JP7252180B2 - フラジェリンをコードする組み換えmvaによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 - Google Patents
フラジェリンをコードする組み換えmvaによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7252180B2 JP7252180B2 JP2020124473A JP2020124473A JP7252180B2 JP 7252180 B2 JP7252180 B2 JP 7252180B2 JP 2020124473 A JP2020124473 A JP 2020124473A JP 2020124473 A JP2020124473 A JP 2020124473A JP 7252180 B2 JP7252180 B2 JP 7252180B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- flagellin
- virus
- antigen
- acid sequence
- immunogenic composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
- A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/255—Salmonella (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
- C12N7/045—Pseudoviral particles; Non infectious pseudovirions, e.g. genetically engineered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55544—Bacterial toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/64—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the architecture of the carrier-antigen complex, e.g. repetition of carrier-antigen units
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2796/00—Viruses not covered by groups C12N2710/00 - C12N2795/00
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
配列番号1は、フラジェリン(Salmonella typhimurium)のアミノ酸配列である。
以下では、本発明の例示的な実施形態について詳しく言及していくが、それらの例については、添付の図面に示されている。可能な場合には、同じまたは類似の部分について言及する際には、図面の全体にわたって、同じ符号を用いる。
特に断りのない限り、本明細書における専門用語は、分子生物学分野の当業者による慣例的な用法に従って使用する。分子生物学における一般用語については、慣例的な用法は、例えば、Genes V by Benjamin Lewin,published by Oxford University Press,1994(ISBN 0-19-854287-9)、Kendrew et al.(eds.)、The Encyclopedia of Molecular Biology,published by Blackwell Science Ltd.,1994(ISBN 0-632-02182-9)及びMolecular Biology and Biotechnology:a Comprehensive Desk Reference edited by Robert A.Meyers,published by VCH Publishers,Inc.,1995(ISBN 1-56081-569-8)のような標準的な教科書に見出すことができる。
本開示の実施形態では、粘膜経路によって(この場合鼻腔内経路を用いて)投与するrMVA-フラジェリン構築物の利点を示す。rMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫は、同様の経路によって投与する単独のrMVAよりも優れたワクチンであることが示されている。rMVA-フラジェリンは、rMVAに比べて、良好な免疫応答を全身的に、かつ粘膜区画内で誘導する機能を有する。このことは、脾臓と肺の両方におけるMVA特異的CTLとOVA特異的CTLの頻度の向上とともに、脾臓におけるこれらのサイトカイン産生CTL、すなわちIFN-γとTNF-αの頻度の向上によって示されている。本明細書に開示されている免疫原性組成物は、脾臓によるIFN-γ+TNF-α+産生CTLの増大により、免疫応答の質を向上させることも示されている。これにより、より良好なT細胞応答の誘導における、rMVA-フラジェリンの有益な作用が示唆されている。本明細書に開示されている免疫原性組成物では、rMVA-フラジェリンが、B細胞応答、より具体的にはTh1型の免疫応答に有益な作用を及ぼすとともに、rMVAに比べて、血清中のIgG2cの力価がより高いことも示されている。rMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫後に、血清及びBALにおけるMVA特異的IgG2cとOVA特異的IgG2cの両方の向上した力価を観察できる。もちろん、粘膜免疫は最終的に、粘膜表面における分泌型IgAの産生によって特徴付けられる粘膜抗体応答を誘導する。これらの結果によって、鼻腔内経路によって投与する単独のrMVAとrMVA-フラジェリンワクチンの両方が、BALにおけるIgAの産生を誘導できることを示す。この免疫原性組成物の方が、上気道において全身性免疫応答と粘膜免疫応答を誘導する効率が高いことが立証されているので、rMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫が、胃腸区画においても免疫応答を誘導できるかを調べた。腸管免疫を賦活できたとともに、腸洗浄液にIgAが存在することが確認された。
MVAは、トルコのアンカラのVaccination Instituteに長年保持されているとともに、ヒトへのワクチンのベースとして用いられている皮膚ワクシニア株Ankara[漿尿膜ワクシニアウイルスAnkaraウイルス、CVA、検討のためには、Mayr et al.(1975),Infection 3,6-14を参照]を鶏胚線維芽細胞で570回超連続継代することによって生成されている。しかしながら、ワクシニアウイルスと関連して、ワクチン接種後に重度の合併症が頻繁に起こることにより、更に弱毒化され、更に安全である天然痘ワクチンを生成する取り組みがいくつか行われた。
一態様では、本発明では、フラジェリンをコードする核酸配列と、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列とを含む組み換えポックスウイルス(例えば、改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)など)を含む免疫原性組成物であって、対象、例えばヒト対象に投与すると、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導される、その異種の疾患関連抗原に特異的なT細胞免疫応答及び/またはB細胞免疫応答に比べて、その異種の疾患関連抗原に特異的な増加したT細胞免疫応答及び/またはB細胞免疫応答を誘導する免疫原性組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明で提供する免疫原性組成物のいずれも、製薬学的に許容可能な担体を更に含む。ある特定の実施形態では、免疫原性組成物は、溶液に、104~109TCID50/ml、105~5×108TCID50/ml、106~108TCID50/mlまたは107~108TCID50/mlの濃度範囲で配合できる。ヒトに対する好ましい用量には、106TCID50、107TCID50、108TCID50または5×108TCID50の用量を含め、106~109TCID50が含まれる。
本発明では、本明細書に開示されている免疫原性組成物のいずれか1つ以上を含むキットも提供する。このキットは、免疫原性組成物の1つまたは複数の容器またはバイアルとともに、感染性疾患に罹患するか、または腫瘍を患うリスクのある対象に免疫原性組成物を投与することに関する説明書を含むことができる。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。説明書には、免疫原性組成物を対象に1回または複数回(すなわち、2回、3回、4回など)投与すべき旨を示してもよい。ある特定の実施形態では、説明書には、ナイーブ対象または非ナイーブ対象に対して、免疫原性組成物の1回目の投与(プライミング)を行ってから、1回以上ブースティング投与を行うべき旨が示される。さらに、免疫原性組成物を、1回目の投与(プライミング)用の第1のバイアルまたは容器と、その後の1回以上のブースティング投与用の1つ以上の追加のバイアルまたは容器に含むキットも提供する。
