JPH01119264A - 吸着体およびそれを用いた除去装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］。

本発明は体液中から抗脂質抗体を吸着除去あるいは吸着
回収するための抗脂質抗体の吸着体およびそれを用いた
抗脂質抗体の除去装置に関する。

［従来の技術および発明が解決しようとする問題点コ 自己免疫疾患はその名称のごとく自己の組織の、構成成
分に対する抗体（以下、自己抗体という）が出現する疾
患であるが、全身性エリテマトーデス（以下、ＳＬＥと
いう）および関連する自己免疫疾患において、血栓症、
血小板減少症および子宮内胎児死亡などの症例に関して
は、細胞膜のリン脂質成分に対する抗体（以下、抗脂質
抗体という）が体液中に出現し、その病態と密接な関連
があると考えられている。産生された自己抗体が病気の
発症に関わる機序は必ずしも明確ではないが、自己抗体
自身が細胞を障害する機構、あるいは自己抗体が抗原と
結合して免疫複合体を形成し組織に沈着することにより
組織障害をおこす機構などが提唱されている。

該症例のばあいは、発生した抗脂質抗体が、血小板膜上
のリン脂質に結合し、その機能を活性化あるいは阻害し
、それぞれ血栓症あるいは血小板減少症を誘発すること
、また胎盤導管の内皮細胞膜上のリン脂質に結合して血
行を阻害し、胎児死亡を誘発する機構などが提唱されて
いる。

このように産生じた抗脂質抗体または該抗体と細胞膜上
のリン脂質との免疫複合体によりさまざまな症状がひき
おこされるわけであるから、該症例の治療には抗脂質抗
体のコントロールが非常に重要である。

従来より抗脂質抗体の産生を抑制する目的でステロイド
剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤などがＳＬＥの
治療に広く用いられている。

なかでもステロイド剤はもつとも一般的に用いられ、パ
ルス治療と呼ばれるステロイドの短期用大量投与療法も
しばしば行なわれている。しかしながら、ステロイドは
少量の投与によっても副作用を生じさせやすいので、ス
テロイドの短期用大量投与療法によればさらに大きな副
作用を生じさせやすくなるのは自明である。また、これ
らの薬剤は長期にわたって用いられることが多く、その
ようなばあいには副作用がさらに出やすく、また薬剤耐
性によりしだいに増量しなければならないことも多いた
め、症例によってはこれらの薬剤の使用が不可能であっ
たり、充分な効果を発揮しないばあいも多い。とくに該
症例の現われる時期は抗脂質抗体の抑制がもっとも必要
な時期であるにもかかわらず、上記の理由によりパルス
療法や免疫抑制剤などの薬剤を用いる強力な療法を採用
できないばあいも多い。

一方、これらの薬剤療法とは別のアプローチとして、体
液中の抗脂質抗体を対外循環により直接除去しようとす
る試みがなされている。もっとも簡便な方法は、抗脂質
抗体を含む患者の血漿を健常人の血漿と交換する、いわ
ゆる血漿交換療法である。この方法によって血中の抗脂
質抗体は大幅に低下し、症状の改善が見られている。し
かしながらこの方法では大量の健常血漿が必要となり高
価であるばかりでなく、該療法処置中に血清肝炎などの
感染の危険性を伴うため広く普及するには至っていない
。

血漿交換療法では血漿中のすべての成分が除去され、健
常血漿と交換されるわけであるが、これに対して病因物
質である抗脂質抗体を選択的に除去する目的で、分子サ
イズにより病因物質を分離する血漿分離膜法が開発され
た。この方法では膜により血漿を高分子量画分と低分子
量両分に分離し、病因物質が含まれている高分子量画分
を廃棄し、主要蛋白であるアルブミンが含まれている低
分子量画分を患者に戻すが、抗脂質抗体は分子量約１６
万のＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）が主であり、アルブミ
ン（分子量約６万）と分子量が近いため両者間の分離は
悪く、抗脂質抗体を除去する際にアルブミンも大量に除
去され、さらに病因物質と同等以上の分子量の蛋白はす
べて除去されるなどの欠点がある。

したがって病因物質である抗脂質抗体をより選択的に除
去し、体液中の他の有用成分がほとんど失われることの
ない除去手段の出現が望まれていた。

そこで本発明者らは、かかる実情に鑑み鋭意研究を重ね
た結果、体液中の有効成分をほとんど失うことなく抗脂
質抗体のみを選択的に吸着しうる吸着体を見出し、本発
明を完成するに至った。

