JPH01157395A

JPH01157395A - 微生物の培養法

Info

Publication number: JPH01157395A
Application number: JP31344487A
Authority: JP
Inventors: Fumiaki Ishizaki; 文彬石崎
Original assignee: SANTOOLE KK
Current assignee: SANTOOLE KK
Priority date: 1987-12-11
Filing date: 1987-12-11
Publication date: 1989-06-20
Anticipated expiration: 2009-06-22
Also published as: JPH0646941B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】天然ゴムの樹液からラテックスを分離した残りの母液（
以下Ｎａｔｕｒａｌ　Ｒｕｂｂｅｒ　５ｅｒｕｎ　　略
してＮＲ８と呼ぶ）は、いわば天然ゴム生産における産
業廃棄物であり、天然ゴム生産国におけるこれの放置は
環境保全上看過できなくなりつつある。まして、ＮＲ３
は、多量のタンパク質を含み、有機酸、糖類、及びその
誘導体をふくんでいるので、微生物にとっては富栄養価
をもつものと考えられ、放置すれば、大きな環境汚染を
引き起こすことになりかねないが、反面、資源化できれ
ば新しい大きなバイオマスとなりうる可能性もひめでい
る。

本発明者は、東甫アジアのラテックス工場で排出するＮ
Ｒ３を原料としてこれを濃縮し、あるいは粉末のＮＲ３
としたものを用いて実験し、このような液状あるいは粉
末のＮＲ３には色々な微生物に対する生育促進効果や、
生育必須因子を含んでいることを見いだした。

一般に、微生物はその生育に色々な栄養因子を要求する
ことが多く、それらは、アミノ酸、ビタミン、ミネラル
など多様であり、また、必ずしも人だけでなく、複数の
栄養因子を要求することも多い。従って、発酵用の培地
には、複数の栄養因子を供給する目的で、有機窒素源な
どの天然の有機栄養が用いられる。これらには、脱脂大
豆加水分解液（ＩＩＶＰ）　、Ｃｏｒｎ　５ｔｅｅｐ　
Ｌｉｑｕｏｒ（Ｃ３Ｌ）、綿実ミ−ル、ビーナツツミー
ル、ｐｈａｒｌａｎ＋ｃｄｉａ　、　ｄｉｓｔｉｌｌｅ
ｒｓ　５ｏｌｕｂｌｅ、家畜血液、屠殺廃液、カゼイン
氷解物など多種多様である。しかも、これらを工業生産
の発酵原料とする場合には、コストか安価なこと、季節
的、突発的ではなく安定的に供給できること、品質が安
定していることなどが必須である上に、色々な微生物に
広く効果のある、普遍的なものでることが望ましい。こ
のような条件を満足するのは、上記の多数の天然有機栄
養源のなかでも、）ｉＶＰ、Ｃ３Ｌ、酵母エキスなどに
限られるが、ＭＶＰやＣ３Ｌはそれぞれ食品工業の副産
物として製造されている為に、最近では製法の転換とと
もにコスト高になったり、供給量が減少しており、酵母
エキスはコスト高で工業原料としては難点が多い。

粉末ＮＲ３の一般的性状は、元素分析値ではＣ２２％Ｈ５，５％Ｎ　　９，５％＾ｓｈ　　１８．５％であるか、この内、有１１ＩＮのバランスをみると、不
溶性窒素化合物が６％、不溶性無窒素化合物が１．５χ
、可溶性有機窒素化合物が１６．５％、可溶性無窒素化
合物が２８％その他、硫酸アンモニウム２８％、灰分１
８％、水分２％　となっている。

可溶性無窒素化合！ｌ−！ＩＪ　２８％中発酵原料とな
りそうな有Ｒ酸や還元糖の含量は小量であり、ＮＲ３は
発酵のＣ源とはなりにくいと考られるが、単純な有機窒
素源であるとも言えない。

