JPH01186820A

JPH01186820A - 悪性腫瘍治療剤

Info

Publication number: JPH01186820A
Application number: JP63007499A
Authority: JP
Inventors: Kaku Katou; 加藤　革; Satoshi Nakamura; 聡中村; Tsukio Sakugi; 柵木　津希夫; Kazuo Kitai; 北井　一男; Kenji Yone; 米　賢二; Jun Suzuki; 純鈴木; Yataro Ichikawa; 市川　弥太郎
Original assignee: Teijin Ltd
Current assignee: Teijin Ltd
Priority date: 1988-01-19
Filing date: 1988-01-19
Publication date: 1989-07-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】イ１発明の目的［産業上の利用分野］本発明は、腫瘍壊死因子またはそれと同様の活性を呈す
る腫瘍壊死因子改変体（以下これらをＴＮＦと総称する
〉および組織プラスミノーゲン活性化因子またはそれと
同様の活性を呈する組織プラスミノーゲン活性化因子改
変体（以下これらをｔ−ＰＡと総称する）、′ウロキナ
ーゼまたはそれと同様の活性を呈するウロキナーゼ改変
体（以下これらをＵＫと総称する）、ストレプトキナー
ゼまたはそれと同様の活性を呈するストレプトキナーゼ
改変体（以下これらをＳＫと総称する）、プラスミンま
たはそれと同様の活性を呈するプラスミン改変体（以下
これらをＰＮと総称する）、プラスミノーゲンまたはそ
れと同様の活性を呈するプラスミノーゲン改変体（以下
これらをＰＧと総称する）およびリポプロテインリパー
ゼまたはそれと同様の活性を呈するリポプロティンリパ
ーゼ改変体（以下これらをＬＰＬと総称する）よりなる
群（Ａ成分）から選ばれた少なくとも一種の活性増強成
分とを有効活性成分として含有する抗腫瘍性医薬組成物
に関する。

また本発明はＴＮＦをｔ−ＰＡ、ＵＫ、ＳＫ。

ＰＮおよびＰＧよりなる群（Ｂ成分）から選ばれた少な
くとも一種の活性増強成分で予め前処理した成分を有効
活性成分として含有する抗腫瘍性医薬組成物に関する。

［発明の背景］ＴＮＦは文献［Ｅ、Ａ、Ｃａｒｓｗｅｌｌら、ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ。

ＡＣａｄ、　Ｓｃｉ、、　Ｕ、Ｓ、＾、、　７２．３８
６６〜３６７０　（１９７５）］ニ記載されているよう
に、例えばｃｏ−ｉ　５ＷｉＳＳマウスにＢＣＧを接種
して約２週間後にエンドトキシンを静脈内に注射するこ
とによって該マウス血清中に誘導される）ｆｅｔｈ　Ａ
肉種出血性壊死能を有する因子に与えられた名称である
。生体におけるＴＮＦ産生はマウスの以外にも、ラット
、家兎、ヒトにおいても認められている［原中勝征、Ｔ
ＮＦ−腫瘍壊死因子−、医事新報社４１〜１０８頁（１
９８４）］。

最近になって、ヒトＴＮＦのアミノ酸配列、遺伝子配列
が解明され［０，Ｐｅｎｎ１Ｃａら、Ｎａｔｕｒｅ。

’ａｉｐ　　７２４〜７２９　（１９８５）、Ｔ、５ｈ
ｉｒａｉら、Ｎａｔｕｒｅ。

３１３　８０３〜８０６　（１９８５）、＾、　Ｈ，Ｗ
ａｎＱら、５ｃｔｅｎｃｅ。

２２８、１４９〜１５４　（１９８５）］　、３ｉ伝子
組換えヒトＴＮＦ（以下、ｒＨｕ−ＴＮＦと略称するこ
とがある）の臨床研究（臨床第工相試験・第■相試験）
が精力的に推進されている。当初、ＴＮＦは、正常細胞
に対しては障害作用を示すことなく、腫瘍細胞に対して
のみ選択的に細胞障害作用を示すことが強く期待されて
きたが、ｒＨＬＪ−ＴＮＦの使用が可能となった１９８
６年以降、ＴＮＦの基礎および臨床研究は著しく進展し
、現在では、ＴＮＦは強力かつ多面的゛な作用を有する
重要なホルモンであることが解明されつつある［石田名
香雄ら、バイオホロニクス・プロジェクト・シンポジウ
ム・マクロファージ１９Ｂ７〜ｒｕｍｏｒ　５ｅｃｒｏ
ｓｔｓ　ｒａｃｔｏｒ　、セラビューティンク・リサー
チ、７巻２号２３１〜４１４頁（１９８７）］。例えば
脂肪細胞の脂肪酸代謝抑制作用［Ｂ、Ｂｅｕｔｌｅｒ　
＆　Ａ、Ｃｅｒａｍｉ、　Ｎａｔｕｒｅ、　３２０．５
８４〜５８８　（１９８６）、Ｊ、Ｓ、　ＰａｔｔＯｎ
ら、Ｐｒ０Ｃ，Ｎａｔｌ、　ＡＣａｄ。

Ｓｃｉ、、　ｔｌ、３．Ａ、、　８３．８３１３〜８３
１７　（１９８＆）　、Ｈ。

Ｋａｗａｋａｍｉら、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　！ｕＬ
３３１〜３３Ｂ　（１９８７）ｌ、正常線維芽細胞の増
殖促進作用［Ｊ、Ｖｉｌｆｆｅｋら、Ｊ、　ＥＸｐ、　
Ｗｅｄ、、　１６３　６３２〜６４３　（１９８６）］
　、好中球の血管内皮細胞への付着促進作用［Ｈ，ＰＯ
ｈｌｍａｎら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３６．４５
４８〜４５５３　（１９８６）　、Ｊ、Ｒ。

Ｇａ１ｌ）　Ｉ　ｅら、ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　ＡＣ
ａｄ、　ＳＣｉ、、Ｕ、Ｓ、＾、、　８２゜８６６７〜
８６７１　（１９８５）］、好中球によるスーパーオキ
サイド分泌促進作用［Ｓ、Ｊ、旧ｅｂａｎｏｆｆら、Ｊ
。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３６．４２２０〜４２２５　（
１９８Ｂ）　、Ｈ。

