101[11培養終了後、酸凝固が観察され
る場合を菌の生育あり(つ と判定した。
(6) Na1l存在下での生育
M17培地にNa1lを2%、4%及び6.5%(いず
れも重量/容量%)となるように加えた培地(150X
16mm試験管中、5m1)を用意し、それぞわに保
存株から採取した菌体のM17培地での72時間の前培
養液の200μlを接種した。
れも重量/容量%)となるように加えた培地(150X
16mm試験管中、5m1)を用意し、それぞわに保
存株から採取した菌体のM17培地での72時間の前培
養液の200μlを接種した。
3日間の培養後、培養液の520nmでの濁度を測定し
、対照(菌体を接種していない培地)よりも0.27以
上高い場合に菌生育あり(+)と判定した。
、対照(菌体を接種していない培地)よりも0.27以
上高い場合に菌生育あり(+)と判定した。
(7) pH9,2での生育
M17培地と、緩衝7?!(グリシン 7.505g及
びNaCl ’ 5.85gに水を加え、全量を101
00Oとしたもの)とを6対40割合て混合し、更に該
混合液のpHを0.IN NaOHで9.2±0.02
に調整した。
びNaCl ’ 5.85gに水を加え、全量を101
00Oとしたもの)とを6対40割合て混合し、更に該
混合液のpHを0.IN NaOHで9.2±0.02
に調整した。
次に、pH調整した混合液をLABODISC−50J
P (02μm、東洋化学社製)で濾過滅菌し、その5
mlを15CIXl釦m試験管に入れた。
P (02μm、東洋化学社製)で濾過滅菌し、その5
mlを15CIXl釦m試験管に入れた。
これに、保存株から採取した菌体のM17培地での72
時間前培養液の200μmを接種し、3日間培養した。
時間前培養液の200μmを接種し、3日間培養した。
培養終了後、培養液の520nmでの濁度を測定し、対
照(菌体を接種していない培地て同様に上記培養条件下
に置いたもの)よりも0.27以上高い場合に菌生育あ
り(+)と判定した。
照(菌体を接種していない培地て同様に上記培養条件下
に置いたもの)よりも0.27以上高い場合に菌生育あ
り(+)と判定した。
なお、調製した培地は48時間以内に使用し、対照培地
は30℃の条件下に3日間置く前と、置いた後のpHを
測定し、そのpHが0.04以上に下がっていないこと
を確認した。
は30℃の条件下に3日間置く前と、置いた後のpHを
測定し、そのpHが0.04以上に下がっていないこと
を確認した。
(8)アルギニンからのNH3の生成
L−アルギニン モノハイドロクロライド(L−Arg
inine monohydrochloride)を
0.3%の濃度となるようにM17培地に加え、そのp
Hを7.1に再調整した溶液の5mlを150 X 1
Bmm試験管に入れ、滅菌処理した。
inine monohydrochloride)を
0.3%の濃度となるようにM17培地に加え、そのp
Hを7.1に再調整した溶液の5mlを150 X 1
Bmm試験管に入れ、滅菌処理した。
次に、保存株から採取した菌体のM17培地での72時
間前培養液の200μ(を上記M1?培地を用いて調製
した溶液に接種し、2日間の培養を行な)た。
間前培養液の200μ(を上記M1?培地を用いて調製
した溶液に接種し、2日間の培養を行な)た。
培養終了後、培養液1mlにNe5sler試薬1ml
を加え、赤褐色の沈殿が生じた場合を陽性(つとした。
を加え、赤褐色の沈殿が生じた場合を陽性(つとした。
(9)クエン酸からのガス産生
■θ%還元脱脂乳を試験管(150x 16++++n
、スクリューキャップ付き)に10.5ml入れ滅菌し
た。これに滅菌した10%Sodium citrat
e dihydrate溶液(p117.0)を0.5
ml加え混合した後、30分間放置した。
、スクリューキャップ付き)に10.5ml入れ滅菌し
た。これに滅菌した10%Sodium citrat
e dihydrate溶液(p117.0)を0.5
ml加え混合した後、30分間放置した。
次に、保存株から採取した菌体のM]7培地での72時
間前培養液の100μmを上記試験管内の溶液に加え、
更に加温した2%寒天(Agar No、] 、0xo
id社製)溶液を加え加温下てよ〈混合した後冷却した
。
間前培養液の100μmを上記試験管内の溶液に加え、
更に加温した2%寒天(Agar No、] 、0xo
id社製)溶液を加え加温下てよ〈混合した後冷却した
。
これを3日間培養し、培地に亀裂や気泡の発生が認めら
れた場合を陽性(+)とした。
れた場合を陽性(+)とした。
(10)乳酸の旋光性
乳酸の旋光性は、保存株から採取した菌体のM17培地