本発明では、疾患関連抗原に対する抗原特異的免疫応答を増強させる方法であって、本発明で提供する免疫原性組成物のいずれかを、それが必要な対象に投与することを含み、その免疫原性組成物が、対象に投与されると、その異種の疾患関連抗原に特異的な増加したT細胞免疫応答を誘導する方法と、本発明で提供する免疫原性組成物であって、対象を免疫する方法で用いる免疫原性組成物のいずれかと、対象を免疫する医薬の調製の際に、本発明で提供する免疫原性組成物のいずれかを使用することとも提供する。
マウス:C57BL/6(H-2b)マウスを、Janvier Labsから購入した。C57BL/6-Tg(TcraTcrb)1100MjbJ(OT-I)マウス、C57BL/6-Tg(TcraTcrb)425bnJ(OT-II)マウス及びB6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ(CD45.1)マウスをUniversity of Zurichから得て、交配し、それぞれCD45.1+OT-Iマウス及びCD45.1+OT-IIマウスを得た。NLRC4-/-も、University of Zurichから得た。マウスは、Bavarian Nordic GmbHまたはUniversity of Zurichの動物施設のいずれかで、研究所のガイドラインに従って交配及び維持した。
鼻腔内免疫は、全身性免疫応答と粘膜免疫応答の両方を誘導することが知られている。従って、我々は、rMVAによる鼻腔内免疫後に両方の部位でCD8+T細胞応答を評価したいと考えた。より具体的には、本発明のアジュバント添加rMVA-フラジェリン構築物によって、rMVAに比べてより良好なCD8+T細胞応答を得ることができるかを知りたいと考えた。この目的のために、B820-27ペプチドをロードしたMHC-I(H2-kb)デキストラマーを用いてMVA特異的応答を、またはOVA257-264ペプチドをロードしたMHC-I(H2-kb)デキストラマーを用いてOVA特異的応答を検出した。B820-27とOVA257-264は、C57BL/6マウスにおける免疫優性CD8T細胞エピトープである。
MHC I多量体染色によって、rMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫後に抗原特異的CD8+T細胞の向上した頻度が立証されたので、我々は、IFN-γ、TNF-αなどのサイトカインを迅速に産生させることが知られているサイトカイン産生メモリーCD8+T細胞の頻度について検討したいと考えた。B8ペプチドとOVAペプチドの両方によって、インビトロで再刺激した後、細胞内サイトカイン染色によって、MVA特異的CD8+T細胞とOVA特異的CD8+T細胞を測定した。
rMVA-フラジェリンが、鼻腔内投与後に、サイトカイン産生MVA特異的CTLとOVA特異的CTLの両方の頻度を向上させるのに有効であることが立証されたので、我々は、その応答の質を決定したいと考えた。
上記の結果から、質的にも量的にも、より強力なCD8+T細胞応答を得るために、我々のTLR5Lアジュバント添加MVAワクチンを鼻腔内経路で用いる利点を我々は明らかに示すことができる。それにもかかわらず、新たなワクチンを設計するときには、長期免疫を獲得するために、効率的な抗体応答を得ることも非常に重要である。したがって、我々の鼻腔内モデルにおける、rMVA-フラジェリンの抗体応答促進に対する寄与度も決定した。本質的な疑問の1つは、rMVA-フラジェリンによって、rMVAよりも良好血清抗体応答を得ることができるかということであった。
rMVAで免疫したマウスとrMVA-フラジェリンで免疫したマウスの血清において抗体応答が発現し、rMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫後に、向上した血清のIgG2cの力価が立証されたので、我々は、BALにおいて、同様の応答を免疫部位で局所的に観察できるかを明らかにすることに興味を持った。実際、BALにおけるIgG応答の観点で、同様の応答を観察できる(図6)。rMVAで免疫したマウスと、rMVA-フラジェリンで免疫したマウスとの間で、BALの総IgGの差は確認できなかった(図6a)。加えて、血清で観察されたように、rMVAで免疫したマウスとrMVA-フラジェリンで免疫したマウスのBALにおいて、同様のレベルのrMVA特異的IgG1の力価(図6b)とOVA特異的IgG1の力価(図6c)を検出できた。これに対して、IgG2cの力価に関しては、rMVAで免疫したマウスに比べて、rMVA-フラジェリンで免疫したマウスは、向上したrMVA特異的IgG2cの力価(図6b)とOVA特異的IgG2cの力価(図6c)の両方を呈した。さらに、rMVAで免疫したマウスは、BALにおいて、より顕著な抗原特異的Th2免疫応答を呈し、IgG1力価のレベルの方が、IgG2cに比べて高かった(図6c)が、rMVA-フラジェリンで免疫したマウスのBALでは、血清中で観察されたように、Th1免疫応答とTh2免疫応答が組み合わさっていることを確認できた(図6c)。これにより、rMVA-フラジェリンによる免疫が、粘膜免疫部位において、よりバランスの取れた免疫応答を誘導することが示唆される。
近年、粘膜ワクチンを開発するために、徹底的な取り組みが行われており、鼻腔内免疫は、既に述べたように、多種多様な理由から、非常に魅力的な経路であることが証明されている。さらに、鼻腔内免疫は、強力な上気道免疫を惹起するのみならず、胃腸免疫応答も惹起することが説明されている。したがって、我々は、鼻腔内投与したrMVAとrMVA-フラジェリンが、胃腸管でも免疫応答を誘導できるか立証したいと考えた。胃腸管で免疫を誘導できる場合には、間違いなく、胃腸病原体に特異的な粘膜rMVAワクチンの開発において、新たな機会を生み出すことになる。
rMVAによる鼻腔内免疫とrMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫の後に、養子導入T細胞がmLNに移動することが既に示され、それにより、rMVA-フラジェリンで免疫したマウスのBALにおけるIgAの誘導とともに、胃腸免疫応答の誘導が示されたので、免疫したマウスの粘膜固有層においてIgAも検出できるかを明らかにしたいと我々は考えた(検出できたら、実際に、胃腸免疫の成立が確認されることになる)。
鼻腔内rMVA-フラジェリンが、rMVAに比べて、増強した全身性免疫と粘膜免疫を誘導することが立証されたので、rMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫後のインビボでの自然免疫応答を明らかにしたいと我々は考えた。そこで、免疫から24時間後に、rMVA-フラジェリンで鼻腔内免疫したマウスのBAL液を採取し、サイトカイン産生について解析した。
上の結果から、rMVA-フラジェリンが、TLR5経路の活性化を誘発して、TNF-αを分泌させることができることが既に示されたので、TLR5によってrMVA-フラジェリンを認識する機構を更に調べたいと我々は考えた。実際、rMVA-フラジェリン構築物内でコードされるフラジェリンは、真核細胞性分泌シグナルを含まないので、形質導入後にフラジェリンが細胞内に留まるのか、分泌されるのか決定することが知りたい対象である。我々は、HEK-blue hTLR5レポーター細胞株を用いて、rMVA-フラジェリン形質導入Hela細胞が、TLR5の活性化を誘発できることを示すことができた(図10)。加えて、rMVA-フラジェリン形質導入細胞の上清または細胞溶解液とともにインキュベートしたHEK-Blue細胞も、SEAP活性を示したことから、rMVA-フラジェリン形質導入細胞からフラジェリンが分泌または放出され、それぞれ、形質導入細胞内に蓄積することが示唆される(図10)。予想どおりに、rMVAは、SEAP活性を検出できなかったので、TLR5の活性化を誘発できない。同様に、rMVAのみで形質導入を行った細胞の上清では、このアッセイにおいてSEAP活性を測定できなかったので、この上清がTLR5を刺激しないことも我々は示した(図10)。組み換えフラジェリンを陽性対照として用いて、フラジェリンタンパク質が実際にHEK-blue細胞を刺激することを我々は確認した(図10)。rMVA-フラジェリン形質導入細胞から得た上清は、TLR5の活性化を誘発することから、フラジェリンが分泌されることが強く示唆されているものの、ピロトーシス後に、死にかけている形質導入細胞からフラジェリンが放出される可能性は排除されないことに言及することが重要であり、このことは、上記の結果ですでに観察されている(図10)。
我々の古典的なrMVAワクチンの免疫原性を向上させるために、十分に確立された粘膜アジュバントフラジェリンによって、遺伝的アジュバント添加構築物を設計して、我々のワクチンを粘膜経路によって用いることを目指した。インビボ投与前に、FLDCを用いたインビトロ研究によって、生物活性と自然免疫認識能を割り出すことが重要であった。
rMVA-フラジェリンによる鼻腔内免疫後に、インビボ及びインビトロで、rMVA-フラジェリン特異的IL-1βが産生されるとともに、胃腸免疫応答が発現することが立証されたので、粘膜DC、より具体的には、粘膜固有層由来のDCの刺激を誘導可能であるかを明らかにしたいと我々は考えた。
配列番号1(P06179(UniProt)フラジェリン(Salmonella typhimurium)のアミノ酸配列:
MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSALGTAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTANIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDSIQAEITQRLNEIDRVSGQTQFNGVKVLAQDNTLTIQVGANDGETIDIDLKQINSQTLGLDTLNVQQKYKVSDTAATVTGYADTTIALDNSTFKASATGLGGTDQKIDGDLKFDDTTGKYYAKVTVTGGTGKDGYYEVSVDKTNGEVTLAGGATSPLTGGLPATATEDVKNVQVANADLTEAKAALTAAGVTGTASVVKMSYTDNNGKTIDGGLAVKVGDDYYSATQNKDGSISINTTKYTADDGTSKTALNKLGGADGKTEVVSIGGKTYAASKAEGHNFKAQPDLAEAAATTTENPLQKIDAALAQVDTLRSDLGAVQNRFNSAITNLGNTVNNLTSARSRIEDSDYATEVSNMSRAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
atggcacaag tcattaatac aaacagcctg tcgctgttga cccagaataa cctgaacaaa tcccagtccg ctctgggcac cgctatcgag cgtctgtctt ccggtctgcg tatcaacagc gcgaaagacg atgcggcagg tcaggcgatt gctaaccgtt ttaccgcgaa catcaaaggt ctgactcagg cttcccgtaa cgctaacgac ggtatctcca ttgcgcagac cactgaaggc gcgctgaacg aaatcaacaa caacctgcag cgtgtgcgtg aactggcggt tcagtctgct aacagcacca actcccagtc tgacctcgac tccatccagg ctgaaatcac ccagcgcctg aacgaaatcg accgtgtatc cggccagact cagttcaacg gcgtgaaagt cctggcgcag gacaacaccc tgaccatcca ggttggtgcc aacgacggtg aaactatcga tatcgatctg aagcagatca actctcagac cctgggtctg gatacgctga atgtgcaaca aaaatataag gtcagcgata cggctgcaac tgttacagga tatgccgata ctacgattgc tttagacaat agtactttta aagcctcggc tactggtctt ggtggtactg accagaaaat tgatggcgat ttaaaatttg atgatacgac tggaaaatat tacgccaaag ttaccgttac ggggggaact ggtaaagatg gctattatga agtttccgtt gataagacga acggtgaggt gactcttgct ggcggtgcga cttccccgct tacaggtgga ctacctgcga cagcaactga ggatgtgaaa aatgtacaag ttgcaaatgc tgatttgaca gaggctaaag ccgcattgac agcagcaggt gttaccggca cagcatctgt tgttaagatg tcttatactg ataataacgg taaaactatt gatggtggtt tagcagttaa ggtaggcgat gattactatt ctgcaactca aaataaagat ggttccataa gtattaatac tacgaaatac actgcagatg acggtacatc caaaactgca ctaaacaaac tgggtggcgc agacggcaaa accgaagttg tttctattgg tggtaaaact tacgctgcaa gtaaagccga aggtcacaac tttaaagcac agcctgatct ggcggaagcg gctgctacaa ccaccgaaaa cccgctgcag aaaattgatg ctgctttggc acaggttgac acgttacgtt ctgacctggg tgcggtacag aaccgtttca actccgctat taccaacctg ggcaacaccg taaacaacct gacttctgcc cgtagccgta tcgaagattc cgactacgcg accgaagttt ccaacatgtc tcgcgcgcag attctgcagc aggccggtac ctccgttctg gcgcaggcga accaggttcc gcaaaacgtc ctctctttac tgcgttaa
1.フラジェリンをコードする核酸配列と、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列とを含む組み換え改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)を含む免疫原性組成物であって、対象に投与すると、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導される、前記異種の疾患関連抗原に特異的なT細胞免疫応答及び/またはB細胞免疫応答に比べて、前記異種の疾患関連抗原に特異的な増加したT細胞免疫応答及び/またはB細胞免疫応答を誘導する前記免疫原性組成物。
2.前記増加したT細胞免疫応答は、前記異種の疾患関連抗原に特異的な細胞傷害性T細胞(CTL)の数が増えることを含む、上記1に記載の免疫原性組成物。
3.前記異種の疾患関連抗原に特異的なCTLの数が増えることにより、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導されるCTLと比べて、増加した細胞溶解活性も示す、上記2に記載の免疫原性組成物。
4.前記増加したT細胞免疫応答は、前記異種の疾患関連抗原に特異的なメモリーT細胞の数が増えることを含む、上記1に記載の免疫原性組成物。
5.前記増加したT細胞免疫応答は、前記異種の疾患関連抗原に特異的なCTLの数が増えることと、前記異種の疾患関連抗原に特異的なメモリーT細胞の数が増えることとを含む、上記1に記載の免疫原性組成物。
6.前記異種の疾患関連抗原に特異的なCTLの数が増えることにより、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導されるCTLと比べて、増加した細胞溶解活性も示す、上記5に記載の免疫原性組成物。
7.前記核酸配列が、配列番号1に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも95%、96%、97%、98%、99%または100%のフラジェリンをコードする、上記1~6のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
8.前記核酸配列が、配列番号1のアミノ酸配列を有するフラジェリンをコードする、上記7に記載の免疫原性組成物。
9.製薬学的に許容可能な担体を更に含む、上記1~8のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
10.前記疾患関連抗原が、感染性疾患抗原または腫瘍関連抗原である、上記1~9のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
11.前記疾患関連抗原が、感染性疾患抗原である、上記10に記載の免疫原性組成物。12.前記感染性疾患抗原が、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原または寄生虫抗原である、上記11に記載の免疫原性組成物。
13.前記感染性疾患抗原が、ウイルス抗原である、上記12に記載の免疫原性組成物。14.前記ウイルス抗原が、アデノウイルス、アルボウイルス、アストロウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、サイトメガロウイルス(「CMV」)、デングウイルス、エボラウイルス、エプスタイン・バーウイルス(「EBV」)、***ウイルス、グアナリトウイルス、ヘンドラウイルス、単純ヘルペスウイルス1型(「HSV-1」)、単純ヘルペスウイルス2型(「HSV-2」)、ヒトヘルペスウイルス6型(「HHV-6」)、ヒトヘルペスウイルス8型(「HHV-8」)、A型肝炎ウイルス(「HAV」)、B型肝炎ウイルス(「HBV」)、C型肝炎ウイルス(「HCV」)、D型肝炎ウイルス(「HDV」)、E型肝炎ウイルス(「HEV」)、ヒト免疫不全ウイルス(「HIV」)、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、ムンプスウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、ノロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス(「HPV」)、パラインフルエンザウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(「RSV」)、ライノウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス(「SARS」)、水痘帯状疱疹ウイルス、痘瘡ウイルス、ウエストナイルウイルス及び黄熱病ウイルスからなる群から選択されるウイルス由来である、上記13に記載の免疫原性組成物。15.前記感染性疾患抗原が、細菌抗原である、上記12に記載の免疫原性組成物。
