JP7448255B2 - コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物、及びその製造方法、並びに植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性の判定方法 - Google Patents
コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物、及びその製造方法、並びに植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性の判定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7448255B2 JP7448255B2 JP2022504812A JP2022504812A JP7448255B2 JP 7448255 B2 JP7448255 B2 JP 7448255B2 JP 2022504812 A JP2022504812 A JP 2022504812A JP 2022504812 A JP2022504812 A JP 2022504812A JP 7448255 B2 JP7448255 B2 JP 7448255B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dna
- seq
- amino acid
- acid sequence
- set forth
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 title claims description 265
- 241000258916 Leptinotarsa decemlineata Species 0.000 title claims description 127
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 127
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 360
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 122
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 119
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 95
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 claims description 89
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 claims description 89
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 claims description 89
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 claims description 89
- KOZCINYDCJVLDW-RIEAZRPGSA-N spirosolane group Chemical group [C@@H]12C[C@@H]3O[C@@]4(CCC(C)CN4)[C@@H](C)[C@@H]3[C@@]1(C)CC[C@H]1[C@H]2CCC2CCCC[C@]12C KOZCINYDCJVLDW-RIEAZRPGSA-N 0.000 claims description 89
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 86
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 85
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 85
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 78
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 71
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 59
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 36
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 34
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 30
- 230000000640 hydroxylating effect Effects 0.000 claims description 28
- 230000000397 acetylating effect Effects 0.000 claims description 26
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 12
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 claims description 11
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 53
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 218
- 108020002494 acetyltransferase Proteins 0.000 description 101
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 65
- 102000005421 acetyltransferase Human genes 0.000 description 60
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 51
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 44
- 241000207764 Solanum chacoense Species 0.000 description 41
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 36
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 27
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 25
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 24
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 24
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 21
- 229930008677 glyco alkaloid Natural products 0.000 description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 13
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 13
- QMGSCYSTMWRURP-UHFFFAOYSA-N Tomatine Natural products CC1CCC2(NC1)OC3CC4C5CCC6CC(CCC6(C)C5CCC4(C)C3C2C)OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(O)C%10O)C8O)C(O)C7O QMGSCYSTMWRURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 13
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 13
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- REJLGAUYTKNVJM-SGXCCWNXSA-N tomatine Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@H]1[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4C[C@H]5[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@@H]([C@@]1(NC[C@@H](C)CC1)O5)C)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O REJLGAUYTKNVJM-SGXCCWNXSA-N 0.000 description 13
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 12
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 12
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 12
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 12
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 12
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 12
- RXVGBQCEAQZMLW-UHFFFAOYSA-N alpha-solanine Natural products CC1CCC2C(C)C3C(CC4C5CC=C6CC(CCC6(C)C5CCC34C)OC7OC(CO)C(O)C(OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C7OC9OC(CO)C(O)C(O)C9O)N2C1 RXVGBQCEAQZMLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 11
- ZGVSETXHNHBTRK-OTYSSXIJSA-N solanine Chemical compound O([C@H]1[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)O)O[C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4C[C@@H]5N6C[C@@H](C)CC[C@@H]6[C@H]([C@@H]5[C@@]4(C)CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZGVSETXHNHBTRK-OTYSSXIJSA-N 0.000 description 11
