JP7213019B2

JP7213019B2 - 血中尿酸値低減剤、並びに、キサンチンオキシダーゼ阻害剤

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Publication number: JP7213019B2
Application number: JP2018061805A
Authority: JP
Inventors: 遼太郎林
Original assignee: Nippon Flour Mills Co Ltd
Current assignee: NIPPN Corp
Priority date: 2018-03-28
Filing date: 2018-03-28
Publication date: 2023-01-26
Anticipated expiration: 2038-03-28
Also published as: JP2019172602A

Description

本発明は、アブラナ属植物又はその抽出物を有効成分として含有する血中尿酸値低減剤とキサンチンオキシダーゼ阻害剤に関する。

尿酸はプリン体の代謝産物であり、体内で産生された後に尿や便を通して排出される。生体においては、プリン体からの尿酸の産生と排出のバランスを取ることにより、体内のプリン体の量が一定になるように維持されている。しかし、遺伝的要因や環境要因などにより、そのバランスが崩れて体内の尿酸値が上昇することがあり、血中尿酸値が７．０ｍｇ／ｄＬを超えると高尿酸血症と判定される（非特許文献１）。

血中尿酸値と疾患の関係については、血中尿酸値が７．０ｍｇ／ｄＬを超えた高尿酸血症では痛風関節炎のリスクが高まること、血中尿酸値と慢性腎臓病（ＣＫＤ）の発症や進展と関係すること、また血中尿酸値が上昇するにつれてメタボリックシンドロームの頻度が高くなる、などの報告がある（非特許文献１）。

高尿酸血症の治療剤としては、尿酸合成阻害、尿酸***促進、プリン体吸収抑制、等の作用を有するものが知られている。尿酸合成阻害剤として、キサンチンオキシダーゼ阻害剤が知られている。

キサンチンオキシダーゼは体内における尿酸の生合成に関わる酵素であり、キサンチンからの尿酸の合成を担っている。そして、アロプリノールなどのキサンチンオキシダーゼ阻害剤が、尿酸値低減剤として高尿酸血症の治療に用いられている。しかし、アロプリノールを腎不全の患者に過剰投与すると、オキシプリノールの蓄積に関連した副作用の危険性が高まる可能性があるとされる（非特許文献１）。

高尿酸血症や痛風の予防や改善を目的とする場合、日常生活において長期間手軽に摂取できる尿酸値低減剤が好ましい。例えば、天然物由来の有効成分を含有する尿酸値低減剤が好適と考えられる。これまで、プリン体の吸収抑制作用を有する天然物として、キトサン（特許文献１）、水溶性食物繊維（特許文献２）、活性炭（特許文献３）、ε－ポリリジン（特許文献４）等が報告されている。また、キサンチンオキシダーゼ阻害活性を有する天然物として、ブドウ抽出物（特許文献５）、エラグ酸（特許文献６）、エピガロカテキンガレート（特許文献７）等が報告されている。さらに、尿酸の***促進作用を有する天然物として、シークヮーサー果皮（特許文献８）が報告されている。

特開２００１－１６３７８８号公報特開２００５－０４７８２８号公報特開２００５－１８７４０５号公報特開２００６－００１８９８号公報特開２００２－１２１１４５号公報特開２０００－２９０１８８号公報特開２００２－３７０９８０号公報特開２０１６－１５５８２５号公報

日本痛風・核酸代謝学会ガイドライン改定委員会編「高尿酸血症・痛風の治療ガイドライン」第２版（２０１２年追補、ダイジェスト版）、株式会社メディカルレビュー発行

上記したように、高尿酸血症・痛風の予防や改善のために、安全性に優れ、日常生活において長期間手軽に摂取できる血中尿酸値低減剤が求められている。そこで本発明は、新たな天然物由来の有効成分を含有し、高尿酸血症・痛風の予防や改善に有用な剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、アブラナ属植物が有する生理作用について詳細に検討した。その結果、アブラナ属植物の一種であるケール又はその抽出物が血中尿酸値低減作用を有すること、さらに、ケール又はその抽出物が高いキサンチンオキシダーゼ阻害活性を有することを見出し、本発明を完成した。

