JP7316044B2 - ラクトバチルス・カゼイを用いて発酵乳製品を製造する方法 - Google Patents
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Description
(a)活性細胞壁プロテイナーゼの存在;及び/又は
(b)蛍光標識カゼインを含有する培地中で当該株を6時間増殖させると,対照試料と比較して蛍光が増加する。
(a)活性細胞壁プロテイナーゼの存在;及び/又は
(b)蛍光標識カゼインを含有する培地中で当該株を6時間増殖させると,対照試料と比較して蛍光が増加する。
(a)下記(i)又は(ii)であるストレプトコッカス・サーモフィルス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28952で寄託された株;
(ii)又は,DSM28952由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある;
(b)下記(i)又は(ii)であるストレプトコッカス・サーモフィルス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28953で寄託された株;
(ii)又は,DSM28953由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある。
(a)ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431;
(b)DSM19465として寄託されたL.カゼイCHCC2115;
(c)ラクトース代謝に欠損を有する株であるDSM28952として寄託されたS.サーモフィルスCHCC17861。
(i)ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431及びラクトース代謝に欠損を有する株であるDSM28952として寄託されたS.サーモフィルスCHCC17861;又は
(ii)2007年06月27日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,DSM19465として寄託されたL.カゼイCHCC2115及びラクトース代謝に欠損を有する株であるDSM28952として寄託されたS.サーモフィルスCHCC17861。
(a)下記(i)又は(ii)であるストレプトコッカス・サーモフィルス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28952で寄託された株;
(ii)又は,DSM28952由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある;
(b)下記(i)又は(ii)であるストレプトコッカス・サーモフィルス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28953で寄託された株;
(ii)又は,DSM28953由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある;
(c)下記(i)又は(ii)であるラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28910で寄託された株;
(ii)又は,DSM28910由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある;からなる群より選択される。
(a)L.カゼイ,及び
(b)ストレプトコッカス・サーモフィルス,ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス及びそれらの混合物から選択されるラクトース代謝に欠損を有する菌,
ここで,前記菌は,(a):(b)を95:5~5:95の割合で乳に添加される,そして,前記方法は,1×108~1×1011CFU/gの濃度のL.カゼイを35~45時間の期間で産生する方法,を提供する。
(a)以下の(i)及び/又は(ii)から選択されるL.カゼイ菌の株:
(i)ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431;及び/又は
(ii)DSM19465として寄託されたL.カゼイCHCC2115;
(b)ストレプトコッカス・サーモフィルス,ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス,及びそれらの混合物,好ましくは株DSM28952として寄託されたS.サーモフィルスCHCC17861を含む,から選択されるラクトース代謝に欠損を有する菌;
ここで,前記菌は,(a):(b)を95:5~5:95の割合で乳に添加される,そして,前記方法は,1×108~1×1011CFU/gの濃度のL.カゼイを35~45時間の期間で産生する方法,を提供する。
(a)1×108~1×1011CFU/gの濃度又は1×109~1×1011CFU/gの濃度のL.カゼイ,及び
(b)ストレプトコッカス・サーモフィルス,ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス及びそれらの混合物から選択されるラクトース代謝に欠損を有する菌。
(a)1×108~1×1011CFU/gの濃度又は1×109~1×1011CFU/gの濃度のL.カゼイの株,ここで,前記株は,以下(i)及び/又は(ii)から選択される
(i)ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431;及び/又は
(ii)DSM19465として寄託されたL.カゼイCHCC2115;及び
(b)ストレプトコッカス・サーモフィルス,ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス,及びそれらの混合物,好ましくはS.サーモフィルスCHCC17861を含む,から選択されるラクトース代謝に欠損を有する菌。
(a)1×108~1×1011CFU/gの濃度又は1×109~1×1011CFU/gの濃度のL.カゼイ,及び
(b)ストレプトコッカス・サーモフィルス,ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス及びそれらの混合物から選択されるラクトース代謝に欠損を有する菌。
(a)1×108~1×1011CFU/gの濃度又は1×109~1×1011CFU/gの濃度のL.カゼイの株,ここで,前記株は,以下(i)及び/又は(ii)から選択される
(i)ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431;及び/又は
(ii)DSM19465として寄託されたL.カゼイCHCC2115;及び
(b)ストレプトコッカス・サーモフィルス,ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス,及びそれらの混合物,好ましくはS.サーモフィルスCHCC17861を含む,から選択されるラクトース代謝に欠損を有する菌。
Costarディープウェルプレート:2.0ml
マイクロタイタープレート:Nunc Blackプレート(カタログ番号:237105),Nunc(製品番号:167008),MJR PCRプレート(V型,製品番号:HSP-9665)
Hamilton液体処理ロボット
Hamilton使い捨て滅菌チップ
塩化カルシウム二水和物(Merckカタログ番号:1.02382.1000)
MES水和物,最低99.5%滴定(Sigma M8250-1kg)
Tris(Sigmaカタログ番号:T1503)
Costarディープウェルプレートに入れた試料(2.0ml)
Enspire,2300マルチラベルリーダー,PerkinElmer
対照株:LH-Emfour,バッチ番号:2995517,材料番号:501638(LH-32バッチ番号:2990465,材料番号:616703を解凍DVSとして添加(50μl)し一晩増殖。対照の新しいバッチを使用する場合は,使用前に古いバッチとタンパク質分解活性を比較。)
500 mM Tris-HCL,pH8.5(60.55 g Tris-HCl。Milli-Q水を加えて800 mlにし,1M HClを用いてpHを8.5に調整。Milli-Q水で1000 mlまで満たす。)
FITC,FITC標識カゼイン(Sigma C3777)(5mg/ml FITC,滅菌濾過Milli-Q水で調製。)
MES100 mM+CaCl2,pH6.5(19.52 g MESおよび7.35 g CaCl2。水を加えて800 mlにし,pHを6.5に調整し,水で1000 mlまで満たし,滅菌濾過。)
5%TCA(5gの三塩化酢酸をMilli-Q水に溶解し,全量を100mlにする。)
培養培地:BD5-3ブロス
・8μlのFITC溶液をMJR PCRマイクロタイタープレート(インキュベーション中の蒸発を最小にするためV字形のウェル)に分注する。
・40μlの洗浄した細胞懸濁液をMJR PCRマイクロタイタープレートに分注し,プレートを密封する。
・MJR PCRマイクロタイタープレートを37℃で0~6時間インキュベートする(ラクトバチルス種およびストレプトコッカス種)。
・115μlの5%w/v TCAをMJR PCRマイクロタイタープレートに分注する。
・MRJ PCRマイクロタイタープレートを室温で1時間または氷浴上で30分間インキュベートする。
・MJR PCRマイクロタイタープレートを遠心分離する(3700rpm,100分間,10℃)。
・125μlのTris-HCl 0.5M(pH8.5)をNunc Blackマイクロタイタープレートに分注する。
・MJR PCRマイクロタイタープレートから45μlをNunc Blackマイクロタイタープレートに吸引する。
・Enspire,2300マルチラベルリーダー,PerkinElmerを用い励起497nm-発光515nmで蛍光を読み取る。
T6 MES緩衝液で洗浄した直後に,37℃で6時間インキュベートした試料。
ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431;
DSM19465として寄託されたL.カゼイ01,CHCC2115;及び
S.サーモフィルスDSM28952として寄託されたS.サーモフィルスCHCC17861。
(1)50:50
(2)90:90,及び
(3)10:90。
ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431を単独,又は以下の1)又は2)の株のいずれかと組み合わせる:
1)ラクトース代謝に欠損を有する株(Lac(-))であり,S.サーモフィルスDSM28952として寄託されたS.サーモフィルスCHCC17861;又は
2)ラクトース代謝に欠損を有さない株(Lac(+))であり,DSM22935として寄託されたS.サーモフィルスCHCC11977(CHCC17861の親株)。
(1)50:50
出願人は,下記の寄託された微生物の試料が,出願人により承認された専門家のみに利用可能であるべきことを要求する。
2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28952で寄託されたストレプトコッカス・サーモフィルス株。
2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28953で寄託されたストレプトコッカス・サーモフィルス株。
2009年09月08日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM22935で寄託されたストレプトコッカス・サーモフィルス株。
2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28910で寄託されたラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス株。
2007年06月27日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM19465で寄託されたラクトバチルス・カゼイ株。
以上の寄託は,特許手続を目的とする微生物の寄託の国際的承認についてのブダペスト条約に従い行われた。