ＴＳｕｊ　ｉｍｏｔｏら、Ｂｉｒｃｈｅｎ、　Ｂｒｏｐ
ｈｙｓ、　ＲｅＳ、ＣＯｍｍＵｎ、。

１３７　１０９４〜１１００　（１９８Ｂ）］、血管内
皮細胞の凝固活性六進作用［Ｐ、Ｐ、ＮａＷｒＯｔｈ　
＆　Ｄ、Ｍ、５ｔｅｒｎ　、　Ｊ。

Ｅｘｐ、　Ｗｅｄ、、　１６３．７４０〜７４５　（１
９８６）、Ｈ，Ｐ。

Ｂｅｖｉ　１ａｃｑｕａら、ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　
ＡＣａｄ、　ＳＣｉ、、υ、Ｓ、°＾、。

８３、４５３３〜４５３７　（１９８６月、軟骨細胞で
の破骨活性六進作用［Ｄ、　Ｒ，ＢｅｒｔＯＩ　１ｒｌ
ｉら、Ｎａｔｕｒｅ、　３１９　５１６〜５１８　（１
９８６）、Ｊ、５ａｋｌａｔｖａｌａ１Ｎａｔｕｒｅ、
　３２２　５４７〜５４９　（１９８６）、Ｂ、　Ｈ，
Ｔｈ０１１１ＳＯｎら、ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

ｙ棧よ７７５〜７７９　（１９８７）］　、　Ｉ　Ｌ−
１の産生誘導作用［Ｐ、　Ｐ、　Ｎａｗｒｏｔｈら、Ｊ
、　ＥＸｐ、　Ｈｅｄ、、　１６３　１３６３〜１３７
５　（１９８６）］、プロスタグランジン類の産生誘導
作用［Ｈｏにａｗａｋａｎ＋ｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｍｍｕｎ、、　１４１．４８２〜４８７　（１９８
６）、Ｊ、Ｍ、　Ｄａｙｅｒら、Ｊ、　ＥＸＩ）、　Ｒ
ｅｄ、、　１６２．２１６３〜２１６８　（１９８６月
、細菌感染時のエンドトキシン・ショック・メデイエー
タ−作用［に、Ｊ、ＴｒａＣｅＶら、５ｃｉｅｎｃｅ、
　２３４．４７０〜４７４、　（１９８６）　、Ｂ、Ｂ
ｅｕｔｌｅｒら、５ｃｉｅｎｃｅ、　２２９゜８６９〜
８７１　（１９８５）］　、発熱作用［Ｃ，＾、Ｄｉｎ
ａｒｅｌｌＯら、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｈｅｄ、、　１６３
．１４３３〜１４５０　（１９８６）］、局所シュワル
ツマン反応惹起作用［８，Ｊ、　Ａｖｅｒｂｏｏｋら、
Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、ム３３３〜３４２
　（１９８７）］、チトクロームＰ４５０依存性の薬物
代謝活性の抑制作用［Ｐ、　ＧｈｅＺＺ　ｉら、Ｂｉｒ
ｃｈｅｎ、　Ｂｔｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

ＣＯｍｍｕｎ、、　１３６．３１６〜３２１　（１９８
６）］　、筋細胞膜電位の脱分極作用［に、Ｊ、’ｒｒ
ａｃｅｙら、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｒｅｄ、。

１６４、１３６８〜１３７３　（１９８６）１などの多
様な作用が知られてきた。さらに、敗血症で死亡した患
者の血清中からＴＮＦが検出され、４４００／ｄ　（ｒ
　Ｈｕ　−ＴＮ　ＦｌｏｏＩＸＩ　／ｄに相当）以上の
血清レベルの患者は全て死亡したと指摘する報告もある
［　Ａ、　Ｗａａｉｊら、１ａｎｃｅｔ、　！、　（８
５２９）　Ｆｅｂ、　１４．３５５〜３５７（１９８７
）］　、　Ｌ／たがって、ＴＮＦを抗腫瘍剤として用い
る場合、抗腫瘍作用以外の多様な作用が副作用として全
体に惹起される恐れが予想される。

［従来の技術］ＴＮＦの制癌剤としての臨床応用においては、局所投与
では効果が見られるものの、全身投与の効果は期待され
たほどではなかった［田口鉄男、癌と化学療法、１３巻
１１号３４９１〜３４９７頁（１９８６）、田口鉄男、
バイオセラピー、１巻１号３１〜３７頁（１９８７）、
Ｍ、　Ｂｌ　ｉｃｋら、ＣａｎＣｅｒ　Ｒｅｄ、、　４
ム２９Ｂ６〜２９８９（１９８７）］。

したがって、ＴＮＦと他のリンフ才力インや化学療法剤
のような制癌剤との併用による相加・相乗効果により、
抗腫瘍作用を増強し、その波及効果である相対的な副作
用の軽減を実現する試みが為されてきた。

例えば、ＴＮＦの抗腫瘍作用を増強するために、マイト
マイシン−Ｃ（以下、ＭＭＣと略称することがある）、
アドリアマイシン、サイクロフォスフアミドなどの各種
抗腫瘍化ゆ療法剤との併用投与の基礎研究が行われ、併
用効果が認められた［中田勝久ら、癌と化学療法、１３
巻１１号３１６８〜３１９３頁（１９８６）］　。

また、インターフェロン、特にインターフェロン−γ（
以下、ＩＦＮ−γと略称することがおる）によるＴＮＦ
の抗腫瘍効果増強作用も認められた［　Ｂ、　Ｄ、　Ｗ
ｉ　ｌ　Ｉ　ｉａｍｓｏｎら、ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ
、　　＾ｃａｄ、　ＳＣｉ、。

Ｕ、　Ｓ、＾、、　８０．５３９７〜（１９８３）、Ｌ
、　ＦｒａｎＳｅｎら、Ｅｕｒ。

Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ　＆　Ｃｌ１ｎ、　０ｎｃｏ１．、２
２　４１９〜（１９８）　、Ｗ。