本発明の１つの様相は、アブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物を有効成分として含有する血中尿酸値低減剤である。

好ましくは、前記アブラナ属植物がケールである。

好ましくは、前記血中尿酸値低減剤は経口投与されるものである。

好ましくは、前記血中尿酸値低減剤は食品組成物である。

本発明の他の様相は、アブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物を有効成分として含有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤である。

好ましくは、前記アブラナ属植物がケールである。

好ましくは、前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤は経口投与されるものである。

好ましくは、前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤は食品組成物である。

好ましくは、前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤は高尿酸血症又は痛風の予防又は改善に用いられる。

本発明によれば、天然物由来の有効成分を含有し、安全性に優れた血中尿酸値低減剤とキサンチンオキシダーゼ阻害剤を提供することができる。

ケールを投与したラットにおける、血清中尿酸値の変化を表すグラフである。ケールを投与したラットにおける、投与後１３日の血清中尿酸値を表すグラフである。ケール抽出物のキサンチンオキシダーゼ阻害活性を調べた結果を表すグラフである。

本発明の血中尿酸値低減剤とキサンチンオキシダーゼ阻害剤（以下、本発明の剤と総称することがある）は、アブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物を有効成分として含有するものである。

本発明におけるアブラナ属植物とは、アブラナ科（Brassicaceae）アブラナ属（Brassica）に属する植物を指す。アブラナ属植物の具体例としては、ケール、ブロッコリー、ブロッコリースプラウト、キャベツ、白菜、カリフラワー、メキャベツ、タイサイ、ミズナ、スグキナ、小松菜、からし菜、かぶ、等が挙げられる。これらのアブラナ属植物については、１種のみ用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。このうち、本発明ではアブラナ属植物として、少なくとも、ケールを用いることが好ましい。

本発明で用いるアブラナ属植物の植物体部位としては特に限定されず、例えば、葉、茎、根、種子、花蕾等を挙げることができる。これらの植物体部位については、１種のみ用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。本発明では葉と茎が好ましく用いられ、葉が特に好ましく用いられる。

本発明の剤に含まれるアブラナ属植物の形態としては特に限定されず、例えば、植物体部位（葉、茎など）の乾燥物（自然乾燥物、熱乾燥物、凍結乾燥物を含む）及びその粉砕物、を挙げることができる。その他、前記植物体部位を圧搾して得られる圧搾汁及び圧搾かす（搾りかす）を挙げることができる。これらの１又は２以上の形態からなるアブラナ属植物が、本発明の剤の有効成分となり得る。

本発明の剤に含まれるアブラナ属植物の抽出物としては特に限定されず、公知の抽出方法を用いて得ることができる。抽出対象としては、植物体部位そのものの他、前記した植物体部位の乾燥物や粉砕物が挙げられる。抽出に用いる溶媒は、水系溶媒でもよいし、非水系溶媒でもよい。抽出方法としては、浸漬、煎出、浸出、等が挙げられる。植物体部位等から抽出した一次抽出物をさらに精製した精製物を、有効成分たるアブラナ属植物の抽出物として用いてもよい。精製操作としては、脱塩、塩析、再結晶、クロマトグラフィー、膜分離、等が挙げられる。

本発明の剤の投与経路としては、経口投与が代表的である。その他、非経口投与の例としては、経皮投与が挙げられる。その他、静脈内、皮下、筋肉、腹腔内、脳室内、等の各投与経路が挙げられる。

本発明の剤の投与量については、対象疾患等（例えば、高尿酸血症・痛風）、投与目的（例えば、予防か改善か）、有効成分の種類、投与経路、投与対象者の年齢や体重、等に応じて適宜設定することができる。高尿酸血症・痛風の予防を目的とする場合には、例えば、本発明の剤を日常的かつ継続的に経口摂取することが好ましい。アブラナ属植物は食用として広く用いられているものが多く、食経験が豊富で安全性に優れている。そのため、本発明の剤は長期間継続して摂取するのに適している。