- 235000002599 Solanum chacoense Nutrition 0.000 description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 10
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 10
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 9
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 9
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 9
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 9
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 8
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- XMZHRQCSOUZPRM-UHFFFAOYSA-N ac1l484b Chemical compound C1CC2(C)C3CCC4(C)C5C(C)C6C(OC(C)=O)CC(C)CN6C5CC4C3CC=C2CC1OC(C(C1O)OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)OC(CO)C1OC1OC(C)C(O)C(O)C1O XMZHRQCSOUZPRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- TYNQWWGVEGFKRU-AJDPQWBVSA-N alpha-Chaconine Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)O)O[C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4C[C@@H]5N6C[C@@H](C)CC[C@@H]6[C@H]([C@@H]5[C@@]4(C)CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@@H]1O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O TYNQWWGVEGFKRU-AJDPQWBVSA-N 0.000 description 7
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- -1 spirosolane glycosides Chemical class 0.000 description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 244000039259 Microstemma tuberosum Species 0.000 description 6
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 6
- 241000207763 Solanum Species 0.000 description 6
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 5
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 5
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 5
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 5
- 235000002634 Solanum Nutrition 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 5
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 5
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 5
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241001531101 Curvularia lycopersici Species 0.000 description 4
- 241000767846 Cyathodium tuberosum Species 0.000 description 4
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- OJOBTAOGJIWAGB-UHFFFAOYSA-N acetosyringone Chemical compound COC1=CC(C(C)=O)=CC(OC)=C1O OJOBTAOGJIWAGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N cefotaxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)/C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N 0.000 description 4
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 4
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 229940031352 solanine Drugs 0.000 description 4
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 3
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 3
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 3
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N D-Octopin Natural products OC(=O)C(C)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N D-octopine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H](C)[NH2+][C@H](C([O-])=O)CCCNC(N)=[NH2+] IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- CFOOYRCBRCGKFV-UHFFFAOYSA-N Esculeoside A Natural products CC1C2C(CC3C4CCC5CC(CCC5(C)C4CCC23C)OC6OC(CO)C(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9O)C8O)C(O)C6O)OC1%10NCC(COC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)CC%10OC(=O)C CFOOYRCBRCGKFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091060211 Expressed sequence tag Proteins 0.000 description 3
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 244000064622 Physalis edulis Species 0.000 description 3
- 235000002560 Solanum lycopersicum Nutrition 0.000 description 3
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 3
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 3
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- KXSHCOVQRKPAEU-UHFFFAOYSA-N alpha-chaconine Natural products CC1CCC2C(C)C3C(CC4C5CC=C6CC(CCC6(C)C5CCC34C)OC7OC(CO)C(O)C(OC8OC(C)C(O)C(O)C8O)C7OC9OC(C)C(O)C(O)C9O)N2C1 KXSHCOVQRKPAEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- VSQBWNYALURFOT-ZSFCQSFNSA-N esculeoside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@H]1[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4C[C@H]5[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@@H]([C@@]1([C@H](C[C@H](CO[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)CN1)OC(C)=O)O5)C)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VSQBWNYALURFOT-ZSFCQSFNSA-N 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- KOZCINYDCJVLDW-YOGGMVBGSA-N tomatanine Chemical group O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCCCC4CC[C@H]3[C@@H]2C1)C)[C@@H]1C)C11CCC(C)CN1 KOZCINYDCJVLDW-YOGGMVBGSA-N 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 description 2
- 240000004204 Brugmansia arborea Species 0.000 description 2
