JP7307757B2 - Bilberry fruit extract containing reduced amounts of organic acids and extraction method therefor - Google Patents
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本発明は、低減した量の有機酸を含むビルベリー果実の抽出物およびそのための抽出方法に関する。 The present invention relates to an extract of bilberry fruit containing reduced amounts of organic acids and an extraction method therefor.
アントシアニンは、多くの花、果実および葉の魅力的な色に関与する水溶性色素である。一般に、それらは、酸性化アルコール性溶媒により植物から抽出され得、多くのものは食物着色料として市販で入手可能である。それらは、しばしば、飲料またはシリアルなどの他の食物に配合するのに適切な濃度の希釈液としてマルトデキストリンと共に供給される。 Anthocyanins are water-soluble pigments responsible for the attractive colors of many flowers, fruits and leaves. Generally, they can be extracted from plants with acidified alcoholic solvents and many are commercially available as food colorings. They are often supplied with maltodextrin as a diluent of suitable concentration for incorporation into beverages or other foods such as cereals.
アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、式（Ｉ）に示す基本構造を有する。 Anthocyanidins, which are the aglycon components of anthocyanins, have the basic structure shown in formula (I).
それらの特定の化学構造のために、アントシアニンおよびアントシアニジンは、電子欠乏により特徴づけられ、このことにより、それらはフリーラジカルとしても知られる活性酸素種（ＲＯＳ）に対して非常に反応性になり、その結果、それらは強力な天然の抗酸化剤であると考えられる。 Due to their particular chemical structure, anthocyanins and anthocyanidins are characterized by electron deficiency, which makes them highly reactive towards reactive oxygen species (ROS), also known as free radicals, As a result, they are considered to be powerful natural antioxidants.
より詳細には、アントシアニンの生物学的利用能は、ｐＨの変化に対するそれらの感受性に起因して低い。アントシアニンは、一般に、３．５以下のｐＨ値で安定であるので、胃条件下で安定である。 More specifically, the bioavailability of anthocyanins is low due to their sensitivity to changes in pH. Anthocyanins are generally stable at pH values below 3.5 and are therefore stable under gastric conditions.
本発明は、低減した量の有機酸を含むビルベリー果実の抽出物およびそのための抽出方法を提供する。 The present invention provides an extract of bilberry fruit containing reduced amounts of organic acids and an extraction method therefor.
本発明者らは、ビルベリー果実を圧搾することによって、有機酸を含む水分を部分的にまたは完全に除去して得られる水分含量が低減した果実（例えば、圧搾処理物、特に、プレスケーキ）を酸でさらに処理することによって、ビルベリー果実からアントシアニンを大量に回収でき、かつ回収されたアントシアニンは有機酸含有量（特にクロロゲン酸含量）をさらに低減させることができることを見出した。本発明はこのような知見に基づくものである。また、有機酸と分離されたアントシアニンは、腸吸収性が向上し、経口剤として適していた。 The present inventors have found that by pressing bilberry fruit, the water content including organic acids is partially or completely removed to produce fruit with a reduced water content (e.g., pressed product, particularly presscake). It was found that by further treatment with acid, large amounts of anthocyanins can be recovered from bilberry fruit, and the recovered anthocyanins can further reduce the organic acid content (particularly the chlorogenic acid content). The present invention is based on such findings. In addition, anthocyanins separated from organic acids have improved intestinal absorbability and are suitable as oral preparations.
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］ビルベリーエキスの抽出方法であって、
ビルベリー果実を圧搾して水分含量が低減した果実を得ることと、
水分含量が低減した果実を酸で処理して水溶性画分としてビルベリーエキスを得ることとを含む、
方法。
［２］酸処理が、塩酸処理である、上記［１］の方法。
［３］酸処理物から水溶性画分を取得することをさらに含む、上記［１］または［２］に記載の方法。
［４］得られた水溶性画分中のポリフェノールを濃縮することをさらに含む、上記［１］～［３］に記載のいずれかに記載の方法。
［５］得られるビルベリーエキスが、アントシアニンの純度が５０％以上であり、総アントシアニンに対する夾雑物含量が１５重量％以下である、上記［１］～［４］に記載のいずれかに記載の方法。
［６］得られるビルベリーエキスが、アントシアニンの純度が５０％以上であり、総アントシアニンに対するキナ酸含量が２重量％以下である、上記［１］～［４］に記載のいずれかに記載の方法。
［７］圧搾工程において、果実を摂氏１０℃以下で圧搾し、かつ果実へのペクチナーゼの添加をしない、上記［１］～［６］に記載のいずれかに記載の方法。
［８］アントシアニン組成物の製造方法であって、
上記［１］～［７］に記載のいずれかの抽出方法を含む、方法。
［９］アントシアニンを含むビルベリーエキスであって、アントシアニン純度が５０重量％以上であり、総アントシアニンに対する夾雑物含量が１５重量％以下である、ビルベリーエキス。
［１０］得られるビルベリーエキスが、アントシアニン純度が５０％以上であり、総アントシアニンに対するキナ酸含量が２重量％以下である、上記［９］に記載のビルベリーエキス。
［１１］ビルベリーエキスが、解重合アントシアニンを含む、上記［９］または［１０］に記載のビルベリーエキス。
［１２］上記［９］～［１１］のいずれかに記載のビルベリーエキスまたはその乾燥物を含む、サプリメント。
According to the present invention, the following inventions are provided.
[1] A method for extracting a bilberry extract,
pressing bilberry fruit to obtain fruit with reduced moisture content;
treating the fruit with reduced water content with an acid to obtain a bilberry extract as the water-soluble fraction;
Method.
[2] The method of [1] above, wherein the acid treatment is hydrochloric acid treatment.
[3] The method according to [1] or [2] above, further comprising obtaining a water-soluble fraction from the acid-treated product.
[4] The method according to any one of [1] to [3] above, further comprising concentrating polyphenols in the obtained water-soluble fraction.
[5] The method according to any one of [1] to [4] above, wherein the obtained bilberry extract has an anthocyanin purity of 50% or more and a contaminant content of 15% by weight or less relative to the total anthocyanins. .
[6] The method according to any one of [1] to [4] above, wherein the obtained bilberry extract has an anthocyanin purity of 50% or more and a quinic acid content of 2% by weight or less relative to the total anthocyanins. .
[7] The method according to any one of the above [1] to [6], wherein in the pressing step, the fruit is pressed at 10°C or lower and pectinase is not added to the fruit.
[8] A method for producing an anthocyanin composition,
A method comprising the extraction method according to any one of [1] to [7] above.
[9] A bilberry extract containing anthocyanins, having an anthocyanin purity of 50% by weight or more and a contaminant content of 15% by weight or less relative to total anthocyanins.
[10] The bilberry extract according to [9] above, wherein the obtained bilberry extract has an anthocyanin purity of 50% or more and a quinic acid content of 2% by weight or less relative to the total anthocyanins.
[11] The bilberry extract according to [9] or [10] above, wherein the bilberry extract contains depolymerized anthocyanins.
[12] A supplement containing the bilberry extract or dried product thereof according to any one of [9] to [11] above.
本明細書では、「ビルベリー」とは、ツツジ科スノキ属の低灌木である。ビルベリーは、アントシアニンを豊富に含む食用可能な果実（「ビルベリー果実」という）を実らせる。ビルベリーには、セイヨウスノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ Ｌ．）といくつかの近縁種が存在する。 As used herein, "bilberry" is a low shrub of the genus Vaccinium of the Ericaceae family. Bilberries produce edible fruits rich in anthocyanins (referred to as "bilberry fruits"). Bilberry includes Vaccinium myrtillus L. and several related species.
本明細書では、「ビルベリーエキス」は、ビルベリー果実からの抽出物であって、アントシアニンを含むものを意味する。ビルベリーエキスは、液体の形態であり得る。ビルベリーエキスは固形の形態（例えば、乾燥された固形物の形態）であり得る。ビルベリーエキスは、アントシアニン（Ｍｗ：約５５０程度）を含み、アントシアニン組成物とも呼ばれ得る。 As used herein, "bilberry extract" means an extract from bilberry fruit containing anthocyanins. The bilberry extract can be in liquid form. The bilberry extract can be in solid form (eg, dried solid form). The bilberry extract contains anthocyanins (Mw: about 550) and can also be called an anthocyanin composition.
本明細書では、「アントシアニン」とは、グリコシル化アントシアニン（アントシアノシド）およびアントシアノシドのアグリコン（アントシアニジン）の両方を包含する。アントシアノシドは、糖を結合していないアグリコンであるアントシアニジンに糖が共有結合により結びついた化合物である。アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、以下式（ＩＩ）に記載の基本構造を有する。アントシアニンは、有機酸などの他の分子と重合した形態で存在し得る。本明細書では、「解重合アントシアニン」とは、重合していないアントシアニン（アントシアニンのモノマー）、すなわち、有機酸または有機酸以外の分子と重合しているアントシアニン以外のアントシアニンをいう。 As used herein, "anthocyanin" includes both glycosylated anthocyanins (anthocyanosides) and aglycones of anthocyanosides (anthocyanidins). Anthocyanosides are compounds in which a sugar is covalently attached to an unsugar aglycone, anthocyanidin. Anthocyanidin, which is an aglycon component of anthocyanin, has a basic structure represented by formula (II) below. Anthocyanins can exist in polymeric form with other molecules such as organic acids. As used herein, "depolymerized anthocyanins" refers to anthocyanins that are not polymerized (monomers of anthocyanins), ie, anthocyanins other than anthocyanins that have been polymerized with molecules other than organic acids or organic acids.
