JP7353689B2 - バチルス・コアグランス胞子の組成物を利用した有機廃棄物からの乳酸の生成 - Google Patents
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Description
本発明は、乳酸生成細菌バチルス・コアグランスの胞子の乾燥または部分乾燥組成物を利用する、発酵工程により乳酸を生成させるための有機廃棄物の工業的リサイクルに関する。
乳酸発酵、即ち、微生物発酵を介した炭水化物源からの乳酸の生成は、バイオプラスチックの製造において乳酸をビルディングブロックとして使用する能力により、近年になり関心が高まってきた。乳酸は、石油から製造されたプラスチックの潜在的代用物と見なされる生分解可能およびリサイクル可能なポリエステルポリ乳酸(PLA)を形成するために重合され得る。PLAは、食品包装、ディスポーザブル品、織物の繊維および衛生製品業界などをはじめとする様々な製品の製造で用いられる。PLAは、3D印刷において最も広く用いられるプラスチックフィラメント材料である。
本発明は、バチルス・コアグランス胞子の乾燥または部分乾燥組成物を利用する、有機廃棄物をリサイクルして乳酸を工業的規模で生成させるためのシステムおよび方法を提供する。本発明のシステムおよび方法は、乳酸を有機廃棄物管理施設の現場で生成させることが可能であり、生成発酵槽の接種に先立って細胞を発育するための複雑なシードライン(seed lines)および制御された条件を必要としない。
(i)粒子サイズの低減および場合により滅菌を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物を提供すること;
(ii)バチルス・コアグランス胞子の乾燥組成物を提供すること;
(iii)発酵反応器内の前処理された有機廃棄物を1種または複数の糖分解酵素およびB.コアグランス胞子の該乾燥組成物と混合し、発酵反応器内の混合物をインキュベートして有機廃棄物を糖化させ、胞子の発芽を誘導し、次に胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞により乳酸生成を誘導すること;ならびに
(iv)発酵ブロスから乳酸またはその塩を回収すること、
を含む、方法を提供する。
(a)粒子サイズの低減および場合により滅菌を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物の供給源と;
(b)バチルス・コアグランス胞子の乾燥組成物と;
(c)1種または複数の糖分解酵素と;
(d)前処理された有機廃棄物と、1種または複数の糖分解酵素と、B.コアグランス胞子の乾燥組成物と、を内部で混合するための発酵反応器と、
を含み、
該混合物が、発酵反応器内でインキュベートされて有機廃棄物を糖化し、胞子の発芽を誘導し、次に胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞により乳酸生成を誘導する、
システムを提供する。
(a)粒子サイズの低減および場合により滅菌を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物の供給源と;
(b)水酸化マグネシウムスラリーに懸濁されたB.コアグランス胞子の乾燥組成物と;
(c)1種または複数の糖分解酵素と;
(d)前処理された有機廃棄物と、1種または複数の糖分解酵素と、水酸化マグネシウムスラリーに懸濁されたB.コアグランス胞子の乾燥組成物と、を内部で混合するための発酵反応器と、
を含み、
該混合物は、発酵反応器内でインキュベートされて有機廃棄物を糖化し、胞子の発芽を誘導し、次に胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞により乳酸生成を誘導する。
(i)B.コアグランス胞子と、乳酸マグネシウムと、を含む乾燥接種材料を提供すること;
(ii)乾燥接種材料を水酸化マグネシウムスラリーに懸濁させ、それにより微生物汚染物が不活性化されたB.コアグランス胞子懸濁液を得ること;
(iii)発酵反応器内のステップ(ii)で得られた懸濁液を、1種または複数の糖分解酵素、ならびに粒子サイズの低減および場合により滅菌を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物と混合し、インキュベートして有機廃棄物を糖化させ、胞子の発芽を誘導し、次に胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞により乳酸生成を誘導すること;ならびに