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 2
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 2
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 2
- 235000018306 Capsicum chinense Nutrition 0.000 description 2
- 244000185501 Capsicum chinense Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000207782 Convolvulaceae Species 0.000 description 2
- 240000007175 Datura inoxia Species 0.000 description 2
- 102000016680 Dioxygenases Human genes 0.000 description 2
- 108010028143 Dioxygenases Proteins 0.000 description 2
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101150005851 NOS gene Proteins 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 240000009134 Physalis philadelphica Species 0.000 description 2
- 235000002489 Physalis philadelphica Nutrition 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 240000000840 Solanum erianthum Species 0.000 description 2
- 235000003161 Solanum erianthum Nutrition 0.000 description 2
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 2
- 240000007417 Solanum muricatum Species 0.000 description 2
- 235000002594 Solanum nigrum Nutrition 0.000 description 2
- 244000061457 Solanum nigrum Species 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 239000001511 capsicum annuum Substances 0.000 description 2
- 239000001390 capsicum minimum Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 2
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N trans-Zeatin Natural products OCC(/C)=C\CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N 0.000 description 2
- UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N trans-zeatin Chemical compound OCC(/C)=C/CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N 0.000 description 2
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 229940023877 zeatin Drugs 0.000 description 2
- DUHAHRVYERUXBJ-UZBLKQGRSA-N (1R,2S,4S,6R,7S,8R,9S,12S,13S)-5',7,9,13-tetramethylspiro[5-oxapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosane-6,2'-piperidine]-3'-ol Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCCCC4CC[C@H]3[C@@H]2C1)C)[C@@H]1C)[C@]11NCC(C)CC1O DUHAHRVYERUXBJ-UZBLKQGRSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical class NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000724328 Alfalfa mosaic virus Species 0.000 description 1
- NLOAQXKIIGTTRE-JSWHPQHOSA-N Alisol b acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](OC(C)=O)C[C@@H](C)C=2CC[C@]3(C)[C@@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)C(=O)CC[C@]5(C)[C@@H]4[C@@H](O)CC3=2)C1(C)C NLOAQXKIIGTTRE-JSWHPQHOSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241001465356 Atropa belladonna Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000886543 Brugmansia Species 0.000 description 1
- 238000010356 CRISPR-Cas9 genome editing Methods 0.000 description 1
- 241001649047 Calibrachoa Species 0.000 description 1
- 235000002567 Capsicum annuum Nutrition 0.000 description 1
- 235000007862 Capsicum baccatum Nutrition 0.000 description 1
- 240000001844 Capsicum baccatum Species 0.000 description 1
- 235000002260 Capsicum cardenasii Nutrition 0.000 description 1
- 240000004395 Capsicum cardenasii Species 0.000 description 1
- 241001544457 Capsicum chacoense Species 0.000 description 1
- 235000002568 Capsicum frutescens Nutrition 0.000 description 1
- 235000015855 Capsicum pubescens Nutrition 0.000 description 1
- 240000000533 Capsicum pubescens Species 0.000 description 1
- 235000007836 Chlorogalum pomeridianum Nutrition 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 235000000298 Cyphomandra crassifolia Nutrition 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 240000008853 Datura stramonium Species 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001096650 Eriophyton tuberosum Species 0.000 description 1
- 108010074122 Ferredoxins Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 101000635799 Homo sapiens Run domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich domain-containing protein Proteins 0.000 description 1
- 238000012218 Kunkel's method Methods 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001106041 Lycium Species 0.000 description 1
- 241001106042 Mandragora Species 0.000 description 1
- 101000763602 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000763586 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1a Proteins 0.000 description 1
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 1
- 241000122904 Mucuna Species 0.000 description 1
- 101000966653 Musa acuminata Glucan endo-1,3-beta-glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 101001107853 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) Ankyrin repeat protein nuc-2 Proteins 0.000 description 1
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 1
- 240000001857 Phyllostachys elegans Species 0.000 description 1
