JP7390398B2

JP7390398B2 - グルテン不耐性の治療管理のための方法および組成物

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Publication number: JP7390398B2
Application number: JP2021560622A
Authority: JP
Inventors: ムハンメドマジード; カリアナムナガブシャナム; キランクマールビーディ; シヴァクマールアルムガム; シャヒーンマジード
Original assignee: サミ－サビンサグループリミテッド
Priority date: 2019-04-02
Filing date: 2020-03-31
Publication date: 2023-12-01
Anticipated expiration: 2040-03-31
Also published as: CA3135837A1; EP3946394A1; WO2020205871A1; JP2022523600A; US20200316140A1; US11419906B2; EA202192668A1; KR102684843B1; AU2020254661A1; EP3946394A4; KR20220018961A

Description

MTCC

MTCC 5856

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月２日に出願された、米国仮出願第６２／８２７，９５５号からの優先権を主張するＰＣＴ出願である。

本発明は全般的にプロバイオティクス組成物に関する。より具体的には、本発明は、グルテンの利用を促進するためのおよびグルテン不耐性の治療管理におけるバチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｏａｇｕｌａｎｓ）を単独でおよび／または多酵素複合体と組み合わせて含む組成物に関する。

グルテンは、コムギ、ライムギおよびオオムギなどの穀物に由来するタンパク質である。コムギにおけるグルテンの役割は、生地の吸水能力、粘性、弾性を改善することである。グルテンタンパク質には２種類、すなわち水に不溶であるグリアジンおよび可溶であるグルテニンがある。コムギのグリアジン部分が、セリアック病の人々にとって特に有毒であると従来より考えられてきた。セリアック病は、コムギ（グリアジン）、ライムギ（セカリン）およびオオムギ（ホルデイン）中に存在するプロラミンによって誘導される自己免疫介在性腸障害であり、西洋諸国において最も一般的な食物関連障害に属する。該疾患は遺伝的要素（ヒトの白血球抗原ＤＱ２またはＤＱ８）が強く、小腸絨毛萎縮、陰窩の過形成および粘膜における激しい免疫応答によって特徴づけられる。グルテン不耐性の小児には、乳幼児期における発育障害、青年期における晩発思春期、気分の過敏性、低身長および歯エナメル質の欠陥を含む多くの影響がある。グルテン除去食が、グルテン不耐性およびセリアック病のような関連状態を管理するための有効な治療戦略であると報告されてきた(Niewinski MM, Advances in Celiac Disease and Gluten-Free Diet, J Am Diet Assoc. 2008;108:661-672)。従って、グルテンの有毒作用を低下させるためには、食物中のグルテン分を低減させ、グルテンの利用を増進させることが必要不可欠である。

セリアック病の人々のための有効な食事調節の手段は、食事からグルテンを除去することである。複数の研究系統が、セリアック病のための新規の治療形態を開発することに集中している。これらには、疾患を駆動するグルテンおよびグリアジンペプチドの解毒ならびにグルテンが誘導する炎症応答の遮断が含まれる。消化酵素を補給することは、グルテンの分解のための有効な治療である得る。別の手法では、食物加工の間にプロバイオティクスを使用して発酵させることによっても、プロバイオティクス細菌によるグルテンの利用を促進するためにプロバイオティクスを投与することによっても、グルテンの解毒を行うことができる。
グルテン不耐性の管理のためのプロバイオティクスの使用は、文献において既に報告されている。
1. Samsel A, Seneff S, Glyphosate, pathways to modern diseases II: Celiac sprue and gluten intolerance. Interdiscip Toxicol. 2013 6(4):159-84. doi: 10.2478/intox-2013-0026.
2. De Angelis M, Rizzello CG, Fasano A, Clemente MG, De Simone C, Silano M, De Vincenzi M, Losito I, Gobbetti M. VSL#3 probiotic preparation has the capacity to hydrolyze gliadin polypeptides responsible for Celiac Sprue. Biochim Biophys Acta. 1762(1):80-3. Epub 2005 Oct 21
3. Wei G, Tian N, Siezen R, Schuppan D, Helmerhorst EJ (2016) Identification of food-grade subtilisin’s as gluten-degrading enzymes to treat celiac disease. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 311(3): G571-580.

グルテン不耐性の管理およびグルテンの利用増進のための消化酵素の使用も既知である（IIdo et. al., Combination of Gluten-Digesting Enzymes Improved Symptoms of Non-Celiac Gluten Sensitivity: A Randomized Single-blind, Placebo-controlled Crossover Study, Clin Transl Gastroenterol. 2018 Sep; 9(9): 181)。
しかし、プロバイオティクスまたはその生成物の生物学的な影響は株に特異的であり、属、種および株間で一般化することはできないことが当科学技術分野において周知である(Probiotics: In Depth/NCCIH, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health)。従って、グルテンの利用および除去の可能性が向上した優れたプロバイオティクス株を見出す必要性がある。本発明は、グルテン不耐性の管理および食料品からのグルテンの除去の向上に対する、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の治療上の可能性を開示することによって、上記の課題を解決する。本発明はまた、上記の使用のための、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体を含む相乗的な組み合わせを開示する。

本発明の主な目的は、食物におけるグルテン分を除去するための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの使用を、開示することである。
本発明の別の目的は、哺乳動物においてグルテンの利用を促進させるための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの使用を開示することである。
本発明のさらに別の目的は、哺乳動物においてグルテン不耐性および関連状態を治療管理するための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの使用を開示することである。
本発明は上記で言及した目的を解決し、さらに関連する利点を提供する。
生物材料の寄託

本出願において言及された受入番号ＭＴＣＣ５８５６を有する生物材料バチルス・コアグランスの寄託は、２０１３年９月１９日にＭｉｃｒｏｂｉａｌＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ＆ＧｅｎｅＢａｎｋ（ＭＴＣＣ）、ＣＳＩＲ-ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｉｃｒｏｂｉａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｔｏｒ３９－Ａ、Ｃｈａｎｄｉｇａｒｈ－１６００３６、Ｉｎｄｉａにおいて行った。
本発明は、グルテンに富む食物中のグルテン分を低減させるための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの可能性を開示する。
本発明は、哺乳動物においてグルテンの利用を増進させるための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの可能性をさらに開示する。
本発明は、バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体を含む組成物を使用してグルテン不耐性および関連状態を管理するための方法をさらに開示する。
本発明の他の特徴および利点が、本発明の原理を例により示す以下のより詳細な説明から明らかになるであろう。

グルテンを含有する培地中でのバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の芽胞および栄養細胞の増殖を示すグラフである。バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６が培地中のグルテン分を低減させる能力を示すことを示すグラフである。バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６によるコムギ粉（ＷＦ）からのグリアジン分の低減を示すグラフである。バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６によるコムギグルテンからのグリアジン分の低減を示すグラフである。バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６およびＭＥＣ（多酵素複合体）によるコムギグルテンからのグリアジン分の低減を示すグラフである。バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６およびＭＥＣ（多酵素複合体）によるコムギ粉からのグリアジン分の低減を示すグラフである。

最も好まれる実施形態では、本発明は、食物中のグルテン分を低減させる方法であって、グルテン分を低減させる効果をもたらすために、グルテンを含有する食物をプロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスと単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて接触させるステップを含む、方法に関する。関連する実施形態では、グルテンの種類は、グリアジン、ホルデイン、アベニンおよびセカリンを含む群から選択される。別の関連する実施形態では、真のグルテンを含有する食物は、オオムギ、コムギ、ライムギおよびオーツムギである。別の関連する実施形態では、グルテンを含有する食物は、オオムギ粉、コムギ粉、ライムギ粉およびオーツムギ粉中のグルテンから選択されるが、それらに限定されない。別の関連する実施形態では、グルテンを含有する食物は、コムギ、中力粉、アーモンド粉、米粉、トウモロコシ粉、グラハム粉、セモリナ、ファッロ粉から選択されるが、それらに限定されない。別の関連する実施形態では、コムギ由来グルテンは、異なる種類のコムギ種、主にファッロメディオすなわちエンマーコムギ、ファッロピッコロすなわちヒトツブコムギ、ファッログランデすなわちスペルトコムギ、ライコムギ、デュラム、ホラーサーン、カムットから選択される。関連する実施形態では、バチルス・コアグランス株は、具体的にはＭＴＣＣ５８５６である。さらに別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの有効用量は、２×１０⁹コロニー形成単位（ｃｆｕ）である。さらに別の関連する実施形態では、多酵素複合体は、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む。