ての72時間前培養菌体及びIloehringer−
Mannhaim・山之内のF−kit 1act、i
c acid (製品番号139084)を用いて判
定した。
ての72時間前培養菌体及びIloehringer−
Mannhaim・山之内のF−kit 1act、i
c acid (製品番号139084)を用いて判
定した。
なお、D−乳酸の定量は、D−LDH(Boehrin
ger−Mannhaim・山之内、製品番号1069
41)を用いて行なった。
ger−Mannhaim・山之内、製品番号1069
41)を用いて行なった。
(11)莢膜多糖生産性
先に述べた生菌数の測定において得られた寒天培地上の
コロニーから単一に釣菌分離した菌を顕微鏡で観察し、
第1図に示すように球菌の周囲に莢膜多糖の生産を示す
白い部分が存在するかどうかを観察した。
コロニーから単一に釣菌分離した菌を顕微鏡で観察し、
第1図に示すように球菌の周囲に莢膜多糖の生産を示す
白い部分が存在するかどうかを観察した。
第1図に示すように球菌の周囲に白い部分が存在する場
合を莢膜多糖生産性あり(+)とした。
合を莢膜多糖生産性あり(+)とした。
以上の各試験を行なった結果、分離された株の75木は
表3に示すように基準菌としての陸且ニーcoccus
1actis 5ubsp、cremoris GI
FU 8590Tとの対比からLactococcus
1actis 5ubsp、 cremorisであ
り、残りの25亀は表4に示すように基準菌としてのL
actcoccus 1actis 5ubsp、1a
ctis GTFU859]Tとの対比からLact
coccus Iactis 5ubsplactis
であることが同定された。
表3に示すように基準菌としての陸且ニーcoccus
1actis 5ubsp、cremoris GI
FU 8590Tとの対比からLactococcus
1actis 5ubsp、 cremorisであ
り、残りの25亀は表4に示すように基準菌としてのL
actcoccus 1actis 5ubsp、1a
ctis GTFU859]Tとの対比からLact
coccus Iactis 5ubsplactis
であることが同定された。
そこで、これらをLactococcus 1acti
s 5ubsp。
s 5ubsp。
cremoris 8a−18bM(FERM P−
9986)、 Lactcoccuslactis 5
ubsp、1actis Lf;S5−2(FERP−
9987)と命名した。
9986)、 Lactcoccuslactis 5
ubsp、1actis Lf;S5−2(FERP−
9987)と命名した。
これらの乳酸菌株は、通産省工業技術院微生物工業技術
研究所に、上記のFERM P一番号で昭和63年4月
12日付で寄託されている。
研究所に、上記のFERM P一番号で昭和63年4月
12日付で寄託されている。
表 3
試験項目 分離株 Ty
pe 5train GIFtl 8590Tり′ラム
染色 +
十カタラーゼ試験 −−0−F
試験 F
Fグルコースの発酵 11omo
Hom。
pe 5train GIFtl 8590Tり′ラム
染色 +
十カタラーゼ試験 −−0−F
試験 F
Fグルコースの発酵 11omo
Hom。
生育温度
10 ℃ 士
士37 ℃ +
+39.5℃
−−45℃ −−Na
C]存在下での生育 2X NaC1+ +
a NaC1+ −6,
5% NaC1−− pH9,2での生育 −−アルキニ
ンからのNH3の生成 −−クエン酸からのカス
産生 −−乳酸の旋光性
L L表 4 試験ffU目 分離株
Type 5train GIFU 859]Tグラ
ム染色 +
+カタラーゼ試験 −−生育
温度 10 ℃ +
や39.5℃ +
+45 ℃
−−NaC1存在下での生育 2% Na1l +
+4%Na1l + 十 6、!A; NaC1−− アルギニンからのNH3の生成 +
+クエン酸からのCO2の生成 −−
pH!i、2ての生育 +
+乳酸の旋光性 L
(+) L(+)グルコースか
らの002の生成 −−運動性
−−莢膜多糖の生産性
十 −分離株の同定
1、Iactisり6 実施例2 Lactococcus Iactis 5ubsp、
cremoris 8a−18bM及びLactcoc
cus Iactjs 5ubsp、Iactis L
C5−2をそれぞれ個々に、20%還元脱脂乳の透析外
液(還元脱脂乳の透析内液と透析外液としての蒸留水と
の比は1:1)に1%トリプチケースペプトンを添加し
た培地で20℃、2日間培養した後、培養液を遠心分離