- 241000244026 Physalis alkekengi var. franchetii Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000709992 Potato virus X Species 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 102100030852 Run domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich domain-containing protein Human genes 0.000 description 1
- 101100191561 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PRP3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100084449 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PRP4 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000000255 Solanum americanum Nutrition 0.000 description 1
- 241000193168 Solanum betaceum Species 0.000 description 1
- 235000008423 Solanum carolinense Nutrition 0.000 description 1
- 241000501039 Solanum carolinense Species 0.000 description 1
- 244000033854 Solanum fendleri Species 0.000 description 1
- 235000014289 Solanum fendleri Nutrition 0.000 description 1
- 235000018650 Solanum gilo Nutrition 0.000 description 1
- 244000244100 Solanum integrifolium Species 0.000 description 1
- 235000000099 Solanum integrifolium Nutrition 0.000 description 1
- 235000009865 Solanum jamesii Nutrition 0.000 description 1
- 235000015506 Solanum lyratum Nutrition 0.000 description 1
- 241000585552 Solanum lyratum Species 0.000 description 1
- 235000013146 Solanum mammosum Nutrition 0.000 description 1
- 244000171202 Solanum mammosum Species 0.000 description 1
- 235000018709 Solanum muricatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000000340 Solanum pseudocapsicum Nutrition 0.000 description 1
- 244000177154 Solanum pseudocapsicum Species 0.000 description 1
- 240000002307 Solanum ptychanthum Species 0.000 description 1
- 235000000341 Solanum ptychanthum Nutrition 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000723792 Tobacco etch virus Species 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 230000011681 asexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013465 asexual reproduction Methods 0.000 description 1
- GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N bilanafos Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCP(C)(O)=O GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000001728 capsicum frutescens Substances 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012212 insulator Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 230000009571 larval growth Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N lucigenin Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.C12=CC=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C2)C2=C1C1=C(C=CC=C2)C2=[N+](C)C2=CC=CC=C12 KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N nifedipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC)C1C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000008779 pepino Nutrition 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000014639 sexual reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 150000003416 spirosolanes Chemical class 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 108091008023 transcriptional regulators Proteins 0.000 description 1
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000235231 white angels trumpet Species 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/12—Processes for modifying agronomic input traits, e.g. crop yield
- A01H1/122—Processes for modifying agronomic input traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- A01H1/1245—Processes for modifying agronomic input traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, e.g. pathogen, pest or disease resistance
- A01H1/127—Processes for modifying agronomic input traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, e.g. pathogen, pest or disease resistance for insect resistance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H3/00—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/82—Solanaceae, e.g. pepper, tobacco, potato, tomato or eggplant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/82—Solanaceae, e.g. pepper, tobacco, potato, tomato or eggplant
- A01H6/827—Solanum tuberosum [potato]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
- A01P7/00—Arthropodicides
- A01P7/04—Insecticides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Physiology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
今回、我々が23水酸化スピロソラン化合物をアセチル化する酵素をコードする遺伝子23ACTを同定した。この遺伝子については(特許文献1及び非特許文献7)を含めて、先行技術文献に報告されたことがない新規の遺伝子であり酵素反応である。
<1> 下記(a)~(d)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、スピロソラン骨格23位への水酸基導入に用いられるための組成物
(a)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列と80%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(d)配列番号:1、3又は5に記載のヌクレオチド配列に相補的な配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。
<2> 前記(a)~(d)からなる群から選択される少なくとも一のDNA及び下記(e)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、スピロソラン骨格23位へのアセトキシ基導入に用いられるための組成物