代表的なアントシアニジンにおける式（ＩＩ）中のＲ1～Ｒ7は以下の表に要約される。 R 1 -R 7 in formula (II) in representative anthocyanidins are summarized in the table below.
アントシアニンのグリコシル化型は、アントシアニジンよりも水可溶性でありかつ安定である。アントシアノシドは、それらが含むグリコシル単位の数により分類される。モノグリコシドは、アグリコンの３－ヒドロキシル基に主に結合した１つの糖部分を含む。ジグリコシドは、一般に、３および５ヒドロキシ位、ならびにたまに３および７水酸化位に、２つの単糖を含む。トリグリコシドは、一般に、３位およびＣ－５またはＣ－７位の１つに２つの単位が存在する場合、結合を有する。３’、４’および／または５’位での糖鎖付加もまた可能である。 Glycosylated forms of anthocyanins are more water soluble and stable than anthocyanidins. Anthocyanosides are classified by the number of glycosyl units they contain. Monoglycosides contain one sugar moiety predominantly attached to the 3-hydroxyl group of the aglycone. Diglycosides generally contain two monosaccharides at the 3- and 5-hydroxyl positions, and occasionally at the 3- and 7-hydroxyl positions. A triglycoside generally has a bond when there are two units at the 3-position and one at the C-5 or C-7 position. Glycosylation at the 3', 4' and/or 5' positions is also possible.
アントシアニンの最も一般的な糖には、単糖であるグルコース、ラムノース、ガラクトース、アラビノースおよびキシロースが挙げられる。アントシアニン中で最も頻繁に見出される二糖および三糖は、ルチノース、ソホロース、サンブビオースおよびグルコルチノースである。 The most common sugars of anthocyanins include the monosaccharides glucose, rhamnose, galactose, arabinose and xylose. The di- and trisaccharides most frequently found in anthocyanins are rutinose, sophorose, sambubiose and glucortinose.
用語「圧搾」または「圧搾する」とは、圧力を加えて絞ることを意味する。本発明において圧搾は、ビルベリー果実に対して実施することができ、これにより、果実から果汁を部分的にまたは完全に分離することができる。 The terms "squeeze" or "squeeze" mean to squeeze under pressure. According to the invention, pressing can be carried out on the bilberry fruit, whereby the juice can be partially or completely separated from the fruit.
用語「精製された」および「単離された」は、上記アントシアニン抽出物からの１つまたはそれ以上のアントシアニンの精製および／または単離を参照するために用いられる。ここでも当該分野で公知の定法を用いて、アントシアニン抽出物の多様な成分を分離して精製物質とし得る。本発明の１つの局面では、抽出物のアントシアニンは、当該分野で公知の技術により実質的に精製および単離される。 The terms "purified" and "isolated" are used to refer to the purification and/or isolation of one or more anthocyanins from the anthocyanin extracts described above. Again, using routine methods known in the art, the various components of the anthocyanin extract can be separated into purified materials. In one aspect of the invention, the anthocyanins of the extract are substantially purified and isolated by techniques known in the art.
本発明によれば、ビルベリー果実を圧搾して得られる圧搾処理物（特に、プレスケーキ）を酸で処理することによって、含有クロロゲン酸濃度が低く、ポリフェノール含量が高いビルベリーエキスを得られる。 According to the present invention, a bilberry extract containing a low chlorogenic acid concentration and a high polyphenol content can be obtained by treating a pressed product obtained by pressing bilberry fruit (especially, presscake) with an acid.
本発明によれば、
ビルベリーエキスの抽出方法であって、
ビルベリー果実を圧搾して水分含量が低減した果実（圧搾処理物）を得ることと、
圧搾処理物を酸で処理して水溶性画分としてビルベリーエキスを得ることとを含む、
方法
が提供される。
According to the invention,
A method for extracting a bilberry extract,
Pressing bilberry fruit to obtain fruit with reduced water content (pressed product);
treating the press with acid to obtain a bilberry extract as a water-soluble fraction;
A method is provided.
（Ａ）ビルベリー果実を圧搾して水分含量が低減した果実を得ること
本発明によれば、ビルベリー果実を圧搾して果実の水分含量を低減させることができる。圧搾によってビルベリー果実から果汁が部分的にまたは完全に除去され得る。上記（Ａ）においては、圧搾により水分含量を低減させた果実（以下「圧搾処理物」ということがあるが、例えば、圧搾処理物は「プレスケーキ」であってもよい）を得ることができる。（Ａ）では、常法に従って圧搾を行うことができる。圧搾は、好ましくは摂氏１０℃以下の低温、より好ましくは、摂氏４℃以下の低温で行うことができる｛但し、果実を凍らせない程度の低温である｝。圧搾は、冷凍した果実を解凍してから行ってもよい。天然のビルベリー果実は、平均的には、固形分（８重量％）と有機酸を含む水分（９２重量％）を含む。（Ａ）では、圧搾により水分含量を減少させるほど、有機酸含量を大きく低減させることができるが、これによってアントシアニンの純度を向上させることができる。これは、ビルベリー果実の水溶性画分には、不純物である有機酸が大量に含まれ、かつ、アントシアニンの含量は相対的に低いためであると考えられる。ある態様では、圧搾処理物の調製においては、圧搾により、果実の水分含量を１／２以下、１／３以下、１／４以下、１／５以下、１／７以下、または１／１０以下にまで低減することができる。これにより、除去した水分と共に有機酸が除去され、圧搾処理物中の有機酸含量を低減させる（例えば、１／２以下、１／３以下、１／４以下、１／５以下、１／７以下、または１／１０以下にまで低減させる）ことができる。本発明のある態様では、ビルベリー果実から圧搾処理物を得る工程において、ペクチン分解酵素を用いなくてもよく、好ましくはペクチン分解酵素を用いない。また、圧搾工程で果実を摂氏６０℃以上、摂氏５０℃以上、摂氏４０℃以上、または摂氏３０℃以上に加温しなくてもよい。圧搾によって、果実は、圧搾処理物とフレッシュジュースとに分離できる。フレッシュジュースには、水溶性の不純物が含まれるため、本発明の圧搾工程では、圧搾によって十分に脱水することが望ましい。工程（Ａ）については、図２の圧搾および脱水（Ｓ１）を参照。
(A) Pressing bilberry fruit to obtain fruit with reduced water content According to the present invention, bilberry fruit can be pressed to reduce the water content of the fruit. Pressing may partially or completely remove the juice from the bilberry fruit. In (A) above, it is possible to obtain a fruit whose moisture content has been reduced by pressing (hereinafter sometimes referred to as "pressed product", but for example, the pressed product may be "press cake"). . In (A), compression can be performed according to a conventional method. The pressing can be carried out at a low temperature, preferably below 10°C, more preferably below 4°C {provided that the temperature does not freeze the fruit}. The pressing may be performed after thawing the frozen fruit. Native bilberry fruit, on average, contains solids (8% by weight) and water (92% by weight) including organic acids. In (A), the more the water content is reduced by pressing, the more the organic acid content can be reduced, which can improve the purity of anthocyanins. This is probably because the water-soluble fraction of bilberry fruit contains a large amount of organic acids as impurities and has a relatively low anthocyanin content. In some embodiments, in preparing the press, pressing reduces the water content of the fruit to 1/2 or less, 1/3 or less, 1/4 or less, 1/5 or less, 1/7 or less, or 1/10. can be reduced to As a result, the organic acid is removed together with the removed water, and the organic acid content in the pressed product is reduced (e.g., 1/2 or less, 1/3 or less, 1/4 or less, 1/5 or less, 1/7 or less, or reduced to 1/10 or less). In one aspect of the present invention, the step of obtaining a pressed product from bilberry fruit may or may not use a pectin-degrading enzyme, preferably not using a pectin-degrading enzyme. Also, the fruit need not be heated to 60°C or higher, 50°C or higher, 40°C or higher, or 30°C or higher during the pressing step. Pressing allows the fruit to be separated into a press and a fresh juice. Since the fresh juice contains water-soluble impurities, it is desirable that the fresh juice is sufficiently dehydrated by pressing in the pressing step of the present invention. For step (A), see pressing and dewatering (S1) in FIG.
ビルベリー果実を圧搾して得られる圧搾処理物中には、アントシアニンが豊富に含まれ、かつ圧搾処理物からは水溶性の不純物（有機酸等）が除去されているために、ビルベリーエキスの抽出工程の最初の工程として相応しいと考えられる。特に、有機酸は、アントシアニンと会合して分子間コピグメンテーションおよび分子内コピグメンテーションを形成し得る。有機酸は、アントシアニンの重合の主な原因であり、有機酸を除去することによって、後の工程における有機酸とアントシアニンとの会合体の形成または再形成を抑制することができると考えられる。したがって、（Ａ）では、有機酸を含む水分含量が低減した果実（圧搾処理物）を得ることができるであろう。 The pressed product obtained by pressing the bilberry fruit contains abundant anthocyanin, and water-soluble impurities (organic acids, etc.) are removed from the pressed product, so the extraction process of the bilberry extract It is considered suitable as the first step of In particular, organic acids can associate with anthocyanins to form intermolecular and intramolecular copigmentations. Organic acids are the main cause of anthocyanin polymerization, and removal of the organic acids is thought to suppress the formation or reformation of aggregates of the organic acids and anthocyanins in subsequent steps. Therefore, in (A), it would be possible to obtain fruit (pressed product) with a reduced moisture content containing organic acids.