［問題点を解決するための手段］ すなわち本発明は、水不溶性多孔質体にアニオン性官能
基を有する化合物が固定されてなる抗脂質抗体の吸着体
ならびに流体の流入口および流出口を存する容器、流体
および該流体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性
多孔質体にアニオン性官能基を存する化合物が固定され
てなる抗脂質抗体の吸着体は通過できないフィルター、
および前記容器内に充填された前記抗脂質抗体の吸着体
からなる抗脂質抗体の除去装置に関する。

［実施例］ 本明細書において体液とは血液、血漿、血清、腹水、リ
ンパ液、関節内液およびこれらからえられた分画成分、
ならびにその他の生体由来の液性成分をいう。

本発明に用いる水不溶性多孔質体は、大きな径の連続し
た細孔を有するものが好ましい。すなわち抗脂質抗体は
Ｉ　ｇＧ　ＳＩ　ｇＭ　　（免疫グロブリンリなどの免
疫グロブリンからなり、分子量が１８〜９０万の巨大分
子であるため、これを効率よく吸着するためには抗脂質
抗体が容易に多孔質体内に侵入しうろことが必要である
。

細孔径の測定方法には種々あり、水銀圧入法がもっとも
よく用いられているが、親水性多孔質体のばあいには適
用が難しい。これにかわる細孔径の目安として排除限界
分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、疎水性多孔質
体いずれにも適用できる。排除限界分子量とは成書（た
とえば波多野傅行、花卉俊彦著、実験高速液体クロマト
グラフィー、化学同人）などに述べられているごとく、
ゲル浸透クロマトグラフィにおいて細孔内に侵入できな
い（排除される）分子のうちもっとも小さい分子量をも
つ物の分子量をいう。

排除限界分子量は対象とする化合物により異なることが
知られており、一般に球状蛋白質、デキストラン、ポリ
エチレングリコールなどについてよく調べられており、
抗脂質抗体にもっとも類似していると思われる球、状蛋
白質（ビールスを含む）を用いてえられた値を用いるの
が適当である。

排除限界の異なる種々の水不溶性多孔質体を用いて検討
した結果、予想に反し排除限界分子量が抗脂質抗体の分
子量より小さいｌＯ万程度のものでもある程度の吸着能
を示し、また細孔径の大きいもの程能力が大きいわけで
なく、むしろ能力が低下したり抗脂質抗体以外の蛋白が
吸着されること、すなわち最適な細孔径の範囲が存在す
ることが明らかになった。すなわちｌＯ万未満の排除限
界分子量を持つ水不溶性多孔質体を用いたばあいは抗脂
質抗体の吸着量は小さく実用に耐えないが、排除限界分
子量がｌＯ万ないし１５万と抗脂質抗体の分子量に近い
水不溶性多孔質体を用いてもある程度実用に供しつる吸
着体かえられた。一方排除限界分子量が大きくなるにつ
れ、抗脂質抗体の吸着量は増加するがやがて頭打ちとな
り、排除限界分子量が８０００万以上になると表面積が
少なすぎ吸着量は目立って低下するばかりでなく、目的
とする抗脂質抗体以外の成分の吸着、すなわち非特異吸
着が増加し選択性がいちじるしく低下する。

したがって本発明に用いる水不溶性多孔質体の好ましい
排除限界分子量はｌＯ万以上ｅｏｏｏ万以下であり、さ
らに好ましくはより選択性吸着容量の大きい点から６０
万以上３０００万以下であるのがよい。

つぎに水不溶性多孔質体の多孔構造については表面多孔
性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が吸着容量が大
きいという点から２０％以上であることが好ましい。水
不溶性多孔質体の形状は、粒状、球状、繊維状、膜状、
ホローファイバー状など任意の形状を選ぶことができる
。

粒子状の水不溶性多孔質体を用いるばあい、その粒子径
は１虜未満のばあい圧力損失が大きく、５０００、ｃａ
をこえるばあい仮管容量が小さい点から１虜以上５００
０Ｉｓ以下であるのが好ましい。

本発明に用いる水不溶性多孔質体は有機性、無機性いず
れであってもよいが、目的とする抗脂質抗体以外の体液
成分の吸着（いわゆる非特異吸着）の少ないものが好ま
しい。親水性である方が非特異吸着が少ないので水不溶
性多孔質体は疎水性であるよりも、親水性であるほうが
好ましく、分子中に水酸基を有する化合物よりなる水不
溶性多孔質体がより好ましい。