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(f)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と80%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(g)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(h)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列に相補的な配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。
<3> 前記(a)~(d)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、植物におけるレプチニン蓄積量の向上に用いられるための組成物。
<4> 前記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、植物におけるレプチン蓄積量の向上に用いられるための組成物。
<5> 前記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、植物へのコロラドハムシに対する抵抗性向上に用いられるための組成物。
<6> 前記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAが導入された、コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物体を再生しうる形質転換植物細胞。
<7> <6>に記載の形質転換植物細胞から再生された、コロラドハムシに対する抵抗性が高められた形質転換植物。
<8> コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物の製造方法であって、
前記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを、植物細胞に導入する工程、及び前記工程においてDNAが導入された形質転換植物細胞から植物を再生する工程を含む方法。
<9> 植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性を判定する方法であって、
被検植物における、前記(a)~(d)からなる群から選択される少なくとも一のDNAと前記(e)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAとの存在若しくは発現を検出する工程、及び前記工程にて、前記DNAの存在又は発現が検出された場合に、前記被検植物は、コロラドハムシに対する抵抗性を有すると判定する工程を、含む方法。
<10> コロラドハムシに対する抵抗性を有する植物を製造する方法であって、
コロラドハムシに対する抵抗性を有する植物と任意の植物とを交配させる工程と、前記工程における交配により得られた植物において、コロラドハムシに対する抵抗性を、<9>に記載の方法により判定する工程と、コロラドハムシに対する抵抗性を有すると判定された植物を選抜する工程とを、含む方法。
<11> コロラドハムシに対する抵抗性を有する植物を製造する方法であって、
前記(a)~(d)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを有する植物と、前記(e)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを有する植物とを交配させる工程と、
前記工程における交配により得られた植物において、コロラドハムシに対する抵抗性を、<9>に記載の方法により判定する工程と、
コロラドハムシに対する抵抗性を有すると判定された植物を選抜する工程と
を、含む方法。
後述の実施例において示すとおり、本発明者らによって、トマト(S.lycopersicum)及びCPB抵抗性ジャガイモ S.chacoenseにおける、23位水酸化酵素(23DOX)遺伝子(Sl23DOX遺伝子及びSc23DOX遺伝子)が各々単離され、それらの配列が同定された。そして、レプチニンの生合成が認められないジャガイモ S.tuberosumに、前記23DOX遺伝子を導入した結果、スピロソラン骨格を有するステロイドグリコアルカロイドの23位に水酸基が導入され、さらにスピロソラン骨格がソラニダン骨格に変換されることによって、当該ジャガイモにおいて、レプチニンの有意な生合成が認められるようになった。
前述の組成物の有効成分として含有される「本発明の23DOXをコードするDNA」の例として、S.chacoense由来の23DOXをコードするcDNAの配列を配列番号:1に示す。当該配列がコードするタンパク質(Sc23DOX)のアミノ酸配列を配列番号:2に示す。「本発明の23DOXをコードするDNA」の別の例として、S.lycopersicum由来の23DOXをコードするcDNAの配列を配列番号:5に示す。当該配列がコードするタンパク質(Sl23DOX)のアミノ酸配列を配列番号:6に示す。なお、Sl23DOX遺伝子は、トマト第2染色体のSolyc02g062460に座乗する。「本発明の23DOXをコードするDNA」の別の例として、S.tuberosum由来の23DOXをコードするcDNAの配列を配列番号:3に示す。当該配列がコードするタンパク質(St23DOX)のアミノ酸配列を配列番号:4に示す。
本発明のCPBに対する抵抗性が高められた植物体を再生しうる植物細胞として、前述の本発明の23DOXをコードするDNA及び本発明の23ACTをコードするDNAのうちの少なくとも1のDNAが導入されることにより形質転換された植物細胞などが挙げられる。
後述の実施例において示すとおり、S.tuberosumは23DOX遺伝子及び23ACT遺伝子を有している。しかしながら、それらの発現量が低いため、レプチンを十分に蓄積することができない。すなわち、これら内在性の遺伝子の発現を増強させることにより、レプチン蓄積量も向上し、CPBに対する抵抗性も増強させることが可能となる。
下記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一の内在性DNAの発現、又はそれに対応するRNAの発現が非形質転換植物細胞と比較して増加したCPBに対する抵抗性が高められた植物体を再生しうる形質転換植物細胞をも提供する。
(a)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列と80%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(d)配列番号:1、3又は5に記載のヌクレオチド配列に相補的な配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(f)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と80%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(g)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(h)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列に相補的な配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。
本発明は、前記植物細胞から再生された植物体を提供する。植物細胞からの植物体の再生は、その細胞の種類に応じて当業者に公知の方法で行うことが可能である。例えば、「植物細胞培養マニュアル」山田康之 編著、講談社サイエンティフィク、1984、「形質転換プロトコール[植物編]」、田部井豊 編、株式会社化学同人、2012年9月20日出版等に記載の方法に従って、形質転換植物細胞から植物体を再生することができる。
前記CPBに対する抵抗性が高められたとは、野生型の植物と比較して、CPBに対する抵抗性が増加したことを意味する。
本発明の、植物におけるCPBに対する抵抗性を判定する方法は、被検植物における、本発明の23DOXをコードするDNAと本発明の23ACTをコードするDNAとの存在若しくは発現を検出する工程、及び前記工程にて、前記DNAの存在又は発現が検出された場合に、前記被検植物は、CPBに対する抵抗性を有すると判定することを特徴とする。
本発明は、前記判定方法を利用した、CPBに対する抵抗性を有する植物を製造する方法を提供する。
を、含む方法が、挙げられ、
また、本発明の23DOXをコードするDNAを有する植物と、本発明の23ACTをコードするDNAを有する植物とを交配させる工程と、
前記工程における交配により得られた植物において、CPBに対する抵抗性を、前述の方法により判定する工程と、
CPBに対する抵抗性を有すると判定された植物を選抜する工程と
を、含む方法が、挙げられる。
上述のとおり、本発明の23DOXをコードするDNA及び23ACTをコードするDNAを検出することによって、植物におけるCPBに対する抵抗性の有無を判定することができる。したがって、本発明は、上述の判定方法により、植物におけるCPBに対する抵抗性を判定するための薬剤であって、下記(a)~(d)から選択される少なくとも1の化合物を含む薬剤
(a)本発明の23DOXをコードする遺伝子、その転写産物又はその相補的ヌクレオチドにハイブリダイズする、少なくとも15ヌクレオチドの鎖長を有するオリゴヌクレオド
(b)本発明の23ACTをコードする遺伝子、その転写産物又はその相補的ヌクレオチドにハイブリダイズする、少なくとも15ヌクレオチドの鎖長を有するオリゴヌクレオド
(c)本発明の23DOXに結合する抗体
(d)本発明の23ACTに結合する抗体。
<12> 下記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAが導入された、レプチンの蓄積量が高められた植物体を再生しうる植物細胞
(a)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列と80%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(d)配列番号:1、3又は5に記載のヌクレオチド配列に相補的な配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(f)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と80%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(g)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加、及び/又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(h)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列に相補的な配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。
<13> 前記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一の内在性DNAの発現が増強された、レプチンの蓄積量が高められた植物体を再生しうる植物細胞。