Ｆｉｅｒｓら、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ
　Ｓｙｍｐｏｓｉａ　ｏｎＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　
Ｂｉｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ、Ｌｌ、　５８７〜５９５（
１９８６）］。

しかしながら、これらの試みの効果は充分なものではな
く、ＴＮＦ抗腫瘍作用増強のための併用剤は、それら自
体が抗腫瘍剤であるために、腫瘍のみならず生体に対し
ても毒性を相加・相乗的に発揮する恐れがめった。

ＴＮＦの抗腫瘍効果の作用機序はまだ完全には解明され
てはいないが、ＴＮＦは細胞代謝、特にリソシームとの
強い関連が示唆された。すなわち、リソシームの不安定
化がＴＮＦの細胞障害作用の−Ｉを担っている可能性が
推測された［例えば、Ｈ，Ｒ，Ｒｕｆｆ１！：Ｇ、Ｅ、
Ｇｉｆｆｏｒｄ　、　Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　Ｖｏｌ、
２．ｅｄ。

ｂｙ　Ｅ、Ｐｉｃｋ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ
、　Ｎ、Ｙ、　２３５〜２７２（１９８１）、Ｆ、　Ｃ
，にｕｌｌ、Ｊｒ、　＆　ｐ、ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ
、　ｃａｎｃｅｒＲｅｓ、、　４１．４８８５〜４８９
０　（１９８１）　、原中勝征、メビオ、３巻２号２７
〜３５頁（１９８Ｂ）、渡辺直樹ら、医学の歩み、１４
２巻２＠１０５〜１０６　（１９８７）、辻本雅文、蛋
白質核酸酵素、３２巻５号３８６〜３９５頁（１９８７
）］。

一方、リンパ球、単球由来のリンフ才力インであるＴＮ
Ｆとは全く異なる抗腫瘍作用メカニズムを有すると考え
られる微生物由来の抗生物質であるＭＭＣについては、
ＵＫあるいは硫酸デキストラン（以下ＤＳと略称するこ
とがある）とを併用投与することによって、ＭＭＣ単独
投与の場合と比較して、抗腫瘍効果が増強し、生存期間
の延長をもたらすことが明らかにされた［例えば、仁井
谷久暢、日本癌治療学会誌、４巻特別号３５〜３９頁（
１９８９）、仁井谷久暢、代謝、９巻４号２８８〜２９
４頁（１９７２）、仁井谷久暢、最新医学、２８巻５号
９１２〜９１９頁（１９７３）、谷口猛、日本癌治療学
会誌、７巻４号２９０〜３０９頁（１９７２）］。この
ような研究により、ＭＭＣによる腫瘍細胞障害の初期段
階で、細胞内顆粒のリンシーム破壊に起因すると考えら
れるリソシーム内酵素の著明な増加が明らかにされた。

ざらには、ＰＮあるいはＬＰＬのリソシーム不安定化作
用も明らかにされた。また、ｉｎ■籾において、ＤＳ、
ヘパリン（以下ＨＰと略称することがある）、インシュ
リン（以下ＩＮＳと略称することがある）お°よびアポ
リポプロティンＣＩｒ（以下Ａ−ＣＩＩと略称すること
がある）はＬＰＬの、またＵＫ、ＳＫおよびｔ−ＰＡは
ＰＮの活性をそれぞれ六進することが知られている。従
って、ＵＫ、ＤＳ、ＨＰ、ＬＰＬあるいはＰＮによるＭ
ＭＣの抗腫瘍作用増強効果の作用機構としては、ＭＭＣ
とりソゾーム不安定化剤とが協同的に腫瘍細胞内リンシ
ームを破壊することによって抗腫瘍作用増強効果を発現
する可能性が示唆された［例えば、仁井谷久暢ら、「血
栓症の治療−現状と将来−」、松岡松三ら編、９７〜１
０３頁、医事出版社（１９８１）、仁井谷久暢、「抗癌
剤の効果増強とターゲツティング療法」塚腰茂ら編、１
８７〜１９３頁、サイエンスフォーラム（１９８７）］
。

０００発の構成［問題を解決するための手段］そこで、本発明者は、この様な知見に基づき、ＴＮＦの
活性を増強し、その波及効果である相対的な副作用の軽
減を実現するためには、ＴＮＦと低毒性の活性増強成分
とを組み合わせてなる有効活性成分を含有する悪性腫瘍
治療剤、あるいはＴＮＦを低毒性の活性増強成分で前処
理した成分を有効活性成分として含有する悪性腫瘍治療
剤の開発が重要であるとの観点に立ち、本来全く異なる
抗腫瘍作用発現機構を有すると考えられるリンフ才力イ
ンであるＴＮＦおよび抗生物質であるＭＭＣが抗腫瘍作
用発現メカニズムの一部においてリソシーム不安定化と
密接に関連している点で類似性があることに着目し、そ
のものには直接的な毒性および抗腫瘍効果がない多数の
リンゾーム不安定化剤群についてＴＮＦの活性増強効果
を鋭意スクリーニングしたところ、意外にも全てのりソ
ゾーム不安定化剤について該作用が認められるわけでは
なく、ごく少数の限られた薬剤についてのみ、ＴＮＦ活
性増強効果を認めるに至り、本発明を完成した。

本発明の特異な点は、抗腫瘍剤であるＴＮＦと、元来そ
れ単独では抗腫瘍効果を期待できない活性増強成分群を
構成する組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナー
ゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミン、プラスミノーゲ
ン、リポプロティンリパーゼおよびこれらと同様の活性
を呈するこれらの改変体よりなる群（Ａ成分）から選ば
れた少なくとも一種類の成分を組み合わせることにより
、あるいはＴＮＦを組織プラスミノーゲン活性化因子、
ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミン、プラ
スミノーゲンおよびこれらと同様の活性を呈するこれら
の改変体よりなる群（Ｂ成分）から選ばれた少なくとも
一種の活性増強成分で予め前処理することにより、著明
な抗腫瘍効果の増強を実現できることにある。

