JP7213019B2 - 血中尿酸値低減剤、並びに、キサンチンオキシダーゼ阻害剤 - Google Patents
血中尿酸値低減剤、並びに、キサンチンオキシダーゼ阻害剤 Download PDFInfo
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Description
なお、動物実験で得られた用量データから、ヒト等価用量(HED)を算出することができる。
本発明の剤を、他の飲食品に添加して機能性を付与する添加剤として用いることもできる。すなわち、本発明の剤を任意の飲食品に添加することにより、血中尿酸値低減効果やキサンチンオキシダーゼ阻害効果を付与することができる。この場合の添加対象としては特に限定はなく、全ての飲食品を対象とすることができる。
Wisterラット(6週齢)を、コントロール群5匹とケール投与群5匹の2群に群分けを行った。2群とも予備飼育として標準食(AIN93G)の自由摂取下で1週間飼育を行った後に、試験飼料としてコントロール群には高尿酸誘導食を、ケール投与群にはケール(商品名「こいあおな」(登録商標)、日本製粉株式会社)の葉の乾燥粉末を添加した高尿酸誘導食(高尿酸誘導食+ケール)を自由摂取させた。
各群に投与した飼料の栄養成分を表1に示す。すなわち、各飼料の栄養成分は、ほぼ同等であった。
・カラム:Inertsil ODS-3、粒子径4μm、内径4.6mm、長さ250mm(ジーエルサイエンス社)
・溶離液:A:74mM リン酸バッファー(pH2.2)、B:メタノール
A:B=98:2
・カラム温度:40℃
・検出波長:284nm
結果を図1、図2に示す。図1は血清中尿酸値の変化を表すグラフであり、縦軸は血清中尿酸値変化量(mg/dL)、横軸は飼育日数(日)である。○はケール投与群、■はコントロール群であり、各プロットとも平均値±標準誤差で表してある。図2は投与後10日の血清中尿酸値を表すグラフである。
図1、図2に示すように、ケール投与群(高尿酸誘導食+ケール)はコントロール群(高尿酸誘導食)に比べて、1日、10日、13日後において有意に低い値を示した(Mann-WhitneyのU検定にて、1日目と13日目:p<0.05、10日目:p<0.01)。以上のことから、ケールの植物体部位が血中尿酸値低減効果を有することが明らかとなった。
ケールの葉を凍結乾燥し、ケール凍結乾燥粉末を得た。100℃で30分加熱したケール凍結乾燥粉末2gに水を20mL加え、1時間振とうした。さらにヘキサンを20mL加えて1時間振とうした後、遠心分離を行い、水層とヘキサン層に分離した。水層を採取し、終濃度90%となるようにエタノールを加えてエタノール沈殿を行った。遠心分離して上清を回収して乾固し、水に溶解した。この溶解液をC18固相抽出カラムに通し、吸着されずに出てきたフロースルー液を乾固し、ケール水抽出画分(ケール抽出物)を得た。下記試験に供するサンプルとして、10mg/mL、100mg/mL、500mg/mLの3種類の濃度のサンプルを調製した。
720μLの0.1Mリン酸カリウムバッファー(pH7.5)、352μLの精製水、48μLのサンプルを混合した。さらに0.1Mリン酸カリウムバッファー(pH7.5)に溶解した0.04unit/mL牛ミルク由来キサンチンオキシダーゼ80μLを加え、37℃で10分間インキュベートした。0.1mMキサンチンを1200μL加え、37℃で30分インキュベートし酵素反応を行った。200μLの1N塩酸を加え、反応を停止させた。反応液を実施例1と同条件のHPLCに供し、尿酸値を測定した。キサンチンオキシダーゼ阻害活性は、水(コントロール)を添加した場合に生成した尿酸を100としたときの、サンプル(ケール水抽出画分)を添加した場合に生成した尿酸の割合で評価した。同時に、ケール水抽出画分に代えてアロプリノール(公知のキサンチンオキシダーゼ阻害剤)を用いて同様の操作を行い、反応系が正常に機能していることを確認した。
図3に結果を示す。図3の縦軸はキサンチンオキシダーゼ相対活性(%)を表す。すなわち、ケール水抽出画分にキサンチンオキシダーゼ阻害活性が認められ、さらに濃度依存性が認められた。以上のことから、ケールの植物体部位がキサンチンオキシダーゼ阻害作用を有することが明らかとなった。
Claims (4)
- ケールの抽出物を有効成分として含有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法であって、
ケールの葉の凍結乾燥粉末を100℃で30分加熱した後、水を加えて1時間振とうし、さらにヘキサンを加えて振とうし、遠心分離を行った後の水層を採取し、
採取した前記水層に、終濃度90%となるようにエタノールを加えてエタノール沈殿を行って、上清を回収し、
回収した前記上清をC18固相抽出カラムに通し、吸着しないフロースルー液をケール水抽出画分として取得し、
前記ケール水抽出画分を前記ケールの抽出物として用いる、
キサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。 - 前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が経口投与されるものである請求項1に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。
- 前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が食品組成物である請求項1又は2に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。
- 前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が高尿酸血症又は痛風の予防又は改善に用いられるものである請求項1~3のいずれかに記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の製造方法。
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Non-Patent Citations (1)
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松仁会医学誌, 2000, Vol.39 No.2, p.159-163 |
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