実験結果によれば、ＮＲ３は、その形態が液体であれ、
粉末であれ、細菌、酵禄において広く生育促進効果を示
し、培地有機窒素源に酵母エキス、１−ＩＶＰ、Ｃ３Ｌ
等を用いる発酵ではこれらをＮＲ８に置き換えて十分発
酵生産の目的を達することが明らかとなった。また、そ
の効果は、細菌の場合は、好気性菌でも、嫌気性菌でも
同様であった。

さらに、一部の微生物では、ＮＲ３を培地に添加する前
に、予めプロテアーゼ処理によって加水分解しておいて
も、加水分解せずにそのまま培地に添加しても同様の効
果が見られた。

このような実験事実を考えると、ＮＲ３の微生物に対す
る効果は、含まれるタンパク質やそれが分解して生ずる
アミノ酸の効果だけによるものではなく、ＮＲ３の中に
含まれる未同定の物質や、それとタンパクとの複合効果
によるものと考えられる。

以下実施例をもって、本発明を説明する。

実施例の１グルコース１０（１、ＨＱＳＯａ　＋　７１１２０３４
＋ａｇ、　Ｎａ１ｌ　２ＰＯ４・１２Ｈ２０７７１＋１
（１、にＣ１１０ｍｇ　　に、ＮＲ３の１１７テア一セ
分解液（ＮＲ３２０ｇをＨ／３０リン酸バッファーｐＨ
７，０１Ｎに添加し、不溶性物質はそのままにして、こ
れにプロナーゼ２００１１ｇを添加し、３０℃１２ｈｒ
反応させたもの。タンパク質の分解率は約９４％である
）をＮＲ３換算で２ｇ相当量を添加し、ｐＨを７．０に
調整したのち、純水でＩＩに希釈する。

一方、グルコース１０ｇ　、Ｈ（］ＳＯ４・７１１２０
３４ｍｇ、Ｎａ１ｌ　２　ＰＯ４−１２１１２０７７＋
ｎｇ、ＫＣＩ　１０＋ｎｇ　　に、酵母エキス（オリエ
ンタル酵母社製）５（ｌとポリペプトン（大五栄養製）
５（Ｊを加えｐＨ調整後純水によってＩ！Ｊとしたもの
を対照とした。

これら両培地に、’Ｉ’　Ｇ　Ｃ−液体培地に３０’Ｃ
で−・夜培養した５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｃ
ｔｉｓ（ＡＴＣＣ１９４３５）を２０１１接種し、３０
℃で静置培養した。培養１２時間後の菌体側を乾燥菌体
重量法により、生成した乳酸量をＩＩＰＬｃによって定
着した。ＮＲ８を含む培地においては、乾燥菌体重１．
２ｈ／、Ｑ　、乳酸生成量９、２ｇ＃であった。一方、
酵母エキス、ポリペプトンを含む対照培地では、乾燥菌
体重ｊ１Ｍ　１．２５ｇ／ｌ、乳酸生成Ｍ　９．ｈ／Ｊ
か得られた。

実施例２キャラサバ澱粉の酵素糖化液（キャラサバ澱粉１００（
］を５００１の純水に溶解の後、α−アミラーゼ６００
ｕを添加して７０℃に加温して３０分間保持し、液化を
行う。しかるのち、４０℃に冷却し、グルコアミラーゼ
を添加して、ゆっくり振とうしながら２４時間反応させ
た糖化液をグルコース１０９相当址Ｊ１ユし、これに酵
母エキス０．３ｇ、ベプＩ−ン０，５ｇを添加し、ｐＨ
６，２に調整の後純粋で１００＋ａｌに稀釈しものを基
準培地とした。

一方、キャラサバ澱粉の酵素糖化液をタル二７−ス１０
ｇ相当量計算し、これにＮＲ３粉末（プロテアーゼ処理
しないもの）　０．３（ｌとペプトン０．５ｑを添加し
、ｐＨ６，２に調整の後、純水で１０Ｏｎ＋ｌに希釈し
たものを検討培地とした。

