JP7471898B2

JP7471898B2 - Biomarkers for Cholangiocarcinoma

Info

Publication number: JP7471898B2
Application number: JP2020074425A
Authority: JP
Inventors: 弘明芳賀; 千咲池田; 達俊犬塚; 綾子栗本; 俊樹植田
Original assignee: HU Group Research Institute GK
Current assignee: HU Group Research Institute GK
Priority date: 2020-04-17
Filing date: 2020-04-17
Publication date: 2024-04-22
Anticipated expiration: 2040-04-17
Also published as: JP2021173529A

Description

本発明は、胆管がんのバイオマーカー、胆管がんの検査方法、および胆管がんの診断試薬に関する。 The present invention relates to a biomarker for bile duct cancer, a method for testing for bile duct cancer, and a diagnostic reagent for bile duct cancer.

胆管がんの診断には多くの課題がある。例えば、胆管がんの確定診断のために胆汁細胞診または胆管生検が実施されているが、胆汁細胞診は診断感度が低く、胆管生検は極めて侵襲性が高いという課題がある。また、硬化性胆管炎や慢性膵炎などの炎症（良性疾患）や、胆管がん（悪性疾患）によって胆管壁が肥厚して胆管狭窄を生じるが、胆道狭窄が良性疾患又は悪性疾患に起因するのかを画像的に高精度で鑑別することは現時点では非常に困難である。このような炎症による胆管壁肥厚や胆管狭窄は一時的であり、炎症の消退により狭窄が改善することがあり、結果的に良性胆管狭窄であったと推測できる場合もあるが、これにはある程度の時間を要し、悪性胆管狭窄であった場合、早期診断の機会を逸してしまうことになる。 There are many challenges in diagnosing bile duct cancer. For example, bile cytology or bile duct biopsy is performed to confirm the diagnosis of bile duct cancer, but bile cytology has low diagnostic sensitivity, and bile duct biopsy is highly invasive. In addition, the bile duct wall thickens and bile duct stenosis occurs due to inflammation (benign disease) such as sclerosing cholangitis and chronic pancreatitis, and bile duct cancer (malignant disease), but it is currently very difficult to distinguish with high accuracy using images whether the bile duct stenosis is caused by a benign or malignant disease. Such bile duct wall thickening and bile duct stenosis due to inflammation are temporary, and the stenosis may improve as the inflammation subsides, and it may be possible to infer that the bile duct stenosis was benign, but this takes a certain amount of time, and if the bile duct stenosis is malignant, the opportunity for early diagnosis will be missed.

ところで、近年、がん等の疾患の診断のため、様々な技術が開発されている。特に、被験体の負担を減らすため、できる限り低侵襲性で疾患を簡便に診断できる技術の開発が所望されており、このような技術の開発のため、バイオマーカーが探索されている。 In recent years, various technologies have been developed for diagnosing diseases such as cancer. In particular, in order to reduce the burden on subjects, there is a demand for the development of technologies that can diagnose diseases simply and with as little invasiveness as possible, and biomarkers are being explored to develop such technologies.

例えば、非特許文献１には、炎症性疾患の一種である原発性硬化性胆管炎（ＰｒｉｍａｒｙＳｃｌｅｒｏｓｉｎｇＣｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ：ＰＳＣ）の患者から採取された胆汁のプロテオミクス解析により、ＰＳＣに特異的な複数の胆汁タンパク質が同定されたことが記載されている（表２～５）。例えば、非特許文献１には、このような胆汁タンパク質として、ＰＳＣで過剰発現するキノンオキシドレダクターゼ（Ｑｕｉｎｏｎｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ）、およびアネキシンＡ４（ＡｎｎｅｘｉｎＡ４）が記載されている（表４、５）。 For example, Non-Patent Document 1 describes the identification of multiple bile proteins specific to primary sclerosing cholangitis (PSC), a type of inflammatory disease, through proteomic analysis of bile collected from patients with PSC (Tables 2 to 5). For example, Non-Patent Document 1 describes quinone oxidoreductase and annexin A4, which are overexpressed in PSC, as such bile proteins (Tables 4 and 5).

非特許文献２には、胆管細胞株であるＨ６９および胆管がん（Ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＣＣＡ）細胞株であるＫＫＵ－Ｍ２１３の培養上清の細胞外小胞（ＥＶ）中のタンパク質含量をプロテオミクス解析により比較した結果、含量に差異が認められたことが記載されている。例えば、非特許文献２の表１には、クラスリン重鎖１（Ｃｌａｔｈｒｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ１）が、ＫＫＵ－Ｍ２１３に比しＨ６９の培養上清のＥＶ中の含量が多いタンパク質として同定されたこと、プログラム細胞死６－相互作用タンパク質（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ６－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）が、Ｈ６９およびＫＫＵ－Ｍ２１３の培養上清のＥＶ中のどちらにも検出されたこと、ならびに腫瘍感受性遺伝子１０１タンパク質（Ｔｕｍｏｒｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｇｅｎｅ１０１ｐｒｏｔｅｉｎ）が、Ｈ６９の培養上清のＥＶ中では検出されたのに対して、ＫＫＵ－Ｍ２１３の培養上清のＥＶ中では検出されなかったタンパク質として同定されたことが報告されている。 Non-patent literature 2 describes that the protein content in extracellular vesicles (EVs) of the culture supernatants of the bile duct cell line H69 and the cholangiocarcinoma (CCA) cell line KKU-M213 was compared by proteomic analysis, revealing differences in the content. For example, Table 1 of Non-Patent Document 2 reports that clathrin heavy chain 1 was identified as a protein that was more abundant in EVs of H69 culture supernatants than in KKU-M213, that programmed cell death 6-interacting protein was detected in EVs of both H69 and KKU-M213 culture supernatants, and that tumor susceptibility gene 101 protein was identified as a protein that was detected in EVs of H69 culture supernatants but not in EVs of KKU-M213 culture supernatants.

非特許文献３には、胆汁中に含まれる複数のタンパク質が包括的に記載されている。 Non-Patent Document 3 provides a comprehensive description of several proteins contained in bile.

しかしながら、上記非特許文献１～３には、胆管がん患者の胆汁（特に、胆汁のＥＶ）において高い含量を示す、胆管がんのバイオマーカーとして使用できるタンパク質が記載されていない。 However, the above non-patent documents 1 to 3 do not describe proteins that are highly abundant in the bile of bile duct cancer patients (especially bile EVs) and that can be used as biomarkers for bile duct cancer.

ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ－ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢａｓｉｓｏｆＤｉｓｅａｓｅ２０１８；１８６４；ｐｐ．１３８０－１３８９Biochimica et Biophysica Acta-Molecular Basis of Disease 2018;1864;pp.1380-1389 ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ２０１５；１８５２；ｐｐ．１９８９－１９９９Biochimica et Biophysica Acta 2015;1852;pp.1989-1999 ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ２０１４；４（１）；ｐｐ．９１－１０８Comprehensive Physiology 2014; 4(1); pp. 91-108

本発明の目的は、胆汁細胞診よりも診断感度に優れる可能性があり、かつ胆管生検よりも侵襲性が低い胆管がんの診断に有用な技術を提供することである。 The objective of the present invention is to provide a technology useful for diagnosing bile duct cancer that may have greater diagnostic sensitivity than bile cytology and is less invasive than bile duct biopsy.

本発明者らは、鋭意検討した結果、胆管がん患者の胆汁（特に、胆汁のＥＶ）において高い含量を示す、胆管がんのバイオマーカーとして使用できるタンパク質を同定することに成功し、本発明を完成するに至った。 As a result of extensive research, the inventors have succeeded in identifying proteins that are highly abundant in the bile of patients with bile duct cancer (particularly bile EVs) and that can be used as biomarkers for bile duct cancer, thus completing the present invention.