本発明に使用する水不溶性多孔質体の代表例としては、
アガロース、デキストラン、ポリアクリルアミドなどの
軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリカゲルなどの
無機多孔質体、ポリメチルメタクリレート、ポリビニル
アルコール、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体など
の合成高分子および／またはセルロースなどの天然高分
子を原料とする多孔質ポリマーハードゲルなどがあげら
れるがこれらに限定されるわけではない。

本発明の吸着体を対外循環治療に用いる際には、血液、
血漿のごとき抗粘性流体を高速で流す必要があるため、
圧密化を引起こさない充分な機械的強度を有する硬質水
不溶性多孔質体を用いるのが好ましい。すなわち硬質多
孔質体とは後記参考例に示すごとく、水不溶性多孔質体
を円筒状カラムに均一に充填し、水性流体を流通したば
あいの圧力損失と流量との関係が少なくとも０．３ｋｇ
／ｃｊまで直接関係にあるものをいう。

本発明に用いるアニオン性官能基はｐＨが中性付近で負
に帯電するような官能基であればいかなるものも使用し
うる。これらの代表例としては、カルボキシル基、スル
ホン酸基、スルホン基、硫酸エステル基、チオール基、
シラノール基、リン酸エステル基、フェノール性水酸基
などがあげられるがこれらに限定されるわけではない。

なかでもカルボキシル基、スルホン酸基、硫酸エステル
基、チオール基およびリン酸エステル基が抗脂質抗体に
対する親和性が強く好ましい。

アニオン性官能基を有する化合物としては、分子内に１
つのアニオン性官能基を有するモノアニオン化合物であ
っても、複数のアニオン性官能基を有するポリアニオン
化合物であってもよい。ポリアニオン化合物は抗脂質抗
体に対する親和性が大きく、また単位量の多孔質体に多
くのアニオン性官能基を導入しやすいので好ましい。な
かでも分子量がｔｏｏｏ以上のポリアニオン化合物は親
和性、アニオン性官能基導入量の点で好ましい。ポリア
ニオン化合物が有するアニオン性官能基は１種類であっ
てもよいし、２種類であってもよい。

本発明に用いるポリアニオン化合物の代表例としては、
ポリアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン
酸、ポリビニルリン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリ
スチレンリン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン
酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイ
ン酸共重合体などの合成ポリアニオン化合物、およびヘ
パリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン、コンドロ
イチン硫酸、ホスホマンナン、キチン、キトサンなどの
アニオン性官能基含有多糖類があげられるがこれらに限
定されるわけではない。

本発明の吸着体に固定されているアニオン性官能基を有
する化合物は１種類であってもよいし、２種類以上であ
ってもよい。

本発明の吸着体は、水不溶性多孔質体にアニオン性官能
基を有する化合物が固定された状態のものをいう。その
ようなアニオン性官能基を有する化合物の固定された状
態をう、るためのアニオン性官能基の吸着体への導入方
法は種々あり、いかなる方法で導入してもよいが、代表
的な導入方法としては （１）アニオン性官能基あるいは容易にアニオン性官能
基に変換しうる官能基を含有する化合物をモノマーある
いは架橋剤として用いる重合によって吸着体を形成させ
る方法、 （２）　　アニオン性官能基を含有する化合物を水不溶
性多孔質体に固定させる方法、 （３）　　アニオン性官能基を形成する化合物と水不溶
性多孔質体を直接反応させることによって、水不溶性多
孔質体にアニオン性官能基を有する化合物を固定させる
方法 などがあげられる。

もちろんガラス、シリカ、アルミナなどもともとアニオ
ン性官能基を含有するアニオン性官能基含有化合物を吸
着体として用いてもよい。

（１）の方法において用いるアニオン性官能基あるいは
容易にアニオン性官能基に変換しうる官能基を含有する
モノマーあるいは架橋剤の代表例としては、アクリル酸
およびそのエステル、メタクリル酸およびそのエステル
、スチレンスルホン酸などがあげられるがこれらに限定
されるわけではない。

（２）の方法、すなわちアニオン性官能基を含有する化
合物を水不溶性多孔質体に固定させる方法としては、物
理的吸着による方法、イオン結合による方法、共有結合
により固定する方法などがあり、いかなる方法を用いて
もよいが、治療目的に吸着体を用いるには、滅菌時ある
いは治療中にアニオン性官能基含有化合物が離脱しない
ことが重要であるので、強固な固定が可能な共有結合法
が好ましい。