別の最も好ましい実施形態では、発明は、哺乳動物においてグルテンの利用を増進させる方法であって、グルテンの利用を増進させる効果をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でおよび／または多酵素複合体と組み合わせて前記哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。関連する実施形態では、バチルス・コアグランス株は、具体的にはＭＴＣＣ５８５６である。さらに別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの有効用量は、２×１０⁹コロニー形成単位（ｃｆｕ）である。さらに別の関連する実施形態では、多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む。別の関連する実施形態では、哺乳動物はヒトである。

さらに別の最も好ましい実施形態では、発明は、グルテンの利用を促進させることによって哺乳動物においてグルテン不耐性および関連状態を治療管理するための方法であって、グルテン不耐性の症状の低減をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む組成物をそのような治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。関連する実施形態では、バチルス・コアグランス株は、具体的にはＭＴＣＣ５８５６である。さらに別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの有効用量は、２×１０⁹コロニー形成単位（ｃｆｕ）である。さらに別の関連する実施形態では、多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む。さらに別の関連する実施形態では、グルテン不耐性の症状は、慢性下痢、膨れた胃、胃けいれんおよび胃痛、関節痛、口腔内の口内炎、月経停止、頭痛、貧血、疲労、鬱および不安、悪心および嘔吐、鼻詰まり、呼吸困難またはアナフィラキシー、眼刺激、蕁麻疹および発疹、腹部膨満およびガス、便秘、蒼白ならびに悪臭便を含む群から選択されるが、それらに限定されない。別の関連する実施形態では、グルテン不耐性の関連状態が、セリアック病、疱疹状皮膚炎、グルテン失調症、非セリアック・グルテン過敏症（ＮＣＧＳ）、グルテン摂取、グルテン吸収不良のような自己免疫障害からなる群から選択される。別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスを単独にまたは多酵素複合体と組み合わせて含む組成物が、医薬品／栄養補助食品として許容される賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｅｎｈａｎｃｅｒｓ）、抗酸化剤および防腐剤と共に製剤化されて、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態において経口的に投与される。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕食物中のグルテン分を低減させる方法であって、グルテン分を低減させる効果をもたらすために、グルテンを含有する食物をプロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスと単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて接触させるステップを含む、方法。
〔２〕グルテンの種類が、グリアジン、ホルデイン、アベニンおよびセカリンからなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔３〕グルテンを含有する食物が、オオムギ、コムギ、ライムギおよびオーツムギからなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔４〕前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６である、前記〔１〕に記載の方法。
〔５〕バチルス・コアグランスの有効用量が、２×１０ ⁹ コロニー形成単位（ｃｆｕ）である、前記〔１〕に記載の方法。
〔６〕前記多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む、前記〔１〕に記載の方法。
〔７〕哺乳動物においてグルテンの利用を増進させる方法であって、グルテンの利用を増進させる効果をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でおよび／または多酵素複合体と組み合わせて前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
〔８〕前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６である、前記〔７〕に記載の方法。
〔９〕バチルス・コアグランスの有効用量が、２×１０ ⁹ コロニー形成単位（ｃｆｕ）である、前記〔７〕に記載の方法。
〔１０〕前記多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む、前記〔７〕に記載の方法。
〔１１〕前記哺乳動物がヒトである、前記〔７〕に記載の方法。
〔１２〕グルテンの利用を促進させることによって哺乳動物において、グルテン不耐性および関連状態を治療管理するための方法であって、グルテン不耐性の症状の低減をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む組成物をそのような治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
〔１３〕前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６である、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１４〕バチルス・コアグランスの有効用量が、２×１０ ⁹ コロニー形成単位（ｃｆｕ）である、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１５〕前記多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１６〕前記グルテン不耐性の関連状態が、セリアック病、疱疹状皮膚炎、グルテン失調症、非セリアック・グルテン過敏症（ＮＣＧＳ）、グルテン摂取、グルテン吸収不良のような自己免疫障害からなる群から選択される、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１７〕前記哺乳動物がヒトである、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１８〕バチルス・コアグランスを単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む前記組成物が、医薬品／栄養補助食品として許容される賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤、抗酸化剤および防腐剤と共に製剤化されて、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態において経口的に投与される、前記〔１２〕に記載の方法。
本明細書に含まれる下記の具体例は、前述の本発明の最も好ましい実施形態を例示する。

（実施例１）
培地中でのバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６によるグルテン（ＧＬ）の利用
方法

Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ５８５６を、培地（組成：５ｇ／ｌ動物組織のペプシン消化物、５ｇ／ｌ酵母抽出液、２ｇ／ｌブドウ糖、０．５ｇ／ｌリン酸二カリウム、０．５ｇ／ｌリン酸一カリウム、０．３ｇ／ｌ硫酸マグネシウムおよび０．３ｇ／ｌ塩化ナトリウム、０．１ｇ／ｌ硫酸マンガンｐＨ６．５）中で増殖させた。４８時間のインキュベーション後、２５０ｍＬのシードを生理食塩水で２回洗浄し、最後に得られたペレットに１０ｍＬの生理食塩水を加えて新鮮な滅菌培地に移した。

２４時間のインキュベーション後、シードを新鮮な滅菌培地（組成：２．５～１０ｇ／ｌコムギ由来グルテン（ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、２．５ｇ／ｌブドウ糖、１．０ｇ／ｌリン酸二カリウム、１．０ｇ／ｌリン酸一カリウム、０．５ｇ／ｌ硫酸マグネシウムおよび２ｇ／ｌの塩化ナトリウム、ｐＨ６．５）に移し、３７℃で７２時間、１８０ｒｐｍでインキュベートした。２４、４８および７２時間のインキュベーションごとに、発酵ブロスを集めて凍結乾燥した（ＶｉｒＴｉｓ２ＫＦｒｅｅｚｅＤｒｙｅｒ、ＳＰＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｗａｒｍｉｎｓｔｅｒ、ＰＡＵＳＡ）。さらに、粉末を集め、グリアジン分の分析をＶｅｒａｔｏｘ（登録商標）のグリアジンＲ５キットを使用して実施した。アッセイは、メーカーの使用説明書に従って記載の通りに実施した。
ＶｅｒａｔｏｘのグリアジンＲ５は、サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法（Ｓ-ＥＬＩＳＡ）である。グリアジンは、６０%のエタノール溶液を用いて、振とう機で振とうすることによって試料から抽出する。１５０μＬの対照と抽出した試料をトランスファーウェルに添加した。次いで、１００μＬを抗体ウェルに移し、１０分間インキュベートし、平らな面上で前後に滑らせるように動かすことにより２０秒間混合し、抗体ウェルから液体を取り除いた。１２チャネルピペッターを使用して試薬ボートから１００μＬのコンジュゲートを抗体ウェルに移し、平らな面上で前後に滑らせるように動かすことにより２０秒間混合し、１０分間インキュベートした。インキュベーション後、１２チャネルピペッターを使用して試薬ボートから抗体ウェルへと１００μＬの基質を前記溶液に添加し、１０分間インキュベートした。平らな面上で前後に滑らせるように動かすことによって２０秒間よく混合した。さらに試薬ボートから１００μＬのｒｅｄＳｔｏｐを抗体ウェルに移し、よく混合し、マイクロウェル読み取り装置において結果を読み取った。青色の発現は、試料が高レベルのグリアジンを含有していることを示す一方、紫または赤の試料はグリアジンをほとんど含有していない、または全く含有していないことを示す。対照の光学密度で標準曲線を作成し、該曲線に対して試料の光学密度をプロットして百万分率（ｐｐｍ）におけるグリアジンの正確な濃度を計算する。

結果
試験データは、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６が、栄養源として小麦グルテンを発酵させながら増殖する能力を有することを示唆した（図１）。
バチルス・コアグランスがグリアジン分を除去する可能性に関しては、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の芽胞および栄養細胞の両方が、培地からグリアジン分を顕著に除去した（図２）。

（実施例２）
コムギ粉（ＷＦ）中でのバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６によるグルテンの利用
方法
Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ５８５６を、培地（組成：５ｇ／ｌ動物組織のペプシン消化物、５ｇ／ｌ酵母抽出液、２ｇ／ｌブドウ糖、０．５ｇ／ｌリン酸二カリウム、０．５ｇ／ｌリン酸一カリウム、０．３ｇ／ｌ硫酸マグネシウムおよび０．３ｇ／ｌ塩化ナトリウム、０．１ｇ／ｌ硫酸マンガンｐＨ６．５）中で増殖させた。４８時間のインキュベーション後、２５０ｍＬのシードを生理食塩水で２回洗浄し、最後に得られたペレットを１０ｍＬの生理食塩水と混合し、新鮮な滅菌培地に移した。
２４時間のインキュベーション後、シードを新鮮な滅菌培地（組成：１０００ｍＬのリン酸カリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．５）中に２．５～１０ｇ／ｌのコムギ粉）に移し、３７℃で７２時間、１８０ｒｐｍでインキュベートした。２４、４８および７２時間のインキュベーションごとに、発酵ブロスを集めて凍結乾燥した。さらに、粉末を集め、グリアジン分の分析をＶｅｒａｔｏｘ（登録商標）のグリアジンＲ５キットを使用して、実施例１に記載の手順の通りに実施した。

結果
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の芽胞および栄養細胞を、全粒コムギ粉と共にインキュベートした。バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の芽胞および栄養細胞の両方が、コムギ粉からグリアジン分を顕著に除去した（図３）。
さらに、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６のコムギからグリアジン分を除去する能力を、他のバチルス・コアグランス株（バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４）と比較した。バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６は、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ３１２８４と比較して、コムギからグリアジン分を除去することにおいてはるかにより有効であった（表１）。

ND-未実施

同様に、Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ５８５６は、Ｂ．コアグランスＡＴＣＣ３１２８４と比較して、コムギグルテンからグリアジン分を除去することにおいてはるかに有効であった（図４および表２）。

ND-未実施

（実施例３）
培地およびコムギ粉（ＷＴ）中でのグルテン（ＧＬ）の利用のためのバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６および多酵素複合体の組み合わせ試験
Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ５８５６を培地（組成：１０ｇ／ｌコムギ由来グルテン（ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、２．５ｇ／ｌブドウ糖、１．０ｇ／ｌリン酸二カリウム、１．０ｇ／ｌリン酸一カリウム、０．５ｇ／ｌ硫酸マグネシウムおよび２ｇ／ｌ塩化ナトリウム、ｐＨ６．５）中で増殖させ、さまざまな濃度の多酵素複合体（１５０ｍｇ／Ｌ）を、培地の滅菌後にＢ．コアグランスＭＴＣＣ５８５６と共に添加し、３７℃で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後に、発酵ブロスを集めて凍結乾燥した（ＶｉｒＴｉｓ２ＫＦｒｅｅｚｅＤｒｙｅｒ、ＳＰＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｗａｒｍｉｎｓｔｅｒ、ＰＡＵＳＡ）。さらに、粉末を集めてグリアジン分の分析を実施した。多酵素複合体を含まない１群もこの実験に入れた。多酵素複合体の内容を表３に開示する。

ＤＵ、デキストリン化単位（ＤｅｘｔｒｉｎｉｚｉｎｇＵｎｉｔ）；ＰＵ、プロテアーゼ単位；ＣＵ、セルラーゼ単位；ＡＬＵ、酸性ラクターゼ単位；ＦＩＰ、国際薬剤師・薬学連合単位

１０００ｍＬのリン酸カリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．５）中に１０ｇ／ｌのコムギ粉、の組成を含有する培地を使用して別の実験を実施し、３７℃で７２時間、１８０ｒｐｍでインキュベートした。２４、４８および７２時間のインキュベーションごとに、発酵ブロスを集めて凍結乾燥した。さらに、粉末を集め、グリアジン分の分析を実施し、多酵素複合体（１５０ｍｇ／Ｌ）を、培地の滅菌後にＢ．コアグランスＭＴＣＣ５８５６と共に添加し、３７℃で７２時間インキュベートした。７２時間のインキュベーション後に、発酵ブロスを集めて凍結乾燥した。さらに、粉末を集めてグリアジン分の分析を実施した。多酵素複合体を含まない１群もこの実験に入れた。

結果
結果を表４に示す。

表４および図５＆図６において示されるように、Ｂ．コアグランスおよび多酵素複合体の組み合わせは、多酵素複合体単独と比較して、全粒コムギ（ｗｈｏｌｅｗｈｅａｔｇｒａｉｎｓ）およびコムギ粉の両方においてグリアジン分を低下させることに対する相乗効果を示した。

（実施例４）
ラクトース不耐性のための、バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体を含有する製剤
バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体は、賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤、抗酸化剤および防腐剤を含む医薬品／栄養補助食品として許容される組成物と共に、かつ／または他の肝保護組成物と組み合わせて製剤化され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態において経口的に投与され、グルテン不耐性の処置のために投与される。以下の表に、種々のバチルス・コアグランスおよび多酵素複合体の組成物の例を示す。
表５～表１０に、グルテン不耐性の処置／管理のためのバチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６（ＬＡＣＴＯＳＯＲＥ（登録商標））を含有する製剤の実例を示す。

