JPH01253654A - 安定なラテックス試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は非特異的凝集及び自然凝集を防ぐことができる
安定なラテックス試薬に関する。

従来の技術及び発明が解決しようとする課題ラテックス
（Ｌａｔ、ｅｘ）凝集反応を利用する測定項目には、ラ
テックスに抗原を感作させた受身凝集反応法によるＲ八
（リウマチ様定性因子）、ＡＳＯ（溶血性連鎖球菌の生
産する菌体外溶血素、５ｔｒｅｐＬｏｌｙｓｉｎＯに対
する抗体価）等があり、一方抗体を感作させた逆受身凝
集反応法によるＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白）、八ＦＰ（α−
７エトプロテイン）など゛が挙１ヂられる。

しかも従来のプレー）　（ｐｌａｔｅ）上のマニュアル
反応から光学機器を利用したラテックス比濁法が開発さ
れるに到り、高感度な系が確立され、測定対象もより拡
大されつつある。特に逆受身凝集反応によるラテックス
凝集比濁法は抗体を調製すれば生体内の対象（抗原）が
測定可能であるがゆえに巾広い項目が期待されている。

しかしラテックスに感作された抗体、特にＩｇＧは固体
への吸着の際に変性が生じ、安定性の低下か起る。その
ような非特異的凝集の増加は光学的測定法の場合、感度
に影響が多（Ｓ／Ｎ比を低下させていた。試薬を評価す
る際、Ｓ／Ｎ比（Ｓ：５ｐｅｃｉｆｉｃ　ａｇｇｌｕｔ
ｉｎａｔｉｏｎ＋　Ｎ：Ｎｏｎ−５ｐｅｃｉｆｉｃ　ａ
ｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ）が大きいことが常に必要と
され、又試薬化の技術もいかにＳ／Ｎ比を太きく　１−
１しがも一定にするかが問題とされていた。又試薬の保
存中にも凝集が認められ、いわゆる自然凝集が発生する
。これらの非特異的凝集あるいは自然２疑集には物理的
攪拌で分散する程度の凝集か呟物理的攪拌では元通りに
分散出来ない強固なものまで認められる。特に後者の場
合は使用の際試薬を攪１′１゛する程度では尼にもどら
ないため、反応に影響をＪｊえ、感度、特異性に著しい
影響をりえる結果となる。

従来知られている安定化を［１的とした添加物としては
ソンウノ、ポリアネｌ−レスルホネート（特公昭６Ｏ−
４７５５２）、ショ糖、塩化ごｊリン（特公昭５９−２
４３８７）、グリシン及びデキストラン（特開昭５５−
３０６５４　）などが知られているか、いずれも物理的
撹拌で分散する程度の凝集の安定化には効果が認められ
るものの強固な非特異凝集及び自然凝集には効果かなか
った。

昧頌濠Ｍ犬↓Ａ力や９」１又 本発明者らは、強固な自然凝集か被感作■ｇＧのメルカ
プト基（−３ｌｔ基）か関すし、ノスルフィＩζ’（−
Ｓ−３−）交換反応によることを明らかにした。そこで
防禦法としでメルカプ１基フロノＡンク剤、還元剤であ
るンスルフィト゛開裂剤（例えばフチオスレイ１−ル、
２−メルカプトエチルアミン、亜硫酸、チオグリコール
酸）を４種または２種以上添加することにより強固なＪ
１特異的凝集及び自然凝集を防ぐことを０Ｊ能とし、本
発明を完成した。

本発明にかかわるラテックスの種類はポリスチレン、ポ
リプロピレン、ポリアセタールなどラテックス凝集反応
に用いられる全てのラテックスに適用可能であり、又本
発明にかかわる測定順［１は、抗体免疫グロブリンを感
作する全ての試薬に適用可能て′ある。又、ラテックス
と抗体の結合は物理的吸着または化学的モ１４合のいず
れでもよい。

本発明にががわる凝集防１１−剤の使用濃度は防止剤の
種類によっても異なるか通常０．Ｏｌ、＋ｎＭ〜５０　
＋ｎ　Ｍであり、好ましくは０．０５＋ｎＭ〜１．Ｏ＋
ｏＨの濃度範囲で添加するのがよい。以下に本発明の実
施例を例示するとともに従来法との比較試験を示し、貝
８体的に説明する。

実施例１ 直径０．２μのポリスチレン粒子の２％懸濁液（１，、
ａｔｅｘ）　１容に、ポリスチレン粒子１ｍ１Ｂ当り２
００μｇになるようにヒトガンマ−グロブリン溶液を加
え、よく混合した後、室温で１〜２時間攪拌後、遠心分
離（１，ＯＯＯＯｒｐｍ＋３０分）で上清を除く。次い
で残漬物に０．０２％ＢＳ八を含むグリシン緩衝液（ｐ
Ｈ８，２）を加え、均一に分散させ、再度遠心分ｉ！Ａ
ｔ（ｌｏｏｏｏｒｐｍ、　３０分）を行い上清を除外、
残渣物に２％庶糖、１％ＢＳΔ、０．１％Ｎ州、を含む
グリシン緩衝液（ｐＨ８，２）を加え。