Claims (15)
- 発酵乳製品に存在するラクトース以外の1つ又はいくつかの炭水化物の代謝が促進される発酵乳製品を製造する方法であって,該方法は,乳に乳酸菌を添加することを含み,ここで前記菌はラクトバチルス・カゼイ及びラクトバチルス・カゼイ以外の種の少なくとも1つの更なる乳酸菌の株を含み,ここで前記更なる株は,ラクトース代謝に欠損を有するが,前記乳に存在するラクトース以外の1つ又はいくつかの炭水化物を代謝することが可能である,前記方法。
- ラクトース代謝に欠損を有する前記少なくとも1つの更なる乳酸菌の株は,スクロース,ガラクトース,およびグルコースからなる群より選択される1つ又は複数の炭水化物を代謝することが可能であり,そして前記炭水化物は,発酵前に乳に添加される,請求項1に記載の発酵乳製品を製造する方法。
- 前記ラクトバチルス・カゼイ株は,ATCC55544として寄託されたL.カゼイCRL431及びDSM19465として寄託されたL.カゼイCHCC2115からなる群より選択される,請求項1又は2に記載の方法。
- 前記更なる株は,
(a)下記(i)又は(ii)であるストレプトコッカス・サーモフィルス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28952で寄託された株;
(ii)又は,DSM28952由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある;
(b)下記(i)又は(ii)であるストレプトコッカス・サーモフィルス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28953で寄託された株;
(ii)又は,DSM28953由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある;
(c)下記(i)又は(ii)であるラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカス株:
(i)2014年06月12日付で,ドイツ微生物細胞培養コレクション(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH;DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweigに,受託番号:DSM28910で寄託された株;
(ii)又は,DSM28910由来の株,ここで該由来株は更に,ラクトース及びX-Galを含む培地上に白色コロニーを生成する能力を有するという特徴がある,
からなる群より選択される,請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。 - ラクトース代謝に欠損を有する前記更なる株はS.サーモフィルスのタンパク質分解性の株である,ここで,タンパク質分解性の株は,以下の特徴を有する:
(a)活性細胞壁プロテイナーゼの存在;及び/又は
(b)蛍光標識カゼインを含有する培地中で当該株を6時間増殖させると,対照試料と比較して蛍光が増加する,
請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。 - 前記方法は,L.カゼイを,1×108~5×109CFU/g,好ましくは1×109~5×109CFU/g,より好ましくは1×109~3×109CFU/gの濃度で産生する,請求項1~5のいずれか1項に記載の発酵乳製品を製造する方法。
- 発酵乳製品に存在するラクトース以外の1つ又はいくつかの炭水化物の代謝が促進される発酵乳製品を製造するための,L.カゼイ種の菌およびL.カゼイ以外の種の少なくとも1つの更なる乳酸菌の株の使用であって,前記更なる株は,ラクトース代謝に欠損を有するが,前記乳に存在するラクトース以外の1つ又はいくつかの炭水化物を代謝することが可能である,前記使用。
- 前記使用は,スクロース,ガラクトース及び/又はグルコースを乳に添加することを更に含む,請求項7に記載のL.カゼイ種の菌および少なくとも1つの更なる乳酸菌の株の使用。
- ラクトース代謝に欠損を有する前記少なくとも1つの更なる乳酸菌の株は,ストレプトコッカス・サーモフィルス及びラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカスからなる群より選択される種の菌である,請求項7又は8に記載のL.カゼイ種の菌および少なくとも1つの更なる乳酸菌の株の使用。
- L.カゼイ種の菌および少なくとも1つの更なる乳酸菌の株を含み、組成物に存在するラクトース以外の1つ又はいくつかの炭水化物の代謝が促進される組成物であって,前記少なくとも1つの更なる乳酸菌の株は,ラクトース代謝に欠損を有する,前記組成物。
- 前記少なくとも1つの更なる菌は,ストレプトコッカス・サーモフィルス及びラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカスからなる群より選択される種の菌である,請求項10に記載のL.カゼイ種の菌および少なくとも1つの更なる乳酸菌の株を含む組成物。
- L.カゼイ種の菌および少なくとも1つの更なる乳酸菌の株を含み、食料又は飼料製品に存在するラクトース以外の1つ又はいくつかの炭水化物の代謝が促進される食料又は飼料製品であって,前記少なくとも1つの更なる乳酸菌の株は,ラクトース代謝に欠損を有する,前記食料又は飼料製品。
- 前記少なくとも1つの更なる乳酸菌の株は,ストレプトコッカス・サーモフィルス及びラクトバチルス・デルブルッキー亜種ブルガリカスからなる群より選択される種の菌である,請求項12に記載の食料又は飼料製品。
- L.カゼイを,1×108~5×109CFU/g,好ましくは1×109~5×109CFU/g,より好ましくは1×109~3×109CFU/gの濃度で含む,請求項12又は13に記載の食料又は飼料製品。
- 前記食料又は飼料製品は発酵乳飲料である,請求項12~14のいずれか1項に記載の食料又は飼料製品。
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