JP7506443B2 - ナノ複合体、並びにその製造方法と使用 - Google Patents
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Description
方法1:
S1.前記タンパク質薬物、前記ヒアルロン酸及び前記プロタミンを混合してナノゲルを形成させる;
S2.前記脂質成分を従来の方法でリポソームに調製する;
S3.前記ナノゲルと前記リポソームとを共培養して、ナノゲル含有リポソームを形成させる;
S4.前記ナノゲル含有リポソームと「前記アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の混合物を、自己集合によりナノ複合体を形成させる;
方法2:
S1.前記タンパク質薬物、前記ヒアルロン酸及び前記プロタミンを混合してナノゲルを形成させる;
S2.前記脂質成分を従来の方法でリポソームに調製する;
S3.前記ナノゲルと前記リポソームを、マイクロ流体チップを通じてナノゲル含有リポソームに調製し、限外濾過により溶媒を除去した後、タンパク質薬物封入リポソームを調製する;
S4.前記タンパク質薬物封入リポソームと「前記アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の混合物を、自己集合によりナノ複合体を形成させる。
本発明のナノ複合体は、特定の使用量のタンパク質薬物、ヒアルロン酸、プロタミンおよび組換えリポタンパク質を含み、それは、適切な比率のヒアルロン酸、プロタミンによりタンパク質薬物に適した微小環境を構成し、組換えリポタンパク質により、タンパク質薬物の効率的な細胞内、生体内、さらには脳内への送達を実現する。
ロータリーエバポレーター(RE-52CS-1、Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory、中国)
超音波装置(JY92-II、Ningbo Xinzhi Biotechnology Co. Ltd.、中国)
透過型電子顕微鏡(H-7650、日立、日本)
クライオ電子顕微鏡(FEI Tecnai F20、Holland)
レーザー粒度計(Zetasizer Nano ZS90 ZEN3590、Malvern、イギリス)
マイクロプレートリーダー(Thermo、アメリカ)
レーザー共焦点顕微鏡(TCS SP8、Leica、ドイツ)。
(1)調製:
[1]ウシ血清アルブミン、ヒアルロン酸及びプロタミンを異なる質量比に従って共培養してアポタンパク質複合体(FITC-BSA-HA-PRTM)を形成させた。
[2]薄膜水和法によるリポソームの調製:脂質(中性リン脂質DMPCおよび/またはレシチンlecithin、カチオン性リン脂質DOTAP、およびアニオン性リン脂質DOPAおよび/またはアニオン性スフィンゴ脂質モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドGM1および/またはDMPA、DPPA、DSPA)を秤量し、500mLの丸底フラスコに入れ、エチルエーテル2mLを加え、蒸発乾燥させてリン脂質の水分を除去し、更にクロロホルム溶液2mLを加え、ロータリーエバポレーターで1時間減圧させた。0.01MのPBS溶液(pH7.4)4mLを加え、薄膜水和し剥離させてリポソームが得られるまで、40℃の水浴中で10分間断続的に振盪した。超音波プローブを用いた超音波で、リポソームの粒径をさらに小さくしてリポソームを得た。
[3]リポソームとFITC-BSA-HA-PRTMとをさまざまな比率で共培養して、タンパク質薬物担持リポソーム(FITC-BSA-HA-PRTM-LIPO)(表1-2)を形成させ、アポリポタンパク質(ApoE)を前記リポソーム溶液に加え、穏やかに混合し、120rpmで、振とうシェーカーに置き、37℃で36時間培養して、ウシ血清アルブミン担持ナノ複合体(FITC-BSA-HA-PRTM-rHDL)を得、ここで、アニオン性脂質DOPAを、DMPA、DPPA、またはDSPAで置き換えて、ウシ血清アルブミン担持ナノ複合体を得、それぞれFITC-BSA-HA-PRTM-rHDL-1、FITC-BSA-HA-PRTM-rHDL-2、FITC-BSA-HA-PRTM-rHDL-3であった。
ウシ血清アルブミン担持ナノ複合体をリンタングステン酸でネガティブ染色し、透過型電子顕微鏡で形態を観察した。さらにサンプリングした後、クライオ電子顕微鏡を使用して構造を観察した。レーザー粒度分析装置を使用して、粒径と表面電位を測定した。マイクロプレートリーダーを使用して、タンパク質薬物へのウシ血清アルブミン担持ナノ複合体のカプセル化効率および薬物担持量を検出した。
ウシ血清アルブミン担持ナノ複合体の細胞内タンパク質送達を、共焦点レーザー顕微鏡により観察した。ヒト子宮頸がん細胞Hela細胞を共焦点皿に50,000/ウェルの密度で播種し、24時間培養した。吸引して元の培養液を廃棄し、500μLの緑色蛍光標識タンパク質を担持した各タンパク質薬物を加えた。
(1)調製:
[1]フィコエリトリン(PE)とヒアルロン酸およびプロタミンとを様々な質量比で共培養してアポタンパク質複合体(PE-HA-PRTM)を形成させ。
[2]適量のリン脂質(両性リン脂質DMPC及びアニオン性リン脂質DOPA)の組み合わせを秤量し、エタノール相に溶解させてリポソームを得;
[3]適量のPE-HA-PRTMを秤量し、前記リポソームと一緒にマイクロ流体チップを介してタンパク質担持リポソーム(PE-HA-PRTM-LIPO)を調製し、限外濾過してエタノール溶液を除去し、エタノールを除去した後のリポソームにリポタンパク質および/またはその模倣ペプチドをロードさせて自己集合して、ヒアルロン酸、プロタミン、および組換えリポタンパク質で構成されるPE担持ナノ複合体(PE-HA-PRTM-rHDL)を得た。
PE担持ナノ複合体をリンタングステン酸でネガティブ染色し、透過型電子顕微鏡で形態を観察した。さらにサンプリングした後、クライオ電子顕微鏡を使用して構造を観察した。レーザー粒度分析装置を使用して、粒径と表面電位を測定した。マイクロプレートリーダーを使用して、タンパク質薬物へのPE担持ナノ複合体のカプセル化効率および薬物ロード量を検出した。
PE担持ナノ複合体の細胞内タンパク質送達状況をレーザー共焦点顕微鏡で観察した。ヒト子宮頸がん細胞Hela細胞、又は神経膠腫細胞C6を共焦点皿に50000/ウェルの密度で播種し、24時間培養した。吸引して元の培養液を廃棄し、500μLのPE担持組換えリポタンパク質ナノ複合体(PE-HA-PRTM-rHDL)を加えた。対照群はそれぞれ遊離PE;ヒアルロン酸、プロタミンおよびPE複合体(PE-HA-PRTM);ヒアルロン酸、プロタミンを含まないPE担持組換えリポタンパク質ナノ複合体(PE-rHDL);ヒアルロン酸、プロタミン、PE複合体担持リポソーム(PE-HA-PRTM-LIPO)及びPE+市販のタンパク質トランスフェクション試薬(PE-Pulsin)であり(PEの質量で計算し、10μg/mLの濃度で投与)、37℃で4時間培養した。次に、3.7%のホルムアルデヒドで37℃で10分間固定し、核をHoechestで10分間染色し、PBSで3回洗浄した後、共焦点イメージングを使用して定性的観察し、Image Jソフトウェアを使用して細胞によるFITC-PEの取り込みの半定量分析を実行した。
(1)調製:
[1]蛍光標識されたシトクロムCと、ヒアルロン酸およびプロタミンとを様々な質量比で共培養して、アポタンパク質複合体(FITC-CC-HA-PRTM)を形成させた。
[2]薄膜水和法によるリポソームの調製:脂質(中性リン脂質DMPCおよびアニオン性リン脂質DOPAの組み合わせ)を秤量し、500mLの丸底フラスコに置き、エチルエーテル2mLを加え、蒸発乾燥させてリン脂質の水分を除去し、更にクロロホルム溶液を加え、ロータリーエバポレーターで1時間減圧させた。0.01MのPBS溶液(pH7.4)4mLを加え、薄膜水和して剥離させてリポソームが得られるまで、40℃の水浴中で10分間断続的に振盪した。超音波プローブを用いた超音波で、リポソームの粒径をさらに小さくしてリポソームを得た。