(iv)発酵ブロスから乳酸またはその塩を回収すること、
を含む、方法が提供される。
粒子サイズの低減および場合により滅菌を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物を提供すること;
B.コアグランスと、乳酸マグネシウムと、を含むB.コアグランス胞子の乾燥組成物を提供すること;
B.コアグランス胞子の乾燥組成物を水酸化マグネシウムスラリーに懸濁させ、それにより微生物汚染物が不活性化されたB.コアグランス胞子懸濁液を得ること;
発酵反応器内の前処理された有機廃棄物を1種または複数の糖分解酵素およびB.コアグランス胞子懸濁液と混合すること;
発酵反応器内の混合物をインキュベートして有機廃棄物を糖化させ、胞子の発芽を誘導し、次に胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞により乳酸生成を誘導し、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウムおよび炭酸マグネシウムから選択されるアルカリ性化合物がpHを調整するためにインキュベーションの間に発酵反応器に添加され、それによりラクタートモノマーおよびMg2+イオンを得ること;ならびに
発酵ブロスから乳酸マグネシウムを回収すること、
を含む、方法が、提供される。
(i)粒子サイズの低減および場合により滅菌を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物を提供すること;
(ii)15%~30%(w/w)の範囲内の水分量を特徴とする、バチルス・コアグランス胞子の部分乾燥組成物を提供すること;
(iii)発酵反応器内の前処理された有機廃棄物を1種または複数の糖分解酵素およびB.コアグランス胞子の部分乾燥組成物と混合し、発酵反応器内の混合物をインキュベートして有機廃棄物を糖化させ、胞子の発芽を誘導し、次に胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞により乳酸生成を誘導すること;ならびに
(iv)発酵ブロスから乳酸またはその塩を回収すること、
を含む、方法が、提供される。
本発明は、バチルス・コアグランス胞子の乾燥または半乾燥接種材料が用いられる、有機廃棄物からの乳酸の生成のための工業的発酵工程を対象とする。
バチルス・コアグランスは、乳酸、特にL-乳酸を生成させるグラム陽性好熱性通性嫌気性胞子形成細菌である。B.コアグランスは、L-乳酸を生成させる工業的発酵工程のために提案された。B.コアグランスはまた、正常な腸内微生物叢を維持すること、および消化性を改善することが示されており、腸内微生物叢の生態学的バランスおよび正常な消化管機能を維持するプロバイオティクスとして慣例的に販売されている。例えばLactoSpore(登録商標)は、マルトデキストリンと混合されたB.コアグランス胞子の噴霧乾燥粉末を含有する、プロバイオティクスとしての使用を意図したバチルス・コアグランス(MTCC5856)胞子調製物である。
本明細書で用いられる用語「乳酸」は、化学式CH3CH(OH)CO2Hを有するヒドロキシカルボン酸を指す。乳酸またはラクタート(非プロトン化乳酸)という用語は、乳酸、つまりL-乳酸/L-ラクタート、D-乳酸/D-ラクタート、またはそれらの組み合わせの立体異性体を指し得る。
本明細書で用いられる「糖分解酵素」は、ビサッカライド(bi-saccharides)(二糖)、オリゴ糖、多糖およびグリココンジュゲートをはじめとする糖の分解を触媒する加水分解酵素(またはその酵素活性部分)を指す。糖分解酵素は、グリコシドヒドロラーゼ、多糖分解酵素および炭水化物エステラーゼからなる群から選択されてもよい。各可能性は、本発明の別の実施形態を表す。本発明での使用のための糖分解酵素は、食物廃棄物および植物材料をはじめとする有機廃棄物中に見出される糖(多糖など)に対して活性であるものから選択される。幾つかの実施形態において、糖分解酵素は、修飾された酵素(即ち、修飾されていて対応する野生型酵素と異なる酵素)であってもよい。幾つかの実施形態において、修飾としては、酵素の改善された活性をもたらす1つまたは複数の変異を挙げることができる。幾つかの実施形態において、糖分解酵素は、野生型(WT)酵素である。
実施例1
フラスコでの胞子の調製