16.前記細菌抗原が、Bacillus anthracis、Bordetella
pertussis、Borrelia burgdorferi、Brucella
abortus、Brucella canis、Brucella melitensis、Brucella suis、Burkholderia mallei、Burkholderia pseudomallei、Campylobacter jejuni、Chlamydia pneumoniae、Chlamydia trachomatis、Chlamydophila psittaci、Clostridium botulinum、Clostridium difficile、Clostridium perfringens、Clostridium tetani、Corynebacterium diptheriae、Enterococcus faecalis、Enterococcus faecium、Escherichia coli、enterotoxigenic Escherichia coli、enteropathogenic Escherichia coli、Escherichia coli)157:H7、Francisella tularensis、Haemophilus influenza、Helicobacter pylori、Legionella pneumophila、Leptospira interrogans、Listeria monocytogenes、Mycobacterium leprae、Mycobacterium tuberculosis、Mycoplasma pneumoniae、Neisseria gonorrhoeae、Neisseria meningitides、Pseudomonas aeruginosa、Rickettsia rickettsia、Salmonella
typhi、Salmonella typhimurium、Shigella sonnei、Staphylococcus aureus、Staphylococcus epidermidis、Staphylococcus saprophyticus、Streptococcus agalactiae、Streptococcus pneumoniae、Streptococcus pyogenes、Treponema pallidum、Vibrio cholerae及びYersinia pestisからなる群から選択される細菌に由来する、上記15に記載の免疫原性組成物。
17.前記感染性疾患抗原が、真菌抗原である、上記12に記載の免疫原性組成物。
18.前記真菌抗原が、Aspergillus clavatus、Aspergillus flavus、Aspergillus fumigatus、Aspergillus nidulans、Aspergillus niger、Aspergillus terreus、Blastomyces dermatitidis、Candida albicans、Candida dubliniensis、Candida glabrata、Candida parapsilosis、Candida
rugosa、Candida tropicalis、Cryptococcus albidus、Cryptococcus gattii、Cryptococcus
laurentii、Cryptococcus neoformans、Histoplasma capsulatum、Microsporum canis、Pneumocystis carinii、Pneumocystis jirovecii、Sporothrix schenckii、Stachbotrys chartarum、Tinea barbae、Tinea captitis、Tinea corporis、Tinea cruris、Tinea faciei、Tinea incognito、Tinea nigra、Tinea versicolor、Trichophyton rubrum及びTrichophyton tonsuransからなる群から選択される真菌に由来する、上記17に記載の免疫原性組成物。
19.前記感染性疾患抗原が、寄生虫抗原である、上記12に記載の免疫原性組成物。
20.前記寄生虫抗原が、Anisakis spp.、Babesia spp.、Baylisascaris procyonis、Cryptosporidium spp.、Cyclospora cayetanensis、Diphyllobothrium spp.、Dracunculus medinensis、Entamoeba histolytica、Giardia duodenalis、Giardia intestinalis、Giardia lamblia、Leishmania sp.、Plasmodium falciparum、Schistosoma mansoni、Schistosoma haematobium、Schistosoma japonicum、Taenia spp.、Toxoplasma gondii、Trichinella spiralis及びTrypanosoma cruziからなる群から選択される寄生虫由来である、上記19に記載の免疫原性組成物。21.前記疾患関連抗原が、腫瘍関連抗原である、上記10に記載の免疫原性組成物。
22.前記腫瘍関連抗原が、5-α-レダクターゼ、α-フェトプロテイン(「AFP」)、AM-1、APC、April、Bメラノーマ抗原遺伝子(「BAGE」)、β-カテニン、Bcl12、bcr-abl、Brachyury、CA-125、カスパーゼ-8(「CASP-8」、「FLICE」としても知られている)、カテプシン、CD19、CD20、CD21/補体レセプター2(「CR2」)、CD22/BL-CAM、CD23/F c εRII、CD33、CD35/補体レセプター1(「CR1」)、CD44/PGP-1、CD45/白血球共通抗原(「LCA」)、CD46/膜補因子タンパク質(「MCP」)、CD52/CAMPATH-1、CD55/崩壊促進因子(「DAF」)、CD59/プロテクチン、CDC27、CDK4、癌胎児性抗原(「CEA」)、c-myc、シクロオキシゲナーゼ-2(「cox-2」)、大腸がん欠失遺伝子(「DCC」)、DcR3、E6/E7、CGFR、EMBP、Dna78、ファルネシルトランスフェラーゼ、線維芽細胞増殖因子-8a(「FGF8a」)、線維芽細胞増殖因子-8b(「FGF8b」)、FLK-1/KDR、葉酸レセプター、G250、Gメラノーマ抗原遺伝子ファミリー(「GAGE-ファミリー」)、ガストリン17、ガストリン放出ホルモン、ガングリオシド2(「GD2」)/ガングリオシド3(「GD3」)/ガングリオシド-モノシアル酸-2(「GM2」)、ゴナドトロピン放出ホルモン(「GnRH」)、UDP-GlcNAc:R 1 Man(α1-6)R 2 [GlcNAc-Man(α1-6)]β1,6-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼV(「GnT V」)、GP1、gp100/Pme117、gp-100-in4、gp15、gp75/チロシン関連タンパク質-1(「gp75/TRP-1」)、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(「hCG」)、ヘパラナーゼ、Her2/neu、ヒト乳癌ウイルス(「HMTV」)、70キロダルトン熱ショックタンパク質(「HSP70」)、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(「hTERT」)、インスリン様増殖因子レセプター-1(「IGFR-1」)、インターロイキン-13レセプター(「IL-13R」)、誘導型一酸化窒素合成酵素(「iNOS」)、Ki67、KIAA0205、K-ras、H-ras、N-ras、KSA、LKLR-FUT、メラノーマ抗原コード遺伝子1(「MAGE-1」)、メラノーマ抗原コード遺伝子2(「MAGE-2」)、メラノーマ抗原コード遺伝子3(「MAGE-3」)、メラノーマ抗原コード遺伝子4(「MAGE-4」)、マンマグロビン、MAP17、Melan-A/T細胞認識メラノーマ抗原-1(「MART-1」)、メソセリン、MIC A/B、MT-MMP、ムチン、精巣特異的抗原NY-ESO-1、オステオネクチン、p15、P170/MDR1、p53、p97/メラノトランスフェリン、PAI-1、血小板由来増殖因子(「PDGF」)、μPA、PRAME、プロバシン、プロゲニポエチン、前立腺特異的抗原(「PSA」)、前立腺特異的膜抗原(「PSMA」)、前立腺酸性ホスファターゼ(「PAP」)、RAGE-1、Rb、RCAS1、SART-1、SSXファミリー、STAT3、STn、TAG-72、形質転換増殖因子α(「TGF-α」)、形質転換増殖因子β(「TGF-β」)、チモシンβ15、腫瘍壊死因子α(「TNF-α」)、TP1、TRP-2、チロシナーゼ、血管内皮増殖因子(「VEGF」)、ZAG、p16INK4及びグルタチオンS-トランスフェラーゼ(「GST」)からなる群から選択される、上記21に記載の免疫原性組成物。