(12,OOOrpm 、30分)し、得られた沈殿物
(菌体を含む)を蒸留水て洗浄後、直ちに凍結乾燥した
。以下の抗腫瘍試験の試料とした。
士37 ℃ +
+39.5℃
−−45℃ −−Na
C]存在下での生育 2X NaC1+ +
a NaC1+ −6,
5% NaC1−− pH9,2での生育 −−アルキニ
ンからのNH3の生成 −−クエン酸からのカス
産生 −−乳酸の旋光性
L L表 4 試験ffU目 分離株
Type 5train GIFU 859]Tグラ
ム染色 +
+カタラーゼ試験 −−生育
温度 10 ℃ +
や39.5℃ +
+45 ℃
−−NaC1存在下での生育 2% Na1l +
+4%Na1l + 十 6、!A; NaC1−− アルギニンからのNH3の生成 +
+クエン酸からのCO2の生成 −−
pH!i、2ての生育 +
+乳酸の旋光性 L
(+) L(+)グルコースか
らの002の生成 −−運動性
−−莢膜多糖の生産性
十 −分離株の同定
1、Iactisり6 実施例2 Lactococcus Iactis 5ubsp、
cremoris 8a−18bM及びLactcoc
cus Iactjs 5ubsp、Iactis L
C5−2をそれぞれ個々に、20%還元脱脂乳の透析外
液(還元脱脂乳の透析内液と透析外液としての蒸留水と
の比は1:1)に1%トリプチケースペプトンを添加し
た培地で20℃、2日間培養した後、培養液を遠心分離
(12,OOOrpm 、30分)し、得られた沈殿物
(菌体を含む)を蒸留水て洗浄後、直ちに凍結乾燥した
。以下の抗腫瘍試験の試料とした。
得られた凍結乾燥試料を以下に示す抗腫瘍活性試験に用
いた。
いた。
〔固型Sarcoma−180を使用した抗腫瘍試験〕
固型Sarcoms−180(I X 10”個/匹、
0日月、東北大学附属抗酸菌病研究所より人手)を腋下
部皮下に移植したMale (雄) ICRマウス[
船橋農場(千葉)より人手、5週齢、lO匹/群]に上
記の凍結乾燥試料をそれぞれ個々に1日日から9日間毎
日その腹腔内に投与した(2.10及び50mg/kg
/per dose 、0.1ml生理食塩水)。
固型Sarcoms−180(I X 10”個/匹、
0日月、東北大学附属抗酸菌病研究所より人手)を腋下
部皮下に移植したMale (雄) ICRマウス[
船橋農場(千葉)より人手、5週齢、lO匹/群]に上
記の凍結乾燥試料をそれぞれ個々に1日日から9日間毎
日その腹腔内に投与した(2.10及び50mg/kg
/per dose 、0.1ml生理食塩水)。
21日目に固体腫瘍を各マウスから摘出し、その重量を
測定することにより、以下の式から増殖抑制(*)を算
定した。
測定することにより、以下の式から増殖抑制(*)を算
定した。
〔腹水系Sarcoma−180を使用した抗腫瘍試験
〕1復水系Sarcoma−180(I X 106個
/匹、0日月、東北大学附属抗酸菌病研究所より人手)
を腹腔内に移植したMale (雄) TCRマウス〔
船橋農場(千葉)より人手、5週齢、10匹/群〕に上
記で得た凍結乾燥試料を1日日から9日間毎日その腹腔
内に投与した(50mg/Kg/per、dose、
O,1ml、生理食塩水) 対照群(投与しないもの)と投与群のそれぞれの生存日
数から対照群に対する投与群の延命効果(*)(投与群
の生存日数/対照群の生存日数)を算出して各試料の抗
腫瘍活性を評価した。
〕1復水系Sarcoma−180(I X 106個
/匹、0日月、東北大学附属抗酸菌病研究所より人手)
を腹腔内に移植したMale (雄) TCRマウス〔
船橋農場(千葉)より人手、5週齢、10匹/群〕に上
記で得た凍結乾燥試料を1日日から9日間毎日その腹腔
内に投与した(50mg/Kg/per、dose、
O,1ml、生理食塩水) 対照群(投与しないもの)と投与群のそれぞれの生存日
数から対照群に対する投与群の延命効果(*)(投与群
の生存日数/対照群の生存日数)を算出して各試料の抗
腫瘍活性を評価した。
得られた結果を表5及び6に示す。
表5
投与量 Sarcoms−180固形腫瘍の増殖抑制
(%) LC5−2] Omg/kg 4650mg
/kg 52 8a−18bM 2mg/kg 47
50mg/kg55 表6 投与量 Sarcoma−180腹水腫瘍での延命効
果(%) LC5−250mg/kg142 8a−18bM 50mg/kg180実施例3 1800mlの温水に対して脱脂粉乳200gの割合と
なるようにこれらを混合溶解した溶液を加熱状態にある
容器内に入れて、約90℃にて15分間煮沸殺菌した。
(%) LC5−2] Omg/kg 4650mg
