JPH01270643A - 検体検査方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は検体検査方法、特にラテックス粒子等の担体粒
子を用いた免疫検査に関する。

［従来の技術］ 従来、免疫検査法としてラテックス粒子等の担体粒子を
所定の抗体で感作したものと被検試料を混合して、感作
した抗体が特定しようとする抗原が被検試料に含まれて
いた場合、抗原抗体反応か起きて担体粒子同志が結合し
、担体粒子の凝集状態から抗原の有無或いは抗原の量を
測定する方法が用いられてきた。その際、担体粒子の凝
集状態を判別する方法は、担体粒子を含む懸ｆＡ液の光
透過度や光散乱の程度の測定により行なっていた。

特にフローサイトメトリ法を用いて、即ち前記懸濁液を
シース液で包んで流体力学的に収斂させて検査位置に個
々の担体粒子を順次流し、検査位置の担体粒子に光ビー
ムを照射して、散乱する散乱光の強度から担体粒子の大
きさを判断することにより、個々の担体粒子の凝集状態
か判断てき、抗原の有無或いは抗原の量を算出して、精
度の高い測定か可能であっフこ。

上記従来例では１種類の抗体を感作した担体杓子しか使
えないのて、−度に１種類の抗原の検査しかできず、犬
ｆ検診等の際に効率化の妨げになっていた。そこて本願
出願人は特願昭６３−３３４８２にて、同時に複数種類
の抗原又は抗体の有無、或いは抗原又は抗体の量か測定
可能な検体検査方法を提案した。

［発明の目的コ 本発明は前記引例の検体検査方法の更なる改良を行ない
、測定精度を高める検体検査方法の提供を目的とする。

［目的を達成するための手段コ 上述した目的を達成するため本発明は、第１の抗体又は
抗原か支持され第１の光学特性を備える同−粒子径の第
１の担体オ☆子と、第２の抗体又は抗原か支持され第２
の光学特性を備える同−粒子径の第２の担体粒子とを被
検試料と混合させ、前記担体粒子を検査位置に組状流し
、該検査位置に流される前記担体粒子に光を照射し、前
記担体粒子から第１の方向と第２の方向へ散乱される光
を各々測光し、該測光される第１、第２の光の強度より
サイ［・ダラムを求めて前記担体粒子の凝集状態及び粒
子種類を検知し、面記被検試料内の抗原又は抗体を検査
する検体検査方法において、前記第１の相体粒子と前記
第２の担体粒子のそれぞれのね予行及び光学物・目か前
記ザイトダラム上て分離されるような組合わせを選択す
る。

［実施例］ 第１図は本発明の実施例の構成図である。

本実施例においては担体粒子として有機高分子物質の微
粒子であるラテックス杓子を用いたか、これには限定さ
れず、例えはシリカ、シリカ−アルミナ、アルミナ等の
；１ｊ［機酸化物、鉱物粉末、金属、ざらに）川・つ球
菌や細胞膜片等も使用可能である。

抗体て感作された複数種のラテックス杓子に血清等の被
検試料を添加したサンプル液の入フたザンブル？１り容
器１５ど、シース液である蒸留水の入ったシース液容器
１４は各々加圧されて、サンプル液かシース液に包まれ
て細い流れに収斂されてフローセル４内の流通部のほぼ
中央部を通過する。

この時サンプル液に含まれる個々のラテックス粒子は分
粗さねて１粒或いは凝集した１塊ずつ順次流れる。この
ラテックス粒子の流れに対して、レーザ光源１から出射
されたレーサ光かシリントリ力ルレンス？、３の組によ
って任怠の形状に収斂され１１へ射される。ラテックス
粒子に照射される光ヒームの形状は流れに対して横長の
楕円形状である。これはサンプル液の流れの位置か変動
しても流れるラテックス粒子にほぼ均一の強度で光ヒー
ムか照射されるようにするためである。

前記ラテックス粒子に光ヒームか照射されると散乱光か
発する。また蛍光測定のためにサンプル液試料を蛍光染
色した場合には同時に蛍光も発生ずる。前記１１９．乱
光の内、光路）１τｊ方方向に発−う−る前方散乱光は
集光レンズ５、光検出器６によって測光される。なお照
射された光ヒームか直接、光検出器６に入射するのを［
５５＜ため光路中集光レンズ５の前方に不図示のストッ
パを設けて直接光を除去している。光検出器６の出力は
演算回路１６に人力される。また前記１１り乱光の内、
光路に直交場−る側方方向に発する側方散乱光は集光レ
ンズ７て集光され、タイクロイックミラー８て反射され
て光検出器１１て測光される。一般には側方散乱光を測
光する方向は本実施例のように直交方向であることか多
いか、直交には限定されず例えは４５度方向や［ｉＯ度
方向等であっても良い。またサンプル液試料を蛍光染色
した際に散乱光と共に発生ずる微弱な蛍光を測光するた
め、集光レンズ７によって集光されタイクロイックミラ
ー８を通過した蛍光の内、タイクロイックミラー９、光
検出器１２の組によって緑色蛍光か検出さね、全反射ミ
ラー１ｏ、光検出器１３の組によって赤色蛍光か検出さ
れる。各光検出器の前には各波長域の光のみを１Ｍ過さ
せるためのバントパスフィルタ２＋、２２．２３か設置
されている。光検出器１１．１２．１３の信号は演算回
路１６に人力され、該演算回路にて粒子解析の演算か行
なわれる。

サンプル液容器１５には、それぞれ特定の抗体で感作さ
れた光透過度、粒子径の異なる３種類のラテックス粒子
か混在し、これに被検試料である血清を加えたものかサ
ンプル液として入っている。

このラテックス粒子は、同一種のものは光透過度及び粒
子径か共に等しい。ここでラテックス粒子に感作された
抗体と血清中の抗原とか合致した場合、抗原抗体反応か
起きて同し種類のラテックス粒子同志かくっついて凝集
する。

このサンプル液の流れに光ヒームを照射して前方散乱光
の強度及び側方散乱光の強度から抗原抗体反応検出を行
なう方法を第２図ないし第９図を用いて説明する。

第２図ないし第４図、及び第８図は同一粒子径で光透過
度か異なる３種類のラテックス粒子に別々の抗体を感作
したものを用いた時の解析結果である。

ある種類のラテックス粒子を流したとき、抗原抗体反応
によって凝集した粒子による前方散乱光のヒストグラム
は、第２図（ａ）のように表わされる。図中、横軸は光
検出器６によって測光される前方散乱光（ＦＳ）の強度
、縦軸は粒子の個数（Ｎ）である。前方散乱光強度は粒
子径に依存するため、ラテックス粒子は凝集によって見
かけ上の大きさが変化し、グラフ上てＩ、、Ｉ２，１３
のように分離して表示される。これらはそれぞれラテッ
クス粒子の凝集数が１個、２個、３個であると考えられ
る。

第２図（ｂ）は側方散乱光のヒストグラムてあり、横軸
は光検出器１１によって測光される側方散乱光（ＳＳ）
の強度、縦軸は粒子の個数（Ｎ）である。側方散乱光強
度は粒子の光透過度によって変化するため、凝集によっ
て凝集塊の光透過度か変化し、グラフ上でＪ、、Ｉ２．
Ｉ３のように分離して表示される。

この両ヒストグラムを１つまとめて表示したサイトダラ
ムか第２図（Ｃ）である。図中、横軸は側方散乱光強度
、縦軸は前方散乱光強度である。第２図（ａ）の■、と
第２図（ｂ）のＪｌとは同一粒子によるものであり、ま
た同様に■２Ｊ２及びＩ３．Ｉ３の組も同一の粒子塊に
よるものである。よってサイトグラム上には側方散乱光
かＪｌて、前方散乱光か１１の粒子の群と、側方散乱光
かＩ２て前方散乱光か１２の群、側方散乱光かＩ３て前
方散乱光がＩ３の群というように３つの群か表われる。

これは粒子か各々１個あるいは２個、３個の凝集状態で
あると判断することかてきる。以上は抗原抗体反応か起
きて粒子か凝集した場合の説明であるか、目的とする抗
原か存在せず凝集か起きなかった場合は、凝集によるＩ
２、Ｉ２，１３Ｊ３はグラフ上に表われず、Ｉ、、Ｊ。

のみとなる。また４個以上の大きな凝集塊か存在する場
合は第２図（Ｃ）の各群を結ぶ破線上に表われる。以上
のようにサイトグラム上に表われる群を見ることによっ
て、求める抗原の存在を検出することかできる。

同様に前記ラテックス粒子と粒子径が同一で、光透過度
の異なる別の種類のラテックス粒子を用いて、−抗原か
存在した場合には第３図、第４図に示すようなヒストグ
ラム及びサイトダラムを得ることかできる。

第８図は第２図（Ｃ）、第３図（Ｃ）、第４図（ｃ）の
サイトグラ１２を１つにまとめたものである。第８図の
サイトダラムにおいて、各破線上にある群は同一の抗原
（抗体）に関する情報である。これは種類の抗体に対す
る抗原かすべて存在したときのホ吉果である。

ここてＷに示すウィンドウ処理を行なうことにより、こ
のウィンドウ中にある粒子の数（カウント数）を調べる
ことは一般に良く用いられる方法である。しかしながら
、第８図の場合は粒子径か同一で光透過度が異なる、す
なわち前方散乱光強度はほぼ同等で、側方散乱光強度の
みか異なるラテックス粒子を選択しているために、サイ
トグラム上で各群が接近しており、一部では重なって表
示されてしまっている。このためウィンドウ処理か難し
い。

そこてサイトグラム上に各群か広かりで現われるように
、光透過度と共に粒子径も異なるラテックス粒子を選択
する。第５図は前方散乱光強度（ＦＳ）が小さく、側方
散乱光強度（ＳＳ）は大きな出力の出るラテックス粒子
によるもの、第６図はＦＳか太きくＳＳも大きいラテツ
ク７、粒子、第７図はＦＳか太きくＳＳは小さいラテッ
クス粒子によるものである。このような組合わせの３種
類のラテックス粒子を選択することによって、得られる
サイトダラムは第９図のように各群か広く分離され、ウ
ィンドウ処理のしやすいヅイトグラムを得ることができ
る。

なお本実施例においては３種類の光透過度の異なるラテ
ックス粒子を用いたか、４種類以上を同時に測定するこ
とも可能であるし、また２種類であれは一層明確に区別
することかてきる。

なお本実施例ではラテックス杓子に抗体を感作させたか
、これとは逆にラテックス粒子に抗原を感作させて抗体
を含む被検試料を加えて検査することによって、特定の
抗体の識別をすることも可能である。

［発明の効果］ 以上本発明によれは、同時に複数種の抗原抗体反応を識
別することか可能であり、タイ１−クラム上て各抗原抗
体反応かはっきりと分離されて現われるため、ウィンド
つ処理かしやずく測定）ｌ’＋度の高い粒子解析が可能
となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例の構成図、第２図ないし第９図
は散乱光測定データの分１１１図である。 １・・・レーザ光源、２．３・・・シリンドリカルレン
ズ、４・・フローセル、５．７・・・集光レンズ、６．
１１．１２．１３・・・光検出器、８．９・・・タイク
ロイックミラー、１０・・・全反射ミラー、１４・・・
シース液容器、１５・・ザンブル液容器、１６・・演算
回路 ２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　〉第
３０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　第１の抗体又は抗原が支持され第１の光学特性を備
   える同一粒子径の第１の担体粒子と、第２の抗体又は抗
   原が支持され第２の光学特性を備える同一粒子径の第２
   の担体粒子とを被検試料と混合させ、前記担体粒子を検
   査位置に順次流し、該検査位置に流される前記担体粒子
   に光を照射し、前記担体粒子から第１の方向と第２の方
   向へ散乱される光を各々測光し、該測光される第１、第
   ２の光の強度により前記担体粒子の凝集状態及び粒子種
   類を検知し、前記被検試料内の抗原又は抗体を検査する
   検体検査方法において、 前記第１の担体粒子と前記第２の担体粒子のそれぞれの
   粒子径及び光学特性の組み合わせが前記凝集状態及び粒
   子種類の検知の際、明確に区別されるような組合わせで
   あることを特徴とする検体検査方法。