JP7375163B2 - Ｔｇｆ－ベータトラップ - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年８月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／８８７，２７２号明細書の利益を主張し、この全内容は、本明細書において参照によって援用される。

配列表の参照
本出願は、「８７７４－１４－ＰＣＴ＿Ｓｅｑ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称で、６８バイトのバイトサイズを有し、２０２０年８月１４日に作成された電子テキストファイルとして提出される配列表を含有する。この電子ファイルに含有される情報は、３７ＣＦＲ§１．５２（ｅ）（５）に従って、その全体が参照によってこれによって援用される。

組成物及び方法は、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）の活性を阻害するために提供される。

ＴＧＦ－βは、細胞増殖及び分化、胚発生、細胞外マトリックス形成、骨発生、創傷治癒、造血、並びに免疫反応及び炎症反応に関与する多機能性サイトカインのファミリーである。ＴＧＦ－β発現は、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、皮膚癌、及び神経膠腫を含む種々の癌において研究されてきた。初期の腫瘍において、ＴＧＦ－βのレベルの増加は、良好な予後と相関するのに対して、進行した腫瘍において、ＴＧＦ－βのレベルの増加は、腫瘍の攻撃性及び予後不良と相関する。より詳細には、ＴＧＦ－βは、癌細胞の運動、浸潤、上皮間葉転換（ＥＭＴ）、及び細胞の幹細胞性を促し、腫瘍進行及び転移を促進する。

ヒトＴＧＦ－βのアイソフォームが３つある：ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３。各アイソフォームは、２５ｋＤａのホモ二量体として存在し、２つの１１２アミノ酸単量体が、鎖間ジスルフィド架橋によってつながれている。ＴＧＦ－β１は、ＴＧＦ－β２及びＴＧＦ－β３と異なっており、それぞれ、２７及び２２の（主に保存的な）アミノ酸が変化している。ＴＧＦ－βの調節異常（ｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）は、先天性異常、癌、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、及び線維性疾患などの、非常に多くの状態に関係する。

ＴＧＦ－βシグナル伝達は、膜貫通タンパク質の２つのグループに分けることができる受容体のスーパーファミリー：Ｉ型及びＩＩ型セリン／トレオニンキナーゼを通して起こる。Ｉ型受容体が最初に結合するか又はＩＩ型受容体が最初に結合するかどうかは、リガンド依存性であり、２番手のＩ型又はＩＩ型受容体は、次いで動員され、ヘテロマーシグナル伝達複合体を形成する。機能的受容体複合体は、２つのＩ型受容体及び２つのＩＩ型受容体と相互作用する１つの二量体リガンドを有する。Ｉ型受容体は、アクチビン様キナーゼ（ＡＬＫ）と称され、ＩＩ型受容体は、結合するリガンドの名をとって命名される。ＩＩ型受容体は、高い親和性でＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３に結合するが、かなり低い親和性でＴＧＦ－β２に結合する。Ｉ型受容体及びＩＩ型受容体は、ＴＧＦ－βの抗増殖シグナルの伝達にとって不可欠であるヘテロ二量体シグナル伝達複合体を共に形成する。ＴＧＦ－βＩＩＩ型受容体もまた実在するが、その細胞質ドメインは、明らかなシグナル伝達モチーフを欠いており、受容体は、シグナル伝達に直接関与していないかもしれない。

ＴＧＦ－βの全身性の阻害は、抗体及び抗体Ｆｃドメインに融合されたＴＧＦ－β受容体ドメインを含有するいわゆるトラップ分子を含む、種々のアプローチを使用して達成されてきた。例えばＧｒａｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：ｅ１２５７４５３（２０１７）及びＤｅ Ｃｒｅｓｃｅｎｚｏ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＴＧＦ－β Ｔｒａｐｓ：Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙ Ｄｉｍｅｒｉｚｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎｓ ａｓ Ｈｉｇｈ－ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｏｆ ＴＧＦ－β Ａｃｔｉｏｎ” ｉｎ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－β ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ＩＩ ｐｐ ６７１－６８４（２００８）を参照されたい。ノックアウトマウスによる研究は、ＴＧＦ－β機能の全身性の損失が、創傷治癒の減少、免疫調節の損失、及び炎症反応の増加に至り得ることを実証した。従って、腫瘍に集中してＴＧＦ－β活性を阻害することが好ましいと思われる。

トランスフォーミング増殖因子－ベータ受容体２型（ＴＧＦβＲＩＩ）のリガンド結合ドメインに融合された免疫グロブリンＦｃドメインを含有するＴＧＦ－βトラップが提供され、トラップは、Ｓｕｓｈｉドメインを含有しない及び免疫グロブリンＦｃドメインは、ヒンジ領域の少なくとも１つの不対システイン残基がセリン残基によって置き換えられるＮ末端免疫グロブリンヒンジ領域をさらに含有する。一態様において、ＴＧＦβＲＩＩは、可動性ペプチドリンカー成分を介してＦｃ領域に連結される。ある非限定的な実施形態において、ＴＧＦβＲＩＩのリガンド結合ドメインは、可動性ペプチドリンカー成分を介してＦｃドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）に連結されるが、他の非限定的な実施形態において、リガンド結合ドメインは、可動性ペプチドリンカー成分を介してＦｃドメインのヒンジ領域のアミノ末端（Ｎ末端）に連結される。いくつかの態様において、ヒンジ領域のＣ２７残基は、セリン残基によって置き換えられる。

ある実施形態において、トラップは、以下の構造を有していてもよい：ＮＨ_２－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＴＧＦβＲＩＩ－ＣＯ_２Ｈ。ある実施形態において、トラップは、構造ＮＨ_２－ＴＧＦβＲＩＩ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－ＣＯ_２Ｈを有していてもよい。一態様において、可動性リンカーは、３、４、５、又はそれ以上のＧ４ＳリピートなどのＧ４Ｓリピートを含む。

一実施形態において、トラップは、配列番号２４に対して少なくとも８５％同一な又は配列番号２５に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を含む。

上記に記載されるトラップをコードする核酸分子もまた、提供され、トラップは、任意選択で、Ｎ末端ペプチドシグナル配列に融合されてもよい。核酸分子は、発現ベクター内に含有することができる。発現ベクター中のプロモーターは、トラップをコードしている核酸分子に作動可能に連結することができる。ある実施形態において、プロモーターは、誘導性プロモーターとすることができる。一態様では、誘導性プロモーターは、ＴＧＦ－β誘導性プロモーターである。ある態様において、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターなどのプロモーターは、恒常的に活性とすることができる。

上記に記載されるベクターにより形質転換される宿主細胞もまた、提供される。ある非限定的な実施形態において、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞又はＮＫ－９２細胞などのヒト細胞とすることができる。

他の実施形態において、本発明は、対象又は患者においてＴＧＦ－βの活性を阻害するための方法であって、それを必要とする対象に、上記に記載されるトラップの有効量を投与することを含む方法に関する。

さらなる実施形態において、本発明は、対象においてＴＧＦ－βの活性を阻害するための方法であって、有効量のＴＧＦ－βトラップを産生するのに十分な量の、上記に記載される宿主細胞を含有する組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。

他の実施形態において、本発明は、対象において新生物を治療するための方法であって、上記に記載される宿主細胞を含有する組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。一態様において、宿主細胞は、非経口的に、静脈内に、腫瘍周囲に、又は注入によって投与することができる。

本明細書において開示される治療の方法のいずれにおいても、追加の治療剤を、対象又は患者に投与することができる。

図１Ａ及び１Ｂは、恒常的に活性なＴＧＦ－βトラップ構築物によるＴＧＦ－β反応の阻害を示す図である。ＣＭＶ駆動型発現構築物は、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃドメイン（Ｆｃ）、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを含有した。 図１Ａ及び１Ｂは、恒常的に活性なＴＧＦ－βトラップ構築物によるＴＧＦ－β反応の阻害を示す図である。ＣＭＶ駆動型発現構築物は、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃドメイン（Ｆｃ）、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを含有した。 図２Ａ及び２Ｂは、ＴＧＦ－β誘導性トラップ構築物によるＴＧＦ－β反応の阻害を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃドメイン（Ｆｃ）、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを比較した。 図２Ａ及び２Ｂは、ＴＧＦ－β誘導性トラップ構築物によるＴＧＦ－β反応の阻害を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃドメイン（Ｆｃ）、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを比較した。 図３は、安定してトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞におけるＴＧＦ－βトラップ発現構築物についての試験を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを比べた。 図４は、安定してトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞における、ＴＧＦ－βトラップを有するＮ末端及びＣ末端融合物についての試験を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型発現構築物をトランスフェクトし、修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）を有するＣ末端（Ｃ－ｔｅｒｍ）対Ｎ末端（Ｎ－ｔｅｒｍ）ＴＧＦ－βＲＩＩ（トラップ）Ｆｃ融合タンパク質を比較した。 図５Ａ及び５Ｂは、ＴＧＦ－βトラップがＴＧＦ－β２を中和する能力を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型又はＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、次いで、既知濃度のＴＧＦ－β２を滴下して刺激した。 図５Ａ及び５Ｂは、ＴＧＦ－βトラップがＴＧＦ－β２を中和する能力を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型又はＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、次いで、既知濃度のＴＧＦ－β２を滴下して刺激した。 図６Ａ及び６Ｂは、ＴＧＦ－βトラップがマウスＴＧＦ－β２を中和する能力を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型又はＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし（配列番号８及び１６において示されるＤＮＡ配列）、次いで、既知濃度のマウスＴＧＦ－β１（ｍＴＧＦ－β１）を滴下して刺激した。細胞を一晩インキュベートし、結果として生じるルシフェラーゼ活性を２４時間後に測定した。 図６Ａ及び６Ｂは、ＴＧＦ－βトラップがマウスＴＧＦ－β２を中和する能力を示す図である。ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型又はＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし（配列番号８及び１６において示されるＤＮＡ配列）、次いで、既知濃度のマウスＴＧＦ－β１（ｍＴＧＦ－β１）を滴下して刺激した。細胞を一晩インキュベートし、結果として生じるルシフェラーゼ活性を２４時間後に測定した。 図７は、ＴＧＦ－β－トラップの産生に対するＳｕｓｈｉドメイン及びヒンジ修飾の効果を示す図である。２９３Ｔ細胞株に、Ｓｕｓｈｉドメイン及び本来の無修飾ヒンジ配列（ＡｌｔＨ）を含有する、ＡｌｔＨを有するがＳｕｓｈｉドメインを含有しない、又は修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）を有するがＳｕｓｈｉを含有しないＣＭＶ駆動型ＴＧＦＢＲＩＩトラップＦｃ融合タンパク質発現構築物をトランスフェクトした。細胞を休ませ、２４時間、無血清培地中で培養し、結果として生じる上清を濃縮し、ヒトＩｇＧ Ｆｃのレベルを測定した。

トランスフォーミング増殖因子－ベータ受容体２型（ＴＧＦβＲＩＩ）のリガンド結合ドメインに連結された免疫グロブリンＦｃドメインを含有するＴＧＦ－βトラップ分子が、提供される。免疫グロブリンＦｃドメインは、改善されたＮ末端免疫グロブリンヒンジ領域を含有し、ヒンジ領域の少なくとも１つの不対システイン残基は、例えばセリン残基によって置き換えられる。ある実施形態において、トラップ分子は、Ｓｕｓｈｉドメインを含有しない。トラップ分子をコードする核酸分子は、細胞をトランスフェクトし、トラップ分子を発現させるために使用することができるベクター及び発現構築物と共に提供される。核酸構築物によりトランスフェクトされた細胞もまた、提供され、トラップ分子の発現は、ＴＧＦ－β誘導性プロモーターのコントロール下にある。癌などの疾患を治療するためにこれらのトラップ、核酸分子、及びトランスフェクト細胞を使用するための方法もまた、提供される。

リガンド結合性ドメイン
トラップ分子は、トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）の細胞外リガンド結合部分に由来するＴＧＦ－β結合ドメインを含有する。ＴＧＦβＲＩＩのアミノ酸配列は、以下の通りである：

受容体の細胞外ドメインに下線を引く。トラップ分子は、いくつかの又はすべての細胞外ドメインを含有してもよい、ただし、ドメインは、リガンドに結合する能力を保持する。有利には、トラップ分子は、下記に示されるリガンド結合配列を含有する。当業者は、アミノ酸をドメインのＮ末端及び／又はＣ末端に追加してもよい又は欠失させてもよいことを認識であろう、ただし、ドメインのリガンド結合特性は、保持される。

免疫グロブリンＦｃドメイン
リガンド結合性ドメインは、リガンド結合性ドメインのインビボにおける血漿半減期を延長する安定化タンパク質ドメインに連結される。原則として、任意の長さが長いアミノ酸が、安定化ドメインとして使用されてもよいが、ある好ましい実施形態において、安定化ドメインは、免疫グロブリン定常（Ｆｃ）ドメインである。Ｆｃは、有利には、ヒトＦｃであり、任意のアイソタイプであってもよいが、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２アイソタイプが最も一般に使用される。この目的に適したＦｃドメインは、当技術分野においてよく知られている。例えば、米国特許第５，４２８，１３０号明細書；Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９：４７（２００３）；及びＣｚａｊｋｏｗｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．４：１０１５－２８（２０１２）を参照されたい。適したＦｃ配列を、下記に示す。当業者は、アミノ酸をドメインのＮ末端及び／又はＣ末端に追加してもよい又は欠失させてもよいことを認識であろう、ただし、ドメインの安定化特性は、保持される。

ヒンジ領域
天然に存在する免疫グロブリンのリガンド結合性ドメインは、可動性ヒンジ領域を介してＦｃドメインに連結され、本明細書において記載されるトラップ分子はまた、Ｆｃ領域のＮ末端に融合された修飾ヒンジ領域も含有する。ヒンジ領域は、可動性のつなぎ綱として作用することができ、鎖間のジスルフィド結合を形成するシステイン成分も含有する。天然に存在するヒンジ領域はまた、不対システイン残基も含有する。驚くべきことに、親水性残基（例えばセリン）によるこれらの不対システイン残基の少なくとも１つの置き換えが、トラップ分子が組換え宿主細胞において産生される場合に、より高いレベルのタンパク質発現をもたらすだけでなく、ＴＧＦ－βに結合する際のトラップの活性の増加ももたらすことがわかった。有利には、ヒンジ領域の少なくとも第１の（Ｎ末端に最も近い）システインが、親水性残基と置き換えられる。これは、天然に存在するヒンジ領域のＣ２７位又は下記に示す配列番号２９のＣ５位に相当する。修飾ヒンジのこの修飾は、本明細書において（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）と称される。例示的な修飾ヒンジ領域を、下記に示すが、下線を引いたセリン残基は、システインをセリンに置換した位置を示す。

ヒトＩｇＧ１の例示的な無修飾の天然に存在するヒンジ配列は、以下の通りである：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号２９）（Ｎｅｚｌｉｎ，Ｒ．Ｇｅｎｅｒａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，１９９８）

可動性リンカー
トラップ分子は、リガンド結合性ドメインとＦｃ領域との間に挿入される可動性親水性リンカードメインを含有する。有利には、リンカーは、さらに、第二構造を欠いており、例えばＳｃＦｖ分子及びその他同種のものにおいて一般に使用されるよく知られている（Ｇ_４Ｓ）_ｎリンカーにおいてなどのように、グリシン残基及びセリン残基から構成される。リンカーは、長さが約５～３５アミノ酸であってもよく、有利には、長さが約１５～３０アミノ酸である。例示的なリンカーは、Ｇ_４Ｓの５つのリピートを含有する。下記に詳細に記載されるように、リンカーは、リガンド結合性ドメインのＮ末端にＦｃのＣ末端を直接連結してもよい又はヒンジ領域のＮ末端にリガンド結合性ドメインのＣ末端を連結してもよい。

分泌シグナル配列
本明細書において記載されるトラップ分子は、細胞培養において又は患者若しくは対象に投与される宿主細胞においてインビボにおいて、組換え真核宿主細胞において産生される。従って、トラップ分子をコードする核酸分子はまた、新たに合成されたタンパク質を宿主細胞の分泌経路に導くＮ末端シグナルペプチドもコードする。シグナルペプチドは、分泌の間に、残りのタンパク質から切断され、成熟トラップタンパク質を産生する。適したシグナルペプチドは、当技術分野においてよく知られている。例えばｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７－２１（１９８３）；Ｍａｒｔｏｇｌｉｏ ａｎｄ Ｄｏｂｂｅｒｓｔｅｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．８：４１０－１５（１９８８）；Ｈｅｇｄｅ ａｎｄ Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ ３１：５６３－７１（２００６）を参照されたい。有利には、シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドである。例示的なシグナルペプチド配列を、下記に示す。
ＭＤＷＩＷＲＩＬＦＬＶＧＡＡＴＧＡＨＳＡＱＰＡ（配列番号５）

トラップ分子の構造
上記に記載される通り、ヒンジ領域は、ＦｃドメインのＮ末端に融合され、リガンド結合性ドメインは、可動性リンカーペプチドを介してヒンジ－Ｆｃ構造に融合される。リガンド結合性ドメインは、Ｆｃ領域に関してＮ末端に又はＣ末端に配置されてもよい。リガンド結合性ドメインがＣ末端に配置される場合、成熟トラップタンパク質は、以下のドメイン構造を有する：
ＮＨ_２－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＴＧＦβＲＩＩ－ＣＯ_２Ｈ。

この構造を有する例示的なトラップ分子は、本明細書において配列番号２４として示される。ある実施形態において、トラップ分子は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の同一性、例えば、配列番号２４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有することができる、ただし、配列番号２４に対して「Ｘ％」の同一性を有する分子は、常に、他のどのアミノ酸を配列番号２４の配列に関して変化させるかに関係なく、配列番号２４の５位に相当する位置にセリンを有するとして理解されるべきであることを条件とする。

リガンド結合性ドメインがＮ末端に配置される場合、成熟トラップタンパク質は、以下のようなドメイン構造を有する：
ＮＨ_２－ＴＧＦβＲＩＩ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－ＣＯ_２Ｈ。

この構造を有する例示的なトラップ分子は、本明細書において配列番号２５として示される。ある実施形態において、トラップ分子は、配列番号２５に対して少なくとも８５％の同一性、例えば、配列番号２５に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有することができる、ただし、配列番号２５に対して「Ｘ％」の同一性を有する分子は、常に、他のどのアミノ酸を配列番号２５の配列に関して変化させるかに関係なく、配列番号２５の１６６位に相当する位置にセリンを有するとして理解されるべきであることを条件とする。