バチルス・コアグランスを、凍結貯蔵液からLB 5ml(50ml Falcon中)に接種した。52℃、200rpmでの一夜培養の後、200μlを芽胞形成培地25ml(40mMリン酸カリウム pH6.2で緩衝された0.4%酵母エキス)に添加した。培養(52℃、200rpm)の24時間後、試料を胞子数および総数(栄養型細胞および胞子)のために取り出した。
発酵槽での胞子調製
A. LB中で発育した一夜B.コアグランス6mlを、芽胞形成培地300ml(40mMリン酸カリウム pH6.2で緩衝された0.4%酵母エキス)を含有する500ml発酵容器に接種した。胞子発酵の間、10%リン酸を用いてpHを6.5~7.0に維持した。一夜培養(52℃、700rpm、0.3VVM)の後、先に記載された通り試料を胞子数および総数のために取り出した。胞子数は、約5*10∧6~10∧7胞子/mlに達し、同じ総数であり、つまり細菌細胞の実質的に全てが発芽したことになる。
B.コアグランス胞子を用いた乳酸発酵 - 第一のプロトコル
以下の実験は、有機廃棄物(食品廃棄物)中で、好成績で発芽して廃棄物中に存在する糖から乳酸を生成するB.コアグランス胞子の能力をテストした。実験は、B.コアグランス胞子を接種し、次に(3時間後)多糖分解酵素(グルコアミラーゼ)を添加することにより、有機食品廃棄物からの乳酸生成をテストした。この設定では、胞子発芽を発酵槽内部の温度により誘導し(熱活性化)、多糖分解酵素の添加前に有機食品廃棄物中で既に見出されて利用可能な還元糖により支援する。
B.コアグランス胞子を用いた乳酸発酵 - 第二のプロトコル
実験は、スーパーマーケットの不合格品から回収された有機食品廃棄物で実行した。食品廃棄物を粉砕して滅菌した。次に、前処理された食品廃棄物300mLを、B.コアグランス胞子7*10∧4胞子/ml(接種された食品廃棄物中の最終濃度)と共に500mLの発酵槽に接種して、さらに0.5g/Lのグルコアミラーゼと共に混合した。発酵を、52℃、pH6.2で実行した。水酸化マグネシウムを用いて、pHを維持した。グルコースおよびラクタート濃度を、モニタリングした。ラクタート合成は、胞子の添加の4時間後に開始した。合計でわずか23時間後に、73g/Lラクタートが測定された。グルコースの能力(廃棄物から生成され得る最大グルコース量)を対照として別に測定し、72g/Lのグルコースの能力を示した。結果は、グルコースからラクタートへの実質的に完全な変換を示し、GAおよび胞子を同時に食品廃棄物と混合した場合の良好なGA活性(糖化)および良好なB.コアグランス活性(胞子始動およびラクタート生成)の両方が示される。
乾燥された胞子配合物の調製
A. B.コアグランス胞子(CFU 4.2*10∧7胞子/ml、芽胞形成培地:0.4%酵母エキス+40mMリン酸カリウム)を13000g、4℃で30分間遠心分離した。上清除去の後、ペレットを重量測定し、次に乳酸マグネシウム溶液に懸濁させて、乳酸マグネシウム濃度が15~25%(w/w)(組成物の総重量に対する%wt)の範囲内、例えば17%(w/w)である配合物を得た。配合物を80℃で乾燥させて乾燥粉末を得て、室温の暗所に貯蔵した。乳酸マグネシウムを有する乾燥配合物の水分量は、4%~10%w/wの範囲内であった。
半乾燥胞子配合物の調製
B.コアグランス胞子(CFU 4.2*10∧7胞子/ml、芽胞形成培地:0.4%酵母エキス+40mMリン酸カリウム)を13000g、4℃で30分間遠心分離した。上清除去の後、ペレットを重量測定し、次に乳酸マグネシウム溶液に懸濁させて、乳酸マグネシウム濃度が15~25%(w/w)(組成物の総重量に対する%wt)の範囲内、例えば17%(w/w)である組成物を得た。乳酸マグネシウムを有する半乾燥配合物の水分量は、約25%w/wであり、即ち、15%~30w/wの範囲内であった。配合物を、室温の暗所で貯蔵した。先に記載された通り胞子数のために、試料を1日目および7日目に取り出した。
水酸化マグネシウムスラリーへの乾燥胞子配合物の再構成
以下の実験において、B.コアグランス胞子の乾燥配合物を15%Mg(OH)2水性スラリーに懸濁させ、次に15%Mg(OH)2スラリー中で種々のインキュベーション時間、インキュベートした。スラリーは、9.5を超えるpHに達する。インキュベーション後の胞子発芽への影響および微生物汚染物の発育を予防するスラリーの能力を検査した。
B.コアグランス胞子の乾燥配合物を用いた乳酸発酵
A. 新鮮なB.コアグランス胞子、およびB.コアグランス胞子の乾燥配合物(17%乳酸マグネシウム中で乾燥させて滅菌水道水に再懸濁)を用いて、有機廃棄物をラクタートに発酵した。先に記載された実験と同様に、スーパーマーケットの不合格品から回収された有機食品廃棄物で発酵を実行し、粉砕して滅菌した。5*10∧4細菌/mlに達するように、各接種材料を発酵槽に添加した。グルコアミラーゼを、細菌/胞子と共に発酵槽に添加した。発酵を52℃、pH6.2で実行した。水酸化マグネシウムを用いて、pHを維持した。グルコースおよびラクタート濃度をモニタリングした。
様々な配合物中の例示的な胞子濃度
1.胞子の湿性配合物
1.1. 芽胞形成培地中の胞子濃度:少なくとも10∧8胞子/ml(=グラムあたり)
1.2. 15%~25%w/w乳酸マグネシウムを有する芽胞形成培地:少なくとも10∧7胞子/ml(=グラムあたり)
1.3. 15%~25%w/w乳酸カルシウムを有する芽胞形成培地:少なくとも10∧7胞子/ml(=グラムあたり)
2.1.乳酸マグネシウム:毛管水を含む水分量が20%~30%w/wの範囲内である(乾燥なし)
2.2.15%~25%w/w乳酸マグネシウムを有する胞子の半乾燥配合物:少なくとも10∧8胞子/ml(=グラムあたり)
2.3.乳酸カルシウム:毛管水を含む水分量が20%~30%w/wの範囲内である(乾燥なし)
2.4.15%~25%乳酸カルシウムを有する胞子の半乾燥配合物:少なくとも10∧8胞子/ml(=グラムあたり)
3.1.15%~25%乳酸マグネシウムを有する配合物:少なくとも10∧9胞子/グラム
3.2.15%~25%乳酸カルシウムを有する配合物:少なくとも10∧9胞子/グラム
Claims (20)
- 有機廃棄物から乳酸またはその塩を生成させるための方法であって、
(i)粒子サイズの低減を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物を提供するステップ;
(ii)バチルス・コアグランス胞子の乾燥組成物を提供するステップ;
(iii)発酵反応器内の前記前処理された有機廃棄物を1種または複数の糖分解酵素およびB.コアグランス胞子の前記乾燥組成物と混合し、前記発酵反応器内の混合物をインキュベートして前記有機廃棄物を糖化させ、前記胞子の発芽を誘導し、次に前記胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞による乳酸生成を誘導するステップであって、
前記混合物が、少なくとも10^4胞子/mlを含み、
前記1種または複数の糖分解酵素が、C5糖(ペントース)、C6糖(ヘキソース)、またはそれらの組み合わせを含む発酵可能な炭水化物を生成し、
pHを5~7の範囲内に調整するために前記インキュベートの間にアルカリ性化合物が前記発酵反応器内に添加され、
前記インキュベートの間にラクタート濃度がモニタリングされる、ステップ;
ならびに
(iv)発酵ブロスから乳酸またはその塩を回収するステップ、
を含む、方法。 - 前記前処理が、滅菌をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- ステップ(iii)において前記前処理された有機廃棄物との前記混合に先立ってB.コアグランス胞子の前記乾燥組成物を水酸化マグネシウムスラリーに懸濁させ、それにより微生物汚染物が不活性化されたB.コアグランス胞子懸濁液を得ることをさらに含む、請求項1または請求項2に記載の方法。
- B.コアグランス胞子の前記乾燥組成物が、乳酸マグネシウムを含む、
請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。 - B.コアグランス胞子の前記乾燥組成物が、10%w/w以下の水分量を特徴とする、
請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。 - 前記有機廃棄物が、食品廃棄物、農業廃棄物、植物材料およびそれらの混合物または組み合わせからなる群から選択される、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。
- ステップ(iii)の前記インキュベートが、45~60℃の範囲内の温度で実行される、
請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。 - ステップ(iii)の前記インキュベートが、20~48時間の範囲内の期間、実行される、請求項1~7のいずれか1項に記載の方法。