すなわち、本発明は、胆汁（特に、胆汁のＥＶ）における、下記１）～１６５）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質（括弧内のアクセッション番号の記載は、ヒトタンパク質に対応する）に関連する発明を提供する：
１）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－２０（Ｒａｓ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＲａｂ－２０）（例、Ｑ９ＮＸ５７）；
２）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－５Ａ（Ｒａｓ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＲａｂ－５Ａ）（例、Ｐ２０３３９）；
３）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－３Ｂ（Ｒａｓ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＲａｂ－３Ｂ）（例、Ｐ２０３３７）；
４）ロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）（Ｌｅｕｃｉｎｅ－－ｔＲＮＡｌｉｇａｓｅ，ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ）（例、Ｑ９Ｐ２Ｊ５）；
５）第Ｘ凝固因子（ＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＸ）（例、Ｐ００７４２）；
６）クローディン－３（Ｃｌａｕｄｉｎ－３）（例、Ｏ１５５５１）；
７）クローディン－７（Ｃｌａｕｄｉｎ－７）（例、Ｏ９５４７１）；
８）クローディン－１０（Ｃｌａｕｄｉｎ－１０）（例、Ｐ７８３６９）；
９）ＷＤリピート及びＳＯＣＳボックス含有タンパク質２（ＷＤｒｅｐｅａｔａｎｄＳＯＣＳｂｏｘ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ２）（例、Ｑ９ＮＹＳ７）；
１０）フォン・ウィルブランド因子Ａドメイン含有タンパク質１（ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄｆａｃｔｏｒＡｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｑ６ＰＣＢ０）；
１１）バーシカンコアタンパク質（Ｖｅｒｓｉｃａｎｃｏｒｅｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｐ１３６１１）；
１２）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質ＶＴＡ１ホモログ（Ｖａｃｕｏｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓｏｒｔｉｎｇ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＶＴＡ１ｈｏｍｏｌｏｇ）（例、Ｑ９ＮＰ７９）；
１３）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質４Ｂ（Ｖａｃｕｏｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓｏｒｔｉｎｇ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ４Ｂ）（例、Ｏ７５３５１）；
１４）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｄ（Ｖａｃｕｏｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓｏｒｔｉｎｇ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ３７Ｄ）（例、Ｑ８６ＸＴ２）；
１５）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｂ（Ｖａｃｕｏｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓｏｒｔｉｎｇ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ３７Ｂ）（例、Ｑ９Ｈ９Ｈ４）；
１６）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質２８ホモログ（Ｖａｃｕｏｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓｏｒｔｉｎｇ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ２８ｈｏｍｏｌｏｇ）（例、Ｑ９ＵＫ４１）；
１７）ウリジン５’－モノホスフェートシンターゼ（Ｕｒｉｄｉｎｅ５’－ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ）（例、Ｐ１１１７２）；
１８）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｄ（Ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｙｏｓｉｎ－Ｉｄ）（例、Ｏ９４８３２）；
１９）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｃ（Ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｙｏｓｉｎ－Ｉｃ）（例、Ｏ００１５９）；
２０）ＵＭＰ－ＣＭＰキナーゼ（ＵＭＰ－ＣＭＰｋｉｎａｓｅ）（例、Ｐ３００８５）
２１）ＵＤＰ－グルコース４－エピメラーゼ（ＵＤＰ－ｇｌｕｃｏｓｅ４－ｅｐｉｍｅｒａｓｅ）（例、Ｑ１４３７６）；
２２）チロシン－プロテインホスファターゼ非レセプター型１２（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｎｏｎ－ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｐｅ１２）（例、Ｑ０５２０９）；
２３）腫瘍感受性遺伝子１０１タンパク質（Ｔｕｍｏｒｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｇｅｎｅ１０１ｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｑ９９８１６）；
２４）尿細管間質性腎炎抗原様（Ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｎｅｐｈｒｉｔｉｓａｎｔｉｇｅｎ－ｌｉｋｅ）（例、Ｑ９ＧＺＭ７）；
２５）チューブリン重合促進タンパク質ファミリーメンバー３（Ｔｕｂｕｌｉｎｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ－ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒ３）（例、Ｑ９ＢＷ３０）；
２６）チューブリンβ－６鎖（Ｔｕｂｕｌｉｎｂｅｔａ－６ｃｈａｉｎ）（例、Ｑ９ＢＵＦ５）；
２７）チューブリンβ－４Ｂ鎖（Ｔｕｂｕｌｉｎｂｅｔａ－４Ｂｃｈａｉｎ）（例、Ｐ６８３７１）；
２８）チューブリンβ－２Ｂ鎖（Ｔｕｂｕｌｉｎｂｅｔａ－２Ｂｃｈａｉｎ）（例、Ｑ９ＢＶＡ１）；
２９）チューブリンβ鎖（Ｔｕｂｕｌｉｎｂｅｔａｃｈａｉｎ）（例、Ｐ０７４３７）；
３０）チューブリンα－１Ｃ鎖（Ｔｕｂｕｌｉｎａｌｐｈａ－１Ｃｃｈａｉｎ）（例、Ｑ９ＢＱＥ３）；
３１）チューブリンα－１Ａ鎖（Ｔｕｂｕｌｉｎａｌｐｈａ－１Ａｃｈａｉｎ）（例、Ｑ７１Ｕ３６）；
３２）トランスメンブラン９スーパーファミリーメンバー２（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ９ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒ２）（例、Ｑ９９８０５）；
３３）トランスフェリンレセプタータンパク質２（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ２）（例、Ｑ９ＵＰ５２）；
３４）Ｔｏｌｌ相互作用タンパク質（Ｔｏｌｌ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｑ９Ｈ０Ｅ２）；
３５）組織因子経路インヒビター（Ｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒｐａｔｈｗａｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（例、Ｐ１０６４６）；
３６）チオレドキシン様タンパク質１（Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ－ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｏ４３３９６）；
３７）Ｔ－ボックス脳タンパク質１（Ｔ－ｂｏｘｂｒａｉｎｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｑ１６６５０）；
３８）ＳＴＥ２０関連キナーゼアダプタータンパク質β（ＳＴＥ２０－ｒｅｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅａｄａｐｔｅｒｐｒｏｔｅｉｎｂｅｔａ）（例、Ｑ９Ｃ０Ｋ７）；
３９）スタフィロコッカルヌクレアーゼドメイン含有タンパク質１（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｎｕｃｌｅａｓｅｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｑ７ＫＺＦ４）；
４０）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットβ－１（Ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇＡＴＰａｓｅｓｕｂｕｎｉｔｂｅｔａ－１）（例、Ｐ０５０２６）；
４１）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットα－１（Ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇＡＴＰａｓｅｓｕｂｕｎｉｔａｌｐｈａ－１）（例、Ｐ０５０２３）；
４２）ナトリウム／グルコースコトランスポーター４（Ｓｏｄｉｕｍ／ｇｌｕｃｏｓｅｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ４）（例、Ｑ２Ｍ３Ｍ２）；
４３）ナトリウム／グルコースコトランスポーター１（Ｓｏｄｉｕｍ／ｇｌｕｃｏｓｅｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ１）（例、Ｐ１３８６６）；
４４）ＳＨ３ドメイン結合タンパク質４（ＳＨ３ｄｏｍａｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ４）（例、Ｑ９Ｐ０Ｖ３）；
４５）セリン／アルギニン－リッチスプライシング因子７（Ｓｅｒｉｎｅ／ａｒｇｉｎｉｎｅ－ｒｉｃｈｓｐｌｉｃｉｎｇｆａｃｔｏｒ７）（例、Ｑ１６６２９）；
４６）セプチン－９（Ｓｅｐｔｉｎ－９）（例、Ｑ９ＵＨＤ８）；
４７）セプチン－８（Ｓｅｐｔｉｎ－８）（例、Ｑ９２５９９）；
４８）ＲＮＡ転写，翻訳及び輸送因子タンパク質（ＲＮＡｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｐｏｒｔｆａｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｑ９Ｙ２２４）；
４９）リボヌクレアーゼ４（Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ４）（例、Ｐ３４０９６）；
５０）ＲｈｏＧＴＰアーゼ活性化タンパク質１（ＲｈｏＧＴＰａｓｅ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｑ０７９６０）；
５１）レチナルデヒドロゲナーゼ１（Ｒｅｔｉｎａｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ１）（例、Ｐ００３５２）；
５２）レセプター型チロシン－プロテインホスファターゼＨ（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｔｙｐｅｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅＨ）（例、Ｑ９ＨＤ４３）；
５３）キノンオキシドレダクターゼ（Ｑｕｉｎｏｎｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ）（例、Ｑ０８２５７）；
５４）タンパク質Ｓ１００－Ａ１０（ＰｒｏｔｅｉｎＳ１００－Ａ１０）（例、Ｐ６０９０３）；
５５）タンパク質ＭＡＬ２（ＰｒｏｔｅｉｎＭＡＬ２）（例、Ｑ９６９Ｌ２）；
５６）タンパク質ＡＭＢＰ（ＰｒｏｔｅｉｎＡＭＢＰ）（例、Ｐ０２７６０）；
５７）プロスタミド／プロスタグランジンＦシンターゼ（Ｐｒｏｓｔａｍｉｄｅ／ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＦｓｙｎｔｈａｓｅ）（例、Ｑ８ＴＢＦ２）；
５８）プログラム細胞死６－相互作用タンパク質（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ６－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｑ８ＷＵＭ４）；
５９）推定リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＨ（Ｐｒｏｂａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇＡＴＰａｓｅＩＨ）（例、Ｐ９８１９６）；
６０）推定カチオン輸送ＡＴＰアーゼ１３Ａ４（Ｐｒｏｂａｂｌｅｃａｔｉｏｎ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇＡＴＰａｓｅ１３Ａ４）（例、Ｑ４ＶＮＣ１）；
６１）ポリペプチドＮ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ３（ＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅＮ－ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ３）（例、Ｑ１４４３５）；
６２）ポリ（ｒＣ）結合タンパク質２（Ｐｏｌｙ（ｒＣ）－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ２）（例、Ｑ１５３６６）；
６３）血小板由来増殖因子Ｄ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＤ）（例、Ｑ９ＧＺＰ０）；
６４）プラスチン－１（Ｐｌａｓｔｉｎ－１）（例、Ｑ１４６５１）；
６５）色素上皮由来因子（Ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ－ｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ）（例、Ｐ３６９５５）；
６６）リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＣ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇＡＴＰａｓｅＩＣ）（例、Ｏ４３５２０）；
６７）ホスホリパーゼＤ１（ＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＤ１）（例、Ｑ１３３９３）；
６８）結腸がん過剰発現１タンパク質（Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａ１ｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｑ８ＴＡＤ７）；
６９）ニバン様タンパク質１（Ｎｉｂａｎ－ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｑ９６ＴＡ１）；
７０）Ｎ－アセチルラクトサミニドβ－１，３－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ３（Ｎ－ａｃｅｔｙｌｌａｃｔｏｓａｍｉｎｉｄｅｂｅｔａ－１，３－Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ３）（例、Ｑ９Ｙ２Ａ９）；
７１）ミオシン調節軽鎖１２Ｂ（Ｍｙｏｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ１２Ｂ）（例、Ｏ１４９５０）；
７２）多剤耐性タンパク質１（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｐ０８１８３）；
７３）マザーズアゲンストデカペンタプレジックホモログ２（Ｍｏｔｈｅｒｓａｇａｉｎｓｔｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃｈｏｍｏｌｏｇ２）（例、Ｑ１５７９６）；
７４）ミトコンドリア性輸入レセプターサブユニットＴＯＭ７０（ＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｉｍｐｏｒｔｒｅｃｅｐｔｏｒｓｕｂｕｎｉｔＴＯＭ７０）（例、Ｏ９４８２６）；
７５）リンゴ酸デヒドロゲナーゼ（細胞質性）（Ｍａｌａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ）（例、Ｐ４０９２５）；
７６）リソソーム膜タンパク質２（Ｌｙｓｏｓｏｍｅｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ２）（例、Ｑ１４１０８）；
７７）脂肪腫好性パートナー（Ｌｉｐｏｍａ－ｐｒｅｆｅｒｒｅｄｐａｒｔｎｅｒ）（例、Ｑ９３０５２）；
７８）分岐鎖α－ケト酸デヒドロゲナーゼ複合体のリポアミドアセチルトランスフェラーゼ成分（ミトコンドリア性）（Ｌｉｐｏａｍｉｄｅａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｂｒａｎｃｈｅｄ－ｃｈａｉｎａｌｐｈａ－ｋｅｔｏａｃｉｄｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｃｏｍｐｌｅｘ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ）（例、Ｐ１１１８２）；
７９）ケラチン，ＩＩ型細胞骨格８（Ｋｅｒａｔｉｎ，ｔｙｐｅＩＩｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ８）（例、Ｐ０５７８７）；
８０）ＩＳＴ１ホモログ（ＩＳＴ１ｈｏｍｏｌｏｇ）（例、Ｐ５３９９０）；
８１）インターロイキン－１８（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１８）（例、Ｑ１４１１６）；
８２）インター－α－トリプシンインヒビター重鎖Ｈ２（Ｉｎｔｅｒ－ａｌｐｈａ－ｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｈｅａｖｙｃｈａｉｎＨ２）（例、Ｐ１９８２３）；
８３）インテグリン結合プロテインキナーゼ（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ｌｉｎｋｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ）（例、Ｑ１３４１８）；
８４）無機ピロホスファターゼ（Ｉｎｏｒｇａｎｉｃｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）（例、Ｑ１５１８１）；
８５）ヒアルロンナン結合タンパク質２（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ２）（例、Ｑ１４５２０）；
８６）高アフィニティーｃＡＭＰ－特異的かつＩＢＭＸ－非感受性３’，５’－サイクリックホスホジエステラーゼ８Ａ（ＨｉｇｈａｆｆｉｎｉｔｙｃＡＭＰ－ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄＩＢＭＸ－ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ３’，５’－ｃｙｃｌｉｃｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ８Ａ）（例、Ｏ６０６５８）；
８７）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＬ（ＨｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｎｕｃｌｅａｒｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＬ）（例、Ｐ１４８６６）；
８８）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＨ（ＨｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｎｕｃｌｅａｒｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＨ）（例、Ｐ３１９４３）；
８９）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＤ様（ＨｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｎｕｃｌｅａｒｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎＤ－ｌｉｋｅ）（例、Ｏ１４９７９）；
９０）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｋ）サブユニットα（Ｇｕａｎｉｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＧ（ｋ）ｓｕｂｕｎｉｔａｌｐｈａ）（例、Ｐ０８７５４）；
９１）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｔ）サブユニットβ－２（Ｇｕａｎｉｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＧ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｔ）ｓｕｂｕｎｉｔｂｅｔａ－２）（例、Ｐ６２８７９）；
９２）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｏ）サブユニットγ－１２（Ｇｕａｎｉｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＧ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｏ）ｓｕｂｕｎｉｔｇａｍｍａ－１２）（例、Ｑ９ＵＢＩ６）；
９３）グアニンデアミナーゼ（Ｇｕａｎｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）（例、Ｑ９Ｙ２Ｔ３）；
９４）増殖因子レセプター結合タンパク質７（Ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂｏｕｎｄｐｒｏｔｅｉｎ７）（例、Ｑ１４４５１）；
９５）グリピカン－６（Ｇｌｙｐｉｃａｎ－６）（例、Ｑ９Ｙ６２５）；
９６）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ ω－１（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｏｍｅｇａ－１）（例、Ｐ７８４１７）；
９７）グルタミン－フルクトース－６－ホスフェートアミノトランスフェラーゼ［異性化］１（Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ－－ｆｒｕｃｔｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ［ｉｓｏｍｅｒｉｚｉｎｇ］１）（例、Ｑ０６２１０）；
９８）グルタメート－リッチタンパク質５（Ｇｌｕｔａｍａｔｅ－ｒｉｃｈｐｒｏｔｅｉｎ５）（例、Ｑ６Ｐ６Ｂ１）；
９９）γ－可溶性ＮＳＦ付着タンパク質（Ｇａｍｍａ－ｓｏｌｕｂｌｅＮＳＦａｔｔａｃｈｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｑ９９７４７）；
１００）ガレクチン－９Ｂ（Ｇａｌｅｃｔｉｎ－９Ｂ）（例、Ｑ３Ｂ８Ｎ２）；
１０１）ガレクチン－２（Ｇａｌｅｃｔｉｎ－２）（例、Ｐ０５１６２）；
１０２）フェルミチンファミリーホモログ１（Ｆｅｒｍｉｔｉｎｆａｍｉｌｙｈｏｍｏｌｏｇ１）（例、Ｑ９ＢＱＬ６）；
１０３）ＦＡＳ－関連因子２（ＦＡＳ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆａｃｔｏｒ２）（例、Ｑ９６ＣＳ３）；
１０４）エストラジオール１７－β－デヒドロゲナーゼ２（Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ１７－ｂｅｔａ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ２）（例、Ｐ３７０５９）；
１０５）上皮細胞接着分子（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ）（例、Ｐ１６４２２）；
１０６）上皮成長因子レセプターキナーゼ基質８様タンパク質１（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｋｉｎａｓｅｓｕｂｓｔｒａｔｅ８－ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｑ８ＴＥ６８）；
１０７）小胞体シャペロンＢｉＰ（ＥｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｃｈａｐｅｒｏｎｅＢｉＰ）（例、Ｐ１１０２１）；
１０８）伸長因子Ｔｕ（ミトコンドリア性）（ＥｌｏｎｇａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＴｕ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ）（例、Ｐ４９４１１）；
１０９）ダブルコルチンドメイン含有タンパク質２（Ｄｏｕｂｌｅｃｏｒｔｉｎｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ２）（例、Ｑ９ＵＨＧ０）；
１１０）ジスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１０（Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎａｎｄｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ１０）（例、Ｏ１４６７２）；
１１１）ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質２（Ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎａｓｅ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ２）（例、Ｑ１６５５５）；
１１２）細胞質性ダイニン１重鎖１（Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｄｙｎｅｉｎ１ｈｅａｖｙｃｈａｉｎ１）（例、Ｑ１４２０４）；
１１３）シスチン－１（Ｃｙｓｔｉｎ－１）（例、Ｑ７１７Ｒ９）；
１１４）サイクリン－Ｙ（Ｃｙｃｌｉｎ－Ｙ）（例、Ｑ８ＮＤ７６）；
１１５）コピン－８（Ｃｏｐｉｎｅ－８）（例、Ｑ８６ＹＱ８）；
１１６）補体Ｃ１ｑサブ成分サブユニットＣ（ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＣ１ｑｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｕｂｕｎｉｔＣ）（例、Ｐ０２７４７）；
１１７）コラーゲンα－１（ＸＶＩＩＩ）鎖（Ｃｏｌｌａｇｅｎａｌｐｈａ－１（ＸＶＩＩＩ）ｃｈａｉｎ）（例、Ｐ３９０６０）；
１１８）コアトマーサブユニットγ－１（Ｃｏａｔｏｍｅｒｓｕｂｕｎｉｔｇａｍｍａ－１）（例、Ｑ９Ｙ６７８）；
１１９）コアトマーサブユニットα（Ｃｏａｔｏｍｅｒｓｕｂｕｎｉｔａｌｐｈａ）（例、Ｐ５３６２１）；
１２０）クラステリン（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ）（例、Ｐ１０９０９）；
１２１）クラスリン重鎖１（Ｃｌａｔｈｒｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ１）（例、Ｑ００６１０）；
１２２）荷電多胞体タンパク質５（Ｃｈａｒｇｅｄｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒｂｏｄｙｐｒｏｔｅｉｎ５）（例、Ｑ９ＮＺＺ３）；
１２３）荷電多胞体タンパク質２ａ（Ｃｈａｒｇｅｄｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒｂｏｄｙｐｒｏｔｅｉｎ２ａ）（例、Ｏ４３６３３）；
１２４）荷電多胞体タンパク質１ａ（Ｃｈａｒｇｅｄｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒｂｏｄｙｐｒｏｔｅｉｎ１ａ）（例、Ｑ９ＨＤ４２）；
１２５）カルボキシ末端ドメインＲＮＡポリメラーゼＩＩポリペプチドＡスモールホスファターゼ１（Ｃａｒｂｏｘｙ－ｔｅｒｍｉｎａｌｄｏｍａｉｎＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅＩＩｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅＡｓｍａｌｌｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ１）（例、Ｑ９ＧＺＵ７）；
１２６）胆管側多選択性有機アニオントランスポーター２（Ｃａｎａｌｉｃｕｌａｒｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃｏｒｇａｎｉｃａｎｉｏｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ２）（例、Ｏ１５４３８）；
１２７）ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ触媒サブユニットβ（ｃＡＭＰ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｃａｔａｌｙｔｉｃｓｕｂｕｎｉｔｂｅｔａ）（例、Ｐ２２６９４）；
１２８）カルパイン－７（Ｃａｌｐａｉｎ－７）（例、Ｑ９Ｙ６Ｗ３）；
１２９）カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ型サブユニットδ（Ｃａｌｃｉｕｍ／ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｔｙｐｅＩＩｓｕｂｕｎｉｔｄｅｌｔａ）（例、Ｑ１３５５７）；
１３０）Ｃ－１－テトラヒドロ葉酸シンターゼ（細胞質性）（Ｃ－１－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ）（例、Ｐ１１５８６）；
１３１）ＢＲＯ１ドメイン含有タンパク質ＢＲＯＸ（ＢＲＯ１ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＢＲＯＸ）（例、Ｑ５ＶＷ３２）；
１３２）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ４（Ｂｅｔａ－１，４－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ４）（例、Ｏ６０５１３）；
１３３）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ１（Ｂｅｔａ－１，４－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１）（例、Ｐ１５２９１）；
１３４）基底膜特異的ヘパラン硫酸プロテオグリカンコアタンパク質（Ｂａｓｅｍｅｎｔｍｅｍｂｒａｎｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｅｐａｒａｎｓｕｌｆａｔｅｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｃｏｒｅｐｒｏｔｅｉｎ）（例、Ｐ９８１６０）；
１３５）バンド４．１様タンパク質１（Ｂａｎｄ４．１－ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ１）（例、Ｑ９Ｈ４Ｇ０）；
１３６）ＡＴＰ依存性６－ホスホフルクトキナーゼ（血小板型）（ＡＴＰ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ６－ｐｈｏｓｐｈｏｆｒｕｃｔｏｋｉｎａｓｅ，ｐｌａｔｅｌｅｔｔｙｐｅ）（例、Ｑ０１８１３）；
１３７）アスパルチル／アスパラギニルβ－ヒドロキシラーゼ（Ａｓｐａｒｔｙｌ／ａｓｐａｒａｇｉｎｙｌｂｅｔａ－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）（例、Ｑ１２７９７）；
１３８）アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥ）（例、Ｐ０２６４９）；
１３９）アポリポタンパク質Ｃ－ＩＶ（ＡｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＣ－ＩＶ）（例、Ｐ５５０５６）；
１４０）アポリポタンパク質Ｂ－１００（ＡｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＢ－１００）（例、Ｐ０４１１４）；
１４１）アノクタミン－１（Ａｎｏｃｔａｍｉｎ－１）（例、Ｑ５ＸＸＡ６）；
１４２）アネキシンＡ４（ＡｎｎｅｘｉｎＡ４）（例、Ｐ０９５２５）；
１４３）アネキシンＡ１３（ＡｎｎｅｘｉｎＡ１３）（例、Ｐ２７２１６）；
１４４）α－１，３－マンノシル－糖タンパク質２－β－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（Ａｌｐｈａ－１，３－ｍａｎｎｏｓｙｌ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ２－ｂｅｔａ－Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（例、Ｐ２６５７２）；
１４５）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ３（Ａｌｄｏ－ｋｅｔｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｆａｍｉｌｙ１ｍｅｍｂｅｒＣ３）（例、Ｐ４２３３０）；
１４６）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ２（Ａｌｄｏ－ｋｅｔｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｆａｍｉｌｙ１ｍｅｍｂｅｒＣ２）（例、Ｐ５２８９５）；
１４７）ＡＤＰ－リボシル化因子様タンパク質３（ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ－ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ３）（例、Ｐ３６４０５）；
１４８）ＡＤＰ－リボシル化因子１（ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ１）（例、Ｐ８４０７７）；
１４９）ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ３（ＡＤＰ／ＡＴＰｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ３）（例、Ｐ１２２３６）；
１５０）アシル－タンパク質チオエステラーゼ１（Ａｃｙｌ－ｐｒｏｔｅｉｎｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ１）（例、Ｏ７５６０８）；
１５１）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７ａ（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ７ａ）（例、Ｐ６２４２４）；
１５２）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ７）（例、Ｐ１８１２４）；
１５３）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ３（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ３）（例、Ｐ３９０２３）；
１５４）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２７ａ（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ２７ａ）（例、Ｐ４６７７６）；
１５５）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２４（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ２４）（例、Ｐ８３７３１）；
１５６）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２３（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ２３）（例、Ｐ６２８２９）；
１５７）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１４（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ１４）（例、Ｐ５０９１４）；
１５８）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１１（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ１１）（例、Ｐ６２９１３）；
１５９）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１０（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ１０）（例、Ｐ２７６３５）；
１６０）４０Ｓリボソーマルタンパク質ＳＡ（４０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＳＡ）（例、Ｐ０８８６５）；
１６１）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ８（４０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＳ８）（例、Ｐ６２２４１）；
１６２）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２５（４０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＳ２５）（例、Ｐ６２８５１）；
１６３）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２４（４０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＳ２４）（例、Ｐ６２８４７）；
１６４）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２３（４０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＳ２３）（例、Ｐ６２２６６）；および
１６５）１－ホスファチジルイノシトール４，５－ビホスフェートホスホジエステラーゼδ－１（１－ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ４，５－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｄｅｌｔａ－１）（例、Ｐ５１１７８）。 That is, the present invention provides an invention related to one or more proteins selected from the group consisting of the following 1) to 165) in bile (particularly, bile EVs):
1) Ras-related protein Rab-20 (e.g., Q9NX57);
2) Ras-related protein Rab-5A (e.g., P20339);
3) Ras-related protein Rab-3B (e.g., P20337);
4) Leucine-tRNA ligase (cytoplasmic) (e.g., Q9P2J5);
5) Coagulation factor X (e.g., P00742);
6) Claudin-3 (e.g., O15551);
7) Claudin-7 (e.g., O95471);
8) Claudin-10 (e.g., P78369);
9) WD repeat and SOCS box-containing protein 2 (e.g., Q9NYS7);
10) von Willebrand factor A domain-containing protein 1 (e.g., Q6PCB0);
11) Versican core protein (e.g., P13611);
12) Vacuolar protein sorting-associated protein VTA1 homolog (e.g., Q9NP79);
13) Vacuolar protein sorting-associated protein 4B (e.g., O75351);
14) Vacuolar protein sorting-associated protein 37D (e.g., Q86XT2);
15) Vacuolar protein sorting-associated protein 37B (e.g., Q9H9H4);
16) Vacuolar protein sorting-associated protein 28 homolog (e.g., Q9UK41);
17) Uridine 5'-monophosphate synthase (e.g., P11172);
18) Unconventional myosin-Id (e.g., O94832);
19) unconventional myosin-Ic (e.g., O00159);
20) UMP-CMP kinase (e.g., P30085)
21) UDP-glucose 4-epimerase (e.g., Q14376);
22) tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 12 (e.g., Q05209);
23) Tumor susceptibility gene 101 protein (e.g., Q99816);
24) Tubulointerstitial nephritis antigen-like (e.g., Q9GZM7);
25) tubulin polymerization-promoting protein family member 3 (e.g., Q9BW30);
26) Tubulin beta-6 chain (e.g., Q9BUF5);
27) Tubulin beta-4B chain (e.g., P68371);
28) Tubulin beta-2B chain (e.g., Q9BVA1);
29) tubulin beta chain (e.g., P07437);
30) Tubulin alpha-1C chain (e.g., Q9BQE3);
31) Tubulin alpha-1A chain (e.g., Q71U36);
32) transmembrane 9 superfamily member 2 (e.g., Q99805);
33) Transferrin receptor protein 2 (e.g., Q9UP52);
34) Toll-interacting protein (e.g., Q9H0E2);
35) tissue factor pathway inhibitor (e.g., P10646);
36) Thioredoxin-like protein 1 (e.g., O43396);
37) T-box brain protein 1 (e.g., Q16650);
38) STE20-related kinase adapter protein beta (e.g., Q9C0K7);
39) Staphylococcal nuclease domain-containing protein 1 (e.g., Q7KZF4);
40) Sodium/potassium-transporting ATPase subunit beta-1 (e.g., P05026);
41) Sodium/potassium-transporting ATPase subunit alpha-1 (e.g., P05023);
42) sodium / glucose cotransporter 4 (e.g., Q2M3M2);
43) sodium / glucose cotransporter 1 (e.g., P13866);
44) SH3 domain-binding protein 4 (e.g., Q9P0V3);
45) serine/arginine-rich splicing factor 7 (e.g., Q16629);
46) Septin-9 (e.g., Q9UHD8);
47) Septin-8 (e.g., Q92599);
48) RNA transcription, translation and transport factor protein (e.g., Q9Y224);
49) Ribonuclease 4 (e.g., P34096);
50) Rho GTPase-activating protein 1 (e.g., Q07960);
51) Retinal dehydrogenase 1 (e.g., P00352);
52) Receptor-type tyrosine-protein phosphatase H (e.g., Q9HD43);
53) quinone oxidoreductase (e.g., Q08257);
54) Protein S100-A10 (e.g., P60903);
55) Protein MAL2 (e.g., Q969L2);
56) Protein AMBP (e.g., P02760);
57) Prostamide/prostaglandin F synthase (e.g., Q8TBF2);
58) programmed cell death 6-interacting protein (e.g., Q8WUM4);
59) Probable phospholipid-transporting ATPase IH (e.g., P98196);
60) Probable cation-transporting ATPase 13A4 (e.g., Q4VNC1);
61) Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 3 (e.g., Q14435);
62) Poly(rC)-binding protein 2 (e.g., Q15366);
63) Platelet-derived growth factor D (e.g., Q9GZP0);
64) Plastin-1 (e.g., Q14651);
65) pigment epithelium-derived factor (e.g., P36955);
66) Phospholipid-transporting ATPase IC (e.g., O43520);
67) Phospholipase D1 (e.g., Q13393);
68) Overexpressed in colon carcinoma 1 protein (e.g., Q8TAD7);
69) Niban-like protein 1 (e.g., Q96TA1);
70) N-acetyllactosaminide beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase 3 (eg, Q9Y2A9);
71) myosin regulatory light chain 12B (e.g., O14950);
72) multidrug resistance protein 1 (e.g., P08183);
73) Mothers against decapentaplegic homolog 2 (e.g., Q15796);
74) mitochondrial import receptor subunit TOM70 (e.g., O94826);
75) Malate dehydrogenase (cytoplasmic) (e.g., P40925);
76) Lysosomal membrane protein 2 (e.g., Q14108);
77) Lipoma-preferred partner (e.g., Q93052);
78) lipoamide acetyltransferase component of branched-chain alpha-keto acid dehydrogenase complex, mitochondrial (e.g., P11182);
79) Keratin, type II cytoskeletal 8 (e.g., P05787);
80) IST1 homolog (e.g., P53990);
81) Interleukin-18 (e.g., Q14116);
82) inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2 (e.g., P19823);
83) integrin-linked protein kinase (e.g., Q13418);
84) inorganic pyrophosphatase (e.g., Q15181);
85) Hyaluronan-binding protein 2 (e.g., Q14520);
86) High affinity cAMP-specific and IBMX-insensitive 3',5'-cyclic phosphodiesterase 8A (e.g., O60658);
87) heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L (e.g., P14866);
88) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H (e.g., P31943);
89) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D-like (e.g., O14979);
90) Guanine nucleotide-binding protein G(k) subunit alpha (e.g., P08754);
91) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(T) subunit beta-2 (e.g., P62879);
92) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(O) subunit gamma-12 (e.g., Q9UBI6);
93) Guanine deaminase (e.g., Q9Y2T3);
94) Growth factor receptor-bound protein 7 (e.g., Q14451);
95) Glypican-6 (e.g., Q9Y625);
96) Glutathione S-transferase omega-1 (e.g., P78417);
97) Glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase [isomerizing] 1 (eg, Q06210);
98) Glutamate-rich protein 5 (e.g., Q6P6B1);
99) gamma-soluble NSF attachment protein (e.g., Q99747);
100) Galectin-9B (e.g., Q3B8N2);
101) Galectin-2 (e.g., P05162);
102) Fermitin family homolog 1 (e.g., Q9BQL6);
103) FAS-associated factor 2 (e.g., Q96CS3);
104) Estradiol 17-beta-dehydrogenase 2 (e.g., P37059);
105) epithelial cell adhesion molecule (e.g., P16422);
106) epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 1 (e.g., Q8TE68);
107) Endoplasmic reticulum chaperone BiP (e.g., P11021);
108) Elongation factor Tu (mitochondrial) (e.g., P49411);
109) Doublecortin domain-containing protein 2 (e.g., Q9UHG0);
110) disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10 (eg, O14672);
111) Dihydropyrimidinase-related protein 2 (e.g., Q16555);
112) Cytoplasmic dynein 1 heavy chain 1 (e.g., Q14204);
113) Cystine-1 (e.g., Q717R9);
114) Cyclin-Y (e.g., Q8ND76);
115) Copine-8 (e.g., Q86YQ8);
116) Complement C1q subcomponent subunit C (e.g., P02747);
117) Collagen alpha-1(XVIII) chain (e.g., P39060);
118) Coatomer subunit gamma-1 (e.g., Q9Y678);
119) Coatomer subunit alpha (e.g., P53621);
120) Clusterin (e.g., P10909);
121) Clathrin heavy chain 1 (e.g., Q00610);
122) Charged multivesicular body protein 5 (e.g., Q9NZZ3);
123) Charged multivesicular body protein 2a (e.g., O43633);
124) Charged multivesicular body protein 1a (e.g., Q9HD42);
125) Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1 (e.g., Q9GZU7);
126) Biliary multispecific organic anion transporter 2 (e.g., O15438);
127) cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta (e.g., P22694);
128) Calpain-7 (e.g., Q9Y6W3);
129) calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit delta (e.g., Q13557);
130) C-1-tetrahydrofolate synthase, cytoplasmic (e.g., P11586);
131) BRO1 domain-containing protein BROX (e.g., Q5VW32);
132) Beta-1,4-galactosyltransferase 4 (e.g., O60513);
133) Beta-1,4-galactosyltransferase 1 (e.g., P15291);
134) basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein (e.g., P98160);
135) Band 4.1-like protein 1 (e.g., Q9H4G0);
136) ATP-dependent 6-phosphofructokinase (platelet type) (e.g., Q01813);
137) Aspartyl/asparaginyl beta-hydroxylase (e.g., Q12797);
138) Apolipoprotein E (e.g., P02649);
139) Apolipoprotein C-IV (e.g., P55056);
140) Apolipoprotein B-100 (e.g., P04114);
141) Anoctamin-1 (e.g., Q5XXA6);
142) Annexin A4 (e.g., P09525);
143) Annexin A13 (e.g., P27216);
144) alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase (e.g., P26572);
145) Aldo-keto reductase family 1 member C3 (e.g., P42330);
146) Aldo-keto reductase family 1 member C2 (e.g., P52895);
147) ADP-ribosylation factor-like protein 3 (e.g., P36405);
148) ADP-ribosylation factor 1 (e.g., P84077);
149) ADP/ATP translocase 3 (e.g., P12236);
150) Acyl-protein thioesterase 1 (e.g., O75608);
151) 60S ribosomal protein L7a (e.g., P62424);
152) 60S ribosomal protein L7 (e.g., P18124);
153) 60S ribosomal protein L3 (e.g., P39023);
154) 60S ribosomal protein L27a (e.g., P46776);
155) 60S ribosomal protein L24 (e.g., P83731);
156) 60S ribosomal protein L23 (e.g., P62829);
157) 60S ribosomal protein L14 (e.g., P50914);
158) 60S ribosomal protein L11 (e.g., P62913);
159) 60S ribosomal protein L10 (e.g., P27635);
160) 40S ribosomal protein SA (e.g., P08865);
161) 40S ribosomal protein S8 (e.g., P62241);
162) 40S ribosomal protein S25 (e.g., P62851);
163) 40S ribosomal protein S24 (e.g., P62847);
164) 40S ribosomal protein S23 (e.g., P62266); and 165) 1-phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate phosphodiesterase delta-1 (e.g., P51178).

より具体的には、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕上記１種以上のタンパク質からなる、胆汁における胆管がんのバイオマーカー。
〔２〕前記バイオマーカーが、胆汁の細胞外小胞における胆管がんのバイオマーカーである、〔１〕のバイオマーカー。
〔３〕前記タンパク質が、１）～２３）、２５）～４０）、４２）～１０４）、１０６）～１３３）、１３５）～１３９）、および１４１）～１６５）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、〔１〕または〔２〕のいずれかのバイオマーカー。
〔４〕前記タンパク質が、１）、４）、８）～１０）、１３）～１７）、２３）、２４）、２８）、３２）、３７）、３８）、４２）、４４）、４５）、４７）、４８）、５７）、５９）、６０）、６６）、６８）、７０）、７３）、７４）、８０）、８１）、８３）、８６）、８７）、８９）、９４）、９８）、１００）、１０２）、１０３）、１０９）、１１２）～１１４）、１１８）、１２３）～１２６）、１２８）、１２９）、１３１）、１３２）、１３９）、１４１）、１４４）、１４７）、１５３）、１５５）、１５６）、１５９）、１６３）、および１６４）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、〔１〕または〔２〕のいずれかのバイオマーカー。
〔５〕前記タンパク質が、１）、５）、２８）、３１）、４２）、４５）、６１）、６８）、７５）、９３）、９８）、１０５）、１０７）、１２５）、１３２）、１５５）、１６０）、および１６２）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、〔１〕または〔２〕のいずれかのバイオマーカー。
〔６〕前記タンパク質が、１）、４）～６）、８）、１１）、１６）、２３）、２５）、２７）、４２）、４６）、４９）、５２）、５４）～５６）、５８）～６０）、６３）、６４）、６７）、６９）、７３）、７９）、８２）、９４）、９７）、９８）、１０３）、１０４）、１０７）、１１３）、１１５）、１１８）、１２２）、１２４）、１２７）、１３０）、１３４）、１４０）、１４２）、１５４）、１５８）、および１６０）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、〔１〕または〔２〕のいずれかのバイオマーカー。
〔７〕前記タンパク質が、１）、５）、４２）、９８）、１０７）、および１６０）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、〔１〕または〔２〕のいずれかのバイオマーカー。
〔８〕被験体から得られた胆汁含有サンプルにおいて、上記１種以上のタンパク質の量を解析することを含む、胆管がんの検査方法（好ましくは、タンパク質は、上記〔３〕～〔７〕に列挙された１種以上のタンパク質であってもよい）。
〔９〕下記（ａ）および（ｂ）を含む、〔８〕の方法：
（ａ）被験体から得られた胆汁含有サンプルから細胞外小胞を回収すること；および
（ｂ）回収された細胞外小胞において、前記１種以上のタンパク質の量を解析すること。
〔１０〕被験体が胆管がん患者である、〔８〕または〔９〕の方法。
〔１１〕上記１種以上のタンパク質の量の解析手段を含む、胆管がんの診断試薬（好ましくは、タンパク質は、上記〔３〕～〔７〕に列挙された１種以上のタンパク質であってもよい）。
〔１２〕前記解析手段が抗体である、〔１１〕の診断試薬。
〔１３〕細胞外小胞の回収手段をさらに含む、〔１１〕または〔１２〕の診断試薬。 More specifically, the present invention is as follows.
[1] A biomarker for bile duct cancer in bile, comprising one or more of the above proteins.
[2] The biomarker of [1], wherein the biomarker is a biomarker for cholangiocarcinoma in extracellular vesicles of bile.
[3] The biomarker according to either [1] or [2], wherein the protein is one or more proteins selected from the group consisting of 1) to 23), 25) to 40), 42) to 104), 106) to 133), 135) to 139), and 141) to 165).
[4] The biomarker according to either [1] or [2], wherein the protein is one or more proteins selected from the group consisting of 1), 4), 8) to 10), 13) to 17), 23), 24), 28), 32), 37), 38), 42), 44), 45), 47), 48), 57), 59), 60), 66), 68), 70), 73), 74), 80), 81), 83), 86), 87), 89), 94), 98), 100), 102), 103), 109), 112) to 114), 118), 123) to 126), 128), 129), 131), 132), 139), 141), 144), 147), 153), 155), 156), 159), 163), and 164).
[5] The biomarker according to either [1] or [2], wherein the protein is one or more proteins selected from the group consisting of 1), 5), 28), 31), 42), 45), 61), 68), 75), 93), 98), 105), 107), 125), 132), 155), 160), and 162).
[6] The biomarker according to either [1] or [2], wherein the protein is one or more proteins selected from the group consisting of 1), 4) to 6), 8), 11), 16), 23), 25), 27), 42), 46), 49), 52), 54) to 56), 58) to 60), 63), 64), 67), 69), 73), 79), 82), 94), 97), 98), 103), 104), 107), 113), 115), 118), 122), 124), 127), 130), 134), 140), 142), 154), 158), and 160).
[7] The biomarker according to either [1] or [2], wherein the protein is one or more proteins selected from the group consisting of 1), 5), 42), 98), 107), and 160).
[8] A method for testing for bile duct cancer, comprising analyzing the amount of one or more of the above proteins in a bile-containing sample obtained from a subject (preferably, the protein may be one or more of the proteins listed in [3] to [7] above).
[9] The method according to [8], comprising the following (a) and (b):
(a) collecting extracellular vesicles from a bile-containing sample obtained from a subject; and (b) analyzing the amount of one or more proteins in the collected extracellular vesicles.
[10] The method according to [8] or [9], wherein the subject is a patient with bile duct cancer.
[11] A diagnostic reagent for bile duct cancer, comprising a means for analyzing the amount of one or more of the above proteins (preferably, the protein may be one or more of the proteins listed in [3] to [7] above).
[12] The diagnostic reagent according to [11], wherein the analytical means is an antibody.
[13] The diagnostic reagent of [11] or [12], further comprising a means for recovering extracellular vesicles.

本発明によれば、胆汁細胞診よりも高い診断感度および／または診断特異度で胆管がんを診断でき、しかも、胆管生検よりも低侵襲性で胆管がんを診断できる。例えば、本発明は、胆道狭窄の原因となる悪性疾患（胆管がん）とその他の良性疾患（例、硬化性胆管炎、慢性膵炎、胆石症などの炎症を伴う疾患）との鑑別に有用である。 According to the present invention, bile duct cancer can be diagnosed with higher diagnostic sensitivity and/or diagnostic specificity than bile cytology, and moreover, with less invasiveness than bile duct biopsy. For example, the present invention is useful for distinguishing between malignant diseases (bile duct cancer) that cause bile duct stricture and other benign diseases (e.g., diseases accompanied by inflammation such as sclerosing cholangitis, chronic pancreatitis, and cholelithiasis).

図１は、胆管がん患者および胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれるＲａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－２０（Ｑ９ＮＸ５７）の量の差異を示す箱ひげ図である（ＦｏｌｄＣｈａｎｇｅ：２１．４８；ｐ－ｖａｌｕｅ：０．０００７）。Ｓｔｏｎｅ：胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれるＲａｂ－２０の量（ｎ＝１０）；Ｃａｎｃｅｒ：胆管がん患者由来胆汁中のＥＶに含まれるＲａｂ－２０の量（ｎ＝１０）。箱ひげ図中の各種線は、以下である。ひげの下端の線：最小値（ｍｉｎｉｍｕｍ）；箱の下端の線：第一四分位数（ｌｏｗｅｒｑｕａｒｔｉｌｅ）；箱内の線：中央値（ｍｅｄｉａｎ）；箱の上端の線：第三四分位数（ｕｐｐｅｒｑｕａｒｔｉｌｅ）；ひげの上端の線：最大値（ｍａｘｉｍｕｍ）（図２～４も同様）。FIG. 1 is a box plot showing the difference in the amount of Ras-related protein Rab-20 (Q9NX57) contained in EVs in bile derived from bile duct cancer patients and gallstone patients (Fold Change: 21.48; p-value: 0.0007). Stone: amount of Rab-20 contained in EVs in bile derived from gallstone patients (n=10); Cancer: amount of Rab-20 contained in EVs in bile derived from bile duct cancer patients (n=10). The various lines in the box plot are as follows. Line at the bottom of the whiskers: minimum; line at the bottom of the box: lower quartile; line inside the box: median; line at the top of the box: upper quartile; line at the top of the whiskers: maximum (same for Figures 2 to 4). 図２は、胆管がん患者および胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれるロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）（Ｑ９Ｐ２Ｊ５）の量の差異を示す箱ひげ図である（ＦｏｌｄＣｈａｎｇｅ：３．２９；ｐ－ｖａｌｕｅ：０．０００２）。Ｓｔｏｎｅ：胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれるロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）の量（ｎ＝１０）；Ｃａｎｃｅｒ：胆管がん患者由来胆汁中のＥＶに含まれるロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）の量（ｎ＝１０）。2 is a box plot showing the difference in the amount of leucine-tRNA ligase (cytoplasmic) (Q9P2J5) contained in EVs from bile derived from bile duct cancer patients and gallstone patients (Fold Change: 3.29; p-value: 0.0002). Stone: Amount of leucine-tRNA ligase (cytoplasmic) contained in EVs from bile derived from gallstone patients (n = 10); Cancer: Amount of leucine-tRNA ligase (cytoplasmic) contained in EVs from bile derived from bile duct cancer patients (n = 10). 図３は、胆管がん患者および胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれる第Ｘ凝固因子（Ｐ００７４２）の量の差異を示す箱ひげ図である（ＦｏｌｄＣｈａｎｇｅ：３１．３９；ｐ－ｖａｌｕｅ：０．００５６）。Ｓｔｏｎｅ：胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれる第Ｘ凝固因子の量（ｎ＝１０）；Ｃａｎｃｅｒ：胆管がん患者由来胆汁中のＥＶに含まれる第Ｘ凝固因子の量（ｎ＝１０）。Figure 3 is a box plot showing the difference in the amount of coagulation factor X (P00742) contained in EVs in bile derived from bile duct cancer patients and gallstone patients (Fold Change: 31.39; p-value: 0.0056). Stone: amount of coagulation factor X contained in EVs in bile derived from gallstone patients (n=10); Cancer: amount of coagulation factor X contained in EVs in bile derived from bile duct cancer patients (n=10). 図４は、胆管がん患者および胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれるクローディン－３（Ｏ１５５５１）の量の差異を示す箱ひげ図である（ＦｏｌｄＣｈａｎｇｅ：２．５８；ｐ－ｖａｌｕｅ：０．０００２）。Ｓｔｏｎｅ：胆石患者由来胆汁中のＥＶに含まれるクローディン－３の量（ｎ＝１０）；Ｃａｎｃｅｒ：胆管がん患者由来胆汁中のＥＶに含まれるクローディン－３の量（ｎ＝１０）。4 is a box plot showing the difference in the amount of claudin-3 (O15551) contained in EVs in bile derived from bile duct cancer patients and gallstone patients (fold change: 2.58; p-value: 0.0002). Stone: amount of claudin-3 contained in EVs in bile derived from gallstone patients (n=10); Cancer: amount of claudin-3 contained in EVs in bile derived from bile duct cancer patients (n=10).

１．本発明で利用されるタンパク質
本発明で利用されるタンパク質の個数は、１種以上である限り特に限定されないが、例えば、２種以上、３種以上、４種以上、５種以上、６種以上、７種以上、８種以上、９種以上、または１０種以上であってもよい。タンパク質の個数はまた、１６５種以下、１６０種以下、１５０種以下、１４０種以下、１３０種以下、１２０種以下、１１０種以下、１００種以下、９０種以下、８０種以下、７０種以下、６０種以下、５０種以下、４０種以下、３０種以下、２０種以下、１５種以下、または１０種以下であってもよい。さらに、タンパク質の個数は、簡便性の向上等の観点より、少数であってもよく、例えば、１種、２種、３種、４種、５種、または６種であってもよい。 1. Proteins Used in the Present Invention The number of proteins used in the present invention is not particularly limited as long as it is one or more, but may be, for example, two or more, three or more, four or more, five or more, six or more, seven or more, eight or more, nine or more, or ten or more. The number of proteins may also be 165 or less, 160 or less, 150 or less, 140 or less, 130 or less, 120 or less, 110 or less, 100 or less, 90 or less, 80 or less, 70 or less, 60 or less, 50 or less, 40 or less, 30 or less, 20 or less, 15 or less, or 10 or less. Furthermore, the number of proteins may be a small number from the viewpoint of improving convenience, etc., and may be, for example, one, two, three, four, five, or six.

一実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、正常胆管細胞での培養上清のＥＶに含まれず、かつ胆管がん細胞の培養上清のＥＶに含まれることが既知のタンパク質以外のタンパク質であってもよい。このような既知のタンパク質は、２４）尿細管間質性腎炎抗原様、４１）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットα－１、１０５）上皮細胞接着分子、１３４）基底膜特異的ヘパラン硫酸プロテオグリカンコアタンパク質、および１４０）アポリポタンパク質Ｂ－１００である（非特許文献２の表１を参照）。したがって、本発明で利用されるタンパク質は、上記１）～２３）、２５）～４０）、４２）～１０４）、１０６）～１３３）、１３５）～１３９）、および１４１）～１６５）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質であってもよい。あるいは、本発明で測定されるタンパク質は、正常または癌性の胆管細胞での培養上清のＥＶに関する先行知見が存在しないタンパク質であってもよい。正常または癌性の胆管細胞での培養上清のＥＶに関する先行知見が存在するタンパク質は、上記５種の既知のタンパク質に加えて、２３）腫瘍感受性遺伝子１０１タンパク質、５８）プログラム細胞死６－相互作用タンパク質、１２１）クラスリン重鎖１であり得る（非特許文献２の表１、および本願の背景技術を参照）。したがって、本発明で利用されるタンパク質は、上記１）～２２）、２５）～４０）、４２）～５７）、５９）～１０４）、１０６）～１２０）、１２２）～１３３）、１３５）～１３９）、および１４１）～１６５）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質であってもよい。 In one embodiment, the protein used in the present invention may be a protein other than a protein that is not contained in EVs of culture supernatants of normal bile duct cells and is known to be contained in EVs of culture supernatants of cholangiocarcinoma cells. Such known proteins are 24) tubulointerstitial nephritis antigen-like, 41) sodium/potassium transporting ATPase subunit α-1, 105) epithelial cell adhesion molecule, 134) basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein, and 140) apolipoprotein B-100 (see Table 1 in Non-Patent Document 2). Therefore, the protein used in the present invention may be one or more proteins selected from the group consisting of 1) to 23), 25) to 40), 42) to 104), 106) to 133), 135) to 139), and 141) to 165) above. Alternatively, the protein measured in the present invention may be a protein for which there is no prior knowledge regarding EVs of culture supernatants of normal or cancerous bile duct cells. In addition to the five known proteins, proteins for which prior knowledge exists regarding EVs in culture supernatants of normal or cancerous bile duct cells may be 23) tumor susceptibility gene 101 protein, 58) programmed cell death 6-interacting protein, and 121) clathrin heavy chain 1 (see Table 1 in Non-Patent Document 2 and the Background Art of the present application). Therefore, the protein used in the present invention may be one or more proteins selected from the group consisting of 1) to 22), 25) to 40), 42) to 57), 59) to 104), 106) to 120), 122) to 133), 135) to 139), and 141) to 165) above.

別の実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、胆汁中に含まれることが既知であるタンパク質（非特許文献１、３を参照）以外のタンパク質であってもよい。例えば、胆汁中に含まれることが既知であるタンパク質以外のタンパク質は、上記１）、４）、８）～１０）、１３）～１７）、２３）、２４）、２８）、３２）、３７）、３８）、４２）、４４）、４５）、４７）、４８）、５７）、５９）、６０）、６６）、６８）、７０）、７３）、７４）、８０）、８１）、８３）、８６）、８７）、８９）、９４）、９８）、１００）、１０２）、１０３）、１０９）、１１２）～１１４）、１１８）、１２３）～１２６）、１２８）、１２９）、１３１）、１３２）、１３９）、１４１）、１４４）、１４７）、１５３）、１５５）、１５６）、１５９）、１６３）、および１６４）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質であってもよい。本発明者らが把握する限り、これらのタンパク質は、胆汁中に含まれることが報告されていない。したがって、これらのタンパク質が胆汁のＥＶ中に含まれるという知見のみならず、胆汁中に含まれるという知見もまた新規であり得る。 In another embodiment, the protein utilized in the present invention may be a protein other than proteins known to be contained in bile (see non-patent literature 1 and 3). For example, the protein other than the protein known to be contained in bile may be one or more proteins selected from the group consisting of the above 1), 4), 8) to 10), 13) to 17), 23), 24), 28), 32), 37), 38), 42), 44), 45), 47), 48), 57), 59), 60), 66), 68), 70), 73), 74), 80), 81), 83), 86), 87), 89), 94), 98), 100), 102), 103), 109), 112) to 114), 118), 123) to 126), 128), 129), 131), 132), 139), 141), 144), 147), 153), 155), 156), 159), 163), and 164). As far as the present inventors know, these proteins have not been reported to be contained in bile. Therefore, not only the finding that these proteins are contained in bile EVs, but also the finding that they are contained in bile may be novel.

さらに別の実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、胆管がんに罹患していない患者（例えば、胆石症、硬化性胆管炎および慢性膵炎などの胆管において炎症を伴う良性疾患の患者）と比較して胆管がん患者の胆汁（特に、胆汁のＥＶ）中で著しい量の増加が認められるタンパク質であってもよい。このような著しい量の増加は、例えば３倍以上、好ましくは５倍以上、より好ましくは７倍以上、さらにより好ましくは９倍以上、特に好ましくは１０倍以上の増加である。このようなタンパク質は、後述の実施例より理解される。例えば、このような１０倍以上の量の増加が認められるタンパク質は、上記１）、５）、２８）、３１）、４２）、４５）、６１）、６８）、７５）、９３）、９８）、１０５）、１０７）、１２５）、１３２）、１５５）、１６０）、および１６２）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である。 In yet another embodiment, the protein used in the present invention may be a protein whose amount is significantly increased in the bile (particularly in bile EVs) of a patient with bile duct cancer compared to a patient without bile duct cancer (e.g., a patient with a benign disease accompanied by inflammation in the bile duct, such as cholelithiasis, sclerosing cholangitis, and chronic pancreatitis). Such a significant increase in amount is, for example, an increase of 3 times or more, preferably 5 times or more, more preferably 7 times or more, even more preferably 9 times or more, and particularly preferably 10 times or more. Such a protein will be understood from the examples described below. For example, such a protein whose amount is increased by 10 times or more is one or more proteins selected from the group consisting of 1), 5), 28), 31), 42), 45), 61), 68), 75), 93), 98), 105), 107), 125), 132), 155), 160), and 162).

さらに別の実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、胆管がんに罹患していない患者（例えば、上述したような胆管において炎症を伴う良性疾患の患者）と比較して胆管がん患者の胆汁（特に、胆汁のＥＶ）中に含まれるタンパク質の量において高度な統計学的有意差が認められるタンパク質であってもよい。このような高度な統計学的有意差は、例えば０．０５未満、好ましくは０．０１未満のｐ値である。このようなタンパク質は、後述の実施例より理解される。例えば、高度な統計学的有意差（０．０１未満のｐ値）が認められるタンパク質は、上記１）、４）～６）、８）、１１）、１６）、２３）、２５）、２７）、４２）、４６）、４９）、５２）、５４）～５６）、５８）～６０）、６３）、６４）、６７）、６９）、７３）、７９）、８２）、９４）、９７）、９８）、１０３）、１０４）、１０７）、１１３）、１１５）、１１８）、１２２）、１２４）、１２７）、１３０）、１３４）、１４０）、１４２）、１５４）、１５８）、および１６０）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である。 In yet another embodiment, the protein used in the present invention may be a protein that exhibits a highly statistically significant difference in the amount of protein contained in the bile (particularly bile EVs) of a patient with bile duct cancer compared to a patient without bile duct cancer (e.g., a patient with a benign disease involving inflammation in the bile duct as described above). Such a highly statistically significant difference is, for example, a p-value of less than 0.05, preferably less than 0.01. Such a protein will be understood from the examples described below. For example, proteins in which a high degree of statistical significance (p value of less than 0.01) is observed are one or more proteins selected from the group consisting of 1), 4) to 6), 8), 11), 16), 23), 25), 27), 42), 46), 49), 52), 54) to 56), 58) to 60), 63), 64), 67), 69), 73), 79), 82), 94), 97), 98), 103), 104), 107), 113), 115), 118), 122), 124), 127), 130), 134), 140), 142), 154), 158), and 160).

好ましい実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、胆管がんに罹患していない患者（例えば、上述したような胆管において炎症を伴う良性疾患の患者）と比較して胆管がん患者の胆汁中で１０倍以上の量の増加が高度な統計学的有意差（０．０１未満のｐ値）で認められるタンパク質であってもよい。このようなタンパク質は、後述の実施例より理解される。例えば、このようなタンパク質は、上記１）、５）、４２）、９８）、１０７）、および１６０）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である。このようなタンパク質の利用は、胆管がんの検査において特に優れた診断感度および診断特異度を実現し得る。 In a preferred embodiment, the protein used in the present invention may be a protein that is found to have a 10-fold or greater increase in the amount in the bile of a patient with bile duct cancer compared to a patient without bile duct cancer (e.g., a patient with a benign disease involving inflammation in the bile duct as described above), with a highly statistically significant difference (p value of less than 0.01). Such a protein will be understood from the examples described below. For example, such a protein is one or more proteins selected from the group consisting of 1), 5), 42), 98), 107), and 160) above. The use of such a protein can achieve particularly excellent diagnostic sensitivity and diagnostic specificity in the testing of bile duct cancer.

特定の実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、特定のタンパク質カテゴリーに属する１種以上のタンパク質であってもよい。このような特定のタンパク質カテゴリーとしては、例えば、酵素、リガンドタンパク質、膜タンパク質（例、レセプター、トランスポーター、細胞外マトリクスタンパク質）、アダプタータンパク質、シャペロンタンパク質、細胞骨格タンパク質、核酸結合タンパク質（例、転写因子）、およびこれらの共役タンパク質が挙げられる。 In certain embodiments, the protein utilized in the present invention may be one or more proteins belonging to a particular protein category. Such particular protein categories include, for example, enzymes, ligand proteins, membrane proteins (e.g., receptors, transporters, extracellular matrix proteins), adaptor proteins, chaperone proteins, cytoskeletal proteins, nucleic acid binding proteins (e.g., transcription factors), and coupling proteins thereof.

特定の実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、特定のタンパク質ファミリーに属する１種以上のタンパク質であってもよい。このような特定のタンパク質ファミリーとしては、例えば、以下が挙げられる：
１’）Ｒａｓ関連タンパク質ファミリー（例、上記１）～３）のタンパク質）；
２’）クローディンファミリー（例、上記６）～８）のタンパク質）；
３’）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質（例、上記１２）～１６）のタンパク質）；
４’）アンコンベンショナルミオシンファミリー（例、上記１８）、１９）のタンパク質）；
５’）チューブリン関連タンパク質ファミリー（例、上記２５）のタンパク質等のチューブリン重合促進タンパク質ファミリーメンバー、上記２６）～２９）のタンパク質等のチューブリンβファミリー、および上記３０）、３１）のタンパク質等のチューブリンαファミリー）；
６’）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットファミリー（例、上記４０）、４１）のタンパク質）；
７’）ナトリウム／グルコースコトランスポーターファミリー（例、上記４２）、４３）のタンパク質）；
８’）セプチンファミリー（例、上記４６）、４７）のタンパク質）；
９’）ＡＴＰアーゼファミリー（例、上記５９）、６０）、６６）のタンパク質）；
１０’）ヘテロ核リボヌクレオプロテインファミリー（例、上記８７）～８９）のタンパク質）；
１１’）グアニンヌクレオチド結合タンパク質ファミリー（例、上記９０）～９２）のタンパク質）；
１２’）ガレクチンファミリー（例、上記１００）、１０１）のタンパク質）；
１３’）コアトマーサブユニットファミリー（例、上記１１８）、１１９）のタンパク質）；
１４’）荷電多胞体タンパク質ファミリー（例、上記１２２）～１２４）のタンパク質）；
１５’）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼファミリー（例、上記１３２）、１３３）のタンパク質）；
１６’）アポリポタンパク質ファミリー（例、上記１３８）～１４０）のタンパク質）；
１７’）アネキシンファミリー（例、上記１４２）、１４３）のタンパク質）；
１８’）アルド－ケトレダクターゼファミリー（例、上記１４５）、１４６）のタンパク質等のアルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバー）；
１９’）ＡＤＰ－リボシル化因子ファミリー（例、上記１４７）、１４８）のタンパク質）；ならびに
２０’）リボソーマルタンパク質ファミリー（例、上記１５１）～１５９）のタンパク質等の６０Ｓリボソーマルタンパク質、および上記１６０）～１６４）のタンパク質等の４０Ｓリボソーマルタンパク質）。 In certain embodiments, the protein utilized in the present invention may be one or more proteins that belong to a particular protein family, such as, for example, the following:
1') Ras-related protein family (e.g., proteins 1) to 3) above);
2') Claudin family proteins (e.g., proteins 6) to 8) above);
3') Vacuolar protein sorting-related proteins (e.g., proteins 12) to 16) above);
4') proteins of the unconventional myosin family (e.g., proteins of 18) and 19) above);
5') Tubulin-related protein family (e.g., tubulin polymerization-promoting protein family members such as the proteins in 25) above, tubulin β family members such as the proteins in 26) to 29) above, and tubulin α family members such as the proteins in 30) and 31) above);
6') Proteins of the sodium/potassium transport ATPase subunit family (e.g., proteins of 40) and 41) above);
7') Proteins of the sodium/glucose cotransporter family (e.g., proteins of 42) and 43) above);
8') proteins of the septin family (e.g., proteins of 46) and 47) above);
9') proteins of the ATPase family (e.g., proteins of 59), 60), 66) above);
10') heterogeneous nuclear ribonucleoprotein family (e.g., proteins of 87) to 89) above);
11') Guanine nucleotide-binding protein family (e.g., proteins of 90) to 92) above);
12') proteins of the galectin family (e.g., proteins of 100 and 101 above);
13') proteins of the coatomer subunit family (e.g., proteins of 118) and 119) above);
14') charged multivesicular body protein family (e.g., proteins of 122) to 124) above);
15') proteins of the β-1,4-galactosyltransferase family (e.g., proteins of 132) and 133) above);
16') Apolipoprotein family (e.g., proteins of 138) to 140) above);
17') proteins of the annexin family (e.g., proteins of 142, 143) above);
18') aldo-keto reductase family 1 members, such as proteins of the aldo-keto reductase family (e.g., 145, above), 146);
19') ADP-ribosylation factor family (eg, proteins of 147) and 148) above); and 20') ribosomal protein family (eg, 60S ribosomal proteins such as proteins of 151) to 159) above, and 40S ribosomal proteins such as proteins of 160) to 164) above).

特定の実施形態では、本発明で利用されるタンパク質は、特定のタンパク質と他のタンパク質との組合せであってもよい。例えば、このような組合せは、１）、５）、４２）、９８）、１０７）、および１６０）からなる群より選ばれる１種以上の特定のタンパク質と、他のタンパク質との組合せであってもよい。 In certain embodiments, the protein utilized in the present invention may be a combination of a specific protein with other proteins. For example, such a combination may be a combination of one or more specific proteins selected from the group consisting of 1), 5), 42), 98), 107), and 160) with other proteins.

２．バイオマーカー
本発明のバイオマーカーは、胆汁における胆管がんのバイオマーカーであり、上記１種以上のタンパク質からなるものである。 2. Biomarker The biomarker of the present invention is a biomarker for bile duct cancer in bile, and consists of one or more of the above proteins.

胆管がんは、胆道がんの一種の悪性腫瘍である。胆道がんは、１）肝門部領域胆管がん、および遠位胆管がんを含む胆管がん、２）肝内胆管がん、３）胆のうがん、ならびに４）乳頭部がん（十二指腸乳頭部がん）に分類することができる。本発明の実施例で対象とした胆管がんは、１）の胆管がんであり、２）～４）の胆道がんは除外されている。 Bile duct cancer is a type of malignant tumor of the biliary tract. Bile duct cancer can be classified into 1) cholangiocarcinoma, including perihilar bile duct cancer and distal bile duct cancer, 2) intrahepatic bile duct cancer, 3) gallbladder cancer, and 4) ampullary cancer (duodenal papilla cancer). The bile duct cancer targeted in the examples of the present invention is 1) bile duct cancer, excluding 2) to 4) bile duct cancer.

好ましくは、本発明のバイオマーカーは、胆汁の細胞外小胞における胆管がんのバイオマーカーであってもよい。 Preferably, the biomarker of the present invention may be a biomarker for cholangiocarcinoma in extracellular vesicles of bile.

細胞外小胞（ＥＶ）は、種々の種類の細胞から分泌される、膜構造を有する微小な小胞である。ＥＶとしては、例えば、エクソソーム、エクトソーム、およびアポトーシス胞が挙げられる。好ましくは、ＥＶは、エクソソームである。ＥＶはまた、そのサイズにより規定することができる。ＥＶのサイズは、例えば、３０～１０００ｎｍであり、好ましくは５０～３００ｎｍ、より好ましくは８０～２００ｎｍである。ＥＶのサイズの測定は、ＮａｎｏＳｉｇｈｔ（ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）により行うことができる。 Extracellular vesicles (EVs) are tiny vesicles with a membrane structure secreted from various types of cells. Examples of EVs include exosomes, ectosomes, and apoptotic vesicles. Preferably, the EVs are exosomes. EVs can also be defined by their size. The size of an EV is, for example, 30 to 1000 nm, preferably 50 to 300 nm, and more preferably 80 to 200 nm. The size of an EV can be measured using NanoSight (Malvern Instruments).

ＥＶはまた、ＥＶマーカーにより規定することができる。このようなＥＶマーカーとしては、例えば、ＥＶの内部マーカーおよび表面マーカーが挙げられる。ＥＶの内部マーカーとしては、例えば、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１２５、ＣＡ１５－３、アクチンファミリー、ＴＳＧ１０１、ＡＬＩＸ、Ｃｈａｒｇｅｄｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒｂｏｄｙｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＨＭＰ）ファミリー、Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＧＡＰＤＨ）、ｐｏｌｙ（ＡＤＰ―ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＰＡＲＰ）ファミリー、ＡＦＰ、ＣＡ１９－９、ＣＡ１２５、Ｆｌｏｔｉｌｌｉｎ－Ｉ、Ｆｌｏｔｉｌｌｉｎ－ＩＩ、Ｒａｂタンパク質、ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ（ＰＤＣＤ）６、ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓｃｒａｍｂｌａｓｅ（ＰＬＳＣＲ）ファミリー、シトクロムＣオキシダーゼ（ＣＯＸ）ファミリー、ラミンファミリー、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、チューブリンファミリー、ＴＡＴＡ結合タンパク質（ＴＢＰ）、電位依存性アニオンチャネルタンパク質（ＶＤＡＣ）、アミロイドベータ、タウタンパク質が挙げられる。ＥＶの表面マーカーとしては、例えば、テトラスパニン膜タンパク質（ＥＶ膜特異的４回貫通膜タンパク質、例、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１）、細胞外マトリクスメタロプロテアーゼ誘導物質（例、ＣＤ１４７）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）７０、ＨＳＰ９０、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）Ｉ、リソソーム関連膜タンパク質（ＬＡＭＰ）１、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）－１、インテグリン、セラミド、コレステロール、ホスファチジルセリン、Ａｎｎｅｘｉｎｓ、Ｃａｖｅｏｌｉｎ－Ｉ、ＥｐＣＡＭが挙げられる。ＥＶマーカーは、好ましくはＥＶ表面マーカーであり、より好ましくはテトラスパニン膜タンパク質であり、さらにより好ましくはＣＤ９および／またはＣＤ６３である。 EVs can also be defined by EV markers, such as internal and surface markers of EVs. Examples of internal markers of EV include carcinoembryonic antigen (CEA), CA125, CA15-3, actin family, TSG101, ALIX, charged multivesicular body protein (CHMP) family, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) family, AFP, CA19-9, CA125, Flotillin-I, Flotillin-II, Rab protein, programmed cell death (PDCD) 6, phospholipid Examples of EV surface markers include tetraspanin membrane proteins (EV membrane-specific four-spanning membrane proteins, e.g., CD9, CD63, CD81), extracellular matrix metalloproteinase inducers (e.g., CD147), heat shock protein (HSP) 70, HSP90, major histocompatibility complex (MHC) I, lysosome-associated membrane protein (LAMP) 1, intercellular adhesion molecule (ICAM)-1, integrins, ceramide, cholesterol, phosphatidylserine, Annexins, Caveolin-I, and EpCAM. The EV marker is preferably an EV surface marker, more preferably a tetraspanin membrane protein, and even more preferably CD9 and/or CD63.

ＥＶは、被験体の胆汁中に存在するものである限り、特に限定されない。被験体としては、例えば、哺乳動物（例、ヒト、サル等の霊長類；マウス、ラット、ウサギ等の齧歯類；ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ、ヒツジ等の有蹄類、イヌ、ネコ等の食肉類）、鳥類（例、ニワトリ）が挙げられる。好ましくは、被験体は、ヒト等の哺乳動物である。臨床応用の観点からは、被験体は、好ましくはヒトである。この場合、本発明で利用されるタンパク質は、ヒトタンパク質である。ヒトタンパク質は、上述のアクセッション番号により特定されるタンパク質である。勿論、本発明で利用されるタンパク質は、人種間および／または個人間において生じ得る１個以上のアミノ酸残基の変異（例、置換、挿入、欠失）を有していてもよい。このような変異におけるアミノ酸残基の個数としては、例えば１～５０個、好ましくは１～３０個、より好ましくは１～２０個、さらにより好ましくは１～１０個、特に好ましくは１個、２個、３個、４個又は５個であってもよい。 EV is not particularly limited as long as it is present in the bile of a subject. Examples of subjects include mammals (e.g., primates such as humans and monkeys; rodents such as mice, rats, and rabbits; ungulates such as cows, pigs, goats, horses, and sheep; carnivores such as dogs and cats), and birds (e.g., chickens). Preferably, the subject is a mammal such as a human. From the viewpoint of clinical application, the subject is preferably a human. In this case, the protein used in the present invention is a human protein. The human protein is a protein identified by the above-mentioned accession number. Of course, the protein used in the present invention may have one or more amino acid residue mutations (e.g., substitutions, insertions, deletions) that may occur between races and/or individuals. The number of amino acid residues in such mutations may be, for example, 1 to 50, preferably 1 to 30, more preferably 1 to 20, even more preferably 1 to 10, and particularly preferably 1, 2, 3, 4, or 5.

３．胆管がんの検査方法
本発明の方法は、被験体から得られた胆汁含有サンプルにおいて、上記１種以上のタンパク質の量を解析することを含む、胆管がんの検査方法である。 3. Testing Method for Bile Duct Cancer The method of the present invention is a method for testing for bile duct cancer, which comprises analyzing the amount of one or more of the above proteins in a bile-containing sample obtained from a subject.

胆汁含有サンプルは、被験体から得ることができる。胆汁含有サンプルの一例は、胆汁サンプルである。被験体からの胆汁サンプルの入手は、任意の方法（例、非特許文献１、３、およびこれらの文献中で引用されている参考文献を参照）により行うことができる。胆汁含有サンプルの別の例は、糞便サンプルである。好ましくは、胆汁含有サンプルは、胆汁サンプルである。 The bile-containing sample can be obtained from a subject. One example of a bile-containing sample is a bile sample. Obtaining a bile sample from a subject can be done by any method (see, e.g., Non-Patent Documents 1 and 3, and references cited therein). Another example of a bile-containing sample is a fecal sample. Preferably, the bile-containing sample is a bile sample.

タンパク質の量の解析は、任意の方法により行うことができる。例えば、タンパク質の量の解析は、例えば、目的タンパク質に対する抗体（好ましくは、モノクローナル抗体）を用いたイムノアッセイにより行うことができる。目的タンパク質に対する抗体は、目的のタンパク質に結合する抗体であればよく、好ましくは、目的のタンパク質に特異的に結合する抗体である。イムノアッセイとしては、例えば、直接競合法、間接競合法、およびサンドイッチ法が挙げられる。また、このようなイムノアッセイとしては、化学発光イムノアッセイ（ＣＬＩＡ）〔例、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）〕、免疫比濁法（ＴＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（例、直接競合ＥＬＩＳＡ、間接競合ＥＬＩＳＡ、およびサンドイッチＥＬＩＳＡ）、放射イムノアッセイ（ＲＩＡ）、ラテックス凝集反応法、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、およびイムノクロマトグラフィー法、ウェスタンブロッティング、免疫染色が挙げられる。複数タンパク質の量が解析される場合、プロテオーム分析が行われてもよい。あるいは、タンパク質の量の解析は、質量分析により行われてもよい。また、タンパク質の種類に応じて、タンパク質の量を解析することもできる。例えば、タンパク質が酵素である場合には、酵素反応後の当該酵素の基質もしくは生成物、または酵素反応の共役因子の変化量を指標にして、タンパク質の量を解析することができる。また、タンパク質がリガンド、アダプター等の結合性タンパク質である場合には、結合性タンパク質の結合標的に対する結合量を指標にして、タンパク質の量を解析することができる。好ましくは、タンパク質の量の解析は、簡便性、迅速性等の観点より、イムノアッセイにより行われる。 The analysis of the amount of protein can be performed by any method. For example, the analysis of the amount of protein can be performed by immunoassay using an antibody (preferably a monoclonal antibody) against the target protein. The antibody against the target protein may be an antibody that binds to the target protein, and is preferably an antibody that specifically binds to the target protein. Examples of immunoassays include direct competitive assays, indirect competitive assays, and sandwich assays. Examples of such immunoassays include chemiluminescent immunoassays (CLIA) (e.g., chemiluminescent enzyme immunoassays (CLEIA)), turbidimetric immunoassays (TIA), enzyme immunoassays (EIA) (e.g., direct competitive ELISA, indirect competitive ELISA, and sandwich ELISA), radioimmunoassays (RIA), latex agglutination, fluorescent immunoassays (FIA), and immunochromatography, Western blotting, and immunostaining. When the amount of multiple proteins is analyzed, proteome analysis may be performed. Alternatively, the analysis of the amount of protein may be performed by mass spectrometry. The amount of protein can also be analyzed depending on the type of protein. For example, if the protein is an enzyme, the amount of protein can be analyzed using the amount of change in the substrate or product of the enzyme after the enzyme reaction, or the amount of a coupling factor of the enzyme reaction, as an index. If the protein is a binding protein such as a ligand or adaptor, the amount of protein can be analyzed using the amount of binding of the binding protein to the binding target as an index. Preferably, the analysis of the amount of protein is performed by immunoassay from the viewpoints of simplicity, speed, etc.