一例として、成人男性（体重６０ｋｇ）の場合には、１日あたり、ケールの葉２９０ｇ～８３０ｇ相当、好ましく３５０ｇ～７５０ｇ相当、より好ましくは４５０ｇ～６５０ｇ相当が摂取されるように、継続的に本発明の剤を摂取すればよい。これにより、健常人の場合は高尿酸血症・痛風の予防効果が期待できる。また、高尿酸血症・痛風を発症しているか兆候がある者の場合には、血中尿酸値の上昇が抑えられ、高尿酸血症・痛風の改善効果が期待できる。
なお、動物実験で得られた用量データから、ヒト等価用量（ＨＥＤ）を算出することができる。

本発明の剤におけるアブラナ属植物又はアブラナ属植物の抽出物の含有量については、前記した、対象疾患等（例えば、高尿酸血症・痛風）、投与目的（例えば、予防か改善か）、有効成分の種類、投与経路、投与対象者の年齢や体重、等に応じて適宜設定することができる。本発明の剤は、アブラナ属植物の植物体部位の前記乾燥物や粉砕物からなるものであってもよい。

本発明の剤は、例えば、医薬組成物、食品組成物、又は化粧品用組成物であり得る。好ましい実施形態では、本発明の剤は食品組成物である。

食品組成物の例としては各種の加工食品が挙げられ、さらに、健康食品、機能性食品、健康補助食品、栄養機能食品、特別用途食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品等の健康食品、が含まれる。その他、動物用サプリメントも含まれる。
本発明の剤を、他の飲食品に添加して機能性を付与する添加剤として用いることもできる。すなわち、本発明の剤を任意の飲食品に添加することにより、血中尿酸値低減効果やキサンチンオキシダーゼ阻害効果を付与することができる。この場合の添加対象としては特に限定はなく、全ての飲食品を対象とすることができる。

本発明の剤は、液体、半固体、固体のいずれの形態でもよい。医薬組成物とする場合の経口投与用の剤形としては、散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、ドロップ剤、等が挙げられる。サプリメント等の食品組成物についても同様である。

本発明の剤には、その性能を損なわない範囲内において、他の成分をさらに含有させてもよい。例えば、医薬品、食品、化粧品等に添加し得る各種の担体や基剤をさらに含有させてもよい。具体的には、賦形剤、安定化剤、結合剤、崩壊剤、溶解補助剤、張化剤、緩衝剤、等をさらに含有させてもよい。また、食品組成物とする場合には、糖類（ショ糖、果糖、乳糖、糖アルコールなど）、アミノ酸類、酸類（クエン酸、酒石酸など）、ビタミン類（ビタミンＣなど）、増粘剤、色素、香料、等をさらに含有させてもよい。

以下、実施例をもって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。

本実施例では、ケールを摂取させたラットにおける血中尿酸値の変化を調べた。

（１）試験方法
Ｗｉｓｔｅｒラット（６週齢）を、コントロール群５匹とケール投与群５匹の２群に群分けを行った。２群とも予備飼育として標準食（ＡＩＮ９３Ｇ）の自由摂取下で１週間飼育を行った後に、試験飼料としてコントロール群には高尿酸誘導食を、ケール投与群にはケール（商品名「こいあおな」（登録商標）、日本製粉株式会社）の葉の乾燥粉末を添加した高尿酸誘導食（高尿酸誘導食＋ケール）を自由摂取させた。
各群に投与した飼料の栄養成分を表１に示す。すなわち、各飼料の栄養成分は、ほぼ同等であった。

各飼料投与から０、１、４、７、１０、１３日後に採血し、血清を採取した。除タンパク処理として、２０μＬの血清に２００μＬの０．３ｍｏｌ／Ｌの過塩素酸を加えた。氷上で３０分静置した後、１００００ｒｐｍで１０分遠心し、上清を回収した。２００μＬの上清に同量の０．２ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム水溶液を加え、Ｃ１８逆相カラムを用いたＨＰＬＣに供した。