- 前記1種または複数の糖分解酵素が、アミラーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、およびグルコアミラーゼからなる群から選択される多糖分解酵素である、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
- 有機廃棄物から乳酸またはその塩を生成させるためのシステムであって、前記システムが、
(a)粒子サイズの低減を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物の供給源と;
(b)バチルス・コアグランス胞子の乾燥組成物と;
(c)C5糖(ペントース)、C6糖(ヘキソース)、またはそれらの組み合わせを含む発酵可能な炭水化物を生成する、1種または複数の糖分解酵素と;
(d)前記前処理された有機廃棄物と、前記1種または複数の糖分解酵素と、B.コアグランス胞子の前記乾燥組成物と、を内部で混合するための発酵反応器であって、混合物が少なくとも10^4胞子/mlを含む、発酵反応器と、
を含み、
前記混合物が、前記発酵反応器内でインキュベートされて前記有機廃棄物を糖化し、前記胞子の発芽を誘導し、次に前記胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞による乳酸生成を誘導する、
システム。 - 前記前処理が、滅菌をさらに含む、請求項10に記載のシステム。
- 前記システムが、
(a)粒子サイズの低減を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物の供給源と;
(b)水酸化マグネシウムスラリーに懸濁されたB.コアグランス胞子の乾燥組成物と;
(c)C5糖(ペントース)、C6糖(ヘキソース)、またはそれらの組み合わせを含む発酵可能な炭水化物を生成する、1種または複数の糖分解酵素と;
(d)前記前処理された有機廃棄物と、前記1種または複数の糖分解酵素と、水酸化マグネシウムスラリーに懸濁されたB.コアグランス胞子の前記乾燥組成物と、を内部で混合するための発酵反応器であって、混合物が少なくとも10^4胞子/mlを含む、発酵反応器と、
を含み、
前記混合物が、前記発酵反応器内でインキュベートされて前記有機廃棄物を糖化し、前記胞子の発芽を誘導し、次に前記胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞による乳酸生成を誘導する、
請求項10~11のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記前処理が、滅菌をさらに含む、請求項12に記載のシステム。
- バチルス・コアグランスの胞子と、乳酸マグネシウムと、を含む乳酸発酵のための粉末形態の乾燥接種材料であって、乾燥されており、乳酸生成発酵槽に接種する前に胞子の活性化またはコンディショニングを必要としない、乾燥接種材料。
- 前記乾燥接種材料が、10^8~10^10胞子/g粉末を含み、前記乾燥接種材料中の前記乳酸マグネシウムの濃度が、40~60%(w/w)の範囲内である、請求項14に記載の乾燥接種材料。
- 有機廃棄物から乳酸またはその塩を生成させるための方法であって、
(i)B.コアグランス胞子と、乳酸マグネシウムと、を含む請求項14~15のいずれか1項に記載の乾燥接種材料を提供するステップ;
(ii)前記乾燥接種材料を水酸化マグネシウムスラリーに懸濁させ、それにより微生物汚染物が不活性化されたB.コアグランス胞子懸濁液を得るステップ;
(iii)発酵反応器内のステップ(ii)で得られた前記懸濁液を、1種または複数の糖分解酵素、および粒子サイズの低減を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物と混合し、前記発酵反応器内の混合物をインキュベートして前記有機廃棄物を糖化させ、前記胞子の発芽を誘導し、次に前記胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞による乳酸生成を誘導するステップであって、
前記混合物が、少なくとも10^4胞子/mlを含み、
前記1種または複数の糖分解酵素が、C5糖(ペントース)、C6糖(ヘキソース)、またはそれらの組み合わせを含む発酵可能な炭水化物を生成し、
pHを5~7の範囲内に調整するために前記インキュベートの間にアルカリ性化合物が前記発酵反応器内に添加され、
前記インキュベートの間にラクタート濃度がモニタリングされる、ステップ;ならびに
(iv)発酵ブロスから乳酸またはその塩を回収するステップ、
を含む、方法。 - 乳酸マグネシウムを生成させるための方法であり、以下のステップ;
粒子サイズの低減を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物を提供するステップと;
B.コアグランス胞子と、乳酸マグネシウムと、を含む請求項14~15のいずれか1項に記載の乾燥接種材料を提供するステップと;
B.コアグランス胞子の前記乾燥接種材料を水酸化マグネシウムスラリーに懸濁させ、それにより微生物汚染物が不活性化されたB.コアグランス胞子懸濁液を得るステップと;
発酵反応器内の前記前処理された有機廃棄物を1種または複数の糖分解酵素および前記B.コアグランス胞子懸濁液と混合するステップであって、
前記1種または複数の糖分解酵素が、C5糖(ペントース)、C6糖(ヘキソース)、またはそれらの組み合わせを含む発酵可能な炭水化物を生成し、
混合物が、少なくとも10^4胞子/を含む、ステップと;
前記発酵反応器内の前記混合物をインキュベートして前記有機廃棄物を糖化させ、前記胞子の発芽を誘導し、次に前記胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞による乳酸生成を誘導し、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウムおよび炭酸マグネシウムから選択されるアルカリ性化合物が、pHを5~7の範囲内に調整するために前記インキュベートの間に前記発酵反応器に添加され、前記インキュベートの間にラクタート濃度がモニタリングされ、それによりラクタートモノマーおよびMg2+イオンを得るステップと;
発酵ブロスから乳酸マグネシウムを回収するステップと、
を含む、請求項16に記載の方法。 - 有機廃棄物から乳酸またはその塩を生成させるための方法であって、
(i)粒子サイズの低減を含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物を提供するステップ;
(ii)15%~30%(w/w)の範囲内の水分量を特徴とする、または15%~25%(w/w)の範囲内の水分量を特徴とする、バチルス・コアグランス胞子の部分乾燥組成物を提供するステップ;
(iii)発酵反応器内の前記前処理された有機廃棄物を、1種または複数の糖分解酵素およびB.コアグランス胞子の前記部分乾燥組成物と混合し、前記発酵反応器内の混合物をインキュベートして前記有機廃棄物を糖化させ、前記胞子の発芽を誘導し、次に前記胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞による乳酸生成を誘導するステップであって、
前記混合物が、少なくとも10^4胞子/mlを含み、
前記1種または複数の糖分解酵素が、C5糖(ペントース)、C6糖(ヘキソース)、またはそれらの組み合わせを含む発酵可能な炭水化物を生成し、
pHを5~7の範囲内に調整するために前記インキュベートの間にアルカリ性化合物が前記発酵反応器内に添加され、
前記インキュベートの間にラクタート濃度がモニタリングされる、ステップ;ならびに
(iv)発酵ブロスから乳酸またはその塩を回収するステップ、
を含む、方法。 - 前記前処理が、滅菌をさらに含む、請求項17~18のいずれか一項に記載の方法。
- 有機廃棄物から乳酸またはその塩を生成させるための方法であって、
(i)粒子サイズの低減、滅菌、および1種または複数の糖分解酵素を使用した糖化、のうちの少なくとも1つを含む前処理に供された、前処理された有機廃棄物を提供するステップであって、前記前処理された有機廃棄物が、C5糖(ペントース)、C6糖(ヘキソース)、またはそれらの組み合わせを含む発酵可能な炭水化物を含む、ステップ;
(ii)バチルス・コアグランス胞子の乾燥組成物を提供するステップ;および
(iii)前記前処理された有機廃棄物とB.コアグランス胞子の前記乾燥組成物を発酵反応器内で混合し、混合物をインキュベートして前記胞子の発芽を誘導し、次に前記胞子から発芽した栄養型B.コアグランス細胞による乳酸生成を誘導するステップであって、
前記混合物が、少なくとも10^4胞子/mlを含み、
pHを5~7の範囲内に調整するために前記インキュベートの間にアルカリ性化合物が前記発酵反応器内に添加され、
前記インキュベートの間にラクタート濃度がモニタリングされる、ステップ;
を含む、方法。
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