本発明の抗腫瘍性医薬粗生物中の活性増強成分の含有量
はそれぞれ下記の量が適当である。

該ｔ−ＰＡを含有する場合において、その含有比はＴＮ
ＦＩＸ１０４〜５Ｘ１０Ｓ　Ｕに対し１〜１０ｍｇが適
当である。該ＵＫを含有する場合において、その含有比
はＴＮＦ１ｘ１０４〜５Ｘ１０５Ｌ＋に対し４Ｘ１０４
〜６．４　ｘｉｏｓ　Ｕが適当である。該ＳＫを含有す
る場合において、その含有比はＴＮＦ１Ｘ１０４〜５Ｘ
１０５Ｕに対し１Ｘ１０４〜３Ｘ１０５Ｕが適当である
。該ＰＮを含有する場合において、その含有比はＴＮＦ
１ｘ１０４〜５Ｘ１０５Ｕに対し１×１０４〜５Ｘ１０
５Ｕが適当である。該ＰＧを含有する場合において、そ
の含有比はＴＮＦ１ｘ１０４〜５Ｘ１０５ｔＪに対し’
１Ｘ１０４〜５Ｘ１０５（Ｊが適当である。該ＬＰＬを
含有する場合において、その含有比はＴＮＦ１ｘ１０４
〜５Ｘ１０５Ｕに対し１０〜１０３　ｔＪが適当である
。

本悪性腫瘍治療剤を投与することにより、腫瘍サイズま
たは腫瘍細胞数を減少させ、担癌動物あるいは癌患者の
生存期間を延長する。本悪性腫瘍治療剤の治療効果は、
ＴＮＦの単独投与の時よりも大きく、ＴＮＦ活性増強成
分群を構成する（Ａ成分）から選ばれた少なくとも１種
類の成分だけを投与した場合には治療効果はほとんどな
い。゛本発明のＴＮＦ成分として、ｒｌ−１ｕ−ＴＮＦ
を投与する場合には、公知のように、単回投与における
最大安全耐容量は５Ｘ１０５　Ｕ／７Ｆ！　（単位尻は
担腫瘍温血動物の体表面積を示す二以下同様、ヒトの場
合的１．５７Ｆｆ／ｂｏｄＶ）であり、好ましくは１．
５〜５ｘ１０５　Ｕ／ｍの範囲が用いられる［田口鉄男
、セラビューティック・リサーチ、７巻２号３２８〜３
３５頁（１９８７）、漆崎−朗、セラビューティック・
リサーチ、７巻２号３３６〜３４２頁（１９８７）］。

本発明のＴＮＦ活性増強成分（Ａ成分）のうら、医薬品
としての使用実績があるｔ−ＰＡ、ＵＫ。

ＳＫおよびＰＮを投与する場合、自体公知のように、ｔ
−ＰＡの投与量については、１〜１０ｍｇ／　ｒＩｔ／
ｈｒ、　、好ましくは５〜１０ｍＭ　ｍ／ｈｒ、の範囲
が用いられ［例えば、上嶋繁ら、バイオメゾイカ、２巻
７号６５４〜６５９頁（１９８７）］　、ＵＫの投与量
については、４Ｘ１０４〜６．４　Ｘ１０５　Ｕ／ｒｄ
／回、好ましくは４Ｘ１０４〜１．６　Ｘ１０５　Ｕ／
ｒｄ／回の範囲が用いられ［例えば、水島裕ら著、「今
日の治療薬（１９８６年版）　Ｊ　２２３〜２２８頁、
南江堂（１９８６）］、ＳＫの投与量については、１Ｘ
１０４Ｕ〜３Ｘ１０５Ｌｌ／Ｔｄ／ｈｒ、　、好ましく
は初回に１〜１．６　Ｘ１０５Ｕ／ｙＦ！を５％ブドウ
糖液２００　ｒＩｔｌで３０分かけて点滴静脈注射後、
１〜１．６　ｘｌＯ５ＬＪ／ｍ／ｈｒ、で点滴静脈注射
し［例えば、山村雄−ら著、「酵素療法」２９４頁南江
堂（１９６９）］　、ＰＮの投与量については、ｌＸ１
０４　Ｕ　〜５Ｘ１０５　Ｕ／ｙｄ／ｈｒ、　、好まし
くは３．３　Ｘ１０４　Ｕ／ｒｄを５％ブドウ糖液２５
０　ｍで６０分かけて点滴静脈注射する［例えば、山村
雄−ら著、「酵素療法」３３９頁南江堂（１９６９）］
。

本発明のＴＮＦ活性増強成分（Ａ成分）のうち、医薬品
としての使用実績のない、ＰＧまたはＬＰＬは、生体が
生理学的に許容し傅る範囲内の投与量を投与することが
できる。例えば、日本人の場合、血清ＬＰＬ正常値は９
±３　Ｌｌ　／ｄｌ　（４００±１５０　Ｕ／ｂｏｄｙ
相当）　［村瀬敏部ら、「血漿リポタンパク」、原一部
ら編、講談社すイエンテイフイク（１９８３）］である
。

本悪性腫瘍治療剤の投与量は、腫瘍発生部位。

組織像、病期、前治療履歴の内容によって変わるが、１
回当りの投与量は低量から開始し、例えば主としてＴＮ
Ｆに起因する血圧低下、血小板減少。

ＧＯＴ／ＧＰＴの一過性上昇、主としてｔ−ＰＡ。

ＵＫ、ＳＫ、ＰＮおよびＰＧに起因する出血傾向、主と
してＬＰＬに起因する血糖値や血清グリセリド値の正常
値範囲からの逸脱、等の有害な副作用を惹起することな
く、所望の腫瘍サイズまたは腫瘍細胞数の減少が達成さ
れるまで徐々に投与量を増加させるのが好ましい。投与
スケジュールは毎日１〜３回程度から２〜１０日毎に１
回程度まで変わりうる。この投与量および投与スケジュ
ールは症状、患者の栄養状態、出血傾向、血糖値、血清
トリグリセリド値２年齢等を勘案して、生体が生理的に
許容し得る範囲内、好ましくは次の範囲内から決定され
る。