本発明の方法は、下記（ａ）および（ｂ）を含んでいてもよい：
（ａ）被験体から得られた胆汁含有サンプルから細胞外小胞（ＥＶ）を回収すること；および
（ｂ）回収された細胞外小胞において、前記１種以上のタンパク質の量を解析すること。 The method of the present invention may comprise the steps of:
(a) collecting extracellular vesicles (EVs) from a bile-containing sample obtained from a subject; and (b) analyzing the amount of one or more proteins in the collected extracellular vesicles.

（ａ）における回収は、液体サンプルからＥＶを回収できる任意の方法により行うことができる。このような方法としては、例えば、免疫沈降、超遠心分離（例、グアニジン塩化セシウム超遠心分離法）、ＡＧＰＣ（ＡｃｉｄＧｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ－Ｐｈｅｎｏｌ－Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）法が挙げられる。ＥＶ回収後にタンパク質の量の解析をすることで、当該解析を阻害し得る物質の潜在的混入を防止でき、また、サンプル間の差異（例、胆汁含有サンプル中に存在する夾雑物）の影響を軽減できるため、高精度の解析が可能になる。好ましくは、回収は、免疫沈降により行うことができる。回収を免疫沈降により行う場合、上記潜在的混入をより防止でき、また、上記差異の影響をより防止できる。 The recovery in (a) can be performed by any method capable of recovering EVs from a liquid sample. Examples of such methods include immunoprecipitation, ultracentrifugation (e.g., guanidine cesium chloride ultracentrifugation), and AGPC (Acid Guanidinium-Phenol-Chloroform) method. By analyzing the amount of protein after recovering EVs, potential contamination with substances that may inhibit the analysis can be prevented, and the influence of differences between samples (e.g., impurities present in a bile-containing sample) can be reduced, enabling highly accurate analysis. Preferably, the recovery can be performed by immunoprecipitation. When recovery is performed by immunoprecipitation, the above potential contamination can be more effectively prevented, and the influence of the above differences can be more effectively prevented.

また、（ａ）における回収は、液体サンプルからＥＶを高効率で回収できる方法を用いてもよい。例えば、このような高効率の回収方法としては、ＥＶ含有サンプルをキレート剤で処理し、次いで、キレート剤で処理されたＥＶ含有サンプルからＥＶを分離することを含む方法を利用することができる（例、国際公開第２０１８／０７０４７９号）。 The recovery in (a) may be performed using a method that can recover EVs from a liquid sample with high efficiency. For example, such a highly efficient recovery method may include treating an EV-containing sample with a chelating agent and then separating EVs from the EV-containing sample treated with the chelating agent (e.g., WO 2018/070479).

キレート剤は、金属イオンとの配位結合が可能である配位部分を有する化合物またはその塩である。配位部分の数は、好ましくは２個以上、より好ましくは３個以上（例、３個または６個）である。配位部分としての配位原子としては、例えば、酸素原子、リン原子、窒素原子、硫黄原子、および塩素原子が挙げられる。配位原子は、好ましくは酸素原子またはリン原子であり、より好ましくは酸素原子である。配位部分としての配位基としては、例えば、上記配位原子を有する基が挙げられる。配位基は、好ましくはカルボン酸基またはリン酸基であり、より好ましくはカルボン酸基である。 The chelating agent is a compound or a salt thereof having a coordinating moiety capable of forming a coordinate bond with a metal ion. The number of coordinating moieties is preferably 2 or more, more preferably 3 or more (e.g., 3 or 6). Examples of the coordinating atom as the coordinating moiety include an oxygen atom, a phosphorus atom, a nitrogen atom, a sulfur atom, and a chlorine atom. The coordinating atom is preferably an oxygen atom or a phosphorus atom, more preferably an oxygen atom. Examples of the coordinating group as the coordinating moiety include groups having the above-mentioned coordinating atoms. The coordinating group is preferably a carboxylic acid group or a phosphate group, more preferably a carboxylic acid group.

キレート剤としては、例えば、ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＩＤＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）（ＥＤＴＭＰ）、グリコールエーテルジアミン四酢酸（ＥＧＴＡ）、並びにそれらの塩が挙げられる。塩としては、例えば、金属塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩等の一価の金属塩、およびカルシウム塩、マグネシウム塩等の二価の金属塩）、無機塩（例、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物等のハロゲン化物塩、およびアンモニウム塩）、有機塩（例、アルキル基で置換されたアンモニウム塩）、および酸付加塩（例、硫酸、塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸等の無機酸との塩、および酢酸、シュウ酸、乳酸、クエン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸等の塩）が挙げられる。 Examples of chelating agents include hydroxyethyliminodiacetic acid (HIDA), nitrilotriacetic acid (NTA), hydroxyethylethylenediaminetriacetic acid (HEDTA), ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), ethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) (EDTMP), glycoletherdiaminetetraacetic acid (EGTA), and salts thereof. Examples of salts include metal salts (e.g., monovalent metal salts such as sodium salts and potassium salts, and divalent metal salts such as calcium salts and magnesium salts), inorganic salts (e.g., halide salts such as fluorides, chlorides, bromides, and iodides, and ammonium salts), organic salts (e.g., ammonium salts substituted with alkyl groups), and acid addition salts (e.g., salts with inorganic acids such as sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, and phosphoric acid, and salts with organic acids such as acetic acid, oxalic acid, lactic acid, citric acid, trifluoromethanesulfonic acid, and trifluoroacetic acid).

キレート剤はまた、臨床検査用の採血管中に含まれる成分として汎用されるキレート剤であってもよい。このようなキレート剤としては、例えば、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＮＴＡ、ＨＥＤＴＡ、ＥＤＴＭＰ、ＨＩＤＡ、クエン酸およびそれらの塩が挙げられる。本発明では、このようなキレート剤の使用もまた、臨床応用の観点から望ましい。 The chelating agent may also be a chelating agent that is commonly used as a component contained in blood collection tubes for clinical testing. Examples of such chelating agents include EDTA, EGTA, NTA, HEDTA, EDTMP, HIDA, citric acid, and salts thereof. In the present invention, the use of such chelating agents is also desirable from the viewpoint of clinical application.

本発明では、１種のキレート剤を単独で使用してもよいし、複数種（例、２種、３種、４種）のキレート剤を併用してもよい。キレート剤の濃度は、キレート剤と併用される他の成分の種類および濃度等の因子によっても変動するが、例えば、１０ｍＭ～１０００ｍＭである。 In the present invention, one type of chelating agent may be used alone, or multiple types (e.g., two, three, or four) of chelating agents may be used in combination. The concentration of the chelating agent varies depending on factors such as the type and concentration of other components used in combination with the chelating agent, but is, for example, 10 mM to 1000 mM.

胆汁含有サンプルからのＥＶの回収が免疫沈降により行われる場合、免疫沈降は、ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質を用いて行うことができる。 When recovery of EVs from bile-containing samples is performed by immunoprecipitation, the immunoprecipitation can be performed using an affinity substance for EV surface markers.

ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質としては、例えば、上述したＥＶ表面マーカーに対する抗体、アプタマー、ホスファチジルセリン結合タンパク質、セラミド結合タンパク質が挙げられる。本発明では、ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質として、単一の物質、または複数種（例、２種、３種、４種）の物質を用いることができる。 Examples of affinity substances for EV surface markers include antibodies, aptamers, phosphatidylserine-binding proteins, and ceramide-binding proteins for the above-mentioned EV surface markers. In the present invention, a single substance or multiple types (e.g., two, three, or four types) of substances can be used as affinity substances for EV surface markers.

好ましくは、ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質は、ＥＶの表面マーカーに対する特異性の確保、および調製の簡便さ等の観点より、ＥＶの表面マーカーに対する抗体であってもよい。抗体としては、例えば、全長抗体（例、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体）およびその抗原結合性断片が挙げられる。抗原結合性断片は、対象とするＥＶ表面マーカーに対する結合性を維持している抗体断片であればよく、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ等が挙げられる。本発明では、単一の抗体、または複数種（例、２種、３種、４種）の抗体を用いることができる。 Preferably, the affinity substance for the EV surface marker may be an antibody for the EV surface marker from the viewpoints of ensuring specificity for the EV surface marker and ease of preparation. Examples of the antibody include a full-length antibody (e.g., a monoclonal antibody, a polyclonal antibody) and an antigen-binding fragment thereof. The antigen-binding fragment may be an antibody fragment that maintains binding to the target EV surface marker, and examples of the antibody include Fab, Fab', F(ab') ₂ , scFv, and the like. In the present invention, a single antibody or multiple types of antibodies (e.g., two, three, four types) can be used.

ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質（好ましくは、抗体）は、ＥＶの分離を容易にするための固相に固定されていてもよい。固相としては、例えば、ビーズおよび粒子（例、セファロースビーズ、アガロースビーズ、磁性ビーズ（磁性粒子））、支持体（例、プラスチックプレート等のプレート、メンブレン）が挙げられる。固相への物質の固定は、任意の方法により行うことができる。このように固相に固定された、ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質を、ＥＶを含む混合液と混合し、ＥＶ表面マーカーに結合する物質とＥＶの複合体を形成させ、この複合体を混合液から分離することで、ＥＶを混合液から分離することができる。例えば、固相としてビーズまたは粒子を用いる場合は、複合体の形成後に遠心分離し、上清を除くことで、ＥＶを混合液から分離することができる。固相として磁性ビーズを用いる場合は、複合体の形成後に集磁し上清を除くことで、ＥＶを混合液から分離してもよい。固相として支持体を用いる場合は、複合体の形成後に混合液を除くことで、ＥＶを混合液から分離することができる。 The affinity substance for the EV surface marker (preferably an antibody) may be immobilized on a solid phase to facilitate the separation of EVs. Examples of the solid phase include beads and particles (e.g., sepharose beads, agarose beads, magnetic beads (magnetic particles)), and supports (e.g., plates such as plastic plates, membranes). Immobilization of the substance on the solid phase can be performed by any method. The affinity substance for the EV surface marker immobilized on the solid phase in this way is mixed with a mixture containing EVs to form a complex between the substance that binds to the EV surface marker and EVs, and this complex is separated from the mixture, thereby separating the EVs from the mixture. For example, when beads or particles are used as the solid phase, the EVs can be separated from the mixture by centrifuging after the formation of the complex and removing the supernatant. When magnetic beads are used as the solid phase, the EVs may be separated from the mixture by collecting the complex after the formation of the complex and removing the supernatant. When a support is used as the solid phase, the EVs can be separated from the mixture by removing the mixture after the formation of the complex.

ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質は、好ましくは、テトラスパニン膜タンパク質に対する親和性物質であり、さらにより好ましくはＣＤ９および／またはＣＤ６３に対する親和性物質である。 The affinity substance for an EV surface marker is preferably an affinity substance for a tetraspanin membrane protein, and even more preferably an affinity substance for CD9 and/or CD63.

胆汁含有サンプルをＥＶの表面マーカーに対する親和性物質と混合する温度は、ＥＶと親和性物質が結合でき、親和性物質を利用してＥＶを回収可能な温度である限り特に限定されない。このような温度は、例えば４～８０℃、好ましくは３５～６０℃であってもよい。ヒト血液サンプルをＥＶの表面マーカーに対する親和性物質で処理する時間は、ＥＶと親和性物質が結合できる十分な時間である限り特に限定されない。 The temperature at which the bile-containing sample is mixed with the affinity substance for the EV surface marker is not particularly limited, so long as it is a temperature at which EVs and the affinity substance can bind and EVs can be recovered using the affinity substance. Such a temperature may be, for example, 4 to 80°C, preferably 35 to 60°C. The time at which the human blood sample is treated with the affinity substance for the EV surface marker is not particularly limited, so long as it is a time sufficient for EVs and the affinity substance to bind.

胆汁含有サンプルからのＥＶの回収が超遠心分離により行われる場合、超遠心分離は、超遠心分離機を用いて行うことができる。超遠心分離で印加される重力は、例えば、１０，０００×ｇ～２００，０００×ｇであり、好ましくは、７０，０００×ｇ～１５０，０００×ｇであってもよい。超遠心分離の時間は、例えば、０．５～２４時間であり、好ましくは１～５時間である。超遠心分離での温度は、例えば、４～３０℃である。超遠心分離は、１回または複数回（例、２回、３回）行ってもよい。 When the recovery of EVs from the bile-containing sample is performed by ultracentrifugation, the ultracentrifugation can be performed using an ultracentrifuge. The gravity applied in the ultracentrifugation may be, for example, 10,000×g to 200,000×g, and preferably 70,000×g to 150,000×g. The time of the ultracentrifugation may be, for example, 0.5 to 24 hours, and preferably 1 to 5 hours. The temperature in the ultracentrifugation is, for example, 4 to 30° C. The ultracentrifugation may be performed once or multiple times (e.g., twice or three times).

（ｂ）における解析は、上述のタンパク質の量の解析と同様にして行うことができる。 The analysis in (b) can be carried out in the same manner as the analysis of protein quantity described above.

本発明の方法では、上述の１種以上のタンパク質の量の解析に基づいて、胆管がんの罹患の可能性が判定される。当該１種以上のタンパク質の解析の結果は、基準値と比較するための指標として利用される。胆管がんに罹患している被験体群は、胆管がんに罹患していない被験体群（例えば、上述したような胆管において炎症を伴う良性疾患の患者）に比し、当該１種以上のタンパク質の量が有意に高い。したがって、本発明の方法によれば、当該１種以上のタンパク質の量が基準値以上のとき、被験体は、胆管がんに罹患している可能性が高いと判定することができる。また、当該１種以上のタンパク質の量が基準値未満のとき、被験体は、胆管がんに罹患している可能性が低いと判定することができる。 In the method of the present invention, the possibility of having bile duct cancer is determined based on the analysis of the amount of one or more proteins described above. The results of the analysis of the one or more proteins are used as an index for comparison with a reference value. A group of subjects suffering from bile duct cancer have a significantly higher amount of the one or more proteins than a group of subjects not suffering from bile duct cancer (e.g., patients with benign diseases accompanied by inflammation in the bile duct as described above). Therefore, according to the method of the present invention, when the amount of the one or more proteins is equal to or greater than the reference value, it can be determined that the subject is highly likely to have bile duct cancer. Also, when the amount of the one or more proteins is less than the reference value, it can be determined that the subject is low likely to have bile duct cancer.

上記基準値としては、例えば、胆管がんに罹患している群を判別できるように適切に設定されたカットオフ値を利用することができる。カットオフ値は、その値を基準として疾患の判定をした場合に、高い診断感度（有病正診率）および高い診断特異度（無病正診率）の両方を満たす値である。診断感度（または単に感度）は、特定状態を有する被験体のうち、正しく診断される被験体の割合である。特定状態を有する全ての被験体について「陽性」の結果が得られる場合、感度は１００％である。診断特異度（または単に特異度）は、特定状態を有しない被験体のうち、正しく診断される被験体の割合である。特定状態を有しない全ての被験体について「陰性」の結果が得られる場合、特異度は１００％である。カットオフ値の算出方法は、本分野において周知である。 As the above-mentioned reference value, for example, a cutoff value appropriately set so as to distinguish a group suffering from bile duct cancer can be used. The cutoff value is a value that satisfies both high diagnostic sensitivity (prevalence rate) and high diagnostic specificity (non-prevalence rate) when a disease is diagnosed based on the value. Diagnostic sensitivity (or simply sensitivity) is the proportion of subjects who are correctly diagnosed among subjects who have a specific condition. When a "positive" result is obtained for all subjects who have a specific condition, the sensitivity is 100%. Diagnostic specificity (or simply specificity) is the proportion of subjects who are correctly diagnosed among subjects who do not have a specific condition. When a "negative" result is obtained for all subjects who do not have a specific condition, the specificity is 100%. Methods for calculating cutoff values are well known in the art.

本発明の方法はまた、上述の１種以上のタンパク質の量が基準値以上である患者に対して、胆管がんの治療剤（例、胆管がんに対する抗がん剤）を投与することを含んでいてもよい。このような投与をさらに含む本発明の方法は、胆管がんの治療法として有用である。 The method of the present invention may also include administering a therapeutic agent for bile duct cancer (e.g., an anticancer agent for bile duct cancer) to a patient whose amount of one or more of the above-mentioned proteins is equal to or greater than the reference value. The method of the present invention further including such administration is useful as a treatment for bile duct cancer.

４．胆管がんの診断試薬
本発明の診断試薬は、上記１種以上のタンパク質の量の解析手段を含む、胆管がんの診断試薬である。 4. Diagnostic Reagent for Bile Duct Cancer The diagnostic reagent of the present invention is a diagnostic reagent for bile duct cancer, which comprises a means for analyzing the amount of one or more of the above proteins.

上記１種以上のタンパク質の量の解析手段としては、例えば、上記１種以上のタンパク質に対して特異的な１種以上の親和性物質が挙げられる。このような親和性物質としては例えば、抗体（例、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、またはこれらの結合性断片）、アプタマーが挙げられる。また、タンパク質の種類に応じた、タンパク質の量の解析手段を利用することもできる。例えば、タンパク質が酵素である場合には、酵素の基質もしくは生成物、またはその共役因子を、タンパク質の量の解析手段として利用することができる。また、タンパク質がリガンド、アダプター等の結合性タンパク質である場合には、結合性タンパク質の結合標的を、タンパク質の量の解析手段として利用することができる。簡便性、迅速性、解析精度等の観点より、タンパク質の量の解析手段は、好ましくは、親和性物質であり、より好ましくは抗体であり、さらにより好ましくはモノクローナル抗体である。解析手段は、上述したような固相に固定されていてもよく、標識物質等の物質と結合体化されていてもよい。本発明の診断試薬は、解析手段が固相に固定されていない場合には、さらに固相を含んでいてもよく、また、標識物質で標識されていない場合には、さらに標識物質を含んでいてもよい。本発明の診断試薬は、解析手段として上記１種以上のタンパク質に対する抗体を含む場合、さらに２次抗体を含んでいてもよい。２次抗体は、上記１種以上のタンパク質に対する抗体と異なるエピトープを標的とする上記１種以上のタンパク質に対する抗体（例、サンドイッチアッセイ用抗体）であってもよい。 The means for analyzing the amount of the one or more proteins may include, for example, one or more affinity substances specific to the one or more proteins. Examples of such affinity substances include antibodies (e.g., IgG, IgM, IgA, or binding fragments thereof) and aptamers. In addition, a means for analyzing the amount of a protein according to the type of protein may be used. For example, when the protein is an enzyme, the substrate or product of the enzyme, or a conjugating factor thereof, may be used as a means for analyzing the amount of the protein. In addition, when the protein is a binding protein such as a ligand or an adapter, the binding target of the binding protein may be used as a means for analyzing the amount of the protein. From the viewpoints of simplicity, speed, analytical accuracy, etc., the means for analyzing the amount of a protein is preferably an affinity substance, more preferably an antibody, and even more preferably a monoclonal antibody. The analytical means may be fixed to a solid phase as described above, or may be conjugated with a substance such as a labeling substance. When the analytical means is not fixed to a solid phase, the diagnostic reagent of the present invention may further include a solid phase, and when it is not labeled with a labeling substance, it may further include a labeling substance. When the diagnostic reagent of the present invention contains an antibody against one or more of the above proteins as an analytical means, it may further contain a secondary antibody. The secondary antibody may be an antibody against one or more of the above proteins that targets an epitope different from that of the antibody against one or more of the above proteins (e.g., an antibody for a sandwich assay).

上記１種以上のタンパク質の量の解析手段の数は、上記１種以上のタンパク質の数に応じて適宜決定することができる。例えば、解析手段の数は、本発明で利用されるべきタンパク質の個数と同じに設定することができる。また、上記１種以上のタンパク質の一つに対し、２種以上の解析手段を用いることもできる。このような解析手段としては、例えば、このような一つのタンパク質中の同一または異なるエピトープに対する異なる２種以上の抗体が挙げられるが、一つのタンパク質中の異なるエピトープに対する異なる２種以上の抗体が好ましい。あるいは、本発明で利用されるべき２種以上の特定タンパク質がその総量としても胆管がんに罹患している被験体群で有意に高く、かつ当該２種以上の特定タンパク質がそれらに特異的な共通エピトープを有する場合（例、当該２種以上のタンパク質が特定ファミリーに属する場合）、共通エピトープに対する抗体を用いてこれらのタンパク質の総量を包括的に解析することによっても本発明の目的を達成できるため、解析手段の数は、本発明で利用されるべきタンパク質の個数よりも少ない数に設定することができる。したがって、本発明の診断試薬に含まれる解析手段の数は、本発明で利用されるべきタンパク質の個数以下の数に設定することができる。 The number of analytical means for analyzing the amount of the one or more proteins can be appropriately determined according to the number of the one or more proteins. For example, the number of analytical means can be set to the same number as the number of proteins to be used in the present invention. In addition, two or more analytical means can be used for one of the one or more proteins. Examples of such analytical means include two or more different antibodies against the same or different epitopes in one protein, and two or more different antibodies against different epitopes in one protein are preferred. Alternatively, when the total amount of two or more specific proteins to be used in the present invention is significantly high in a group of subjects suffering from bile duct cancer and the two or more specific proteins have a common epitope specific to them (e.g., when the two or more proteins belong to a specific family), the object of the present invention can also be achieved by comprehensively analyzing the total amount of these proteins using an antibody against the common epitope, so the number of analytical means can be set to a number less than the number of proteins to be used in the present invention. Therefore, the number of analytical means included in the diagnostic reagent of the present invention can be set to a number equal to or less than the number of proteins to be used in the present invention.

本発明の診断試薬は、ＥＶの回収手段をさらに含んでいてもよい。ＥＶの回収手段としては、ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質が挙げられる。ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質は上述のとおりである。ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質は、ＥＶの分離を容易にするための固相に固定されていてもよい。あるいは、ＥＶの表面マーカーに対する親和性物質が固相に固定されていない場合、本発明の診断試薬は、上述したような固相をさらに含んでいてもよい。本発明の診断試薬は、例えば、本発明の方法の迅速かつ簡便な実施に有用である。 The diagnostic reagent of the present invention may further comprise a means for recovering EVs. Examples of the means for recovering EVs include an affinity substance for an EV surface marker. The affinity substance for the EV surface marker is as described above. The affinity substance for the EV surface marker may be immobilized on a solid phase to facilitate separation of EVs. Alternatively, when the affinity substance for the EV surface marker is not immobilized on a solid phase, the diagnostic reagent of the present invention may further comprise a solid phase as described above. The diagnostic reagent of the present invention is useful, for example, for rapid and simple implementation of the method of the present invention.

以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。 The present invention will be described in detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

胆汁の細胞外小胞（ＥＶ）に含有されるタンパク質の量的差異で胆管がんの診断が可能かどうか検証するために、胆管がん患者由来胆汁１０例および良性疾患として胆石患者由来胆汁１０例のＥＶを用いてプロテオミクスを行った。 To verify whether it is possible to diagnose bile duct cancer based on quantitative differences in proteins contained in bile extracellular vesicles (EVs), we performed proteomics using EVs from 10 cases of bile derived from patients with bile duct cancer and 10 cases of bile derived from patients with gallstones, a benign disease.

（細胞外小胞の回収）
４００μＬの胆汁検体を、４００μＬのＥＤＴＡおよびＥＧＴＡ入りＰＢＳ（ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡの終濃度は５０ｍＭ、以下ＥＤ／ＥＧ）で希釈し、室温で１０分放置した後、１５，０００ｘｇ、４℃で１５分間遠心した。上清を新しいチューブに移し、６００μＬのＥＤ／ＥＧを加えた。溶液を０．２２μｍのフィルターに通し、その内１．４ｍＬを新しいチューブに移し、１００，０００ｘｇ、４℃で１時間超遠心した。上清を廃棄し、ペレットに１００μＬのＥＤ／ＥＧを加えた。よく懸濁した後、再度１００，０００ｘｇ、４℃で１時間超遠心した。上清を廃棄し、ペレットを回収してＥＶを得た。 (Extracellular vesicle recovery)
400 μL of bile specimen was diluted with 400 μL of PBS containing EDTA and EGTA (final concentration of EDTA and EGTA is 50 mM, hereinafter referred to as ED/EG), left at room temperature for 10 minutes, and then centrifuged at 15,000 x g and 4 ° C for 15 minutes. The supernatant was transferred to a new tube, and 600 μL of ED/EG was added. The solution was passed through a 0.22 μm filter, 1.4 mL of which was transferred to a new tube, and ultracentrifuged at 100,000 x g and 4 ° C for 1 hour. The supernatant was discarded, and 100 μL of ED/EG was added to the pellet. After thorough suspension, it was ultracentrifuged again at 100,000 x g and 4 ° C for 1 hour. The supernatant was discarded, and the pellet was collected to obtain EV.

（プロテオミクスのための処理および操作）
ペレットに４０μＬのＬｙｓｉｓＢｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ重炭酸アンモニウム（シグマアルドリッチ社製）、５０ｍＭＤＴＴ／５０ｍＭ重炭酸アンモニウムおよび２％ＲａｐｉｇｅｓｔＳＦ試薬（Ｗａｔｅｒｓ社製）／５０ｍＭ重炭酸アンモニウムを８：１：１の比率で混合したもの）を加え懸濁した。溶液を新しいチューブに移し、６０℃で３０分還元を行った。室温に戻した後に４μＬの１５０ｍＭヨードアセトアミド（和光純薬社製）／５０ｍＭ重炭酸アンモニウムを添加し、遮光し３０分間室温で反応させた。 (Processing and manipulation for proteomics)
The pellet was suspended in 40 μL of Lysis Buffer (a mixture of 50 mM ammonium bicarbonate (Sigma-Aldrich), 50 mM DTT/50 mM ammonium bicarbonate and 2% Rapigest SF reagent (Waters)/50 mM ammonium bicarbonate in a ratio of 8:1:1). The solution was transferred to a new tube and reduced at 60° C. for 30 minutes. After returning to room temperature, 4 μL of 150 mM iodoacetamide (Wako Pure Chemical Industries)/50 mM ammonium bicarbonate was added and reacted at room temperature for 30 minutes in the dark.

反応後、１μｇ／μＬのＴｒｙｐｓｉｎ／Ｌｙｓ－ＣＭｉｘ，ＭａｓｓＳｐｅｃＧｒａｄｅ（プロメガ社製）を１μＬ加え３７℃で１８時間インキュベートした。溶液に４μＬの１０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（サーモサイエンティフィック社製）を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。白濁していることを確認した後、１３，０００ｘｇ、１０分間室温遠心した。新しいチューブに上清を回収し、遠心エバポレーター（東京理化器械株式会社製）で凍結乾固させた。 After the reaction, 1 μL of 1 μg/μL Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade (Promega) was added and incubated at 37°C for 18 hours. 4 μL of 10% trifluoroacetic acid (TFA) (Thermo Scientific) was added to the solution and incubated at 37°C for 30 minutes. After confirming that the solution was cloudy, the solution was centrifuged at 13,000 xg for 10 minutes at room temperature. The supernatant was collected in a new tube and freeze-dried using a centrifugal evaporator (Tokyo Rikakikai Co., Ltd.).

凍結乾固したサンプルを７０μＬの０．５％ＴＦＡ／５％アセトニトリル（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で再溶解した後、ＰｉｅｒｃｅＣ１８－ＳｐｉｎＣｏｌｕｍｎ，ＰｅｐＣｌｅａｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で脱塩処理した。溶出液を遠心エバポレーターで凍結乾固させた。得られたペプチドに１０μＬの０．１％ギ酸水（サーモサイエンティフィック社製）を加えて溶解したのち、ＬＣ－ＭＳ（ＬＣ：ＵｌｔｉｍａｔｅＵ３０００、質量分析装置：ＱＥｘａｃｔｉｖｅ、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で測定を行った。タンパク質の同定および定量解析はＰｒｏｔｅｏｍｅＤｉｓｃｏｖｅｒｅｒ２．２（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）で行った。 The freeze-dried sample was redissolved in 70 μL of 0.5% TFA/5% acetonitrile (Thermo Fisher Scientific), and then desalted using a Pierce C18-Spin Column, PepClean (Thermo Fisher Scientific). The eluate was freeze-dried using a centrifugal evaporator. The peptides obtained were dissolved in 10 μL of 0.1% formic acid water (Thermo Scientific), and then measured using LC-MS (LC: Ultimate U3000, mass spectrometer: Q Exactive, Thermo Fisher Scientific). Protein identification and quantitative analysis were performed using Proteome Discoverer 2.2 (Thermo Fisher Scientific).

得られたタンパク質ごとの定量値を基に、Ｗｅｌｃｈのｔ検定によるｐ値およびＦｏｌｄＣｈａｎｇｅ（胆管がん／胆石）を算出し、差異が認められるタンパク質を抽出した（ｐ値０．０５未満、ＦｏｌｄＣｈａｎｇｅ２以上）。結果を表１～５に示す。また、差異が認められるタンパク質の例としてＲａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－２０（Ｑ９ＮＸ５７）、ロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）（Ｑ９Ｐ２Ｊ５）、第Ｘ凝固因子（Ｐ００７４２）、クローディン－３（Ｏ１５５５１）の結果を、図１～４に示す。 Based on the quantitative values obtained for each protein, the p-value and fold change (bile duct cancer/gallstones) were calculated using Welch's t-test, and proteins showing differences were extracted (p-value less than 0.05, fold change 2 or more). The results are shown in Tables 1 to 5. In addition, as examples of proteins showing differences, the results for the Ras-related protein Rab-20 (Q9NX57), leucine-tRNA ligase (cytoplasmic) (Q9P2J5), coagulation factor X (P00742), and claudin-3 (O15551) are shown in Figures 1 to 4.

その結果、胆管がん患者および良性疾患である胆石患者由来胆汁中のＥＶに含有されるタンパク質の量において統計学的有意差（ｐ＜０．０５）が認められたことから、胆管がんのマーカー候補として１６５種のタンパク質が同定された（表１～５、図１～４）。したがって、胆汁中のＥＶにより、胆管がんの判別が可能であることが示された。 As a result, a statistically significant difference (p<0.05) was found in the amount of proteins contained in EVs in bile derived from patients with bile duct cancer and patients with gallstones, a benign disease, and 165 proteins were identified as potential markers for bile duct cancer (Tables 1-5, Figures 1-4). This shows that it is possible to distinguish bile duct cancer from EVs in bile.

本発明は、例えば、胆管がんの臨床検査に有用である。 The present invention is useful, for example, in clinical testing for bile duct cancer.

Claims

下記１）のタンパク質からなる、胆汁における胆管がんのバイオマーカー：
１）クローディン－３。 A bile biomarker for cholangiocarcinoma consisting of the following proteins:
1) Claudin- 3.

前記バイオマーカーが、胆汁の細胞外小胞における胆管がんのバイオマーカーである、請求項１記載のバイオマーカー。 The biomarker of claim 1, wherein the biomarker is a biomarker for cholangiocarcinoma in extracellular vesicles of bile.

請求項１に記載の胆汁における胆管がんのバイオマーカーと、さらに下記２）～１６５）のタンパク質からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である胆汁における胆管がんのバイオマーカーとを含む、胆汁における胆管がんのバイオマーカーセット：A biomarker set for bile duct cancer in bile, comprising the biomarker for bile duct cancer in bile according to claim 1, and a biomarker for bile duct cancer in bile which is one or more proteins selected from the group consisting of the following proteins 2) to 165):
２）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－２０；2) the Ras-related protein Rab-20;
３）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－５Ａ；3) the Ras-related protein Rab-5A;
４）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－３Ｂ；4) Ras-related protein Rab-3B;
５）ロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）；5) leucine-tRNA ligase (cytoplasmic);
６）第Ｘ凝固因子；6) Coagulation factor X;
７）クローディン－７；7) Claudin-7;
８）クローディン－１０；8) Claudin-10;
９）ＷＤリピート及びＳＯＣＳボックス含有タンパク質２；9) WD repeat and SOCS box-containing protein 2;
１０）フォン・ウィルブランド因子Ａドメイン含有タンパク質１；10) von Willebrand factor A domain-containing protein 1;
１１）バーシカンコアタンパク質；11) Versican core protein;
１２）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質ＶＴＡ１ホモログ；12) Vacuolar protein sorting-associated protein VTA1 homolog;
１３）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質４Ｂ；13) Vacuolar protein sorting-associated protein 4B;
１４）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｄ；14) Vacuolar protein sorting-associated protein 37D;
１５）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｂ；15) Vacuolar protein sorting-associated protein 37B;
１６）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質２８ホモログ；16) Vacuolar protein sorting-associated protein 28 homolog;
１７）ウリジン５’－モノホスフェートシンターゼ；17) Uridine 5'-monophosphate synthase;
１８）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｄ；18) unconventional myosin-Id;
１９）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｃ；19) unconventional myosin-Ic;
２０）ＵＭＰ－ＣＭＰキナーゼ；20) UMP-CMP kinase;
２１）ＵＤＰ－グルコース４－エピメラーゼ；21) UDP-glucose 4-epimerase;
２２）チロシン－プロテインホスファターゼ非レセプター型１２；22) Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 12;
２３）腫瘍感受性遺伝子１０１タンパク質；23) Tumor susceptibility gene 101 protein;
２４）尿細管間質性腎炎抗原様；24) tubulointerstitial nephritis antigen-like;
２５）チューブリン重合促進タンパク質ファミリーメンバー３；25) Tubulin polymerization promoting protein family member 3;
２６）チューブリンβ－６鎖；26) Tubulin β-6 chain;
２７）チューブリンβ－４Ｂ鎖；27) Tubulin β-4B chain;
２８）チューブリンβ－２Ｂ鎖；28) Tubulin β-2B chain;
２９）チューブリンβ鎖；29) Tubulin β chain;
３０）チューブリンα－１Ｃ鎖；30) Tubulin α-1C chain;
３１）チューブリンα－１Ａ鎖；31) Tubulin α-1A chain;
３２）トランスメンブラン９スーパーファミリーメンバー２；32) transmembrane 9 superfamily member 2;
３３）トランスフェリンレセプタータンパク質２；33) Transferrin receptor protein 2;
３４）Ｔｏｌｌ相互作用タンパク質；34) Toll-interacting protein;
３５）組織因子経路インヒビター；35) tissue factor pathway inhibitor;
３６）チオレドキシン様タンパク質１；36) Thioredoxin-like protein 1;
３７）Ｔ－ボックス脳タンパク質１；37) T-box brain protein 1;
３８）ＳＴＥ２０関連キナーゼアダプタータンパク質β；38) STE20-related kinase adaptor protein beta;
３９）スタフィロコッカルヌクレアーゼドメイン含有タンパク質１；39) Staphylococcal nuclease domain-containing protein 1;
４０）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットβ－１；40) Sodium/potassium transport ATPase subunit beta-1;
４１）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットα－１；41) Sodium/potassium transport ATPase subunit α-1;
４２）ナトリウム／グルコースコトランスポーター４；42) Sodium/glucose cotransporter 4;
４３）ナトリウム／グルコースコトランスポーター１；43) Sodium/glucose cotransporter 1;
４４）ＳＨ３ドメイン結合タンパク質４；44) SH3 domain binding protein 4;
４５）セリン／アルギニン－リッチスプライシング因子７；45) serine/arginine-rich splicing factor 7;
４６）セプチン－９；46) Septin-9;
４７）セプチン－８；47) Septin-8;
４８）ＲＮＡ転写，翻訳及び輸送因子タンパク質；48) RNA transcription, translation and transport factor proteins;
４９）リボヌクレアーゼ４；49) Ribonuclease 4;
５０）ＲｈｏＧＴＰアーゼ活性化タンパク質１；50) Rho GTPase-activating protein 1;
５１）レチナルデヒドロゲナーゼ１；51) Retinal dehydrogenase 1;
５２）レセプター型チロシン－プロテインホスファターゼＨ；52) Receptor-type tyrosine-protein phosphatase H;
５３）キノンオキシドレダクターゼ；53) quinone oxidoreductase;
５４）タンパク質Ｓ１００－Ａ１０；54) Protein S100-A10;
５５）タンパク質ＭＡＬ２；55) Protein MAL2;
５６）タンパク質ＡＭＢＰ；56) Protein AMBP;
５７）プロスタミド／プロスタグランジンＦシンターゼ；57) Prostamide/prostaglandin F synthase;
５８）プログラム細胞死６－相互作用タンパク質；58) Programmed cell death 6-interacting protein;
５９）推定リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＨ；59) Putative phospholipid transport ATPase IH;
６０）推定カチオン輸送ＡＴＰアーゼ１３Ａ４；60) Putative cation transporting ATPase 13A4;
６１）ポリペプチドＮ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ３；61) Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 3;
６２）ポリ（ｒＣ）結合タンパク質２；62) poly(rC) binding protein 2;
６３）血小板由来増殖因子Ｄ；63) Platelet-derived growth factor D;
６４）プラスチン－１；64) Plastin-1;
６５）色素上皮由来因子；65) pigment epithelium-derived factor;
６６）リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＣ；66) Phospholipid transport ATPase IC;
６７）ホスホリパーゼＤ１；67) Phospholipase D1;
６８）結腸がん過剰発現１タンパク質；68) Colon cancer overexpressed 1 protein;
６９）ニバン様タンパク質１；69) Niban-like protein 1;
７０）Ｎ－アセチルラクトサミニドβ－１，３－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ３；70) N-acetyllactosaminide β-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase 3;
７１）ミオシン調節軽鎖１２Ｂ；71) Myosin regulatory light chain 12B;
７２）多剤耐性タンパク質１；72) multidrug resistance protein 1;
７３）マザーズアゲンストデカペンタプレジックホモログ２；73) Mothers Against Decapentaplegic Homolog 2;
７４）ミトコンドリア性輸入レセプターサブユニットＴＯＭ７０；74) mitochondrial import receptor subunit TOM70;
７５）リンゴ酸デヒドロゲナーゼ（細胞質性）；75) Malate dehydrogenase (cytoplasmic);
７６）リソソーム膜タンパク質２；76) Lysosomal membrane protein 2;
７７）脂肪腫好性パートナー；77) Lipomatophilic partner;
７８）分岐鎖α－ケト酸デヒドロゲナーゼ複合体のリポアミドアセチルトランスフェラーゼ成分（ミトコンドリア性）；78) Lipoamide acetyltransferase component of the branched-chain α-ketoacid dehydrogenase complex (mitochondrial);
７９）ケラチン，ＩＩ型細胞骨格８；79) Keratin, type II cytoskeleton 8;
８０）ＩＳＴ１ホモログ；80) IST1 homolog;
８１）インターロイキン－１８；81) Interleukin-18;
８２）インター－α－トリプシンインヒビター重鎖Ｈ２；82) inter-α-trypsin inhibitor heavy chain H2;
８３）インテグリン結合プロテインキナーゼ；83) Integrin-linked protein kinase;
８４）無機ピロホスファターゼ；84) inorganic pyrophosphatase;
８５）ヒアルロンナン結合タンパク質２；85) Hyaluronan binding protein 2;
８６）高アフィニティーｃＡＭＰ－特異的かつＩＢＭＸ－非感受性３’，５’－サイクリックホスホジエステラーゼ８Ａ；86) High affinity cAMP-specific and IBMX-insensitive 3',5'-cyclic phosphodiesterase 8A;
８７）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＬ；87) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L;
８８）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＨ；88) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H;
８９）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＤ様；89) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D-like;
９０）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｋ）サブユニットα；90) Guanine nucleotide-binding protein G(k) subunit α;
９１）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｔ）サブユニットβ－２；91) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(T) subunit β-2;
９２）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｏ）サブユニットγ－１２；92) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(O) subunit γ-12;
９３）グアニンデアミナーゼ；93) Guanine deaminase;
９４）増殖因子レセプター結合タンパク質７；94) Growth factor receptor-binding protein 7;
９５）グリピカン－６；95) Glypican-6;
９６）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ ω－１；96) Glutathione S-transferase ω-1;
９７）グルタミン－フルクトース－６－ホスフェートアミノトランスフェラーゼ［異性化］１；97) Glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase [isomerization] 1;
９８）グルタメート－リッチタンパク質５；98) Glutamate-rich protein 5;
９９）γ－可溶性ＮＳＦ付着タンパク質；99) γ-soluble NSF adhesion protein;
１００）ガレクチン－９Ｂ；100) Galectin-9B;
１０１）ガレクチン－２；101) Galectin-2;
１０２）フェルミチンファミリーホモログ１；102) Fermitin family homolog 1;
１０３）ＦＡＳ－関連因子２；103) FAS-related factor 2;
１０４）エストラジオール１７－β－デヒドロゲナーゼ２；104) Estradiol 17-β-dehydrogenase 2;
１０５）上皮細胞接着分子；105) epithelial cell adhesion molecule;
１０６）上皮成長因子レセプターキナーゼ基質８様タンパク質１；106) epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 1;
１０７）小胞体シャペロンＢｉＰ；107) endoplasmic reticulum chaperone BiP;
１０８）伸長因子Ｔｕ（ミトコンドリア性）108) Elongation factor Tu (mitochondrial)
１０９）ダブルコルチンドメイン含有タンパク質２；109) Doublecortin domain-containing protein 2;
１１０）ジスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１０；110) A disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10;
１１１）ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質２；111) Dihydropyrimidinase-related protein 2;
１１２）細胞質性ダイニン１重鎖１；112) Cytoplasmic dynein 1 heavy chain 1;
１１３）シスチン－１；113) Cystine-1;
１１４）サイクリン－Ｙ；114) cyclin-Y;
１１５）コピン－８；115) Copin-8;
１１６）補体Ｃ１ｑサブ成分サブユニットＣ；116) Complement C1q subcomponent subunit C;
１１７）コラーゲンα－１（ＸＶＩＩＩ）鎖；117) Collagen α-1 (XVIII) chain;
１１８）コアトマーサブユニットγ－１；118) Coatomer subunit γ-1;
１１９）コアトマーサブユニットα；119) Coatomer subunit α;
１２０）クラステリン；120) Clusterin;
１２１）クラスリン重鎖１；121) Clathrin heavy chain 1;
１２２）荷電多胞体タンパク質５；122) charged multivesicular body protein 5;
１２３）荷電多胞体タンパク質２ａ；123) charged multivesicular body protein 2a;
１２４）荷電多胞体タンパク質１ａ；124) charged multivesicular body protein 1a;
１２５）カルボキシ末端ドメインＲＮＡポリメラーゼＩＩポリペプチドＡスモールホスファターゼ１；125) Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1;
１２６）胆管側多選択性有機アニオントランスポーター２；126) Biliary multispecific organic anion transporter 2;
１２７）ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ触媒サブユニットβ；127) cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit β;
１２８）カルパイン－７；128) calpain-7;
１２９）カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ型サブユニットδ；129) Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit δ;
１３０）Ｃ－１－テトラヒドロ葉酸シンターゼ（細胞質性）；130) C-1-tetrahydrofolate synthase (cytoplasmic);
１３１）ＢＲＯ１ドメイン含有タンパク質ＢＲＯＸ；131) BRO1 domain-containing protein BROX;
１３２）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ４；132) β-1,4-galactosyltransferase 4;
１３３）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ１；133) β-1,4-galactosyltransferase 1;
１３４）基底膜特異的ヘパラン硫酸プロテオグリカンコアタンパク質；134) Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein;
１３５）バンド４．１様タンパク質１；135) band 4.1-like protein 1;
１３６）ＡＴＰ依存性６－ホスホフルクトキナーゼ（血小板型）；136) ATP-dependent 6-phosphofructokinase (platelet type);
１３７）アスパルチル／アスパラギニルβ－ヒドロキシラーゼ；137) Aspartyl/asparaginyl β-hydroxylase;
１３８）アポリポタンパク質Ｅ；138) Apolipoprotein E;
１３９）アポリポタンパク質Ｃ－ＩＶ；139) Apolipoprotein C-IV;
１４０）アポリポタンパク質Ｂ－１００；140) Apolipoprotein B-100;
１４１）アノクタミン－１；141) Anoctamin-1;
１４２）アネキシンＡ４；142) Annexin A4;
１４３）アネキシンＡ１３；143) Annexin A13;
１４４）α－１，３－マンノシル－糖タンパク質２－β－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ；144) α-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-β-N-acetylglucosaminyltransferase;
１４５）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ３；145) Aldo-keto reductase family 1 member C3;
１４６）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ２；146) Aldo-keto reductase family 1 member C2;
１４７）ＡＤＰ－リボシル化因子様タンパク質３；147) ADP-ribosylation factor-like protein 3;
１４８）ＡＤＰ－リボシル化因子１；148) ADP-ribosylation factor 1;
１４９）ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ３；149) ADP/ATP translocase 3;
１５０）アシル－タンパク質チオエステラーゼ１；150) Acyl-protein thioesterase 1;
１５１）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７ａ；151) 60S ribosomal protein L7a;
１５２）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７；152) 60S ribosomal protein L7;
１５３）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ３；153) 60S ribosomal protein L3;
１５４）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２７ａ；154) 60S ribosomal protein L27a;
１５５）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２４；155) 60S ribosomal protein L24;
１５６）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２３；156) 60S ribosomal protein L23;
１５７）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１４；157) 60S ribosomal protein L14;
１５８）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１１；158) 60S ribosomal protein L11;
１５９）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１０；159) 60S ribosomal protein L10;
１６０）４０Ｓリボソーマルタンパク質ＳＡ；160) 40S ribosomal protein SA;
１６１）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ８；161) 40S ribosomal protein S8;
１６２）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２５；162) 40S ribosomal protein S25;
１６３）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２４；163) 40S ribosomal protein S24;
１６４）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２３；および164) 40S ribosomal protein S23; and
１６５）１－ホスファチジルイノシトール４，５－ビホスフェートホスホジエステラーゼδ－１。165) 1-phosphatidylinositol 4,5-biphosphate phosphodiesterase delta-1.

前記２）～１６５）のタンパク質からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質が、２）～２３）、２５）～４０）、４２）～１０４）、１０６）～１３３）、１３５）～１３９）、および１４１）～１６５）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、請求項３記載のバイオマーカーセット。 The biomarker set according to claim 3, wherein the one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2) to 165) are one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2 ) to 23), 25) to 40), 42) to 104), 106) to 133), 135) to 139), and 141) to 165 ).

前記２）～１６５）のタンパク質からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質が、２）、５）、８）～１０）、１３）～１７）、２３）、２４）、２８）、３２）、３７）、３８）、４２）、４４）、４５）、４７）、４８）、５７）、５９）、６０）、６６）、６８）、７０）、７３）、７４）、８０）、８１）、８３）、８６）、８７）、８９）、９４）、９８）、１００）、１０２）、１０３）、１０９）、１１２）～１１４）、１１８）、１２３）～１２６）、１２８）、１２９）、１３１）、１３２）、１３９）、１４１）、１４４）、１４７）、１５３）、１５５）、１５６）、１５９）、１６３）、および１６４）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、請求項３記載のバイオマーカーセット。 The biomarker set according to claim 3, wherein the one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2) to 165) are one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2), 5), 8) to 10), 13) to 17), 23), 24), 28), 32), 37), 38), 42), 44), 45), 47), 48), 57), 59), 60), 66), 68), 70), 73), 74), 80), 81), 83), 86), 87), 89), 94), 98), 100), 102), 103), 109), 112) to 114), 118), 123) to 126), 128), 129), 131), 132), 139), 141), 144), 147), 153), 155), 156), 159 ), 163), and 164).

前記２）～１６５）のタンパク質からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質が、２）、６）、２８）、３１）、４２）、４５）、６１）、６８）、７５）、９３）、９８）、１０５）、１０７）、１２５）、１３２）、１５５）、１６０）、および１６２）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、請求項３記載のバイオマーカーセット。 The biomarker set according to claim 3, wherein the one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2) to 165) are one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2), 6), 28), 31), 42), 45), 61), 68), 75 ) , 93), 98), 105), 107), 125), 132), 155), 160), and 162) .

前記２）～１６５）のタンパク質からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質が、２）、５）、６）、８）、１１）、１６）、２３）、２５）、２７）、４２）、４６）、４９）、５２）、５４）～５６）、５８）～６０）、６３）、６４）、６７）、６９）、７３）、７９）、８２）、９４）、９７）、９８）、１０３）、１０４）、１０７）、１１３）、１１５）、１１８）、１２２）、１２４）、１２７）、１３０）、１３４）、１４０）、１４２）、１５４）、１５８）、および１６０）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、請求項３記載のバイオマーカーセット。 The biomarker set according to claim 3, wherein the one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2) to 165) are one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2 ), 5), 6), 8), 11), 16), 23), 25), 27), 42), 46), 49), 52), 54) to 56), 58) to 60), 63), 64), 67), 69), 73), 79), 82), 94), 97), 98), 103), 104), 107), 113), 115), 118), 122), 124), 127), 130), 134), 140), 142), 154 ) , 158), and 160) .

前記２）～１６５）のタンパク質からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質が、２）、６）、４２）、９８）、１０７）、および１６０）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質である、請求項３記載のバイオマーカーセット。 The biomarker set according to claim 3 , wherein the one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2) to 165) are one or more proteins selected from the group consisting of proteins 2), 6), 42), 98 ), 107), and 160).

被験体から得られた胆汁含有サンプルにおいて、
下記１）のタンパク質の量、又は、
下記１）のタンパク質の量と下記２）～１６５）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質の量
を解析することを含む、胆管がんの検査方法：
１）クローディン－３；
２）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－２０；
３）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－５Ａ；
４）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－３Ｂ；
５）ロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）；
６）第Ｘ凝固因子；
７）クローディン－７；
８）クローディン－１０；
９）ＷＤリピート及びＳＯＣＳボックス含有タンパク質２；
１０）フォン・ウィルブランド因子Ａドメイン含有タンパク質１；
１１）バーシカンコアタンパク質；
１２）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質ＶＴＡ１ホモログ；
１３）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質４Ｂ；
１４）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｄ；
１５）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｂ；
１６）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質２８ホモログ；
１７）ウリジン５’－モノホスフェートシンターゼ；
１８）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｄ；
１９）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｃ；
２０）ＵＭＰ－ＣＭＰキナーゼ；
２１）ＵＤＰ－グルコース４－エピメラーゼ；
２２）チロシン－プロテインホスファターゼ非レセプター型１２；
２３）腫瘍感受性遺伝子１０１タンパク質；
２４）尿細管間質性腎炎抗原様；
２５）チューブリン重合促進タンパク質ファミリーメンバー３；
２６）チューブリンβ－６鎖；
２７）チューブリンβ－４Ｂ鎖；
２８）チューブリンβ－２Ｂ鎖；
２９）チューブリンβ鎖；
３０）チューブリンα－１Ｃ鎖；
３１）チューブリンα－１Ａ鎖；
３２）トランスメンブラン９スーパーファミリーメンバー２；
３３）トランスフェリンレセプタータンパク質２；
３４）Ｔｏｌｌ相互作用タンパク質；
３５）組織因子経路インヒビター；
３６）チオレドキシン様タンパク質１；
３７）Ｔ－ボックス脳タンパク質１；
３８）ＳＴＥ２０関連キナーゼアダプタータンパク質β；
３９）スタフィロコッカルヌクレアーゼドメイン含有タンパク質１；
４０）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットβ－１；
４１）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットα－１；
４２）ナトリウム／グルコースコトランスポーター４；
４３）ナトリウム／グルコースコトランスポーター１；
４４）ＳＨ３ドメイン結合タンパク質４；
４５）セリン／アルギニン－リッチスプライシング因子７；
４６）セプチン－９；
４７）セプチン－８；
４８）ＲＮＡ転写，翻訳及び輸送因子タンパク質；
４９）リボヌクレアーゼ４；
５０）ＲｈｏＧＴＰアーゼ活性化タンパク質１；
５１）レチナルデヒドロゲナーゼ１；
５２）レセプター型チロシン－プロテインホスファターゼＨ；
５３）キノンオキシドレダクターゼ；
５４）タンパク質Ｓ１００－Ａ１０；
５５）タンパク質ＭＡＬ２；
５６）タンパク質ＡＭＢＰ；
５７）プロスタミド／プロスタグランジンＦシンターゼ；
５８）プログラム細胞死６－相互作用タンパク質；
５９）推定リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＨ；
６０）推定カチオン輸送ＡＴＰアーゼ１３Ａ４；
６１）ポリペプチドＮ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ３；
６２）ポリ（ｒＣ）結合タンパク質２；
６３）血小板由来増殖因子Ｄ；
６４）プラスチン－１；
６５）色素上皮由来因子；
６６）リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＣ；
６７）ホスホリパーゼＤ１；
６８）結腸がん過剰発現１タンパク質；
６９）ニバン様タンパク質１；
７０）Ｎ－アセチルラクトサミニドβ－１，３－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ３；
７１）ミオシン調節軽鎖１２Ｂ；
７２）多剤耐性タンパク質１；
７３）マザーズアゲンストデカペンタプレジックホモログ２；
７４）ミトコンドリア性輸入レセプターサブユニットＴＯＭ７０；
７５）リンゴ酸デヒドロゲナーゼ（細胞質性）；
７６）リソソーム膜タンパク質２；
７７）脂肪腫好性パートナー；
７８）分岐鎖α－ケト酸デヒドロゲナーゼ複合体のリポアミドアセチルトランスフェラーゼ成分（ミトコンドリア性）；
７９）ケラチン，ＩＩ型細胞骨格８；
８０）ＩＳＴ１ホモログ；
８１）インターロイキン－１８；
８２）インター－α－トリプシンインヒビター重鎖Ｈ２；
８３）インテグリン結合プロテインキナーゼ；
８４）無機ピロホスファターゼ；
８５）ヒアルロンナン結合タンパク質２；
８６）高アフィニティーｃＡＭＰ－特異的かつＩＢＭＸ－非感受性３’，５’－サイクリックホスホジエステラーゼ８Ａ；
８７）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＬ；
８８）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＨ；
８９）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＤ様；
９０）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｋ）サブユニットα；
９１）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｔ）サブユニットβ－２；
９２）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｏ）サブユニットγ－１２；
９３）グアニンデアミナーゼ；
９４）増殖因子レセプター結合タンパク質７；
９５）グリピカン－６；
９６）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ ω－１；
９７）グルタミン－フルクトース－６－ホスフェートアミノトランスフェラーゼ［異性化］１；
９８）グルタメート－リッチタンパク質５；
９９）γ－可溶性ＮＳＦ付着タンパク質；
１００）ガレクチン－９Ｂ；
１０１）ガレクチン－２；
１０２）フェルミチンファミリーホモログ１；
１０３）ＦＡＳ－関連因子２；
１０４）エストラジオール１７－β－デヒドロゲナーゼ２；
１０５）上皮細胞接着分子；
１０６）上皮成長因子レセプターキナーゼ基質８様タンパク質１；
１０７）小胞体シャペロンＢｉＰ；
１０８）伸長因子Ｔｕ（ミトコンドリア性）
１０９）ダブルコルチンドメイン含有タンパク質２；
１１０）ジスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１０；
１１１）ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質２；
１１２）細胞質性ダイニン１重鎖１；
１１３）シスチン－１；
１１４）サイクリン－Ｙ；
１１５）コピン－８；
１１６）補体Ｃ１ｑサブ成分サブユニットＣ；
１１７）コラーゲンα－１（ＸＶＩＩＩ）鎖；
１１８）コアトマーサブユニットγ－１；
１１９）コアトマーサブユニットα；
１２０）クラステリン；
１２１）クラスリン重鎖１；
１２２）荷電多胞体タンパク質５；
１２３）荷電多胞体タンパク質２ａ；
１２４）荷電多胞体タンパク質１ａ；
１２５）カルボキシ末端ドメインＲＮＡポリメラーゼＩＩポリペプチドＡスモールホスファターゼ１；
１２６）胆管側多選択性有機アニオントランスポーター２；
１２７）ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ触媒サブユニットβ；
１２８）カルパイン－７；
１２９）カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ型サブユニットδ；
１３０）Ｃ－１－テトラヒドロ葉酸シンターゼ（細胞質性）；
１３１）ＢＲＯ１ドメイン含有タンパク質ＢＲＯＸ；
１３２）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ４；
１３３）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ１；
１３４）基底膜特異的ヘパラン硫酸プロテオグリカンコアタンパク質；
１３５）バンド４．１様タンパク質１；
１３６）ＡＴＰ依存性６－ホスホフルクトキナーゼ（血小板型）；
１３７）アスパルチル／アスパラギニルβ－ヒドロキシラーゼ；
１３８）アポリポタンパク質Ｅ；
１３９）アポリポタンパク質Ｃ－ＩＶ；
１４０）アポリポタンパク質Ｂ－１００；
１４１）アノクタミン－１；
１４２）アネキシンＡ４；
１４３）アネキシンＡ１３；
１４４）α－１，３－マンノシル－糖タンパク質２－β－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ；
１４５）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ３；
１４６）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ２；
１４７）ＡＤＰ－リボシル化因子様タンパク質３；
１４８）ＡＤＰ－リボシル化因子１；
１４９）ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ３；
１５０）アシル－タンパク質チオエステラーゼ１；
１５１）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７ａ；
１５２）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７；
１５３）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ３；
１５４）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２７ａ；
１５５）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２４；
１５６）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２３；
１５７）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１４；
１５８）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１１；
１５９）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１０；
１６０）４０Ｓリボソーマルタンパク質ＳＡ；
１６１）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ８；
１６２）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２５；
１６３）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２４；
１６４）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２３；および
１６５）１－ホスファチジルイノシトール４，５－ビホスフェートホスホジエステラーゼδ－１。 In a bile-containing sample obtained from a subject,
The amount of protein in 1) below, or
A method for testing for bile duct cancer, comprising analyzing the amount of the protein of 1) below and the amount of one or more proteins selected from the group consisting of 2) to 165) below :
1) Claudin-3;
2) the Ras-related protein Rab-20;
3) the Ras-related protein Rab-5A;
4) Ras-related protein Rab-3B;
5) leucine-tRNA ligase (cytoplasmic);
6) Coagulation factor X;
7) Claudin-7;
8) Claudin-10;
9) WD repeat and SOCS box-containing protein 2;
10) von Willebrand factor A domain-containing protein 1;
11) Versican core protein;
12) Vacuolar protein sorting-associated protein VTA1 homolog;
13) Vacuolar protein sorting-associated protein 4B;
14) Vacuolar protein sorting-associated protein 37D;
15) Vacuolar protein sorting-associated protein 37B;
16) Vacuolar protein sorting-associated protein 28 homolog;
17) Uridine 5'-monophosphate synthase;
18) unconventional myosin-Id;
19) unconventional myosin-Ic;
20) UMP-CMP kinase;
21) UDP-glucose 4-epimerase;
22) Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 12;
23) Tumor susceptibility gene 101 protein;
24) tubulointerstitial nephritis antigen-like;
25) Tubulin polymerization promoting protein family member 3;
26) Tubulin β-6 chain;
27) Tubulin β-4B chain;
28) Tubulin β-2B chain;
29) Tubulin β chain;
30) Tubulin α-1C chain;
31) Tubulin α-1A chain;
32) transmembrane 9 superfamily member 2;
33) Transferrin receptor protein 2;
34) Toll-interacting protein;
35) tissue factor pathway inhibitor;
36) Thioredoxin-like protein 1;
37) T-box brain protein 1;
38) STE20-related kinase adaptor protein β;
39) Staphylococcal nuclease domain-containing protein 1;
40) Sodium/potassium transport ATPase subunit beta-1;
41) Sodium/potassium transport ATPase subunit α-1;
42) Sodium/glucose cotransporter 4;
43) Sodium/glucose cotransporter 1;
44) SH3 domain binding protein 4;
45) serine/arginine-rich splicing factor 7;
46) Septin-9;
47) Septin-8;
48) RNA transcription, translation and transport factor proteins;
49) Ribonuclease 4;
50) Rho GTPase-activating protein 1;
51) Retinal dehydrogenase 1;
52) Receptor-type tyrosine-protein phosphatase H;
53) quinone oxidoreductase;
54) Protein S100-A10;
55) Protein MAL2;
56) Protein AMBP;
57) Prostamide/prostaglandin F synthase;
58) Programmed cell death 6-interacting protein;
59) Putative phospholipid transport ATPase IH;
60) Putative cation transporting ATPase 13A4;
61) Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 3;
62) poly(rC) binding protein 2;
63) Platelet-derived growth factor D;
64) Plastin-1;
65) pigment epithelium-derived factor;
66) Phospholipid transport ATPase IC;
67) Phospholipase D1;
68) Colon cancer overexpressed 1 protein;
69) Niban-like protein 1;
70) N-acetyllactosaminide β-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase 3;
71) Myosin regulatory light chain 12B;
72) multidrug resistance protein 1;
73) Mothers Against Decapentaplegic Homolog 2;
74) mitochondrial import receptor subunit TOM70;
75) Malate dehydrogenase (cytoplasmic);
76) Lysosomal membrane protein 2;
77) Lipomatophilic partner;
78) Lipoamide acetyltransferase component of the branched-chain α-ketoacid dehydrogenase complex (mitochondrial);
79) Keratin, type II cytoskeleton 8;
80) IST1 homolog;
81) Interleukin-18;
82) inter-α-trypsin inhibitor heavy chain H2;
83) Integrin-linked protein kinase;
84) inorganic pyrophosphatase;
85) Hyaluronan binding protein 2;
86) High affinity cAMP-specific and IBMX-insensitive 3',5'-cyclic phosphodiesterase 8A;
87) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L;
88) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H;
89) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D-like;
90) Guanine nucleotide-binding protein G(k) subunit α;
91) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(T) subunit β-2;
92) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(O) subunit γ-12;
93) Guanine deaminase;
94) Growth factor receptor-binding protein 7;
95) Glypican-6;
96) Glutathione S-transferase ω-1;
97) Glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase [isomerization] 1;
98) Glutamate-rich protein 5;
99) γ-soluble NSF adhesion protein;
100) Galectin-9B;
101) Galectin-2;
102) Fermitin family homolog 1;
103) FAS-related factor 2;
104) Estradiol 17-β-dehydrogenase 2;
105) epithelial cell adhesion molecule;
106) epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 1;
107) endoplasmic reticulum chaperone BiP;
108) Elongation factor Tu (mitochondrial)
109) Doublecortin domain-containing protein 2;
110) A disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10;
111) Dihydropyrimidinase-related protein 2;
112) Cytoplasmic dynein 1 heavy chain 1;
113) Cystine-1;
114) cyclin-Y;
115) Copin-8;
116) Complement C1q subcomponent subunit C;
117) Collagen α-1 (XVIII) chain;
118) Coatomer subunit γ-1;
119) Coatomer subunit α;
120) Clusterin;
121) Clathrin heavy chain 1;
122) charged multivesicular body protein 5;
123) charged multivesicular body protein 2a;
124) charged multivesicular body protein 1a;
125) Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1;
126) Biliary multispecific organic anion transporter 2;
127) cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit β;
128) calpain-7;
129) Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit δ;
130) C-1-tetrahydrofolate synthase (cytoplasmic);
131) BRO1 domain-containing protein BROX;
132) β-1,4-galactosyltransferase 4;
133) β-1,4-galactosyltransferase 1;
134) Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein;
135) band 4.1-like protein 1;
136) ATP-dependent 6-phosphofructokinase (platelet type);
137) Aspartyl/asparaginyl β-hydroxylase;
138) Apolipoprotein E;
139) Apolipoprotein C-IV;
140) Apolipoprotein B-100;
141) Anoctamin-1;
142) Annexin A4;
143) Annexin A13;
144) α-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-β-N-acetylglucosaminyltransferase;
145) Aldo-keto reductase family 1 member C3;
146) Aldo-keto reductase family 1 member C2;
147) ADP-ribosylation factor-like protein 3;
148) ADP-ribosylation factor 1;
149) ADP/ATP translocase 3;
150) Acyl-protein thioesterase 1;
151) 60S ribosomal protein L7a;
152) 60S ribosomal protein L7;
153) 60S ribosomal protein L3;
154) 60S ribosomal protein L27a;
155) 60S ribosomal protein L24;
156) 60S ribosomal protein L23;
157) 60S ribosomal protein L14;
158) 60S ribosomal protein L11;
159) 60S ribosomal protein L10;
160) 40S ribosomal protein SA;
161) 40S ribosomal protein S8;
162) 40S ribosomal protein S25;
163) 40S ribosomal protein S24;
164) 40S ribosomal protein S23; and 165) 1-phosphatidylinositol 4,5-biphosphate phosphodiesterase delta-1.

下記（ａ）および（ｂ）を含む、請求項９記載の方法：
（ａ）被験体から得られた胆汁含有サンプルから細胞外小胞を回収すること；および
（ｂ）回収された細胞外小胞において、前記タンパク質の量を解析すること。 The method of claim 9 , comprising: (a) and (b)
(a) collecting extracellular vesicles from a bile-containing sample obtained from a subject; and (b) analyzing the amount of the protein in the collected extracellular vesicles.

被験体が胆管がん患者である、請求項９または１０記載の方法。 The method of claim 9 or 10 , wherein the subject is a bile duct cancer patient.

下記１）のタンパク質の量、又は、
下記１）のタンパク質の量と下記２）～１６５）からなる群より選ばれる１種以上のタンパク質の量の解析手段を含む、胆管がんの診断試薬：
１）クローディン－３；
２）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－２０；
３）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－５Ａ；
４）Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－３Ｂ；
５）ロイシン－ｔＲＮＡリガーゼ（細胞質性）；
６）第Ｘ凝固因子；
７）クローディン－７；
８）クローディン－１０；
９）ＷＤリピート及びＳＯＣＳボックス含有タンパク質２；
１０）フォン・ウィルブランド因子Ａドメイン含有タンパク質１；
１１）バーシカンコアタンパク質；
１２）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質ＶＴＡ１ホモログ；
１３）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質４Ｂ；
１４）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｄ；
１５）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質３７Ｂ；
１６）液胞タンパク質ソーティング関連タンパク質２８ホモログ；
１７）ウリジン５’－モノホスフェートシンターゼ；
１８）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｄ；
１９）アンコンベンショナルミオシン－Ｉｃ；
２０）ＵＭＰ－ＣＭＰキナーゼ；
２１）ＵＤＰ－グルコース４－エピメラーゼ；
２２）チロシン－プロテインホスファターゼ非レセプター型１２；
２３）腫瘍感受性遺伝子１０１タンパク質；
２４）尿細管間質性腎炎抗原様；
２５）チューブリン重合促進タンパク質ファミリーメンバー３；
２６）チューブリンβ－６鎖；
２７）チューブリンβ－４Ｂ鎖；
２８）チューブリンβ－２Ｂ鎖；
２９）チューブリンβ鎖；
３０）チューブリンα－１Ｃ鎖；
３１）チューブリンα－１Ａ鎖；
３２）トランスメンブラン９スーパーファミリーメンバー２；
３３）トランスフェリンレセプタータンパク質２；
３４）Ｔｏｌｌ相互作用タンパク質；
３５）組織因子経路インヒビター；
３６）チオレドキシン様タンパク質１；
３７）Ｔ－ボックス脳タンパク質１；
３８）ＳＴＥ２０関連キナーゼアダプタータンパク質β；
３９）スタフィロコッカルヌクレアーゼドメイン含有タンパク質１；
４０）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットβ－１；
４１）ナトリウム／カリウム輸送ＡＴＰアーゼサブユニットα－１；
４２）ナトリウム／グルコースコトランスポーター４；
４３）ナトリウム／グルコースコトランスポーター１；
４４）ＳＨ３ドメイン結合タンパク質４；
４５）セリン／アルギニン－リッチスプライシング因子７；
４６）セプチン－９；
４７）セプチン－８；
４８）ＲＮＡ転写，翻訳及び輸送因子タンパク質；
４９）リボヌクレアーゼ４；
５０）ＲｈｏＧＴＰアーゼ活性化タンパク質１；
５１）レチナルデヒドロゲナーゼ１；
５２）レセプター型チロシン－プロテインホスファターゼＨ；
５３）キノンオキシドレダクターゼ；
５４）タンパク質Ｓ１００－Ａ１０；
５５）タンパク質ＭＡＬ２；
５６）タンパク質ＡＭＢＰ；
５７）プロスタミド／プロスタグランジンＦシンターゼ；
５８）プログラム細胞死６－相互作用タンパク質；
５９）推定リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＨ；
６０）推定カチオン輸送ＡＴＰアーゼ１３Ａ４；
６１）ポリペプチドＮ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ３；
６２）ポリ（ｒＣ）結合タンパク質２；
６３）血小板由来増殖因子Ｄ；
６４）プラスチン－１；
６５）色素上皮由来因子；
６６）リン脂質輸送ＡＴＰアーゼＩＣ；
６７）ホスホリパーゼＤ１；
６８）結腸がん過剰発現１タンパク質；
６９）ニバン様タンパク質１；
７０）Ｎ－アセチルラクトサミニドβ－１，３－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ３；
７１）ミオシン調節軽鎖１２Ｂ；
７２）多剤耐性タンパク質１；
７３）マザーズアゲンストデカペンタプレジックホモログ２；
７４）ミトコンドリア性輸入レセプターサブユニットＴＯＭ７０；
７５）リンゴ酸デヒドロゲナーゼ（細胞質性）；
７６）リソソーム膜タンパク質２；
７７）脂肪腫好性パートナー；
７８）分岐鎖α－ケト酸デヒドロゲナーゼ複合体のリポアミドアセチルトランスフェラーゼ成分（ミトコンドリア性）；
７９）ケラチン，ＩＩ型細胞骨格８；
８０）ＩＳＴ１ホモログ；
８１）インターロイキン－１８；
８２）インター－α－トリプシンインヒビター重鎖Ｈ２；
８３）インテグリン結合プロテインキナーゼ；
８４）無機ピロホスファターゼ；
８５）ヒアルロンナン結合タンパク質２；
８６）高アフィニティーｃＡＭＰ－特異的かつＩＢＭＸ－非感受性３’，５’－サイクリックホスホジエステラーゼ８Ａ；
８７）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＬ；
８８）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＨ；
８９）ヘテロ核リボヌクレオプロテインＤ様；
９０）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｋ）サブユニットα；
９１）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｔ）サブユニットβ－２；
９２）グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（Ｏ）サブユニットγ－１２；
９３）グアニンデアミナーゼ；
９４）増殖因子レセプター結合タンパク質７；
９５）グリピカン－６；
９６）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ ω－１；
９７）グルタミン－フルクトース－６－ホスフェートアミノトランスフェラーゼ［異性化］１；
９８）グルタメート－リッチタンパク質５；
９９）γ－可溶性ＮＳＦ付着タンパク質；
１００）ガレクチン－９Ｂ；
１０１）ガレクチン－２；
１０２）フェルミチンファミリーホモログ１；
１０３）ＦＡＳ－関連因子２；
１０４）エストラジオール１７－β－デヒドロゲナーゼ２；
１０５）上皮細胞接着分子；
１０６）上皮成長因子レセプターキナーゼ基質８様タンパク質１；
１０７）小胞体シャペロンＢｉＰ；
１０８）伸長因子Ｔｕ（ミトコンドリア性）
１０９）ダブルコルチンドメイン含有タンパク質２；
１１０）ジスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質１０；
１１１）ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質２；
１１２）細胞質性ダイニン１重鎖１；
１１３）シスチン－１；
１１４）サイクリン－Ｙ；
１１５）コピン－８；
１１６）補体Ｃ１ｑサブ成分サブユニットＣ；
１１７）コラーゲンα－１（ＸＶＩＩＩ）鎖；
１１８）コアトマーサブユニットγ－１；
１１９）コアトマーサブユニットα；
１２０）クラステリン；
１２１）クラスリン重鎖１；
１２２）荷電多胞体タンパク質５；
１２３）荷電多胞体タンパク質２ａ；
１２４）荷電多胞体タンパク質１ａ；
１２５）カルボキシ末端ドメインＲＮＡポリメラーゼＩＩポリペプチドＡスモールホスファターゼ１；
１２６）胆管側多選択性有機アニオントランスポーター２；
１２７）ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ触媒サブユニットβ；
１２８）カルパイン－７；
１２９）カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ型サブユニットδ；
１３０）Ｃ－１－テトラヒドロ葉酸シンターゼ（細胞質性）；
１３１）ＢＲＯ１ドメイン含有タンパク質ＢＲＯＸ；
１３２）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ４；
１３３）β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ１；
１３４）基底膜特異的ヘパラン硫酸プロテオグリカンコアタンパク質；
１３５）バンド４．１様タンパク質１；
１３６）ＡＴＰ依存性６－ホスホフルクトキナーゼ（血小板型）；
１３７）アスパルチル／アスパラギニルβ－ヒドロキシラーゼ；
１３８）アポリポタンパク質Ｅ；
１３９）アポリポタンパク質Ｃ－ＩＶ；
１４０）アポリポタンパク質Ｂ－１００；
１４１）アノクタミン－１；
１４２）アネキシンＡ４；
１４３）アネキシンＡ１３；
１４４）α－１，３－マンノシル－糖タンパク質２－β－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ；
１４５）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ３；
１４６）アルド－ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ２；
１４７）ＡＤＰ－リボシル化因子様タンパク質３；
１４８）ＡＤＰ－リボシル化因子１；
１４９）ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロカーゼ３；
１５０）アシル－タンパク質チオエステラーゼ１；
１５１）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７ａ；
１５２）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ７；
１５３）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ３；
１５４）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２７ａ；
１５５）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２４；
１５６）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ２３；
１５７）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１４；
１５８）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１１；
１５９）６０Ｓリボソーマルタンパク質Ｌ１０；
１６０）４０Ｓリボソーマルタンパク質ＳＡ；
１６１）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ８；
１６２）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２５；
１６３）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２４；
１６４）４０Ｓリボソーマルタンパク質Ｓ２３；および
１６５）１－ホスファチジルイノシトール４，５－ビホスフェートホスホジエステラーゼδ－１。 The amount of protein in 1) below, or
A diagnostic reagent for bile duct cancer, comprising an analytical means for analyzing the amount of the protein of 1) below and the amount of one or more proteins selected from the group consisting of 2) to 165) below :
1) Claudin-3;
2) the Ras-related protein Rab-20;
3) the Ras-related protein Rab-5A;
4) Ras-related protein Rab-3B;
5) leucine-tRNA ligase (cytoplasmic);
6) Coagulation factor X;
7) Claudin-7;
8) Claudin-10;
9) WD repeat and SOCS box-containing protein 2;
10) von Willebrand factor A domain-containing protein 1;
11) Versican core protein;
12) Vacuolar protein sorting-associated protein VTA1 homolog;
13) Vacuolar protein sorting-associated protein 4B;
14) Vacuolar protein sorting-associated protein 37D;
15) Vacuolar protein sorting-associated protein 37B;
16) Vacuolar protein sorting-associated protein 28 homolog;
17) Uridine 5'-monophosphate synthase;
18) unconventional myosin-Id;
19) unconventional myosin-Ic;
20) UMP-CMP kinase;
21) UDP-glucose 4-epimerase;
22) Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 12;
23) Tumor susceptibility gene 101 protein;
24) tubulointerstitial nephritis antigen-like;
25) Tubulin polymerization promoting protein family member 3;
26) Tubulin β-6 chain;
27) Tubulin β-4B chain;
28) Tubulin β-2B chain;
29) Tubulin β chain;
30) Tubulin α-1C chain;
31) Tubulin α-1A chain;
32) transmembrane 9 superfamily member 2;
33) transferrin receptor protein 2;
34) Toll-interacting protein;
35) tissue factor pathway inhibitor;
36) Thioredoxin-like protein 1;
37) T-box brain protein 1;
38) STE20-related kinase adaptor protein beta;
39) Staphylococcal nuclease domain-containing protein 1;
40) Sodium/potassium transport ATPase subunit beta-1;
41) Sodium/potassium transport ATPase subunit α-1;
42) Sodium/glucose cotransporter 4;
43) Sodium/glucose cotransporter 1;
44) SH3 domain binding protein 4;
45) serine/arginine-rich splicing factor 7;
46) Septin-9;
47) Septin-8;
48) RNA transcription, translation and transport factor proteins;
49) Ribonuclease 4;
50) Rho GTPase-activating protein 1;
51) Retinal dehydrogenase 1;
52) Receptor-type tyrosine-protein phosphatase H;
53) quinone oxidoreductase;
54) Protein S100-A10;
55) Protein MAL2;
56) Protein AMBP;
57) Prostamide/prostaglandin F synthase;
58) Programmed cell death 6-interacting protein;
59) Putative phospholipid transport ATPase IH;
60) Putative cation transporting ATPase 13A4;
61) Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 3;
62) poly(rC) binding protein 2;
63) Platelet-derived growth factor D;
64) Plastin-1;
65) pigment epithelium-derived factor;
66) Phospholipid transport ATPase IC;
67) Phospholipase D1;
68) Colon cancer overexpressed 1 protein;
69) Niban-like protein 1;
70) N-acetyllactosaminide β-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase 3;
71) Myosin regulatory light chain 12B;
72) multidrug resistance protein 1;
73) Mothers Against Decapentaplegic Homolog 2;
74) mitochondrial import receptor subunit TOM70;
75) Malate dehydrogenase (cytoplasmic);
76) Lysosomal membrane protein 2;
77) Lipomatophilic partner;
78) Lipoamide acetyltransferase component of the branched-chain α-ketoacid dehydrogenase complex (mitochondrial);
79) Keratin, type II cytoskeleton 8;
80) IST1 homolog;
81) Interleukin-18;
82) inter-α-trypsin inhibitor heavy chain H2;
83) Integrin-linked protein kinase;
84) inorganic pyrophosphatase;
85) Hyaluronan binding protein 2;
86) High affinity cAMP-specific and IBMX-insensitive 3',5'-cyclic phosphodiesterase 8A;
87) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L;
88) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H;
89) Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D-like;
90) Guanine nucleotide-binding protein G(k) subunit α;
91) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(T) subunit β-2;
92) Guanine nucleotide-binding protein G(I)/G(S)/G(O) subunit γ-12;
93) Guanine deaminase;
94) Growth factor receptor-binding protein 7;
95) Glypican-6;
96) Glutathione S-transferase ω-1;
97) Glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase [isomerization] 1;
98) Glutamate-rich protein 5;
99) γ-soluble NSF adhesion protein;
100) Galectin-9B;
101) Galectin-2;
102) Fermitin family homolog 1;
103) FAS-related factor 2;
104) Estradiol 17-β-dehydrogenase 2;
105) epithelial cell adhesion molecule;
106) epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 1;
107) endoplasmic reticulum chaperone BiP;
108) Elongation factor Tu (mitochondrial)
109) Doublecortin domain-containing protein 2;
110) A disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10;
111) Dihydropyrimidinase-related protein 2;
112) Cytoplasmic dynein 1 heavy chain 1;
113) Cystine-1;
114) cyclin-Y;
115) Copin-8;
116) Complement C1q subcomponent subunit C;
117) Collagen α-1 (XVIII) chain;
118) Coatomer subunit γ-1;
119) Coatomer subunit α;
120) Clusterin;
121) Clathrin heavy chain 1;
122) charged multivesicular body protein 5;
123) charged multivesicular body protein 2a;
124) charged multivesicular body protein 1a;
125) Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1;
126) Biliary multispecific organic anion transporter 2;
127) cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit β;
128) calpain-7;
129) Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit δ;
130) C-1-tetrahydrofolate synthase (cytoplasmic);
131) BRO1 domain-containing protein BROX;
132) β-1,4-galactosyltransferase 4;
133) β-1,4-galactosyltransferase 1;
134) Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein;
135) band 4.1-like protein 1;
136) ATP-dependent 6-phosphofructokinase (platelet type);
137) Aspartyl/asparaginyl β-hydroxylase;
138) Apolipoprotein E;
139) Apolipoprotein C-IV;
140) Apolipoprotein B-100;
141) Anoctamin-1;
142) Annexin A4;
143) Annexin A13;
144) α-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-β-N-acetylglucosaminyltransferase;
145) Aldo-keto reductase family 1 member C3;
146) Aldo-keto reductase family 1 member C2;
147) ADP-ribosylation factor-like protein 3;
148) ADP-ribosylation factor 1;
149) ADP/ATP translocase 3;
150) Acyl-protein thioesterase 1;
151) 60S ribosomal protein L7a;
152) 60S ribosomal protein L7;
153) 60S ribosomal protein L3;
154) 60S ribosomal protein L27a;
155) 60S ribosomal protein L24;
156) 60S ribosomal protein L23;
157) 60S ribosomal protein L14;
158) 60S ribosomal protein L11;
159) 60S ribosomal protein L10;
160) 40S ribosomal protein SA;
161) 40S ribosomal protein S8;
162) 40S ribosomal protein S25;
163) 40S ribosomal protein S24;
164) 40S ribosomal protein S23; and 165) 1-phosphatidylinositol 4,5-biphosphate phosphodiesterase delta-1.

前記解析手段が抗体である、請求項１２記載の診断試薬。 The diagnostic reagent of claim 12 , wherein the analytical means is an antibody.

細胞外小胞の回収手段をさらに含む、請求項１２または１３記載の診断試薬。 The diagnostic reagent of claim 12 or 13 , further comprising a means for collecting extracellular vesicles.