[3]上記で調製されたリポソームをさまざまな比率で共培養して、タンパク質薬物担持リポソーム(FITC-CC-HA-PRTM-LIPO)を形成させ、ApoEをナノ複合体溶液に加え、穏やかに混合し、120rpmで、振とうシェーカーに置き、37℃で36時間培養して、シトクロムC担持ナノ複合体(FITC-CC-HA-PRTM-rHDL)を得た。
シトクロムC担持ナノ複合体をリンタングステン酸でネガティブ染色し、透過型電子顕微鏡で形態を観察した。さらにサンプリングした後、クライオ電子顕微鏡を使用して構造を観察した。レーザー粒度分析装置を使用して、粒径と表面電位を測定した。マイクロプレートリーダーを使用して、タンパク質薬物へのシトクロムC担持ナノ複合体のカプセル化効率および薬物ロード量を検出した。
シトクロムC担持ナノ複合体の細胞内タンパク質送達を、共焦点レーザー顕微鏡により観察した。神経膠腫細胞株U87細胞を共焦点皿に50,000個/ウェルの密度で播種し、24時間培養した。吸引して元の培養液を廃棄し、500μLの緑色蛍光タンパク質で標識したシトクロムC(FITC-CC)担持組換えリポタンパク質ナノ複合体(FITC-CC-HA-PRTM-rHDL)を加え、対照群はそれぞれ遊離FITC-CCタンパク質;ヒアルロン酸、プロタミン、FITC-CCリポソーム(FITC-CC-HA-PRTM);ヒアルロン酸、プロタミンを含まないCCリポタンパク質担持組換えナノ複合体(FITC-CC-rHDL);ヒアルロン酸、プロタミン、FITC-CCのリポソーム(FITC-CC-HA-PRTM-LIPO)とFITC-CC+市販のタンパク質トランスフェクション試薬(FITC-CC-Pulsin)(FITC-CCタンパク質の量に応じて計算し、20μg/mLの濃度で投与)をそれぞれ37℃で6時間培養した。次に、3.7%のホルムアルデヒドで37℃で10分間固定し、核をHoechestで10分間染色し、PBSで3回洗浄した後、共焦点イメージングを使用して定性的観察し、Image Jソフトウェアを使用して細胞によるFITC-BSAの取り込みの半定量分析を実行した。
(1)調製:
[1]蛍光標識抗体Alexa Fluor488-IgGをと、ヒアルロン酸およびプロタミンとを、様々な質量比で共培養して、アポタンパク質複合体(Alexa Fluor488-IgG-HA-PRTM)を形成させた。
[2]薄膜水和法によるリポソームの調製:脂質(両性リン脂質DMPC、カチオン性リン脂質DOTAP、及びアニオン性リン脂質DOPAの組み合わせ)を秤量し、500mLの丸底フラスコに置き、エチルエーテル2mLを加え、蒸発乾燥させてリン脂質の水分を除去し、更にクロロホルム溶液を加え、ロータリーエバポレーターで1時間減圧させた。0.01MのPBS溶液(pH7.4)4mLを加え、薄膜水和し剥離させてリポソームが得られるまで、40℃の水浴中で10分間断続的に振盪した。超音波プローブにより、リポソームの粒径をさらに小さくしてリポソームを得た。
[3]上記で調製したリポソームとAlexa Fluor488-IgG-HA-PRTMとを様々な比率で共培養してタンパク質薬物担持リポソーム(Alexa Fluor488-IgG-HA-PRTM-LIPO)を形成させ、ApoE又はApoA I模倣ペプチド(Ac-FAEKFKEAVKDYFAKFWD)を前記タンパク質担持リポソーム溶液に加え、穏やかに混合し、120rpmで、振とうシェーカーに置き、37℃で36時間培養して、Alexa Fluor488-IgG抗体担持ナノ複合体(Alexa Fluor488-IgG-HA-PRTM-rHDL)を得た。
Alexa Fluor488-IgG抗体担持ナノ複合体をリンタングステン酸でネガティブ染色し、透過型電子顕微鏡で形態を観察した。さらにサンプリングした後、クライオ電子顕微鏡を使用して構造を観察した。レーザー粒度分析装置を使用して、粒径と表面電位を測定した。マイクロプレートリーダーを使用して、タンパク質薬物へのAlexa Fluor488-IgG抗体担持ナノ複合体のカプセル化効率および薬物ロード量を検出した。
Alexa Fluor488-IgG抗体担持ナノ複合体の細胞内タンパク質送達を、共焦点レーザー顕微鏡により観察した。ヒト子宮頸がん細胞Hela細胞を共焦点皿に50000/ウェルの密度で播種し、24時間培養した。吸引して元の培養液を廃棄し、500μLのAlexa Fluor488-IgG抗体(Alexa Fluor488-IgG)担持組換えリポタンパク質ナノ複合体(Alexa Fluor488-IgG-HA-PRTM-rHDL)を加え、対照群はそれぞれ遊離Alexa Fluor488-IgGタンパク質;ヒアルロン酸、プロタミン、Alexa Fluor488-IgG複合体(Alexa Fluor488-IgG-HA-PRTM);ヒアルロン酸、プロタミンを含まないAlexa Fluor488-IgG組換えリポタンパク質担持ナノ複合体(Alexa Fluor488-IgG-rHDL);ヒアルロン酸、プロタミン、Alexa Fluor488-IgG担持リポソーム(Alexa Fluor488-IgG-HA-PRTM-LIPO)及びAlexa Fluor488-IgG+市販のタンパク質トランスフェクション試薬(Alexa Fluor488-IgG-Pulsin)(Alexa Fluor488-IgGタンパク質の量に応じて計算し、10μg/mLの濃度で投与)をそれぞれ37℃で6時間培養した。次に、3.7%のホルムアルデヒドで37℃で10分間固定し、核をHoechestで10分間染色し、PBSで3回洗浄した後、共焦点イメージングを使用して定性的観察し、Image Jソフトウェアを使用して細胞によるAlexa Fluor488-IgGの取り込みの半定量分析を実行した。
β-NGFを神経栄養性タンパク質薬物の研究モデルとして選択し、実施例1と同じ調製方法で、それぞれ実験群であるβ-NGF担持ナノ複合体と対照群を調製し、実験群と対照群の製剤は表8に示される通りである。
HRPを活性型酵素タンパク質薬物の研究モデルとして選択し、実施例1と同じ調製方法で、それぞれ実験群であるHRP担持ナノ複合体と対照群を調製し、実験群と対照群の製剤は表9に示される通りである。
[1]カタラーゼ(CAT)と、ヒアルロン酸およびプロタミンとを様々な質量比で共培養してアポタンパク質複合体(FITC-CAT-HA-PRTM)を形成させた。
[2]膜水和法によるリポソームの調製:脂質(中性リン脂質DMPC及びカチオン性リン脂質DOTAPの組み合わせ)を秤量し、500mLの丸底フラスコに入れ、エチルエーテル2mLを加え、蒸発乾燥させてリン脂質の水分を除去し、更にクロロホルム溶液2mLを加え、ロータリーエバポレーターで1時間減圧させた。0.01MのPBS溶液(pH7.4)4mLを加え、薄膜水和し剥離させてリポソームが得られるまで、40℃の水浴中で10分間断続的に振盪した。超音波プローブを用いた超音波で、リポソームの粒径をさらに小さくしてリポソームを得た。
[3]上記で調製したリポソームとFITC-CAT-HA-PRTMとを様々な比率で共培養してヒアルロン酸、プロタミン、FITC-CAT担持リポソーム(FITC-CAT-HA-PRTM-LIPO)を形成させ;ApoEを前記リポソーム溶液に加え、穏やかに混合し、120rpmで、振とうシェーカーに置き、37℃で36時間培養して、カタラーゼ(CAT)担持ナノ複合体(FITC-CAT-HA-PRTM-rHDL)を得た。
カタラーゼ担持ナノ複合体をリンタングステン酸でネガティブ染色し、透過型電子顕微鏡で形態を観察した。さらにサンプリングした後、クライオ電子顕微鏡を使用して構造を観察した。レーザー粒度分析装置を使用して、粒径と表面電位を測定した。マイクロプレートリーダーを使用して、タンパク質薬物へのシトクロムC担持ナノ複合体のカプセル化効率および薬物ロード量を検出した。