23.疾患関連抗原に対する抗原特異的免疫応答の誘導方法であって、上記1~22のいずれか1項に記載の免疫原性組成物を、それが必要な対象に投与することを含み、前記免疫原性組成物が、対象に投与されると、前記異種の疾患関連抗原に特異的な増加したT細胞免疫応答及び/またはB細胞免疫応答を誘導する前記方法。
24.前記増加したT細胞免疫応答の増加は、前記異種の疾患関連抗原に特異的な細胞傷害性T細胞(CTL)の数が増えることが含まれる、上記23に記載の方法。
25.前記異種の疾患関連抗原に特異的なCTLの数が増えることにより、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導されるCTLと比べて、増加した細胞溶解活性も示す、上記24に記載の方法。
26.前記増加したT細胞免疫応答は、前記異種の疾患関連抗原に特異的なメモリーT細胞の数が増えることが含まれる、上記23に記載の方法。
27.前記増加したT細胞免疫応答は、前記異種の疾患関連抗原に特異的なCTLの数が増えることと、前記異種の疾患関連抗原に特異的なメモリーT細胞の数が増えることとが含まれる、上記23に記載の方法。
28.前記異種の疾患関連抗原に特異的なCTLの数が増えることにより、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導されるCTLと比べて、増加した細胞溶解活性を示す、上記27に記載の方法。
29.前記核酸配列が、配列番号1に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも95%、96%、97%、98%、99%または100%であるフラジェリンをコードする、上記23~28のいずれか1項に記載の方法。
30.前記核酸配列が、配列番号1のアミノ酸配列を有するフラジェリンをコードする、上記29に記載の方法。
31.前記免疫原性組成物が、製薬学的に許容可能な担体を更に含む、上記23~30のいずれか1項に記載の方法。
32.前記疾患関連抗原が、感染性疾患抗原または腫瘍関連抗原である、上記23~31のいずれか1項に記載の方法。
33.前記疾患関連抗原が、感染性疾患抗原である、上記32に記載の方法。
34.前記感染性疾患抗原が、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原または寄生虫抗原である、上記33に記載の方法。
35.前記感染性疾患抗原が、ウイルス抗原である、上記34に記載の方法。
36.前記ウイルス抗原が、アデノウイルス、アルボウイルス、アストロウイルス、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、サイトメガロウイルス(「CMV」)、デングウイルス、エボラウイルス、エプスタイン・バーウイルス(「EBV」)、***ウイルス、グアナリトウイルス、ヘンドラウイルス、単純ヘルペスウイルス1型(「HSV-1」)、単純ヘルペスウイルス2型(「HSV-2」)、ヒトヘルペスウイルス6型(「HHV-6」)、ヒトヘルペスウイルス8型(「HHV-8」)、A型肝炎ウイルス(「HAV」)、B型肝炎ウイルス(「HBV」)、C型肝炎ウイルス(「HCV」)、D型肝炎ウイルス(「HDV」)、E型肝炎ウイルス(「HEV」)、ヒト免疫不全ウイルス(「HIV」)、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、ムンプスウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、ノロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス(「HPV」)、パラインフルエンザウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(「RSV」)、ライノウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス(「SARS」)、水痘帯状疱疹ウイルス、痘瘡ウイルス、ウエストナイルウイルス及び黄熱病ウイルスからなる群から選択されるウイルスに由来する、上記35に記載の方法。
37.前記感染性疾患抗原が、細菌抗原である、上記34に記載の方法。
38.前記細菌抗原が、Bacillus anthracis、Bordetella
pertussis、Borrelia burgdorferi、Brucella
abortus、Brucella canis、Brucella melitensis、Brucella suis、Burkholderia mallei、Burkholderia pseudomallei、Campylobacter jejuni、Chlamydia pneumoniae、Chlamydia trachomatis、Chlamydophila psittaci、Clostridium botulinum、Clostridium difficile、Clostridium perfringens、Clostridium tetani、Corynebacterium diptheriae、Enterococcus faecalis、Enterococcus faecium、Escherichia coli、enterotoxigenic Escherichia coli、enteropathogenic Escherichia coli、Escherichia coli)157:H7、Francisella tularensis、Haemophilus influenza、Helicobacter pylori、Legionella pneumophila、Leptospira interrogans、Listeria monocytogenes、Mycobacterium leprae、Mycobacterium tuberculosis、Mycoplasma pneumoniae、Neisseria gonorrhoeae、Neisseria meningitides、Pseudomonas aeruginosa、Rickettsia rickettsia、Salmonella
typhi、Salmonella typhimurium、Shigella sonnei、Staphylococcus aureus、Staphylococcus epidermidis、Staphylococcus saprophyticus、Streptococcus agalactiae、Streptococcus pneumoniae、Streptococcus pyogenes、Treponema pallidum、Vibrio cholerae及びYersinia pestisからなる群から選択される細菌に由来する、上記37に記載の方法。
39.前記感染性疾患抗原が、真菌抗原である、上記34に記載の方法。
40.前記真菌抗原が、Aspergillus clavatus、Aspergillus flavus、Aspergillus fumigatus、Aspergillus nidulans、Aspergillus niger、Aspergillus terreus、Blastomyces dermatitidis、Candida albicans、Candida dubliniensis、Candida glabrata、Candida parapsilosis、Candida
rugosa、Candida tropicalis、Cryptococcus albidus、Cryptococcus gattii、Cryptococcus
laurentii、Cryptococcus neoformans、Histoplasma capsulatum、Microsporum canis、Pneumocystis carinii、Pneumocystis jirovecii、Sporothrix schenckii、Stachbotrys chartarum、Tinea barbae、Tinea captitis、Tinea corporis、Tinea cruris、Tinea faciei、Tinea incognito、Tinea nigra、Tinea versicolor、Trichophyton rubrum及びTrichophyton tonsuransからなる群から選択される真菌に由来する、上記39に記載の方法。
41.前記感染性疾患抗原が、寄生虫抗原である、上記34に記載の方法。
42.前記寄生虫抗原が、Anisakis spp.、Babesia spp.、Baylisascaris procyonis、Cryptosporidium spp.、Cyclospora cayetanensis、Diphyllobothrium spp.、Dracunculus medinensis、Entamoeba histolytica、Giardia duodenalis、Giardia intestinalis、Giardia lamblia、Leishmania sp.、Plasmodium falciparum、Schistosoma mansoni、Schistosoma haematobium、Schistosoma japonicum、Taenia spp.、Toxoplasma gondii、Trichinella spiralis及びTrypanosoma cruziからなる群から選択される寄生虫に由来する、上記41に記載の方法。
43.前記疾患関連抗原が、腫瘍関連抗原である、上記32に記載の方法。