ＴＮＦ：１ｘ１０４〜５Ｘ１０５Ｕ／ゴ／ｈ「。

ＴＮＦ活性増強成分ｔ　−ＰＡ　：　１〜１０ｍＭ　ｍ／ｈｒ。

ＵＫ　：　４ｘ１０４　（Ｊ　〜６．４　ｘ１０５　Ｌ
ｌ／ＴＩｔ／ｈｒ。

ＳＫ　：　１　ｘ１０４　　ｔＪ　〜３ｘ１０５　　Ｌ
ｌ／Ｔｄ／ｈｒ。

ＰＮ　：　１　ＸＩＯ’　　Ｕ　〜５ｘ１０”　　Ｕ／
ＴＩｔ／ｈｒ。

ＰＧ　：　１　ｘ１０４１Ｊ　〜５ｘ１０５　　Ｕ／Ｔ
ｄ／ｈｒ。

Ｌ　Ｐ　Ｌ　：　１０〜１０３Ｕ　／　Ｔｄ／ｈｒ。

本悪性腫瘍治療剤の好ましい投与経路は、溶液または懸
濁液の静脈注射（点滴注射を含む）あるいは腫瘍的投与
である。

本発明の悪性腫瘍治療剤の剤型としては、例えば注射剤
などがあげられ、かかる注射剤としては、点滴注射剤、
静脈注射剤、動脈注射剤、皮下注射剤、陵内注射剤、筋
肉注射剤、腹腔内注射剤、腹腔内潅流剤、腫瘍内注射剤
、腫瘍内潅流剤などの剤型を包含し、注射剤以外の剤型
としては、肛門・直腸・結腸内坐剤、腟・子宮内坐剤、
舌下剤。

口腔内粘膜貼付剤、外用軟膏剤、皮膚貼付剤、鼻腔的粘
膜噴霧剤、咽喉・食道内粘膜噴霧剤などの剤型を包含す
る。かかる注射剤は自体公知の方法、すなわち、元来そ
れ単独では抗腫瘍効果を期待できないＴＮＦ活性増強成
分群を構成するｔ−ＰＡ。

ＵＫ、ＳＫ、ＰＮ、ＰＧおよびＬＰＬよりなる群（Ａ成
分）から選ばれた少なくとも１種類の成分と組み合わせ
たＴＮＦあるいはｔ−ＰＡ、ＵＫ。

ＳＫ、ＰＮおよびＰＧよりなる群（Ｂ成分）から選ばれ
た少なくとも一種のＴＮＦ活性増強成分で予め前処理し
たＴＮＦを、通常注射剤に用いられる無菌の水性液に溶
解あるいは懸濁することによって調製される。

また、本発明の悪性腫瘍治療剤は、ＴＮＦおよびＴＮＦ
活性増強成分群を構成する（Ａ成分）から選ばれた少な
くとも１種類の成分は、粉末あるいは凍結乾燥体を同−
若しくは別のバイアルあるいはアンプルに充填し、用時
、別に調製した注射用水性液に懸濁または溶解して使用
できる。注射用の水性液としては、生理食塩水、ブドウ
糖液。

リンゲル液やその他の補助薬を含む等張渡などがあげら
れる。

本発明の悪性腫瘍治療剤は、ＴＮＦをＴＮＦ活性増強成
分（Ｂ成分）で、予め適当な条件で前処理することによ
っても調製し得る。

ざらに、ＴＮＦ活性増強成分（Ｂ成分）を、公知の方法
により５ｅｐｈａｒｏｓｅ　４Ｂのような適当な担体に
固定化した固定化酵素で、ＴＮＦを前処理することによ
っても本発明の悪性腫瘍治療剤を調製し得る。

前処理条件としては、ｐＨ５〜１０，０〜６０℃、１分
以上であり、好ましくはｐＨ６〜８．２５〜３７℃。

１０分〜５時間であり、さらに好ましくはｐＨ７，４。

３７℃、１〜５時間である。このような前処理は、冷却
することにより、あるいはアプロチニン（以下、ＡＰと
略称することがある）や大豆由来トリプシン・インヒビ
ターのようなプロテアーゼ・インヒビターを加えること
により停止することができる。前処理後、限外ン濾過、
　ＤＥＡＥ　５ｅｐｈａｒｏｓｅカラムクロマトグラフ
イー、抗ｒＨＬｊ−ＴＮＦモノクロナル抗体固定化アフ
ィニティー・カラムクロマトグラフィーなどの精製操作
により、抗腫瘍作用に寄与しない成分を除去することが
できる。

［作用］本発明によれば、ＴＮＦの単独投与の時よりも、腫瘍の
ＴＮＦ感受性を増感し、腫瘍サイズまたは腫瘍細胞数を
減少させ、担癌動物あるいは癌患者の生存期間を延長す
ることを期待できる。

本発明における組成物、治療方法および抗腫瘍作用増強
方法は、腫瘍の治療または腫瘍の転移の予防に極めて有
用である。

以下に本発明の効果および実施の態様を諸実施例によっ
て詳細に説明するが、これらは本発明を限定するもので
はない。

実施例に旦旦二工■五ｍ本発明に用いたｒＨｕ−ＴＮＦおよびその製造方法につ
いては、先に出願された特許（特願昭６１−９００８７
号：昭和６１年４月２１日出願：発明の名称“新規生理
活性ポリペプチド″）に記載されている方法によって得
られたものを使用した。すなわち、ｒＨｕ−ＴＮＦ遺伝
子発現ベクターを導入した大腸菌の培養を行ない、ｒ）
（ｕ−ＴＮＦ蛋白質の産生を促進した。集菌後大腸菌を
低温で超音波破砕し、得られた懸濁液よりＳｈ　ｉ　ｒ
ａ　ｉらの方法［Ｔ、５ｈｉｒａｉら、Ｎａｔｕｒｅ、
　３１３　８０３〜８０６　（１９８５）］に従い、Ｄ
ＥＡＥ　５ｅｐｈａｒｏｓｅカラムクロマトグラフイー
により粗精製した。本粗精製品中のｒＨｕ−ＴＮＦ含有
率は、約３０％であった。