*Sabinsa Corporation、USAの登録商標

*Sabinsa Corporation、USAの登録商標

*Sabinsa Corporation、USAの登録商標

*Sabinsa Corporation、USAの登録商標

*Sabinsa Corporation、USAの登録商標

*Sabinsa Corporation、USAの登録商標

上記の製剤は単なる実例であり、前記目的のために意図される上記の有効成分を含有するいかなる製剤も同等であるとみなされるであろう。
本発明に対する他の変更形態および変形形態が上述の開示および教示から当業者には明らかであろう。従って、本明細書では本発明の特定の実施形態のみを具体的に記載しているが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくそれらに対して数々の変更を行うことができることは明らかであろう。本発明の範囲は添付の請求項と併せてのみ解釈されなければならない。

Claims

食物中のグルテン分を低減させる方法であって、グルテン分を低減させる効果をもたらすために、グルテンを含有する食物をプロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６と単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて接触させるステップを含む、方法。
グルテンの種類が、グリアジン、ホルデイン、アベニンおよびセカリンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
グルテンを含有する食物が、オオムギ、コムギ、ライムギおよびオーツムギからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の有効用量が、２×１０⁹コロニー形成単位（ｃｆｕ）である、請求項１に記載の方法。
前記多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上、およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む、請求項１に記載の方法。
哺乳動物においてグルテンの利用を増進させるための薬剤の製造のための、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６を単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む組成物の使用であって、前記薬剤が、微生物発酵の副産物として形成されるガスを低減することによってセリアック病の低減をもらたす薬剤を除く、使用。
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の有効用量が、２×１０⁹コロニー形成単位（ｃｆｕ）である、請求項６に記載の使用。
前記多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上、およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む、請求項６に記載の使用。
前記哺乳動物がヒトである、請求項６に記載の使用。
グルテンの利用を促進させることによって哺乳動物において、グルテン不耐性および関連状態を治療管理して、グルテン不耐性の症状の低減をもたらすための薬剤の製造のための、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６を単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む組成物の使用であって、前記グルテン不耐性の症状の低減が、微生物発酵の副産物として形成されるガスを低減することによるセリアック病の低減を除く、使用。
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の有効用量が、２×１０⁹コロニー形成単位（ｃｆｕ）である、請求項１０に記載の使用。
前記多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上、およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む、請求項１０に記載の使用。
前記グルテン不耐性の関連状態が、セリアック病（但し、腸のガスの産生の増加によって引き起こされるセリアック病を除く）、疱疹状皮膚炎、グルテン失調症、非セリアック・グルテン過敏症（ＮＣＧＳ）、グルテン摂取、およびグルテン吸収不良のような自己免疫障害からなる群から選択される、請求項１０に記載の使用。
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０に記載の使用。
プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６を単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む前記組成物が、医薬品／栄養補助食品として許容される賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤、抗酸化剤および防腐剤をさらに含み、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態である、請求項１０に記載の使用。
プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６を単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む、哺乳動物においてグルテンの利用を増進させるための組成物であって、前記組成物が、微生物発酵の副産物として形成されるガスを低減することによってセリアック病の低減をもらたす医薬組成物を除く、組成物。
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ５８５６の有効用量が、２×１０⁹コロニー形成単位（ｃｆｕ）である、請求項１６に記載の組成物。
前記多酵素複合体が、ａ）α－アミラーゼ：２４０００ＤＵ／ｇ以上、ｂ）セルラーゼ：１１００ＣＵ／ｇ以上、ｃ）リパーゼ：２００ＦＩＰ／ｇ以上、ｄ）ラクターゼ：４０００ＡＬＵ／ｇ以上、およびｅ）中性または酸性プロテアーゼ：６０００ＰＣ／ｇ以上、を含む、請求項１６～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記組成物が、グルテン不耐性の症状の低減をもたらして、前記グルテン不耐性および関連状態を治療管理するための組成物である、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の組成物。
前記グルテン不耐性の関連状態が、セリアック病（但し、腸のガスの産生の増加によって引き起こされるセリアック病を除く）、疱疹状皮膚炎、グルテン失調症、非セリアック・グルテン過敏症（ＮＣＧＳ）、グルテン摂取、およびグルテン吸収不良のような自己免疫障害からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
医薬品／栄養補助食品として許容される賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤、抗酸化剤および防腐剤をさらに含み、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態である、請求項１６～２０のいずれか１項に記載の組成物。