（Ｂ）水分含量が低減した果実（圧搾処理物）を酸で処理して水溶性画分としてビルベリーエキスを得ること
本発明によれば、得られた圧搾処理物を酸で処理することができる。圧搾処理物に対して薬学上許容可能な酸（例えば、塩酸）を含む水溶液を加え、水溶性画分には、ビルベリーエキスが含まれる。酸は、例えば、ｐＨ３．５以下、ｐＨ３以下、ｐＨ２．５以下、またはｐＨ２以下の酸であり得る。ある好ましい態様では、酸は、ｐＨ１～２（例えば、ｐＨ１．５）の酸であり得る。酸による圧搾処理物の処理は、圧搾処理物からのアントシアニンの遊離を促進すると考えられる。
アントシアニンは、有機酸と共有結合した形態として圧搾処理物中には含まれ、酸処理によって、アントシアニンと有機酸との結合が破壊されると、アントシアニンが有機酸から遊離する。したがって、酸処理は、アントシアニンの抽出において有利であると共に、有機酸とアントシアニンとの分離において有益であるという一側面を有する。図２の残渣（圧搾処理物）の酸処理参照。このようにして得られる圧搾処理物からの抽出エキスには、アントシアニンが豊富に含まれる。また、含まれるアントシアニンは、解重合アントシアニンであり、例えば、分子量５５０程度のアントシアニンであり得る。
(B) Treating fruit (pressed product) with reduced water content with acid to obtain bilberry extract as a water-soluble fraction. According to the present invention, the obtained pressed product can be treated with acid. . An aqueous solution containing a pharmaceutically acceptable acid (eg, hydrochloric acid) is added to the compressed product, and the water-soluble fraction contains bilberry extract. The acid can be, for example, a pH of 3.5 or less, a pH of 3 or less, a pH of 2.5 or less, or a pH of 2 or less. In some preferred embodiments, the acid can be a pH 1-2 (eg, pH 1.5) acid. Treatment of the presses with acid is believed to promote the release of anthocyanins from the presses.
Anthocyanin is contained in the pressed product in the form of a covalent bond with an organic acid, and when the acid treatment breaks the bond between the anthocyanin and the organic acid, the anthocyanin is released from the organic acid. Therefore, the acid treatment has one aspect of being advantageous in the extraction of anthocyanins and in the separation of organic acids and anthocyanins. See acid treatment of residue (squeezed product) in FIG. Anthocyanins are abundantly contained in the extract obtained from the pressed product. Moreover, the anthocyanin contained is depolymerized anthocyanin, and may be, for example, an anthocyanin having a molecular weight of about 550.
（Ｃ）得られた酸処理物から水溶性画分を得ること
本発明の抽出方法は、得られた酸処理物から水溶性画分を得ることをさらに含み得る。水溶性画分は、遠心分離、およびろ過などの当業者に周知の様々な方法により得ることができる。例えば、ろ過は、常法に従って当業者であれば実施することができる。ろ過は、例えば、濾過機（例えば、フィルタープレス）によって行うことができる。濾過機は、濾過助剤を用いて駆動させてもよい。例えば、ろ過は、珪藻土を焼成してできる珪藻土焼成物（例えば、セライトTM、ラヂオライトTM）、および火山岩由来のパーライト（トプコTM）を含む濾過助剤を用いた濾過機によって行われ得る。これによって、不溶成分を抽出物から除去することができる。
(C) Obtaining a water-soluble fraction from the obtained acid-treated product The extraction method of the present invention may further comprise obtaining a water-soluble fraction from the obtained acid-treated product. The water-soluble fraction can be obtained by various methods well known to those skilled in the art, such as centrifugation and filtration. For example, filtration can be performed by those skilled in the art according to routine methods. Filtration can be performed, for example, by a filter machine (eg, filter press). The filter may be driven with a filter aid. For example, filtration can be carried out by a filter using a filter aid containing calcined diatomaceous earth produced by calcining diatomaceous earth (eg, Celite ™ , Radiolite ™ ) and volcanic rock-derived perlite (Topco ™ ). This allows insoluble components to be removed from the extract.
本発明によれば、得られたビルベリーエキスは、そのまま、またはさらに精製して用いることができる。精製は、アントシアニンの純度を高める目的、および／または、エキス中の有機酸含量を低減させる目的で行われ得る。
精製は、例えば、カラムを用いた精製によることができる。カラムは、ゲル濾過カラム、またはアントシアニン吸着カラムであり得る。アントシアニン吸着カラムとしては、アントシアニンに親和性を有するカラムが多く知られ、これらを用いることができる。アントシアニン吸着カラムとしては、例えば、オクタデシルシリル基で表面が修飾されたシリカゲルを充填したカラム（Ｃ１８カラム）、ＨＰ－２０カラム、ＳＰ２０７カラム等のアントシアニンの精製に用いられるカラムを用いてアントシアニンを精製することができる。カラムからのアントシアニンの溶出は、当業者であれば適宜実施できる。アントシアニンはｐＨ３．５以下で安定であることが知られるため、ｐＨ３．５以下の有機溶媒（例えば、５０％～７０％エタノール溶液、例えば、５０％～７０％エタノール－ＨＣｌ（ｐＨ３．５））で抽出ができる。
According to the present invention, the obtained bilberry extract can be used as it is or after further purification. Purification may be performed for the purpose of increasing the purity of anthocyanins and/or for the purpose of reducing the organic acid content in the extract.
Purification can be, for example, purification using a column. The column can be a gel filtration column, or an anthocyanin adsorption column. As the anthocyanin adsorption column, many columns having affinity for anthocyanin are known, and these can be used. As the anthocyanin adsorption column, for example, a column (C18 column) packed with silica gel whose surface is modified with octadecylsilyl groups, HP-20 column, SP207 column, and other columns used for purifying anthocyanins are used to purify anthocyanins. be able to. Elution of anthocyanins from the column can be carried out as appropriate by those skilled in the art. Since anthocyanins are known to be stable at pH 3.5 or lower, organic solvents at pH 3.5 or lower (e.g., 50%-70% ethanol solution, e.g., 50%-70% ethanol-HCl (pH 3.5)) can be extracted with
アントシアニンの純度が高め、および／または、有機酸含量をさらに低減させることによって、解重合アントシアニンが、再び有機酸を介して重合することを防ぐことができると考えられる。したがって、精製によって、アントシアニンの純度が高め、および／または、有機酸含量をさらに低減させることは、解重合アントシアニンを解重合状態で維持することに有益であり得る。アントシアニンが解重合アントシアニンであることは、質量分析等の当業者に周知の方法により決定することができる。解重合アントシアニンの濃度は、例えば、遊離有機酸を除去した後に、総アントシアニン濃度から有機酸濃度を控除することにより理想的には求められ得る。得られたビルベリーエキスは、酸性（例えば、ｐＨ２～５、例えば、ｐＨ３～４、例えば、約ｐＨ３．５）であり得る。 It is believed that by increasing the purity of the anthocyanin and/or further reducing the organic acid content, the depolymerized anthocyanin can be prevented from polymerizing again via the organic acid. Therefore, increasing the purity of the anthocyanin and/or further reducing the organic acid content by purification may be beneficial in maintaining the depolymerized anthocyanin in a depolymerized state. Whether the anthocyanin is depolymerized anthocyanin can be determined by methods well known to those skilled in the art, such as mass spectrometry. The concentration of depolymerized anthocyanins can ideally be determined, for example, by subtracting the organic acid concentration from the total anthocyanin concentration after removing the free organic acids. The resulting bilberry extract may be acidic (eg, pH 2-5, such as pH 3-4, eg about pH 3.5).
本発明によれば、得られたビルベリーエキスは、乾燥させて、乾燥された固形物または粉末の形態に加工することができ、そのような加工形態で用いることができる。本発明によれば、乾燥形態または粉末形態のビルベリーエキスは、サプリメントや医薬等として製剤化することができる。サプリメントや医薬は、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、または散剤であり得る。 According to the present invention, the obtained bilberry extract can be dried and processed into dried solid or powder form and used in such processed form. According to the present invention, the bilberry extract in dry or powder form can be formulated as supplements, pharmaceuticals, and the like. Supplements and medicaments can be tablets, pills, capsules, granules, granules, or powders.
本発明のビルベリーエキスは、従来のビルベリーエキスよりも、クロロゲン酸含量が少ないものであり得る。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して１．５重量％以下のクロロゲン酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して１．４重量％以下、１．３重量％以下、１．２重量％以下、１．１重量％以下、１．０重量％以下、０．９重量％以下、０．８重量％以下、０．７重量％以下、０．６重量％以下、０．５重量％以下、０．４重量％以下、０．３重量％以下、０．２重量％以下または０．１５重量％以下のクロロゲン酸を含む。 The bilberry extract of the present invention may have a lower chlorogenic acid content than conventional bilberry extracts. In one aspect, the bilberry extract of the present invention comprises 1.5% or less by weight of chlorogenic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the obtained bilberry extract is 1.4 wt% or less, 1.3 wt% or less, 1.2 wt% or less, 1.1 wt% or less, 1.0 wt% or less relative to total anthocyanins. , 0.9 wt% or less, 0.8 wt% or less, 0.7 wt% or less, 0.6 wt% or less, 0.5 wt% or less, 0.4 wt% or less, 0.3 wt% or less, 0.2% by weight or less, or 0.15% by weight or less of chlorogenic acid.