＜ＨＰＬＣ条件＞
・カラム：Inertsil ODS-3、粒子径4μm、内径4.6mm、長さ250mm（ジーエルサイエンス社）
・溶離液：Ａ：７４ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ２．２）、Ｂ：メタノール
Ａ：Ｂ＝９８：２
・カラム温度：４０℃
・検出波長：２８４ｎｍ

（２）結果
結果を図１、図２に示す。図１は血清中尿酸値の変化を表すグラフであり、縦軸は血清中尿酸値変化量（ｍｇ／ｄＬ）、横軸は飼育日数（日）である。○はケール投与群、■はコントロール群であり、各プロットとも平均値±標準誤差で表してある。図２は投与後１０日の血清中尿酸値を表すグラフである。
図１、図２に示すように、ケール投与群（高尿酸誘導食＋ケール）はコントロール群（高尿酸誘導食）に比べて、１日、１０日、１３日後において有意に低い値を示した（Ｍａｎｎ－ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定にて、１日目と１３日目：ｐ＜０．０５、１０日目：ｐ＜０．０１）。以上のことから、ケールの植物体部位が血中尿酸値低減効果を有することが明らかとなった。

本実施例では、ケール抽出物が有するキサンチンオキシダーゼ阻害活性を調べた。

（１）ケール抽出物の調製
ケールの葉を凍結乾燥し、ケール凍結乾燥粉末を得た。１００℃で３０分加熱したケール凍結乾燥粉末２ｇに水を２０ｍＬ加え、１時間振とうした。さらにヘキサンを２０ｍＬ加えて１時間振とうした後、遠心分離を行い、水層とヘキサン層に分離した。水層を採取し、終濃度９０％となるようにエタノールを加えてエタノール沈殿を行った。遠心分離して上清を回収して乾固し、水に溶解した。この溶解液をＣ１８固相抽出カラムに通し、吸着されずに出てきたフロースルー液を乾固し、ケール水抽出画分（ケール抽出物）を得た。下記試験に供するサンプルとして、１０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬの３種類の濃度のサンプルを調製した。

（２）試験方法
７２０μＬの０．１Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．５）、３５２μＬの精製水、４８μＬのサンプルを混合した。さらに０．１Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．５）に溶解した０．０４ｕｎｉｔ／ｍＬ牛ミルク由来キサンチンオキシダーゼ８０μＬを加え、３７℃で１０分間インキュベートした。０．１ｍＭキサンチンを１２００μＬ加え、３７℃で３０分インキュベートし酵素反応を行った。２００μＬの１Ｎ塩酸を加え、反応を停止させた。反応液を実施例１と同条件のＨＰＬＣに供し、尿酸値を測定した。キサンチンオキシダーゼ阻害活性は、水（コントロール）を添加した場合に生成した尿酸を１００としたときの、サンプル（ケール水抽出画分）を添加した場合に生成した尿酸の割合で評価した。同時に、ケール水抽出画分に代えてアロプリノール（公知のキサンチンオキシダーゼ阻害剤）を用いて同様の操作を行い、反応系が正常に機能していることを確認した。

（３）結果
図３に結果を示す。図３の縦軸はキサンチンオキシダーゼ相対活性（％）を表す。すなわち、ケール水抽出画分にキサンチンオキシダーゼ阻害活性が認められ、さらに濃度依存性が認められた。以上のことから、ケールの植物体部位がキサンチンオキシダーゼ阻害作用を有することが明らかとなった。

Claims

ケールの抽出物を有効成分として含有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法であって、
ケールの葉の凍結乾燥粉末を１００℃で３０分加熱した後、水を加えて１時間振とうし、さらにヘキサンを加えて振とうし、遠心分離を行った後の水層を採取し、
採取した前記水層に、終濃度９０％となるようにエタノールを加えてエタノール沈殿を行って、上清を回収し、
回収した前記上清をＣ１８固相抽出カラムに通し、吸着しないフロースルー液をケール水抽出画分として取得し、
前記ケール水抽出画分を前記ケールの抽出物として用いる、
キサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。
前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が経口投与されるものである請求項１に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。
前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が食品組成物である請求項１又は２に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。
前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が高尿酸血症又は痛風の予防又は改善に用いられるものである請求項１～３のいずれかに記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。