44.前記腫瘍関連抗原が、5-α-レダクターゼ、α-フェトプロテイン(「AFP」)、AM-1、APC、April、Bメラノーマ抗原遺伝子(「BAGE」)、β-カテニン、Bcl12、bcr-abl、Brachyury、CA-125、カスパーゼ-8(「CASP-8」、「FLICE」としても知られている)、カテプシン、CD19、CD20、CD21/補体レセプター2(「CR2」)、CD22/BL-CAM、CD23/F c εRII、CD33、CD35/補体レセプター1(「CR1」)、CD44/PGP-1、CD45/白血球共通抗原(「LCA」)、CD46/膜補因子タンパク質(「MCP」)、CD52/CAMPATH-1、CD55/崩壊促進因子(「DAF」)、CD59/プロテクチン、CDC27、CDK4、癌胎児性抗原(「CEA」)、c-myc、シクロオキシゲナーゼ-2(「cox-2」)、大腸がん欠失遺伝子(「DCC」)、DcR3、E6/E7、CGFR、EMBP、Dna78、ファルネシルトランスフェラーゼ、線維芽細胞増殖因子-8a(「FGF8a」)、線維芽細胞増殖因子-8b(「FGF8b」)、FLK-1/KDR、葉酸レセプター、G250、Gメラノーマ抗原遺伝子ファミリー(「GAGE-ファミリー」)、ガストリン17、ガストリン放出ホルモン、ガングリオシド2(「GD2」)/ガングリオシド3(「GD3」)/ガングリオシド-モノシアル酸-2(「GM2」)、ゴナドトロピン放出ホルモン(「GnRH」)、UDP-GlcNAc:R 1 Man(α1-6)R 2 [GlcNAc-Man(α1-6)]β1,6-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼV(「GnT V」)、GP1、gp100/Pme117、gp-100-in4、gp15、gp75/チロシン関連タンパク質-1(「gp75/TRP-1」)、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(「hCG」)、ヘパラナーゼ、Her2/neu、ヒト乳癌ウイルス(「HMTV」)、70キロダルトン熱ショックタンパク質(「HSP70」)、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(「hTERT」)、インスリン様増殖因子レセプター-1(「IGFR-1」)、インターロイキン-13レセプター(「IL-13R」)、誘導型一酸化窒素合成酵素(「iNOS」)、Ki67、KIAA0205、K-ras、H-ras、N-ras、KSA、LKLR-FUT、メラノーマ抗原コード遺伝子1(「MAGE-1」)、メラノーマ抗原コード遺伝子2(「MAGE-2」)、メラノーマ抗原コード遺伝子3(「MAGE-3」)、メラノーマ抗原コード遺伝子4(「MAGE-4」)、マンマグロビン、MAP17、Melan-A/T細胞認識メラノーマ抗原-1(「MART-1」)、メソセリン、MIC A/B、MT-MMP、ムチン、精巣特異的抗原NY-ESO-1、オステオネクチン、p15、P170/MDR1、p53、p97/メラノトランスフェリン、PAI-1、血小板由来増殖因子(「PDGF」)、μPA、PRAME、プロバシン、プロゲニポエチン、前立腺特異的抗原(「PSA」)、前立腺特異的膜抗原(「PSMA」)、前立腺酸性ホスファターゼ(「PAP」)、RAGE-1、Rb、RCAS1、SART-1、SSXファミリー、STAT3、STn、TAG-72、形質転換増殖因子α(「TGF-α」)、形質転換増殖因子β(「TGF-β」)、チモシンβ15、腫瘍壊死因子α(「TNF-α」)、TP1、TRP-2、チロシナーゼ、血管内皮増殖因子(「VEGF」)、ZAG、p16INK4及びグルタチオンS-トランスフェラーゼ(「GST」)からなる群から選択されている、上記43に記載の方法。45.前記免疫原性組成物を鼻腔内投与する、上記23~44のいずれか1項に記載の方法。
46.1回目の投与(プライミング)用の第1のバイアルまたは容器と、2回目の投与(ブースティング)用の第2のバイアルまたは容器に、上記1~22のいずれか1項に記載の免疫原性組成物を含むキット。
47.第3、第4またはそれ以降のバイアルまたは容器に、3回目、4回目またはそれ以降の投与(ブースティング)用の前記免疫原性組成物を含む、上記46に記載のキット。
Claims (17)
- フラジェリンをコードする核酸配列を含み、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列をさらに含む組み換え改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)を含む免疫原性組成物であって、対象に投与すると、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導される、前記異種の疾患関連抗原に特異的なT細胞免疫応答ならびに自然免疫応答に比べて、a)前記異種の疾患関連抗原に特異的な増加したT細胞免疫応答ならびにb)増加した自然免疫応答を誘導する前記免疫原性組成物において、
前記の組み換え改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)が鶏胚線維芽細胞(CEF)において増殖的に複製でき、
前記の組み換え改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)が、異種コード配列としては、前記のフラジェリンをコードする核酸配列と前記の異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列のみを含む、免疫原性組成物。 - 前記増加したT細胞免疫応答は、前記異種の疾患関連抗原に特異的な細胞傷害性T細胞(CTL)の数が増えることを含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。
- 前記核酸配列が、配列番号1に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも95%、96%、97%、98%、99%または100%のフラジェリンをコードする、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。
- 前記核酸配列が、配列番号1のアミノ酸配列を有するフラジェリンをコードする、請求項3に記載の免疫原性組成物。
- 製薬学的に許容可能な担体を更に含む、請求項1~4のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記疾患関連抗原が、感染性疾患抗原または腫瘍関連抗原である、請求項1~5のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記感染性疾患抗原が、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原または寄生虫抗原である、請求項6に記載の免疫原性組成物。
- フラジェリンをコードする核酸配列を含み、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列をさらに含む組み換え改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)を含む免疫原性組成物であって、対象に投与すると、異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列を含むが、フラジェリンをコードする核酸配列を含まない組み換えMVAの投与によって誘導される、前記異種の疾患関連抗原に特異的なT細胞免疫応答ならびに自然免疫応答に比べて、a)前記異種の疾患関連抗原に特異的な増加したT細胞免疫応答ならびにb)増加した自然免疫応答を誘導するための、前記免疫原性組成物において、
前記の組み換え改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)が鶏胚線維芽細胞(CEF)において増殖的に複製でき、
前記の組み換え改変ワクシニアウイルスAnkara(MVA)が、異種コード配列としては、前記のフラジェリンをコードする核酸配列と前記の異種の疾患関連抗原をコードする核酸配列のみを含む、免疫原性組成物。 - 前記増加したT細胞免疫応答は、前記異種の疾患関連抗原に特異的な細胞傷害性T細胞(CTL)の数が増えることが含まれる、請求項8に記載の免疫原性組成物。
- 前記核酸配列が、配列番号1に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも95%、96%、97%、98%、99%または100%であるフラジェリンをコードする、請求項8または9に記載の免疫原性組成物。
- 前記核酸配列が、配列番号1のアミノ酸配列を有するフラジェリンをコードする、請求項10に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が、製薬学的に許容可能な担体を更に含む、請求項8~11のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記疾患関連抗原が、感染性疾患抗原または腫瘍関連抗原である、請求項8~12のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記感染性疾患抗原が、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原または寄生虫抗原である、請求項13に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物を鼻腔内投与する、請求項8~14のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 1回目の投与(プライミング)用の第1のバイアルまたは容器と、2回目の投与(ブースティング)用の第2のバイアルまたは容器に、請求項1~7のいずれか1項に記載の免疫原性組成物を含むキット。
- 第3、第4またはそれ以降のバイアルまたは容器に、3回目、4回目またはそれ以降の投与(ブースティング)用の前記免疫原性組成物を含む、請求項16に記載のキット。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14186588 | 2014-09-26 | ||
EP14186588.1 | 2014-09-26 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017513550A Division JP2017530114A (ja) | 2014-09-26 | 2015-09-25 | フラジェリンをコードする組み換えmvaによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020183430A JP2020183430A (ja) | 2020-11-12 |
JP7252180B2 true JP7252180B2 (ja) | 2023-04-04 |
Family
ID=51690214
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017513550A Pending JP2017530114A (ja) | 2014-09-26 | 2015-09-25 | フラジェリンをコードする組み換えmvaによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 |
JP2020124473A Active JP7252180B2 (ja) | 2014-09-26 | 2020-07-21 | フラジェリンをコードする組み換えmvaによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017513550A Pending JP2017530114A (ja) | 2014-09-26 | 2015-09-25 | フラジェリンをコードする組み換えmvaによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10512684B2 (ja) |
EP (1) | EP3197490B1 (ja) |
JP (2) | JP2017530114A (ja) |
AU (1) | AU2015323736B2 (ja) |
CA (1) | CA2960087C (ja) |
NZ (1) | NZ729519A (ja) |
WO (1) | WO2016046357A1 (ja) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016144564A2 (en) | 2015-02-25 | 2016-09-15 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Use of inactivated nonreplicating modified vaccinia virus ankara (mva)as monoimmunotherapy or in combination with immune checkpoint blocking agents for solid tumors |
AU2016249521B2 (en) | 2015-04-17 | 2021-08-19 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Use of MVA or MVADELTAE3L as immunotherapeutic agents against solid tumors |
EP3419648A4 (en) | 2016-02-25 | 2019-09-11 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | ATTENUATED REPLICATION-VACCINE VIRUSES WITH THYMIDINE KINASE DELETION WITH AND WITHOUT EXPRESSION OF FLT3L OR HUMAN GM-CSF FOR ANTICANCER IMMUNOTHERAPY |
IL261321B2 (en) | 2016-02-25 | 2023-12-01 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Recombinant MVA or MVADELE3L expressing human FLT3L and their use as immunotherapeutic agents against solid tumors |
US20200405846A1 (en) * | 2016-05-10 | 2020-12-31 | The Regents Of The University Of Michigan | Emulsion adjuvant for intramuscular, intradermal and subcutaneous administration |
US20190351039A1 (en) | 2017-02-01 | 2019-11-21 | Modernatx, Inc. | Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides |
CN111107872A (zh) | 2017-05-12 | 2020-05-05 | 纪念斯隆-凯特林癌症中心 | 有用于癌症免疫疗法的牛痘病毒突变体 |
JP7522426B2 (ja) * | 2017-05-25 | 2024-07-25 | ユニバーシティ オブ セントラル フロリダ リサーチ ファウンデーション,インコーポレイテッド | 天然キラー細胞による殺傷に対する腫瘍細胞の感受性を高めるための新規な腫瘍溶解性ウイルス |
KR20200044000A (ko) * | 2017-08-24 | 2020-04-28 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 재조합 mva 및 항체의 정맥내 투여에 의한 암 치료를 위한 병용 요법 |
EP3847246A1 (en) * | 2018-09-06 | 2021-07-14 | Bavarian Nordic A/S | Storage improved poxvirus compositions |
TW202043256A (zh) | 2019-01-10 | 2020-12-01 | 美商健生生物科技公司 | ***新抗原及其用途 |
US20220288198A1 (en) * | 2019-08-30 | 2022-09-15 | Genome Protection, Inc. | Methods of increasing vaccine efficacy |
EP4061405A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-09-28 | Janssen Biotech, Inc. | Vaccines based on mutant calr and jak2 and their uses |
AU2021290177A1 (en) * | 2020-06-10 | 2023-01-19 | Bavarian Nordic A/S | A recombinant Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA) vaccine against coronavirus disease |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009079564A2 (en) | 2007-12-17 | 2009-06-25 | Emory University | Immunogenic compositions and methods of use thereof |
JP2013511552A (ja) | 2009-11-20 | 2013-04-04 | インビラジェン, インコーポレイテッド | ワクチン構築物におけるポックスウイルスエレメントに関する組成物、方法、および使用 |
WO2014015287A2 (en) | 2012-07-20 | 2014-01-23 | Inviragen, Inc. | Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs against influenza virus subtypes or strains |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE68922394T2 (de) | 1988-05-05 | 1995-10-05 | Praxis Biolog Inc | Rekombinante vakzine von flagellin. |
WO2007103048A2 (en) | 2006-03-01 | 2007-09-13 | Regents Of The University Of Colorado | Tlr agonist (flagellin)/cd40 agonist/antigen protein and dna conjugates and use thereof for inducing synergistic enhancement in immunity |
EP1835031A1 (en) * | 2006-03-14 | 2007-09-19 | Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe | Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans |
ES2569417T3 (es) * | 2010-02-02 | 2016-05-10 | Instituto Nacional De Investigación Y Tecnología Agraria Y Alimentaria | Uso de flagelinas del género Marinobacter como adyuvantes vacunales |
WO2014037124A1 (en) | 2012-09-04 | 2014-03-13 | Bavarian Nordic A/S | Methods and compositions for enhancing vaccine immune responses |
CA2935341A1 (en) * | 2013-12-30 | 2015-07-09 | V-Core Technologies, Inc. | Poxvirus-plasmodium recombinants, compositions containing such recombinants, uses thereof, and methods of making and using same |
-
2015
- 2015-09-25 CA CA2960087A patent/CA2960087C/en active Active
- 2015-09-25 JP JP2017513550A patent/JP2017530114A/ja active Pending
- 2015-09-25 AU AU2015323736A patent/AU2015323736B2/en active Active
- 2015-09-25 EP EP15766889.8A patent/EP3197490B1/en active Active
- 2015-09-25 NZ NZ729519A patent/NZ729519A/en unknown
- 2015-09-25 WO PCT/EP2015/072076 patent/WO2016046357A1/en active Application Filing
- 2015-09-25 US US15/512,820 patent/US10512684B2/en active Active
-
2020
- 2020-07-21 JP JP2020124473A patent/JP7252180B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009079564A2 (en) | 2007-12-17 | 2009-06-25 | Emory University | Immunogenic compositions and methods of use thereof |
JP2013511552A (ja) | 2009-11-20 | 2013-04-04 | インビラジェン, インコーポレイテッド | ワクチン構築物におけるポックスウイルスエレメントに関する組成物、方法、および使用 |
WO2014015287A2 (en) | 2012-07-20 | 2014-01-23 | Inviragen, Inc. | Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs against influenza virus subtypes or strains |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Vaccine,2010年,Vol.28, No.24,pp.4103-4112 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2015323736B2 (en) | 2020-09-10 |
NZ729519A (en) | 2024-02-23 |
CA2960087A1 (en) | 2016-03-31 |
US10512684B2 (en) | 2019-12-24 |
WO2016046357A1 (en) | 2016-03-31 |
EP3197490A1 (en) | 2017-08-02 |
EP3197490B1 (en) | 2023-06-21 |
JP2020183430A (ja) | 2020-11-12 |
US20170290909A1 (en) | 2017-10-12 |
AU2015323736A1 (en) | 2017-03-16 |
EP3197490C0 (en) | 2023-06-21 |
JP2017530114A (ja) | 2017-10-12 |
CA2960087C (en) | 2024-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7252180B2 (ja) | フラジェリンをコードする組み換えmvaによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 | |
US20210299236A1 (en) | Methods and Compositions for Enhancing Vaccine Immune Responses | |
US12036279B2 (en) | Recombinant MVA or MVADELE3L expressing human FLT3L and use thereof as immuno-therapeutic agents against solid tumors | |
Walsh et al. | Vaccinia viruses: vaccines against smallpox and vectors against infectious diseases and tumors | |
US7273605B2 (en) | Vaccine | |
AU2021200985B2 (en) | Compositions and methods vectors for inducing an enhanced immune response using poxvirus vectors | |
JP2006514549A (ja) | Il−15を発現する組換えワクチンウイルスおよびその使用方法 | |
Mackova et al. | Adjuvant effect of dendritic cells transduced with recombinant vaccinia virus expressing HPV16-E7 is inhibited by co-expression of IL12 | |
WO2024003239A1 (en) | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN | |
ZA200402629B (en) | Vaccine. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200805 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200805 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210811 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20211108 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220209 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220608 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220906 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221205 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230222 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230323 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7252180 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |