JP7296189B2 - Menopause improving agent containing grape seed extract - Google Patents
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Description
本発明は、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化を抑制し、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化に起因する体重増加症状、及び更年期障害期に生じる耐糖能の低下症状を軽減するための主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、サプリメントに関する。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention suppresses the deterioration of the intestinal flora during the menopausal period, and the symptom of weight gain caused by the deterioration of the intestinal flora during the menopausal period and the symptom of decreased glucose tolerance that occurs during the menopausal period. It relates to a menopause improving agent, food, drink, and supplement containing a grape seed extract as a main ingredient for alleviating
更年期は、一般に閉経をはさんだ前後約10年間のことを指し、年齢としては、45歳~55歳くらいの時期が該当する。更年期には、いわゆる更年期障害として、疲労感、微熱感、頭痛、ほてり、のぼせ、耳鳴り、多汗、めまい、しびれ感などの種々の不定愁訴の症状が現れることがある。更年期障害は、卵巣機能の低下によるエストロゲンなどの女性モルモンの減少に起因すると考えられている。近年では、女性の社会進出に伴い、20~40歳の女性においてもストレスや喫煙、ダイエット等によりホルモンバランスが乱れ、更年期障害に類似の症状が現れるケースが増えており、若年性更年期障害と呼ばれている。 Menopause generally refers to a period of about 10 years before and after menopause, and corresponds to a period of about 45 to 55 years of age. During menopause, various indefinite symptoms such as fatigue, slight fever, headache, hot flash, hot flash, tinnitus, hyperhidrosis, dizziness, and numbness may appear as so-called climacteric disorders. Menopause is believed to be caused by a decrease in female Mormons such as estrogen due to decreased ovarian function. In recent years, with the advancement of women in society, there has been an increase in the number of women aged 20 to 40 who are experiencing hormonal imbalance due to stress, smoking, dieting, etc., and are experiencing symptoms similar to menopause. is
また、女性は更年期のころからポッチャリしたいわゆるリンゴ型の肥満体形になる傾向がある。更年期には、卵巣機能の低下に伴い、女性ホルモンのひとつであるエストロゲンが急激に減少する。エストロゲンは、妊娠・出産のための働きをするだけでなくコレステロール値を正常にして脂肪の代謝を促進する働きがあり、更年期時期のエストロゲン減少は女性が太りやすくなる原因のひとつである。その他にも加齢とともに筋肉が低下し基礎代謝が下がることや普段の生活で運動量が減っていくことなどが原因していると考えられている。 In addition, women tend to have plump, so-called apple-shaped obese bodies from the time of menopause. During menopause, estrogen, which is one of the female hormones, decreases sharply as the ovarian function declines. Estrogen not only works for pregnancy and childbirth, but it also works to normalize cholesterol levels and promote fat metabolism. In addition, it is thought that the muscle weakens with age, the basal metabolism decreases, and the amount of exercise in everyday life decreases.
女性ホルモンのエストロゲンには、脂肪の代謝を促進する作用以外にも、インスリンを効きやすくする性質がある。更年期に入ってエストロゲンの分泌が徐々に減少していくと、インスリンが効きづらくなり血糖値が下がりにくくなる。すなわち、耐糖能が低下する傾向にある。そこに体重増加による肥満が加わると、生活習慣病のひとつである糖尿病にかかる危険性が高まってしまう。 Estrogen, a female sex hormone, has the property of making insulin more effective in addition to promoting fat metabolism. When menopause begins, estrogen secretion gradually decreases, making it difficult for insulin to work and blood sugar levels to fall. That is, glucose tolerance tends to decrease. When obesity due to weight gain is added to this, the risk of developing diabetes, which is one of lifestyle-related diseases, increases.
このような更年期障害の治療法としては、不足している女性ホルモンを飲み薬や皮膚に貼って補充するホルモン補充療法(HRT)があるが、長期的に使用すると乳がんや子宮がんの発生リスクを高める可能性があると指摘されている。また、植物成分としては、分子構造がヒトのエストロゲンに似ている大豆イソフラボンが、エストロゲンに似た作用を生じることが知られている(特許文献1)。しかし、大豆イソフラボン等の植物エストロゲンについては、乳がん等エストロゲンに感受性の高いがんにおける発生リスクが懸念されている。そこで、副作用リスクの少ない更年期障害改善剤が望まれていた。 As a treatment for such menopausal disorders, there is hormone replacement therapy (HRT), in which the lacking female hormones are supplemented by oral medicine or skin application, but long-term use increases the risk of breast cancer and uterine cancer. has been suggested to have the potential to increase As a plant component, soybean isoflavone, which has a molecular structure similar to human estrogen, is known to produce effects similar to estrogen (Patent Document 1). However, regarding phytoestrogens such as soy isoflavones, there is concern about the risk of developing estrogen-sensitive cancers such as breast cancer. Therefore, a menopausal disorder improving agent with a low risk of side effects has been desired.
肥満は糖尿病や高血圧・心筋疾患などの生活習慣病を始めとして数多くの疾患のもとになることが叫ばれ、厚生労働省においても、健康づくりにおいて肥満の予防・対策は重要な位置づけを持つとして、食事や運動などの生活習慣の見直しを提唱している(非特許文献1)。一方で、肥満と腸内細菌叢との関係について多くの研究がなされ、腸内細菌叢が肥満や生活習慣病に関係しているこが明らかになってきている(非特許文献2)。 Obesity is said to be the cause of many diseases, including lifestyle-related diseases such as diabetes, hypertension, and myocardial disease. It advocates a review of lifestyle habits such as diet and exercise (Non-Patent Document 1). On the other hand, many studies have been conducted on the relationship between obesity and intestinal flora, and it has become clear that the intestinal flora is related to obesity and lifestyle-related diseases (Non-Patent Document 2).
人の腸内には、常在細菌である腸内細菌が、数にして600~1000兆、種類としては1000種以上も棲息しているといわれている。腸内細菌叢とは、腸の中に棲息する腸内細菌の群生であり、人によりその構成は大きく異なるが腸管内で一定のバランスを保っている。腸内細菌叢の構成は、宿主により異なり加齢によっても変化する。 It is said that there are 600 to 1000 trillion, and more than 1000 species, of intestinal bacteria, which are resident bacteria, in the human intestine. The intestinal flora is a colony of intestinal bacteria that inhabits the intestine, and although the composition varies greatly from person to person, it maintains a certain balance within the intestinal tract. The composition of the intestinal microbiota differs depending on the host and also changes with age.
腸内細菌叢は、大きくわけてアクチノバクテリア門、バクテロイデス門、プロテオバクテリア門、フィルミクテス門に分けられる。また、「善玉菌」「悪玉菌」「日和見菌」の3種類に分類されることもある。乳酸菌、ビフィズス菌などのアクチノバクテリア門は善玉菌といわれ、主に食物繊維を餌に増え、乳酸や酢酸を分泌して、消化吸収をよくしたり、腸の免疫細胞を刺激して免疫力を活発化している。大腸菌などのプロテオバクテリア門は、アンモニアやアミンなどの毒素を作り出し、消化吸収を妨げるので、悪玉菌といわれている。腸内細菌叢の大部分を占めるバクテロイデス門とフィルミクテス門は日和見菌といわれ、普段はほとんど影響を与えないが、善玉菌、悪玉菌のどちらか優勢なほうに加勢することが知られている。日和見菌のうち、バクテロイデス門は善玉菌が優勢となると善玉菌に加勢し、フィルミクテス門は逆に、悪玉菌が優勢となると悪玉菌に加勢する傾向にある。腸内細菌叢において、これらがバランスよく共存していることが重要であり、それぞれの菌は互いに共存しているため悪玉菌がいないと善玉菌は動かないし、悪玉菌の中にはO‐157を排除する菌も存在している。 The intestinal flora is broadly divided into Actinobacteria, Bacteroidetes, Proteobacteria, and Firmicutes. In addition, it is sometimes classified into three types: "good bacteria", "bad bacteria" and "opportunistic bacteria". Actinobacteria, such as lactic acid bacteria and bifidobacteria, are said to be good bacteria. They mainly feed on dietary fiber, secrete lactic acid and acetic acid, improve digestion and absorption, and stimulate immune cells in the intestine to strengthen immunity. Active. Proteobacteria such as Escherichia coli are called bad bacteria because they produce toxins such as ammonia and amines and interfere with digestion and absorption. The Bacteroidetes and Firmicutes phyla, which account for most of the intestinal flora, are called opportunistic bacteria, and although they usually have little effect, they are known to support either the good bacteria or the bad bacteria, whichever is dominant. Among the opportunistic bacteria, the Bacteroidetes phylum tends to assist the good bacteria when the good bacteria become dominant, while the Firmicutes phylum tends to assist the bad bacteria when the bad bacteria become dominant. In the intestinal flora, it is important for these to coexist in a well-balanced manner. There are also bacteria that eliminate
また、腸内細菌叢が、肥満体重と正常体重でことなることがわかってきている。Gordonらのグループは、肥満マウスでは正常体重マウスに比較してバクテロイデス門に属する菌数が50%少なく、それに比例してフィルミクテス門に属する菌数が高いことを報告している(非特許文献3)。ヒトにおいても肥満者は、フィルミクテス門が多いと同時にバクテロイデス門が少ないことが報告されている(非特許文献4)。 In addition, it has been found that the intestinal flora differs between obese and normal weight individuals. Gordon et al.'s group reported that obese mice have 50% fewer bacteria belonging to the phylum Bacteroidetes than normal weight mice, and that the number of bacteria belonging to the phylum Firmicutes is proportionally higher (Non-Patent Document 3). ). Obese humans are also reported to have more Firmicutes and less Bacteroidetes (Non-Patent Document 4).
さらに、肥満の人から腸内細菌を移植された無菌マウスは、痩せた人の腸から細菌を与えられた無菌マウスに比べて体重が増加し、より多くの脂肪が蓄積することも示されており、腸内細菌叢が肥満に影響することも示めされている(非特許文献5)。すなわち、肥満により腸内細菌叢は変化し、肥満により変化した腸内細菌叢により、さらに体重が増加し脂肪が蓄積されるという悪循環に陥ってしまうと考えられるのである。したがって、体重増加を防ぐためのひとつの方法は、フィルミクテス門に属する菌を増やさないこと、及びフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の比を維持、又は増加させ、肥満型の腸内細菌叢の構成に移行させないことが大切であると考えられる。 In addition, germ-free mice transplanted with gut bacteria from obese individuals have been shown to gain weight and accumulate more fat than germ-free mice fed bacteria from the gut of lean individuals. It has also been shown that the intestinal flora influences obesity (Non-Patent Document 5). In other words, it is thought that obesity causes changes in the intestinal flora, and the changed intestinal flora due to obesity leads to further weight gain and accumulation of fat, leading to a vicious circle. Therefore, one way to prevent weight gain is to prevent the growth of bacteria belonging to the phylum Firmicutes, and to maintain or increase the ratio of Bacteroidetes to Firmicutes, thereby preventing a shift to an obese gut microbiota composition. is considered important.
緑茶に多く含まれるカテキンには、抗菌・殺菌作用があることが知られているが(非特許文献6)、カテキンなどのポリフェノールが腸内細菌叢のバランス、特に日和見菌であるフィルミクテス門とバクテロイデス門の割合に与える影響については報告がなされていない。一方で、カテキンなどのポリフェノールが、脂肪の吸収や代謝に関与していることや体重増加、血糖値上昇抑制作用があることも示されている。例えば、小嶋らは、高脂肪食餌と同時に小豆ポリフェノール飲料を与えたマウスの体重増加が抑制されることを報告し、同時に小豆ポリフェノールに脂肪を分解するリパーゼ活性を抑制する働きがあることをin vitro実験により示し、体重増加の抑制は小豆ポリフェノールが脂肪の消化・吸収を抑制し、脂肪が便とともに排出されたことによると推定している(非特許文献7)。 It is known that catechins, which are abundant in green tea, have antibacterial and bactericidal effects (Non-Patent Document 6). Effects on phylum proportions have not been reported. On the other hand, it has also been shown that polyphenols such as catechins are involved in fat absorption and metabolism, and have weight gain and blood sugar level elevation suppressing effects. For example, Kojima et al. reported that administration of an adzuki bean polyphenol drink at the same time as a high-fat diet suppressed weight gain in mice. Experiments have shown that the suppression of weight gain is presumed to be due to adzuki bean polyphenol suppressing the digestion and absorption of fat, and the fat being excreted together with feces (Non-Patent Document 7).
更年期の体重増加を抑制するためにポリフェノールを取れば食事から摂取した脂肪の消化・吸収を抑えることはできると考えられるが、上述したように更年期の体重増加の原因は食事にのみ起因するものではない。そこで、我々はポリフェノールの一種であるカテキン類を多く含むブドウ種子抽出物に注目し、更年期時期に主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、フィルミクテス門の増加を抑え、あるいは、フィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合を維持、増加させ、更年期前後で腸内細菌叢のバランスを変化させずに維持することができないかと考えた。このような腸内細菌叢の悪化を抑制することができれば、更年期時期の体重増加の原因のひとつを排除できるので、肥満予防につながり、ひいては生活習慣病の予防ができるのではなかと考えたからである。 Taking polyphenols to suppress menopausal weight gain is thought to suppress the digestion and absorption of dietary fat, but as mentioned above, the cause of menopausal weight gain is not solely due to diet. do not have. Therefore, we focused on grape seed extract, which contains a large amount of catechins, a type of polyphenol. I wondered whether it would be possible to suppress or maintain or increase the ratio of Bacteroidetes to Firmicutes and maintain the balance of the intestinal microflora before and after menopause without changing it. If we can suppress the deterioration of the intestinal microflora, we can eliminate one of the causes of weight gain during menopause. be.
上記の事情を鑑み、本発明は、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化を抑制し、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化に起因する体重増加症状、及び更年期障害期に生じる耐糖能の低下症状を軽減するための主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントを提供することを課題とする。 In view of the above circumstances, the present invention suppresses the deterioration of the intestinal flora that occurs during the menopausal period, and provides weight gain symptoms caused by the deterioration of the intestinal flora that occurs during the menopause period, and in the menopausal period. An object of the present invention is to provide a menopausal disorder improving agent, food, drink, and supplement containing a grape seed extract as a main component for alleviating symptoms of decreased glucose tolerance.
上記課題を解決するための手段として、以下の発明などを提供する。すなわち、更年期障害期に生じる腸内細菌叢のフィルミクテス門の増加を抑制するための主要成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントを第一の発明として提供する。 As means for solving the above problems, the following inventions are provided. That is, the first invention provides a menopausal disorder improving agent, food and drink, and a supplement containing a grape seed extract as a main component for suppressing an increase in the Firmicutes phylum of the intestinal flora that occurs during the menopausal period.
第二の発明として、更年期障害期に生じる腸内細菌叢のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合を維持又は増加するための主要成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントを提供する。 As a second invention, a menopausal disorder improving agent, food, drink, and supplement containing grape seed extract as a main ingredient for maintaining or increasing the ratio of Bacteroidetes to Firmicutes in the intestinal flora that occurs during menopause. offer.
第三の発明として、更年期障害期の腸内菌叢の悪玉化に起因する体重増加症状を軽減するための主要成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントを提供する。 As a third invention, the present invention provides a menopausal disorder improving agent, food and drink, and a supplement containing a grape seed extract as a main ingredient for alleviating weight gain symptoms caused by deterioration of the intestinal flora during the menopausal period. .
第四の発明として、更年期障害期に生じる耐糖能の低下症状を軽減するための主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントを提供する。 As a fourth invention, the present invention provides a menopausal disorder improving agent, food and drink, and a supplement containing a grape seed extract as a main component for alleviating symptoms of decreased glucose tolerance that occur during the menopausal period.
本発明により、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化を抑制し、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化に起因する体重増加症状、及び更年期障害期に生じる耐糖能の低下症状を軽減するための主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、サプリメント提供することが可能となる。 ADVANTAGES OF THE INVENTION According to the present invention, the deterioration of intestinal microflora during menopause is suppressed, and symptoms of weight gain and symptoms of decreased glucose tolerance that occur during menopause due to the deterioration of intestinal microflora during menopause are provided. It is possible to provide menopausal disorder improving agents, food and drink, and supplements containing grape seed extract as a main component for alleviating
以下、本発明の実施の形態について説明する。なお、本発明は、これらの実施形態に何ら限定されるべきものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施し得る。
<概要>
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Embodiments of the present invention will be described below. It should be noted that the present invention should not be limited to these embodiments in any way, and can be implemented in various forms without departing from the gist of the present invention.
<Overview>
本発明は、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化を抑制し、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化に起因する体重増加症状、及び更年期障害期に生じる耐糖能の低下症状を軽減するための主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントに関する。
<実施形態 構成>
INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention suppresses the deterioration of the intestinal flora during the menopausal period, and the symptom of weight gain caused by the deterioration of the intestinal flora during the menopausal period and the symptom of decreased glucose tolerance that occurs during the menopausal period. It relates to anti-menopausal agents, food and drink, and supplements containing grape seed extract as a main ingredient for alleviating
<Embodiment configuration>
本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントは、更年期障害期に生じる腸内細菌叢のフィルミクテス門の増加を抑制するための主要成分としてブドウ種子抽出物を含む。さらに、本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントは、更年期障害期に生じる腸内細菌叢のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合を維持又は増加するための主要成分としてブドウ種子抽出物を含む。また、さらに、本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントは、更年期障害期の腸内菌叢の悪玉化に起因する体重増加症状を軽減するための主要成分としてブドウ種子抽出物を含む。また、本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、及びサプリメントは、更年期障害期に生じる耐糖能の低下症状を軽減するための主要成分としてブドウ種子抽出物を含む。 The menopause-improving agent, food and drink, and supplement of the present invention contain a grape seed extract as a main component for suppressing an increase in the Firmicutes division of the intestinal flora that occurs during menopause. Furthermore, the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention contain a grape seed extract as a main ingredient for maintaining or increasing the ratio of Bacteroidetes to Firmicutes in the intestinal flora that occurs during menopause. . Furthermore, the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention contain grape seed extract as a main ingredient for alleviating weight gain symptoms caused by deterioration of intestinal flora during menopausal period. . In addition, the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention contain a grape seed extract as a main ingredient for alleviating symptoms of decreased glucose tolerance that occur during the menopausal period.
本件発明において、「更年期障害期」とは、卵巣機能が衰えはじめる閉経前後以降のエストロゲンが欠乏した状態の期間を指す。また、20~40歳の女性にもホルモンバランスの乱れに起因する更年期障に類似の症状が現れることがあるが、若年性更年期障害におけるホルモンバランスの崩れた期間も「更年期障害期」に含むものとする。 In the present invention, the term "menopausal period" refers to a period of estrogen deficiency after menopause when ovarian function begins to decline. In addition, women aged 20 to 40 may also experience symptoms similar to menopause due to hormonal imbalance, but the period of hormonal imbalance in premature menopause is also included in the "menopausal period." .
本件発明において、「腸内細菌叢の悪玉化」とは、フィルミクテス門が増加すること、ひいてはフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合が減少することを指す。バクテロイデス門は善玉化しやすく、脂肪の吸収を妨げる短鎖脂肪酸を産出する性質があるのに対し、フィルミクテス門は、悪玉菌と呼ばれるプロテオバクテリア門が優勢となると悪玉菌に加勢する性質があり、肥満に伴い増加し肥満に伴う肝臓がんの原因ともいわれているからである。 In the present invention, "deterioration of the intestinal microflora" refers to an increase in the phylum Firmicutes and a decrease in the ratio of the phylum Bacteroidetes to the phylum Firmicutes. The Bacteroidetes phylum tends to become good and produces short-chain fatty acids that interfere with fat absorption, while the Firmicutes phylum has the property of helping bad bacteria when the Proteobacteria phylum, known as bad bacteria, becomes dominant, leading to obesity. This is because it is said to be a cause of liver cancer associated with obesity.
本件発明において、「耐糖能の低下症状」とは、糖負荷試験において、血糖値が急激に上昇し正常値まで低下する時間が正常よりも長いことをいい、糖の分解に対する感度が低下し血糖値が下がりにくくなっている症状をいうものとする。 In the present invention, “symptom of decreased glucose tolerance” refers to a period in which the blood glucose level rapidly rises and then falls to a normal level for a longer time than normal in a glucose tolerance test. It refers to the symptom that the value is difficult to decrease.
ブドウ種子抽出物はブドウ種子から抽出されるものである。ブドウ種子は、ブドウ科ブドウの種子であり、ブドウの由来や産地は特に限定されない。ブドウ種子は、ワイン製造プロセス、ブドウジュース製造後に残った種子を含む搾りかすを原料としてもよい。また、ブドウ種子を原料として製造されるグレープシードオイルの搾りかすを原料とすることもできる。 A grape seed extract is one that is extracted from grape seeds. The grape seed is a seed of the grape family Grape, and the origin and production area of the grape are not particularly limited. Grape seeds may be sourced from the seed-containing pomace left over from the winemaking process, grape juice production. In addition, grapeseed oil pomace produced from grape seeds can also be used as a raw material.
ブドウ種子から抽出物を得る方法については、様々な抽出方法および精製方法が開示されているが、例えば、ブドウ種子を熱水を用いて加熱しブドウ種子スラリーを得た後、不要物を濾してブドウ抽出液を得ることができる。さらに、ブドウ抽出液に酵素や酵母を加えて処理することもできる。本件発明に用いるブドウ種子抽出物は、この製造方法に限定されるものではない。また、ブドウ種子抽出物は、ブドウ種子成分を含む原料から得られる抽出液、その希釈液、濃縮液、エキス、乾燥物を含むが、これらに限定されるものではない。 Various extraction methods and purification methods have been disclosed as methods for obtaining an extract from grape seeds. For example, after heating grape seeds with hot water to obtain a grape seed slurry, filtering out unnecessary substances A grape extract can be obtained. Furthermore, the grape extract can be treated by adding enzymes or yeast. The grape seed extract used in the present invention is not limited to this production method. Grape seed extracts include, but are not limited to, extracts obtained from raw materials containing grape seed components, their dilutions, concentrates, extracts, and dried products.
本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、サプリメントに主要成分として含まれるブドウ種子抽出物は、Folin-Denis法(Schanderl SH. Tannins and related phenolics. In: Joslyn MA, editor. Methods in Food Analysis New York: Academic Press, 1970. pp 701-724.)にて測定した総カテキン類換算量がブドウ種子抽出物中の80重量%以上であることが好ましい。さらに好ましくは、95重量%以上含まれることが望ましい。 The grape seed extract contained as a main component in the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention was obtained by the Folin-Denis method (Schanderl SH. Tannins and related phenolics. In: Joslyn MA, editor. Methods in Food Analysis New York : Academic Press, 1970. pp 701-724.) is preferably 80% by weight or more in terms of total catechins in the grape seed extract. More preferably, it should be contained in an amount of 95% by weight or more.
本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、サプリメントに主要成分として含まれるブドウ種子抽出物として、例えば、インデナ社のロイコセレクト(登録商標)を使用することができる。ロイコセレクト(登録商標)は、カテキン類の化学組成が一定しており、(-)-エピカテキン、(+)-カテキンの総量が15%、(-)-エピカテキンのガレート型、2量体~4量体とそのガレート型の総量が80%、5量体~7量体とそのガレート型の総量が5%であることがHPLC-UV(紫外検出器を用いた高速液体クロマトグラフィー分析)、GPC(ゲル浸透クロマトグラフィー分析)、HPLC-TSP-MS(液体クロマトグラフ質量分析)により確認されたことが示されている。 For example, Leucoselect (registered trademark) manufactured by Indena can be used as the grape seed extract contained as a main component in the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention. Leucoselect (registered trademark) has a constant chemical composition of catechins, (-)-epicatechin, (+)-catechin total 15%, (-)-epicatechin gallate type, dimer HPLC-UV (high performance liquid chromatography analysis using an ultraviolet detector) that the total amount of ~ tetramer and its gallate form is 80%, and the total amount of pentamer ~ 7mer and its gallate form is 5% , GPC (gel permeation chromatography analysis), HPLC-TSP-MS (liquid chromatography-mass spectrometry).
カテキン類は、ポリフェノールの中のフラボノイド、その中でもフラバノール類(フラバン-3-オール類)の一群である。フラバン-3-オール骨格の炭素環には、2位と3位に不斉炭素を有するため、フラバン-3-オールのモノマーはシス型とトランス型の立体異性体が存在し、さらに、同骨格の5´位に水酸基が結合したものも存在する。また、同骨格の3位に没食子酸エステルが結合したものはガレート型と呼ばれている。フラバン-3-オールのモノマーが4位と8位の炭素環で縮合したオリゴマーも多数、存在している。このように、カテキンは立体異性体、モノマー、オリゴマー、ガレート型などの様々な構造を有する化合物が知られている。 Catechins are a group of flavonoids among polyphenols, among them flavanols (flavan-3-ols). Since the carbocyclic ring of the flavan-3-ol skeleton has asymmetric carbon atoms at the 2- and 3-positions, the flavan-3-ol monomer has cis-type and trans-type stereoisomers. There are also those in which a hydroxyl group is bonded to the 5'-position of . In addition, those in which a gallic acid ester is bound to the 3-position of the same skeleton are called gallate-type. There are also many oligomers in which flavan-3-ol monomers are fused at the 4- and 8-position carbocyclic rings. Thus, catechins are known to have various structures such as stereoisomers, monomers, oligomers, and gallate types.
ブドウ種子抽出物に含まれるフラバン-3-オールのモノマーとは、具体的には、(-)-エピカテキン、(+)-カテキン、(-)-エピガロカテキンおよび(+)-ガロカテキンとこれらのガレート型である。(-)-エピカテキン、(-)-エピガロカテキンはシス型で、(+)-カテキン、(+)-ガロカテキンはトランス型である。 The flavan-3-ol monomer contained in the grape seed extract specifically includes (-)-epicatechin, (+)-catechin, (-)-epigallocatechin and (+)-gallocatechin and these is a gallate type. (−)-Epicatechin and (−)-Epigallocatechin are cis forms, and (+)-Catechin and (+)-Gallocatechin are trans forms.
本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、サプリメントに主要成分として含まれるブドウ種子抽出物は、総カテキン中に(-)-エピカテキン、(+)-カテキン、(-)-エピガロカテキンおよび(+)-ガロカテキンを5~40重量%含むことが好ましい。 The grape seed extract contained as a main ingredient in the menopausal disorder improving agent, food, and supplement of the present invention contains (-)-epicatechin, (+)-catechin, (-)-epigallocatechin and ( It preferably contains 5 to 40% by weight of +)-gallocatechin.
ブドウ種子抽出物に含まれるフラバン-3-オールのモノマーのガレート型とは、(-)-エピカテキンガレート、(+)-カテキンガレート、(-)-エピガロカテキンガレートおよび(+)-ガロカテキンガレートである。ブドウ種子抽出物に含まれるフラバン-3-オールのオリゴマーとは、具体的には、フラバン-3-オールのモノマーが、炭素環の4位と6位あるいは4位と8位の炭素環で縮合したオリゴマーであって、2量体以上のものをいい、具体的には、2~15量体程度の縮合体を指す。フラバン-3-オールのオリゴマーのガレート型とは、フラバン-3-オールのオリゴマーのガレート型である。 Monomer gallate forms of flavan-3-ols contained in grape seed extracts are (-)-epicatechin gallate, (+)-catechin gallate, (-)-epigallocatechin gallate and (+)-gallocatechin Gallate. The flavan-3-ol oligomer contained in the grape seed extract is, specifically, a monomer of flavan-3-ol condensed at the 4-position and 6-position or the 4-position and 8-position of the carbocyclic ring. It refers to an oligomer that is a dimer or higher, and specifically refers to a condensate of about 2 to 15 mers. A gallate form of an oligomer of flavan-3-ol is a gallate form of an oligomer of flavan-3-ol.
本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、サプリメントに主要成分として含まれるブドウ種子抽出物は、総カテキン中にフラバン-3-オールのモノマーのガレート型、フラバン-3-オールのオリゴマー、およびフラバン-3-オールのオリゴマーのガレート型の総量として60~95重量%含むことが好ましい。 The grape seed extract contained as a main component in the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention contains flavan-3-ol monomer gallate type, flavan-3-ol oligomer, and flavan- It preferably contains 60 to 95% by weight as the total amount of gallate type oligomers of 3-ol.
本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、サプリメントに主要成分として含まれるブドウ種子抽出物は、ガレート型カテキンを含むことが好ましい。 The grape seed extract contained as a main ingredient in the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention preferably contains gallate-type catechins.
カテキン類は、上記のしたように立体異性体、モノマー、オリゴマー、ガレート型などの多数の化合物が知られているが、その化学構造により生理活性や高次構造が異なることがクロマトグラフィーの溶出挙動やlogP値(オクタノール/水二相系における分配係数Pの対数で、有機化合物の疎水性を評価する指標として汎用される数値)などの物性の面からも明らかにされつつある。例えば抗酸化作用に着目すれば、水酸基およびフェノール環の多いオリゴマー、ガレート型の化学構造が、抗酸化能が高いことを示唆する。また、東海林らは「カテキンモノマーとそのオリゴマーの比較では、重合度の増加に伴いlogP値が大きく減少することを報告しているが(BUNSEKI KAGAKU 53,953-958,2004)、logP値を指標とすれば重合度の増加により親水性はより強まることになる。これはフェノール性水酸基が極性の置換基であるために重合度が増すとフェノール性水酸基の数も増えることに起因していると考えられる。一方で、東海林らの報告では、カテキンオリゴマーはlogP値が低いにもかかわらず、逆相HPLCでは比較的強く保持されたことから、重合度の増加に伴い形成される高次構造は、分子表面の親水性を高めると同時に、逆相HPLCの固定相のODS鎖と立体的に強く相互作用することができる疎水性領域を分子内に有していることを示している。このことから、カテキンオリゴマーのlogP値が低い値を示すのは、あくまで化合物の表面の親水性が増していることを表し、分子内部は疎水性が高まり、脂質二重層からなる細胞膜と相互作用する可能性を示唆している。 As mentioned above, catechins are known to have many compounds such as stereoisomers, monomers, oligomers, and gallate types. and the logP value (the logarithm of the partition coefficient P in the octanol/water two-phase system, which is widely used as an index for evaluating the hydrophobicity of organic compounds). For example, focusing on antioxidant activity, it is suggested that oligomers with many hydroxyl groups and phenol rings, and gallate-type chemical structures have high antioxidant activity. In addition, Tokairin et al., ``In a comparison of catechin monomers and their oligomers, they reported that the logP value decreased greatly as the degree of polymerization increased (BUNSEKI KAGAKU 53, 953-958, 2004), but the logP value was used as an index. If the degree of polymerization increases, the hydrophilicity becomes stronger.This is because the number of phenolic hydroxyl groups increases as the degree of polymerization increases because the phenolic hydroxyl group is a polar substituent. On the other hand, Tokairin et al. reported that catechin oligomers were relatively strongly retained in reversed-phase HPLC despite their low logP values, suggesting that the higher-order structure formed with an increase in the degree of polymerization was , shows that the molecule has a hydrophobic region in the molecule that increases the hydrophilicity of the molecular surface and at the same time has a strong steric interaction with the ODS chain of the stationary phase of reversed-phase HPLC. Therefore, the low logP value of catechin oligomers indicates that the surface of the compound has increased hydrophilicity, and the interior of the molecule has increased hydrophobicity, which may interact with the cell membrane consisting of a lipid bilayer. It suggests.
一方で、東海林らはカテキンモノマーのlogP値は高いことも報告しており、カテキンモノマーは疎水性であるため、脂質二重層を通過し、細胞内に入り込みやすく、細胞内部で作用を発揮していることが予想される。したがって、カテキンモノマーは細胞内部、オリゴマーは細胞表層というように作用部位が異なることが想定される。 On the other hand, Tokairin et al. also reported that the logP value of catechin monomers is high. expected to be Therefore, it is assumed that the catechin monomers act at different sites, such as the inside of the cell and the oligomer at the cell surface.
本件発明の更年期障害改善剤、飲食物、サプリメントに主要成分として含まれるブドウ種子抽出物は、フラバン-3-オールのモノマー、フラバン-3-オールのモノマーのガレート型、フラバン-3-オールのオリゴマー、およびフラバン-3-オールのオリゴマーのガレート型といった種々のカテキン類が含まれていることが知られており(特許5424641号)、このようなブドウ種子抽出物中のカテキン類が、細胞内部および細胞表層で作用するため、腸内細菌叢に対する作用や耐糖能の低下症状を軽減する効果が高いと考えられる。 The grape seed extract contained as a main ingredient in the menopausal disorder improving agent, food and drink, and supplement of the present invention is a flavan-3-ol monomer, a flavan-3-ol monomer gallate type, and a flavan-3-ol oligomer. , and flavan-3-ol oligomeric gallate forms (Patent No. 5424641). Since it acts on the cell surface, it is thought to be highly effective in reducing intestinal microflora and symptoms of decreased glucose tolerance.
本件発明の更年期障害改善剤は、主要成分としてブドウ種子抽出物を含む健康食品、食品添加物、医薬品、化粧品、医薬部外品などとして応用することが可能である。例えば、医薬品や医薬部外品とする場合には、主要成分としてブドウ種子抽出物を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて錠剤としてもよい。また、食品添加物や健康食品とする場合には、医薬品などのようにカプセルや錠剤のような形態で提供してもよいし、飲料、調味料、菓子等の各種の食品に添加した態様で提供することもできる。 The agent for improving menopausal disorders of the present invention can be applied as health foods, food additives, pharmaceuticals, cosmetics, quasi-drugs, etc. containing grape seed extract as a main component. For example, in the case of pharmaceuticals and quasi-drugs, grape seed extract is powdered or granulated as the main ingredient and filled into capsules, or excipients, binders, disintegrants, etc. are added. It may be made into tablets using a tableting machine or the like. In addition, when it is used as a food additive or health food, it may be provided in the form of capsules or tablets like pharmaceuticals, or it may be added to various foods such as beverages, seasonings, and confectionery. can also be provided.
飲食物とは、一般的な食べ物、飲み物のほかに、広く口から摂取可能な個体状・液体状物質を指す。本件発明の飲食物は、既知の方法を用いることにより、主要成分としてブドウ種子抽出物を含む飲食物として提供することが可能である。例えば、飲料、調味料、菓子、惣菜、冷凍食品、アイスクリーム、レトルト食品、缶詰、瓶詰、ハム、ソーセージ、チーズなどが挙げられるが、これらの飲食物の種類に限定されるものではない。 Food and drink refer to general foods and drinks, as well as solid and liquid substances that can be taken orally. The food and drink of the present invention can be provided as a food and drink containing a grape seed extract as a main component by using a known method. Examples include beverages, seasonings, confectionery, side dishes, frozen foods, ice cream, retort foods, canned foods, bottled foods, hams, sausages, cheeses, etc., but are not limited to these foods and beverages.
本件発明のサプリメントは、本実施形態のブドウ種子抽出物を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて製造することができる。また、飲料、調味料、菓子等の各種の食品にブドウ種子抽出物を添加した態様で提供することもできる。 The supplement of the present invention is the grape seed extract of the present embodiment as powder or granules and filled into a capsule, or an excipient, a binder, a disintegrant, etc. are added and a tableting machine or the like is used. can be manufactured. It is also possible to provide various foods such as beverages, seasonings and confectionery with the grape seed extract added.
次に、更年期障害期モデルマウスの腸内細菌叢の解析、更年期障害期モデルマウスを用いた体重増加の比較試験、糖負荷試験による耐糖能の比較をした結果を調製例および実施例により詳しく説明する。なお、本発明はこれらの調製例および実施例に何ら限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施しうる。なお、本実施例では更年期障害期モデルマウスとして外科手術により卵巣を摘出したマウスを用いた。 Next, the analysis of the intestinal flora of the menopausal model mice, the weight gain comparison test using the menopausal model mice, and the results of the comparison of glucose tolerance by the glucose tolerance test will be explained in detail with preparation examples and examples. do. The present invention is by no means limited to these preparation examples and examples, and can be implemented in various forms without departing from the scope of the invention. In addition, in this example, a mouse whose ovaries were surgically removed was used as a climacteric model mouse.
<調製例1>ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の調製
マウス用飼料のクレア ロデット ダイエット CE-2(日本クレア社製)5kgに対し10gのブドウ種子抽出物を混錬後、成形し、ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料を調製した。ブドウ種子抽出物には、インデナ社のロイコセレクト(登録商標)を用いた。ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料は、目視で確認したところ着色はなく、混錬前の飼料とくらべ差はみられなかった。マウス用飼料にブドウ種子抽出物が混錬されていることを確認するために、以下の方法で(-)-エピカテキンと(+)-カテキンの分析を行った。ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料を粉砕、メタノールを添加後、激しく攪拌して、カテキン類を抽出した。抽出液を遠心分離(10000rpmで15分間)した後、LC-MS(液体クロマトグラフ質量分析)で上清を分析したところ、(-)-エピカテキンと(+)-カテキンが確認された。
<Preparation Example 1> Preparation of mouse feed containing grape seed extract After kneading 10 g of grape seed extract with 5 kg of Clea Rodet Diet CE-2 (manufactured by CLEA Japan) for mouse feed, molding, grapes A mouse chow containing seed extract was prepared. Leucoselect (registered trademark) from Indena was used as the grape seed extract. The mouse feed containing the grape seed extract was not colored when visually observed, and no difference was observed when compared with the feed before kneading. In order to confirm that the grape seed extract was mixed in the mouse feed, (−)-epicatechin and (+)-catechin were analyzed by the following method. The mouse feed containing the grape seed extract was pulverized, methanol was added, and the mixture was vigorously stirred to extract catechins. After centrifuging the extract (10,000 rpm for 15 minutes), the supernatant was analyzed by LC-MS (liquid chromatography-mass spectrometry), and (−)-epicatechin and (+)-catechin were confirmed.
<実施例1>更年期障害期モデルマウスを用いた腸内細菌叢解析
(マウスの給餌条件等)
C57系雌性マウス(三協ラボサービス株式会社)7週齢を温度23~25℃、湿度70%、照明は12時間/日に設定された施設で1週間予備飼育後、手術を行った。1群5匹とし、卵巣の摘出手術をおこなったマウスを更年期障害期モデルとして用いた。更年期障害期モデルとしてのマウスに調製例1のブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料を与えたものを試験群1とし、更年期障害期モデルとしてのマウスにブドウ種子抽出物を含まない通常の飼料(マウス用飼料のクレア ロデット ダイエット CE-2(日本クレア社製))を給餌したものを対照群1とした。試験群1は手術前日から調製例1のブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の給餌を開始したが、手術前々日まではブドウ種子抽出物を含まない通常の飼料を給餌した。対照群2は、開腹手術(sham手術)のみをおこない、対照群1と同様に手術前後でブドウ種子抽出物を含まない通常の飼料を与えた。手術後1~2週間おきに各マウスの体重を測定した。なお、マウスは8週後も成長により体重が自然増加することが知られている。
<Example 1> Intestinal microflora analysis using menopausal model mice (feeding conditions of mice, etc.)
Female C57 mice (Sankyo Labo Service Co., Ltd.) aged 7 weeks were preliminarily bred for 1 week in a facility set at a temperature of 23-25° C., humidity of 70%, and lighting of 12 hours/day, and then operated. One group consisted of 5 animals, and mice subjected to ovariectomy were used as climacteric period models. A test group 1 was given to mice as a climacteric model with a mouse feed containing the grape seed extract of Preparation Example 1, and a normal diet containing no grape seed extract was given to mice as a climacteric model ( Control group 1 was fed with Clea Rodet Diet CE-2 (manufactured by Clea Japan, Inc.), which is a feed for mice. In test group 1, feeding of the mouse feed containing the grape seed extract of Preparation Example 1 was started from the day before the surgery, but normal feeding without the grape seed extract was fed until two days before the surgery.
(手術)
試験群1及び対照群1の卵巣摘出手術は次のようにおこなった。麻酔(2,2,2-トリブロモエタノール(Sigma)1.2%溶液をマウス10gあたり0.2ml)下にマウスを腹臥位とし、背部に切開を加え、卵巣を露出、これを除去した。対照群2に施したsham手術は、皮膚、後腹膜切開を加えるが、卵巣を摘出せず、創を縫合した。
(surgery)
Ovariectomy in test group 1 and control group 1 was performed as follows. Under anesthesia (0.2 ml of 2,2,2-tribromoethanol (Sigma) 1.2% solution per 10 g of mouse), the mouse was placed in the prone position, an incision was made on the back, and the ovaries were exposed and removed. . In the sham surgery performed on
(腸内細菌叢解析試験)
手術8週後、1日(24時間)分の糞便をマウスごとに採取し、-80℃で保存した。腸内細菌叢解析は、コスモ・バイオ株式会社に依頼して行った。-80℃で保存した糞便をコスモ・バイオ株式会社に送付し、糞便からDNAをマウスごとに抽出し、16SrDNA領域配列をもちいたリアルタイムPCR法により全菌種、フィルミクテス門、バクテロイデス門の解析を行った。解析して得られたCP値から比較Ct法により、全菌種に対する相対比率(%)を算出した。
(Intestinal flora analysis test)
Eight weeks after surgery, one day (24 hours) of feces was collected from each mouse and stored at -80°C. The intestinal microflora analysis was commissioned to Cosmo Bio Co., Ltd. Stool samples stored at -80°C were sent to Cosmo Bio Co., Ltd. DNA was extracted from the stool samples for each mouse, and all bacterial strains, Firmicutes phylum, and Bacteroidetes phylum were analyzed by real-time PCR using the 16S rDNA region sequence. rice field. From the CP value obtained by analysis, the relative ratio (%) to all bacterial species was calculated by the comparative Ct method.
(結果)
図1及び図2は、更年期障害期モデルマウスの腸内細菌叢の解析の一例を示す図である。図1はそれぞれの群の5匹のマウスについてフィルミクテス門とバクテロイデス門の全菌種に対する相対比率を比較した図であり、フィルミクテス門を塗りつぶしで、バクテロイデス門を白抜きで示した。図2は腸内細菌叢のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合の各群の平均値を比較した図である。
(result)
FIG. 1 and FIG. 2 are diagrams showing an example of the analysis of intestinal microflora in menopausal model mice. FIG. 1 compares the relative proportions of Firmicutes and Bacteroidetes to all species in five mice in each group, with Firmicutes being solid and Bacteroidetes being open. FIG. 2 is a diagram comparing the average values of the ratios of the Bacteroidetes phylum to the Firmicutes phylum of the intestinal flora in each group.
フィルミクテス門の相対比率を比較すると、試験群1の平均値13.08に対し、対照群1の平均値は21.52であり、試験群1は対照群1とくらべて顕著に低かった。卵巣を切除した更年期障害期モデルマウスでは、ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の摂餌によりフィルミクテス門の値が低く抑えられることがわかった。一方で、ブドウ種子抽出物を含まないマウス用飼料を摂餌した対照群1と対照群2をくらべると、対照群1の平均値は対照群2の平均値15.21とくらべ高く、卵巣摘出によりフィルミクテス門が増加することが示された。また、試験群1の平均値と対照群2の平均値を比較すると試験群1のほうがやや高い値となった。
Comparing the relative proportions of Firmicutes, the average value of test group 1 was 13.08, while the average value of control group 1 was 21.52, which was significantly lower in test group 1 than in control group 1. In ovariectomized perimenopause model mice, feeding mouse chow containing grape seed extract was found to suppress Firmicutes levels. On the other hand, when comparing control group 1 and
これらの結果は、更年期障害期のモデルとして卵巣摘出マウスは、通常の餌を摂取しているとフィルミクテス門が増加してしまうが、ブドウ種子抽出物を含む餌を摂取することによりフィルミクテス門の増加が抑制され、卵巣摘出前の状態が維持されることを示している。すなわち、更年期障害期直後からの主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、フィルミクテス門の増加が抑制され更年期障害期前の状態を維持できることが認められた。 These results suggest that ovariectomized mice, as a model of menopause, show an increase in Firmicutes phylum when fed a normal diet, but increased Firmicutes phylum when fed a diet containing grape seed extract. is suppressed and the pre-oophorectomy state is maintained. That is, by ingesting a menopausal remedy containing grape seed extract as the main ingredient immediately after the menopausal period, the increase in Firmicutes can be suppressed and the state before the menopausal period can be maintained.
バクテロイデス門を比較すると、試験群1の平均値30.24に対し、対照群1の平均値は24.40であり、試験群1のほうが高かった。卵巣を切除した更年期障害期モデルマウスでは、ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の摂餌によりバクテロイデス門の値が増えることがわかった。一方で、ブドウ種子抽出物を含まないマウス用飼料を摂餌した対照群1と対照群2をくらべると、対照群1の平均値は対照群2の平均値29.68とくらべ低く、卵巣摘出によりバクテロイデス門が減少することが示された。また、試験群1の平均値と対照群2の平均値を比較すると試験群1のほうがやや高い値となった。
Comparing the phylum Bacteroidetes, the average value of the test group 1 was 30.24, while the average value of the control group 1 was 24.40, which was higher in the test group 1. In ovariectomized perimenopause model mice, feeding a mouse chow containing grape seed extract was found to increase levels of the Bacteroidetes phylum. On the other hand, when comparing control group 1 and
これは、更年期障害期のモデルとして卵巣摘出マウスは、通常の餌を摂取しているとバクテロイデス門が減少してしまうが、ブドウ種子抽出物を含む餌を摂取することによりバクテロイデス門の減少が抑制され、卵巣摘出前の状態が維持されることを示している。すなわち、更年期障害期直後からの主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、バクテロイデス門の減少が抑制され更年期障害期前の状態を維持することができることが認められた。 As a model of menopause, ovariectomized mice show a decrease in the phylum of Bacteroidetes when fed a normal diet, but the decrease in the phylum of Bacteroidetes is suppressed by ingesting a diet containing grape seed extract. , indicating that the pre-ovariectomy status was maintained. That is, it has been found that by ingesting a menopausal disorder improving agent containing grape seed extract as the main ingredient immediately after the menopausal period, the decrease in Bacteroidetes can be suppressed and the state before the menopausal period can be maintained. rice field.
各群のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合の平均値を比較したものが図2である。試験群1の割合は1.75~3.36で平均値は2.46に対し、対照群1の割合は0.93~1.46で平均値は1.14で、試験群1は対照群1とくらべ顕著に高い値であった。卵巣を切除した更年期障害期モデルマウスでは、ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の摂餌によりフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合が増加することがわかった。一方で、ブドウ種子抽出物を含まないマウス用飼料を摂餌した対照群1と対照群2をくらべると、対照群2の割合は1.05~3.85で平均値は、2.18であり、対照群1は対照群2とくらべ低く、卵巣摘出によりフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合が減少することが示された。また、試験群1と対照群2を比較すると、試験群1の値は、対照群の値の最高値3.85から最低値1.05の範囲内であり、平均値はやや高い値となった。
FIG. 2 compares the average ratio of Bacteroidetes to Firmicutes in each group. The proportion of test group 1 was 1.75-3.36 with a mean value of 2.46, while the proportion of control group 1 was 0.93-1.46 with a mean value of 1.14, with test group 1 being the control The value was remarkably higher than that of group 1. In ovariectomized perimenopause model mice, feeding mice chow containing grape seed extract was found to increase the ratio of Bacteroidetes to Firmicutes. On the other hand, when comparing the control group 1 and the
この結果は更年期障害期のモデルとしての卵巣摘出マウスは、通常の餌を摂取していると腸内細菌叢のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合が減少してしまうが、ブドウ種子抽出物を含む餌の摂取により腸内細菌叢のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合は維持又は増加し、卵巣摘出前の状態が維持されることを示している。すなわち、更年期障害期直後から主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、腸内細菌叢のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合が維持又は増加するので、更年期障害期前の状態を維持できることが示された。 This result suggests that ovariectomized mice, a model of menopause, show a decrease in the ratio of the phylum Bacteroidetes to the phylum Firmicutes in the gut microbiome when fed a normal diet, whereas a diet containing grape seed extract The ratio of Bacteroidetes phylum to Firmicutes phylum in the intestinal flora is maintained or increased, indicating that the state before ovariectomy is maintained. That is, by ingesting a menopausal remedy containing grape seed extract as a main ingredient immediately after the menopause period, the ratio of the intestinal flora of the Bacteroidetes to the Firmicutes phylum is maintained or increased. It was shown that the state of
なお、本実施例は、更年期障害期のモデルとして卵巣摘出マウスを用い、卵巣を摘出することにより、腸内細菌叢のフィルミクテス門が増加し、それに伴いフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合が減少すること、すなわち、腸内細菌叢が悪玉化することを初めて明らかにした報告である。さらにブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の給餌することで、卵巣摘出マウスの腸内細菌叢の悪玉化が防げることも明らかにし、卵巣機能が低下する更年期障害期に主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、更年期障害期に生じる腸内細菌叢の悪玉化が抑えられることを示したのである。 In this example, ovariectomized mice were used as a model of menopausal disorders. By removing the ovaries, the intestinal flora of the Firmicutes phylum increased, and the ratio of the Bacteroidetes phylum to the Firmicutes phylum decreased accordingly. In other words, this is the first report that clarifies that the intestinal flora becomes evil. Furthermore, it was clarified that feeding mouse diets containing grape seed extract can prevent the intestinal microflora of ovariectomized mice from becoming unhealthy. It was shown that the ingestion of a menopausal disorder improving agent, etc., containing this, suppresses the deterioration of the intestinal microflora that occurs during the menopausal period.
本試験例の結果から、更年期障害期から主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、更年期障害期に生じる腸内細菌叢のフィルミクテス門の増加を抑制できること、及び腸内細菌叢のフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合を維持又は増加できることが認められた。 From the results of this test example, by ingesting a menopausal disorder improvement agent containing grape seed extract as a main ingredient from the menopausal period, it is possible to suppress the increase in the Firmicutes division of the intestinal flora that occurs during the menopausal period, and It was found that the ratio of Bacteroidetes to Firmicutes in the intestinal flora can be maintained or increased.
図3は、実施例1に供したマウスの体重変化(1群5匹の平均値)の比較の一例を示す図である。試験群1は、対照群1にくらべて体重増加が抑えられており、ブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の給餌より体重増加が抑制されることが示された。また、対照群1は対照群2にくらべて体重増加が著しく、卵巣切除により体重が増加することが示された。本実施例により更年期障害期において、ブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することにより体重増加が抑制されることが明らかとなった。
FIG. 3 is a diagram showing an example of comparison of changes in body weight of mice subjected to Example 1 (average value of 5 mice per group). Test group 1 showed suppressed weight gain as compared to control group 1, and it was shown that weight gain was suppressed by the feeding of the mouse feed containing the grape seed extract. In addition, the control group 1 showed a significant weight gain as compared to the
一方で、試験群1と対照群2の術後8週の腸内細菌叢には顕著に差があり、卵巣を切除した対照群2の腸内細菌叢は悪玉化することが認められた。そこで、実施例2において、マウスの腸内細菌叢のみが体重増加に与える影響を調べるために、実施例1に供したマウスの糞便を移植して体重変化を調べることとした。
On the other hand, there was a marked difference in the intestinal microflora between the test group 1 and the
<実施例2>更年期障害期モデルマウスを用いた体重増加の比較試験
(抗生剤含有水の調製)
アンピシリン300mg、ネオマイシン300mg、メトロニダゾール300mg、バンコマイシン150mgを300mlの飲料水に溶解した。
(マウスの給餌条件等)
<Example 2> Comparative test of weight gain using menopause model mice (preparation of antibiotic-containing water)
300 mg ampicillin, 300 mg neomycin, 300 mg metronidazole and 150 mg vancomycin were dissolved in 300 ml drinking water.
(Feeding conditions of mice, etc.)
C57系雌性マウス(三協ラボサービス株式会社)7週齢を温度23~25℃、湿度70%、照明は12時間/日に設定された施設で2週間、水の代わりに抗生剤含有水を自由摂取させながら飼育をおこなった。餌はブドウ種子抽出物を含まない通常の飼料(マウス用飼料のクレア ロデット ダイエット CE-2(日本クレア社製))を与えた。1群6~8匹とし、実施例1の試験群1の糞便を移植する群を試験群2、同じく対照群1の糞便を移植する群を対照群3、同じく対照群2の糞便を移植する群を対照群4とした。
Female C57 mice (Sankyo Labo Service Co., Ltd.) aged 7 weeks were placed in a facility with a temperature of 23-25°C, humidity of 70%, and lighting of 12 hours/day for 2 weeks. The mice were reared while being fed ad libitum. The mice were fed with a normal diet containing no grape seed extract (Clea Rodet Diet CE-2, a mouse diet (manufactured by CLEA Japan)). 6 to 8 animals per group, the group to which the feces of the test group 1 of Example 1 are transplanted is the
抗生剤を2週間投与することで、試験に供するマウス中の腸内を無菌化した後、抗生剤の投与を休止し、3日後に新鮮糞便を投与した。糞便を供給するマウスごとに1日(24時間)分の糞便200mgを5mlのPBS(リン酸緩衝液食塩水)に入れて3分間攪拌後、室温で2分間静置した。上清200μlをゾンデにて経口投与した。糞便の採集は、いずれも試験例1のマウスの術後9週後におこなった。糞便移植により、試験群2は試験群1と、対照群3は対照群1と、対照群4は対照群2のマウスの腸内細菌叢とそれぞれ同じ構成になったと考えられる。糞便移植後、各マウスの体重を6~9日ごとに測定した。抗生剤の投与休止後は、抗生剤を含まない通常の水及び飼料を自由に摂取させた。なおマウスは、通常の飼育環境で飼育した場合において、9週以降も成長による自然体重増加がみられることが知られている。
(結果)
Antibiotics were administered for 2 weeks to sterilize the intestines of the mice to be tested, and then administration of the antibiotics was discontinued, and fresh feces were administered 3 days later. 200 mg of stool for one day (24 hours) for each mouse supplied with stool was added to 5 ml of PBS (phosphate buffered saline), stirred for 3 minutes, and allowed to stand at room temperature for 2 minutes. 200 μl of the supernatant was orally administered using a sonde. Feces were collected from the mice of Test Example 1 9 weeks after surgery. It is considered that the intestinal microflora of
(result)
図4は、実施例1に供したマウスの糞便を移植されたマウスの体重変化の比較の一例を示す図である。実施例2は、腸内を無菌化したマウスに実施例1に供したマウスの新鮮糞便を移植し、腸内細菌叢のみが異なる条件下でマウスの体重変化を測定し、ブドウ種子抽出物を含む飼料の摂餌と卵巣切除が腸内細菌を介して体重増加に及ぼす影響を調査したものである。 FIG. 4 is a diagram showing an example of comparison of changes in body weight of mice transplanted with mouse feces used in Example 1. FIG. In Example 2, fresh feces of the mice subjected to Example 1 were transplanted to mice whose intestines were sterilized, and changes in body weight of the mice were measured under conditions where only the intestinal flora was different, and grape seed extract was added. In this study, we investigated the effect of ingestion of diets containing ovaries and ovariectomy on body weight gain via intestinal bacteria.
試験群2は、実施例1に供した試験群1のマウスの糞便を移植されているので、腸内細菌叢が試験群1と同様な構成となり、いわゆる悪玉化していない状態であることが予想される。一方、対照群1のマウスの糞便を移植された対照群3は、腸内細菌叢は、試験群1と同様に腸内細菌叢のフィルミクテス門が増加し、それに伴いフィルミクテス門に対するバクテロイデス門の割合が減少している、いわゆる腸内細菌叢が悪玉化した状態であることが予想される。対照群4は、実施例1に供した試験群2のマウスの糞便を移植されているので、試験群2と同様にいわゆる悪玉化していない状態であることが予想される。
Since
図4に示されるようにブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料を給餌された更年期障害期のモデルとしての卵巣摘出マウスである試験群1の糞便を移植された試験群2のマウスの体重増加は、通常の飼料を給餌された更年期障害期のモデルとしての卵巣摘出マウスである対照群1の糞便を移植された対照群3のマウスにくらべ顕著に低かった。また、対照群3は、通常の飼料を給餌され、卵巣を摘出されていないマウスである対照群2の糞便を移植された対照群4のマウスにくらべ顕著に高かった。対照群3と対照群4の体重変化の差は、卵巣摘出による腸内細菌叢の変化が宿主の体重増加をもたらすことが示している。また、この結果に加え、試験群2と対照群3の体重変化の相違から、卵巣摘出を施されたマウスの腸内細菌叢であっても、ブドウ種子抽出物を含む飼料を摂取することで、いわゆる悪玉化していない状態であるので、体重増加が是正され、卵巣摘出していないマウスと同じような体重変化となることが示された。
As shown in Figure 4, the weight gain of
実施例1により卵巣摘出8週後のマウスの比較において、腸内細菌叢が変化することが示されているが、その影響は術後すぐに変化するのではなく徐々に変わっていくことが予想される。図3の特に4週目までにおいて、試験群1と対照群2の体重増加の差が顕著に現れていなかったのは、対照群2の腸内細菌叢にまだ大きな変化が生じていなかったことによるのかもしれない。
Example 1 shows that the intestinal flora changes in mice compared 8 weeks after ovariectomy, but it is expected that the effect will change gradually, not immediately after surgery. be done. The difference in weight gain between test group 1 and
更年期障害期の体重増加にはいくつかの原因があるが、実施例1により更年期障害期に腸内細菌叢が変化することを初めて明らかにし、実施例2によりその変化が宿主の体重増加をもたらすことを確認した。したがって、実施例1及び2により更年期障害期から主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、腸内細菌叢の変化を抑制し、悪玉化に起因する体重増加症状を軽減できることを確認することができた。 There are several causes for weight gain during menopause, but Example 1 reveals for the first time that the intestinal flora changes during menopause, and Example 2 shows that these changes lead to weight gain in the host. It was confirmed. Therefore, according to Examples 1 and 2, by ingesting a menopausal disorder improving agent containing grape seed extract as a main ingredient from the menopausal period, changes in the intestinal flora can be suppressed, and weight gain symptoms caused by bad behavior can be suppressed. can be confirmed to be reduced.
試験例1及び2の結果から、更年期障害期から主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、更年期障害期の腸内菌叢の悪玉化に起因する体重増加症状を軽減できることが認められた。 From the results of Test Examples 1 and 2, by ingesting a menopausal disorder improving agent containing grape seed extract as a main ingredient from the menopausal period, weight gain symptoms caused by the deterioration of the intestinal flora during the menopausal period. was found to be able to reduce
なお、本発明の実施例では、更年期障害期のモデルとしての卵巣摘出マウスを用いているため、女性ホルモンは急激に減少すると想定されるが、実際の更年期障害期では卵巣機能は徐々に衰え、それに伴い腸内細菌叢も徐々に変化していくと考えられる。したがって、本発明の主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を更年期障害期の初期から摂取することがより効果的であり好ましい。 In the examples of the present invention, an ovariectomized mouse is used as a model of menopause, so female hormones are expected to decrease rapidly. Along with this, it is thought that the intestinal microflora also gradually changes. Therefore, it is more effective and preferable to take the anti-menopausal agent or the like containing the grape seed extract as the main component of the present invention from the beginning of the menopausal period.
<実施例3>更年期障害期モデルマウスを用いた糖負荷試験による耐糖能の比較
(マウスの給餌条件等)
<Example 3> Comparison of glucose tolerance by glucose tolerance test using menopausal model mice (feeding conditions of mice, etc.)
マウスの飼育方法は、実施例1と同様である。卵巣の摘出手術をおこなった更年期障害期モデルマウスにブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料を給餌した群を試験群3とし、更年期障害期モデルマウスにブドウ種子抽出物を含まない通常の飼料を給餌した群を対照群5とした。試験群3は手術前日から調製例1のブドウ種子抽出物を含むマウス用飼料の給餌を開始したが、手術前々日まではブドウ種子抽出物を含まない通常の飼料を給餌した。対照群6は、開腹手術のみをおこない、対照群5と同様に手術前後でブドウ種子抽出物を含まない通常の飼料を与えた。手術は、実施例1と同様におこなった。
The mouse breeding method is the same as in Example 1. Test group 3 is a group in which climacteric model mice that have undergone ovariectomy are fed with a mouse diet containing grape seed extract. A control group 5 was obtained. Test group 3 started feeding the mouse chow containing the grape seed extract of Preparation Example 1 from the day before the operation, but continued to feed normal chow without the grape seed extract until two days before the operation.
(糖負荷試験)
手術後5週後、16時間絶食後、尾静脈から採血後、直ちにマウスの体重1g当たり1mgのグルコースをゾンデにて経口投与し、30分間隔で尾静脈から採血した血中グルコース濃度を4回測定した。血中グルコース濃度は自己検査用グルコースキット グルテストNEOセンサーおよび自己検査用グルコース測定器 グルテストNEOアルファを用いて測定した。
(sugar tolerance test)
Five weeks after the operation, after fasting for 16 hours, blood was collected from the tail vein. Immediately after that, 1 mg of glucose per 1 g of the body weight of the mouse was orally administered using a sonde. It was measured. Blood glucose levels were measured using a self-test glucose kit Glutest NEO sensor and a self-test glucose meter Glutest NEO alpha.
(結果)
図5は、糖負荷試験による耐糖能の比較の一例を示す図である。卵巣を摘出した対照群5は、卵巣を摘出していない対照群6にくらべ、血糖値が急激に上昇し正常値まで低下する時間が長くなっており、耐糖能が低下していることが示された。しかし、図5に示す通り、試験群3では、対照群5に比し耐糖能の低下症状は軽度であった。このことは、更年期障害期のモデルとして用いた卵巣摘出マウスでは、ブドウ種子抽出物の投与によって、耐糖能の低下症状が改善したことを示している。更年期障害時の耐糖能の低下症状は、インスリン抵抗性の増大に起因すると考えられることから、ブドウ種子抽出物は、直接的にあるいは腸内細菌叢への作用などを介して間接的に肝臓や筋肉、脂肪細胞などでインスリンが正常に働くように作用していることが考えられる。
(result)
FIG. 5 is a diagram showing an example of comparison of glucose tolerance by a glucose tolerance test. In the control group 5 in which the ovaries were removed, the blood sugar level rapidly increased and decreased to the normal level for a longer period of time than in the
本試験例の結果から、更年期障害期から主成分としてブドウ種子抽出物を含む更年期障害改善剤等を摂取することで、更年期障害期に生じる耐糖能の低下症状を軽減できることが認められた。 From the results of this test example, it was confirmed that the symptoms of decreased glucose tolerance that occur during the menopausal period can be alleviated by ingesting a menopausal disorder improving agent containing grape seed extract as the main ingredient from the menopausal period.
本発明は、更年期障害期に生じる症状に対し早期に対策することで、正常体重の腸内細菌叢の構成を維持し、体重増加を抑制し、ひいては糖尿病などの生活習慣病の予防に貢献できると考えられる。ところで、高橋は、閉経後は心血管系疾患が増加するが、心血管系疾患の発生にはエストロゲンの減少以外に加齢という生物学的老化現象も関与するため、エストロゲンの投与がすべての年齢における動脈硬化の発生の抑制につながるものではないこと、及び、閉経後であっても年齢の低い段階でHRTをおこなうことが効果的で、女性のQOL向上に貢献できることが考えられると報告している。(日本生殖内分泌学会雑誌 18:11-15, 2013)このように疾病の種類によっては、症状が悪化する前に早期に対応することで、効果をあげることができることが分かってきている。具体的な症状が現れる前から対策し、健康状態を長期に継続させようとする健康管理法が提唱され始めており、本発明はこのような見地からも有用であると期待される。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention can contribute to the prevention of lifestyle-related diseases such as diabetes by maintaining the composition of the intestinal microflora of a normal body weight and suppressing weight gain by taking early measures against symptoms that occur during the menopausal period. it is conceivable that. By the way, Takahashi points out that cardiovascular diseases increase after menopause, and that the occurrence of cardiovascular diseases is related not only to the decrease in estrogen levels but also to the biological aging phenomenon of aging. and that HRT at a young age, even after menopause, is effective and may contribute to improving the QOL of women. there is (Journal of the Japanese Society for Reproductive Endocrinology 18:11-15, 2013) In this way, depending on the type of disease, it has been found that early treatment before symptoms worsen can be effective. Health management methods have begun to be proposed, in which measures are taken before specific symptoms appear and health conditions are to be maintained over the long term, and the present invention is expected to be useful from this point of view as well.
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