本発明のビルベリーエキスは、従来のビルベリーエキスよりも、キナ酸含量が少ないものであり得る。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して４．０重量％以下のキナ酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して３．５重量％以下、３．０重量％以下、２．５重量％以下、２．０重量％以下、１．５重量％以下、１．４重量％以下、１．３重量％以下、１．２重量％以下、１．１重量％以下、１．０重量％以下、０．９重量％以下、０．８重量％以下、０．７重量％以下、０．６重量％以下、または０．５重量％以下のキナ酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、２．０重量％以下のキナ酸を含む。得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、１．５重量％以下のキナ酸を含む。得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、１．０重量％以下のキナ酸を含む。 The bilberry extract of the present invention may contain less quinic acid than conventional bilberry extracts. In one aspect, the bilberry extract of the present invention comprises 4.0% or less by weight of quinic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the obtained bilberry extract is 3.5% by weight or less, 3.0% by weight or less, 2.5% by weight or less, 2.0% by weight or less, 1.5% by weight or less based on total anthocyanins , 1.4% by weight or less, 1.3% by weight or less, 1.2% by weight or less, 1.1% by weight or less, 1.0% by weight or less, 0.9% by weight or less, 0.8% by weight or less, 0.7 wt% or less, 0.6 wt% or less, or 0.5 wt% or less of quinic acid. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 2.0% or less by weight of quinic acid relative to total anthocyanins. The resulting bilberry extract contains, for example, 1.5% by weight or less of quinic acid relative to total anthocyanins. The resulting bilberry extract contains, for example, 1.0% by weight or less of quinic acid relative to total anthocyanins.
本発明のビルベリーエキスは、従来のビルベリーエキスよりも、リンゴ酸含量が少ないものであり得る。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して３．０重量％以下のリンゴ酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して２．５重量％以下、２．０重量％以下、１．５重量％以下、１．４重量％以下、１．３重量％以下、１．２重量％以下、１．１重量％以下、１．０重量％以下、０．９重量％以下、０．８重量％以下、０．７重量％以下、０．６重量％以下、または０．５重量％以下のリンゴ酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、２．０重量％以下のリンゴ酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、１．５重量％以下のリンゴ酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、１．０重量％以下のリンゴ酸を含む。 The bilberry extract of the present invention may contain less malic acid than conventional bilberry extracts. In one aspect, the bilberry extract of the present invention comprises 3.0% or less by weight of malic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the obtained bilberry extract is 2.5% by weight or less, 2.0% by weight or less, 1.5% by weight or less, 1.4% by weight or less, 1.3% by weight or less based on total anthocyanins. , 1.2 wt% or less, 1.1 wt% or less, 1.0 wt% or less, 0.9 wt% or less, 0.8 wt% or less, 0.7 wt% or less, 0.6 wt% or less, Alternatively, it contains 0.5% by weight or less of malic acid. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 2.0% or less by weight of malic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 1.5% or less by weight of malic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 1.0% or less by weight of malic acid relative to total anthocyanins.
本発明のビルベリーエキスは、従来のビルベリーエキスよりも、クエン酸含量が少ないものであり得る。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して７重量％以下のクエン酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して６重量％以下、５．５重量％以下、５重量％以下、４．５重量％以下、４重量％以下、３．５重量％以下、または３重量％以下のクエン酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、例えば、総アントシアニンに対して６重量％以下のクエン酸を含む。得られたビルベリーエキスは、例えば、総アントシアニンに対して５．５重量％以下のクエン酸を含む。得られたビルベリーエキスは、例えば、総アントシアニンに対して４重量％以下のクエン酸を含む。 The bilberry extract of the present invention may contain less citric acid than conventional bilberry extracts. In one aspect, the bilberry extract of the present invention comprises 7% or less by weight of total anthocyanins of citric acid. In one embodiment, the resulting bilberry extract contains 6 wt% or less, 5.5 wt% or less, 5 wt% or less, 4.5 wt% or less, 4 wt% or less, 3.5 wt% of total anthocyanins. or less, or 3% by weight or less of citric acid. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 6% or less by weight of citric acid relative to total anthocyanins. The resulting bilberry extract contains, for example, 5.5% by weight or less of citric acid relative to total anthocyanins. The obtained bilberry extract contains, for example, 4% by weight or less of citric acid relative to total anthocyanins.
本発明のビルベリーエキスは、従来のビルベリーエキスよりも、コハク酸含量が少ないものであり得る。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して０．１５重量％以下のコハク酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して０．１４重量％以下、０．１３重量％以下、０．１２重量％以下、０．１１重量％以下、０．１０重量％以下、０．０９重量％以下、０．０８重量％以下、０．０７重量％以下、０．０６重量％以下、または０．０５重量％以下のコハク酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、０．１３重量％以下のコハク酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、０．１０重量％以下のコハク酸を含む。ある態様では、得られたビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して例えば、０．０８重量％以下のコハク酸を含む。 The bilberry extract of the present invention may have less succinic acid content than conventional bilberry extracts. In one embodiment, the bilberry extract of the present invention contains 0.15% or less succinic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the obtained bilberry extract is 0.14% by weight or less, 0.13% by weight or less, 0.12% by weight or less, 0.11% by weight or less, 0.10% by weight or less based on total anthocyanins. , 0.09 wt.% or less, 0.08 wt.% or less, 0.07 wt.% or less, 0.06 wt.% or less, or 0.05 wt.% or less of succinic acid. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 0.13% or less by weight of succinic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 0.10% or less by weight of succinic acid relative to total anthocyanins. In one aspect, the resulting bilberry extract contains, for example, 0.08% or less by weight of succinic acid relative to total anthocyanins.
本発明のビルベリーエキスは、従来のビルベリーエキスよりも、有機酸を含む夾雑物含量が少ないものであり得る。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、総アントシアニンに対して、２０重量％以下、１９重量％以下、１８重量％以下、７重量％以下、１６重量％以下、１５重量％以下、１４重量％以下、１３重量％以下、１２重量％以下、１１重量％以下、１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、６重量％以下、または５重量％以下の夾雑物を含む。ある態様では、総アントシアニンに対して、例えば、２０重量％以下の夾雑物を含む。ある態様では、総アントシアニンに対して、例えば、１５重量％以下の夾雑物を含む。ある態様では、総アントシアニンに対して、例えば、１０重量％以下の夾雑物を含む。夾雑物としては、例えば、酒石酸、キナ酸、リンゴ酸、クエン酸、コハク酸、プロトカテク酸、没食子酸、カフェ酸、クロロゲン酸、およびカフェインからなる群から選択される１以上またはすべてが含まれうる。 The bilberry extract of the present invention may contain less contaminants including organic acids than conventional bilberry extracts. In one aspect, the bilberry extract of the present invention is 20 wt% or less, 19 wt% or less, 18 wt% or less, 7 wt% or less, 16 wt% or less, 15 wt% or less, 14 wt% of total anthocyanins. 13% by weight or less, 12% by weight or less, 11% by weight or less, 10% by weight or less, 9% by weight or less, 8% by weight or less, 7% by weight or less, 6% by weight or less, or 5% by weight or less of contaminants including. In one aspect, the contaminant content is, for example, 20% or less by weight relative to the total anthocyanin. In some embodiments, for example, 15% by weight or less of contaminants is included relative to total anthocyanins. In one aspect, the contaminant content is, for example, 10% by weight or less relative to the total anthocyanin. Contaminants include, for example, one or more selected from the group consisting of tartaric acid, quinic acid, malic acid, citric acid, succinic acid, protocatechuic acid, gallic acid, caffeic acid, chlorogenic acid, and caffeine. sell.
本発明のビルベリーエキスは、アントシアニンを５０％重量以上、５１重量％以上、５２重量％以上、５３重量％以上、５４重量％以上、５５重量％以上、５６重量％以上、５７重量％以上、５８重量％以上、５９重量％以上、または６０重量％以上の濃度で含み得る。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、アントシアニンを５０重量％以上含み、かつ、１．５重量％以下のクロロゲン酸を含む。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、アントシアニンを５０重量％以上含み、かつ、１重量％以下のクロロゲン酸を含む。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、アントシアニンを５０重量％以上含み、かつ０．５重量％以下のクロロゲン酸を含む。ある態様では、本発明のビルベリーエキスは、アントシアニンを５５重量％以上含み、かつ０．５重量％以下のクロロゲン酸を含む。このように本発明のビルベリー抽出物は、高純度のアントシアニン（特に解重合アントシアニン）を含み得る。また、本発明のビルベリー抽出物は、低減された量のクロロゲン酸などの有機酸（例えば、芳香族有機酸）を含み得る。 The bilberry extract of the present invention contains 50% by weight or more, 51% by weight or more, 52% by weight or more, 53% by weight or more, 54% by weight or more, 55% by weight or more, 56% by weight or more, 57% by weight or more, 58% by weight or more. It may be included at a concentration of weight percent or more, 59 weight percent or more, or 60 weight percent or more. In one aspect, the bilberry extract of the present invention contains 50% by weight or more of anthocyanins and 1.5% by weight or less of chlorogenic acid. In one aspect, the bilberry extract of the present invention contains 50% by weight or more of anthocyanins and 1% by weight or less of chlorogenic acid. In one aspect, the bilberry extract of the present invention contains 50% by weight or more of anthocyanins and 0.5% by weight or less of chlorogenic acid. In one aspect, the bilberry extract of the present invention contains 55% by weight or more of anthocyanins and 0.5% by weight or less of chlorogenic acid. Thus, the bilberry extract of the present invention may contain highly pure anthocyanins, especially depolymerized anthocyanins. Bilberry extracts of the present invention may also contain reduced amounts of organic acids such as chlorogenic acid (eg, aromatic organic acids).