/kg 52 8a−18bM 2mg/kg 47
50mg/kg55 表6 投与量 Sarcoma−180腹水腫瘍での延命効
果(%) LC5−250mg/kg142 8a−18bM 50mg/kg180実施例3 1800mlの温水に対して脱脂粉乳200gの割合と
なるようにこれらを混合溶解した溶液を加熱状態にある
容器内に入れて、約90℃にて15分間煮沸殺菌した。
殺菌終了後、約25℃になるまで溶液を冷却したところ
で、この溶液に以下に示す操作で調製したスターター約
30gを攪拌下で加えた後、20℃で20時間放置して
発酵させて発酵乳とした。
で、この溶液に以下に示す操作で調製したスターター約
30gを攪拌下で加えた後、20℃で20時間放置して
発酵させて発酵乳とした。
スターターの調製;
脱脂粉乳10%溶液を調製し、これを121℃で10分
間滅菌処理した。
間滅菌処理した。
この滅菌処理した溶液に、Lactococcus 1
actissubsp、 1actis LC5−2を
接種し、20℃で48時間の培養を行ないスターターを
得た。
actissubsp、 1actis LC5−2を
接種し、20℃で48時間の培養を行ないスターターを
得た。
得られたスターターは、0.05%となるようにL−ア
スコルビン酸ナトリウムを添加して、窒素ガスの封入を
行なフて5℃て保存した。
スコルビン酸ナトリウムを添加して、窒素ガスの封入を
行なフて5℃て保存した。
実施例4
Lactococcus 1actis 5ubsp、
1actis LC5−2の代りにLactococ
cus 1actis 5ubsp、 cremori
s 8a−18bMをスターターの調製に用いる以外は
実施例3と同様にして発酵乳を得た。
1actis LC5−2の代りにLactococ
cus 1actis 5ubsp、 cremori
s 8a−18bMをスターターの調製に用いる以外は
実施例3と同様にして発酵乳を得た。
実施例5
1000mlの温水に対して脱脂粉乳200gの割合と
なるようにこれらを混合溶解した溶液を加熱状態にある
容器内に入れて、約90℃にて15分間煮沸殺菌した。
なるようにこれらを混合溶解した溶液を加熱状態にある
容器内に入れて、約90℃にて15分間煮沸殺菌した。
殺菌終了後、約25℃になるまで溶液を冷却したところ
で、この溶液に以下に示す操作で調製したスターター約
30gを攪拌下で加えた後、20℃で18時間放置して
発酵させて発酵乳とした。
で、この溶液に以下に示す操作で調製したスターター約
30gを攪拌下で加えた後、20℃で18時間放置して
発酵させて発酵乳とした。
こうして得られた発酵乳に、別途調製したシロップ(1
震のショ糖水溶液を90℃、20分の条件て殺菌処理し
、20℃に冷却したもの)を、発酵乳:シロップ−30
: 70 (重量)の割合で混合して発酵乳製品を得た
。
震のショ糖水溶液を90℃、20分の条件て殺菌処理し
、20℃に冷却したもの)を、発酵乳:シロップ−30
: 70 (重量)の割合で混合して発酵乳製品を得た
。
スターターの調製:
脱脂粉乳10%溶液を調製し、これに蛋白分解酸素を0
.05%の濃度となるように加え、50℃で3.5時間
反応させて蛋白質を分解させた後、これにショ糖オレイ
ン酸エステルを0゜1%の濃度となるように加え、 1
21℃で10分間殺菌処理した。
.05%の濃度となるように加え、50℃で3.5時間
反応させて蛋白質を分解させた後、これにショ糖オレイ
ン酸エステルを0゜1%の濃度となるように加え、 1
21℃で10分間殺菌処理した。
この滅菌処理した溶液に、1、actococcus
1actissubsp、 1actis LC5−2
及びLactococcus 1actissubsp
、cremoris 8a−18bM (1: 1混
合)を接種し、20℃で48時間の培養を行ないスター
ターを得た。
1actissubsp、 1actis LC5−2
及びLactococcus 1actissubsp
、cremoris 8a−18bM (1: 1混
合)を接種し、20℃で48時間の培養を行ないスター
ターを得た。
得られたスターターは、005%となるようにL−アス
コルビン酸ナトリウムを添加して、窒素カスの封入を行
なって5℃で保存した。
コルビン酸ナトリウムを添加して、窒素カスの封入を行
なって5℃で保存した。
実施例6
以下の組成を有する組成物を加圧滅菌処理(121℃、
10分間)し、これにLactococcus Iac
tissubsp、 cremoris 8a−18b
Mを接種し、20℃、60時間の培養を行なった。
10分間)し、これにLactococcus Iac