共有結合によりアニオン性官能基含有化合物を固定させ
るばあい、アニオン性官能基含有化合物がアニオン性官
能基以外に固定に利用できる官能基を有するのが好まし
い。

固定に利用できる官能基の代表例としては、アミノ基、
アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシニルイ
ミド基、水酸基、チオール基、アルデヒド基、ハロゲン
基、エポキシ基、シラノール基などがあげられるがこれ
らに限定されるわけではない。

これらの官能基を有するアニオン性官能基含を化合物は
多数存在するが、実施例に記載したスルファニル酸、硫
酸水素２−アミノエチル、テレフタル酸、ホスホリルエ
タノールアミン、グルコース６−リン酸、エタンジチオ
ールなどはその一例である。

また、アニオン性官能基を含有する化合物のうち硫酸エ
ステル基を含有する化合物の代表例としては、アルコー
ル、糖類、グリコールなどの水酸基含有化合物の硫酸エ
ステルがあげられるが、これらのなかでも多価アルコー
ルの部分、硫酸エステル化物、とりわけ糖類の硫酸エス
テル化物が硫酸エステル基、固定に必要な官能基の双方
を含んでいるうえに、生体適合性および活性ともに高く
、さらに硫酸化多糖類は容易に水不溶性多孔質体に固定
しうろことからとくに好ましい。

つぎに（３）の方法、すなわちアニオン性官能基を形成
する化合物と水不溶性多孔質体とを反応させることによ
って、水不溶性多孔質体にアニオン性官能基を存する化
合物を固定させてアニオン性官能基を導入する方法の代
表例として水酸基含有多孔質体に硫酸エステル基を導入
する反応があげられる。このばあい、水酸基含有水不溶
性多孔質体とクロロスルホン酸、濃硫酸などの試薬を反
応させることによって直接硫酸エステル基を導入するこ
とができる。

導入されるアニオン性官能基の量は、吸着体１　ｍｌあ
たり　０．０１　ｕ　ｍｏ１以上１０ｍ　ｍｏｌ以下が
好ましい。０．Ｏ１μｍｏ１未満のばあい吸官能力が充
分でなく、ｌｏｗ　ｍｏｌをこえるばあい非特異吸着が
多すぎて実用に供することが困難になる。

より好ましいアニオン性官能基導入量は１μｓｏ１以上
１００μｓｏｌ以下であるのがよい。

本発明の吸着体を用いて体液から抗脂質抗体を除去する
方法には種々あり、いかなる方法を用いてもよいが、流
体の流入口および流出口を有する容器、流体および該流
体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性多孔質体に
アニオン性官能基を有する化合物が固定されてなる抗脂
質抗体の吸着体は通過できないフィルター、および前記
容器内に充填された前記抗脂質抗体の吸着体からなる抗
脂質抗体の除去装置に体液を通液する方法が簡便で好ま
しいｄ 第２図に本発明の抗脂質抗体の除去装置の一実施例の概
略断面図を示す。第２図中、（１）および（２）はそれ
ぞれの流体の流入口と流出口、（３）１±本発明の吸着
体、（４）および（５）は流体および流体に含まれる成
分は通過できるが本発明の吸着体は通過できないフィル
ターまたはメツシュ、（６）はカラム、（７）は容器で
ある。ここで流体の流入口側のフィルター（４）は存在
しなくてもよい。

以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、
本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。

参考例 両端に孔径１５−のフィルターを装着したガラス製カラ
ム（内径９ｍｍ、カラム長１５０ｍ）にアガロースゲル
Ｂｉｏｇｏｌ　Ａ５ｍ　　（商品名、バイオラド社製、
粒径５０〜１００メツシユ）、合成ポリマーよりなるゲ
ル、トヨバールＨＷ８５　（商品名、東洋曹達工業■製
、粒径５０〜１０１００ｕ、および多孔質セルロースゲ
ル、セルロファインＣＣ−７００（商品名、チッソ■製
、粒径４５〜１００ρ）をそれぞれ均一に充填し、ベリ
スタティックポンプによりカラム内に水を流通し、流量
と圧力損失ΔＰとの関係を求めた。その結果冬第１図に
示す。同図より明らかなように軟質ゲルであるアガロー
スゲルは一定の流量以上では圧密化を起こし、圧力を増
加させても流量が増加しないのに対し、トヨパール、セ
ルロファインなどの硬質ゲルは圧力の増加にほぼ比例し
て流量が増加する。

製造例１ 多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡ３　（商品名、
チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量５０００万、
粒径８３〜１２５項）　　１００ｍ１に水Ｂ　Ｏｍｌお
よび２Ｍ　Ｎａ０１１８０ｍ１を加え４５℃で１時間攪
拌した。

攪拌後、さらにエビクロロヒドリン２５ｍ１を加えて４
５℃で２時間攪拌して反応終了後、ゲルを濾別水洗して
エポキシ化セルロースゲル（以下、エポキシ化ゲルとい
う）をえた。

実施例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲルｌｏｍｌに、スルファニ
ル酸０．１４ｇを７．５ｍｌの水に溶解したものを加え
、さらに２Ｍ　Ｎａ０１１を加えて溶液のｐＨを１０に
調整したのち４５℃で２０時間放置した。反応終了後、
ゲルを濾別水洗してスルファニル酸が固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定されたスルファニル酸により導入
されたアニオン性官能基量は吸着体１　ｍｌあたりｌＯ
μｆｆ１Ｏ１であった。

実施例２ スルファニル酸のかわりに硫酸水素２−アミノエチル０
．１１ｇを用いたほかは実施例１とまったく同様にして
、硫酸水素２−アミノエチルが固定されたセルロースゲ
ルをえた。固定された硫酸水素２−アミノエチルにより
導入されたアニオン性官能基量は吸着体１　ｍｌあたり
１０μｍｏｌであった。

実施例３ スルファニル酸のかわりにホスホリルエタノールアミン
ｏ、ｔｔｇを用いたほかは実施例１とまったく同様にし
て、ホスホリルエタノールアミンが固定されたセルロー
スゲルをえた。固定されたホスホリルエタノールアミン
により導入されたアニオン性官能基量は吸着体１　ｍｌ
あたりｌＯμｌ１Ｏ１であった。

実施例４ スルファニル酸のかわりに１．２−エタンジチオール０
．０８　［を用いたほかは実施例１とまったく同様にし
て、１．２−エタンジチオールが固定されたセルロース
ゲルをえた。固定された１、２−エタンジチオールによ
り導入されたアニオン性官能基量は吸着体１　ｍｌあた
りｌＯμｍｏｌであった。

実施例５ 製造例１でえたエポキシ化ゲル１０ｍ１に、分子量的５
０００、イオウ含ｍ１８％のデキストラン硫酸ナトリウ
ム５ｇ１および水８　ｍｌを加え、さらに２ＭＮａＯＨ
を加えて溶液のｐＨを１０に調整したのち４５℃で１７
時間放置した。反応終了後ゲルを濾別水洗し、０．５％
モノエタノールアミン水溶液を加えて室温で２０時間放
置し、未反応のエポキシ基を封止した。反応終了後ゲル
を濾別水洗してデキストラン硫酸ナトリウムが固定され
たセルロースゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸
により導入されたアニオン性官能基量は、吸着体１　ｍ
ｌあたり２９μｍｏｌであった。

製造例２ 製造例１でえたエポキシ化ゲル４０　ｍｌに、エチレン
ジアミン０．５ｇを３０　ｍｌの水に溶解したものを加
え４５℃で２０時間放置した。反応終了後ゲルを濾別水
洗してアミノ基が導入されたセルロースゲル（以下、ア
ミノ化ゲルという）をえた。

実施例６ 製造例２でえたアミノ化ゲル１０ｍ１に、水１０ｍ１と
それに続いてグルコース６−リン酸バリウム塩Ｉｇを加
え、さらに２Ｍ　ＮａＯＨ０，５ｍｌを加えて１時間４
５℃に保った。これにＮａＢＩＩ４０．１ｇを加え室温
で２４時間放置した。反応終了後ゲルを濾別水洗してグ
ルコース６−リン酸が固定されたセルロースをえた。固
定されたゲルコーストリン酸により導入されたアニオン
性官能基量は吸着体１ｍｌあたり１０μｍｏｌであった
。

実施例７ 製造例２でえたアミノ化ゲル１０ｍ１をＮ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）中に懸濁させ全容を１８ｍ１
とした。それにテレフタル酸０．２７ｇを溶解させたの
ち、縮合試薬（Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイ
ミド）１ｇを加え室温で一２４時間攪拌した。反応終了
後ゲルを濾別し、ＤＭＦ　、エタノール、水の順に洗浄
してテレフタル酸が固定されたセルロースゲルをえた。

固定されたテレフタル酸により導入されたアニオン性官
能基口は吸着体１　ｍｌあたりｌＯμｍｏｌであった。

実施例８ 製造例２でえたアミノ化ゲル１０ｍ１に、実施例５で用
いたものと同種のデキストラン硫酸ナトリウム５ｇおよ
び水８　ｍｌを加え、さらに２Ｍ　Ｎａ０１１Ｏ，５ｍ
ｌを加えて１時間４５℃に保った。これにＮａ１３１１
４０．１ｇを加え室温で２４時間放置した。反応終了後
ゲルを；点別水洗してデキストラン硫酸ナトリウムが固
定されたセルロースゲルをえた。