<14> <12>又は<13>に記載の植物細胞から再生された、レプチンの蓄積量が高められた植物。
<15> レプチンの蓄積量が高められた植物の製造方法であって、
前記(a)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを、植物細胞に導入する工程、及び
前記工程においてDNAが導入された形質転換植物細胞から植物を再生する工程
を含む方法。
<16> 植物におけるレプチンの生成能を判定する方法であって、
被検植物における、
前記(a)~(d)からなる群から選択される少なくとも一のDNAと前記(e)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAとの存在若しくは発現を検出する工程、及び
前記工程にて、前記DNAの存在又は発現が検出された場合に、前記被検植物は、レプチンの生成能を有すると判定する工程
を、含む方法。
<17> レプチンの生成能を有する植物を製造する方法であって、
レプチンの生成能を有する植物と任意の植物とを交配させる工程と、
前記工程における交配により得られた個体において、レプチンの生成能を、<16>に記載の方法により判定する工程と、
レプチンの生成能を有すると判定された植物を選抜する工程と
を、含む方法。
<18> レプチンの生成能を有する植物を製造する方法であって、
前記(a)~(d)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを有する植物と、前記(e)~(h)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを有する植物とを交配させる工程と、
前記工程における交配により得られた植物において、レプチンの生成能を、<16>に記載の方法により判定する工程と、
レプチンの生成能を有すると判定された植物を選抜する工程と
を、含む方法。
トマトにおいて、前記スピロソラン配糖体の代謝(トマチンからエスクレオサイドAの生成)は、果実の成熟過程において生じることが明らかになっている。そこで、トマトの果実において発現する水酸化酵素(ジオキシゲナーゼ)をコードする遺伝子の同定を試みた。
上記水酸化酵素同様に、トマトの果実において発現するアセチル基転移酵素をコードする遺伝子の同定を試みた。具体的には先ず、トマトの発現データベース(Sol Genomics Network:https://solgenomics.net/)で果実で発現しているアセチル基転移酵素の構造を持つタンパク質をコードする配列(Solyc08g075210)を見出した。トマト果実のcDNAに対し、この配列を基に合成したプライマー GGATCCCATATGACAGCATCAAGTTTTGTATCTATG(配列番号:21)及びGTCGACCTAGAGATTCGTAACTGGAGAAGC(配列番号:22)を用いて、アニール温度55℃にてPCR(40サイクル、タカラバイオ社製 PrimeStar HSを使用)を行い、遺伝子を増幅した。これをpCR4Blunt-TOPOベクター(サーモフィッシャー社製)へクローニングして、遺伝子断片を取得し、全長配列を決定した(以下、この遺伝子がコードするタンパク質を「Sl23ACT」とも称する。また、このアミノ酸配列を配列番号:12に示す)。
実施例1にて同定した遺伝子がコードするタンパク質が、想定したように、α-トマチン又はα-ソラニンを基質として、これら化合物の23位に水酸基を導入できるかどうかを、以下に示す方法にて検証した。
実施例2にて同定した遺伝子がコードするタンパク質が、想定したように、23ヒドロキシ-トマチン、又はレプチニンI又はレプチニンIIを基質として、これら化合物23位の水酸基をアセチル化できるかどうかを、以下に示す方法にて検証した。
次に、S.chacoense由来の23DOX遺伝子を導入した形質転換ジャガイモを作製し、この形質転換体において、レプチニンI及びレプチニンIIが生成されるかどうかを、以下に示す方法にて検証した。
次に、S.chacoense由来の23DOX遺伝子及び23ACT遺伝子を導入した形質転換ジャガイモを作製し、この形質転換体において、レプチンI及びレプチンIIが生成されるかどうかを、以下に示す方法にて検証した。
CPB抵抗性を示さないS.tuberosumはSc23DOX遺伝子を有していないことを確認すべく、以下に示す解析を行なった。
実施例7同様に、CPB抵抗性を示さないS.tuberosumはSc23ACT遺伝子を有していないことを確認すべく、以下に示す解析を行なった。
Sc23DOX遺伝子及びSc23ACT遺伝子と、レプチン蓄積との相関を確認すべく、以下に示す解析を行なった。
ジャガイモ(S.tuberosum)のゲノムデータベース(Spud DB:http://solanaceae.plantbiology.msu.edu/index.shtml)にある配列を対象とした、tblast解析では、Sc23DOXに最も相同性の高い配列(PGSC0003DMT400081914)でも同一性は79%と低く、S.tuberosumには23DOX遺伝子は存在していないものと考えていた。
実施例10にて同定したSt23DOX遺伝子に関し、実施例3に記載の方法と同様にして解析を行った。その結果、図2及び3に示すとおり、α-トマチンを基質にした場合に、S.tuberosum由来のもの(St23DOX)についても、23位に水酸基が導入された産物が得られることが明らかになった。すなわち、St23DOXは、Sc23DOX及びSl23DOX同様に、レプチニン生成に関与し得ることが明らかになった。一方、S.tuberosum(品種サッシー)においては、レプチニン生成を介したCPB抵抗性は認められない。したがって、以上のことから、少なくとも品種サッシーにおいて、St23DOXはレプチニンの十分な生成に資する程発現していないことが示唆される。
ジャガイモ(S.tuberosum)のゲノムデータベース(Spud DB: http://solanaceae.plantbiology.msu.edu/index.shtml)にある配列を対象とした、tblast解析では、Sc23ACTに最も相同性の高い配列(PGSC0003DMT400023800)でも、同一性は75%と低く、またN末に余分な30アミノ酸が付加していることが確認された。そのため、Sc23ACTと全長が似た長さのものでは同一相同性で50%を越えるものは見つからず、S.tuberosumには23ACT遺伝子は存在していないものと考えていた。
実施例12にて同定したSt23ACT遺伝子に関し、実施例4に記載の方法と同様にして解析を行った。その結果、図4及び5に示すとおり、23ヒドロキシトマチンを基質にした場合に、St23ACTの存在下では、23位にアセトキシ基が導入された産物を得られることが明らかになった。すなわち、St23ACTは、Sc23ACT及びSl23ACT同様に、レプチン生成に関与し得ることが明らかになった。一方、S.tuberosum(品種サッシー)においては、レプチン蓄積によるCPB抵抗性は認められない。したがって、以上のことから、少なくとも品種サッシーにおいては、上述のSt23DOX同様に、St23ACTはレプチンの十分な生成に資する程発現していないことが示唆される。
実施例8ではコナフブキはSc23ACTの配列を有することを明らかにしたが、この配列が機能し、コナフブキが23ACT活性を発現していることを確認するため、コナフブキにてSc23DOX遺伝子を導入したジャガイモの毛状根におけるステロイドグリコアルカロイドの解析を行った。
具体的には、実施例6同様に、Sc23DOX遺伝子をpBin+201につないだベクターpBin+201_Sc23DOXを作成し、これをアグロバクテリウム・リゾゲネスC15834株に導入した。ベクターを含むアグロバクテリウムを、50ppmのカナマイシンを含むYEB液体培地[5g/Lビ-フエキス、1g/L酵母エキス、5g/Lペプトン、5g/L蔗糖、2mM硫酸マグネシウム(pH7.2)]にて28℃、12時間振とう培養した。培養液をYEB寒天培地(2% アガロース)にスプレッドし、暗所28℃で72時間培養した。試験管内で培養したジャガイモ品種「コナフブキ」を1-1.5cmに切断し、茎の根側の先端をリゾゲネスのコロニーに付着させ、プラントボックス内でB5培地(0.3% ゲルライト、2% スクロースを含む)に根側の先端が上向きになるように突き立てた。これを暗所20℃で20日間培養し、毛状根の形成が確認された茎の上部を切り取りMS培地(0.3% ゲルライト、2% スクロース、250ppm セフォタキシムを含む)に移し、暗所25℃で7日間培養し、除菌した。伸びた毛状根の先端1cmを切り取りB5培地(0.3% ゲルライト、2% スクロース、250ppm セフォタキシムを含む)に移し、暗所25℃で7日間培養した。得られた毛状根を切片に分け、B5液体培地(2% スクロースを含む)に移し、20℃暗所(100rpm)でさらに14日間振とう培養した。切片から増殖したもの100mgを液体窒素で凍結させ、ミキサーミルで破砕した(1/30sec,2min)。破砕物に300μLのメタノールを加え、10分間ソニーケーションした。遠心分離(15000rpm,10min)を行い、上清を回収した。この抽出操作を三度繰り返し、回収した上清を減圧乾固し、残渣を200μLメタノールに再溶解した。再溶解液20μLを180μLのメタノールに溶かし、LC-MS(ウォーターズ社製、製品名:UPLC-ESI-MS ACQUITY)を用いグリコアルカロイドを分析した。なお、カラムはACQUITY HSS T3 1.8μm φ2.1×100mm(ウォーターズ社製)を用いた。LC分析において、移動相A:0.1% ギ酸水、B:アセトニトリルでグラジエント溶出を行った。グラジエント溶出は、0-30分,90% A/10% Bから45.0% A/55.0% B、30-31分,45.0% A/55.0% Bから0% A/100% B、31-35分,100% Bで保持することによって行なった。
その結果、図14及び15に示すとおり、レプチンの生成が認められなかったコナフブキにおいて、Sc23DOX遺伝子だけを強制的に発現させることによって、レプチンI及びレプチンIIの生産が可能となることが確認された。
以上のことから、Sc23ACT遺伝子を持っている系統や品種では、Sc23DOX遺伝子だけを導入することでレプチンを生成できるようになることが示唆された。