核酸及びベクター
トラップ分子をコードする核酸分子及びベクターが、提供される。核酸分子を合成するための方法は、当技術分野においてよく知られている。核酸配列は、ファージ、ウイルス、プラスミド、ファージミド、コスミド、ＹＡＣ、又はエピソームなどの染色体外の複製に適しているベクター内に含有されてもよい。タンパク質発現について、ベクターは、発現ベクター、すなわち、挿入されたタンパク質コード化配列の転写及び翻訳に必要とされるコントロールエレメントを含有するベクターである。適した発現系は、ウイルス（例えばワクシニアウイルス、アデノウイルスなど）に感染させた哺乳類細胞系；ウイルス（例えばバキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；酵母ベクターを含有する酵母などの微生物、又はバクテリオファージ、ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、若しくはコスミドＤＮＡにより形質転換させた細菌を含む。このような宿主ベクター系に適した転写及び翻訳エレメントは、当技術分野においてよく知られている。核酸分子の調製、クローニング、及びタンパク質発現についての一般的な技術は、例えば“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ” “Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；及び“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）において記載される。

ある実施形態において、ＴＧＦ－β反応エレメントを含有する誘導性プロモーターは、トラップ分子発現をコントロールする。誘導性プロモーターのコントロール下にトラップ分子をコードする適したベクターは、適した宿主細胞の中に導入される。ある実施形態において、宿主細胞は、トラップ分子により治療することになっている患者又は対象の中に宿主細胞を導入することができることを前提に選ばれる。腫瘍によるＴＧＦ－βの発現は、腫瘍の周辺にトラップの産生を誘導し、その周辺においてＴＧＦ－β活性を低下させる又は排除する。このアプローチは、有利には、ＴＧＦ－βを発現している腫瘍の周辺でのみ、ＴＧＦ－β活性を抑制し又は阻害し、場合によっては望ましくない全身性の効果を回避する。適したＴＧＦ－β反応エレメントは、当技術分野において知られている。例えばＺｈａｎｇ ａｎｄ Ｄｅｒｙｎｃｋ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１６９７９（２０００）；Ｇｒｏｔｅｎｄｏｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．７：４６９－８０（１９９６）；Ｒｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．．１２：１８４６－５５（１９９２）を参照されたい；配列番号２６～２８もまた、参照されたい。適した反応エレメントを含有する発現ベクターは、市販で入手可能である。ｍｉｎＰプロモーターエレメントの一部としてＴＧＦ－β反応エレメントを含有し、下記にさらに詳細に記載されるｐＧＬ４．２８（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい。

トラップ分子は、Ｎ末端シグナル配列を有するトラップ分子をコードするＤＮＡ発現ベクターを宿主細胞の中に導入すること、トラップ分子を発現し且つトラップ分子の二量体化を可能にするのに十分な条件下で培地中で宿主細胞を培養すること、及び宿主細胞又は培地から二量体可溶性トラップ分子を精製することによって、産生されてもよい。トラップ分子が産生され、エクスビボにおいて精製される場合、発現ベクターは、有利には、ＣＭＶ恒常的プロモーターのコントロール下にポリペプチドをコードするＤＮＡを含有する。

その代わりに、宿主細胞は、哺乳類細胞、とりわけヒト細胞株であってもよく、これは、患者又は対象の中に導入することができ、インサイツにおいてトラップ分子を産生する。この場合、宿主細胞は、有利には、ＴＧＦ－β反応エレメントを含有するプロモーターのコントロール下にトラップ分子をコードする発現ベクターを含有する。

生物学的に活性な変異ＴＧＦβＲＩＩ、ヒンジ、リンカー、又はＦｃドメインコード化配列を得る際に、当業者らは、ポリペプチドが、生物学的活性を損失する又は低下させることなく、あるアミノ酸の置換、追加、欠失、及び翻訳後修飾によって修飾されてもよいことを認識するであろう。特に、保存的アミノ酸の置換、すなわち、同様のサイズ、電荷、極性、及び立体構造の別のアミノ酸へのあるアミノ酸の置換は、タンパク質の機能を著しく改変する可能性が低いことがよく知られている。タンパク質の構成成分である２０の標準アミノ酸は、以下の通り、保存的アミノ酸の４つのグループに大まかに分類することができる：非極性（疎水性）グループは、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びバリンを含む；極性（無電荷、中性）グループは、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、セリン、トレオニン、及びチロシンを含む；正電荷（塩基性）グループは、アルギニン、ヒスチジン、及びリシンを含有する；並びに負電荷（酸性）グループは、アスパラギン酸及びグルタミン酸を含有する。同じグループ内の別のアミノ酸へのあるアミノ酸のタンパク質における置換は、タンパク質の生物学的活性に対して悪影響を有する可能性が低い。他の例において、アミノ酸の位置に対する修飾は、タンパク質の生物学的活性を低下させる又は増強するためになすことができる。このような変化は、ランダムに又は標的とされる残基の既知の若しくは推定される構造的な若しくは機能的な特性に基づいて、部位特異的突然変異を介して導入することができる。変異タンパク質の発現後に、修飾による生物学的活性における変化は、結合アッセイ又は機能的アッセイを使用して容易に評価することができる。

ヌクレオチド配列間の配列同一性は、ＤＮＡハイブリダイゼーション解析によって決定することができ、二本鎖ＤＮＡハイブリッドの安定性は、起こる塩基対形成の程度に依存性である。高温及び／又は低い塩含有量といった条件は、ハイブリッドの安定性を低下させ、選択された同一性の程度よりも低い配列のアニーリングを予防するように変動させることができる。例えば、約５５％のＧ－Ｃ含有量を有する配列について、４０～５０Ｃ、６×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム緩衝液）、及び０．１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）といったハイブリダイゼーション及び洗浄条件は、約６０～７０％の同一性を必要とし、５０～６５℃、１×ＳＳＣ、及び０．１％ＳＤＳといったハイブリダイゼーション及び洗浄条件は、８２～９７％の同一性を必要とし、５２℃、０．１×ＳＳＣ、及び０．１％ＳＤＳといったハイブリダイゼーション及び洗浄条件は、約９９～１００％の同一性を必要とする。ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を比較する（並びに同一性の程度を測定する）ためのさまざまなコンピュータープログラムもまた、入手可能であり、市販で入手可能な及び無料のソフトウェアの供給元を提供するリストは、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）において見つけられる。

タンパク質発現
精製トラップタンパク質の産生について、有利には、哺乳類細胞、特にＣＨＯ、Ｊ５５８、ＮＳＯ、又はＳＰ２－Ｏ細胞が、使用される。他の適した宿主は、例えば、Ｓｆ９などの昆虫細胞を含む。使用することができる哺乳類細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ ｄｈｆｒ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｍ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０））、２９３細胞（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（１９７７））、又はＳＰ２若しくはＮＳＯのような骨髄腫細胞（Ｇａｌｆｒｅ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，７３（Ｂ）：３（１９８１））を含む。従来の培養条件が、用いられる。Ｓａｍｂｒｏｏｋ、前掲を参照されたい。安定した形質転換又はトランスフェクト細胞株を、次いで、選択することができる。トラップ分子を発現している細胞は、既知の手順によって特定することができる。例えば、トラップ分子の発現は、結合ドメイン若しくはＦｃドメインなどのトラップ分子のドメインに対して特異的なＥＬＩＳＡによって及び／又はイムノブロッティングによって決定することができる。

患者の中に導入され、ＴＧＦ－βに依存してトラップ分子を発現する宿主細胞について、ヒト宿主細胞が、使用される。患者から取り出すことができる患者自身の細胞を含む種々のヒト宿主細胞が、使用されてもよい。しかしながら、有利には、宿主細胞は、非ＭＨＣ拘束性であり、そのため、本質的に、いかなる患者においても、宿主細胞に対して患者が免疫反応を引き起こすことなく使用することができるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。適したＮＫ細胞株は、ＮＫ－９２細胞株であり、これは、当技術分野において知られている。例えば米国特許第７，６１８，８１７号明細書及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ ８，ａｒｔｉｃｌｅ ５３３（２０１７）を参照されたい。特定の実施形態において、ＮＫ－９２細胞は、ＴＧＦ－β誘導性コントロールエレメントのコントロール下にトラップ分子をコードする適した核酸構築物によりトランスフェクトされ、次いで、例えば、静脈内若しくは腹腔内注入又は固形腫瘍若しくは他の癌病変の中への直接的な注射によって、患者の中に導入される。

トラップ分子をコードする核酸は、細胞をトランスフェクトするための標準的な技術によって、宿主細胞の中に導入することができる。用語「トランスフェクトすること」又は「トランスフェクション」は、リン酸カルシウム共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性のトランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、ウイルス形質導入、及び／又は組込みを含む、核酸を宿主細胞の中に導入するためのすべて従来の技術を包含することを意図する。宿主細胞をトランスフェクトするための適した方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．、前掲及び他の実験テキストにおいて見つけることができる。

種々のプロモーター（転写開始調節領域）は、本明細書において記載される分子の発現をコントロールするために使用されてもよい。適切なプロモーターの選択は、提案される発現宿主に依存性である。異種の供給源由来のプロモーターは、それらが選ばれた宿主において機能的である限り、使用されてもよい。上記に記載される通り、ＴＧＦ－β反応エレメント又はＣＭＶプロモーターを組み込んでいるプロモーターは、有利には、使用される。

選択マーカーは、多くの場合、用いられ、選択マーカーは、発現構築物の一部であってもよく又は発現構築物と分離していてもよく（例えば、発現ベクターによって運搬されてもよく）、その結果、マーカーは、興味がある遺伝子と異なる部位に統合してもよい。例として、抗生物質に対する耐性を与える（例えば、ｂｌａは、アンピシリンに対する耐性を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）宿主細胞に与え、ｎｐｔＩＩは、カナマイシン耐性を多種多様な原核細胞及び真核細胞に与える）又は宿主が最少培地で成長するのを可能にする（例えば、ＨＩＳ４は、Ｐ．パストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ）が又はＨｉｓ－は、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が、ヒスチジンの非存在下において成長するのを可能にする）マーカーを含む。選択可能なマーカーは、マーカーの非依存性の発現を可能にするそれ自体の転写及び翻訳開始及び終了調節領域を有する。抗生物質耐性がマーカーとして用いられる場合、選択のための抗生物質の濃度は、抗生物質に依存して変動し、一般に、１０～６００μｇの抗生物質／培地１ｍＬの範囲に及ぶであろう。

発現構築物は、既知の組換えＤＮＡ技術を用いることによって組み立てられてもよい（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。制限酵素消化及びライゲーションは、ＤＮＡの２つの断片をつなぐために用いられる基本的なステップである。ＤＮＡ断片の端は、ライゲーションの前に修飾を必要としてもよく、これは、オーバーハングの充填、ヌクレアーゼ（例えばＥｘｏＩＩＩ）による断片の端末部分の欠失、部位特異的変異誘発によって、又はＰＣＲによる新たな塩基対の追加によって達成されてもよい。ポリリンカー及びアダプターは、選択された断片をつなぐのを容易にするために用いられてもよい。発現構築物は、典型的に、制限、ライゲーション、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の形質転換を一巡して、段階的に組み立てられる。

発現構築物の構築に適した非常に多くのクローニングベクターが、当技術分野において知られている（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９９において挙げられるλＺＡＰ及びｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ ＳＫ－１、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、 ｐＥＴ、Ｎｏｖａｇｅｎ Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）。クローニングベクターの選択は、宿主細胞の中への発現構築物の導入のために選択される遺伝子導入系によって影響を与えられる。各段階の終わりに、結果として生じる構築物は、制限、ＤＮＡ配列、ハイブリダイゼーション、及びＰＣＲ解析によって解析されてもよい。

発現構築物は、線状若しくは環状のクローニングベクター構築物として宿主に形質転換されてもよい又はクローニングベクターから取り出され、そのまま使用されてもよい若しくは送達ベクターに導入されてもよい。送達ベクターは、選択された宿主細胞型における発現構築物の導入及び維持を容易にする。発現構築物は、多くの既知の遺伝子導入系のいずれかによって宿主細胞の中に導入される（例えば、自然の受容能、化学的に媒介される形質転換、プロトプラスト形質転換、エレクトロポレーション、微粒子銃形質転換、トランスフェクション、又はコンジュゲーション）（Ａｕｓｕｂｅｌ又はＳａｍｂｒｏｏｋ、前掲を参照されたい）。選択される遺伝子導入系は、使用される宿主細胞及びベクター系に依存する。

標準的なタンパク質精製技術は、培地から又は収集された細胞から、興味があるトラップ分子タンパク質を単離するために使用することができる。特に、精製技術は、ローラーボトル、スピナーフラスコ、組織培養プレート、バイオリアクター、又は発酵槽を含め種々に実施して、所望の融合タンパク質を大規模に（すなわち、少なくともミリグラム量で）発現させ、精製するために使用することができる。

発現されたトラップタンパク質は、既知の方法によって単離し、精製することができる。典型的に、培養培地は、遠心分離され又はろ過され、次いで、上清は、アフィニティー若しくはイムノアフィニティークロマトグラフィー、例えばプロテインＡ若しくはプロテインＧアフィニティークロマトグラフィー又は抗体若しくは発現されたトラップ分子に結合する他の結合分子の使用を含むイムノアフィニティープロトコールによって精製される。トラップ分子は、既知の技術の適切な組み合わせによって分離し、精製することができる。これらの方法は、例えば、塩析沈殿及び溶媒沈殿などの溶解度を利用する方法、透析、限外ろ過、ゲルろ過、及びＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動などの分子量における差異を利用する方法、イオン交換カラムクロマトグラフィーなどの電荷における差異を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的な親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性における差異を利用する方法、及び等電点電気泳動などの等電点における差異を利用する方法、Ｎｉ－ＮＴＡなどの金属アフィニティーカラムを含む。一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ又はＡｕｓｕｂｅｌ、前掲を参照されたい。

トラップ分子は、有利には、実質的に純粋である。すなわち、融合タンパク質は、自然に伴う細胞置換基（ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）から単離されており、その結果、融合タンパク質は、好ましくは、少なくとも８０％又は９０％～９５％の均質性（ｗ／ｗ）で存在する。少なくとも９８～９９％の均質性（ｗ／ｗ）を有する融合タンパク質は、多くの医薬、臨床、及びリサーチでの適用にとって最も好ましい。一度実質的に精製されたら、融合タンパク質は、治療上の適用にとっての混入物が実質的に取り除かれているはずである。一度部分的に又は実質的に純粋に精製されたら、可溶性融合タンパク質は、治療上又は本明細書において開示されるインビトロ若しくはインビボアッセイを実行する際に使用することができる。実質的な純度は、クロマトグラフィー及びゲル電気泳動などの種々の標準的な技術によって決定することができる。

薬物治療
治療薬として使用するためのトラップ分子を含有する医薬組成物が、提供される。トラップ分子は、タンパク質治療薬として投与することができる又はＴＧＦに依存して宿主細胞からインサイツにおいて分泌によって提供されてもよい。

一態様において、トラップ分子は、全身投与される、例えば、生理食塩水などの薬学的に許容される緩衝液において製剤される。好ましい投与ルートは、例えば、患者において組成物の継続的な、持続性の、又は有効なレベルを提供する、膀胱の中への注入、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、又は皮内注射を含む。ヒト患者又は他の動物の治療は、生理学的に許容されるキャリアにおいて本明細書において特定される治療有効量の治療薬を使用して実行される。適したキャリア及びそれらの製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎにおいて記載される。

投与される治療剤の量は、投与の方式、患者の年齢、及び体重に依存して並びに新生物の臨床症状により変動する。例えば、投薬量は、約１μｇトラップ／体重１ｋｇ～約５０００ｍｇトラップ／体重１ｋｇの間で；又は約５ｍｇ／体重１ｋｇ～約４，０００ｍｇ／体重１ｋｇ又は約１０ｍｇ／体重１ｋｇ～約３，０００ｍｇ／体重１ｋｇ；又は約５０ｍｇ／体重１ｋｇ～約２０００ｍｇ／体重１ｋｇ；又は約１００ｍｇ／体重１ｋｇ～約１０００ｍｇ／体重１ｋｇ；又は約１５０ｍｇ／体重１ｋｇ～約５００ｍｇ／体重１ｋｇで変動してもよい。例えば、用量は、約１、５、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１，０００、１，０５０、１，１００、１，１５０、１，２００、１，２５０、１，３００、１，３５０、１，４００、１，４５０、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、４，０００、４，５００、又は５，０００ｍｇ／体重１ｋｇである。その代わりに、用量は、約５ｍｇ化合物／体重１ｋｇ～約２０ｍｇ化合物／体重１ｋｇの範囲にある。別の実施例において、用量は、約８、１０、１２、１４、１６、又は１８ｍｇ／体重１ｋｇである。好ましくは、トラップ分子は、０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．５、１、３、５、１０ｍｇ／ｋｇ）で投与される。ある実施形態において、トラップは、当業者に知られている方法によって決定されるように、対象の免疫反応を増強する又は新生物、感染、若しくは自己免疫細胞の増殖、生存、若しくは侵襲性を低下させる投薬量で投与される。

上記に記載される通り、ＴＧＦ－βに依存してトラップ分子を分泌する宿主細胞は、患者に投与することができる。細胞は、静脈内若しくは腹腔内注入を介して又は当技術分野において知られている他の方法によって、例えば、固形腫瘍若しくは他の病変の中へ直接的な注射によって送達することができる。ある実施形態において、少なくとも１０^３の細胞、例えば少なくとも１０^４、少なくとも１０^５、少なくとも１０^６、少なくとも１０^７、少なくとも１０^８、又は少なくとも１０^９の細胞が、患者に投与されるであろう。

医薬組成物の製剤
トラップ分子の投与は、他の構成成分と組み合わせて、ＴＧＦ－β活性を阻害する際に有効である治療薬の濃度をもたらす任意の適した方法によるものであってもよい。トラップ分子は、任意の適したキャリア物質において任意の適切な量で含有されてもよく、一般に、組成物の総重量の１～９５重量％の量で存在する（例えば少なくとも１０％ｗ／ｗ、少なくとも１５％ｗ／ｗ、少なくとも２０％ｗ／ｗ、少なくとも２５％ｗ／ｗ、少なくとも３０％ｗ／ｗ。少なくとも４０％ｗ／ｗ、少なくとも５０％ｗ／ｗ、少なくとも６０％ｗ／ｗ、少なくとも７０％ｗ／ｗ。少なくとも７５％のｗ／ｗ、少なくとも８０％ｗ／ｗ、少なくとも８５％ｗ／ｗ、少なくとも９０％ｗ／ｗ、及び９５％ｗ／ｗ又は約９５％ｗ／ｗ）。組成物は、非経口（例えば皮下、静脈内、筋肉内、膀胱内、腫瘍内、又は腹腔内）投与ルートに適している剤形で提供されてもよい。例えば、医薬組成物は、従来の薬務に従って製剤される（例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ ｅｄ．），ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００及びＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ ａｎｄ Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８－１９９９，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。

当業者が、動物モデルと比較してヒトについての投薬量を変えることは、当技術分野において通常のことであると認識するように、ヒトへの投薬の量は、マウス又は非ヒト霊長類において使用される化合物の量から推定することによって最初に決定される。例えば、投薬量は、約１μｇ化合物／体重１ｋｇ～約５０００ｍｇ化合物／体重１ｋｇの間；又は約５ｍｇ／体重１ｋｇ～約４，０００ｍｇ／体重１ｋｇ又は約１０ｍｇ／体重１ｋｇ～約３，０００ｍｇ／体重１ｋｇ；又は約５０ｍｇ／体重１ｋｇ～約２０００ｍｇ／体重１ｋｇ；又は約１００ｍｇ／体重１ｋｇ～約１０００ｍｇ／体重１ｋｇ；又は約１５０ｍｇ／体重１ｋｇ～約５００ｍｇ／体重１ｋｇで変動してもよい。例えば、用量は、約１、５、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１，０００、１，０５０、１，１００、１，１５０、１，２００、１，２５０、１，３００、１，３５０、１，４００、１，４５０、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、３，０００、３，５００、４，０００、４，５００、又は５，０００ｍｇ／体重１ｋｇである。その代わりに、用量は、約５ｍｇ化合物／体重１Ｋｇ～約２０ｍｇ化合物／体重１ｋｇの範囲にある。別の実施例において、用量は、約８、１０、１２、１４、１６、又は１８ｍｇ／体重１ｋｇである。好ましくは、トラップ分子は、０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．５、１、３、５、１０ｍｇ／ｋｇ）で投与される。当然、この投薬の量は、このような治療プロトコールにおいて、最初の治験の結果及び特定の患者の必要に依存して、通常行われているように、上又は下に調整されてもよい。

ある実施形態において、本明細書において記載されるトラップ分子は、適切な賦形剤と共に、投与と同時にトラップ分子を制御放出する医薬組成物に製剤することができる。例として、単一の又は複数単位の錠剤又はカプセル組成物、油剤、懸濁剤、エマルション、マイクロカプセル、マイクロスフェア、分子複合体、ナノ粒子、パッチ、及びリポソームを含む。好ましくは、トラップ分子は、非経口投与に適した賦形剤において製剤される。

非経口組成物
トラップ分子を含む医薬組成物は、注射、注入、又は移植（皮下、静脈内、筋肉内、腫瘍内、膀胱内、腹腔内）によって、従来の無毒性の薬学的に許容されるキャリア及び補助薬を含有する剤形、製剤において、又は適した送達デバイス若しくは移植片を介して、非経口的に投与されてもよい。このような組成物の製剤及び調製は、医薬製剤の当業者によく知られている。製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、前掲において見つけることができる。非経口使用のためのトラップ分子を含む組成物は、単位剤形において（例えば単回用量のアンプルにおいて）提供される。その代わりに、組成物は、数回の用量を含有し、適した防腐剤が追加されてもよいバイアルにおいて提供される。組成物は、水剤、懸濁剤、エマルション、注入デバイス、若しくは移植のための送達デバイスの形態をしている又は組成物は、使用の前に、水若しくは他の適したビヒクルにより元に戻される乾燥粉剤として与えられる。組成物は、適した非経口的に許容されるキャリア及び／又は賦形剤を含んでいてもよい並びに懸濁化剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、及び／又は分散剤を含んでいてもよい。

上記に示されるように、トラップ分子を含有する医薬組成物は、無菌注射に適した形態をしていてもよい。このような組成物を調製するために、トラップ分子は、非経口的に許容される液体ビヒクル中に溶解される又は懸濁される。用いられてもよい許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、適切な量の塩酸の追加によって適したｐＨに調整される水、水酸化ナトリウム又は適した緩衝液、１，３－ブタンジオール、リンゲル液、並びに等張塩化ナトリウム溶液及びブドウ糖溶液がある。水性製剤はまた、１つ以上の防腐剤（例えばｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル、エチル、又はｎ－プロピル）を含有してもよい。化合物の１つがほんのわずかに又はわずかに水に可溶性である場合、溶解増強剤若しくは可溶化剤を追加することができる又は溶媒は、１０～６０％ｗ／ｗのプロピレングリコールを含んでいてもよい。

本開示は、ＴＧＦ－β活性を阻害するための或いは新生物、感染症、若しくは自己免疫疾患又はその症状を治療するための方法であって、対象（例えばヒトなどの哺乳類）に、本明細書において記載されるトラップ分子を含む医薬組成物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。従って、一実施形態は、新生物、感染症、若しくは自己免疫疾患又はその症状に罹患している又は罹りやすい対象を治療するための方法である。方法は、疾患又は障害が治療される条件下で、疾患若しくは障害又はその症状を治療するのに十分なトラップ分子の量の治療量を哺乳類に投与するステップを含む。腫瘍成長を遅延させる又は阻害するなどの所望の治療上の利益を提供する程度まで、患者又は対象におけるＴＧＦ－β活性を阻害するのに十分なトラップ分子の量を哺乳類に投与することによって、ＴＧＦ－β活性を阻害するための方法もまた、提供される。このような治療を必要とする対象を特定することは、対象又は医療従事者の判断によるものとすることができ、主観的（例えば見解）又は客観的（例えば検査若しくは診断方法によって測定可能な）なものとすることができる。

治療方法及び予防方法は、哺乳類、特にヒトを含む、それを必要とする対象（例えば動物、ヒト）への治療有効量のトラップ分子の投与を一般に含む。このような治療は、ＴＧＦ－β活性を阻害することが望ましい対象、特にヒトに適切に投与されるであろう。このような患者は、新生物、感染症、自己免疫疾患、障害、又はその症状に罹患していてもよい、有していてもよい、若しくは罹りやすくてもよい又は危険性があってもよい。「危険性がある」対象の決定は、任意の客観的な又は主観的な決定によって、診断検査又は対象若しくは医療提供者の見解によってなすことができる（例えば遺伝子検査、酵素又はタンパク質マーカー、バイオマーカー、家族歴、及びその他同種のもの）。トラップ分子は、ＴＧＦ－β活性の減少が所望される任意の他の障害の治療において使用されてもよい。

治療進行をモニターするための方法もまた、提供される。方法は、例えば、対象における診断マーカーのレベル又は診断測定値（例えばＴＧＦ－βレベル）を決定することを含み、対象は、治療量のトラップ分子又はトラップ分子を分泌する宿主細胞が投与されている。

方法において決定される診断マーカーのレベル又は測定値は、対象の疾患ステータスを確定するために、健康な正常のコントロールにおける又は他の罹病患者におけるマーカーの既知のレベルと比較することができる。いくつかの場合において、対象におけるマーカーの第２のレベルは、第１のレベルの決定よりも後の時点で決定され、２つのレベルは、疾患の経過又は療法の有効性をモニターするために比較される。ある態様において、対象におけるマーカーの治療前のレベルは、本明細書において開示される方法に従って、治療を始める前に決定され、マーカーについてのこの治療前のレベルは、次いで、治療の有効性を決定するために、治療が始まった後の対象におけるマーカーのレベルと比較することができる。

組み合わせ療法
任意選択で、トラップ分子は、任意の他の標準的な療法と組み合わせて投与される；このような方法は、当業者に知られており、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎにおいて記載される。所望される場合、トラップ分子は、任意の従来の抗新生物療法又は免疫療法、治療抗体、標的治療、手術、放射線療法、若しくは化学療法を含むがこれらに限定されない他の療法と組み合わせて投与される。

キット又は製剤系
トラップ分子又はトラップ分子を発現する宿主細胞を含む医薬組成物は、対象又は患者におけるＴＧＦ－βを阻害し、それによって、新生物、感染症、又は自己免疫疾患などの疾患を寛解させるのに使用するためのキット又は製剤系にまとめられてもよい。キット又は製剤系は、ボックス、カートン、チューブなどのキャリアを含み、バイアル、チューブ、アンプル、瓶、及びその他同種のものなどの１つ以上の容器がその中に密封されていてもよい。キット又は製剤系はまた、トラップ分子を使用するための関連する指示書を含んでいてもよい。

定義
「寛解させる」は、疾患の発生又は進行を減少させる、抑制する、軽減する、小さくする、抑える、又は安定化することを意味する。

「類似体」は、同一ではないが、類似した機能的又は構造的特徴を有する分子である。例えば、ポリペプチド類似体は、対応する天然に存在するポリペプチドの生物学的活性を保持し、天然に存在するポリペプチドに比べて類似体の機能を増強するある生化学的修飾を有する。このような生化学的修飾は、例えばリガンド結合性を改変することなく、類似体のプロテアーゼ抵抗性、膜透過性、又は半減期を増加させることができる。類似体は、非天然のアミノ酸を含んでいてもよい。

分子への「結合」は、その分子に対する物理化学的親和性を有することを意味する。

「検出する」は、分析物の存在、不在、又は量を特定することを指す。

「疾患」は、細胞、組織、又は器官の正常な機能を損傷する又は干渉する任意の状態又は障害を意味する。疾患の例は、新生物、自己免疫反応、及びウイルス感染症を含む。

製剤又は製剤構成成分の「有効量」及び「治療有効量」という用語によって、所望される効果を提供するための、単独の又は組み合わせの、製剤又は構成成分の十分な量を意味する。例えば、「有効量」によって、未治療の患者に比べて疾患の症状を寛解させるのに必要とされる、単独の又は組み合わせの、化合物の量を意味する。疾患の治療処置のために本明細書において開示される方法を実施するために使用される活性化合物の有効量は、投与の様式、対象の年齢、体重、及び健康状態に依存して変動する。最終的に、主治医又は獣医が、適切な量及び投与計画を決めるであろう。このような量は、「有効」量と称される。

用語「単離された」、「精製された」、又は「生物学的に純粋な」は、程度はさまざまであるが、自然の状態で見つけられるように、通常伴う構成成分が取り除かれている物質を指す。「単離する」は、本来の供給源又は環境からの分離の程度を意味する。「精製する」は、単離よりも高い分離の程度を意味する。

「精製された」又は「生物学的に純粋な」タンパク質は、他の物質が十分に取り除かれており、いかなる不純物も、物質的にタンパク質の生物学的特性に影響を及ぼさない又は他の有害な結果を引き起こさない。すなわち、本明細書において記載される核酸又はペプチドは、組換えＤＮＡ技術によって産生される場合に、細胞性の物質、ウイルス性の物質、若しくは培養培地又は化学的に合成される場合に、化学的前駆体若しくは他の化学物質が実質的に取り除かれているのであれば、精製されている。純度及び均質性は、典型的に、分析化学の技術、例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。用語「精製された」は、核酸又はタンパク質が、電気泳動ゲル中に本質的に１つバンドを生じることを意味することができる。修飾、例えばリン酸化又はグリコシル化にかけることができるタンパク質については、様々な修飾によって、様々な単離タンパク質を生じてもよく、これらは、別々に精製することができる。

同様に、「実質的に純粋な」によって、自然に伴う構成成分から分離されたヌクレオチド又はポリペプチドを意味する。典型的に、ヌクレオチド及びポリペプチドは、少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％、又はさらに９９重量％、自然に関連するタンパク質及び天然に存在する有機分子が取り除かれている場合、実質的に純粋である。

「単離核酸」によって、核酸が由来する生物の天然に存在するゲノムにおいて側面に位置するヌクレオチドが取り除かれている核酸を意味する。この用語は、例えば、以下を包含する：（ａ）天然に存在するゲノムＤＮＡ分子の一部であるが、生物中に天然に存在するゲノムにおいて分子のその部分の側面に位置する核酸配列の両方が側面に位置するというわけではないＤＮＡ；（ｂ）結果として生じる分子がいかなる天然に存在するベクター又はゲノムＤＮＡとも同一にならないように、ベクターに又は原核生物若しくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれる核酸；（ｃ）ｃＤＮＡ、ゲノム断片、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって産生される断片、又は制限断片などの分離した分子；及び（ｄ）ハイブリッド遺伝子、すなわち、融合タンパク質をコードする遺伝子の一部である組換えヌクレオチド配列。本開示による単離核酸分子は、合成して産生された分子並びに化学的に改変された及び／又は修飾された骨格を有する、任意の核酸をさらに含む。例えば、単離核酸は、精製されたｃＤＮＡ又はＲＮＡポリヌクレオチドである。単離核酸分子はまた、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）分子も含む。

「単離ポリペプチド」によって、自然に伴う構成成分から分離されたポリペプチドを意味する。典型的に、ポリペプチドは、自然に関連するタンパク質及び天然に存在する有機分子が少なくとも６０重量％取り除かれている場合、単離されている。好ましくは、調製物は、少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、及び最も好ましくは少なくとも９９重量％、ポリペプチドである。単離ポリペプチドは、例えば、天然の供給源からの抽出によって、このようなポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって；又はタンパク質を化学的に合成することによって得られてもよい。純度は、任意の適切な方法、例えばカラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって又はＨＰＬＣ分析によって測定することができる。

「マーカー」によって、疾患又は障害と関連する発現レベル又は活性において改変を有する任意のタンパク質又はポリヌクレオチド又は他の分子を意味する。

「新生物」によって、過剰な増殖によって特徴づけられる疾患又は障害を意味する。本明細書において開示されるトラップ分子を使用することができる例証となる新生物は、白血病（例えば急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、並びに肉腫及び癌腫などの固形腫瘍（例えば線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮がん、基底細胞がん、腺がん、汗腺がん、脂腺がん、乳頭状がん、乳頭状腺がん、嚢胞腺がん、髄様がん、気管支原性がん、腎細胞がん、肝がん、胆管がん、絨毛がん、セミノーマ、胎児性がん、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、上皮がん、神経膠腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起膠細胞腫、シュワン細胞腫、髄膜腫、黒色腫神経芽細胞腫、及び網膜芽細胞腫）を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、新生物は、多発性骨髄腫、ベータ細胞リンパ腫、尿路上皮／膀胱がん、又は黒色腫である。本明細書において使用されるように、「作用物質を得ること」のような「得ること」は、作用物質を合成すること、購入すること、又は入手することを含む。

「低下させる」は、少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又はさらに１００％、小さくすることを意味する。

「参照」は、標準又はコントロール条件を意味する。

「参照配列」は、配列比較のための基準として使用される明確な配列である。参照配列は、特定の配列のサブセット又はその全体であってもよい；例えば、完全長ｃＤＮＡ若しくは遺伝子配列のセグメント又は完全なｃＤＮＡ若しくは遺伝子配列。ポリペプチドについては、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に、少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは少なくとも約２０アミノ酸、より好ましくは少なくとも約２５アミノ酸、及びさらにより好ましくは約３５アミノ酸、約５０アミノ酸、又は約１００アミノ酸であろう。核酸については、参照核酸配列の長さは、一般に、少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約７５ヌクレオチド、及びさらにより好ましくは約１００ヌクレオチド又は約３００ヌクレオチド又はその辺りの若しくはその間の任意の整数であろう。

「特異的に結合する」は、ポリペプチドを認識して、結合するが、自然にポリペプチドを含むサンプル、例えば生物学的サンプル中の他の分子を実質的には認識せず、結合しない化合物又は抗体を意味する。

本明細書において開示される方法において有用な核酸分子は、ポリペプチドをコードする任意の核酸分子又はその断片を含む。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一である必要はないが、典型的に、実質的な同一性を呈する。内在性配列に対して「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることが可能である。本明細書において開示される方法において有用な核酸分子は、ポリペプチドをコードする任意の核酸分子又はその断片を含む。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一である必要はないが、典型的に、実質的な同一性を呈する。内在性配列に対して「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズする」によって、ストリンジェンシーについての種々の条件下で、相補的なポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書において記載される遺伝子）又はその部分の間で二本鎖分子を形成する対を意味する。（例えばＷａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照されたい）。

例えば、ストリンジェントな塩濃度は、普通、約７５０ｍＭ ＮａＣｌ及び７５ｍＭクエン酸三ナトリウム未満、好ましくは約５００ｍＭ ＮａＣｌ及び５０ｍＭクエン酸三ナトリウム未満、並びにより好ましくは約２５０ｍＭ ＮａＣｌ及び２５ｍＭクエン酸三ナトリウム未満であろう。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えばホルムアミドの非存在下において得ることができるが、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、より好ましくは少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下において得ることができる。ストリンジェントな温度条件は、普通、少なくとも約３０℃、より好ましくは少なくとも約３７℃、及び最も好ましくは少なくとも約４２℃の温度を含む。ハイブリダイゼーション時間、洗剤、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、及びキャリアＤＮＡの包含又は除外などのさまざまな追加のパラメーターは、当業者らによく知られている。ストリンジェンシーの種々のレベルは、必要に応じてこれらの種々の条件を組み合わせることによって達成される。好ましい実施形態において、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム、及び１％ＳＤＳにおいて３０℃で行われるであろう。より好ましい実施態様において、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、３５％ホルムアミド、及び１００．ｍｕ．ｇ／ｍｌ変性サケ***ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）において３７℃で行われるであろう。最も好ましい実施形態において、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、及び２００μｇ／ｍｌ ｓｓＤＮＡにおいて４２℃で行われるであろう。これらの条件に対する有用な変更は、当業者らに容易に明らかになるであろう。

ほとんどの適用について、ハイブリダイゼーションに続く洗浄ステップもまた、ストリンジェンシーが変動するであろう。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度によって及び温度によって定義することができる。上記のように、洗浄ストリンジェンシーは、塩濃度を減少させることによって又は温度を増加させることによって増加させることができる。例えば、洗浄ステップについてのストリンジェントな塩濃度は、好ましくは、約３０ｍＭ ＮａＣｌ及び３ｍＭクエン酸三ナトリウム未満並びに最も好ましくは約１５ｍＭ ＮａＣｌ及び１．５ｍＭクエン酸三ナトリウム未満であろう。洗浄ステップについてのストリンジェントな温度条件は、普通、少なくとも約２５℃、より好ましくは少なくとも約４２℃、及びさらにより好ましくは少なくとも約６８℃の温度を含むであろう。好ましい実施形態において、洗浄ステップは、３０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭクエン酸三ナトリウム、及び０．１％ＳＤＳにおいて２５℃で行われるであろう。より好ましい実施態様において、洗浄ステップは、１５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウム、及び０．１％ＳＤＳにおいて４２Ｃで行われるであろう。より好ましい実施形態において、洗浄ステップは、１５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウム、及び０．１％ＳＤＳにおいて６８℃で行われるであろう。これらの条件に対する追加の変更は、当業者らに容易に明らかになるであろう。ハイブリダイゼーション技術は、当業者らによく知られており、例えばＢｅｎｔｏｎ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ １９６：１８０，１９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｈｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｍｅｌ（Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；及びＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおいて記載される。

ポリペプチド又は核酸分子は、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書において記載されるアミノ酸配列のいずれか１つ）又は核酸配列（例えば、本明細書において記載される核酸配列のいずれか１つ）に対して少なくとも５０％の同一性を呈する場合、「実質的に同一である」。好ましくは、このような配列は、比較のために使用される配列に対して、アミノ酸レベル又は核酸で、少なくとも６０％、より好ましくは８０％又は８５％、より好ましくは９０％、９５％、又はさらに９９％同一である。２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関する用語「同一の」又は「同一性」パーセントは、比較ウインドウ上で比較され、一致が最大となるようにアラインメントされる場合に、同じである又は同じである特定のパーセンテージのアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する、２つ以上の配列又はサブ配列を指す。本開示の目的のためのアミノ酸又は核酸配列同一性の程度は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０において記載されるＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して決定され、これは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ウェブアドレスｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）によって提供されるソフトウェアを通して公的に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列における同じ長さのワードとアラインメントされた場合にマッチする又はいくらか正の値の閾値スコアＴを満たす、問い合わせ配列における長さＷのショートワードを特定することによって、高スコアリング配列対（ＨＳＰＳ）を特定する。Ｔは、隣接ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、前掲）。最初の隣接ワードヒットは、それらを含有するより長いＨＳＰを見つけるために検索を開始するためのシードの働きをする。次いで、ワードヒットは、累積アライメントスコアが増加し得る限り、それぞれの配列に沿って両方向に拡張される。累積スコアは、パラメーターＭ（マッチする残基の対についてのリワードスコア；常に＞０）及びＮ（ミスマッチする残基についてのペナルティースコア；常に＜０）を使用してヌクレオチド配列について計算される。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスが、累積スコアを計算するために使用される。それぞれの方向におけるワードヒットの拡張は、累積アライメントスコアが、その最大達成値から数量Ｘ下がる；累積スコアが、１つ以上の負のスコアリング残基アライメントの蓄積により０若しくはそれ未満になる；又は一方の配列の末端部に到達する場合に停止する。アミノ酸配列又は核酸配列の同一性パーセントを決定するために、ＢＬＡＳＴプログラムのデフォルトパラメーターを使用することができる。アミノ酸配列の解析については、ＢＬＡＳＴＰデフォルトは、以下の通りである：ワード長（Ｗ）、３；期待値（Ｅ）、１０；及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス。核酸配列の解析については、ＢＬＡＳＴＮプログラムのデフォルトは、ワード長（Ｗ）、１１；期待値（Ｅ）、１０；Ｍ＝５；Ｎ＝－４；及び両方の鎖の比較である。ＴＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列データベースに問い合わせるためにタンパク質配列を使用する）は、デフォルトとして３のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、及びＢＬＯＳＵＭ ６２スコアリングマトリックスを使用する。（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照されたい）。

配列同一性パーセントの計算に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列の間の類似性の統計分析も実行する（例えばＫａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－８７を参照されたい）。最小確率和（ｔｈｅ ｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕｍ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））は、２つのヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の間のマッチが偶然起こるであろう確率の指標を提供する。例えば、参照核酸に対する試験核酸の比較における最小確率和が約０．０１未満である場合、核酸は、参照配列に類似しているとみなされる。

用語「治療すること」及び「治療」は、症状の重症度及び／若しくは頻度における低下に影響を及ぼすための、症状及び／若しくはそれらの根底にある原因を排除するための、並びに／又は損傷の改善若しくは回復を容易にするための、有害な状態、障害、又は疾患に罹病している臨床症状を示す個人への作用物質又は製剤の投与を指す。除外するわけではないが、障害又は状態を治療することは、障害、状態、又はそれに関連する症状が完全に排除されることを必要とするものではないことが十分に理解されるであろう。

用語「予防すること」及び「予防」は、特定の有害な状態、障害、又は疾患に罹りやすい又は素因のある、臨床症状を示さない個人への作用物質又は組成物の投与を指し、従って、症状及び／又はそれらの根底にある原因の発生の予防に関する。

詳細に述べられない又は文脈から明らかでない限り、本明細書において使用されるように、用語「又は（ｏｒ）」は、包括的であることが理解される。詳細に述べられない又は文脈から明らかでない限り、本明細書において使用されるように、用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、単数又は複数であることが理解される。

詳細に述べられない又は文脈から明らかでない限り、本明細書において使用されるように、用語「約」は、当技術分野において通常許容される範囲内、例えば、平均の２標準偏差内として理解される。「約」は、所定の値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％内として理解することができる。

以下の実施例は、アッセイ、スクリーニング、及び治療方法を組み立てて、使用する方法について完全な開示及び説明を当業者らに提供するために示される。これらの実施例は、本明細書において主張される本発明の範囲を限定することを意図するものではない。

材料及び方法：
ＴＧＦ－βレポーター細胞株．ＴＧＦ－β反応性の安定した細胞株は、メーカー推奨のプロトコールに従ってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅを使用して、ＴＧＦ－β反応エレメントによって駆動されるルシフェラーゼを含有する発現プラスミドであるｐＧＬ４．２８（Ｐｒｏｍｅｇａ）をＨＥＫ－２９３Ｔ細胞にトランスフェクトすることによって作製した。トランスフェクト細胞は、２ヵ月間、ハイグロマイシンを使用して選択した。

トランスフェクション．ＴＧＦ－βトラップ構築物は、ＴＧＦ－βレポーター２９３Ｔ細胞株に、推奨されるプロトコールを使用して、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で一過性にトランスフェクトし、次いで、一晩インキュベートした。細胞は、次いで、１８時間、図に示す濃度で、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、又はマウスＴＧＦ－β１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）により刺激した。刺激後、反応は、推奨されるプロトコールに従って、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してアッセイした。

ＩｇＧ力価測定：ＴＧＦ－βトラップＩｇＧ融合物の力価は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６機でプロテインＡバイオセンサーを使用して測定した。ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞に、ＴＧＦ－βトラップ構築物をトランスフェクトし、１８時間インキュベートし、次いで、細胞培養上清を、収集し、濃縮した。濃縮した上清を、２００μｌの最終容量まで、１×ＰＢＳ中で１０倍に希釈し、９６ウェルプレート中に置いた。プロテインＡバイオセンサーは、測定の前に１０分間、１×ＰＢＳ中でインキュベートした。アッセイは、２５℃で実行して、読み取り、各サンプルのＩｇＧ濃度は、ＰＢＳ中に希釈した精製抗体の既知の濃度で生成した検量線と比較することによって決定した。

実施例１：恒常的に活性なＴＧＦ－βトラップ構築物によるＴＧＦ－β反応の阻害
ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型発現構築物をトランスフェクトし、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃドメイン（Ｆｃ）、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを比較した。（配列番号１５、１７、１９、及び２１；配列番号１４、１６、１８、及び２０の対応するＤＮＡ配列を有する）。細胞は、一晩インキュベートし、洗浄し、示す濃度のＴＧＦ－βにより刺激した。結果として生じるルシフェラーゼ活性は、１８時間後に測定した。図１Ａ及び１Ｂにおいて示されるデータは、トラップ構築物が、低レベル（０～１ｎｇ／ｍｌ）でＴＧＦ－βを阻害したが、修飾ヒンジを有する構築物だけが、高濃度で有効であったことを実証する。

実施例２：ＴＧＦ－β誘導性トラップ構築物によるＴＧＦ－β反応の阻害
ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃドメイン（Ｆｃ）、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを比較した。（配列番号７、９、１１、及び１３；配列番号６、８、１０、及び１２の対応するＤＮＡ配列を有する）。細胞は、一晩インキュベートし、洗浄し、示す濃度のＴＧＦ－βにより刺激した。結果として生じるルシフェラーゼ活性は、１８時間後に測定し、データは、図２Ａ及び２Ｂに示す。本来の構築物は、誘導性の形式でＴＧＦ－β活性をブロックすることができなかったが、修飾された構築物は、低濃度（０．１ｎｇ／ｍｌ）で有効であり、中～高濃度（１～１０ｎｇ／ｍｌ）でなお中和活性を実証した。

実施例３：２９３Ｔ－ＴＧＦ－β安定株（ｓｔａｂｌｅ）におけるＴＧＦ－βトラップ発現構築物の試験
ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、Ｓｕｓｈｉドメイン（Ｓｕｓｈｉ）、無修飾ヒンジ（ＡｌｔＨ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなし対修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）、Ｆｃ、ＴＧＦＢＲＩＩ（トラップ）あり又はなしを比べた（配列番号７、１７、１１、及び１３；配列番号６、１６、１０、及び１２の対応するＤＮＡ配列を有する）。細胞は、一晩インキュベートし、洗浄し、示されるように「低濃度帯の」既知濃度のＴＧＦ－βを滴下して刺激した。結果として生じるルシフェラーゼ活性は、２４時間後に測定した。図３において示されるデータは、修飾ヒンジを有する構築物が、非常に有効であることを示した。

実施例４：２９３Ｔ－ＴＧＦ－β安定株におけるＮ－ｔｅｒｍ対Ｃ－ｔｅｒｍ融合ＴＧＦ－βトラップの試験
ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型発現構築物をトランスフェクトし、修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）を有するＣ末端（Ｃ－ｔｅｒｍ）対Ｎ末端（Ｎ－ｔｅｒｍ）ＴＧＦ－βＲＩＩ（トラップ）Ｆｃ融合タンパク質を比較した配列番号１７、２１、及び２３；配列番号１６、２０、及び２２の対応するＤＮＡ配列を有する）。細胞は、一晩インキュベートし、洗浄し、示されるようにＴＧＦ－βにより刺激した。結果として生じるルシフェラーゼ活性は、２４時間後に測定した。図４におけるデータは、Ｃ末端対Ｎ末端融合タンパク質の間で、活性における見分けのつく差異を示さない。