tissubsp、 cremoris 8a−18b
Mを接種し、20℃、60時間の培養を行なった。
組成物組成:
脱脂粉乳 150g
ブドウ糖 30g
NaC13g
に2HPO41g
酵母エキストラクト 2g
Mg5[]4・71120 1gFe5
0.+・7H200,03g 水 1 立 (pH7
,0)得られた培養物800m1に対し、ショ糖200
g、Na1l 2g 、香料15m1及び酸味料(コハ
ク酸、クエン酸及びヒタミンCの混合物)2mlを添加
し、更に滅菌水を加えて全体を]000m1として原液
を得た。
0.+・7H200,03g 水 1 立 (pH7
,0)得られた培養物800m1に対し、ショ糖200
g、Na1l 2g 、香料15m1及び酸味料(コハ
ク酸、クエン酸及びヒタミンCの混合物)2mlを添加
し、更に滅菌水を加えて全体を]000m1として原液
を得た。
得られた原液に、該原液の2倍容量の滅菌水を更に加え
て、ミキサーて細粉・混和して、乳酸菌飲料を得た。
て、ミキサーて細粉・混和して、乳酸菌飲料を得た。
実施例7
脱脂乳(無脂乳固形分含量8%) 300kgに水10
0kgを加え、無脂乳固形分含量を6%に調整し、これ
を85℃で15分間殺菌処理し、40℃まで冷却した。
0kgを加え、無脂乳固形分含量を6%に調整し、これ
を85℃で15分間殺菌処理し、40℃まで冷却した。
これとは別に、12kgの殺菌した脱脂乳(無脂乳固形
分含量8%)にLactococcus Iactis
5ubsp。
分含量8%)にLactococcus Iactis
5ubsp。
cremoris 8a−18bMを接種し、20℃、
18時間培養して前培養液を調整した。
18時間培養して前培養液を調整した。
次に、先に調製した脱脂乳にこの前培養液の全量を加え
、約20分間攪拌して均一に混合した後、20℃で48
時間発酵を行ない、発酵乳約400gを得た。得られた
発酵乳の乳酸酸度は1.48%であフた。
、約20分間攪拌して均一に混合した後、20℃で48
時間発酵を行ない、発酵乳約400gを得た。得られた
発酵乳の乳酸酸度は1.48%であフた。
更に、水940 ILに砂糖180gを添加し、80℃
で10分間殺菌し、30℃に冷却してシロップを調製し
た。
で10分間殺菌し、30℃に冷却してシロップを調製し
た。
このシロップに先に得た発酵乳375kgを加え、攪拌
して均一に混合し、更に香料1.5kgを添加した後、
]00kg/cm2の圧力下て無菌的に均質化し、無脂
乳固形分を1.5%含有する乳酸菌飲料約1450kg
を得た。
して均一に混合し、更に香料1.5kgを添加した後、
]00kg/cm2の圧力下て無菌的に均質化し、無脂
乳固形分を1.5%含有する乳酸菌飲料約1450kg
を得た。
[試験結果]
実施例3、実施例4及び実施例5で調製した発酵乳を凍
結乾燥し、−30℃で保存し、これを以下の試験に供与
するサンプルとした。
結乾燥し、−30℃で保存し、これを以下の試験に供与
するサンプルとした。
次に、固型Sarcoms−180(1x 106個/
匹、01目、東北大学附属抗酸菌病研究所より人手)を
腋下部皮下に移植したMale (雄) IGRマウ
ス[船橋農場(千葉)より人手、5週齢、10匹/群]
に上記の凍結乾燥試料をそれぞれ個々に1白目から15
日間毎日経口投与した(800mg/kg/per d
ose、0.1ml生理食塩水)。
匹、01目、東北大学附属抗酸菌病研究所より人手)を
腋下部皮下に移植したMale (雄) IGRマウ
ス[船橋農場(千葉)より人手、5週齢、10匹/群]
に上記の凍結乾燥試料をそれぞれ個々に1白目から15
日間毎日経口投与した(800mg/kg/per d
ose、0.1ml生理食塩水)。
21日ロー固体腫瘍を各マウスから摘出し、その重量を
測定することにより、下記式から増殖抑制を求めた。
測定することにより、下記式から増殖抑制を求めた。
得られた結果を表7に示す。
表 7
[発明の効果]
本発明により抗腫瘍活性を有する新たな乳酸菌株が提供
された。
された。
これらの乳酸菌株の抗腫瘍活性は、例えば抗腫瘍剤や腫
瘍発生予防等の分野において、あるいは抗腫瘍活性のあ
る乳酸飲料や発酵乳の製造に好適に利用でき、本発明に
よって乳酸菌の抗腫瘍活性の各種分野での実用化が促進
され得る。
瘍発生予防等の分野において、あるいは抗腫瘍活性のあ
る乳酸飲料や発酵乳の製造に好適に利用でき、本発明に
よって乳酸菌の抗腫瘍活性の各種分野での実用化が促進
され得る。
第1図は図面代用のロンクツイル由来の球菌の顕微鏡写
真である。
真である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1)抗腫瘍活性成分を産生することを特徴とする乳酸菌
ラクトコッカスラクチスサブスペ シーラクチス。 2)抗腫瘍活性成分を産生することを特徴とする乳酸菌
ラクトコッカスラクチスサブスペ シークレモリス。 3)請求項1及び/または請求項2に記載の乳酸菌を培
養して得たことを特徴とする抗腫瘍活性を有する培養物
。 4)乳成分を含む培地に請求項1及び/または請求項2
に記載の乳酸菌を含むスターターを加えて発酵させた発
酵乳である請求項3記載の培養物。 5)請求項1及び/または請求項2に記載の乳酸菌を培
養する過程を含むことを特徴とする抗腫瘍活性を有する
培養物の製造方法。 6)前記乳酸菌の培養過程が乳成分を含む培地に請求項
1及び/または請求項2に記載の乳酸菌を含むスタータ
ーを加えて発酵を行なう過程である請求項5記載の培養
物の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63105400A JPH01277484A (ja) | 1988-04-30 | 1988-04-30 | 抗腫瘍活性を有する乳酸菌株およびその培養物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63105400A JPH01277484A (ja) | 1988-04-30 | 1988-04-30 | 抗腫瘍活性を有する乳酸菌株およびその培養物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01277484A true JPH01277484A (ja) | 1989-11-07 |
Family
ID=14406582
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63105400A Pending JPH01277484A (ja) | 1988-04-30 | 1988-04-30 | 抗腫瘍活性を有する乳酸菌株およびその培養物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH01277484A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5424201A (en) * | 1990-05-31 | 1995-06-13 | Sapporo Breweries Limited | Method for preparing an antitumor dextran using Lactobacillus confusus |
WO2007007562A1 (ja) | 2005-07-08 | 2007-01-18 | Morishita Jintan Co., Ltd. | ビフィドバクテリウム属の微生物が産生する多糖 |
-
1988
- 1988-04-30 JP JP63105400A patent/JPH01277484A/ja active Pending
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5424201A (en) * | 1990-05-31 | 1995-06-13 | Sapporo Breweries Limited | Method for preparing an antitumor dextran using Lactobacillus confusus |
US5484715A (en) * | 1990-05-31 | 1996-01-16 | Sapporo Breweries Limited | Method for preparing an antitumor dextran using a dextran synthetase from Lactobacillus confusus |
WO2007007562A1 (ja) | 2005-07-08 | 2007-01-18 | Morishita Jintan Co., Ltd. | ビフィドバクテリウム属の微生物が産生する多糖 |
US8022049B2 (en) | 2005-07-08 | 2011-09-20 | Morishita Jintan Co., Ltd. | Polysaccharide produced by microorganism belonging to genus Bifidobacterium |
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