固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン
性官能基口は吸着体１　ｍｌあたり３９μｍｏｌであっ
た。

製造例３ 製造例１で用いたものと同種の多孔質セルロースゲル（
ＣＫゲルＡ　３　）　４０　ｍｌをヘプタン中に懸濁さ
せ全容を７０ｍ１とした。これに２０％Ｎ１亀Ｏｆｆ　
ｌ　Ｏｍｌおよびノニオン系界面活性剤トウィーン２０
（商品名、バイオラッド社製）　４０？ｆｉを加え４０
℃で３０分間振盪した。続いてエピクロロヒドリンｌｏ
ｍｌを加え４０℃で６時間振盪した。反応終了後ゲルを
濾別し、エタノール、水の順で洗浄してエポキシ化ゲル
をえた。

実施例９ 製造例１でえたエポキシ化ゲルのかわりに製造例３でえ
たエポキシ化ゲルｌＱｍｌを用いたほかは実施例５とま
ったく同様にして、デキストラン硫酸ナトリウムが固定
されたセルロースゲルをえた。固定されたデキストラン
硫酸により導入されたアニオン性官能基量は、吸着体１
　ｍｌあたり３８μｍｏｌであった。

実施例１Ｏ 製造例３でえたエポキシ化ゲル１０ｍ１に、片末端にア
ミノ基を有するポリアクリル酸（分子量的１０００）　
Ｉｇを水５　ｍｌに溶解したものを加え、これに２Ｍ　
Ｎａ０ＩＩ　１　ｍｌを加えて室温で４８時間放置した
。反応終了後ゲルを濾別水洗してポリアクリル酸が固定
されたセルロースゲルをえた。固定されたポリアクリル
酸により導入されたアニオン性官能基口は吸着体１　ｍ
ｌあたり　５６０μｍｏｌであった。片末端にアミノ基
を有するポリアクリル酸は、２−アミノエタンチオール
を連鎖移動剤とし、α、α″　−アゾビスイソブチロニ
トリル（ＡＩＢＮ）を開始剤とするアクリル酸の低重合
反応によりえられたものを用いた（日本化学会誌、１９
７７、Ｎｏ、１、＋ｌ［１〜９２頁、「２−ヒドロキシ
エチル−メタクリラート　−スチレン系ＡＩＩＡ型ブロ
ック共重合体の合成およびその構造とぬれ」、岡野光夫
、他参照）。

実施例１１ 片末端にアミノ基を有するポリアクリル酸（分子量的１
０００）のかわりに片末端にアミノ基を有するポリアク
リル酸（分子量約１万）ｔｇを用いたほかは実施例１０
とまったく同様にして、ポリアクリル酸が固定されたセ
ルロースゲルをえた。固定されたポリアクリル酸により
導入されたアニオン性官能基口は吸着体１　ｍｌあたり
５、Ｂｍ　ｍｏｌであった。片末端にアミノ基を有する
ポリアクリル酸は実施例１０に記載した方法と類似の方
法にしたがって合成した。

製造例４ 製造例３でえたエポキシ化ゲル１０ｍ１に、エチレンジ
アミン０．１２ｇを水５　ｍｌに溶解したものを加えた
ほかは製造例２とまったく同様にして、アミノ化ゲルを
えた。

実施例１２ 製造例２でえたアミノ化ゲルのかわりに製造例４でえた
アミノ化ゲル１０ｍ１を用いたほかは実施例８とまった
く同様にして、デキストラン硫酸ナトリウムが固定され
たセルロースゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸
により導入されたアニオン性官能基量は、吸着体１ｍｌ
あたり７６μｓ＋ｏｌであった。

製造例５ ７　、多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡ２２（商
、品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子ｍ　３
０００万、粒径５３〜１２５　ｕｔａ　）　２５　ｍｌ
に水１０ｍ１および２Ｍ　Ｎａ０１１３０ｍ１を加え、
４０℃で２０分間振盪した。

これにエピクロロヒドリン１２ｍ１を加え４０℃で３時
間振盪した。反応終了後ゲルを濾別水洗してエポキシ化
ゲルをえた。

製造例６ 多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡ３２（商品名、
チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量２０００万、
粒径５３〜１２５．ｕｍ）　２５ｍ１に、水１５ｍ１゜
２Ｍ　Ｎａ０１１２１ｍ１およびエビクロロヒドリン７
．１ｍｌを用いたほかは製造例５と同様にしてエポキシ
化ゲルをえた。

製造例７ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＧＣＬ−２
０００ｍ　　（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除
限界分子ｍ　３００万、粒径４４〜１０５μｍ）　２５
ｍ１　、水２５ｍ１．２Ｍ　ＮａＯ］ｌ　１５ｍ１およ
びエビクロロドリン５　ｍｌを用いたほかは製造例５と
同様にしてエポキシ化ゲルをえた。

製造例８ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＧＣＬ−１
００ｈ　　（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限
界分子量ＧＯ万、粒径４４〜ｌＱ５ＡＩｍ　）　２５ｍ
１　。

水２５ｍ１　、２Ｍ　Ｎａ０１１１１．７５　ｍｌおよ
びエビクロロドリン４ｍｌを用いたほかは製造例５と同
様にしてエポキシ化ゲルをえた。

製造例９ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＣＣ−７０
０ｍ　　（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界
分子ｆｆ１４０万、粒径４４〜１０５遍）　２５ｍ１　
。

水２５ｍ１　、２Ｍ　ＮａＯ！ｌ　　８．７５　ｍｌお
よびエビクロロヒドリン３　ｍｌを用いたほかは製造例
５と同様にしてエポキシ化ゲルをえた。

製造例１Ｏ 多孔質セルロースゲルであるセルロファインＣＣ−２０
０ｍ　　（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界
分子量１２万、粒径４４〜１０５ｍ＋　）　２５ｍ１　
。

水２５ｍ１．２Ｍ　ＮａＯＨ７ｍｌおよびエビクロロヒ
ドリン２．５ｍｌを用いたほかは製造例５と同様にして
エポキシ化ゲルをえた。

実施例１３ 製造例５でえたエポキシ化ゲル（ＣにゲルＡ２２）２０
ｍｌ”に、実施例５で用いたものと同種のデキストラン
硫酸ナトリウム１０ｇおよび水を加え全容を３３ｍ１と
した。２Ｍ　Ｎａ０１１を加えて溶液のＩ’１１を１０
．０に調整したのち４５℃で１７時間放置した。反応終
了後ゲルを濾別水洗し、０．５％モノエタノールアミン
水溶液を加えて室温で２０時間放置し、未反応のエポキ
シ基を封止した。反応終了後ゲルを濾別水洗してデキス
トラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえ
た。固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニ
オン性官能基量は吸着体１　ｍｌあたり３１μｍｏｌで
あった。

実施例１４ 製造例６でえたエポキシ化ゲル（ＣＫゲル八へ２）２０
ｍｌに、実施例５で用いたものと同種のデキストラン硫
酸ナトリウムｌＱｇおよび水を加え全容を３θｍｌとし
たこと、および溶液のｐｌ＋を９．９に調整したことの
ほかは実施例１３と同様にして、デキストラン硫酸ナト
リウムが固定されたセルロースゲルをえた。固定された
デキストラン硫酸により導入されたアニオン性官能基量
は、吸着体１　ｍｌあたり２７μａ＋ｏｌであった。

実施例１５ 製造例７でえたエポキシ化ゲル（ＧＣＬ−２０００１１
）２０　ｍｌに、実施例５で用いたものと同種のデキス
トラン硫酸ナトリウム９．３ｇおよび水を加え全容を３
５　ｍｌとしたこと、および溶液のｐｌ＋を９．３に調
整したことのほかは実施例１３と同様にして、デキスト
ラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえた
。固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオ
ン性官能基量は、吸着体１　ｍｌあたり３０μｍｏｌで
あった。

実施例１Ｂ 製造例８でえたエポキシ化ゲル（ＧＣＬ−１０００ｍ）
２０ｍｌに、実施例５で用いたものと同種のデキストラ
ン硫酸ナトリウム９．３ｇおよび水を加え全容を３５ｍ
１としたこと、および溶液のｐＨを９．３に調整したこ
とのほかは実施例１３と同様にして、デキストラン硫酸
ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえた。固定さ
れたデキストラン硫酸により導入されたアニオン性官能
基量は、吸盾体１　ｍｌあたり３０μｍｏｌであった。

実施例１７ 製造例９でえたエポキシ化ゲル（ＧＣ−７００１１１）
２０ｍｌに、実施例５で用いたものと同種のデキストラ
ン硫酸ナトリウム９．０ｇおよび水を加え全容を３６ｍ
１としたこと、および溶液のｐＨを９．３に調整したこ
とのほかは実施例１３と同様にして、デキストラン硫酸
ナトリウムが固定されたセルロースゲルをえた。固定さ
れたデキストラン硫酸により導入されたアニオン性官能
基量は、吸着体１　ｍｌあたり３０μｍｏｌであった。

