JP7383874B2 - Composition for inhibiting endotoxin transfer into blood - Google Patents

Description

関連出願の参照References to related applications

本願は、先行する日本国出願である特願２０１６－１０８４０（出願日：２０１６年１月２２日）の優先権の利益を享受するものであり、その開示内容全体は引用することにより本明細書の一部とされる。 This application benefits from the priority of Japanese Patent Application No. 2016-10840 (filing date: January 22, 2016), which is an earlier Japanese application, and the entire disclosure thereof is incorporated herein by reference. considered to be part of

本発明はホエイたんぱく質を含有する、エンドトキシンの血中移行阻害用組成物に関する。 The present invention relates to a composition containing whey protein for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream.

エンドトキシンは、内毒素やリポポリサッカライドとも呼ばれる細菌毒素の一種であり、サルモネラ菌、大腸菌、緑膿菌などのグラム陰性菌の細胞壁成分である。これらグラム陰性菌が破壊されてその細胞壁の構成成分であるリポ多糖(LPS)が遊離し、毒性を発揮する。エンドトキシンの毒作用は外毒素より弱いが、体内に入ると、発熱、血圧低下、ショック、白血球数減少、血小板数減少、悪寒、頭痛、嘔吐、筋肉痛、心悸亢進などの全身症状を引き起こすことが知られている。このような症状はエンドトキシン血症や敗血症とも呼ばれる。 Endotoxin is a type of bacterial toxin, also called endotoxin or lipopolysaccharide, and is a cell wall component of Gram-negative bacteria such as Salmonella enterica, Escherichia coli, and Pseudomonas aeruginosa. When these Gram-negative bacteria are destroyed, lipopolysaccharide (LPS), a component of their cell walls, is released and becomes toxic. The toxic effect of endotoxin is weaker than that of exotoxin, but when it enters the body, it can cause systemic symptoms such as fever, decreased blood pressure, shock, decreased white blood cell count, decreased platelet count, chills, headache, vomiting, muscle pain, and heart palpitations. Are known. This condition is also called endotoxemia or sepsis.

高齢者や、外科手術後で抵抗力の低下した患者がエンドトキシンに起因するこれらの症状に罹ると、しばしば急激な経過をたどることがある。また、肝硬変、アルコール性肝障害、非アルコール性肝障害（NASH）、急性膵炎、腎疾患、アルツハイマー病、糖尿病、動脈硬化などの、様々な疾患の原因にもエンドトキシンが関与していることが明らかになってきている（例えば、非特許文献１）。 These symptoms caused by endotoxin often develop rapidly in elderly patients and patients with weakened immune systems following surgical procedures. It is also clear that endotoxins are involved in the causes of various diseases such as liver cirrhosis, alcoholic liver injury, non-alcoholic liver injury (NASH), acute pancreatitis, kidney disease, Alzheimer's disease, diabetes, and arteriosclerosis. (For example, Non-Patent Document 1).

Sakaguchi S. et al., Drug Metab. Pharmacokinet 2011; 26(1): 30-46Sakaguchi S. et al., Drug Metab. Pharmacokinet 2011; 26(1): 30-46

本発明者らは今般、ホエイたんぱく質の加水分解物を含む栄養組成物をConA誘発肝障害モデルマウスに摂取させたところ、エンドトキシンの血中移行が阻害されるとともに、肝障害の悪化が抑制されることを見出した。本発明はこれらの知見に基づくものである。 The present inventors recently found that when a mouse model of ConA-induced liver damage was ingested with a nutritional composition containing a whey protein hydrolyzate, the transfer of endotoxin into the bloodstream was inhibited, and the worsening of liver damage was suppressed. I discovered that. The present invention is based on these findings.

本発明はエンドトキシンの血中移行を阻害する組成物を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a composition that inhibits the movement of endotoxin into the blood.

本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］ホエイたんぱく質を含んでなる、エンドトキシンの血中移行阻害用組成物。
［２］ホエイたんぱく質が加水分解物の形態である、上記［１］に記載の組成物。
［３］ホエイたんぱく質が、α－ラクトアルブミン、β－ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群から選択される１種または２種以上である、上記［１］または［２］に記載の組成物。
［４］ホエイたんぱく質が、乳たんぱく質濃縮物(MPC)、ホエイたんぱく質濃縮物(WPC)、ホエイたんぱく質分離物(WPI)、脱脂粉乳、脱脂濃縮乳および生乳からなる群から選択される１種または２種以上に由来する、上記［１］～［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］ホエイたんぱく質が、組成物100kcal当たり0.5～5.0g含まれる、上記［１］～［４］のいずれかに記載の組成物。
［６］たんぱく質として発酵乳たんぱく質をさらに含んでなる、上記［１］～［５］のいずれかに記載の組成物。
［７］脂質としてn-3系脂肪酸を含む油脂をさらに含んでなる、上記［１］～［６］のいずれかに記載の組成物。
［８］炭水化物としてイソマルチュロースを含む糖質をさらに含んでなる、上記［１］～［７］のいずれかに記載の組成物。
［９］エンドトキシンの血中移行の阻害がその治療、予防または改善に有効である疾患または症状の治療、予防または改善に用いるための、上記［１］～［８］のいずれかに記載の組成物。
［１０］前記疾患および症状が、肝硬変、アルコール性肝障害、非アルコール性肝障害（ＮＡＳＨ）、急性膵炎、腎疾患、アルツハイマー病、糖尿病、動脈硬化、発熱、血圧低下、白血球数減少、血小板数減少、悪寒、頭痛、嘔吐、筋肉痛および心悸亢進からなる群から選択される１種または２種以上である、上記［９］に記載の組成物。
［１１］エンドトキシンの血中移行阻害用組成物の製造のための、ホエイたんぱく質の使用。
［１２］エンドトキシンの血中移行阻害に使用するためのホエイたんぱく質。
［１３］有効量のホエイたんぱく質を、それを必要としている対象に摂取させるか、あるいは投与することを含んでなる、エンドトキシンの血中移行阻害方法。According to the present invention, the following inventions are provided.
[1] A composition for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream, which contains whey protein.
[2] The composition according to [1] above, wherein the whey protein is in the form of a hydrolyzate.
[3] The composition according to [1] or [2] above, wherein the whey protein is one or more selected from the group consisting of α-lactalbumin, β-lactoglobulin, and lactoferrin.
[4] The whey protein is one or two selected from the group consisting of milk protein concentrate (MPC), whey protein concentrate (WPC), whey protein isolate (WPI), skim milk powder, skim concentrate milk, and raw milk. The composition according to any one of [1] to [3] above, which is derived from more than one species.
[5] The composition according to any one of [1] to [4] above, wherein whey protein is contained in an amount of 0.5 to 5.0 g per 100 kcal of the composition.
[6] The composition according to any one of [1] to [5] above, further comprising a fermented milk protein as the protein.
[7] The composition according to any one of [1] to [6] above, further comprising an oil or fat containing an n-3 fatty acid as a lipid.
[8] The composition according to any one of [1] to [7] above, further comprising a carbohydrate containing isomaltulose as the carbohydrate.
[9] The composition according to any one of [1] to [8] above, for use in the treatment, prevention, or amelioration of a disease or condition for which inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream is effective for treatment, prevention, or amelioration. thing.
[10] The diseases and symptoms include liver cirrhosis, alcoholic liver damage, non-alcoholic liver damage (NASH), acute pancreatitis, kidney disease, Alzheimer's disease, diabetes, arteriosclerosis, fever, decreased blood pressure, decreased white blood cell count, and platelet count. The composition according to the above [9], wherein the composition is one or more selected from the group consisting of decreased sensitization, chills, headache, vomiting, myalgia, and heart palpitation.
[11] Use of whey protein for producing a composition for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream.
[12] Whey protein for use in inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream.
[13] A method for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream, which comprises ingesting or administering an effective amount of whey protein to a subject in need of it.

本発明によればエンドトキシンの血中移行を阻害する組成物が提供される。本発明の組成物に含まれるホエイたんぱく質は、長年食品の原料として用いられてきた乳たんぱく質を利用するものであることから、本発明の組成物は、長期間にわたって服用しても副作用が少なく、安全性が高い点において有利である。 According to the present invention, a composition that inhibits endotoxin transfer into the bloodstream is provided. The whey protein contained in the composition of the present invention utilizes milk protein, which has been used as a food ingredient for many years, so the composition of the present invention has few side effects even when taken over a long period of time. It is advantageous in that it is highly safe.

肝障害マウスに栄養組成物（試験食）を摂取させた栄養組成物群の血中アスパラギン酸トランスアミナーゼ(AST)活性および血中アラニントランスアミナーゼ(ALT)活性を、対照群（対照食摂取群）との比較で示した図である。t検定、＊：p < 0.05 vs対照群。The blood aspartate transaminase (AST) activity and blood alanine transaminase (ALT) activity of the nutritional composition group in which liver-damaged mice were given the nutritional composition (test food) were compared with the control group (control food intake group). It is a diagram shown for comparison. t-test, *: p < 0.05 vs control group. 肝障害マウスに栄養組成物（試験食）を摂取させた栄養組成物群の血中TNF-α濃度および血中IL-６濃度を、対照群（対照食摂取群）との比較で示した図である。t検定、＊：p < 0.05 vs対照群、＃：p < 0.1 vs対照群。Diagram showing the blood TNF-α concentration and blood IL-6 concentration of the nutritional composition group in which liver-damaged mice were fed the nutritional composition (test food), compared with the control group (control food intake group). It is. t-test, *: p < 0.05 vs control group, #: p < 0.1 vs control group. エンドトキシンの有無と初期の炎症性サイトカイン（TNF-α・IL6）濃度との関係を箱ひげ図により示した図である。FIG. 2 is a diagram showing the relationship between the presence or absence of endotoxin and the initial inflammatory cytokine (TNF-α/IL6) concentration using a box plot.

発明の具体的説明Specific description of the invention

本発明の組成物は有効成分としてホエイたんぱく質を含んでなるものである。ここで、「ホエイ」とは、乳から乳脂肪分やカゼインなどを除いた水溶液を意味し、乳清および乳漿と同義である。ホエイはβ－ラクトグロブリン（β-Lg）、α－ラクトアルブミン（α-La）、ラクトフェリン、血清アルブミン、免疫グロブリンなどのたんぱく質成分に富むことが知られている。また、本発明で使用するホエイの由来は特に限定されないが、乳たんぱく質濃縮物（MPC、総たんぱく乳質(TMP)ともいう）、ホエイたんぱく質濃縮物(WPC)、ホエイたんぱく質分離物(WPI)、脱脂粉乳、脱脂濃縮乳、生乳など、牛乳由来のホエイが好ましい。 The composition of the present invention contains whey protein as an active ingredient. Here, "whey" means an aqueous solution obtained by removing milk fat, casein, etc. from milk, and is synonymous with whey and whey. Whey is known to be rich in protein components such as β-lactoglobulin (β-Lg), α-lactalbumin (α-La), lactoferrin, serum albumin, and immunoglobulin. In addition, the origin of the whey used in the present invention is not particularly limited, but may include milk protein concentrate (MPC, also referred to as total milk protein (TMP)), whey protein concentrate (WPC), whey protein isolate (WPI), defatted Whey derived from milk, such as powdered milk, skim concentrated milk, and raw milk, is preferred.