また、キャラサバ澱粉の酵素糖化液をグルコース１０ｇ
相当量計算し、ペプトンＯ，ｓｇを添加し、ｐＨ６，２
に′Ａ整の後純水で１００１１に希釈したもの、および
、キャラサバ澱粉の酵素糖化液をグルコース１０（ｌ相
当量計算し、あとは何も加えない培地を比較培地とした
。

これら４種類の培地をＩＤｅｉｓｓｃｌに入れて殺菌し
、Ｙ　Ｍ　（Ｄｉｆｃｏ）液体培地で３０℃、２０培養
した７ｙ＋ａｏｎｏｎａｓ　ｎ＋ｏｂｉｌｉｓ　ＮＲＲ
Ｌ　Ｂ１４０２３を５１　接種後２日培養し、乾燥菌体
重量と生成したエタノールを測定した。

糖液に酵母エキス、ペプトンを加えた培地では、乾燥菌
体重量２．０５ｕ／ｎｌとエタノール５．２２＋ｕｌが
えられ、ＮＲ３を用いた培地では、菌体型ｉ１．６１１
１ｇ／１１１　とエタノール５．０１ｎｌかえられた。

一方、ｉ液にペプトンだけ加えた培地では、菌体型ＭＯ
，８４ｎ＋ｑ／ｌｌ　とエタノール３．８５ｍ　ｌかえ
られたが、糖液だけの培地では菌の生育、エタノールの
生成共全く認められなかった。

実施例の３実施例の２で用いたと全く同じ糖液を、クルコース１０
（ｌ相当量計景し、これに酵母エキス０．３ｇ、マルト
エキス０．３ｇ、ペグトン０．５すを添加し、ｐＨ６゜
２に調整の後純水で１０Ｏｎ＋ｌに希釈したものを基準
培地とした。

一方、糖液をグルコース１０９相当延計算し、これにＮ
Ｒ８粉末（プロテアーゼ処理しないもの）０．３ｇとペ
プトンＯ，！ｏ＋を添加し、ｐｔｌ６．２に調整の後、
純水で１００ｎｌに希釈したものを検討培地とした。

また、糖液をグルコース１０ｇ相当量計算し、ベグ１〜
ン０．５ｇを添加し、ｐＨ６，２に調整の後純水で１０
０＋ｎｌに希釈したもの、および、糖液をグルコ−ス１
０９相当延計算し、あとは何も加えない培地を比較培地
とした。

これら４種類の培地をｎ＋ｅｉｓｓｅｌに入れて殺菌し
、クルコース１０ｇ／！酵朋エキス３ｇ／ｌ、マルトエ
キス３ｇ／ｌ、ペプトン５（１／　ｌ　（ｐＨ６、２）
からなる前培養地で３０℃、２日培養したＳａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ　ｕｒａｕｒｎ　ＩＦＯ０５６５を５ｎ
ｌ接柿後２［１培養し、乾燥菌体重量と生成したエタノ
ールを測定した。

糖液に酵母エキス、フル１〜エキス、ペプトンを加えた
培地では、乾燥菌体重量４．９０１′ｍｇ／ｍｌ　とエ
タノール４．８９１１１１が得られ、ＮＲ３を用いた培
地では、菌体型ｉ　４．０４１Ｂ！ＩＩ／１ｍ　ｌ　と
エタノール４．５８１１１１かえられた。一方、糖液に
ペプトンだけを加えた培地では、菌体重量０．６４＋ｎ
ｇ＃ａ　Ｉ　とエタノール１　、９９ｎ＋　ｌがえられ
た。また、糖液だけの培地でも菌体重量０．３３＋ａｑ
／１１　とエタノール０．８４ｎ　ｌかえられた。

実施例の４グルコース１．０％　、ヘキサメタリン酸ソータ０．１
７　％　　、にＣ１０，１％　　、　　Ｈ（ＩＳＯ４−
７Ｈ２００，０４％からなる培地（ｐｔｌ　７．０）を
基本とし、■　他にはなにも加えないもの ■　脱脂大豆塩酸加水分解物（ＭＶＰ）を０．５ｎｌ／
旧の濃度なるよう添加したもの■　酵母エキス０．２５
％を添加したもの■　ＮＲ３粉末０．２５％を添加した
ものの４種の培地を作成し、これを５００　ｎｌ振どう
フラスコに２０１づつ分注し殺菌の後、グルコース１．
０％、酵母エキス１゜０％、ボリベプｌ〜ン１．０％、
ＮａＣｌ　０１５ｘからなる前培養培地（ｐＨ７，０）
にＰｓｅｕｄ。

ｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＫＹＵ−１（ＦＥ
ＲＮ　Ｐ　０７０１）を接種し、３０℃−夜振とう培養
したプロスを１００μｍ添加して、３０°Ｃで３日間振
どう培養を行い、生成した乾燥菌体重量を測定した。培
地■では、菌の生育は全く認められなかった。培地■で
は乾燥菌体重量は２．３ｉｇ／ｉｆに、培地■では乾燥
菌体体重量は２，９１９／１１に、培地■では乾燥菌体
重量は３．１ｎｇ／ｎ＋Ｉは、それぞれ達した。

実施例の５グルコース　１０％、　Ｋ１１２　ＰＯ４０，１％、Ｈ
ＧＳＯａ　・７１１２００．２４　％　　、　ＦｅＳＯ
４−７１１２００，０１’Ｘ、Ｍｎ５Ｏ４、４１＋２　
Ｑ　Ｏ，００１％、ビタミンＢｔ　　１００ｒ／ｌ　、
ビオチン３ｒ／Ｉからなる培地に、液状ＮＲ３を１．０
１１／旧の濃度で添加し、ｐ　Ｈを７．０に調整の後殺
菌し、全容１！Ｊのミニジャーファーメンタ−に３００
ｎ　ｌを張り込んだ。

一方ＮＲ３以外は全く同じ組成の培地に、ＮＲ８の替わ
りに、実施例の４で用いた脱脂大豆塩酸加水分解物を０
．７５ｎ＋ｌ／旧の濃度なるよう添加したのを、先と同
様ｐｌ＋を７．０に調整の後殺菌し、全容１１のミニジ
ャーファーメンタ−に３００ｎ　Ｉ　を張り込み対照と
した。この両ジャーに、グルコース１．０％、酵母エキ
ス１．０％、ポリペプトン１．０％、ＮａＣｌ　Ｏ，５
％からなる前培養培地（ａｌｌ　７．０）にＢｒｃｖｉ
ｂａｃｔｅｒｉｕｎ＋　ｆｌａｖｕＩＩＡＴＣＣ１４０
６７を接種し、３０℃−夜振とう培養したブロスを１５
ｎ＋Ｉ添加して、温度３４℃、通気撹ハンＬｔ１／２　
ＶＶＭ　、ｔ２００ｒｐｎ＋　、　ｐＨ制御はアモニア
水をフィードしながらｐＨを７，５に制御する方法で培
養した。３０時間培養の後、脱脂大豆塩酸加水分解物を
用いた培養液には対糖４６，５％のグルタミン酸が蓄積
し、液状ＮＲ３を用いた培養液には対＄３４８．２％の
グルタミン酸が蓄積していた。

Claims

【特許請求の範囲】

１）天然ゴムの樹液からラテックスを分離した残りの母
液を濃縮し、もしくはスプレードライ法によって粉末化
して、それをそのまま発酵培地とし、または発酵培地に
一部添加して、その培地に細菌（放線菌を含む）、真菌
（酵母または糸状菌）を接種して増殖させ、菌体を生産
させ、かつ／また特定の発酵生産物を蓄積させる微生物
の培養法。