実施例１８ 製造例１Ｏでえたエポキシ化ゲル（ＧＯ−２００ｍ）２
０ｍｌに、実施例５で用いたものと同種のデキストラン
硫酸ナトリウム９．０ｇおよび水を加え全容を３０ｍ１
としたこと、および溶液のｐＨを９．２に調整したこと
のほかは実施例１３と同様にして、デ１； キストラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロースゲル
をえた。固定されたデキストラン硫酸により導入された
アニオン性官能基量は、吸着体１　ｍｌあたり３２μｓ
＋ｏｌであった。

実施例１９ 実施例１〜１２でえられた吸着体を０．５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７，４）で洗浄したのち、各吸着体０．１ｍｌ
ずつをポリプロピレン製マイクロチューブ（容量１．５
ｍ１）に取り、０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）を
加えて全容を１　ｍｌとした。それに抗脂質抗体を含む
血清０　、２　ｍｌずつを加え、３７℃で２時間振四し
た。この吸着操作終了後、遠心分離してゲルを沈降させ
、採取した上澄中の抗脂質抗体価を酵素免疫抗体法（Ｅ
ＬＩＳＡ法）により測定した。抗脂質抗体価は、カルシ
オリピンをコートしたプレートに、希釈した検体を加え
、抗原−抗体反応を行い、ペルオキシダーゼ標識抗ヒト
免疫グロブリン抗体を加え、酵素発色反応をＣ５−９３
０（商品名、■島津製作所製）にて測定した。第１表に
、各吸着体に固定されたアニオン性官能基を有する化合
物名、および各吸着体の原血清中の抗詣質抗体価に対す
る吸着操作終了後の上澄中の抗脂質抗体価を百分率で相
対抗体価として示す。

第１表からデキストラン硫酸またはポリアクリル酸が固
定された吸着体の抗脂質抗体吸着能がとくにすぐれてい
ることがわかる。

実施例２０ 実施例５および１３〜１８でえられた吸着体を用い、加
えた血清量を０．１５ｍ１としたほかは実施例１９と同
様の方法にしたがって相対抗体価を求めた。えられた結
果を用いた種々の水不溶性多孔質件名とともに第２表に
示す。

第２表から、排除限界分子量が４０万以下の多孔質体で
あるセルロファインＧＣ−７００ｍおよびセルロファイ
ンＧＣ−２００ａ＋を用いた吸着体の抗脂質抗体吸着能
がややおとることがわかる。また逆に、排除限界分子量
を５０００万と大きくしすぎても抗脂質抗体吸着能はお
ちる傾向にあることがわかる。

第　　　　１　　　　表 ［発明の効果］ 本発明の吸着体およびそれを用いる除去装置は体液より
抗脂質抗体を選択的に除去する効果を奏する。

【図面の簡単な説明】

第１図は３種類のゲルを用いて流速と圧力損失との関係
を調べた結果を示すグラフであり、第２図は本発明の抗
脂質抗体の除去装置の一実施例の概略断面図である。 （図面の主要符号） （１）二流入口 （２）：流出口 （３）：吸着体 （４）、（５）：フィルター （７）：容　器 ２１？１　　図 圧力損失ΔＰ　（Ｋｑ／ｃｍ”　）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　水不溶性多孔質体にアニオン性官能基を有する化合
   物が固定されてなる抗脂質抗体の吸着体。 ２　アニオン性官能基が硫酸エステル基、スルホン酸基
   、カルボキシル基、チオール基およびリン酸エステル基
   からなる群より選ばれた少なくとも１種類よりなるもの
   である特許請求の範囲第１項記載の抗脂質抗体の吸着体
   。 ３　アニオン性官能基を有する化合物が、１分子内に複
   数のアニオン性官能基を有するポリアニオン化合物であ
   る特許請求の範囲第１項記載の抗脂質抗体の吸着体。 ４　水不溶性多孔質体が水酸基を有する化合物よりなる
   特許請求の範囲第１項記載の抗脂質抗体の吸着体。 ５　流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
   び該流体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性多孔
   質体にアニオン性官能基を有する化合物が固定されてな
   る抗脂質抗体の吸着体は通過できないフィルター、およ
   び前記容器内に充填された前記抗脂質抗体の吸着体から
   なる抗脂質抗体の除去装置。