カタラーゼ担持ナノ複合体の細胞内タンパク質送達を、共焦点レーザー顕微鏡により観察した。ミクログリアBV2細胞を共焦点皿に50,000個/ウェルの密度で播種し、24時間培養した。吸引して元の培養液を廃棄し、500μLの緑色蛍光タンパク質で標識したカタラーゼ(FITC-CAT)の組換えリポタンパク質担持ナノ複合体(FITC-CAT-HA-PRTM-rHDL)を加え、対照群はそれぞれ遊離FITC-CATタンパク質;ヒアルロン酸、プロタミン、FITC-CAT複合体(FITC-CAT-HA-PRTM);ヒアルロン酸、プロタミンを含まないCAT組換えリポタンパク質担持複合体(FITC-CAT-rHDL);ヒアルロン酸、プロタミン、FITC-CAT担持リポソーム(FITC-CAT-HA-PRTM-LIPO)とFITC-CAT+市販のタンパク質トランスフェクション試薬(FITC-CAT-Pulsin)(FITC-CATタンパク質の量に応じて計算し、20μg/mLの濃度で投与)をそれぞれ37℃で6時間培養した。次に、3.7%のホルムアルデヒドで37℃で10分間固定し、核をHoechestで10分間染色し、PBSで3回洗浄した後、共焦点イメージングを使用して定性的観察し、Image Jソフトウェアを使用して細胞によるFITC-CATの取り込みの半定量分析を実行した。
カタラーゼ(CAT)をタンパク質薬物の研究モデルとして選択し、調製方法は実施例7と同様にして、カタラーゼ(CAT)担持ナノ複合体をそれぞれ調製し、製剤は表11に示される通りである。
蛍光プローブDiRおよびDiIで標識されたヒアルロン酸、プロタミン、CAT組換えリポタンパク質担持ナノ複合体(CAT-HA-PRTM-rHDL)(即ち、実施例7の実験群FITC-CAT-HA-PRTM-rHDL)及びヒアルロン酸、プロタミン、CAT担持リポソーム(CAT-HA-PRTM-LIPO)を調製した。同時に、制御された皮質損傷のマウスモデル(Controlled Cortical Injury、CCI)を構築した。マウスを5%抱水クロラールの腹腔内注射により麻酔した後、脳定位固定装置に固定し、頭皮を無菌条件下で切開して右頭頂骨を露出させ、右冠状縫合糸とヘリンボーン縫合糸の間、正中線の横に丸い頭蓋窓を開けて硬膜を露出させ、様々な程度の皮質損傷モデルをシミュレートするために、様々な打撃パラメータを設定した。衝撃パラメータ:速度:1.5m/s、深度:1mm、衝撃ヘッド直径:2mm、接触時間:100msで中等度の損傷をシミュレートし、日常的な脳損傷実験に使用した。損傷後、頭蓋骨は閉じ、皮膚を縫合した。偽損傷群のマウスは、頭皮のみを切開して右頭頂骨を露出させ、打撲傷は与えなかった。製剤のin vivo分布実験では、DiR標識製剤を尾静脈より投与し(リン脂質DMPC投与濃度で計算して20mg/kgである)、投与4時間後に心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓及び脳組織を採取し、生理食塩水ですすいだ後、小動物用生体内画像装置に設置して画像を収集し、体内におけるナノ複合体の分布と脳への輸送の動的な変化を観察した。実験結果は図8に示される通りであり、生理食塩水を与えた群の脳には蛍光製剤の分布が全くないが、CAT-HA-PRTM-rHDL脳の蛍光強度は有意で、右脳のCCI損傷部位に高度に集中していて、これは、本発明で構築されたナノ複合体が標的タンパク質を脳内に効率的に送達し、損傷部位への分布を標的にすることができることを示した。
さらに、本発明は、緑色蛍光タンパク質に形質転換されたミクログリア細胞を有するCX3CR1-GFPトランスジェニックマウスを選択してCCIモデルを構築し、同じように、DiI標識蛍光製剤をCCI後に尾静脈に投与し、CCIマウスの脳内におけるDiI-CAT-HA-PRTM-rHDL製剤の分布とミクログリア細胞による製剤の取り込みを脳スライス実験により評価し、尾静脈投与の3時間後、マウスを麻酔して心臓灌流のために固定し、腫瘍担持マウスの完全な脳を得、4%のパラホルムアルデヒドで24時間固定した後、PBSですすぎ、順次に15%および30%のスクロース溶液で乾燥させて沈殿させ、次に続いてO.C.T.で包埋し、-20℃で凍結して連続凍結冠状切片を作製し、スライスの厚さは14μmで、PBSですすぎ、100ng/mLのDAPIで10分間染色し、PBSですすぎ、水垢を拭き取り、グリセロールリン酸でスライドをマウントし、レーザー共焦点顕微鏡で脳内のCAT-HA-PRTM-rHDLの分布を観察した。実験結果は図9に示される通りであり、CAT-HA-PRTM-rHDLは、脳内のミクログリアによって効率的に取り込まれることができる。
マウス中等度CCI脳損傷モデルを構築し、様々なCAT担持製剤を尾静脈から投与し(CATによって計算された投与量濃度は13300単位/kgである)、7日間の連続投与後、マウスをモリス水迷路で行動学トーニングし、テストした。水迷路は、円形プール、プラットフォーム及び記録システムの3つの部分で構成され;プールは直径150cm、高さ50cmであり、プールは4つの象限(I、II、III及びIV象限)に分かれており、深さ30cmで水を満たし、マウスがプラットフォームとプールの底を直接見ることができないように、白い食品着色料を加えて水を不透明にし;水温は約25℃に保たれた。マウスがプラットフォームの位置を見つけて記憶することができるように、空間参照オブジェクト(ドア、カメラ、壁の標識など)をプールの周囲に設置し、それらの位置は変化しないようにした。円筒形のプラットフォームは直径9cm、高さ29cmで、無反射の黒い布で包まれ、水面下1cmに面が沈むように象限IVに配置した。プールの中央上に一つのカメラを設置して、動物の水泳画像を自動的に収集し、収集した信号をコンピュータに直接入力し、モリス水迷路ビデオ解析システム2.0を使用してマウスの遊泳軌跡を監視および記録した。隠しプラットフォームテスト(Hidden platform test)はマウスに7日間連続投与した後に開始し、5日間継続し;各トレーニングの入水ポイントは無作為で4つの象限に配置し、毎回異なるマウスを同じ位置に置き、プールの壁に面して水に入れ、入水順序は隣接する2日ごとに変え、マウスが入水してから黒いプラットフォームを見つけて登るまでの経路と所要時間(潜伏期間)をコンピュータで監視・記録した。各マウスは1日4回トレーニングを受け、各トリーニングに設定された潜伏期間は60秒であり、マウスが60秒以内にプラットフォームを見つけられない場合は、マウスをプラットフォームに誘導し、そこに10秒間滞在させ、この時、潜伏期間は60秒と記録され、各マウスの2つのトレーニング間隔は30秒である。空間探査実験(Probe trial)は5日間の測位航法試験後、6日目にプラットフォームを撤去し、それぞれ象限II、III象限の水入点からプールの壁に面してマウスを水の中に入れ、60秒以内のマウスがターゲット象限(プラットフォームが配置されている象限)で費やす時間の割合と、プラットフォームを検索するマウスの軌跡を記録した。実験結果は図10に示される通りであり、トレーニング時間が増加するにつれて、マウスの潜伏期間は徐々に短くなり、CAT-HA-PRTM-rHDLはマウスのプラットフォームを見つけるまでの時間を有意に短縮させ;同時に、空間探査実験により、CAT-HA-PRTM-rHDLを与えたマウスのプラットフォームを横切る回数とターゲットプラットフォームに滞在する時間が大幅に増加したことが示され、CAT-HA-PRTM-rHDLは、CATタンパク質を脳損傷部位に効率的に送達し、脳損傷による酸化ストレスレベルの上昇を緩和し、マウスの空間学習と記憶の能力を向上させることが示唆された。
実施例10と同様に、トランスジェニックマウスにSOD1-G93A(筋萎縮性側索硬化症モデル)CAT-HA-PRTM-rHDLを投与し、その中で、生理食塩水および遊離CATタンパク質投与群を対照群とし、SODマウスには生後3ヶ月から投与し始め、毎日継続的に投与すると同時に、ロータロッドテスト、グラブバーテスト及び後肢食いしばりテストなどのマウスの運動能力評価実験を実施した。ロータロッド実験の具体的なステップ:最初の週はマウスを3回トリーニングし、ロータロッドの回転速度は14rpmであり、この速度でロータロッド上に180秒間留まったマウスを無症候性と定義し、マウスがロータロッド上に留まる時間が180秒未満の場合、臨床発症時間として定義され、マウスは1週間のトリーニング後に実験する。ロッドグラブテストは、マウスが上肢に頼ってロッドを掴む時間を記録するもので、総検出時間は60秒であり、60秒以内のマウスの落下潜時を記録し;後肢食いしばりテストでは、マウスの尻尾を持ってマウスを逆さまに吊り下げ、15秒間のビデオを録画して、15秒以内のマウスの後肢を食いしばり状況を記録し、スコアは0~3であり、マウスの後肢の食いしばりの程度を評価した(硬直の重症度に正比例する)。実験結果は図11に示される通りであり、ロータロッド実験の初期段階では、各群のマウスは同様の時間でロータロッド上に留まったが、時間の延長(4℃で一晩放置)に伴い、CAT-HA-PRTM-rHDLを投与したマウスのロータロッド上での時間は有意に延長し、ロッドグラブテストのCAT-HA-PRTM-rHDL群のマウスのロッドグラブ時間は対照群よりも有意に延長され、後肢の食いしばりの程度が弱くなっており、SODマウスの麻痺の病理学的過程を軽減することを証明した。
[1]ヒアルロン酸とプロタミンを様々な質量比で共培養してアポタンパク質複合体(HA-PRTM)を形成させた。
[2]薄膜水和法によるリポソームの調製:脂質(中性リン脂質DMPC、およびアニオン性リン脂質DOPA)と赤色蛍光色素DiIを秤量し、500mLの丸底フラスコに置き、エチルエーテル2mLを加え、蒸発乾燥させてリン脂質の水分を除去し、更にクロロホルム溶液2mLを加え、ロータリーエバポレーターで1時間減圧させた。0.01MのPBS溶液(pH7.4)4mLを加え、薄膜水和し剥離させてリポソームが得られるまで、40℃の水浴中で10分間断続的に振盪した。超音波プローブを用いた超音波で、リポソームの粒径をさらに小さくして赤色蛍光プローブ担持リポソーム(DiI-LIPO)を得た。
[3]リポソームとHA-PRTMとを様々な比率で共培養して、タンパク質薬物を含まないブランクリポソーム(DiI-HA-PRTM-LIPO)を形成させ;アポリポタンパク質(ApoE)を前記リポソーム溶液に加え、穏やかに混合し、120rpmで、振とうシェーカーに置き、37℃で36時間培養して、ウシ血清アルブミン担持ナノ複合体(DiI-HA-PRTM-rHDL)を得た。
タンパク質薬物を含まないナノ複合体をリンタングステン酸でネガティブ染色し、透過型電子顕微鏡で形態を観察した。さらにサンプリングした後、クライオ電子顕微鏡を使用して構造を観察した。レーザー粒度分析装置を使用して、粒径と表面電位を測定した。
タンパク質薬物を含まないナノ複合体の細胞内タンパク質送達を、共焦点レーザー顕微鏡により観察した。ヒト子宮頸がん細胞Hela細胞を共焦点皿に50,000個/ウェルの密度で播種し、24時間培養した。吸引して元の培養液を廃棄し、500μLの赤色蛍光プローブで標識されたタンパク質薬物を含まないナノ複合体を加えた。
C57マウスを利用してCCIモデルを構築し、同じように、CCI後、尾静脈にDiI標識蛍光製剤を投与し、脳スライス実験によりCCIマウスの脳におけるDiI-BSA-HA-PRTM-rHDL及びDiI-HA-PRTM-rHDL製剤の分布状況を評価し、尾静脈投与の3時間後、マウスを麻酔して心臓灌流のために固定し、腫瘍担持マウスの完全な脳を採取し、4%のパラホルムアルデヒドで24時間固定し、PBSですすいだ後、15%および30%のグルコース溶液で沈むまで脱水し、続いてO.C.T.を使用して包埋し、-20℃で凍結し、厚さ14μmの連続凍結冠状切片を作製し、PBSですすいだ後、100ng/mLのDAPIで10分間染色し、PBSですすぎ、水垢を拭き取り、グリセロールリン酸でスライドをマウントし、レーザー共焦点顕微鏡で脳内の二つの製剤の分布を観察した。
Claims (22)
- ナノ複合体であって、
前記ナノ複合体は0~60%のタンパク質薬物、0.03~15%のヒアルロン酸、及び0.1~20%のプロタミン、35~95%の脂質成分と2.5~40%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」を含み、前記脂質成分は電気的に中性の脂質とアニオン性脂質を含み、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計投与量は0.03~15%であり、百分率は、前記ナノ複合体に対する各成分の質量百分率であることを特徴とする、ナノ複合体。 - 前記ナノ複合体はカチオン性脂質DOTAPを含まなく、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は10~255kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の等電点は4~11であり、
及び/又は、前記電気的に中性の脂質は、両親媒性脂質、非イオン性脂質、コレステロールおよびそれらの誘導体の中の1つまたは複数を含み、
及び/又は、前記アニオン性脂質はアニオン性リン脂質であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEおよびその模倣ペプチド、ApoA-I、ApoA-II、ApoA-IVおよびそれらの模倣ペプチド、ApoC-I、ApoC-II、ApoC-IIIおよびそれらの模倣ペプチド、ApoBおよびその模倣ペプチド、ApoJおよびその模倣ペプチドの中の1つ又は複数であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は1~43%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は0.03~5%であり;
及び/又は、前記プロタミンの使用量は0.2~16%であり;
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は2.85%~25%であり、
及び/又は、前記脂質成分の使用量は、35~90%であり、
及び/又は、前記アニオン性脂質の使用量は、14~40%であり、
或いは、前記電気的に中性の脂質の使用量は22~60%であり、
或いは、前記ヒアルロン酸とプロタミンの合計使用量は0.2~14%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は10~1000nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は-70~-15mVであることを特徴とする、請求項1に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の分子量は、10~16kDa、15~40kDa、30~50kDa、60~80kDa、140~180kDa、200~255kDa、又は210~255kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の等電点は4~5.3、3.7~5.7、4.4~6.4、6~8.5、7~9、8.3~10.3、又は9.3~11であり、
及び/又は、前記電気的に中性の脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、およびスフィンゴミエリンの中の1つまたは複数を含み、
及び/又は、前記アニオン性脂質はアニオン性リン脂質であり、前記アニオン性リン脂
質は、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン、リゾリン脂質、およびガングリオシドの中の1つ又は複数を含み、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEまたはApoA-I模倣ペプチドであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、1.5%、1.78%、2.2%、3%、4%、4.8%、5%、6%、8%、8.5%、9%、10%、11%、12.06%、15%、16%、16.5%、17%、17.73%、19%、20%、22%、28.08%、28.68%、29.31%、30%、31.5%、32%、30.9%、33%、33.07%、34%、34.5%、又は41%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.04%、0.05%、0.06%、0.08%、0.09%、0.1%、0.13%、0.14%、0.15%、0.2%、0.24%、0.25%、0.3%、0.33%、0.35%、0.41%、0.43%、0.44%、0.45%、0.47%、0.5%、0.6%、0.78%、0.8%、0.9%、1.53%、2.1%、0.2%、2.1%、2.5%、又は3%であり
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、0.1%、0.2%、0.3%、0.35%、0.8%、0.83%、1%、1.3%、1.5%、1.6%、1.7%、2%、2.34%、2.39%、2.44%、3%、3.26%、3.3%、3.5%、3.7%、4%、4.3%、4.5%、4.85%、5%、5.1%、5.5%、5.53%、6%、6.5%、7%、13%、又は14%であり
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、2.92%、3%、3.5%、3.82%、3.94%、4%、4.1%、4.12%、4.43%、4.5%、4.65%、4.68%、4.78%、4.83%、4.89%、5%、5.4%、5.8%、6%、6.35%、6.52%、7.21%、10.35%、16.5%、16.37%、19.29%、又は20%であり、
及び/又は、前記アニオン性脂質の使用量は、16%、17.64%、22%、24%、24.04%、24.78%、24.8%、25%、25.66%、26%、26.1%、27%、27.22%、27.5%、29.79%、29%、30%、30.5%、30.66%、31%、31.08%、31.11%、32%、31.5%、32%、32.5%、33%、33.06%、33.12%、33.6%、34%、34.44%、35%、35.07%、36%、37.22%、37.72%、37.8%、38%、又は39%であり、
及び/又は、前記電気的に中性の脂質の使用量は、23.5%、24.36%、30%、30.94%、32%、33%、34.2%、34.22%、35%,36.09%、37%、37.44%、37.5%、38.25%、39.08%、39.91%、41%、41.21%、42%、42.34%、42.92%、43.5%、44%、45%、45.61%、46%、46.4%、47%、47.56%、48.43%、50%、52.17%、52.2%、53%、54%、54.5%、55.32%、56%、又は57%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸とプロタミンの合計使用量は、0.3%、0.5%、0.64%、0.8%、0.85%、0.97%、1%、1.08%、1.15%、1.2%、1.5%、1.63%、1.71%、1.79%、2%、2.15%、2.35%、2.58%、2.63%、2.68%、3.2%、3.5%、4%、4.17%、5%、5.08%、5.5%、5.6%、5.96%、6.38%、6.5%、7%、8%、又は8.6%、13.06%、又は13.5%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は10~1000nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は、-65、-64.87±3.30、-63.7±2.66、-58.87±4.90、-57.33±2.31、-56.33±3.26、-55.20±10.74、-52.07±2.15、-50.10±3.18、-48.87±1.95、-45.20±2.15、-44.87±0.45mV、-43.93±14.03、-43.87±9.68、-43.20±2.75mV、
-40.23±6.92、-38.27±13.10、-36.83±2.71、-31.57±4.67、-30、-25,-20、-21.03±2.47、又は-19.43±1.96mVである、請求項2に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の分子量は、10~14kDa、20~33kDa、35~45kDa、60~80kDa、150~170kDa、220~250kDa、又は220~250kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の等電点は、4~4.8、4.2~5.5、4.9~5.9、6.5~8、7.5~8.5、8.8~9.8、又は9.8~10.8であり、
及び/又は、前記ホスファチジルコリンは、ジミリストイルホスファチジルコリンDMPC、ジパルミトイルホスファチジルコリンDPPC、ジステアロイルホスファチジルコリンDSPC、ジオレオイルホスファチジルコリンDOPC、ジラウロイルホスファチジルコリンDLPC、ジエルコイルホスファチジルコリンDEPC、1-パルミトイル-2-オレオイルホスファチジルコリンPOPC、卵黄レシチン、大豆レシチン、水素添加大豆リン脂質HSPCおよびそれらの誘導体の中の一つ又は複数であり、
及び/又は、前記ホスファチジルエタノールアミンは、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンDMPE、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンDSPE、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンDPPE、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンDOPE、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン―ポリエチレングリコール2000、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン―ポリエチレングリコール5000、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン―ポリエチレングリコール2000、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン―ポリエチレングリコールジオール5000、およびそれらの誘導体の中の一つ又は複数であり、
及び/又は、前記ホスファチジルグリセロールは、ジミリストイルホスファチジルグリセロールDMPG、ジステアロイルホスファチジルグリセロールDSPG、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールDPPG、ジオレオイルホスファチジルグリセロールDOPG、1-パルミトイル-2-オレオイルホスファチジルグリセリンナトリウムPOPG-Na、卵黄ホスファチジルグリセロールEPGおよびそれらの誘導体の中の一つ又は複数であり、
及び/又は、前記ホスファチジン酸は、ジミリストイルホスファチジン酸DMPA、ジステアロイルホスファチジン酸DSPA、ジパルミトイルホスファチジン酸DPPA、ジオレオイルホスファチジン酸DOPA及びそれらの誘導体の中の1つ又は複数であり、
及び/又は、前記ホスファチジルセリンは、ジオレオイルホスファチジルセリンDOPSおよび/またはジパルミトイルホスファチジルセリンDPPSであり、
及び/又は、前記リゾリン脂質は、ステアロイルリゾホスファチジルコリンS-lysoPC、ミリストイルリゾホスファチジルコリンM-LysoPC、パルミトイルリゾホスファチジルコリンP-LysoPC、およびそれらの誘導体の中の1つまたは複数であり、
及び/又は、前記ガングリオシドは、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドGM1であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は12~95nmである、請求項3に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の分子量は、12.4kDa、26kDa、40kDa、69.3kDa、160kDa、又は240kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の等電点は、4.3、4.7、5.4、7.2、8、9.3、又は10.3であり、
及び/又は、前記ホスファチジルコリンは、ジミリストイルホスファチジルコリンDMPC、卵黄レシチン、および水素添加大豆リン脂質HSPCの中の一つ又は複数であり、
及び/又は、前記ホスファチジン酸は、ジオレオイルホスファチジン酸DOPAであり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は、20.30±5.89nm、23.79±7.91nm、25nm、26.52±4.31nm、27.31±10.84nm、27.38±7.83nm、27.55±6.99nm、37.98±14.29nm、28.96±8.74nm、31.11±3.44nm、36.30±6.41nm、37.22±7.28nm、37.55±13.73nm、37.63±4.20nm、37.68±2.20nm、38nm、39.12±4.84nm、40.55±7.66nm、55nm、55.75±7.69nm、57nm、60nm、63.62±1.97nm、70nm、74.20±14.23nm、又は75.29±14.53nmである、請求項4に記載のナノ複合体。 - 前記電気的に中性の脂質がジミリストイルホスファチジルコリンDMPCと卵黄レシチンとの混合物である場合、ジミリストイルホスファチジルコリンDMPCと卵黄レシチンとの質量比は20:(8~12)であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質がホスファチジン酸とガングリオシドとの混合物である場合、ガングリオシドとホスファチジン酸の質量比は30.07:(3~7)であ
る、請求項3に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の等電点が4~5.7であり、分子量が60~80kDaである場合、前記ナノ複合体は0~30%のタンパク質薬物、0.15~2.1%のヒアルロン酸、1~6.5%のプロタミン、4.65~7%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」、30~53.5%の電気的に中性のリン脂質と、23.5~38.5%のアニオン性リン脂質とを含み、前記ヒアルロン酸とプロタミンの合計使用量は1~9%である、請求項1~6のいずれか1項に記載のナノ複合体。
- 前記タンパク質薬物の等電点は4.2~5.5であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は、60~80kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物は、ウシ血清アルブミンであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、0%、9%、16%、22%、28.08%、28.68%、29.31%、又は30%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.15%、0.24%、0.33%、0.35%、0.47%、又は2.1%であり、
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、1%、2%、2.34%、2.39%、2.44%、3.26%、3.7%、又は6.5%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、4.65%、4.68%、4.78%、4.83%、4.89%、5.4%、6.35%、又は6.52%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEであり、
及び/又は、前記電気的に中性の脂質は、DMPC及び/又は卵黄レシチン、或いは、DMPC及び/又は水素添加大豆リン脂質であり;
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質の使用量は、30.94%、37%、37.44%、38.25%、39.08%、43.5%、又は48.43%、又は52.17%であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質は、ガングリオシドおよび/またはホスファチジン酸であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質の使用量は、24.04%、25.66%、26%、27.22%、31.5%、33.06%、35.07%、又は37.72%であり、
前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は、1.15%、2.35%、2.58%、2.63%、2.68%、4.17%、又は8.6%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は、20~95nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は、-70~-20mVである、請求項7に記載のナノ複合体。 - 前記ホスファチジン酸は、ジオレオイルホスファチジン酸DOPAであり、前記ガングリオシドは、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドGM1であり、
前記アニオン性リン脂質がモノシアロテトラヘキソシルガングリオシドGM1とDOPAとの混合物である場合、モノシアロテトラヘキソシルガングリオシドGM1とDOPAの質量比は、30.07:(3~7)である、請求項8に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の等電点が4~5.3であり、分子量が200~255kDaである場合、前記ナノ複合体は4~17%のタンパク質薬物、0.05~0.25%のヒアルロン酸、1~3.3%のプロタミン、4~16.5%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」、42~53%の電気的に中性のリン脂質と、31~38%のアニオン性リン脂質とを含み、前記ヒアルロン酸とプロタミンの合計使用量は、1~3.5%である、請求項1~9のいずれか1項に記載のナノ複合体。
- 前記タンパク質薬物の等電点は、4~4.8であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は、220~250kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物はフィコエリトリンであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、4.8%、8%、8.5%、11%、又は16%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.08%、0.13%、0.15%、又は0.2%であり、
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、1%、1.5%、又は3%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、4.12%、5.8%、10.35%、又は16.37%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質は、ホスファチジルコリンであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質の使用量は、42.92%、43.5%、46.4%、47.56%、又は52.2%であり
及び/又は、前記アニオン性リン脂質は、DOPAであり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質の使用量は、31.08%、31.5%、33.6%、34.44%、又は37.8%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は、1.08%、1.15%、1.2%、1.63%、又は3.2%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は、12~60nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は、-65~-30mVである、請求項10に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の等電点が9.3~11であり、分子量が8~16kDaである場合、前記ナノ複合体は31.5~34.5%のタンパク質薬物、0.25~0.45%のヒアルロン酸、0.1~0.35%のプロタミン、3~5%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」、35~37.5%の電気的に中性のリン脂質と、25~27.5%のアニオン性リン脂質とを含み、前記ヒアルロン酸とプロタミンの合計使用量は0.5~0.85%である、請求項1~11のいずれか1項に記載のナノ複合体。
- 前記タンパク質薬物の等電点は、9.8~10.8であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は、10~14kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物は、シトクロムCであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、32~34%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.3~0.5%であり、
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、0.1~0.3%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、3.5~4.5%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質は、ホスファチジルコリンであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質の使用量は、35~37%であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質は、DOPAであり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質の使用量は、25~27%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は、0.5~0.8%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は、25~38nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は、-25~-15である、請求項12に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の等電点が7~9であり、分子量は140~180kDaである場合、前記ナノ複合体は5~43%のタンパク質薬物、0.04~0.9%のヒアルロン酸、1~14%のプロタミン、2.5~20%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」、23.5~46%の電気的に中性のリン脂質と、16~32%のアニオン性リン脂質とを含み、前記ヒアルロン酸とプロタミンの合計使用量は1~13.5%である、請求項1~13のいずれか1項に記載のナノ複合体。
- 前記タンパク質薬物の等電点は、7.5~8.5であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は、150~170kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物は、IgG抗体であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、6%、20%、33%、又は41%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.06%、0.09%、0.15%、0.41%、又は0.78%であり、
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、1.3%、1.7%、2%、4.3%、又は13%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、2.85%、2.92%、3.94%、7.21%、19.29%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoE、又はApoA-Iの模倣ペプチドであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質は、ホスファチジルコリンであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質の使用量は、24.36%、34.22%、41.21%、42.34%、又は45%であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質は、DOPAであり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質の使用量は、17.64%、24.78%、29.79%、30%、又は30.66%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は、1.71%、1.79%、2.15%、5.08%、又は13.06%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は、15~95nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は、-70~-20mVである、請求項1
4に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の等電点が8.3~10.3であり、分子量が15~40kDaである場合、前記ナノ複合体は1~3%のタンパク質薬物、0.2~0.6%のヒアルロン酸、4.5~6.5%のプロタミン、2.5~5%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」、54~57%の電気的に中性のリン脂質と、32~35%のアニオン性リン脂質とを含み、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は5~7%である、請求項1~15のいずれか1項に記載のナノ複合体。
- 前記タンパク質薬物の等電点は、8.8~9.8であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は、20~33kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物は、神経成長因子β-NGFであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、1.5~2.2%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.3~0.5%であり、
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、5~6%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、3~4.5%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質は、ホスファチジルコリンであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質の使用量は、54.5~56%であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質は、DOPAであり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質の使用量は、32.5~34%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は、5.5~6.5%である、請求項16に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の等電点が6~8.5であり、分子量が30~50kDaである場合、前記ナノ複合体は15~20%のタンパク質薬物、0.05~0.8%のヒアルロン酸、0.8~1.6%のプロタミン、3~6%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」、44~47%の電気的に中性のリン脂質と、29~330%のアニオン性リン脂質とを含み、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は0.3~2%である、請求項1~17のいずれか1項に記載のナノ複合体。
- 前記タンパク質薬物の等電点は、6.5~8であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は、35~45kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物は、活性型酵素タンパク質薬物HRPであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、16.5~19%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.1~0.3%であり、
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、0.8~1.5%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、4~5%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質は、ホスファチジルコリンであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質の使用量は、45~46%であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質は、DOPAであり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質の使用量は、30.5~32%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は、0.5~1.5%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は、20~57nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は、-55~-15である、請求項18に記載のナノ複合体。 - 前記タンパク質薬物の等電点が4.4~6.4であり、分子量が210~255kDaである場合、前記ナノ複合体は10~33%のタンパク質薬物、0.2~3%のヒアルロン酸、3.5~7%のプロタミン、3~6%の「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」、32~42%の電気的に中性のリン脂質と、22~39%のアニオン性リン脂質とを含み、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの合計使用量は4~8%である、請求項1に記載のナノ複合体。
- 前記タンパク質薬物の等電点は、4.9~5.9であり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の分子量は、220~250kDaであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物は、カタラーゼCATであり、
及び/又は、前記タンパク質薬物の使用量は、11~32%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸の使用量は、0.3~2.5%であり
及び/又は、前記プロタミンの使用量は、4~5.5%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の使用量は、4~5%であり、
及び/又は、前記「アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」は、ApoEであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質は、ホスファチジルコリンであり、
及び/又は、前記電気的に中性のリン脂質の使用量は、33~41%であり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質は、DOPAであり、
及び/又は、前記アニオン性リン脂質の使用量は、24~38%であり、
及び/又は、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンの使用量は、5~7%であり、
及び/又は、前記ナノ複合体の粒径は、55~70nmであり、
及び/又は、前記ナノ複合体のZeta電位は、-25~-15mVである、請求項20に記載のナノ複合体。 - 下記の方法1または方法2により製造されることを特徴とする、請求項1~21のいずれか1項に記載のナノ複合体の製造方法であって、
方法一:
S1.前記タンパク質薬物、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンとを混合してナノゲルを形成させ、
S2.前記脂質成分を従来の方法でリポソームに製造し、
S3.前記ナノゲルと前記リポソームとを共培養して、ナノゲル含有リポソームを形成させ、
S4.前記ナノゲル含有リポソームと「前記アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の混合物を、自己集合によりナノ複合体を形成させ、
方法二:
S1.前記タンパク質薬物、前記ヒアルロン酸と前記プロタミンとを混合してナノゲルを形成させ、
S2.前記脂質成分を従来の方法でリポソームに製造し、
S3.前記ナノゲルと前記リポソームを、マイクロ流体チップを通じてナノゲル含有リポソームに調製し、限外濾過により溶媒を除去した後、タンパク質薬物封入リポソームを製造し、
S4.前記タンパク質薬物封入リポソームと「前記アポリポタンパク質および/またはその模倣ペプチド」の混合物を、自己集合によりナノ複合体を形成される。
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US20110256224A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-10-20 | Signablok, Inc. | Methods and compositions for targeted delivery |
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