本発明の好ましい態様ではホエイたんぱく質は加水分解物の形態で使用することができる。ホエイたんぱく質の加水分解物は、例えば下記(i)～(v)の工程を含む方法により調製することができる。
(i)乾燥物としてたんぱく質の含量が約90%(w/w)のホエイたんぱく質の分離物（WPI、ダビスコ社）を、たんぱく質の濃度が8%(w/v)となるように蒸留水に溶解して、たんぱく質の水溶液を得る。
(ii)この水溶液を85℃、2分間で加熱処理して、たんぱく質を変性させる。この加熱処理後の水溶液のpHは、例えば約7.5とすることができる。
(iii)その後に、アルカラーゼ2.4L（酵素、ノボザイムス社）を、たんぱく質（基質）の濃度に対して2.0%(w/w)で添加し、その水溶液を55℃、3時間で保持して加水分解する。
(iv)次に、豚由来のトリプシンであるPTN6.0S（酵素、ノボザイムズジャパン社）を、たんぱく質（基質）の濃度に対して3.0%(w/w)で添加し、その水溶液を55℃、3時間で保持して加水分解する。つまり、加水分解の時間は例えば合計6時間とすることができる。これらの加水分解の反応終了時の水溶液のpHは、例えば約7.0とすることができる。
(v)ホエイたんぱく質の加水分解物は、遠心処理（20,000×g、10分間）した後に、分画分子量が10,000の限外濾過(UF)膜（ミリポア社ウルトラフリー－MC）で処理する。In a preferred embodiment of the invention, whey protein can be used in the form of a hydrolyzate. A whey protein hydrolyzate can be prepared, for example, by a method including the following steps (i) to (v).
(i) Whey protein isolate (WPI, Davisco) with a protein content of approximately 90% (w/w) as a dry substance was added to distilled water to a protein concentration of 8% (w/v). Dissolve to obtain an aqueous solution of protein.
(ii) Heat-treat this aqueous solution at 85°C for 2 minutes to denature the protein. The pH of the aqueous solution after this heat treatment can be, for example, about 7.5.
(iii) Then, 2.4L of Alcalase (enzyme, Novozymes) was added at 2.0% (w/w) relative to the protein (substrate) concentration, and the aqueous solution was held at 55°C for 3 hours to add water. Disassemble.
(iv) Next, PTN6.0S (enzyme, Novozymes Japan), which is trypsin derived from pigs, was added at a concentration of 3.0% (w/w) relative to the protein (substrate) concentration, and the aqueous solution was Hydrolyze by holding at ℃ for 3 hours. That is, the hydrolysis time can be, for example, 6 hours in total. The pH of the aqueous solution at the end of these hydrolysis reactions can be, for example, about 7.0.
(v) Whey protein hydrolyzate is centrifuged (20,000 x g, 10 minutes) and then treated with an ultrafiltration (UF) membrane (Millipore Ultrafree-MC) with a molecular weight cutoff of 10,000.

乳たんぱく質の加水分解物の調製方法では、最適化のための５つのパラメーターとして、予備加熱、酵素と基質の比率(E/S)、pH、加水分解の温度および加水分解の時間などがあり、例えば、次の条件を挙げることができる。すなわち、予備加熱：65～90℃、E/S：0.01～0.2、pH：2～10、加水分解の温度：30～65℃、加水分解の時間：3～20時間である。 In the preparation method of milk protein hydrolyzate, there are five parameters for optimization, including preheating, enzyme-to-substrate ratio (E/S), pH, hydrolysis temperature, and hydrolysis time. For example, the following conditions can be mentioned. That is, preheating: 65 to 90°C, E/S: 0.01 to 0.2, pH: 2 to 10, hydrolysis temperature: 30 to 65°C, and hydrolysis time: 3 to 20 hours.

本発明のホエイたんぱく質の加水分解物には、たんぱく質の加水分解物そのものに加えて、限外濾過膜で処理した保持液（リテンテイト）や、透過液（パーミエイト）が含まれ、さらに、本発明で必要とされる同様の活性が有る市販のホエイたんぱく質の加水分解物が包含される。例えば、本発明の乳たんぱく質の加水分解物として、分画分子量が5000、6000、7000、8000、9000、10000のいずれかを下限（～以上、あるいは、～より高い）、15000、20000、25000、30000のいずれかを上限（～以下、あるいは、～より低い）とする2点の間の分子量である限外濾過膜、好ましくは分画分子量が10000である限外濾過膜で処理した保持液を用いることができる。 The whey protein hydrolyzate of the present invention includes, in addition to the protein hydrolyzate itself, a retentate treated with an ultrafiltration membrane and a permeate (permeate). Commercially available whey protein hydrolysates with similar activity as required are included. For example, as the milk protein hydrolyzate of the present invention, the lower limit of the molecular weight cut-off is 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000 (more than or higher than), 15000, 20000, 25000, The retentate is treated with an ultrafiltration membrane whose molecular weight is between two points with an upper limit of 30,000 (less than, or lower than), preferably an ultrafiltration membrane with a molecular weight cut-off of 10,000. Can be used.

本発明の組成物においてホエイたんぱく質の配合量は、他の成分（発酵乳たんぱく質、脂質、糖質など）の配合量や、本発明の組成物を摂取させる者の病態、症状、年齢、体重、用途などにより適宜調整することができる。具体的には、ホエイたんぱく質の配合量として、組成物100kcal当たり0.5～5.0g、好ましくは1.0～3.0g、より好ましくは1.5～2.5gを例示することができるが、これらの範囲に限定されない。 In the composition of the present invention, the amount of whey protein blended depends on the amount of other ingredients (fermented milk protein, lipid, carbohydrate, etc.), the medical condition, symptoms, age, weight, etc. of the person who ingests the composition of the present invention. It can be adjusted as appropriate depending on the purpose and the like. Specifically, the amount of whey protein blended may be 0.5 to 5.0 g, preferably 1.0 to 3.0 g, and more preferably 1.5 to 2.5 g per 100 kcal of the composition, but is not limited to these ranges.

本発明の組成物はたんぱく質として発酵乳たんぱく質を含んでいてもよい。本発明で用いることができる発酵乳たんぱく質は、牛、水牛、ヤギ、羊、馬などの家畜の乳、およびこれらの部分脱脂乳、脱脂乳、還元全乳、還元脱脂乳、還元部分脱脂乳、バター、クリームなどの乳原料から選択される１種または２種以上を用いて調製した液状乳を、乳酸菌などのスターターを用いて発酵させたもの、すなわち、発酵乳を用いることができる。本発明の発酵乳たんぱく質としては、フレッシュチーズ、ナチュラルチーズ、ヨーグルト、ホエイチーズが挙げられる。ここで、「チーズ」とは、乳、バターミルクあるいはクリームを乳酸菌で発酵させ、または乳、バターミルクあるいはクリームに酵素を加えてできた凝乳からホエイ（乳清）を除去したものをいい、固形化や熟成の有無については問わない。発酵乳を製造するスターターとして、Lactobacillus bulgaricus、Streptococcus thermophilusを主に用いることができるが、これらに限定されず、例えば、Streptococcus lactis、Streptococcus cremoris、Streptococcus diacetilactis、Enterococcus faecium、Enterococcus fecalis、Lactobacillus casei、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus plantarum、Lactobacillus murinus、Lactobacillus reuteri、Lactobacillus brevis、Lactobacillus gasseri、Bifidobacterium longum、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium breveなどの乳酸菌やビフィズス菌を用いることもできる。その他、プロピオニバクテリウム属菌（Propionibacterium）などの発酵乳を製造する際に用いられる微生物を併用することもできる。本発明の組成物は、いずれの発酵乳を用いて調製してもよいが、好ましくは、フレッシュチーズまたはヨーグルト、より好ましくは、クワルク（quark）またはヨーグルトを用いて調製することができる。The composition of the present invention may contain fermented milk protein as the protein. Fermented milk proteins that can be used in the present invention include milk from livestock such as cows, water buffalo, goats, sheep, and horses, as well as partially skimmed milk, skimmed milk, reduced whole milk, reduced skimmed milk, reduced partially skimmed milk, A liquid milk prepared using one or more selected from dairy raw materials such as butter and cream and fermented using a starter such as lactic acid bacteria, that is, fermented milk can be used. Fermented milk proteins of the present invention include fresh cheese, natural cheese, yogurt, and whey cheese. Here, "cheese" refers to products obtained by fermenting milk, buttermilk or cream with lactic acid bacteria, or by removing whey from curdled milk made by adding enzymes to milk, buttermilk or cream. It does not matter whether it is solidified or aged. As a starter for producing fermented milk, Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus can mainly be used, but are not limited to these, for example, Streptococcus lactis , Streptococcus cremoris , Streptococcus diacetilactis , Enterococcus faecium , Enterococcus fecalis , Lactobacillus casei , Lactobacillus helveticus Lactic acid bacteria and bifidobacteria such as Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus rhamnosus , Lactobacillus plantarum , Lactobacillus murinus , Lactobacillus reuteri , Lactobacillus brevis , Lactobacillus gasseri , Bifidobacterium longum , Bifidobacterium bifidum , Bifidobacterium breve can also be used. I can. In addition, microorganisms used in producing fermented milk such as Propionibacterium can also be used in combination. The composition of the present invention may be prepared using any fermented milk, but preferably fresh cheese or yoghurt, more preferably quark or yoghurt.

「フレッシュチーズ」には、カッテージ、クワルク、ストリング、ヌーシャテル、クリームチーズ、モツァレラ、リコッタ、マスカルポーネなどの数多くの種類のものがある。このうちクワルクは非熟成型（フレッシュ）チーズの一種であり、脂肪含量が低く、爽やかなフレーバーと酸味が特徴である。 There are many types of "fresh cheese" such as cottage, quark, string, Neuchâtel, cream cheese, mozzarella, ricotta, and mascarpone. Among these, quark is a type of unripened (fresh) cheese, with a low fat content and a refreshing flavor and sour taste.

乳酸菌にプロバイオティクス効果があることは広く知られている。また、乳酸菌発酵で得られるフレッシュチーズのホエイには、大腸菌、腸炎ビブリオ菌、ビフィズス菌、バクテロイデスなどに対する抗菌効果を有することが知られている（特開平７－１５５１０３号公報参照）。従って、本発明の組成物に乳酸菌発酵された発酵乳たんぱく質を配合することでプロバイオティクス効果や抗菌効果が期待される。 It is widely known that lactic acid bacteria have probiotic effects. Furthermore, whey from fresh cheese obtained by lactic acid bacteria fermentation is known to have an antibacterial effect against Escherichia coli, Vibrio parahaemolyticus, Bifidobacterium, Bacteroides, etc. (see JP-A-7-155103). Therefore, probiotic effects and antibacterial effects are expected by incorporating fermented milk proteins fermented by lactic acid bacteria into the composition of the present invention.

発酵乳たんぱく質の配合量は、他の成分（乳たんぱく質加水分解物、脂質、糖質など）の配合量や、本発明の組成物を摂取させる者の病態、症状、年齢、体重、用途などにより適宜調整することができる。具体的には、発酵乳たんぱく質の配合量として、たんぱく質に換算して組成物100kcal当たり0.5～6.0g、好ましくは1.5～5.0g、より好ましくは2.5～3.5gを例示することができるが、これらの範囲に限定されない。ここで、発酵乳たんぱく質の持つ効果を発揮させ、良好な風味を維持したまま継続して摂取しやすくするために、発酵乳たんぱく質の配合量を上記数値範囲内に調整することが好ましい。 The amount of fermented milk protein to be mixed depends on the amount of other ingredients (milk protein hydrolyzate, lipids, carbohydrates, etc.) and the medical condition, symptoms, age, weight, intended use, etc. of the person who is ingesting the composition of the present invention. It can be adjusted as appropriate. Specifically, the blending amount of fermented milk protein can be 0.5 to 6.0 g, preferably 1.5 to 5.0 g, and more preferably 2.5 to 3.5 g per 100 kcal of the composition in terms of protein. is not limited to the range of Here, in order to exhibit the effects of fermented milk protein and to make it easy to continuously ingest while maintaining good flavor, it is preferable to adjust the blending amount of fermented milk protein within the above numerical range.

本発明において乳たんぱく質の加水分解物や発酵乳たんぱく質の調製に使用する乳は、初乳以外の乳（normal milk）、すなわち、成熟乳（mature milk）を用いるのが好ましい。乳の由来は、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ヒトなど、いずれの動物であってもよい。 In the present invention, the milk used to prepare the milk protein hydrolyzate and fermented milk protein is preferably normal milk other than colostrum, that is, mature milk. Milk may come from any animal such as cow, water buffalo, goat, sheep, horse, or human.

本発明の組成物はホエイたんぱく質および発酵乳たんぱく質以外のたんぱく質を含んでいてもよく、そのようなたんぱく質としては、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、α－カゼイン、β－カゼイン、κ－カゼイン、大豆たんぱく質、鶏卵たんぱく質、肉たんぱく質などの動植物性たんぱく質並びにこれらの分解物；バター、ホエイ（乳清）ミネラル、クリーム、ホエイ、非たんぱく態窒素、シアル酸などの各種乳由来成分などが挙げられる。これ以外に、カゼインホスホペプチド、リジンなどのペプチドやアミノ酸を含んでいてもよい。 The composition of the present invention may contain proteins other than whey protein and fermented milk protein, such as whole milk powder, skim milk powder, partially skim milk powder, casein, α-casein, β-casein, etc. Animal and plant proteins such as casein, κ-casein, soy protein, egg protein, and meat protein, and their decomposition products; various milk-derived products such as butter, whey minerals, cream, whey, non-protein nitrogen, and sialic acid. Ingredients, etc. In addition to this, it may also contain peptides and amino acids such as casein phosphopeptide and lysine.

本発明の組成物は配合成分として脂質を含んでいてもよい。本発明の組成物に配合できる脂質としては、リン脂質および食用油脂が挙げられる。本発明の組成物に使用できるリン脂質としては乳リン脂質、大豆レシチン、卵黄レシチンが挙げられ、これらは単独で用いても、組み合わせて用いてもよい。 The composition of the present invention may contain a lipid as a component. Lipids that can be incorporated into the composition of the present invention include phospholipids and edible fats and oils. Examples of phospholipids that can be used in the composition of the present invention include milk phospholipids, soybean lecithin, and egg yolk lecithin, and these may be used alone or in combination.

本発明の組成物に使用できる食用油脂としては脂肪酸を含有する油脂が挙げられる。脂肪酸としては、例えば、飽和脂肪酸、一価不飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸が挙げられる。脂肪酸を含有する油脂のうち好ましいものとしてはオレイン酸などの一価不飽和脂肪酸を含有する油脂が挙げられる。 Edible fats and oils that can be used in the composition of the present invention include fats and oils containing fatty acids. Examples of fatty acids include saturated fatty acids, monounsaturated fatty acids, and polyunsaturated fatty acids. Among the fats and oils containing fatty acids, preferred are fats and oils containing monounsaturated fatty acids such as oleic acid.

オレイン酸などの一価不飽和脂肪酸の配合量は、本発明の組成物の脂肪酸組成中25%以上、好ましくは30%以上、より好ましくは30～50%とすることができるが、これらの範囲に限定されない。さらに、n-3系脂肪酸（例えば、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、リノレン酸）やn-6系脂肪酸（例えば、リノール酸、アラキドン酸）などの多価不飽和脂肪酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸などの中鎖脂肪酸を加えることができる。 The blending amount of monounsaturated fatty acids such as oleic acid can be 25% or more, preferably 30% or more, and more preferably 30 to 50% in the fatty acid composition of the composition of the present invention, but within these ranges. but not limited to. In addition, polyunsaturated fatty acids such as n-3 fatty acids (e.g. docosahexaenoic acid, eicosapentaenoic acid, linolenic acid) and n-6 fatty acids (e.g. linoleic acid, arachidonic acid), caprylic acid, capric acid, lauric acid, etc. Medium chain fatty acids such as acids can be added.

本発明の組成物は、好ましくはn-3系脂肪酸を脂質として含んでいてもよい。本発明の組成物に含まれるn-3系脂肪酸としては、EPA、DHA、α－リノレン酸、DPAなどが挙げられ、好ましくはEPA、DHA、および／またはα－リノレン酸、より好ましくはEPAまたは／およびDHAである。n-3系脂肪酸を含む油脂としては、シソ油、アマニ油、エゴマ油、魚油、菜種油、大豆油、サラダ油、フラックス油などが挙げられる。本発明においては、これらn-3系脂肪酸を直接含んでいてもよいし、魚油などの油脂の形態で含んでいてもよい。 The composition of the present invention may preferably contain n-3 fatty acids as a lipid. Examples of n-3 fatty acids contained in the composition of the present invention include EPA, DHA, α-linolenic acid, DPA, etc., preferably EPA, DHA, and/or α-linolenic acid, more preferably EPA or / and DHA. Examples of fats and oils containing n-3 fatty acids include perilla oil, flaxseed oil, perilla oil, fish oil, rapeseed oil, soybean oil, salad oil, and flax oil. In the present invention, these n-3 fatty acids may be contained directly or in the form of fats and oils such as fish oil.

また、本発明の組成物は、好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセリド（MCT：medium-chain triglyceride）を脂質として含んでいてもよい。MCTは体内で速やかに吸収されエネルギーになりやすく、体に脂肪が付きにくいという特徴を有する。MCTを含む油脂としては、パーム油、パーム核油、中鎖脂肪酸含有油脂などが挙げられる。本発明においては、MCTを直接含んでいてもよいし、パーム核油などの油脂の形態で含んでいてもよい。 Furthermore, the composition of the present invention may preferably contain medium-chain triglyceride (MCT) as a lipid. MCTs are quickly absorbed in the body and easily converted into energy, making it difficult for the body to accumulate fat. Examples of fats and oils containing MCT include palm oil, palm kernel oil, and fats and oils containing medium-chain fatty acids. In the present invention, MCT may be contained directly or in the form of oil or fat such as palm kernel oil.

また、本発明の組成物は、オレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、リノール酸、ステアリン酸、リノレン酸、アラキドン酸などの脂肪酸、好ましくはオレイン酸を脂質として含むことができる。これらの脂肪酸を含む油脂としては、例えば、高オレイン酸のハイオレイックヒマワリ油、ナタネ油、オリーブ油、高オレイン酸ベニバナ油、大豆油、コーン油、パーム油などが挙げられる。ヒマワリ油、ナタネ油、オリーブ油、およびオリーブ油との混合物も用いることができる。リノール酸、アラキドン酸、γ―リノレン酸などはn-6系脂肪酸である。n-6系脂肪酸を含む油脂としては、サフラワー油、ひまわり油、大豆油、アマニ油、トウモロコシ油、ラッカセイ油などが挙げられる。 The composition of the present invention can also contain fatty acids such as oleic acid, palmitic acid, palmitoleic acid, linoleic acid, stearic acid, linolenic acid, arachidonic acid, etc., preferably oleic acid, as a lipid. Examples of oils and fats containing these fatty acids include high oleic sunflower oil, rapeseed oil, olive oil, high oleic safflower oil, soybean oil, corn oil, and palm oil. Sunflower oil, rapeseed oil, olive oil, and mixtures with olive oil can also be used. Linoleic acid, arachidonic acid, gamma-linolenic acid, etc. are n-6 fatty acids. Examples of fats and oils containing n-6 fatty acids include safflower oil, sunflower oil, soybean oil, linseed oil, corn oil, and peanut oil.

本発明の組成物は上記以外の食用油脂を含んでいてもよく、そのような食用油脂としては、例えば、ラード、魚油、並びに、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油などの動物性油脂；サフラワー油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油などの植物性油脂などが挙げられる。 The composition of the present invention may contain edible fats and oils other than those mentioned above, such as lard, fish oil, and animal-based oils such as fractionated oils, hydrogenated oils, and transesterified oils thereof. Oils and fats: Vegetable oils and fats such as safflower oil, coconut oil, fractionated oils thereof, hydrogenated oils, and transesterified oils are exemplified.

脂肪酸を含有する油脂を含む食用油脂の配合量は、他の成分（乳たんぱく質加水分解物、発酵乳たんぱく質、糖質など）の配合量や、本発明の組成物を摂取させる者の病態、症状、年齢、体重、用途などにより適宜調整することができる。具体的には、食用油脂の配合量として、組成物100kcal当たり合計0.5～5.0g、好ましくは1.0～4.0g、より好ましくは2.0～3.0gを例示することができるが、これらの範囲に限定されない。また、MCTの配合量は、組成物100kcal当たり0.3～1.0g、好ましくは0.5～0.7gとすることができ、n-3系脂肪酸の配合量は、組成物100kcal当たり0.03～0.10g、好ましくは0.05～0.07gとすることができる。ここで、脂質成分の持つ効果を発揮させ、良好な風味を維持したまま継続して摂取しやすくするために、脂質成分の配合量を上記数値範囲内に調整することが好ましい。なお、本発明において、1kcal=1mLの場合には、「組成物100kcal当たり」は「組成物100mL当たり」と置き換えてもよい。 The amount of edible fats and oils containing fatty acid-containing oils and fats depends on the amount of other ingredients (milk protein hydrolyzate, fermented milk protein, carbohydrates, etc.) and the pathological condition and symptoms of the person receiving the composition of the present invention. , can be adjusted as appropriate depending on age, weight, purpose, etc. Specifically, the amount of edible fats and oils can be exemplified as a total of 0.5 to 5.0 g, preferably 1.0 to 4.0 g, more preferably 2.0 to 3.0 g per 100 kcal of the composition, but is not limited to these ranges. . Further, the amount of MCT blended can be 0.3 to 1.0 g, preferably 0.5 to 0.7 g per 100 kcal of the composition, and the blended amount of n-3 fatty acids can be 0.03 to 0.10 g, preferably 0.03 to 0.10 g per 100 kcal of the composition. It can be 0.05-0.07g. Here, in order to exhibit the effect of the lipid component and to make it easy to continuously ingest while maintaining good flavor, it is preferable to adjust the blending amount of the lipid component within the above numerical range. In addition, in the present invention, when 1 kcal=1 mL, "per 100 kcal of the composition" may be replaced with "per 100 mL of the composition".