ざらに、先に出願された特許（特願昭６２−１６２２３
３号：昭和６２年７月１日出願：発明の名称′“モノク
ロナル抗体およびハイブリドーマ細胞゛′）に記載され
ているｒＨｕ−ＴＮＦに対するモノクロナル抗体を、公
知の方法により５ｅｐｈａｒｏｓｅ　４Ｂに固定した抗
ｒＨｕ−ＴＮＦモノクロナル抗体固定化アフィニティー
カラムを作成し、粗精製ｒ）−１ｕ−ＴＮＦの純度を上
げるべくざらに精製を行なった。本精製品中のｒＨｕ−
ＴＮＦ含有率は、約９５％であった。

ＴＮＦの　腫　　用地　効　の検ＴＮＦの細胞障害作用活性のバイオアッセイ測定方法と
しては、ｉｎ　ｖｉｖｏで腫瘍壊死効果を測定する方法
と、ｉｎ　ＶｉｔｒＯで腫瘍細胞障害効果を測定する方
法がある。

ｉｎ　ＶｉｔｒＯ法による腫瘍細胞障害効果測定は、例
えば、Ｍ、　Ｒ，Ｒｕｆｆら［１１７ｍ１）ｈｏｋｉｒ
ｌｅ　ＲｅｐＯｒｔＳ　ＶＯｌ、２゜ｅｄ、　ｂｙ　Ｅ
、Ｐｉｃｋ、　ＡＣａｄｅｌｌｌｉＣｐｒｅｓｓ、　Ｎ
、Ｙ、　　（１９８０）］あるいは、Ｆ、　Ｃ，にｕｌ
ｌ、　Ｊｒ、とｐ、ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ　　［Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１２６．１２７９′〜１２８３　
（１９８１）］の方法があげられる。

本発明者らが用いているｉｎ　ＶｉｔｒＯ法は、これら
を改良したものであり、ＴＮＦがＬ−９２９細胞（アメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション、ＣＣＬ　
１．　ＮＣＴＣｃｌｏｎｅ　９２９）の生育を阻害する
効果を評価するものである。すなわち、Ｌ−９２９細胞
を５ｖ／ｖ％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ　、ＪＸ下ＦＢ
Ｓト略称する）添加イーグルのミニマム・エツセンシャ
ル培地（日水製薬、以下ＥＭＥＭと略称する、その組成
は、たとえば、「組織培養」中井準之助他編集、朝倉書
店（１９６７年）に記載されている）に分散させ、９６
穴組織培養用マイクロマルチウェルプレート（ファルコ
ン社）にエツペンドルフピペット４７８０　（■ヤトロ
ン）を用いて無菌的に４ｘｉｏ：１個細胞／１００μｍ
２／ウェルとなるように分注する。

マイクロマルチウェルプレートを、５％の炭酸ガスを含
む空気中、３７℃で２４時間予備培養する。予備培養後
、ダルベツコの燐酸緩衝液（日水製薬、以下Ｐ　Ｂ　Ｓ
　（−）と略称する）あるいはＴＮＦ抗腫瘍作用増強剤
を含むＰ　Ｂ　Ｓ　（−）で、投与後濃度が１０〜１０
４　Ｕ／ｍｅとなるように、１１段階に連続２倍希釈し
たＴＮＦを、エツペンドルフピペット４７８０を用いて
無菌的に、１００μＩｔ／ウエルで投与する。投与後、
マイクロマルチウェルプレートを、５％の炭酸ガスを含
む空気中、３７℃で、ざらに４８時間本培養する。本培
養後、培養上清を廃棄し、各ウェルをＰ　Ｂ　Ｓ　（−
）　３００μｌ／ウエルで一回洗浄後、用時に調製した
０、１％クリスタルバイオレット、１％メタノール水溶
液を１００μｍ／ウェル加え、２０分間、細胞を固定・
染色する。余分なりリスタルバイオレットを洗い流し乾
燥した後、細胞を染色しているクリスタルバイオレット
を１００μｌ／ウエルの０．５％ドデシル硫酸ナトリウ
ム（ＳＤＳ）水溶液で抽出し、その５９５ｎｌｌｌにお
ける吸光度と４０５止における吸光度の差の三波長吸光
度をＥＬＩＳ＾アナライザー・モデルＥＴＹ−９６（東
洋測器（１１）で測定する。この吸光度は、生き残った
細胞数に比例する。ＴＮＦを加えない対照の吸光度を１
００％、細胞が存在しないブランクの吸光度を０％とし
た細胞生育率を、吸光度から計算し、横　　゛軸：ＴＮ
Ｆ投与量／縦軸：細胞生育率曲線を作成する。ＴＮＦを
加えない対照の細胞生育率の５０％の値に相当するＴＮ
Ｆの濃度をこの曲線の回帰式から計算し、５０％効果投
与量（以下ＥＤ５ｏと略称する）とした。以下、本発明
におけるＴＮＦの１ｎＶｉｔｒＯ抗腫瘍作用増強効果は
、すべてこのＥＤ５゜の比較で評価する。

ウロキナーゼ（持田製薬・“ウロナーゼ６０００国際単
位゛′）のＬ９２９細胞に対する細胞障害作用を、上記
のｒ　＠　ｕ−ＴＮ　Ｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏアッセイ方
法に準じて検定した結果、Ｅ′Ｄ５ｏは１５００Ｕ／ｌ
ｄ、細胞障害作用を示さない最高投与量は３７５Ｕ／ｒ
ｎＲであった。

ウロキナーゼ投与濃度を３００Ｕ／ｒＩｉｌ一定で、ｒ
Ｈｕ−ＴＮＦ投与濃度を１０〜１０４　Ｕ／ｒＩＪ！（
１１段階に連続２倍希釈）と変化させた時の１９２９細
胞に対する細胞障害作用の変化を、ｒＨｕ−ＴＮＦ単独
投与の場合と比較して第１図に示した。

第１図は、横軸にｒＨｕ−ＴＮＦＩＩ度を、縦軸は［９
２９細胞生育率を表わし、Ｏ印のプロットは対照（ｒＨ
ｕ−ＴＮＦ単独投与）、・印のプロットは併用投与を示
す。ｒＨｕ−ＴＮＦ投与量とＬ９２９細胞生育率との相
関を示すグラフである。

第２〜第５回も同様のグラフである。

対照（ｒＨｕ−ＴＮＦ単独投与）のＥＤ５Ｑは１００Ｕ
／ｄであるのに対し、ｒＨｕ−ＴＮＦ／ウロキナーゼ併
用投与の場合のＥＤ５ｏは３０Ｕ／Ｗ１１であったこと
から、ウロキナーゼはＬ９２９細胞のｒＨｕ−ＴＮＦに
対する感受性を増感していることが明らかである。

実施例２組　プラスミノ−゛ン活　イ因　によるｒＨｕ−ＴＮＦ
の抗腫瘍　用　強効果組織プラスミノーゲン活性化因子（Ｂｉｏｓｃｏｔ社・
ヒト由来）のＬ９２９細胞に対する細胞障害作用を、実
施例１と同様に検定した結果、ＥＤ５ｏは２．５μｇ／
ｒｒ１１以上、細胞障害作用を示さない最高投与量は２
．５μ（Ｊ　／ｒａｉｌであった。

組織プラスミノーゲン活性化因子投与濃度を３３３ｎａ
　／ｗｉｔ一定で、組織プラスミノーゲン活性化因子に
よるｒＨｕ−ＴＮＦの［９２９細胞に対する抗腫瘍作用
増強効果を実施例１と同様に検定した結果を第２図に示
した。

対照（ｒＨｕ−ＴＮＦ単独投与）のＥＤ５ｏは１００Ｕ
／ｄであるのに対し、ｒＨｕ−ＴＮＦ／組織プラスミノ
ーゲン活性化因子併用投与の場合のＥＤ５ｏは２０Ｕ／
ｒｎｉであったことから、組織プラスミノーゲン活性化
因子は［９２９細胞のｒＨｕ−ＴＮＦに対する感受性を
増感していることが明らかである。

実施例３プラスミンによるｒＨｕ−ＴＮＦの抗腫瘍作用増強効果プラスミン（Ｋａｂｉ社・ヒト由来）の１９２９細胞に
対する細胞障害作用を、実施例１と同様に検定しりｈｉ
　ｉ、Ｅ　Ｄ　　Ｇ；！１．２５ＣＵ／ｄ１細胞障害作
用を示ざない最高投与量は３１３ｍＣＵ／ｍｅでめった
。

プラスミン投与濃度を１５０ｍＣＵ／ｍｌ一定で、プラ
スミンによるｒＨｕ−ＴＮＦの［９２９細胞に対する抗
腫瘍作用増強効果を実施例１と同様に検定した結果を第
３図に示した。

対照（ｒＨＵ−ＴＮＦ単独投与）のＥＤ５Ｑは５００Ｕ
／ｄであるのに対し、ｒＨｕ−ＴＮＦ／プラスミン併用
投与の場合のＥＤ５゜は１５０　ＬＪ／ｍｅであったこ
とから、プラスミンはＬ９２９細胞のｒＨｕ−ＴＮＦに
対する感受性を増感していることが明らかである。

実施例４リポプロティンリパーゼ（Ｓｉｇｍａ社・Ｌ−８６３４
・ｐｓｅｕａｏｍｏｎａｓ属由来）のＬ９２９細胞に対
する細胞障害作用を、実施例１と同様に検定した結果、
ＥＤ５ｏは１２．５ｔＪ／ｒＩＪ１、細胞障害作用を示
さない最高投与量は３．１３ＬＪ　／ｒｒＩｉであった
。

リポプロティンリパーゼ投与濃度を２．５Ｕ／ｄ一定で
、リポプロティンリパーゼによるｒＨｕ−ＴＮＦのＬ９
２９細胞に対する抗腫瘍作用増強効果を実施例１と同様
に検定した結果を第４図に示した。

対照（ｒＨｕ−ＴＮＦ単独投与）のＥＤ５ｏは１００Ｌ
Ｉ／ｄであるのに対し、ｒＨｕ−ＴＮＦ／リポプロティ
ンリパーゼ併用投与の場合のＥＤ５ｏは２５Ｕ／ｄであ
ったことから、リポプロティンリパーゼはＬ９２９細胞
のｒＨＬＪ−ＴＮＦに対する感受性を増感していること
が明らかである。

実施例５プラスミノーゲン（Ｋａｂｉ社・ヒト由来）のＬ９２９
細胞に対する細胞障害作用を、実施例１と同様に検定し
た結果、ＥＤ５ｏは５ＣＵ／ｍｅ以上、細胞障害作用を
示さない最高投与量は６２５ｍＣＵ／ｍｌであった。

プラスミノーゲン投与濃度を１５０ｍＣＵ／ｒ１１一定
、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＢｉＯ３ＣＯｔ社
・ヒト由来）投与濃度を８３．３ｎＭ　ｄ一定で、プラ
スミノーゲン／組織プラスミノーゲン活性化因子による
ｒＨｕ−ＴＮＦのＬ９２９細胞に対する抗腫瘍作用増強
効果を実施例１と同様に検定した結果を第５図に示した
。

対照（ｒＨｕ−ＴＮＦ単独投与）のＥＤ５ｏは７００Ｕ
／ｄであるのに対し、ｒＨｕ−ＴＮＦ／プラスミノーゲ
ン／組織プラスミノーゲン活性化囚子併用投与の場合の
ＥＤ５ｏは１５０　Ｕ／ｒ１１であったことから、プラ
スミノーゲン／組織プラスミノーゲン活性化因子は［９
２９細胞のｒＨｕ−ＴＮＦに対する感受性を増感してい
ることが明らかである。

この投与濃度では、ｒＨｕ−ＴＮＦ／プラスミノーゲン
あるいはｒＨｕ−ＴＮＦ／組織プラスミノーゲン活性化
因子の組み合わせでは、ｒＨｕ−ＴＮＦ単独投与の場合
と比較して、［９２９細胞のｒＨｕ−ＴＮＦに対する感
受性の増感は認められなかった。

実施例６ｒＨｕ−ＴＮＦ４ｘｌＯ５Ｕ／ｄ、１０（ｌｉ（溶媒は
Ｐ　Ｂ　Ｓ　（−））とプラスミン（Ｋａｂｉ社・ヒト
由来）１２１０ｍＣｔＪ　／ｒｒｄｔ、　１００　μｍ
　（溶媒はＰＢＳ（−））を攪拌混合後、所定時間（０
，１，２，３，４および５時間）、３７℃前処理し、所
定時間後、氷冷するとともにＡＰ（帝国臓器製薬・アン
チクレイン注２５）　６０６　Ｕ／ｍｆｆ１、ｉｏｏμ
ｍ（溶媒はＰＢＳ（−））を加え攪拌混合し、前処理を
停止した。この前処理混合液の［９２９細胞に対する細
胞障害作用を、実施例１の手順に従って検定した結果を
第１表に示した。

第１表は、ｒＨｕ−ＴＮＦをプラスミンで前処理した場
合の、前処理に要した時間と、プラスミン前処理ｒＨｕ
−ＴＮＦのＬ９２９細胞に対する細胞障害作用の指標で
あるＥＤ５ｏとの相関を示した表である。

実施例１の手順に従いｒＨｕ−ＴＮＦの投与後濃度が１
０〜１０４　Ｕ／ｒｄとなるように、１１段階に連続２
倍希釈した際のプラスミンとＡＰの投与後濃度はそれぞ
れ、３０μＣＵ／ｍ　〜３０ｇｎＣＵ　／ｒｒｄｌおよ
ヒ１５ｍｕ／Ｉｄ〜１５Ｕ／ｒＩＩｉであった。プラス
ミンとＡＰの細胞障害作用を示さない最高投与量はそれ
ぞれ、３１３ｍＣＵ／ｍオにヒフ８１　Ｕ／ｌｌ１１テ
あり、ｒＨｕ−ＴＮＦを投与しない場合には、プラスミ
ンとＡＰは本実施例の投与濃度範囲ではＬ９２９細胞に
対する細胞障害作用を示さない。

対照（ｒＨｕ−ＴＮＦ単独投与）のＥＤ５ｏは８６Ｕ／
ｄであるのに対し、プラスミン前処理ｒＨｕ−ＴＮＦ投
与の場合のＥＤ５ｏは前処理時間によって異なるが、何
れの場合も対照の場合より小さくＬ９２９細胞のｒ）（
ｕ−ＴＮＦに対する感受性を増感していることが明らか
である。本実施例の前処理条件では、前処理時間３時間
で、最高のｒＨｕ−ＴＮＦｖＬｉｉ瘍作用増強効果が認
められた。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第５図は、横軸にｒＨｕ−ＴＮＦ濃度を、縦軸
はＬ９２９細胞生育率を表わし、ｒｌ−１ｕ−ＴＮＦ投
与量とＬ９２９細胞生育率との相関を示すグラフである
。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）腫瘍壊死因子またはそれと同様の活性を呈する腫
瘍壊死因子改変体および組織プラスミノーゲン活性化因
子、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミン、
プラスミノーゲン、リポプロテインリパーゼおよびこれ
らと同様の活性を呈するこれらの改変体よりなる群（Ａ
成分）から選ばれた少なくとも一種の活性増強成分とを
有効活性成分として含有する抗腫瘍性医薬組成物。
（２）腫瘍壊死因子またはそれと同様の活性を呈する腫
瘍壊死因子改変体を組織プラスミノーゲン活性化因子、
ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミン、プラ
スミノーゲンおよびこれらと同様の活性を呈するこれら
の改変体よりなる群（Ｂ成分）から選ばれた少なくとも
一種の活性増強成分で予め前処理した成分を有効活性成
分として含有する抗腫瘍性医薬組成物。
（３）該組織プラスミノーゲン活性化因子または該プラ
スミノーゲン活性化因子改変体を含有する場合において
、その含有比が該腫瘍壊死因子または該腫瘍壊死因子改
変体１×１０＾４〜５×１０＾５Ｕに対し、１〜１０ｍ
ｇである請求項１記載の抗腫瘍性医薬組成物。
（４）該ウロキナーゼまたは該ウロキナーゼ改変体を含
有する場合において、その含有比が該腫瘍壊死因子また
は該腫瘍壊死因子改変体１×１０＾４〜５×１０＾５Ｕ
に対し、４×１０＾４〜６．４×１０＾５Ｕである請求
項１記載の抗腫瘍性医薬組成物。
（５）該ストレプトキナーゼまたは該ストレプトキナー
ゼ改変体を含有する場合において、その含有比が該腫瘍
壊死因子または該腫瘍壊死因子改変体１×１０＾４〜５
×１０＾５Ｕに対し、１×１０＾４〜３×１０＾５Ｕで
ある請求項１記載の抗腫瘍性医薬組成物。
（６）該プラスミンまたは該プラスミン改変体を含有す
る場合においてその含有比が該腫瘍壊死因子または該腫
瘍壊死因子改変体１×１０＾４〜５×１０＾５Ｕに対し
、１×１０＾４〜５×１０＾５Ｕである請求項１記載の
抗腫瘍性医薬組成物。
（７）該プラスノーゲンまたは該プラスミノーゲン改変
体を含有する場合においてその含有比が該腫瘍壊死因子
または該腫瘍壊死因子改変体１×１０＾４〜５×１０＾
５Ｕに対し、１×１０＾４〜５×１０＾５Ｕである請求
項１記載の抗腫瘍性医薬組成物。
（８）該リポプロテインリパーゼまたは該リポプロテイ
ンリパーゼ改変体を含有する場合において、その含有比
が該腫瘍壊死因子または該腫瘍壊死因子改変体１×１０
＾４〜５×１０＾５Ｕに対し、１０〜１０＾３Ｕである
請求項１記載の抗腫瘍性医薬組成物。