当業者に周知であるように、ビルベリーエキス中のアントシアニン含量は、液体クロマトグラフィーにより決定することができ、有機酸含量は、液体クロマトグラフィーと質量分析により決定することができる。
具体的には、塩化シアニジン３－グルコシドの１種を標準品とし、高速液体クロマトグラフィー装置で展開したときの当該標準品のそれぞれの物質のピーク面積を決定する。ピーク面積と標準品の溶液濃度から検量線を作成し、得られた検量線から次式によりアントシアニンの含量を算出することができる。
As is well known to those skilled in the art, the anthocyanin content in the bilberry extract can be determined by liquid chromatography, and the organic acid content can be determined by liquid chromatography and mass spectrometry.
Specifically, one type of cyanidin chloride 3-glucoside is used as a standard product, and the peak area of each substance of the standard product is determined when developed with a high-performance liquid chromatography device. A calibration curve is prepared from the peak area and the solution concentration of the standard, and the anthocyanin content can be calculated from the obtained calibration curve by the following equation.
有機酸含量は、液体クロマトグラフィー装置および質量分析計を用いて測定することができる。具体的には、クエン酸などの各有機酸の標準品から各々標準品溶液を調製し、各標準品溶液を混合したものを有機酸混合標準品溶液とし、その検量線から試料における各有機酸成分の定量値を算出することができる。 Organic acid content can be measured using a liquid chromatography device and a mass spectrometer. Specifically, each standard solution is prepared from standard products of each organic acid such as citric acid. Quantitative values of components can be calculated.
本発明のビルベリーエキスは、経口投与された場合に、アントシアニンの吸収性に富む。したがって、本発明のビルベリーエキスを含むサプリメントまたは医薬は、経口剤であり得る。本発明のビルベリーエキスを含むサプリメントまたは医薬は、アントシアニンと賦形剤をさらに含み得る。サプリメントに添加される賦形剤は、食品科学上許容可能な賦形剤である。医薬に添加される賦形剤は、医薬上許容可能な賦形剤である。 The bilberry extract of the present invention is highly absorbable of anthocyanins when orally administered. Therefore, supplements or medicines containing the bilberry extract of the present invention can be oral preparations. A supplement or medicament containing the bilberry extract of the present invention may further contain anthocyanins and excipients. The excipients added to the supplement are food science acceptable excipients. The excipients added to the medicament are pharmaceutically acceptable excipients.
本発明のビルベリーエキス、またはこれを含むサプリメント若しくは医薬は、エタノール抽出法よりも高いアントシアニンの吸収性を有し得る。 The bilberry extract of the present invention, or a supplement or medicine containing the same, can have higher absorption of anthocyanins than the ethanol extraction method.
アントシアニンは、当業者に周知の方法によって定量できる。例えば、アントシアニンは、実施例に記載の方法によって定量することができる。例えば、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって測定することができる。必要に応じて、標品となるビルベリーエキスを用いることができる。 Anthocyanins can be quantified by methods well known to those skilled in the art. For example, anthocyanins can be quantified by the method described in the Examples. For example, it can be measured by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). If necessary, a standard bilberry extract can be used.
［材料］
試験に使用したビルベリーエキスは、抽出エキス（従来法）および圧搾処理物抽出エキスとした。抽出エキス（従来法）および圧搾処理物抽出エキスは、以下の通り調製されたものである。
従来法による抽出エキス（エタノール抽出法）は、ビルベリー果実酸性含水エタノール抽出液を精製したエキスである。具体的には、加温（６０℃）条件下で果実にペクチナーゼを作用させて果実の繊維を分解し、その後、当該分解物を酸性（約ｐＨ３．５）条件下で含水エタノール溶液と混合して含水エタノール中にビルベリー果実のアントシアニンを浸出させた。この操作によって、エタノール中のアントシアニン濃度を飽和状態（２０００ｐｐｍから２５００ｐｐｍである）に到達させた。ｐＨ３．５という数値は、アントシアニンの化学的安定性を維持しながら、かつ、抽出物が接するステンレス製装置の腐食を抑制させる条件から選定されたｐＨである。その後、常法に従い遠心分離を行い、上清を除去して沈殿物を回収した。
アントシアニン濃度の測定は、以下の通り行った。試料０．１００ｇ～０．１１０ｇを大型の秤量皿で量りとり、ロートを置いた５０ｍＬメスフラスコ内に移し、２％塩酸メタノール１０ｍＬを４回繰り返し加え、超音波洗浄機で５分間混合した。その後、２％塩酸メタノールを加え定容した。この溶液５ｍＬを精確に量りとり、２５ｍＬメスフラスコに加え、１０％リン酸を加え定容した。この一部を０．４５μｍメンブレンフィルターに通した後、バイアル瓶に移し、試験溶液とした。アントシアニン濃度測定は、高速液体クロマトグラフィー装置（ＥＬＩＴＥ ＬａＣｈｒｏｍ、Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ、日立ハイテクサイエンス社製またはＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅＬＣ－２０ＡＢ、島津製作所製）を用いて実施した。カラムはＫｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ， ５μｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ製）を使用し、カラム温度は３０℃とした。カラム流量は１．０ ｍｌ／分で、移動相Ａ（１０％ギ酸水溶液）、移動相Ｂ（メタノール、アセトニトリル、ぎ酸、純水 （２２５：２２５：１００：４００） 混液）のグラジェント条件（０．００分（Ａ：９３％， Ｂ：７％）、３５分（Ａ：７５％， Ｂ：２５％）、４５分（Ａ：３５％， Ｂ：６５％）、４６分（Ａ：０％， Ｂ：１００％）、５０分（Ａ：９０％， Ｂ：１０％）、６０分（Ａ：９０％， Ｂ：１０％））で測定した。サンプルクーラーは４℃に設定し、４０μＬ注入で測定した。アントシアニンの検出は、５３５ｎｍにおける吸光度の測定により行い、総アントシアニン濃度の算出には、それぞれの物質のピーク面積値を用いた。塩化シアニジン３－グルコシドの１種を標準品として、その検量線と分子量比から次式により算出した。
[material]
The bilberry extracts used in the test were an extract (conventional method) and an extract obtained by pressing. The extracted extract (conventional method) and the pressed product extracted extract were prepared as follows.
The extract obtained by the conventional method (ethanol extraction method) is an extract obtained by purifying an acid water-containing ethanol extract of bilberry fruit. Specifically, pectinase is allowed to act on the fruit under heating (60 ° C.) conditions to decompose the fiber of the fruit, and then the decomposition product is mixed with a hydrous ethanol solution under acidic (about pH 3.5) conditions. bilberry fruit anthocyanins were leached into aqueous ethanol. This operation allowed the anthocyanin concentration in ethanol to reach saturation (2000 ppm to 2500 ppm). The numerical value of pH 3.5 is a pH value selected from the condition of suppressing corrosion of stainless steel equipment in contact with the extract while maintaining the chemical stability of anthocyanins. Thereafter, centrifugation was performed according to a conventional method, and the supernatant was removed to collect the precipitate.
Anthocyanin concentration was measured as follows. A sample of 0.100 g to 0.110 g was weighed in a large weighing dish, transferred into a 50 mL volumetric flask equipped with a funnel, 10 mL of 2% hydrochloric acid methanol was added four times, and mixed for 5 minutes with an ultrasonic cleaner. After that, 2% hydrochloric acid methanol was added to adjust the volume. 5 mL of this solution was accurately weighed, added to a 25 mL volumetric flask, and 10% phosphoric acid was added to adjust the volume. A portion of this solution was passed through a 0.45 μm membrane filter and then transferred to a vial to obtain a test solution. Anthocyanin concentration was measured using a high-performance liquid chromatography device (ELITE LaChrom, Chromaster, manufactured by Hitachi High-Tech Science Co., Ltd. or Prominence LC-20AB, manufactured by Shimadzu Corporation). The column used was Kinetex C18 (4.6×250 mm, 5 μm, manufactured by Phenomenex), and the column temperature was 30°C. The column flow rate was 1.0 ml/min, and the gradient conditions of mobile phase A (10% formic acid aqueous solution) and mobile phase B (methanol, acetonitrile, formic acid, pure water (225:225:100:400) mixture) were applied ( 0.00 minutes (A: 93%, B: 7%), 35 minutes (A: 75%, B: 25%), 45 minutes (A: 35%, B: 65%), 46 minutes (A: 0 %, B: 100%), 50 minutes (A: 90%, B: 10%), and 60 minutes (A: 90%, B: 10%)). The sample cooler was set at 4° C. and a 40 μL injection was measured. Anthocyanin was detected by measuring absorbance at 535 nm, and the peak area value of each substance was used to calculate the total anthocyanin concentration. Using one type of cyanidin chloride 3-glucoside as a standard, it was calculated from the calibration curve and the molecular weight ratio by the following formula.