均一に分散させＲ△テスＩ・用のラテックス試薬（対照
品）とする。

このラテックス試薬に、２−メルカプ］・エチルアミン
を］、ＯｍＭとなるように加え、改良ラテックス試薬と
する。（保存安定性評価） （１）濁度変化 ラテックス試薬１００Ｉｎを１）ＢＳ　６００μりで希
釈し、光路長２＋ｎｍのセルを用いて６］Ｏｍｎで測光
し、濁度変化を調べた結果、表１に示す通り対照ラテッ
クス試薬は９か月日（２〜］０°Ｃ保存）からやや濁度
の上昇か認められ、１３か月では著しく」二昇した。し
カル改良ラテックス試薬は、１３か月「Ｉでも吸光度の
変化は認められず、安定であった。

表１（濁度変化） −−−−−−−−−−−−−づ巻均し一一−−−−−−
−−−−開始時３ケ月６ケ月９ケ月１３ケ月 改良試薬　０．４０７　０．４０９０，４０６０．４１
５０．４２７対照試薬　０．４１．７　０，４２８０，
４４００．４６６０．６６５（２）凝集性変化 健常者のｎｎ清５例とＲΔ患者３例を用い、各検体５０
１１１と各ラテックス試薬５０μａをガラス′Ｉ５す定
板上に採り、混合攪拌後１分後の凝集の有無を目視で判
定した所、表２に示す辿り、調製時（０が月日）は両う
テックス試薬共健常者血清は陰性、ＲＡ患者は陽性を示
したか、１３が月ＩＪでは対照品にのみ健常者血清が陽
性を示し、非特異的凝集の発生が認められた。

ヌ・Ｊ照試薬検体１　−−−−　± ２　　−−−−＋ ３　　−−−−＋ ４　−−−−十 ５−±−±十 ６　　　　＋　　十　　十　　十　　十７　　　　＋＋
十十十 ８＋　　　十　　十　　十　　十 改良試薬検体］、−−−−− ６＋十十＋十 ７　　　　＋十十＋十 ８　　　　＋十＋＋十 十二明らかな凝集あり。

ｍ：凝集は全く認められない。

±：明らかな凝集ではないがザラツキが認められる 末検体１〜５は健常者であり、検体６へ・８はＲΔ患者
実施例２ 実施例１で述べた方法に準して、直径０．４μのポリス
チレン粒子を用いたラテックス試薬を調製し、次いで２
−メルカプ）・エチルアミン（１０＋ｎＭ、、　５　＋
ｎＭ）、デイチオスレイトール（１０＋ｎＭ、　　５ｍ
Ｍ、　０．５ｍＭ、　０．０５ｍＭ、　０，００５ｍＭ
）、亜硫酸（１０ｍＭ、　５　＋ｎＭ）、チオグリフー
ル酸（ｌｏｍＭ、５　＋ｏＭ）を各々カッコ内に示した
濃度になるよう加え、２〜ＩＯ’Ｃに保存し、１が月後
の濁度の変化を調べた所、表３に示す通り対照は着しい
濁度の上昇が認められた。又、デイチオスレイトール１
０ｍＭでは、還元力が強すぎるため、γ−グロブリンの
変性に伴い、白濁から沈澱を生じたが、適当量の還元剤
を加えたラテックス試薬（２−メルカプトエチルアミン
５　ｍＭ、　１０ｍＭ、デイチオスレイト−ル０．５ｍ
ｌづ−０，０５ｆｎＭ、チオグリコール酸１０＋ｎＭ−
５ｍＭ）はほとんど濁度が変化せず、安定であることが
示された。

表３ 添加条件　　　　　　　　　　　吸光度開始時　１が月
後 対照　　　　　　　　　　０．５１２　０．６５６メル
カプトエチルアミン１０「ｎＭ　　／７　　　０．５２
４５ｍＭ　　／／　　　　０．５３７ テ゛イチオスレイト−ル１０ＩｏＭ　　／ｌ　　　　白
濁５ｍＭ　　／ｌ　　　　Ｏ，４９４ ０、５ｍＭ　　　ｔｔ　　　　０．５０６０、０５＋ｎ
Ｍ　　　ｈ　　　　Ｏ，５９５０，００５ｍ１づ〃０．
６０７ 亜硫酸　　　　　　１．ｏｎ＋Ｍ　　／ｌ　　　　０．
６００５＋ｎＨ／／　　　　０，６５０ チオグリコール酸　　］、Ｏ＋ｎＭ　　ｈ　　　　Ｏ，
５０９５＋ｎＭ　　’７　　　０．５４３ 発明の効果 本発明により測定誤差の少ない優れたラテックス試薬を
提供することかできる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ジスルフィド結合開裂剤、メルカプト基ブロッキング剤
   から選ばれた少なくとも１つを非特異凝集又は自然凝集
   防止剤として含有するラテックス試薬。