本発明の組成物は炭水化物として糖質を含んでいてもよい。本発明の組成物に配合できる糖質としては、糖アルコール（ソルビトール、キシリトール、マルチトールなど）、ハチミツ、グラニュー糖、ブドウ糖、果糖、転化糖、イソマルチュロース、デキストリンなどが挙げられ、好ましくは糖質として少なくともイソマルチュロースを配合することができる。 The composition of the present invention may contain carbohydrates as carbohydrates. Examples of carbohydrates that can be incorporated into the composition of the present invention include sugar alcohols (sorbitol, xylitol, maltitol, etc.), honey, granulated sugar, glucose, fructose, invert sugar, isomaltulose, dextrin, etc., and preferably At least isomaltulose can be blended as the carbohydrate.

イソマルチュロースは、ブドウ糖と果糖が１分子ずつα-1,6結合した二糖類（分子量342.297、Cas. No. 13718-94-0）である。イソマルチュロースはショ糖の構造異性体であり、6‐O‐(α‐D‐Glucopyranosyl)‐D‐fructoseあるいはイソマルツロース、パラチノースともいい、甘味料などに用いられている。イソマルチュロースは蜂蜜やサトウキビなどに非常に少量含まれている。また、スクロースにプロタミノバクター・ルブラム（Protaminobacter rubrum）起源のα－グルコシルトランスフェラーゼなどを作用させて、α-1,2結合をα-1,6結合に転移させて、イソマルチュロースを製造することもできる。イソマルチュロースの甘味はスクロースに似ているが、甘味度はスクロースの約半分である。経口的に摂取されたイソマルチュロースは、消化管内でイソマルターゼによって分解を受け、ショ糖と同様にグルコースとフルクトースに消化されて吸収される（合田敏尚ら、日本栄養・食糧学会誌, Vol. 36(3): 169-173, 1983）。他にイソマルターゼで消化を受けるイソマルトース、パノース、イソマルトトリオースなどは、イソマルチュロースの消化と競合するため、イソマルチュロースの摂取によって消化吸収が抑制されると言われている（日本栄養・食糧学会誌、36(3)、pp.169-173(1983)）。イソマルチュロースのカロリーは4kcal/gである。本発明において、イソマルチュロースは、パラチノースシロップ、還元パラチノースあるいはパラチノース水飴などを含む。パラチノース水飴は、イソマルチュロースの脱水縮合によって生じる四糖、六糖、八糖などのオリゴ糖を主成分とする水飴状の液状物である。Isomaltulose is a disaccharide (molecular weight 342.297, Cas. No. 13718-94-0) in which one molecule of glucose and one fructose are linked with α-1,6 bonds. Isomaltulose is a structural isomer of sucrose, also known as 6-O-(α-D-Glucopyranosyl)-D-fructose, isomaltulose, or palatinose, and is used as a sweetener. Isomaltulose is found in very small amounts in honey and sugar cane. In addition, isomaltulose is produced by reacting α-glucosyltransferase derived from Protaminobacter rubrum with sucrose to transfer α-1,2 bonds to α-1,6 bonds. You can also. Isomaltulose has a sweet taste similar to sucrose, but its sweetness is about half that of sucrose. Orally ingested isomaltulose is broken down by isomaltase in the gastrointestinal tract, and like sucrose, it is digested into glucose and fructose and absorbed (Toshihisa Goda et al., Journal of the Japanese Society of Nutrition and Food Science, Vol. 36(3): 169-173, 1983). Other substances that are digested by isomaltase, such as isomaltose, panose, and isomaltotriose, compete with the digestion of isomaltulose, so it is said that ingestion of isomaltulose suppresses digestion and absorption ( Journal of the Japanese Society of Nutrition and Food Science, 36(3), pp.169-173(1983)). The calorie content of isomaltulose is 4kcal/g. In the present invention, isomaltulose includes palatinose syrup, reduced palatinose, palatinose starch syrup, and the like. Palatinose starch syrup is a starch syrup-like liquid substance whose main components are oligosaccharides such as tetrasaccharides, hexasaccharides, and octasaccharides produced by dehydration condensation of isomaltulose.

イソマルチュロースなどの晶質浸透圧調整剤、およびデキストリン・難消化デキストリンなどの膠質浸透圧調整剤の組み合わせを水に溶解して、浸透圧を200～440mOsm/Lに調整した水溶液が腸内の有害菌を排除し有用菌の増殖環境を調整することも知られている（国際公開第２００４／０６７０３７号）。従って、本発明の組成物にイソマルチュロースを配合することで摂取者の腸内環境の改善効果が期待される。 An aqueous solution prepared by dissolving a combination of crystalloid osmotic pressure regulators such as isomaltulose and colloid osmotic pressure regulators such as dextrin and indigestible dextrin in water and adjusting the osmotic pressure to 200 to 440 mOsm/L is used in the intestine. It is also known to eliminate harmful bacteria and adjust the growth environment for useful bacteria (International Publication No. 2004/067037). Therefore, by incorporating isomaltulose into the composition of the present invention, the effect of improving the intestinal environment of the consumer is expected.

イソマルチュロースの配合量は、他の成分（乳たんぱく質加水分解物、発酵乳たんぱく質、脂質など）の配合量や、本発明の組成物を摂取させる者の病態、症状、年齢、体重、用途などにより適宜調整することができる。具体的には、イソマルチュロースの配合量として、組成物100kcal当たり4～15g好ましくは6～8gを例示することができるが、これらの範囲に限定されない。 The amount of isomaltulose to be blended depends on the amount of other ingredients (milk protein hydrolyzate, fermented milk protein, lipid, etc.), as well as the medical condition, symptoms, age, weight, and intended use of the person who is ingesting the composition of the present invention. It can be adjusted as appropriate. Specifically, the amount of isomaltulose blended is 4 to 15 g, preferably 6 to 8 g, per 100 kcal of the composition, but is not limited to these ranges.

ここで、イソマルチュロースの持つ効果を発揮させ、良好な風味を維持したまま継続して摂取しやすくするために、イソマルチュロースの配合量を上記数値範囲内に調整することが好ましい。
Here, in order to exhibit the effects of isomaltulose and to make it easy to continuously ingest while maintaining good flavor, it is preferable to adjust the blending amount of isomaltulose within the above numerical range.

本発明の組成物は上記以外の糖質原料を含んでいてもよく、そのような糖質原料としては、例えば、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテルなどの加工澱粉が挙げられる。 The composition of the present invention may contain carbohydrate raw materials other than those mentioned above, and examples of such carbohydrate raw materials include modified starches such as soluble starch, British starch, oxidized starch, starch ester, and starch ether. It will be done.

本発明の組成物は、たんぱく質、脂質、糖質の配合量を加減することにより、その熱量を調節することができる。本発明の組成物の熱量は、液状組成物100mLあたり50～150kcal、好ましくは80～120kcalとすることができるが、これらの範囲に限定されない。 The amount of heat in the composition of the present invention can be adjusted by adjusting the amounts of protein, lipid, and carbohydrate. The calorific value of the composition of the present invention can be 50 to 150 kcal, preferably 80 to 120 kcal per 100 mL of the liquid composition, but is not limited to these ranges.

また、本発明の組成物における、たんぱく質、脂質および糖質の組成物全体に対するエネルギー比率は、第六次改定日本人の栄養所要量にほぼ準ずる形で決定することができる。具体的には、たんぱく質15～25%、脂質20～30%、糖質45～65%を例示することができるが、これらの範囲に限定されない。 Furthermore, the energy ratio of protein, lipid, and carbohydrate to the entire composition in the composition of the present invention can be determined in a manner substantially in accordance with the Sixth Revised Japanese nutritional requirements. Specifically, 15 to 25% protein, 20 to 30% fat, and 45 to 65% carbohydrate can be exemplified, but the range is not limited to these.

本発明の組成物はさらに食物繊維を含んでいてもよい。食物繊維は、ヒトの消化酵素によって加水分解されない食物中の物質を指し、水に対する親和性の違いにより、水溶性食物繊維および不溶性食物繊維に分類される。水溶性食物繊維としては、例えば、ラクツロース、ラクチトール、あるいはラフィノースなどの難消化性オリゴ糖などが挙げられる。このうち、難消化性オリゴ糖の生理機能としては、未消化物のまま大腸に到達し、腸内ビフィズス菌の活性化および増殖に寄与し、腸内環境の改善すなわち整腸効果を有することが知られている。他の水溶性食物繊維としては、ペクチン（プロトペクチン、ペクチニン酸、ペクチン酸）、グアーガム・酵素分解物、タマリンドシードガムなどが挙げられる。 The composition of the present invention may further contain dietary fiber. Dietary fiber refers to substances in food that are not hydrolyzed by human digestive enzymes, and is classified into soluble dietary fiber and insoluble dietary fiber, depending on their affinity for water. Examples of water-soluble dietary fibers include indigestible oligosaccharides such as lactulose, lactitol, and raffinose. Among these, the physiological function of indigestible oligosaccharides is that they reach the large intestine as undigested substances, contribute to the activation and proliferation of intestinal bifidobacteria, and have the effect of improving the intestinal environment, that is, regulating the intestinal tract. Are known. Other water-soluble dietary fibers include pectin (protopectin, pectinic acid, pectic acid), guar gum, enzymatically decomposed product, and tamarind seed gum.

本発明の組成物は、前記のたんぱく質、脂質、糖質、食物繊維の他に、水、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類、乳化剤、増粘剤、安定化剤などを使用することができる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンA、カロチン類、ビタミンB群、ビタミンC、ビタミンD群、ビタミンE、ビタミンK群、ビタミンP、ビタミンQ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられる。ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、エリソルビン酸などが挙げられる。また、便臭低減効果のある素材（例えば、シャンピニオンエキスを0.005%～0.5%）、カロチノイド製剤（例えば、α－カロチン、β－カロチン、リコピン、ルテインなどを含む製剤を0.00001%～0.0002%）、抗酸化剤（カテキン、ポリフェノールなど）を本発明の組成物に含ませることもできる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用することができ、合成品および／またはこれらを多く含む食品を使用してもよい。 In addition to the above proteins, lipids, carbohydrates, and dietary fibers, the composition of the present invention also contains water, vitamins, minerals, organic acids, organic bases, fruit juice, flavors, emulsifiers, thickeners, and stabilizers. etc. can be used. Examples of vitamins include vitamin A, carotenes, B group vitamins, vitamin C, vitamin D group, vitamin E, vitamin K group, vitamin P, vitamin Q, niacin, nicotinic acid, pantothenic acid, biotin, inositol, and choline. , folic acid, etc. Examples of minerals include calcium, potassium, magnesium, sodium, copper, iron, manganese, zinc, and selenium. Examples of organic acids include malic acid, citric acid, lactic acid, tartaric acid, and erythorbic acid. In addition, materials that have the effect of reducing stool odor (for example, champignon extract at 0.005% to 0.5%), carotenoid preparations (for example, preparations containing α-carotene, β-carotene, lycopene, lutein, etc. at 0.00001% to 0.0002%), Antioxidants (catechins, polyphenols, etc.) can also be included in the compositions of the invention. Two or more of these components can be used in combination, and synthetic products and/or foods containing a large amount of these components may also be used.

本発明の好ましい態様によれば、ホエイたんぱく質および発酵乳たんぱく質を含んでなり、さらに脂質としてn-3系脂肪酸を含む食用油脂を、炭水化物としてイソマルチュロースを含む糖質を、それぞれ含んでなる、エンドトキシンの血中移行阻害用栄養組成物が提供される。この栄養組成物は好ましくは液状組成物の形態で提供することができ、その場合、ホエイたんぱく質の組成物100kcal当たりの含有量を0.5～5.0gとし、発酵乳たんぱく質の組成物100kcal当たりの含有量を0.5～6.0gとし、n-3系脂肪酸の組成物100kcal当たりの含有量を0.03～0.10gとし、イソマルチュロースの組成物100kcal当たりの含有量を4～15gとすることができる。 According to a preferred embodiment of the present invention, it contains whey protein and fermented milk protein, and further contains edible oil and fat containing n-3 fatty acids as a lipid, and carbohydrates containing isomaltulose as a carbohydrate. , a nutritional composition for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream is provided. This nutritional composition can preferably be provided in the form of a liquid composition, in which case the content of whey protein is 0.5 to 5.0 g per 100 kcal of the composition, and the content of fermented milk protein is 0.5 to 5.0 g per 100 kcal of the composition. The content of n-3 fatty acids can be 0.03 to 0.10 g per 100 kcal of the composition, and the content of isomaltulose can be 4 to 15 g per 100 kcal of the composition.

本発明の組成物は、当業界において公知の方法で製造することができる。例えば、前記構成成分の一部または全てを調合した後に、必要に応じて均質化を行うことで製造することができる。ここで「均質化」とは、調合した各成分を十分混合することにより均質にし、また、脂肪球や他成分の粗大粒子を機械的に微細化して脂肪などの浮上・凝集を防止するとともに、組成物を均一な乳化状態にすることをいう。 The composition of the present invention can be manufactured by methods known in the art. For example, it can be manufactured by blending some or all of the constituent components and then homogenizing as necessary. Here, "homogenization" refers to making the blended components homogeneous by thoroughly mixing them, and mechanically refining coarse particles of fat globules and other components to prevent floating and agglomeration of fat, etc. This refers to bringing the composition into a uniform emulsified state.

本発明の組成物の製造においては加熱処理または加熱殺菌を実施することができる。加熱殺菌条件は、一般的な食品の殺菌条件を用いることができ、慣用の装置を用いて加熱殺菌を行うことができる。例えば、62～65℃×30分、72℃以上×15秒以上、72℃以上×15分以上、あるいは120～150℃×1～5秒の殺菌、または121～124℃×5～20分、105～140℃の滅菌、レトルト（加圧加熱）殺菌、高圧蒸気滅菌などを使用することができるが、これらの例に限定されない。加熱殺菌は、好ましくは加圧下で行うことができる。 In producing the composition of the present invention, heat treatment or heat sterilization can be carried out. As the heat sterilization conditions, general food sterilization conditions can be used, and heat sterilization can be performed using a conventional device. For example, sterilization at 62-65℃ for 30 minutes, 72℃ or higher for 15 seconds or more, 72℃ or higher for 15 minutes or more, or 120-150℃ for 1-5 seconds, or 121-124℃ for 5-20 minutes. Sterilization at 105 to 140°C, retort (pressurized heating) sterilization, high-pressure steam sterilization, etc. can be used, but are not limited to these examples. Heat sterilization can be preferably performed under pressure.

また、液状の組成物を予め加熱滅菌した後、無菌的に容器に充填する方法（例えば、UHT滅菌法とアセプティック包装法を併用した方法）、液状の栄養組成物を容器に充填した後、容器とともに加熱滅菌する方法（例えば、オートクレーブ法）、缶容器や流動食や経口・経管栄養に用いる各種容器（いわゆるソフトバッグ、栄養バックなど）に充填しレトルト殺菌（例えば、115～145℃で5～10秒）を行う方法、缶容器や流動食や経口・経管栄養に用いる各種容器（いわゆるソフトバッグ、栄養バックなど）に充填し、レトルト殺菌した後に約140～145℃で約5～8秒間加熱殺菌後、冷却し、無菌充填を行う方法を例示することができるが、これらに限定されるものではない。なお、加熱処理または加熱殺菌によって、原料の発酵乳に由来するスターター（乳酸菌、ビフィズス菌、またはプロピオニバクテリウム属菌など）は死滅する。 In addition, a method in which a liquid composition is heat sterilized in advance and then filled into a container aseptically (for example, a method using a combination of UHT sterilization method and aseptic packaging method), a method in which a liquid nutritional composition is filled into a container and then filled into a container. sterilization by heating (e.g., autoclave method), filling cans and various containers used for liquid foods, oral and tube feedings (so-called soft bags, nutritional bags, etc.) and retort sterilization (e.g., sterilization at 115 to 145°C for 50 minutes). 10 seconds), fill can containers and various containers used for liquid food and oral/tube feeding (so-called soft bags, nutrition bags, etc.), retort sterilize them, and then heat them at approximately 140 to 145 degrees Celsius for approximately 5 to 8 seconds. Examples include, but are not limited to, a method of heat sterilization for seconds, cooling, and aseptic filling. Note that the starter (lactic acid bacteria, bifidobacteria, propionibacterium, etc.) derived from the fermented milk as a raw material is killed by heat treatment or heat sterilization.

本発明の組成物を液状の形態で提供する場合、その浸透圧は500～1000mOsm/Lとすることができ、好ましくは550～750mOsm/Lの浸透圧とすることができる。 When the composition of the present invention is provided in liquid form, its osmotic pressure can be between 500 and 1000 mOsm/L, preferably between 550 and 750 mOsm/L.

本発明の組成物を液状の形態で提供する場合、その粘度は、室温で測定したときに、20～100cp (1cp = 0.001Pa・s)、好ましくは25～60cp、より好ましくは30～50cpとすることができるが、これらの範囲に限定されるものではない。 When the composition of the invention is provided in liquid form, its viscosity is between 20 and 100 cp (1 cp = 0.001 Pa·s), preferably between 25 and 60 cp, more preferably between 30 and 50 cp, when measured at room temperature. However, it is not limited to these ranges.

本発明の組成物を液状の形態で提供する場合、そのpHは4.6以下、好ましくは3.0～4.3、より好ましくは3.8～4.2に調整することができるが、これらの範囲に限定されるものではない。 When the composition of the present invention is provided in liquid form, its pH can be adjusted to 4.6 or less, preferably 3.0 to 4.3, more preferably 3.8 to 4.2, but is not limited to these ranges. .

後記実施例に示されるように、ホエイたんぱく質を含有する本発明の組成物はエンドトキシンの血中移行を阻害する。従って、本発明の組成物はエンドトキシン血中移行阻害用組成物およびエンドトキシン血中移行阻害剤として使用することができるとともに、エンドトキシン血中移行阻害方法に使用することができる。 As shown in the Examples below, the composition of the present invention containing whey protein inhibits the transfer of endotoxin into the bloodstream. Therefore, the composition of the present invention can be used as a composition for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream and as an endotoxin transfer inhibitor, and can also be used in a method for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream.

すなわち、本発明によれば、有効量のホエイたんぱく質または本発明の組成物を、それを必要としている対象に摂取させるか、あるいは投与することを含んでなる、エンドトキシンの血中移行阻害方法が提供される。摂取または投与対象は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、非ヒト哺乳動物）である。 That is, according to the present invention, there is provided a method for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream, which comprises ingesting or administering an effective amount of whey protein or the composition of the present invention to a subject in need thereof. be done. The subject to be ingested or administered is a human or a non-human animal (eg, a non-human mammal).

本発明によればまた、エンドトキシンの血中移行阻害用組成物の製造のための、ホエイたんぱく質またはそれを含む組成物の使用が提供される。本発明によればさらに、エンドトキシンの血中移行阻害剤の製造のための、ホエイたんぱく質またはそれを含む組成物の使用が提供される。本発明によればさらにまた、エンドトキシンの血中移行阻害に使用するためのホエイたんぱく質またはそれを含む組成物が提供される。 According to the present invention, there is also provided the use of whey protein or a composition containing the same for producing a composition for inhibiting the movement of endotoxin into the bloodstream. According to the present invention, there is further provided the use of whey protein or a composition containing the same for the production of an inhibitor of endotoxin transfer into the bloodstream. According to the present invention, there is further provided a whey protein or a composition containing the whey protein for use in inhibiting the movement of endotoxin into the bloodstream.

ここで、「エンドトキシン」とはサルモネラ菌、大腸菌、緑膿菌などグラム陰性菌の細胞壁成分であり、内毒素やリポポリサッカライドとも呼ばれる。「エンドトキシン血中移行阻害」の有無は、血清中のエンドトキシン濃度を指標にして評価することができる（実施例１参照）。なお、エンドトキシン血中移行阻害はエンドトキシンの血中移行抑制を含む意味で用いられるものとする。 Here, "endotoxin" is a cell wall component of Gram-negative bacteria such as Salmonella enterica, Escherichia coli, and Pseudomonas aeruginosa, and is also called endotoxin or lipopolysaccharide. The presence or absence of "inhibition of endotoxin transfer into blood" can be evaluated using the endotoxin concentration in serum as an index (see Example 1). Note that the expression "inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream" is used to include inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream.

本発明の組成物の使用はヒトおよび非ヒト動物並びにこれらに由来する試料における使用であってもよく、治療的使用と非治療的使用のいずれもが意図される。ここで、「非治療的」とはヒトを手術、治療または診断する行為（すなわち、ヒトに対する医療行為）を含まないことを意味し、具体的には、医師または医師の指示を受けた者がヒトに対して手術、治療または診断を行う方法を含まないことを意味する。 The compositions of the invention may be used in human and non-human animals and samples derived therefrom, and both therapeutic and non-therapeutic uses are contemplated. Here, "non-therapeutic" means that it does not include the act of surgery, treatment, or diagnosis on humans (i.e., medical treatment for humans), and specifically, it means that a doctor or a person under the direction of a doctor This means that it does not include methods of performing surgery, treatment, or diagnosis on humans.

後記実施例に示される通り、本発明の組成物はエンドトキシンの血中移行を阻害することができると考えられる。これまでにエンドトキシンの血中濃度の増加が肝障害などの疾患の発症や悪化と関連することが知られている（Michelena J et al., Hepatology 2015; 62(3): 762-772； Verdam FJ et al., J Clin Gastroenterol. 2011; 45(2): 149-152； Wig JD et al., J Clin Gastroenterol. 1998; 26(2): 121-124； Wong J et al., Semin Dial.2015; 28(1): 59-67； Bester J et al. 2015; 6(34): 35284-35303）。また、エンドトキシンの血中濃度の増加が、発熱、血圧低下、白血球数減少、血小板数減少、悪寒、頭痛、嘔吐、筋肉痛、心悸亢進などの症状の発現と関係することが知られている（Doorduin J et al., Shock 2015; 44(4): 316-322）。さらに後記実施例に示される通り、肝障害モデルマウスにおいて肝障害の指標とされているＡＳＴやＡＬＴの血中濃度が本発明の組成物の摂取により有意に低下することが確認された（実施例１）。従って本発明においては、エンドトキシン血中移行の阻害がその治療、予防または改善に有効である疾患および症状の治療、予防または改善に本発明の組成物を使用することができる。また本発明の組成物は、エンドトキシン血中移行の阻害がその治療、予防または改善に有効である疾患および症状の治療剤、予防剤および改善剤として使用できるとともに、エンドトキシン血中移行の阻害がその治療、予防または改善に有効である疾患および症状の治療方法、予防方法および改善方法に使用することができる。本発明の治療方法、予防方法および改善方法は、それを必要としている対象に本発明の組成物または有効量のホエイたんぱく質を摂取させるか、あるいは投与することにより実施することができる。摂取または投与対象は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、非ヒト哺乳動物）である。 As shown in the Examples below, it is believed that the composition of the present invention can inhibit the transfer of endotoxin into the bloodstream. It has been known that increased endotoxin blood levels are associated with the onset or worsening of diseases such as liver damage (Michelena J et al., Hepatology 2015; 62(3): 762-772; Verdam FJ et al., J Clin Gastroenterol. 2011; 45(2): 149-152; Wig JD et al., J Clin Gastroenterol. 1998; 26(2): 121-124; Wong J et al., Semin Dial.2015 ; 28(1): 59-67; Bester J et al. 2015; 6(34): 35284-35303). It is also known that an increase in the blood concentration of endotoxin is associated with the development of symptoms such as fever, decreased blood pressure, decreased white blood cell count, decreased platelet count, chills, headache, vomiting, muscle pain, and heart palpitations ( Doorduin J et al., Shock 2015; 44(4): 316-322). Furthermore, as shown in the Examples below, it was confirmed that the blood concentrations of AST and ALT, which are considered as indicators of liver damage, were significantly reduced by ingestion of the composition of the present invention in liver damage model mice (Example 1). Therefore, in the present invention, the composition of the present invention can be used for the treatment, prevention, or amelioration of diseases and symptoms for which inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream is effective for treatment, prevention, or amelioration. Furthermore, the composition of the present invention can be used as a therapeutic, preventive, or ameliorating agent for diseases and symptoms for which inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream is effective for treatment, prevention, or amelioration, and the composition of the present invention can also be used as a therapeutic, preventive, or ameliorating agent for diseases and symptoms for which inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream is effective. It can be used in methods for treating, preventing, and improving diseases and symptoms that are effective for treatment, prevention, or amelioration. The treatment, prevention, and improvement methods of the present invention can be carried out by ingesting or administering the composition of the present invention or an effective amount of whey protein to a subject in need thereof. The subject to be ingested or administered is a human or a non-human animal (eg, a non-human mammal).

エンドトキシン血中移行の阻害がその治療、予防または改善に有効である疾患としては、肝硬変、アルコール性肝障害、非アルコール性肝障害（ＮＡＳＨ）などの肝障害や、急性膵炎、腎疾患、アルツハイマー病、糖尿病、動脈硬化などの疾患が挙げられる。また、エンドトキシン血中移行の阻害がその治療、予防または改善に有効である症状としては、発熱、血圧低下、白血球数減少、血小板数減少、悪寒、頭痛、嘔吐、筋肉痛、心悸亢進などが挙げられる。 Diseases for which inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream is effective in treating, preventing, or improving include liver disorders such as liver cirrhosis, alcoholic liver injury, and non-alcoholic liver injury (NASH), acute pancreatitis, renal disease, and Alzheimer's disease. , diabetes, arteriosclerosis, and other diseases. Symptoms for which inhibition of endotoxin transfer into the bloodstream is effective in treating, preventing, or improving include fever, decreased blood pressure, decreased white blood cell count, decreased platelet count, chills, headache, vomiting, muscle pain, and heart palpitation. It will be done.

本発明の組成物および本発明の阻害剤並びに本発明の治療剤、予防剤および改善剤は医薬品、医薬部外品、食品、飼料などの形態で提供することができ、下記の記載に従って実施することができる。また本発明のエンドトキシン血中移行阻害方法並びに本発明の治療方法、予防方法および改善方法は下記の記載に従って実施することができる。 The composition of the present invention, the inhibitor of the present invention, and the therapeutic agent, prophylactic agent, and improving agent of the present invention can be provided in the form of pharmaceuticals, quasi-drugs, foods, feeds, etc., and are carried out according to the following description. be able to. Furthermore, the method of inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream of the present invention, as well as the treatment, prevention, and improvement methods of the present invention can be carried out according to the following description.

本発明の組成物は医薬品またはサプリメントとしてヒトおよび非ヒト動物に経口摂取させるか、あるいは経口投与することができる。経口剤としては、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などが挙げられる。これらの製剤は、当分野で通常行われている手法により、薬学上許容される担体を用いて製剤化することができる。薬学上許容される担体としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤などが挙げられる。また、適当量のカルシウムを添加してもよく、さらに適当量のビタミン、ミネラル、有機酸、糖類、アミノ酸、ペプチド類などを添加してもよい。 The composition of the present invention can be orally ingested or administered to humans and non-human animals as a pharmaceutical or supplement. Oral preparations include tablets (including sugar-coated tablets), pills, capsules, granules, powders, syrups, and the like. These preparations can be formulated using pharmaceutically acceptable carriers by methods commonly practiced in the art. Pharmaceutically acceptable carriers include excipients, binders, disintegrants, lubricants, flavoring agents, solubilizing agents, suspending agents, coating agents, fragrances, buffers, thickeners, coloring agents, and stabilizing agents. agents, emulsifiers, etc. Further, an appropriate amount of calcium may be added, and further appropriate amounts of vitamins, minerals, organic acids, sugars, amino acids, peptides, etc. may be added.

本発明においては、ヒトおよび非ヒト動物に対する経管投与、経鼻管投与、点滴、座薬などの経口投与以外の投与も、本発明の組成物の形態に応じて可能である。例えば、本発明の組成物を、粘性を有する液状の組成物、または、半固形状の組成物とすることで、咀嚼や嚥下の機能が低下し、経口摂取ないしは経口投与ができないヒトおよび非ヒト動物に対しても投与することができる。本発明の組成物を経口摂取以外で摂取させるか、あるいは投与することにより、咀嚼や嚥下の機能が加齢などにより低下したとしても、これらのヒトおよび非ヒト動物においてエンドトキシンの血中への移行を阻害することができるとともに、肝障害などの疾患や該疾患に関連する症状の治療、予防および改善が期待できる。さらには本発明の組成物はその配合成分により栄養補給剤やエネルギー補給剤としての機能も持ちうることから、咀嚼や嚥下の機能が低下したヒトおよび非ヒト動物に各種栄養成分やエネルギーを補給することができる。 In the present invention, administration other than oral administration to humans and non-human animals such as tube administration, nasal tube administration, infusion, suppository, etc. is also possible depending on the form of the composition of the present invention. For example, by making the composition of the present invention into a viscous liquid composition or a semi-solid composition, the mastication and swallowing functions are reduced, making it impossible for humans and non-humans to take orally administer the composition. It can also be administered to animals. By ingesting or administering the composition of the present invention other than by oral ingestion, endotoxin can be transferred into the blood in these humans and non-human animals, even if the mastication and swallowing functions have declined due to aging. In addition, it is expected to treat, prevent, and improve diseases such as liver disorders and symptoms related to these diseases. Furthermore, the composition of the present invention can function as a nutritional supplement or an energy supplement depending on its ingredients, so it can supply various nutritional components and energy to humans and non-human animals with reduced masticatory and swallowing functions. be able to.

本発明の組成物はホエイたんぱく質やその加水分解物など日常食品素材を原料にする一方で、エンドトキシンの血中移行阻害作用を有するため、日常摂取する食品や、サプリメントとして摂取する食品、さらには栄養補給を目的とした栄養機能食品として提供することができる。本発明の組成物はまた、各種食品に配合させて提供することができる。 Although the composition of the present invention is made from everyday food materials such as whey protein and its hydrolyzate, it also has the effect of inhibiting the movement of endotoxin into the bloodstream, so it can be used in foods that are consumed daily, foods that are taken as supplements, and even nutritional supplements. It can be provided as a nutritionally functional food for the purpose of supplementation. The composition of the present invention can also be provided by being incorporated into various foods.

本発明の組成物を食品として提供する場合、該食品は本発明の組成物を有効量含有した食品である。ここで、本発明の組成物を「有効量含有した」とは、個々の食品において通常喫食される量を摂取した場合に後述するような範囲で本発明の組成物が摂取されるような含有量をいう。また「食品」とは、健康食品、機能性食品、保健機能食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、栄養補助食品、機能性表示食品）、特別用途食品（例えば、幼児用食品、妊産婦用食品、病者用食品）を含む意味で用いられる。本発明の組成物は食品として利用できる成分を配合成分としていることから、エンドトキシンの血中移行阻害やそれに関連する効果を期待しつつ、流動食、経口・経管栄養剤、飲料、ゲル状食品（特に、いわゆる機能性食品）などとして、経口・経腸栄養患者や高齢者、乳幼児などの栄養管理に用いることができる。 When the composition of the present invention is provided as a food, the food is a food containing an effective amount of the composition of the present invention. Here, "containing an effective amount" of the composition of the present invention means that the composition of the present invention is contained in such a way that the composition of the present invention is ingested in the range described below when the amount normally consumed in an individual food is ingested. Refers to quantity. In addition, "food" refers to health foods, functional foods, foods with health claims (e.g., foods for specified health uses, foods with nutritional function claims, nutritional supplements, foods with functional claims), foods for special purposes (e.g., foods for infants, foods for pregnant and nursing mothers), food for the sick, food for the sick). Since the composition of the present invention contains ingredients that can be used as food, it is expected to inhibit endotoxin transfer into the bloodstream and have related effects. (In particular, it can be used as a so-called functional food) for the nutritional management of oral/enteral nutritional patients, the elderly, infants, etc.

「食品」の形態は特に限定されるものではなく、例えば、飲料や流動食のような液状の形態であっても、ペースト状、半液体、ゲル状の形態であっても、固形、粉末の形態であってもよい。また、液状、固形、粉末などの形態を問わず、本発明の組成物は各種食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、特別用途食品、病者用食品、栄養食品、冷凍食品、加工食品その他の市販食品など）に添加し、これを摂取させてもよい。また、栄養組成物の使用形態が粉末の場合、例えば噴霧乾燥、凍結乾燥などの手段を用いることにより製造することができる。 The form of "food" is not particularly limited; for example, it may be in a liquid form such as a drink or liquid food, or in a paste, semi-liquid, or gel form, or in a solid or powdered form. It may be a form. In addition, the composition of the present invention can be used in various foods (milk, soft drinks, fermented milk, yogurt, cheese, bread, biscuits, crackers, pizza crust, infant formula, liquid foods, etc.) regardless of its form such as liquid, solid, or powder. It may also be added to foods for special purposes, foods for the sick, nutritional foods, frozen foods, processed foods, and other commercially available foods, and then ingested. Furthermore, when the nutritional composition is used in the form of powder, it can be manufactured by, for example, spray drying, freeze drying, or the like.

本発明の組成物の医薬品または食品としての1日当たりの摂取量あるいは投与量は、摂取対象者の病態、年齢、症状、体重、用途や、本発明の組成物が栄養の唯一の物であるかなどによって異なるため、特に限定されない。エンドトキシンの血中移行阻害やそれに関連する作用効果を目的とする摂取および投与の場合、例えば、成人1日当たりホエイたんぱく質を0.5～80ｇ、好ましくは2～42ｇ、より好ましくは6～25ｇを摂取できるように本発明の組成物を摂取させるか、あるいは投与することができる。また、本発明の組成物は栄養組成物の側面を有しており、成人の場合1日当たり100～1600kcal、好ましくは200～1400kcal、より好ましくは400～1000kcalの摂取量および投与量を例示することができる。健康な成人の場合、例えば1日当たり3000kcalまでの摂取量および投与量が許容される。また、摂取量は、摂取対象者の担当医により決定することもできる。 The daily intake or dosage of the composition of the present invention as a drug or food depends on the condition, age, symptoms, weight, intended use of the subject, and whether the composition of the present invention is the only nutritional source. It is not particularly limited as it varies depending on the situation. When ingesting and administering for the purpose of inhibiting the transfer of endotoxin into the bloodstream and its related effects, for example, it is recommended that an adult consume 0.5 to 80 g of whey protein per day, preferably 2 to 42 g, and more preferably 6 to 25 g. The composition of the present invention can be ingested or administered to the patient. Furthermore, the composition of the present invention has the aspect of a nutritional composition, and the intake and dosage for adults is 100 to 1600 kcal, preferably 200 to 1400 kcal, and more preferably 400 to 1000 kcal per day. Can be done. For healthy adults, intakes and doses of, for example, up to 3000 kcal per day are permissible. Moreover, the intake amount can also be determined by the doctor in charge of the subject.

本発明の組成物は、エンドトキシンの血中移行阻害などに有効な1日分の摂取量の組成物で提供することができる。この場合、本発明の組成物は１日分の有効摂取量を摂取できるように包装されていてもよく、1日分の有効摂取量が摂取できる限り、包装形態は一包装であっても、複数包装であってもよい。包装形態で提供する場合、1日分の有効摂取量が摂取できるように摂取量に関する記載が包装になされているか、または該記載がなされた文書を一緒に提供することが望ましい。また、1日分の有効摂取量を複数包装で提供する場合には、摂取の便宜上、1日分の有効摂取量の複数包装をセットで提供することもできる。 The composition of the present invention can be provided in a daily dose that is effective for inhibiting the movement of endotoxin into the bloodstream. In this case, the composition of the present invention may be packaged so that one day's worth of effective intake can be ingested, and as long as one day's worth of effective intake can be ingested, even if the composition is packaged in one package, Multiple packages may be used. If the product is provided in a packaged form, it is desirable that the package contains a statement regarding the intake amount so that one day's worth of effective intake can be taken, or that a document containing such a statement is provided together. Furthermore, when providing one day's worth of effective intake in multiple packages, multiple packages containing one day's worth of effective intake can be provided as a set for convenience of intake.

本発明の組成物を提供するための包装形態は一定量を規定する形態であれば特に限定されず、例えば、包装紙、袋、ソフトバック、紙容器、缶、ボトル、カプセルなどの収容可能な容器などが挙げられる。 The packaging form for providing the composition of the present invention is not particularly limited as long as it stipulates a certain amount, and examples include wrapping paper, bags, soft bags, paper containers, cans, bottles, capsules, etc. Examples include containers.

本発明の組成物はその効果をよりよく発揮させるために、1週間以上継続的に投与または摂取させることが好ましく、投与および摂取期間はより好ましくは1～4週間、特に好ましくは1～2週間である。ここで、「継続的に」とは毎日投与または摂取を続けることを意味する。本発明の組成物を包装形態で提供する場合には、継続的摂取のために一定期間（例えば、1週間）の有効摂取量をセットで提供してもよい。 In order to better exhibit its effects, the composition of the present invention is preferably administered or ingested continuously for one week or more, and the administration and ingestion period is more preferably 1 to 4 weeks, particularly preferably 1 to 2 weeks. It is. Here, "continuously" means that administration or intake continues every day. When the composition of the present invention is provided in packaged form, it may be provided in a set containing an effective intake amount for a certain period of time (for example, one week) for continuous intake.

以下の例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。 The present invention will be explained more specifically based on the following examples, but the present invention is not limited to these examples.

実施例１：本発明の栄養組成物のエンドトキシン血中移行抑制効果の確認
本発明の栄養組成物のエンドトキシンの血中への移行を抑制する効果を確認するために、コンカナバリンA (ConA)投与による肝障害モデルマウスを用いて以下のような評価を行った。 Example 1: Confirmation of the effect of the nutritional composition of the present invention on inhibiting transfer of endotoxin into the blood In order to confirm the effect of the nutritional composition of the present invention on suppressing transfer of endotoxin into the blood, concanavalin A (ConA) was administered. The following evaluations were performed using liver injury model mice.

（１）試験飼料
試験食（本発明の栄養組成物）としては、流動食「明治メイン(MEIN)」（明治社製）を使用した。対照食としては、流動食「メイバランスHP」（明治社製）を使用した。各流動食を凍結乾燥して粉末化したものをそれぞれ試験飼料とした。試験食と対照食の成分組成（100mL当たり）と試験食のたんぱく質、糖質、繊維および脂質に関する原料組成（100mL当たり）はそれぞれ下記表１、表２に示される通りであった。(1) Test feed As the test food (nutritional composition of the present invention), a liquid food "Meiji Main" (manufactured by Meiji Co., Ltd.) was used. As a control food, a liquid food "Mei Balance HP" (manufactured by Meiji Co., Ltd.) was used. Each liquid diet was freeze-dried and powdered to serve as test feed. The component compositions of the test food and control food (per 100 mL) and the raw material compositions of the test food regarding protein, carbohydrate, fiber, and lipid (per 100 mL) are shown in Tables 1 and 2 below, respectively.

（２）試験条件
6週齢のBalb/c雌マウス（日本エスエルシー社より購入）を１週間予備飼育した後、体重の平均が等しくなるように4群に群分けし、それぞれ、正常対照群(n=5)、正常栄養組成物群(n=5)、肝障害対照群(n=15)、肝障害栄養組成物群(n=14)とした。(2) Test conditions
After preliminarily breeding 6-week-old Balb/c female mice (purchased from Japan SLC) for one week, they were divided into four groups with equal average body weight, and each group was divided into a normal control group (n=5). , a normal nutritional composition group (n=5), a liver damage control group (n=15), and a liver damage nutritional composition group (n=14).

正常対照群および肝障害対照群は対照食を用いて14日間飼育した。正常栄養組成物群および肝障害栄養組成物群は試験食を用いて14日間飼育した。肝障害対照群および肝障害栄養組成物群（以下、併せて「肝障害群」ということがある。）は14日目にConA（Sigma社製）を20mg/kgの用量で尾静脈内に投与し、正常対照群および正常栄養組成物群（以下、併せて「正常群」ということがある。）にはConAを投与しなかった。 The normal control group and the liver damage control group were fed a control diet for 14 days. The normal nutritional composition group and the liver disorder nutritional composition group were fed for 14 days using the test diet. ConA (manufactured by Sigma) was administered into the tail vein at a dose of 20 mg/kg on day 14 for the liver damage control group and the liver damage nutritional composition group (hereinafter sometimes referred to as the "hepatic damage group"). However, ConA was not administered to the normal control group and the normal nutritional composition group (hereinafter sometimes referred to as the "normal group").

（３）測定項目
肝障害群は、ConA投与の２時間後に尾静脈からヘパリン処理注射器で0.3mLの採血を行い、翌日（15日目）、イソフルラン麻酔下で腹部大静脈からヘパリン処理注射器で全採血を行った。正常群は飼育開始14日目にイソフルラン麻酔下で腹部大静脈からヘパリン処理注射器で全採血を行った。血液は無菌状態で採血し、3000rpmで1分遠心した上清の多血小板血漿を回収し、生菌数の検出とエンドトキシン検出用に使用した。尾静脈から採血を行った血液と上記の多血小板血漿の一部を取った残りの血液は12,000rpmで5分遠心し、血漿をサイトカインや生化学検査の測定に使用した。(3) Measurement items For the liver damage group, 0.3 mL of blood was collected from the tail vein with a heparin-treated syringe 2 hours after ConA administration, and on the next day (day 15), blood was collected from the abdominal vena cava with a heparin-treated syringe under isoflurane anesthesia. Blood was drawn. For the normal group, whole blood was collected from the abdominal vena cava using a heparinized syringe under isoflurane anesthesia on the 14th day after the start of rearing. Blood was collected under aseptic conditions, centrifuged at 3000 rpm for 1 minute, and the supernatant, platelet-rich plasma, was collected and used for detection of viable bacterial counts and endotoxin detection. Blood collected from the tail vein and a portion of the above-mentioned platelet-rich plasma were centrifuged at 12,000 rpm for 5 minutes, and the plasma was used for measurements of cytokines and biochemical tests.

(i)AST・ALT活性
肝障害群について、得られた血漿（ConA投与後24時間後の血漿）を用いて、肝障害の指標となるアスパラギン酸トランスアミナーゼ(AST)およびアラニントランスアミナーゼ(ALT)の活性をそれぞれ測定した。測定には富士ドライケムDRY・CHEM NX500i（富士フィルム社製）を使用した。(i) AST/ALT activity For the liver injury group, the activity of aspartate transaminase (AST) and alanine transaminase (ALT), which are indicators of liver injury, was determined using the obtained plasma (plasma 24 hours after ConA administration). were measured respectively. Fuji Dry-Chem DRY・CHEM NX500i (manufactured by Fuji Film Co., Ltd.) was used for the measurement.

(ii)血漿中TNF-α・IL-6濃度
肝障害群について、得られた血漿（ConA投与後２時間後の血漿）を用いて、ConAによる誘発初期に産生される炎症性サイトカインであるTNF-αおよびIL-6の濃度をそれぞれ測定した。測定にはMouse inflammation kit（日本べクトン・ディッキンソン社製）を用い、BD FACS Verse(BD Biosciences社製)で測定した。(ii) Plasma TNF-α/IL-6 concentration For the liver injury group, the obtained plasma (plasma 2 hours after ConA administration) was used to analyze TNF-α, an inflammatory cytokine produced in the early stage of induction by ConA. -α and IL-6 concentrations were measured respectively. The measurement was performed using a Mouse inflammation kit (manufactured by Nippon Becton Dickinson) and a BD FACS Verse (manufactured by BD Biosciences).

(iii)血漿中エンドトキシン検出の有無
正常群および肝障害群について、得られた多血小板血漿（ConA投与後２４時間後の血漿）において、エンドトキシン検出の有無を確認した。エンドトキシン検出の有無を確認するために、エンドトキシン濃度をLimulus ES-F シングルテストワコー（和光純薬工業社製）を用いて、トキシノメーターET-6000（和光純薬工業社製）で測定した。血漿中のエンドトキシン濃度が検出限界（0.02EU/mL）以下である場合にエンドトキシンが検出されなかったと判定し、血漿中のエンドトキシン濃度が検出限界以上であった場合にエンドトキシンが検出されたと判定した。(iii) Detection of endotoxin in plasma The presence or absence of endotoxin detection in the platelet-rich plasma obtained (plasma 24 hours after ConA administration) was confirmed for the normal group and the liver disorder group. In order to confirm the presence or absence of endotoxin detection, endotoxin concentration was measured using Limulus ES-F Single Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and Toxinometer ET-6000 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). It was determined that endotoxin was not detected when the endotoxin concentration in plasma was below the detection limit (0.02EU/mL), and it was determined that endotoxin was detected when the endotoxin concentration in plasma was above the detection limit.

(i)～(iii)の結果は平均値±標準誤差(SE)で示し、IBM社の統計解析ソフトウェアであるSPSSを用いて、t-test(＊：p < 0.05)で統計解析を行った。 The results of (i) to (iii) are shown as mean ± standard error (SE), and statistical analysis was performed using t-test (*: p < 0.05) using IBM's statistical analysis software SPSS. .

（４）結果
飼育期間中、いずれの群も順調に体重が増加し、群間に有意な差は認められなかった。(4) Results During the rearing period, all groups steadily gained weight, and no significant difference was observed between the groups.

(i)AST・ALT活性
ASTおよびALT活性の測定結果を図１に示す。肝障害栄養組成物群では、肝障害対照群と比較してASTおよびALTの活性がいずれも有意に低かった。これらの結果から、本発明の栄養組成物により肝障害の発症と悪化が抑制されることが示された。(i) AST/ALT activity
The measurement results of AST and ALT activities are shown in Figure 1. Both AST and ALT activities were significantly lower in the liver injury nutritional composition group than in the liver injury control group. These results showed that the nutritional composition of the present invention suppresses the onset and aggravation of liver damage.

(ii)血漿中TNF-α・IL-6濃度
血漿中TNF-αおよびIL-6濃度の測定結果を図２に示す。肝障害栄養組成物群では、肝障害対照群と比較してTNF-αの濃度が低い傾向を示した。また、肝障害栄養組成物群では、肝障害対照群と比較してIL-6の濃度が有意に低かった。これらの結果から、本発明の栄養組成物により初期の炎症性サイトカイン産生が抑制され、肝障害の発症と悪化が抑制されることが示された。(ii) Plasma TNF-α and IL-6 concentrations The measurement results of plasma TNF-α and IL-6 concentrations are shown in FIG. 2. In the liver damage nutritional composition group, the concentration of TNF-α tended to be lower than in the liver damage control group. In addition, the concentration of IL-6 was significantly lower in the liver injury nutritional composition group than in the liver injury control group. These results showed that the nutritional composition of the present invention suppresses early inflammatory cytokine production and suppresses the onset and aggravation of liver damage.

(iii)血漿中エンドトキシン検出の有無
血漿中にエンドトキシンが検出された個体数を群ごとに表３に示す。なお、正常群および肝障害群の血漿中の生菌数を培養法で検討したが、生菌は確認されなかった（データ省略）。

(iii) Detection of endotoxin in plasma The number of individuals in which endotoxin was detected in plasma is shown in Table 3 for each group. The number of viable bacteria in the plasma of the normal group and the liver-impaired group was examined using a culture method, but no viable bacteria were confirmed (data omitted).

表３の結果から分かるように、正常群では、対照群と栄養組成物群ともにすべての個体でエンドトキシンが検出されなかった。一方、肝障害群中、対照群では15個体中6個体（40%）、栄養組成物群では14個体中2個体（14%）でエンドトキシンが検出された。なお、エンドトキシンが検出されたと判定された個体の血漿中のエンドトキシン濃度は0.022-0.047 EU/mL(3.14-6.71pg/mL)であり、エンドトキシンが検出されない個体とは明らかに異なっていた。 As can be seen from the results in Table 3, in the normal group, no endotoxin was detected in any individuals in both the control group and the nutritional composition group. On the other hand, in the liver damage group, endotoxin was detected in 6 out of 15 animals (40%) in the control group and in 2 out of 14 animals (14%) in the nutritional composition group. In addition, the endotoxin concentration in the plasma of individuals in which it was determined that endotoxin was detected was 0.022-0.047 EU/mL (3.14-6.71 pg/mL), which was clearly different from that in individuals in which endotoxin was not detected.

以上の結果から、本発明の栄養組成物はエンドトキシンの血中移行を抑制することができ、これにより肝障害の発症や悪化を抑制することが明らかとなった。 From the above results, it has become clear that the nutritional composition of the present invention can suppress the transfer of endotoxin into the bloodstream, thereby suppressing the onset and aggravation of liver damage.

ところで、ConA投与により誘発される肝障害は、初期の炎症性サイトカイン産生とエンドトキシンの血中移行により引き起こされるものであるところ、本実施例によれば、本発明の栄養組成物は、エンドトキシンの血中移行の抑制のみならず、初期の炎症性サイトカイン産生も抑制することが確認された。初期の炎症性サイトカイン産生がエンドトキシンの影響を受けているかを確認するために、初期の炎症性サイトカイン濃度のデータとエンドトキシン検出の有無とから箱ひげ図を作成したところ、初期の炎症性サイトカイン産生とエンドトキシンの血中移行の抑制との間に相関がないことが示唆された（図３）。以上のことから、本発明の栄養組成物はエンドトキシンの血中移行を抑制するとともに、これと別の経路による初期の炎症性サイトカイン産生を抑制することにより肝障害を抑制していると考えられる。
By the way, liver damage induced by ConA administration is caused by the initial production of inflammatory cytokines and the transfer of endotoxin into the bloodstream.According to this example, the nutritional composition of the present invention reduces endotoxin in the bloodstream. It was confirmed that it not only suppresses intermediate migration but also suppresses early inflammatory cytokine production. In order to confirm whether early inflammatory cytokine production is influenced by endotoxin, we created a boxplot from the initial inflammatory cytokine concentration data and the presence or absence of endotoxin detection. It was suggested that there is no correlation between the inhibition of endotoxin transfer into the blood (Fig. 3). From the above, it is thought that the nutritional composition of the present invention suppresses liver damage by suppressing the transfer of endotoxin into the bloodstream and suppressing early inflammatory cytokine production through a different pathway.

Claims (7)

ホエイたんぱく質の加水分解物、発酵乳たんぱく質、脂質、ビタミンおよびカルニチンを含んでなるエンドトキシンの血中移行阻害用組成物であって、
前記ホエイたんぱく質の加水分解物が組成物１００ｋｃａｌ当たり０．５～５．０ｇ含まれ、
前記発酵乳たんぱく質が組成物１００ｋｃａｌ当たり０．５～６．０ｇ含まれ、
前記脂質がＭＣＴ、ＥＰＡおよびＤＨＡを少なくとも含み、
前記ビタミンがビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ナイアシン、パントテン酸、ビタミンＣおよびコリンを少なくとも含み、前記ビタミンＡが組成物１００ｋｃａｌ当たり１５０μｇＲＥ以上含まれ、前記ビタミンＤが組成物１００ｋｃａｌ当たり０．７５μｇ以上含まれ、前記ビタミンＥが組成物１００ｋｃａｌ当たり５．０ｍｇ以上含まれ、前記ビタミンＢ１が組成物１００ｋｃａｌ当たり０．２５ｍｇ以上含まれ、前記ビタミンＢ２が組成物１００ｋｃａｌ当たり０．３０ｍｇ以上含まれ、前記ナイアシンが組成物１００ｋｃａｌ当たり３．０ｍｇ以上含まれ、前記パントテン酸が組成物１００ｋｃａｌ当たり１．２ｍｇ以上含まれ、前記ビタミンＣが組成物１００ｋｃａｌ当たり５０ｍｇ以上含まれ、前記コリンが１００ｋｃａｌ当たり９．２ｍｇ以上含まれ、
前記カルニチンが組成物１００ｋｃａｌ当たり１５ｍｇ以上含まれる、組成物。 A composition for inhibiting endotoxin transfer into the bloodstream, comprising a whey protein hydrolyzate, fermented milk protein , lipid, vitamins, and carnitine ,
0.5 to 5.0 g of the whey protein hydrolyzate per 100 kcal of the composition ,
The fermented milk protein contains 0.5 to 6.0 g per 100 kcal of the composition,
the lipid includes at least MCT, EPA and DHA,
The vitamins include at least vitamin A, vitamin D, vitamin E, vitamin B1, vitamin B2, niacin, pantothenic acid, vitamin C, and choline, the vitamin A is contained at 150 μg RE or more per 100 kcal of the composition, and the vitamin D is contained in the composition. 0.75 μg or more per 100 kcal, the vitamin E contains 5.0 mg or more per 100 kcal, the vitamin B1 contains 0.25 mg or more per 100 kcal, and the vitamin B2 contains 0.30 mg per 100 kcal. The niacin is contained in an amount of 3.0 mg or more per 100 kcal of the composition, the pantothenic acid is contained in an amount of 1.2 mg or more per 100 kcal, the vitamin C is contained in an amount of 50 mg or more per 100 kcal, and the choline is contained in an amount of 100 kcal. Contains more than 9.2mg per serving,
A composition containing 15 mg or more of the carnitine per 100 kcal of the composition. ホエイたんぱく質が、α－ラクトアルブミン、β－ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群から選択される１種または２種以上である、請求項１に記載の組成物。 The composition according to claim 1 , wherein the whey protein is one or more selected from the group consisting of α-lactalbumin, β-lactoglobulin, and lactoferrin. ホエイたんぱく質が、乳たんぱく質濃縮物（ＭＰＣ）、ホエイたんぱく質濃縮物（ＷＰＣ）、ホエイたんぱく質分離物（ＷＰＩ）、脱脂粉乳、脱脂濃縮乳および生乳からなる群から選択される１種または２種以上に由来する、請求項１または２に記載の組成物。 The whey protein is one or more selected from the group consisting of milk protein concentrate (MPC), whey protein concentrate (WPC), whey protein isolate (WPI), skim milk powder, skim concentrate milk, and raw milk. A composition according to claim 1 or 2 , derived from. 炭水化物としてイソマルチュロースを含む糖質をさらに含んでなる、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 3 , further comprising a carbohydrate containing isomaltulose as the carbohydrate. エンドトキシンの血中移行阻害に用い、かつ、エンドトキシンの血中移行の阻害がその治療、予防または改善に有効である疾患または症状の治療、予防または改善に用いるための、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。 Any one of claims 1 to 4 , which is used for inhibiting the movement of endotoxin into the bloodstream, and for use in the treatment, prevention, or amelioration of a disease or condition for which inhibition of the movement of endotoxin into the bloodstream is effective for the treatment, prevention, or amelioration thereof. The composition according to item 1. 前記疾患および症状が、肝硬変、アルコール性肝障害、非アルコール性肝障害（ＮＡＳＨ）、急性膵炎、腎疾患、アルツハイマー病、糖尿病、動脈硬化、発熱、血圧低下、白血球数減少、血小板数減少、悪寒、頭痛、嘔吐、筋肉痛および心悸亢進からなる群から選択される１種または２種以上である、請求項５に記載の組成物。 The diseases and symptoms include liver cirrhosis, alcoholic liver damage, non-alcoholic liver damage (NASH), acute pancreatitis, kidney disease, Alzheimer's disease, diabetes, arteriosclerosis, fever, decreased blood pressure, decreased white blood cell count, decreased platelet count, and chills. 6. The composition according to claim 5 , wherein the composition is one or more selected from the group consisting of , headache, vomiting, muscle pain, and heart palpitation. エンドトキシンの血中移行阻害に用い、かつ、肝障害の発症または悪化の抑制に用いるための、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 6 , which is used to inhibit endotoxin transfer into the bloodstream and to suppress the onset or aggravation of liver damage.

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