NCBIのデータベースに登録されているSRX118622: transcriptome analysis of breaker fruit of Solanum lycopersicon cv Heinzを用いてSl23ACT遺伝子の発現解析をTrinity (https://github.com/trinityrnaseq/trinityrnaseq/wiki) 、Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/index.shtml) 、DEGseq (Original site) 、eXpress (Original site)を用いて遺伝子発現量(fpkm:fragments per kilobase of exon per million reads mapped)を解析したところ、70.93と算出することができた。トマトのbreaker fruit 期ではエスクレオサイドAを合成していることから23ACTは十分量の遺伝子が発現されていることが分かる。Solanum chacoense M6(Leisnerら、Plant Journal (2018) 94, 562-570)はレプチンを算出しない系統であるが、23ACT遺伝子は、公開されている遺伝子情報の相同性検索の結果ではg38106であることが分かり、葉での遺伝子発現量が63.11と記載されていることから、Solanum chacoense M6にあるSc23ACTのプロモーター配列は機能し得ることが分かった。g38106が座上するゲノム配列は表S5からscaffold_1344であることが分かり、プロモーターとして有効な配列(配列番号34)を取得した。この配列とg38106とSt23ACTの配列からプライマーU1240(TCAGCAATAGTGCATTACCAGAG)(配列番号35)とU1241(CGCCTAAGTGAAGAAGGGGTA)(配列番号36)を用いて、S.chacoense PI 458310から1つの配列(配列番号37)、コナフブキから2つの配列(A:配列番号38とB:配列番号39)、サッシーから1つの配列(配列番号40)を取得した。コナフブキの配列Bとサッシーの配列は全く同一であり、活性がないことが分かる。一方、Solanum chacoense M6とコナフブキの配列Aは活性を持つ。これらの配列を比較したものが図16である。これらの配列を比較することで、活性のない配列に活性のある配列を遺伝子組換えやゲノム編集の手法を持って置換することにより通常不活型であるSt23ACT活性型に変えることができる。
NCBIのデータベースに登録されているSRX118622: transcriptome analysis of breaker fruit of Solanum lycopersicon cv Heinzを用いてSl23DOX遺伝子の発現解析をTrinity (https://github.com/trinityrnaseq/trinityrnaseq/wiki) 、Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/index.shtml) 、DEGseq (Original site) 、eXpress (Original site)を用いて遺伝子発現量(fpkm:fragments per kilobase of exon per million reads mapped)を解析したところ、1982.30と算出することができた。トマトのbreaker fruit 期ではエスクレオサイドAを合成していることから23DOXは十分量の遺伝子が発現されていることが分かる。Solanum chacoense M6(Leisnerら、Plant Journal (2018) 94, 562-570)はレプチンを算出しない系統であるが、23DOX遺伝子は、公開されている遺伝子情報の相同性検索の結果ではg39095であることが分かり、葉での遺伝子発現量が2.25と記載されていることから、Solanum chacoense M6にあるSc23DOXのプロモーター配列は機能していないことがわかる。g39095が座上するゲノム配列は表S5からscaffold_1570であることがわかり、プロモーターとして機能しない配列(配列番号41)を取得した。この配列とg39095とSt23DOXの配列からプライマーU1249(GGGTCCGACTTTTTGTTTTT)(配列番号42)とU1243(CAATGGCAATTGTGGAATCA)(配列番号43)を用いて、S.chacoense PI 458310から機能する2つの配列(A:配列番号44とB:配列番号45)を取得した。しかし、サッシーやコナフブキからは取得できなかったことからプライマーU1276 (TAAAATTATTCATTAATTTCATAAAATTGACA)(配列番号46)とU1243を用いてサッシーから2つの配列(A:配列番号47とB:配列番号48)と、コナフブキからサッシーの配列Aと全く同じ活性のない配列番号49を取得した。これらの配列を比較したものが図17である。これらの配列を比較することで、活性のない配列に活性のある配列を遺伝子組換えやゲノム編集の手法を持って置換することにより通常不活型であるSt23DOX活性型に変えることができる。
<223> 人工的に合成されたプライマーの配列
Claims (16)
- 下記(a)~(c)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、Solanum tuberosumにおけるスピロソラン骨格23位に水酸基を導入するSolanum tuberosum用組成物
(a)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1又は3に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 下記(a)~(c)からなる群から選択される少なくとも一のDNA及び下記(d)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、スピロソラン骨格23位へのアセトキシ基導入用組成物
(a)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1、3又は5に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - Solanum tuberosumにおけるスピロソラン骨格23位へのアセトキシ基を導入するSolanum tuberosum用組成物である、請求項2に記載の組成物。
- 下記(a)~(c)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、Solanum tuberosumにおけるレプチニン蓄積量を向上させるSolanum tuberosum用組成物
(a)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1又は3に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 下記(a)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、Solanum tuberosumにおけるレプチン蓄積量を向上させるSolanum tuberosum用組成物
(a)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1又は3に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 下記(a)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを含む、Solanum tuberosumへのコロラドハムシに対する抵抗性を向上させるSolanum tuberosum用組成物
(a)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1又は3に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 下記(a)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAが導入された、コロラドハムシに対する抵抗性が高められたSolanum tuberosumを再生可能な形質転換細胞
(a)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1又は3に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 請求項7に記載の形質転換細胞から再生された、コロラドハムシに対する抵抗性が高められた形質転換Solanum tuberosum。
- Solanum tuberosumの製造方法であって、
下記(a)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを、細胞に導入する工程、及び
前記工程においてDNAが導入された形質転換細胞からSolanum tuberosumを再生する工程
を含む方法。
(a)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1又は3に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性を判定する方法であって、
被検植物における、
下記(a)~(c)からなる群から選択される少なくとも一のDNAと下記(d)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAとの存在若しくは発現を検出する工程、及び
前記工程にて、前記DNAの存在又は発現が検出された場合に、前記被検植物は、コロラドハムシに対する抵抗性を有すると判定する工程
を、含む方法。
(a)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1、3又は5に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 前記植物が、Solanum tuberosumである、請求項10に記載の方法。
- コロラドハムシに対する抵抗性を有する植物を製造する方法であって、
コロラドハムシに対する抵抗性を有する植物と任意の植物とを交配させる工程と、
前記工程における交配により得られた植物において、コロラドハムシに対する抵抗性を、請求項10から11のいずれかに記載の方法により判定する工程と、
コロラドハムシに対する抵抗性を有すると判定された植物を選抜する工程と
を、含む方法。 - コロラドハムシに対する抵抗性を有する植物を製造する方法であって、
下記(a)~(c)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを有する植物と、下記(d)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAを有する植物とを交配させる工程と、
前記工程における交配により得られた植物において、コロラドハムシに対する抵抗性を、請求項9に記載の方法により判定する工程と、
コロラドハムシに対する抵抗性を有すると判定された植物を選抜する工程と
を、含む方法。
(a)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2、4又は6に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1、3又は5に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 前記植物が、Solanum tuberosumである、請求項13に記載の方法。