圧搾処理物からの抽出エキスとしては、プレスケーキからの抽出エキス、すなわち、プレスケーキ抽出エキス（プレスケーキエキス）を用いた。プレスケーキ抽出エキスの調製は、以下の通り行った。常法により、凍結解凍したビルベリー果実（１０，０００ｋｇ；液体成分９，２００ｋｇおよび固形分８００ｋｇ）を２℃の条件下で圧搾し、２，５００ｋｇの圧搾物を得た。このようにして、水分含量を約１／５以下まで低減させた。次にプレスケーキを４５℃で酸処理した。具体的には、プレスケーキ６００ｇにｐＨ１．５ ＨＣｌ ４８００ｍＬを加え、１５０ｒｐｍで１５分撹拌し、４５分静置を２回繰り返し、最後に１５分撹拌して、抽出液を得た。次に抽出液をろ過してろ液を取得した。具体的には、上記で得られた抽出液５００ｍＬにラヂオライト＃６００（５ｇ）（昭和化学工業社製）を添加し吸引ろ過してろ液を取得した。このようにしてビルベリーからエキスを抽出した。抽出されたエキスは、以下の手順によってポリフェノール精製に適した樹脂カラムによって精製した。具体的には、得られたろ液をゼパビーズTMＳＰ２０７（８０ｍＬ）（三菱ケミカル社製）に通液し、樹脂にアントシアニンを吸着させ、ｐＨ３．５ ＨＣｌ（６０ｍＬ）で洗浄し、７０％エタノール－ｐＨ３．５ ＨＣｌ（２４０ｍＬ）で溶出した。得られた溶出液を薄膜式濃縮装置を用いて濃縮し、乾燥噴霧により乾固して、ビルベリーエキスを８６７．６ｍｇ得た。得られたビルベリーエキス（プレスケーキ抽出エキス）は、アントシアニンを約６１重量％含有した。
従来法では、減圧式濃縮装置を併用してエタノール除去と水分除去濃縮を行うが、本実施例で薄膜式濃縮装置を用いる理由は、従来法では、濃度が上昇していく過程で、アントシアニンの会合または分子内若しくは分子間コピグメントがより多く発生するのに対して、薄膜式濃縮によると短時間（例えば、３０秒程度）でもエタノール除去と水分除去が可能であり、これによってアントシアニンの会合または分子内若しくは分子間コピグメントが抑制されることが明らかになったためである。
As the extract extracted from the pressed product, an extract extracted from the press cake, that is, a press cake extract (press cake extract) was used. The presscake extract was prepared as follows. Frozen and thawed bilberry fruits (10,000 kg; 9,200 kg of liquid component and 800 kg of solid content) were pressed at 2° C. to obtain 2,500 kg of pressed material. In this way the water content was reduced to about 1/5 or less. The presscake was then acid treated at 45°C. Specifically, 4800 mL of pH 1.5 HCl was added to 600 g of press cake, and the mixture was stirred at 150 rpm for 15 minutes, allowed to stand for 45 minutes, and then stirred twice for 15 minutes to obtain an extract. Next, the extract was filtered to obtain a filtrate. Specifically, Radiolite #600 (5 g) (manufactured by Showa Chemical Industry Co., Ltd.) was added to 500 mL of the extract obtained above, and suction filtration was performed to obtain a filtrate. An extract was extracted from bilberry in this way. The extracted extract was purified on a resin column suitable for polyphenol purification by the following procedure. Specifically, the resulting filtrate was passed through Zepabeads ™ SP207 (80 mL) (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) to adsorb anthocyanin to the resin, washed with pH 3.5 HCl (60 mL), and washed with 70% ethanol-
In the conventional method, ethanol is removed and water is removed and concentrated by using a vacuum concentrator in combination. While more association or intramolecular or intermolecular copigment occurs, thin-film concentration can remove ethanol and water even in a short period of time (for example, about 30 seconds), thereby anthocyanin association or This is because it has been clarified that intramolecular or intermolecular copigment is suppressed.
［動物］
実験動物は、ウィスターラット（Ｓｌｃ：ｗｉｓｔａｒ、体重１８９～２０３ｇ、雄、９週齢）を使用した。動物搬入後、１週間の予備飼育を行い実験に供した。餌と水は自由摂取とし、前日１７時より一晩絶食させてから実験に供した。
[animal]
Wistar rats (Slc:wistar, body weight 189-203 g, male, 9 weeks old) were used as experimental animals. After the animals were brought in, they were preliminarily bred for one week and used for experiments. Food and water were given ad libitum, and the animals were fasted overnight from 17:00 on the previous day before the experiment.
［ビルベリーエキス投与及びサンプル採取］
各ビルベリーエキス投与溶液の調製表を表２－１に示した。経口投与するアントシアニン量が３７ｍｇ／ｋｇとなるよう各ビルベリーエキス量を算出し、５ｍＬ遠心チューブに各ビルベリーエキスを秤量した。秤量した各ビルベリーエキスに水を添加してボルテックスで溶解させ、メスアップしたものを投与溶液とした。経口投与量は、４ｍＬ／ｋｇとした。
吸入麻酔下（イソフルラン）でラットの頸静脈を露出し採血部位を確保した後、各ビルベリーエキス溶液をゾンデにて経口投与した。経口投与後、０．２５，０．５，１，１．５，２，４，および６時間の計７回、経時的に採血を行った。採血には、ヘパリン処理したシリンジを使用し、採血量は５００μＬ／回とした。採取した血液はすぐに氷冷し、３０分以内に遠心分離（４℃、１０，０００×ｇ、３分）を行い、血漿を採取した。実験中は、麻酔下でのラットの体温維持のため加温を行った。
[Bilberry extract administration and sample collection]
A preparation table for each bilberry extract administration solution is shown in Table 2-1. The amount of each bilberry extract was calculated so that the amount of anthocyanin to be orally administered was 37 mg/kg, and each bilberry extract was weighed in a 5 mL centrifuge tube. Water was added to each of the weighed bilberry extracts, dissolved by vortexing, and diluted to a volume to obtain an administration solution. The oral dose was 4 mL/kg.
After exposing the jugular vein of the rat under inhalation anesthesia (isoflurane) and securing a blood sampling site, each bilberry extract solution was orally administered using a sonde. After oral administration, blood was collected over time at 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 4, and 6 hours, a total of 7 times. A heparinized syringe was used for blood collection, and the volume of blood collected was 500 μL/time. The collected blood was immediately ice-cooled and centrifuged (4° C., 10,000×g, 3 minutes) within 30 minutes to collect plasma. During the experiment, warming was performed to maintain the body temperature of the rats under anesthesia.
［アントシアニン濃度測定］
アントシアニン抽出用サンプル調製は、血漿２００μＬを１．５ｍＬマイクロチューブに採取し、５％ギ酸水溶液を２００μＬ加えた。固相抽出カラムは、Ｏａｓｉｓ ＨＬＢ １ｃｍ3（Ｗａｔｅｒｓ）を使用した。固相抽出操作は、カラムに１０％ギ酸アセトン１ｍＬを入れ、続けて１０％ギ酸水溶液１ｍＬを２回負荷する。カラムにアントシアニン抽出用サンプル４００μＬを負荷し、１％ギ酸水溶液を１ｍＬ負荷する（洗浄）。この操作を２回行った。最後に、溶出液回収用の１．５ｍＬマイクロチューブをセットし、１０％ギ酸アセトン４００μＬを負荷した。マイクロチューブ内の溶出液は、窒素（Ｎ2）ガスで乾固させた。Ｎ2ガス乾固後のマイクロチューブに１０％ギ酸水溶液１００μＬを添加し、ボルテックスにて溶解したものを３００μＬ容ＰＰバイアルに移して測定溶液とした。
アントシアニン濃度測定は、液体クロマトグラフィー装置（ＮｅｘｅｒａＸ２、島津製作所）及び質量分析計（ＬＣＭＳ－８０５０、島津製作所）を用いて実施した。カラムはＳｈｉｍ－Ｐａｃｋ ＦＣ－ＯＤＳ（１５０×２ｍｍ）（島津製作所）を使用し、カラムオーブンは３０℃とした。移動相流量は０．２５ｍｌ／ｍｉｎで、移動相Ａ（５％ギ酸水溶液）、移動相Ｂ（５％ギ酸含有アセトニトリル）のグラジェント条件（０．００→４．００ ｍｉｎ（Ａ：９０％， Ｂ：１０％）、４．００→１０．００ ｍｉｎ（Ａ：９０→７５％， Ｂ：１０→２５％）、１０．００→１２．００ ｍｉｎ（Ａ：７５→６２％， Ｂ：２５→３８％）、１２．０１→１４．００ ｍｉｎ（Ａ：０％， Ｂ：１００％）、１４．０１→２０．００ ｍｉｎ（Ａ：９０％， Ｂ：１０％））で測定した。サンプルクーラーは４℃に設定し、２μＬ注入で測定した。質量分析計（エレクトロスプレー法：ＥＳＩ）のネブライザー流量は３Ｌ／ｍｉｎ、ヒーティングガス流量は５Ｌ／ｍｉｎ、インターフェイス温度は２５０℃、ＤＬ温度は２５０℃、ヒートブロック温度は２５０℃、ドライングガス流量は１５Ｌ／ｍｉｎに設定し、Ｄｅｌ－３－Ｇａｌ，Ｄｅｌ－３－Ｇｌｕは４６４．９＞３０３．０、Ｄｅｌ－３－Ａｌａは４３５．１＞３０３．０、Ｃｙａ－３－Ｇａｌ，Ｃｙａ－３－Ｇｌｕは４４９．０＞２８７．０、Ｃｙａ－３－Ａｌａは４１９．０＞２８７．０、Ｐｅｔ－３－Ｇａｌ，Ｐｅｔ－３－Ｇｌｕは４７９．２＞３１７．０、Ｐｅｔ－３－Ａｌａは４４９．２＞３１７．０、Ｐｅｏ－３－Ｇａｌ，Ｐｅｏ－３－Ｇｌｕは４６３．２＞３０１．０、Ｐｅｏ－３－Ａｌａは４３３．２＞３０１．０、Ｍａｌ－３－Ｇａｌ，Ｍａｌ－３－Ｇｌｕは４９３．１＞３３１．０、Ｍａｌ－３－Ａｌａは４６３．２＞３３１．０のＭＲＭ（ポジティブ）を定量イオンとして測定した。
アントシアニンの定量については、ＬＣ－ＵＶでビルベリーエキス（従来法によるエキス）をＣ３Ｇで定量し、そのビルベリーエキス溶液の各１５種のアントシアニンの定量値をもとめ、そのビルベリーエキス溶液を標準溶液とした。
[Measurement of anthocyanin concentration]
Sample preparation for anthocyanin extraction was performed by collecting 200 μL of plasma in a 1.5 mL microtube and adding 200 μL of 5% formic acid aqueous solution. The solid phase extraction column used was
Anthocyanin concentration was measured using a liquid chromatography system (Nexera X2, Shimadzu Corporation) and a mass spectrometer (LCMS-8050, Shimadzu Corporation). A Shim-Pack FC-ODS (150×2 mm) (Shimadzu Corporation) was used as a column, and the column oven was set at 30°C. The mobile phase flow rate was 0.25 ml/min, and the gradient conditions of mobile phase A (5% formic acid aqueous solution) and mobile phase B (acetonitrile containing 5% formic acid) (0.00 → 4.00 min (A: 90%, B: 10%), 4.00 → 10.00 min (A: 90 → 75%, B: 10 → 25%), 10.00 → 12.00 min (A: 75 → 62%, B: 25 → 38%), 12.01→14.00 min (A: 0%, B: 100%), 14.01→20.00 min (A: 90%, B: 10%)). The sample cooler was set at 4° C. and a 2 μL injection was measured. The mass spectrometer (electrospray method: ESI) had a nebulizer flow rate of 3 L/min, a heating gas flow rate of 5 L/min, an interface temperature of 250°C, a DL temperature of 250°C, a heat block temperature of 250°C, and a drying gas flow rate of Set to 15 L / min, Del-3-Gal, Del-3-Glu 464.9>303.0, Del-3-Ala 435.1>303.0, Cya-3-Gal, Cya-3 -Glu is 449.0>287.0, Cya-3-Ala is 419.0>287.0, Pet-3-Gal, Pet-3-Glu is 479.2>317.0, Pet-3-Ala is 449.2>317.0, Peo-3-Gal, Peo-3-Glu is 463.2>301.0, Peo-3-Ala is 433.2>301.0, Mal-3-Gal, Mal MRM (positive) of 493.1>331.0 for -3-Glu and 463.2>331.0 for Mal-3-Ala was measured as quantitative ions.
For quantification of anthocyanins, the bilberry extract (extract by conventional method) was quantified by C3G with LC-UV, and the quantitative values of 15 kinds of anthocyanins in each of the bilberry extract solutions were determined, and the bilberry extract solution was used as a standard solution.
［統計解析］
全てのデータは、平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＤ）で示した。各データの比較は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いて行なった。有意水準は、ｐ＜０．０５とした。
[Statistical analysis]
All data are presented as mean ± standard deviation (Mean ± SD). Each data was compared using Student's t-test. The level of significance was p<0.05.
［結果］
投与直前の各投与群のラットの体重を表２－２に示した。従来法による抽出エキス投与群と比較して、２群とも有意な差はみられなかった。
[result]
Table 2-2 shows the body weight of rats in each administration group immediately before administration. No significant difference was observed between the two groups in comparison with the extract administration group by the conventional method.
従来法による抽出エキス投与群の血漿中アントシアニン濃度の経時的変化を確認した（図１、表３－１および表３－２）。従来法による抽出エキス投与群では、経口投与後約２時間で最高濃度（Ｃmax）となった。従来法による抽出エキス投与群および圧搾処理物抽出エキス投与群の血漿中アントシアニン濃度の経時的変化を比較した（図１、表３－１～表３－３）。圧搾処理物抽出エキス投与群では、経口投与後６時間経過しても血漿中アントシアニン濃度は増加をし続けた。また、ＡＵＣ0-6は、従来法による抽出エキス投与群よりも圧搾処理物抽出エキス投与群の方が統計的有意に高値であった（表３－１）。 Changes over time in plasma anthocyanin concentration in the group administered with the extract by the conventional method were confirmed (Fig. 1, Tables 3-1 and 3-2). In the extract administration group by the conventional method, the maximum concentration (C max ) was reached about 2 hours after oral administration. The time-dependent change in plasma anthocyanin concentration was compared between the conventional extract administration group and the compressed product extract administration group (Fig. 1, Tables 3-1 and 3-3). In the pressed product extract administration group, the plasma anthocyanin concentration continued to increase even 6 hours after oral administration. In addition, AUC 0-6 was statistically significantly higher in the group administered with the compressed extract than in the group administered with the extract obtained by the conventional method (Table 3-1).
圧搾処理物抽出エキス投与群では、各個体のＣmaxが、従来法による抽出エキス投与群と比較して高かった。また、圧搾処理物抽出エキス投与群のＡＵＣ0-6は従来法による抽出エキス投与群と比較して２倍以上高い値を示し、かつこの差は統計的有意であった（表３－１参照）こと、およびＣmaxが約２倍（個体間では最大６倍）に増加したことから、圧搾処理物抽出エキスは、従来法による抽出エキスよりも、投与後のアントシアニンの吸収性が良い可能性が示唆された。また、従来法による抽出エキス投与群では、Ｃmaxがとりわけ低い個体（Ｎｏ．３）が認められたが、圧搾処理物抽出エキスでは、個体間のばらつきの少ない安定したＣmaxを達成した。このように、解重合アントシアニンを多く含むと考えられる圧搾処理物抽出エキスは、経口投与によって血中アントシアニンの濃度を高めやすいという特徴を示す。 In the compressed product extract administration group, the C max of each individual was higher than in the extraction extract administration group by the conventional method. In addition, the AUC 0-6 of the compressed product extract administration group showed a value more than twice as high as that of the extraction extract administration group by the conventional method, and this difference was statistically significant (see Table 3-1). ), and the C max increased about twice (maximum six times among individuals), it is possible that the compressed product extract has better absorption of anthocyanins after administration than the extract obtained by the conventional method. was suggested. In addition, in the extract administration group by the conventional method, an individual with particularly low C max (No. 3) was observed, but in the compressed extract, a stable C max with little variation among individuals was achieved. As described above, the extract of the pressed product, which is considered to contain a large amount of depolymerized anthocyanin, exhibits the characteristic that it is easy to increase the concentration of anthocyanin in the blood by oral administration.
各種ビルベリーエキスの有機酸含有量を分析した。具体的には、試料０．０５０ｇ～０．０６０ｇを秤量皿で量りとり、ロートを置いた５０ｍＬメスフラスコに移し、１０％メタノール水溶液１０ｍＬを４回繰り返し加え、超音波洗浄機で５分間混合した。その後、１０％メタノール水溶液を加え定容した。この一部を適宜希釈し、０．４５μｍメンブレンフィルターに通した後、バイアル瓶に移し、試験溶液とした。次に、有機酸含有量測定は、液体クロマトグラフィー装置（ＮｅｘｅｒａＸ２、島津製作所）及び質量分析計（ＬＣＭＳ－８０５０、島津製作所）を用いて実施した。カラムはＳｈｉｇｍａ Ｆ５（２５０×２．１ｍｍ， ５μｍ）（島津製作所）を使用し、カラムオーブンは３０℃とした。カラム流量は０．２ｍＬ／ｍｉｎで、移動相Ａ（０．２％ギ酸水溶液）、移動相Ｂ（０．２％ギ酸含有アセトニトリル）のグラディエント条件（０．００分（Ａ１００％，Ｂ：０％）、２．００分（Ａ１００％，Ｂ：０％）、５．００分（Ａ７５％，Ｂ：２５％）、１１．００分（Ａ６５％，Ｂ：３５％）、１５．００分（Ａ５％，Ｂ：９５％）、１８．００分（Ａ５％，Ｂ：９５％）、１８．０１分（Ａ１００％，Ｂ：０％）、３０．００分（Ａ１００％，Ｂ：０％））で測定した。サンプルクーラーは４℃に設定し、サンプルは２μＬ注入した。質量分析計（エレクトロスプレー法：ＥＳＩ）のネブライザー流量は３Ｌ／ｍｉｎ、ヒーティングガス流量は１０Ｌ／分、ＤＬ温度は２００℃、ヒートブロック温度は３００℃、ドライングガス流量は１０Ｌ／分に設定した。各有機酸の定量は、有機酸混合標準溶液を用いて行った。各有機酸標準品より、各々標準原液を調製し、各標準原液を混合したものを有機酸混合標準溶液とし、その検量線から定量値を算出した。結果は、表４－１および４－２に示される通りであった。 Organic acid content of various bilberry extracts was analyzed. Specifically, 0.050 g to 0.060 g of the sample was weighed with a weighing dish, transferred to a 50 mL volumetric flask with a funnel, 10 mL of a 10% methanol aqueous solution was added four times, and mixed for 5 minutes with an ultrasonic cleaner. . After that, a 10% methanol aqueous solution was added to adjust the volume. A portion of this was diluted appropriately, passed through a 0.45 μm membrane filter, and then transferred to a vial to obtain a test solution. Next, the organic acid content was measured using a liquid chromatograph (Nexera X2, Shimadzu Corporation) and a mass spectrometer (LCMS-8050, Shimadzu Corporation). Sigma F5 (250×2.1 mm, 5 μm) (Shimadzu Corporation) was used as a column, and the column oven was set at 30°C. The column flow rate was 0.2 mL/min, and the gradient conditions of mobile phase A (0.2% formic acid aqueous solution) and mobile phase B (acetonitrile containing 0.2% formic acid) were set for 0.00 min (A100%, B: 0% ), 2.00 minutes (A100%, B: 0%), 5.00 minutes (A75%, B: 25%), 11.00 minutes (A65%, B: 35%), 15.00 minutes (A5 %, B: 95%), 18.00 minutes (A5%, B: 95%), 18.01 minutes (A100%, B: 0%), 30.00 minutes (A100%, B: 0%)) measured in The sample cooler was set at 4° C. and 2 μL of sample was injected. The mass spectrometer (electrospray method: ESI) had a nebulizer flow rate of 3 L/min, a heating gas flow rate of 10 L/min, a DL temperature of 200°C, a heat block temperature of 300°C, and a drying gas flow rate of 10 L/min. . Each organic acid was quantified using an organic acid mixed standard solution. A standard undiluted solution was prepared from each organic acid standard product, each standard undiluted solution was mixed to obtain an organic acid mixed standard solution, and a quantitative value was calculated from the calibration curve. The results were as shown in Tables 4-1 and 4-2.
表４－１に示されるように、ビルベリーの冷凍果実を圧搾して得られた圧搾処理物においては、有機酸含量が大きく低減している。このことは、圧搾によって有機酸が除去されたことを意味する。また、表４－２に示されるように、圧搾処理物抽出エキスにおいては、従来法による抽出エキスよりも、酒石酸、キナ酸、リンゴ酸、クエン酸、コハク酸、没食子酸、およびクロロゲン酸含有量が低減されていた。圧搾による圧搾処理物調製工程において有機酸が除去されたと共に、圧搾処理物の酸処理によって、アントシアニンと有機酸との結合が破壊され、これにより夾雑物としての有機酸の有効な除去を可能としたと考えられる。これに対して、圧搾処理物抽出エキスには、アントシアニンが高濃度で含まれていたことから、圧搾や酸処理によってアントシアニンは減少しにくいという点は圧搾処理物抽出エキスの利点として注目されるべきである。 As shown in Table 4-1, the pressed product obtained by pressing the frozen bilberry fruit has a significantly reduced organic acid content. This means that the organic acids have been removed by pressing. In addition, as shown in Table 4-2, in the pressed product extract, the content of tartaric acid, quinic acid, malic acid, citric acid, succinic acid, gallic acid, and chlorogenic acid is higher than that of the extract obtained by the conventional method. was reduced. Organic acids were removed in the process of preparing the pressed product by pressing, and the acid treatment of the pressed product destroyed the bond between the anthocyanin and the organic acid, thereby enabling effective removal of the organic acid as a contaminant. It is thought that On the other hand, the pressed product extract contained a high concentration of anthocyanins, so it should be noted that the fact that anthocyanins are less likely to decrease by pressing or acid treatment is an advantage of the pressed product extract. is.
アントシアニンは、有機酸（例えば、クロロゲン酸等）と組み合わさることで色味を増す。この現象は分子内コピグメントによる。圧搾処理物抽出エキスでは、有機酸含量が減少し、従来法による抽出エキスよりも、コピグメントの形成を１０～５０％未満に画期的に低減させている。特にアントシアニン重量：総有機酸重量比に関して、圧搾処理物抽出エキスでは、従来法による抽出エキスと比較して約１／３にまで低減した。 Anthocyanin increases color by being combined with an organic acid (for example, chlorogenic acid, etc.). This phenomenon is due to intramolecular copigmentation. In the pressed extract, the organic acid content is reduced, and the formation of copigments is dramatically reduced to less than 10-50% compared to extracts extracted by conventional methods. In particular, the anthocyanin weight:total organic acid weight ratio was reduced to about 1/3 in the pressed extract as compared with the extract obtained by the conventional method.
イオン交換樹脂への吸着物中のアントシアニン純度において、従来では最大でも４５％程度であったところ、圧搾処理物抽出エキスにおいては約６０％の純度を認めた。この結果は、溶液中の有機酸は、アントシアニンと有機酸との会合体（分子間コピグメンテーションや分子内コピグメンテーション）などの分子内または分子間で重合したアントシアニン生成の原因となり得る。圧搾工程によって有機酸を含む水分を除去することが、その後の工程における、分子間コピグメンテーションや分子内コピグメンテーションの再形成の低減に繋がっていると考えられる。また、水分除去で取り除かれなかった有機酸に関しても、その後の酸処理によって、アントシアニンからの乖離が促進されることによって、有機酸とのアントシアニンとの会合体を低減させている（解重合させている）。その上で、イオン交換樹脂には、分子量が低いアントシアニン（解重合アントシアニン）が優先的に結合し、有機酸との分子内または分子間結合を含むアントシアニンの結合性は低い。このことが、圧搾処理物抽出エキスにおいては、解重合アントシアニンの含量が増加したことの理由となっていると考えられる。このように圧搾処理物抽出エキスにおいては、有機酸濃度が低減されており、アントシアニンによるコピグメントの形成率が画期的に低く、かつ解重合した単分子のアントシアニンの含量に関して、従来法による抽出エキスよりも高まっていると考えられる。インビボ投与試験の結果からは、圧搾処理物抽出エキス投与群においてＣmaxおよびＡＵＣが高かった。この結果は、解重合アントシアニンの収量の増加は、腸管におけるアントシアニンの吸収性の向上に寄与したことを示唆するものである。実験で用いられたアントシアニン溶液中では、アントシアニンは濃色化しており、自己会合アントシアニンを形成していると考えられる。自己会合アントシアニン含量を増加させること（または分子内または分子間コピグメンテーションを減少させること）は、アントシアニンの腸吸収性や血中濃度を改善し得ることもまた、明らかになった。 Conventionally, the purity of anthocyanin in the substance adsorbed to the ion-exchange resin was about 45% at maximum, but the purity of the extract obtained by pressing was found to be about 60%. As a result, the organic acid in the solution can cause the formation of intramolecularly or intermolecularly polymerized anthocyanins such as associations of anthocyanins and organic acids (intermolecular copigmentation or intramolecular copigmentation). It is considered that the removal of water containing organic acids by the pressing step leads to the reduction of re-formation of inter-molecular co-pigmentation and intra-molecular co-pigmentation in subsequent steps. In addition, the subsequent acid treatment promotes dissociation from anthocyanin for the organic acid that was not removed by water removal, thereby reducing the aggregate of the organic acid and anthocyanin (depolymerized). there). In addition, anthocyanins with low molecular weights (depolymerized anthocyanins) preferentially bind to ion exchange resins, and anthocyanins containing intramolecular or intermolecular bonds with organic acids have low binding properties. This is considered to be the reason for the increased content of depolymerized anthocyanins in the pressed product extract. In this way, the extract of the pressed product has a reduced organic acid concentration, a remarkably low copigment formation rate by anthocyanin, and a content of depolymerized monomolecular anthocyanin extracted by a conventional method. It is thought that it is higher than the extract. From the results of the in vivo administration test, Cmax and AUC were high in the group that was administered the extract of the compressed product. This result suggests that the increase in the yield of depolymerized anthocyanin contributed to the enhancement of anthocyanin absorption in the intestinal tract. In the anthocyanin solution used in the experiment, anthocyanin is darkened, and it is considered that self-associated anthocyanin is formed. It was also found that increasing the content of self-associated anthocyanins (or decreasing intramolecular or intermolecular copigmentation) can improve the intestinal absorption and blood levels of anthocyanins.
本発明に方法によれば、ビルベリー果実からアントシアニンを大量に抽出できるだけでなく、抽出されるアントシアニンは解重合型の比率が高く生体への利用性が向上していることが明らかとなった。 According to the method of the present invention, not only can a large amount of anthocyanin be extracted from bilberry fruit, but the ratio of depolymerized anthocyanin in the extracted anthocyanin is high, and bioavailability is improved.
Claims (8)
ビルベリー果実を摂氏１０℃以下の温度条件下において圧搾して水分含量およびアントシアニンに対する有機酸含有量が低減した果実の圧搾処理物を得ることと、
水分含量およびアントシアニンに対する有機酸含有量が低減した果実の圧搾処理物を酸で処理して水溶性画分としてビルベリーエキスを得ることとを含む、
方法。 A method for extracting a bilberry extract,
Pressing bilberry fruit under a temperature condition of 10 degrees Celsius or less to obtain a pressed product of the fruit having a reduced moisture content and a reduced organic acid content relative to anthocyanin ;
treating the fruit press with reduced water content and organic acid content relative to anthocyanins with an acid to obtain a bilberry extract as a water-soluble fraction;
Method.
請求項１～７のいずれか一項に記載の抽出方法を含む、方法。 A method for producing an anthocyanin composition,
A method comprising an extraction method according to any one of claims 1-7.
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