実施例５：ＴＧＦ－βトラップがＴＧＦ－β２を中和することができる能力についての決定
ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型又はＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし、次いで、既知濃度のＴＧＦ－β２を滴下して刺激した。細胞は、一晩インキュベートし、結果として生じるルシフェラーゼ活性は、２４時間後に測定した。図５Ａ及び５Ｂにおけるデータは、ＴＧＦ－β２を阻害する、ＣＭＶ駆動型構築物の部分的な能力及びＴＧＦＢＲＥ駆動型構築物の最小限の能力を示すが、ＴＧＦＢＲＥ駆動型構築物は、ＴＧＦ－β２を中和する、見分けることができる能力を有していなかった。

実施例６：ＴＧＦ－βトラップがマウスＴＧＦ－β２を中和することができる能力についての決定
ＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼを安定して発現する２９３Ｔ細胞株に、ＣＭＶ駆動型又はＴＧＦ－β反応エレメント（ＴＧＦＢＲＥ）駆動型発現構築物をトランスフェクトし（配列番号８及び１６において示されるＤＮＡ配列）、次いで、既知濃度のマウスＴＧＦ－β１（ｍＴＧＦ－β１）を滴下して刺激した。細胞は、一晩インキュベートし、結果として生じるルシフェラーゼ活性は、２４時間後に測定した。図６Ａ及び６Ｂにおいて示されるデータは、ＣＭＶ駆動型及びＴＧＦＢＲＥ駆動型トラップ発現構築物がマウスＴＧＦ－β誘導型ルシフェラーゼ活性を阻害することが可能であったことを示す。

実施例７：ＴＧＦ－β－トラップの産生に対するＳｕｓｈｉドメイン及びヒンジ修飾の効果の決定
２９３Ｔ細胞株に、Ｓｕｓｈｉドメイン及び本来の無修飾ヒンジ配列（ＡｌｔＨ）を含有する、ＡｌｔＨを有するがＳｕｓｈｉドメインを含有しない、又は修飾ヒンジ（（Ｃ２７Ｓ）Ｈ）を有するがＳｕｓｈｉを含有しないＣＭＶ駆動型ＴＧＦＢＲＩＩトラップＦｃ融合タンパク質発現構築物をトランスフェクトした。細胞を休ませ、２４時間、無血清培地中で培養し、結果として生じる上清を濃縮し、ヒトＩｇＧ Ｆｃのレベルを測定した。図７において示されるデータは、Ｓｕｓｈｉなし、Ｃ２７Ｓヒンジ産物が、最も高い濃度を実証したことを示す。

他の実施形態
本発明が、その特定の実施形態への参照により、詳細に示され、記載されたが、形態及び詳細における種々の変更が、添付の特許請求の範囲によって包含される範囲から逸脱することなくなされてもよいことが当業者らに理解されるであろう。
本開示は以下の実施形態を包含する。
[１] トランスフォーミング増殖因子－ベータ受容体２型（ＴＧＦβＲＩＩ）のリガンド結合ドメインに融合された免疫グロブリン定常ドメイン（Ｆｃ）を含むＴＧＦ－βトラップであって、
前記トラップは、Ｓｕｓｈｉドメインを含有しない、及び
前記免疫グロブリンＦｃドメインは、Ｎ末端免疫グロブリンヒンジ領域をさらに含み、前記ヒンジ領域の少なくとも１つの不対システイン残基は、セリン残基によって置き換えられる、ＴＧＦ－βトラップ。
[２] 前記ＴＧＦβＲＩＩは、可動性ペプチドリンカー成分を介して前記Ｆｃ領域に連結される、実施形態１に記載のトラップ。
[３] ＴＧＦβＲＩＩの前記リガンド結合ドメインは、前記可動性ペプチドリンカー成分を介して前記Ｆｃドメインのカルボキシ末端に連結される、実施形態２に記載のトラップ。
[４] ＴＧＦβＲＩＩの前記リガンド結合ドメインは、前記可動性ペプチドリンカー成分を介して前記Ｆｃドメインの前記ヒンジ領域のアミノ末端に連結される、実施形態２に記載のトラップ。
[５] 前記ヒンジ領域のＣ２７残基は、セリン残基によって置き換えられる、実施形態１～４のいずれかに記載のトラップ。
[６] 前記トラップは、構造：ＮＨ２－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＴＧＦβＲＩＩ－ＣＯ２Ｈを有する、実施形態１～３又は５のいずれかに記載のトラップ。
[７] 前記トラップは、構造：ＮＨ２－ＴＧＦβＲＩＩ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－ＣＯ２Ｈを有する、実施形態１、２、４、又は５のいずれかに記載のトラップ。
[８] 前記可動性リンカーは、Ｇ４Ｓリピートを含む、実施形態１～７のいずれかに記載のトラップ。
[９] 前記リンカーは、５つのＧ４Ｓリピートを含む、実施形態８に記載のトラップ。
[１０] 前記トラップは、配列番号２４に対して少なくとも８５％同一な又は配列番号２５に対して少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を含む、実施形態１に記載のトラップ。
[１１] ペプチドシグナル配列は、前記トラップのアミノ末端に融合される、実施形態１～１０のいずれかに記載のトラップ。
[１２] 実施形態１～１１のいずれかに記載のトラップをコードする核酸分子。
[１３] 実施形態１２に記載の核酸を含む発現ベクター。
[１４] 前記核酸は、誘導性プロモーターに作動可能に連結される、実施形態１３に記載のベクター。
[１５] 前記誘導性プロモーターは、ＴＧＦ－β誘導性プロモーターを含む、実施形態１４に記載のベクター。
[１６] 前記核酸は、恒常的に活性であるプロモーターに作動可能に連結される、実施形態１３に記載のベクター。
[１７] 前記恒常的に活性なプロモーターは、ＣＭＶプロモーターである、実施形態１６に記載のベクター。
[１８] 実施形態１３～１７のいずれかに記載のベクターを含む宿主細胞。
[１９] 前記宿主細胞は、ＩＬ－２依存性ナチュラルキラー細胞である、実施形態１８に記載の宿主細胞。
[２０] 対象においてＴＧＦ－βの活性を阻害するための方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０のいずれかに記載のトラップの有効量を投与することを含む方法。
[２１] 対象においてＴＧＦ－βの活性を阻害するための方法であって、有効量の前記ＴＧＦ－βトラップを産生するのに十分な量の、実施形態１８又は１９に記載の宿主細胞を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
[２２] 対象において新生物を治療するための方法であって、実施形態１８又は１９に記載の宿主細胞を含む組成物の治療有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法。
[２３] 前記宿主細胞は、非経口的に、静脈内に、腫瘍周囲に、又は注入によって投与される、実施形態２１又は２２に記載の方法。
[２４] 追加の治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、実施形態２０～２３のいずれかに記載の方法。

Claims (15)

1. トランスフォーミング増殖因子－ベータ受容体２型（ＴＧＦβＲＩＩ）のリガンド結合ドメインに融合された免疫グロブリン定常ドメイン（Ｆｃ）を含むＴＧＦ－βトラップであって、
   前記トラップは、Ｓｕｓｈｉドメインを含有せず、かつ、
   前記免疫グロブリンＦｃドメインは、免疫グロブリンヒンジ領域をさらに含み、前記ヒンジ領域の少なくとも１つの不対システイン残基は、セリン残基によって置き換えられており、
   前記トラップは、ＮＨ_２－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＴＧＦβＲＩＩ－ＣＯＯＨ又はＮＨ _２ －ＴＧＦβＲＩＩ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－ＣＯＯＨなる構造を有し、かつ前記トラップは、配列番号１７、配列番号２４、配列番号２３又は配列番号２５と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、前記ＴＧＦ－βトラップ。
2. 前記トラップが、配列番号１７、配列番号２４、配列番号２３又は配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のトラップ。
3. 請求項１又は２に記載のトラップをコードする核酸分子。
4. 請求項３に記載の核酸を含む発現ベクター。
5. 前記核酸は、誘導性プロモーターに作動可能に連結される、請求項４に記載のベクター。
6. 前記誘導性プロモーターは、ＴＧＦ－β誘導性プロモーターを含む、請求項５に記載のベクター。
7. 前記核酸は、恒常的に活性であるプロモーターに作動可能に連結される、請求項４に記載のベクター。
8. 前記恒常的に活性なプロモーターは、ＣＭＶプロモーターである、請求項７に記載のベクター。
9. 請求項４～８のいずれか一項に記載のベクターを含む宿主細胞。
10. 前記宿主細胞は、ＩＬ－２依存性ナチュラルキラー細胞である、請求項９に記載の宿主細胞。
11. 有効量の請求項１又は２に記載のトラップを含む、対象におけるＴＧＦ－βの活性を阻害するための組成物。
12. 対象においてＴＧＦ－βの活性を阻害するための組成物であって、有効量の前記ＴＧＦ－βトラップを産生するのに十分な量の、請求項９又は１０に記載の宿主細胞を含む組成物。
13. 対象において新生物を治療するための組成物であって、治療有効量の請求項９又は１０に記載の宿主細胞を含む組成物。
14. 前記組成物に含まれる宿主細胞が、非経口的に、静脈内に、腫瘍周囲に、又は注入によって投与されるものである、請求項１２又は１３に記載の組成物。
15. 前記対象に投与されるための追加の治療剤をさらに含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の組成物。

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