- 下記(a)~(f)からなる群から選択される少なくとも一の内在性DNAの発現、又は下記(a)~(f)からなる群から選択される少なくとも一のDNAに対応するRNAの発現が、非形質転換植物細胞と比較して1.1倍以上である、コロラドハムシに対する抵抗性が高められたSolanum tuberosumを再生可能な形質転換細胞
(a)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:2又は4に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(c)配列番号:1又は3に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格の23位を水酸化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA
(d)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(e)配列番号:8、10又は12に記載のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質を、コードするDNA
(f)配列番号:7、9又は11に記載のヌクレオチド配列と90%以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつスピロソラン骨格23位の水酸基をアセチル化する活性を有するタンパク質をコードする、DNA。 - 請求項15に記載の形質転換細胞から再生された、コロラドハムシに対する抵抗性が高められた形質転換Solanum tuberosum。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/JP2020/008910 WO2021176557A1 (ja) | 2020-03-03 | 2020-03-03 | コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物、及びその製造方法、並びに植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性の判定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2021176557A1 JPWO2021176557A1 (ja) | 2021-09-10 |
JP7448255B2 true JP7448255B2 (ja) | 2024-03-12 |
Family
ID=77613187
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022504812A Active JP7448255B2 (ja) | 2020-03-03 | 2020-03-03 | コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物、及びその製造方法、並びに植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性の判定方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240209389A1 (ja) |
JP (1) | JP7448255B2 (ja) |
WO (1) | WO2021176557A1 (ja) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018146678A1 (en) | 2017-02-09 | 2018-08-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Glycoalkaloid metabolism enyzymes (games) and uses thereof |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7372657B2 (ja) * | 2018-09-04 | 2023-11-01 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物、及びその製造方法、並びに植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性の判定方法 |
-
2020
- 2020-03-03 US US17/905,518 patent/US20240209389A1/en active Pending
- 2020-03-03 JP JP2022504812A patent/JP7448255B2/ja active Active
- 2020-03-03 WO PCT/JP2020/008910 patent/WO2021176557A1/ja active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018146678A1 (en) | 2017-02-09 | 2018-08-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Glycoalkaloid metabolism enyzymes (games) and uses thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2021176557A1 (ja) | 2021-09-10 |
US20240209389A1 (en) | 2024-06-27 |
JPWO2021176557A1 (ja) | 2021-09-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10138491B2 (en) | Protein having glycoalkaloid biosynthetic enzyme activity and gene encoding the same | |
CN109402141B (zh) | 小麦雄性不育基因wms及其花药特异性启动子的应用 | |
US20200354735A1 (en) | Plants with increased seed size | |
WO2019038417A1 (en) | METHODS FOR INCREASING GRAIN YIELD | |
Dunemann et al. | Using CRISPR/Cas9 to produce haploid inducers of carrot through targeted mutations of centromeric histone H3 (CENH3) | |
WO2019163601A1 (ja) | 形質転換植物、およびその利用 | |
US9340795B2 (en) | Genetically modified plant capable of biosynthesizing capsinoid | |
JP6191996B2 (ja) | 単為結果制御遺伝子およびその利用 | |
JP6038040B2 (ja) | グリコアルカロイド生合成酵素活性を有するタンパク質とそれをコードする遺伝子 | |
JP7372657B2 (ja) | コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物、及びその製造方法、並びに植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性の判定方法 | |
EA029226B1 (ru) | Дефект гена ckx3 и по крайней мере одного другого гена ckx в растении или растительной клетке, которые приводят к улучшенным признакам | |
JP7448255B2 (ja) | コロラドハムシに対する抵抗性が高められた植物、及びその製造方法、並びに植物におけるコロラドハムシに対する抵抗性の判定方法 | |
CA2916187C (en) | Gene encoding enzyme that oxidizes position 16 of steroid skeleton and plant in which expression level of the gene is lowered | |
JP5902801B2 (ja) | ステロイド骨格の24位を還元する酵素をコードする遺伝子および該遺伝子の発現が低下した植物体 | |
US11795469B2 (en) | Scaevola plants with radially symmetrical flowers | |
US20050188435A1 (en) | Method of increasing the GGT activity in plants, plants with increased GGT activity, and a method of producing such plants | |
WO2023008076A1 (ja) | グリコアルカロイドを低減した遺伝子改変ジャガイモ、及びその作製方法 | |
JP2005229823A (ja) | 休眠期間の短縮した植物、およびその作出法 | |
JP5951004B2 (ja) | グリコアルカロイド生合成酵素遺伝子の発現が抑制されているか、または該酵素の活性が変化した植物 | |
JP2024078049A (ja) | 自家和合性を有するアブラナ科植物の作出方法 | |
Stanic | Increasing Reproductive Output of Brassica napus (canola) Through Manipulation of Shoot Architecture | |
JP2023526035A (ja) | 標的突然変異生成によって変異体植物を得るための方法 | |
JP2011130697A (ja) | ジョイントレス形質を有するトマトの作出方法 | |
JP2007275055A (ja) | 花芽形成制御遺伝子 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220902 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230905 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231031 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240206 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240221 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7448255 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |