JP7199656B2

JP7199656B2 - Method for evaluating attention-deficit/hyperactivity disorder or attention-deficit/hyperactivity disorder, method for assisting evaluation, and data acquisition method for evaluating attention-deficit/hyperactivity disorder or attention-deficit/hyperactivity disorder

Info

Publication number: JP7199656B2
Application number: JP2018229821A
Authority: JP
Inventors: 昌樹山口; 伸介鷲塚; 大明篠山; 崇泰関根; 秀津久井
Original assignee: Japan Tobacco Inc; Shinshu University NUC
Current assignee: Japan Tobacco Inc; Shinshu University NUC
Priority date: 2018-12-07
Filing date: 2018-12-07
Publication date: 2023-01-06
Anticipated expiration: 2038-12-07
Also published as: JP2020091242A

Description

本発明は、評価対象が注意欠如・多動症（ＡｔｔｅｎｔｉｏｎＤｅｆｉｃｉｔ－ＨｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙＤｉｓｏｒｄｅｒ：ＡＤＨＤ）に罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する方法、及び評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価するためのデータを取得する方法に関する。 The present invention provides a method for evaluating whether or not an evaluation subject suffers from Attention Deficit-Hyperactivity Disorder (ADHD) or whether it is likely to develop, and whether an evaluation subject suffers from ADHD. It relates to a method of obtaining data for evaluating whether or not there is a possibility of developing the disease.

注意欠如・多動症（注意欠如・多動症障害ともいう。以下、「ＡＤＨＤ」と称することもある。）は、衝動性、過活動性又は不注意などの症状を特徴とし、小児期及びその後の人生において有意な障害を引き起こし得る神経発達障害である。過活動性はＡＤＨＤを有する小児によく見られるが、成人期には消失する傾向があるものの、ＡＤＨＤを有する小児の過半数は生涯にわたって、ある程度の不注意症状を有し続ける。 Attention-deficit/hyperactivity disorder (also known as attention-deficit/hyperactivity disorder, hereinafter sometimes referred to as "ADHD") is characterized by symptoms such as impulsivity, hyperactivity, or inattention, and is It is a neurodevelopmental disorder that can cause significant disability. Hyperactivity is common in children with ADHD, but although it tends to disappear in adulthood, the majority of children with ADHD continue to have some level of inattention throughout their lives.

ＡＤＨＤは遺伝的要因が７６％とされるが、分離が洗練されておらず家庭という環境要因が含まれてしまっているため、遺伝的要因をもって容易に診断することはできない。 It is said that 76% of ADHD is caused by genetic factors, but since the separation is not refined and environmental factors such as family are included, it cannot be easily diagnosed by genetic factors.

ＡＤＨＤは、７歳以前（ＤＳＭ－Ｖを用いるなら１２歳以前）から発症し、少なくとも６か月以上継続しており、通常生活に支障があるときに診断されている。診断は、一般的に多くの精神障害と同様に問診等で行われる。診断を補助するための評価尺度としてＤＳＭ－Ｖがある。なお、ＤＳＭ－Ｖでは、ＭＲＩや血液検査等の生物学的データは診断項目としていない。そのため、誤診も多く、客観的な指標が必要とされている。 ADHD begins before age 7 (before age 12 using DSM-V), has been ongoing for at least 6 months, and is diagnosed when it interferes with normal living. Diagnosis is generally made through interviews and the like, as with many mental disorders. There is DSM-V as a rating scale for assisting diagnosis. DSM-V does not include biological data such as MRI and blood tests as diagnostic items. Therefore, there are many misdiagnoses, and an objective index is required.

これまでに、問診以外の方法として、ディスプレイを用いて評価する方法（例えば、特許文献１参照）、一塩基多型をマーカーとして利用する方法（例えば、特許文献２参照）、Ｐｍｃｈ遺伝子をマーカーとして利用する方法（例えば、特許文献３参照）、抹消皮膚温度を測定し、ＡＤＨＤを示す値を測定する方法（例えば、特許文献４参照）など、様々な方法が提案されている。
しかしながら、臨床実施が可能な技術は未だ提供されていないという問題がある。 So far, as methods other than medical interview, a method of evaluation using a display (see, for example, Patent Document 1), a method of using a single nucleotide polymorphism as a marker (see, for example, Patent Document 2), and a Pmch gene as a marker A variety of methods have been proposed, including a method of using (see, for example, Patent Document 3) and a method of measuring peripheral skin temperature and measuring a value indicative of ADHD (see, for example, Patent Document 4).
However, there is a problem that a technology that can be clinically implemented has not yet been provided.

また、現在までのところ、ＡＤＨＤの根治法はなく、行動療法と薬物療法との組合せにより症状を管理することが行われている。薬物療法では、中枢神経刺激薬の投薬が広く使用されている。
しかしながら、薬物療法には有害作用の危険も伴うため、不要な投与は避け必要最低限の使用にとどめることが理想的である。
そのため、不要な投薬の回避という点からも、ＡＤＨＤに罹患しているか否かを正確に診断することは非常に重要である。 To date, there is no cure for ADHD, and symptoms are managed through a combination of behavioral therapy and drug therapy. Medications of central nervous system stimulants are widely used in drug therapy.
However, since drug therapy carries the risk of adverse effects, it is ideal to avoid unnecessary administration and limit its use to the minimum necessary.
Therefore, it is very important to accurately diagnose ADHD from the viewpoint of avoiding unnecessary medication.

したがって、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価することができる新たな技術の速やかな提供が強く求められているのが現状である。 Therefore, the current situation is that there is a strong demand for prompt provision of a new technique that can evaluate with high accuracy whether or not a person is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD.

特表２０１８－５０３４１０号公報Japanese Patent Publication No. 2018-503410 特開２０１３－６６４５４号公報JP 2013-66454 A 特開２０１０－４８４８号公報Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 2010-4848 特開２００３－３３３５５号公報JP-A-2003-33355

本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価することができる評価方法、及びＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価するためのデータを取得する方法を提供することを目的とする。 SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to solve the above-mentioned conventional problems and to achieve the following objects. That is, the present invention provides an evaluation method capable of evaluating with high accuracy whether or not ADHD is afflicted or likely to be developed, and whether or not ADHD is afflicted or likely to be developed. It is an object of the present invention to provide a method of acquiring data for evaluating with high accuracy whether or not there is

本発明者らは、前記目的を達成するべく鋭意検討を行った結果、ＡＤＨＤの患者由来の試料中の特定のサイトカインの量が、健常者由来の試料中の前記サイトカインの量と比べて有意に異なることを知見した。 The present inventors have made intensive studies to achieve the above object, and as a result, the amount of a specific cytokine in a sample derived from an ADHD patient is significantly higher than the amount of the cytokine in a sample derived from a healthy subject. I found different.

本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を指標として、注意欠如・多動症（ＡＤＨＤ）に罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する評価工程を含むことを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する方法である。
＜２＞評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を測定する測定工程を含むことを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価するためのデータを取得する方法である。 The present invention is based on the above findings by the present inventors, and means for solving the above problems are as follows. Namely
<1> Characterized by including an evaluation step of evaluating whether or not attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD) is afflicted or likely to develop, using the amount of cytokine in the sample derived from the evaluation subject as an index. This is a method for evaluating whether or not an evaluation subject is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD.
<2> To evaluate whether an evaluation subject suffers from or is likely to develop ADHD, characterized by including a measurement step of measuring the amount of cytokine in a sample derived from the evaluation subject. It is a method to acquire the data of

本発明によれば、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価することができる評価方法、及びＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価するためのデータを取得する方法を提供することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to solve the above-mentioned problems in the conventional art, achieve the above-mentioned objects, and evaluate with high accuracy whether or not the person is suffering from ADHD or has the possibility of developing it. It is possible to provide an evaluation method that can be used, and a method of acquiring data for highly accurate evaluation of whether a person has ADHD or is likely to develop ADHD.

図１は、実施例１で採取した健常者群及びＡＤＨＤ患者群の唾液中において、有意差があったサイトカインの濃度平均値を示すグラフである。なお、実線は健常者群から採取した唾液に含まれるサイトカイン濃度を、破線はＡＤＨＤ患者群から採取した唾液に含まれるサイトカイン濃度を示す。FIG. 1 is a graph showing the average concentration values of cytokines showing significant differences in the saliva of the healthy subject group and the ADHD patient group collected in Example 1. FIG. The solid line indicates the cytokine concentration in the saliva sampled from the healthy subject group, and the dashed line indicates the cytokine concentration in the saliva sampled from the ADHD patient group.

（ＡＤＨＤの評価方法）
本発明の評価対象が注意欠如・多動症（ＡＤＨＤ）に罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する方法（以下、「ＡＤＨＤの評価方法」と称することがある。）は、評価工程を少なくとも含み、必要に応じて更に、測定工程等のその他の工程を含む。 (ADHD evaluation method)
A method for evaluating whether or not an evaluation subject of the present invention is suffering from attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD) or has a possibility of developing it (hereinafter sometimes referred to as "ADHD evaluation method"). includes at least an evaluation step and, if necessary, further includes other steps such as a measurement step.

ＡＤＨＤは、衝動性、過活動性又は不注意などの症状を特徴とし、小児期及びその後の人生において有意な障害を引き起こし得る神経発達障害である。 ADHD is a neurodevelopmental disorder characterized by symptoms such as impulsivity, hyperactivity, or inattentiveness, which can lead to significant disability in childhood and later in life.

＜評価工程＞
前記ＡＤＨＤの評価方法における評価工程は、評価対象由来の試料におけるサイトカインの量（以下、「濃度」と称することもある。）を指標として、前記評価対象が、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する工程である。
本発明において、前記ＡＤＨＤに罹患しているか否かには、ＡＤＨＤの症状の程度も含まれる。 <Evaluation process>
In the evaluation step in the ADHD evaluation method, the amount of cytokine in a sample derived from the evaluation subject (hereinafter sometimes referred to as "concentration") is used as an index to determine whether the subject is suffering from ADHD or It is a step of evaluating whether or not there is a possibility of developing the disease.
In the present invention, the degree of symptoms of ADHD is also included in whether or not the person is suffering from ADHD.

前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量は、後述する測定工程で測定されたものであってもよいし、別途測定されたものであってもよい。
前記サイトカインの量のデータの単位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、モル濃度、重量濃度、これらの濃度に任意の定数を加減乗除することで得られるものなどが挙げられる。 The amount of cytokine in the sample derived from the subject of evaluation may be measured in the measurement step described later, or may be measured separately.
The unit of the cytokine amount data is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. things, etc.

－評価対象－
前記評価対象としては、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かの評価が求められる対象であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記評価対象の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、ヒトであってもよいし、ヒト以外の動物であってもよい。
前記評価対象の性別としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、男であってもよいし、女であってもよい。
前記評価対象の年齢としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、前記評価対象がヒトの場合、成人前であってもよいし、成人後であってもよいが、２０歳以下が好ましく、１５歳以下がより好ましく、５歳以上１５歳以下が特に好ましい。－Evaluation target－
The subject to be evaluated is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the purpose, as long as the subject requires evaluation of whether or not the subject is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD.
The type of the subject to be evaluated is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose, and may be a human or an animal other than a human.
The gender of the subject to be evaluated is not particularly limited, can be appropriately selected according to the purpose, and may be male or female.
The age of the subject to be evaluated is also not particularly limited, and can be appropriately selected according to the purpose. For example, when the subject to be evaluated is a human, it may be before adulthood or after adulthood, but is preferably 20 years old or younger, more preferably 15 years old or younger, and particularly preferably 5 to 15 years old. .

－評価対象由来の試料－
前記評価対象由来の試料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、血液、血清、脳脊髄液、唾液、咽頭ぬぐい液、汗、尿、涙、リンパ液、***、腹水、母乳などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
これらの中でも、血液、唾液が好ましく、非侵襲的に得ることができる点で、唾液がより好ましい。 -Sample derived from evaluation target-
The sample derived from the subject to be evaluated is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. , ascites, and breast milk. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.
Among these, blood and saliva are preferred, and saliva is more preferred because it can be obtained noninvasively.

前記試料の調製方法（以下、「採取方法」と称することもある。）としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
例えば、前記試料が血液の場合は、例えば、通常のシリンジを用いて採血する方法などが挙げられる。
また、前記試料が、唾液の場合は、例えば、唾液を直接採取する方法、サリベットや市販の採取用器具を用いる方法などが挙げられる。 The sample preparation method (hereinafter also referred to as “collection method”) is not particularly limited, and a known method can be appropriately selected.
For example, when the sample is blood, a method of collecting blood using an ordinary syringe can be used.
Moreover, when the sample is saliva, for example, a method of directly collecting saliva, a method of using a salivet or a commercially available collecting device, and the like can be used.

前記評価対象由来の試料の採取時期（以下、「採取時間帯」と称することもある。）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、後述する評価工程において比較する対象から試料を採取した時期と同程度の時期とすることが好ましい。特に、前記試料が唾液の場合には、唾液中に含まれるサイトカインの量の日内変動が大きいことがあるため、一日のうち一定の時間帯に行うことが好ましい。 The collection time of the sample derived from the evaluation object (hereinafter sometimes referred to as "collection time period") is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. It is preferable that the time period is the same as the time period when the sample was collected from the subject to be tested. In particular, when the sample is saliva, the amount of cytokine contained in saliva may vary greatly during the day, so it is preferable to perform the test at a certain time of the day.

前記評価対象由来の試料は、必要に応じて、希釈などの処理が施されてもよい。 The sample derived from the subject of evaluation may be subjected to processing such as dilution, if necessary.

－サイトカイン－
前記サイトカインとは、細胞シグナリングにおいて重要な役割を果たす、比較的小型のタンパク質（およそ５～２０ｋＤａ）の総称である。
前記評価工程に用いるサイトカインとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、インターロイキン；リンフォカイン；ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅｄｏｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ、ｎｏｒｍａｌＴｃｅｌｌｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｎｄｓｅｃｒｅｔｅｄ）等のケモカイン；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）等の造血因子；上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）等の細胞増殖因子；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）、リンフォトキシン（ＴＮＦ－β）等の細胞障害因子；レプチン、ＴＮＦ－α等のアディポカイン；神経成長因子（ＮＧＦ）等の神経栄養因子などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。 -Cytokine-
Said cytokine is a general term for relatively small proteins (approximately 5-20 kDa) that play an important role in cell signaling.
Cytokines used in the evaluation step are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. For example, interleukins; lymphokines; ; Hematopoietic factors such as colony stimulating factor (CSF), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), erythropoietin (EPO); epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF), platelet-derived growth factor (PDGF) ), hepatocyte growth factor (HGF), transforming growth factor (TGF) and other cell growth factors; tumor necrosis factor (TNF-α), lymphotoxin (TNF-β) and other cytotoxic factors; leptin, TNF- adipokines such as α; neurotrophic factors such as nerve growth factor (NGF); These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.

前記サイトカインの中でも、より評価の精度を高めることができる点で、インターロイキン－１受容体アンタゴニストタンパク質（ＩＬ－１ｒａ）、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、インターロイキン－１２ｐ７０（ＩＬ－１２ｐ７０）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、及び血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）からなる群から選択される１種以上が好ましく、前記群から選択される２種以上がより好ましく、ＩＬ－１ｒａ及びＶＥＧＦの２種が特に好ましい。 Among the cytokines, interleukin-1 receptor antagonist protein (IL-1ra), interleukin-1β (IL-1β), interleukin-7 (IL-7), in that the accuracy of evaluation can be further improved. , interleukin-8 (IL-8), interleukin-12 p70 (IL-12 p70), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), interferon-γ (IFN-γ), and vascular endothelial growth factor (VEGF ) are preferred, two or more are more preferred, and two of IL-1ra and VEGF are particularly preferred.

－評価－
前記評価の方法としては、評価対象が、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価することができれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 -evaluation-
The evaluation method is not particularly limited as long as it is possible to evaluate whether the subject is suffering from ADHD or whether it is likely to develop ADHD, and can be appropriately selected according to the purpose. can.

前記評価の方法としては、例えば、前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量と、基準値とを比較する処理を含む方法が挙げられる。 The method of evaluation includes, for example, a method including a process of comparing the amount of cytokine in the sample derived from the subject of evaluation with a reference value.

前記基準値としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、（Ｉ）健常個体由来の試料におけるサイトカインの量（以下、「正常値」と称することがある。）に基づく値、（ＩＩ）ＡＤＨＤ患者由来の試料におけるサイトカインの量（以下、「疾患値」と称することがある。）に基づく値などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記ＡＤＨＤ患者は、典型的なＡＤＨＤ患者であってもよいし、軽度、中度、又は重度のＡＤＨＤ患者であってもよい。 The reference value is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. and (II) a value based on the amount of cytokine in a sample derived from an ADHD patient (hereinafter sometimes referred to as "disease value"). These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.
The ADHD patient may be a typical ADHD patient, or a mild, moderate or severe ADHD patient.

前記（Ｉ）正常値に基づく値としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、スクリーニング検査のように、疾患群を見逃さないことを最優先とする場合には、特異度よりも感度を優先し、前記正常値を参考に、閾値（以下、「カットオフ値」と称することがある。）を前記正常値又は前記正常値に近い値に設定するなどが挙げられる。 The value based on the (I) normal value is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. , Sensitivity is prioritized over specificity, and with reference to the normal value, the threshold (hereinafter sometimes referred to as "cutoff value") is set to the normal value or a value close to the normal value. be done.

前記（ＩＩ）疾患値に基づく値としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＡＤＨＤの症状の程度を評価する場合には、前記疾患値を参考に、閾値を前記疾患値又は前記疾患値に近い値に設定するなどが挙げられる。 The value based on the (II) disease value is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. is set to the disease value or a value close to the disease value.

前記処理では、前記基準値が（Ｉ）正常値に基づく値の場合には、前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量が、前記正常値に基づく値より少ない場合に、評価対象が、ＡＤＨＤに罹患している又はＡＤＨＤを発症する可能性を有すると評価することができる。
前記健常個体は、前記評価対象と同一種類の個体であって、年齢が近しい個体が好ましい。 In the treatment, when the reference value is (I) a value based on a normal value, the amount of cytokine in the sample derived from the evaluation subject is less than the value based on the normal value, the evaluation subject has ADHD It can be assessed as having or likely to develop ADHD.
The healthy individual is preferably the same type of individual as the subject of evaluation and is close in age.

また、前記基準値が（ＩＩ）疾患値に基づく値の場合には、前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量が、前記疾患値に基づく値と同量以下の場合に、評価対象が、ＡＤＨＤに罹患している又はＡＤＨＤを発症する可能性を有すると評価することができる。
前記ＡＤＨＤ患者は、前記評価対象と同一種類の個体であって、年齢が近しい患者が好ましい。 Further, when the reference value is (II) a value based on the disease value, if the amount of cytokine in the sample derived from the evaluation subject is equal to or less than the value based on the disease value, the evaluation subject has ADHD or likely to develop ADHD.
The ADHD patient is preferably the same type of individual as the subject of evaluation and is close in age.

前記基準値は、前記ＡＤＨＤの評価方法を実施する際に併せて測定した試料におけるサイトカインの量に基づいて設定したものを用いてもよいし、既に測定された試料におけるサイトカインの量に基づいて設定したものを用いてもよい。 The reference value may be set based on the amount of cytokine in the sample measured together with the ADHD evaluation method, or may be set based on the amount of cytokine in the sample that has already been measured. You can use what you have.

また、前記評価の方法としては、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価することが可能な評価式を用いる方法も挙げられる。 Moreover, as the method of evaluation, there is a method using an evaluation formula capable of evaluating whether or not a person is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD.

例えば、前記サイトカインの濃度のデータに基づいて、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価することが可能な評価式に前記サイトカインの濃度のデータを代入して、前記評価対象が、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する方法が挙げられる。ここで、前記評価式には、前記サイトカインの濃度値が代入される変数が含まれている。前記変数の数としては、少なくとも１つであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、より評価の精度を高めることができる点で、少なくとも２つが好ましい。即ち、２種以上のサイトカインの量のデータに基づいてＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価することが可能な評価式に、前記２種以上のサイトカインの量のデータを代入することを含み、前記評価式には、前記２種以上のサイトカインの量のデータが代入される少なくとも２つの変数が含まれていることが好ましい。
前記サイトカインは、上記－サイトカイン－の項目に記載したものと同様である。 For example, by substituting the cytokine concentration data into an evaluation formula capable of evaluating whether or not ADHD is afflicted or likely to develop, based on the cytokine concentration data. , a method of evaluating whether or not the subject is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD. Here, the evaluation formula includes variables into which the cytokine concentration values are substituted. The number of variables is not particularly limited as long as it is at least one, and can be appropriately selected according to the purpose. However, at least two is preferable in that the accuracy of evaluation can be further improved. That is, an evaluation formula capable of evaluating whether ADHD is afflicted or likely to develop based on the data of the amount of the two or more cytokines is added to the above-mentioned two or more cytokines. It is preferable that the evaluation formula includes at least two variables into which the amount data of the two or more cytokines are substituted.
Said cytokines are the same as those described in the item -Cytokines- above.

前記評価式としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ロジスティック回帰式、分数式、線形判別式、重回帰式、サポートベクターマシンで作成された式、マハラノビス距離法で作成された式、正準判別分析で作成された式、決定木で作成された式などが挙げられる。これにより、ＡＤＨＤの状態を知る上で参考となり得る情報の更なる信頼性向上を実現することができる。 The evaluation formula is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose. Examples include formulas created by method, formulas created by canonical discriminant analysis, and formulas created by decision trees. As a result, it is possible to further improve the reliability of information that can be used as a reference when knowing the state of ADHD.

また、評価式として採用する式とは、一般に多変量解析で用いられる式の形式を意味するものであり、例えば、分数式、重回帰式、多重ロジスティック回帰式、線形判別関数、マハラノビス距離、正準判別関数、サポートベクターマシン、決定木、異なる形式の式の和で示されるような式などが挙げられる。ここで、重回帰式、多重ロジスティック回帰式、正準判別関数においては各変数に係数及び定数項が付加されるが、この係数及び定数項は、好ましくは実数であれば構わず、より好ましくは、データから前記の各種分類を行うために得られた係数及び定数項の９９％信頼区間の範囲に属する値であれば構わず、さらに好ましくは、データから前記の各種分類を行うために得られた係数及び定数項の９５％信頼区間の範囲に属する値であれば構わない。また、各係数の値及びその信頼区間は、それを実数倍したものでもよく、定数項の値及びその信頼区間は、それに任意の実定数を加減乗除したものでもよい。ロジスティック回帰、線形判別、重回帰分析などの表示式を評価式として用いる場合、表示式の線形変換（定数の加算、定数倍）及び単調増加（減少）の変換（例えばｌｏｇｉｔ変換など）は評価性能を変えるものではなく変換前と同等であるので、この表示式には、これらの変換が行われた後のものも含まれる。 In addition, the formula adopted as the evaluation formula means the formula format generally used in multivariate analysis, such as fractional formula, multiple regression formula, multiple logistic regression formula, linear discriminant function, Mahalanobis distance, positive These include quasi-discriminant functions, support vector machines, decision trees, and formulas such as sums of different forms of formulas. Here, a coefficient and a constant term are added to each variable in the multiple regression equation, the multiple logistic regression equation, and the canonical discriminant function. , Any value within the range of the 99% confidence interval of the coefficient and constant term obtained for performing the various classifications from the data, more preferably, the value obtained for performing the various classifications from the data Any value that falls within the range of the 95% confidence interval of the coefficient and the constant term may be used. Also, the value of each coefficient and its confidence interval may be obtained by multiplying it by a real number, and the value of the constant term and its confidence interval may be obtained by adding, subtracting, multiplying, or dividing it by an arbitrary real constant. When using display formulas such as logistic regression, linear discriminant, multiple regression analysis, etc. as evaluation formulas, linear transformation (addition of constant, constant multiplication) and monotonically increasing (decreasing) conversion (e.g. logit transformation) of the display formula are evaluated performance This representation includes the expression after these transformations have been made, since it is equivalent to before the transformation rather than changing .

例えば、２種のサイトカインの濃度データを用いて評価する場合、（サイトカインＡの濃度）＋（サイトカインＢの濃度）という式が挙げられる。これによれば、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かの評価を具体的な数値として定量化することができる。また、前もって、様々なサイトカインとＡＤＨＤ患者との相関を調べて得られた結果に基づき、サイトカインの種類ごとに重みづけを行ってもよい。さらには、（評価対象の各サイトカインの濃度データの値）／（健常者の各サイトカインの濃度データの平均値）を用いて（あるいは、その値に一定の重みづけをして）加算した値によって評価を行ってもよい。また、年齢、性別、人種、ＡＤＨＤ遺伝的背景の有無などによって、サイトカイン濃度の値を補正してもよい。これらの補正の程度や補正の有無は、サイトカインの種類によって変更してもよい。以上のようにして得られた評価の値を一般的な人の値（例えば日本人の平均値）と比較をして、その倍率によってＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価してもよい。 For example, when evaluating using concentration data of two types of cytokines, the formula (concentration of cytokine A)+(concentration of cytokine B) can be used. According to this, it is possible to quantify the evaluation of whether or not a person is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD as a specific numerical value. Moreover, each type of cytokine may be weighted based on the results obtained by examining the correlation between various cytokines and ADHD patients in advance. Furthermore, by using (value of concentration data of each cytokine to be evaluated) / (average value of concentration data of each cytokine of healthy subjects) (or weighting the value with a certain weight) and adding may be evaluated. In addition, the cytokine concentration value may be corrected according to age, sex, race, presence or absence of ADHD genetic background, and the like. The degree of correction and the presence/absence of correction may be changed depending on the type of cytokine. The evaluation value obtained as described above is compared with the value of general people (e.g., the average value of Japanese people), and depending on the magnification, whether or not they are suffering from ADHD or have the possibility of developing It may be evaluated whether

前記濃度のデータを変数として用いるサイトカインの種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、より評価の精度を高めることができる点で、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される２種以上が好ましく、ＩＬ－１ｒａ及びＶＥＧＦの２種がより好ましい。
また、前記サイトカインを抽出するにあたり、例えば、ＲＯＣ曲線（ＲｅｃｅｉｖｅｒＯｐｅｒａｔｏｒａｔｉｎｇＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｃｕｒｖｅ；受信者動作特性曲線）のＡＵＣ（ＡｒｅａＵｎｄｅｒｔｈｅＣｕｒｖｅ）などを用いることができる。なお、本発明においては、例えば、変数減少法によってＡＵＣが最大となるサイトカインの組合せを求めることができる。 The types of cytokines for which the concentration data are used as variables are not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. , IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF are preferred, and two or more of IL-1ra and VEGF are more preferred.
Further, in extracting the cytokine, for example, AUC (Area Under the Curve) of a ROC curve (Receiver Operating Characteristic curve) can be used. In the present invention, for example, a combination of cytokines that maximizes AUC can be determined by a regression method.

＜その他の工程＞
前記ＡＤＨＤの評価方法におけるその他の工程としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、測定工程、試料調製工程などが挙げられる。 <Other processes>
Other steps in the ADHD evaluation method are not particularly limited as long as they do not impair the effects of the present invention, and can be appropriately selected according to the purpose. Examples thereof include a measurement step and a sample preparation step.

＜＜測定工程＞＞
前記ＡＤＨＤの評価方法における測定工程は、前記評価対象由来の試料における前記サイトカインの量を測定する工程である。 <<Measurement process>>
The measuring step in the method for evaluating ADHD is a step of measuring the amount of the cytokine in the sample derived from the subject of evaluation.

－測定－
前記試料における前記サイトカインの量を測定する方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができ、例えば、タンパク質の量を測定する方法、ｍＲＮＡの量を測定する方法などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
なお、前記サイトカインのアミノ酸配列や塩基配列は、ＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）などの公共データベースを通じて容易に入手することができる。 -measurement-
The method for measuring the amount of the cytokine in the sample is not particularly limited, and a known method can be appropriately selected. Examples include a method for measuring the amount of protein and a method for measuring the amount of mRNA. be done. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.
The amino acid sequences and base sequences of the cytokines can be easily obtained through public databases such as GenBank (NCBI).

前記サイトカインのタンパク質の量を測定する方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができ、例えば、前記サイトカインを特異的に認識する抗体を用いて、免疫学的手法により測定する方法などが挙げられる。 The method for measuring the protein amount of the cytokine is not particularly limited, and a known method can be appropriately selected. For example, an immunological method using an antibody that specifically recognizes the cytokine. and methods to do so.

前記免疫学的手法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができ、例えば、抗体アレイ、フローサイトメトリー解析、放射性同位元素免疫測定法（ＲＩＡ法）、ＥＬＩＳＡ法（ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌ．７０：４１９－４３９（１９８０））、ドットブロット法、免疫核酸アッセイ法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが挙げられる。 The immunological technique is not particularly limited, and known methods can be appropriately selected. Enzymol., 70: 419-439 (1980)), dot blotting, immunonucleic acid assay, western blotting, immunohistochemical staining and the like.

前記ＥＬＩＳＡ法の具体例としては、マイクロプレートに標的サイトカインを固相化し、標識した当該サイトカインを認識する抗体を作用させる直接法、抗サイトカイン抗体を認識する標識二次抗体を用いる間接法、抗サイトカイン抗体を固相化し、さらに標識した抗サイトカイン抗体を用いるサンドイッチ法、抗サイトカイン抗体を固相化し、目的タンパク質および濃度があらかじめ分かっている酵素標識抗原を、同一マイクロプレート内で同時に反応させる競合法などが挙げられる。 Specific examples of the ELISA method include a direct method in which a target cytokine is immobilized on a microplate and a labeled antibody that recognizes the cytokine acts on it, an indirect method that uses a labeled secondary antibody that recognizes an anti-cytokine antibody, and an anti-cytokine method. Anti-cytokine antibodies are immobilized, followed by a sandwich method using a labeled anti-cytokine antibody, a competition method where an anti-cytokine antibody is immobilized, and the target protein and enzyme-labeled antigen whose concentration is known are simultaneously reacted in the same microplate, etc. is mentioned.

前記ｍＲＮＡの量を測定する方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができ、例えば、ＰＣＲ法、リアルタイムＰＣＲ法、ＤＮＡアレイ法、ノーザンブロット法などが挙げられる。 The method for measuring the amount of mRNA is not particularly limited, and a known method can be appropriately selected. Examples thereof include PCR method, real-time PCR method, DNA array method, Northern blot method, and the like.

前記試料における前記サイトカインの量は、市販されているサイトカイン量の測定キットを使用して測定することもできる。 The cytokine amount in the sample can also be measured using a commercially available cytokine amount measurement kit.

＜＜試料調製工程＞＞
前記ＡＤＨＤの評価方法における試料調製工程は、前記評価対象由来の試料を調製する工程であり、前記試料の種類に応じて、公知の方法を適宜選択することができる。 <<Sample preparation process>>
The sample preparation step in the method for evaluating ADHD is a step of preparing a sample derived from the subject to be evaluated, and a known method can be appropriately selected according to the type of the sample.

本発明のＡＤＨＤの評価方法は、問診等の他の手段による評価と組み合わせて行うこともできる。 The ADHD evaluation method of the present invention can also be performed in combination with evaluation by other means such as interview.

本発明のＡＤＨＤの評価方法によれば、評価対象由来の試料における前記サイトカインの量を指標とすることで、前記評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価することができる。 According to the method for evaluating ADHD of the present invention, it is possible to determine whether or not the subject is suffering from or is likely to develop ADHD by using the amount of the cytokine in the sample derived from the subject as an index. can be evaluated with high accuracy.

したがって、本発明は、前記評価工程を少なくとも含み、必要に応じて更に前記その他の工程を含む、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か若しくは発症する可能性を有するか否かを診断する方法、又は評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か若しくは発症する可能性を有するか否かの診断を補助する方法にも関する。
また、本発明は、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か若しくは発症する可能性を有するか否かを評価、診断、又は診断補助するためのバイオマーカーであって、サイトカインからなるバイオマーカーにも関する。 Therefore, the present invention provides a method for diagnosing whether or not an object to be evaluated has ADHD or is likely to develop ADHD, which includes at least the evaluation step described above and, if necessary, the other steps described above. , or a method for assisting in diagnosing whether a subject has or is likely to develop ADHD.
In addition, the present invention provides a biomarker for evaluating, diagnosing, or assisting diagnosis as to whether an evaluation subject is suffering from ADHD or has a possibility of developing ADHD, the biomarker comprising a cytokine. Also related.

（ＡＤＨＤの評価用データ取得方法）
本発明の評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価するためのデータを取得する方法（以下、「ＡＤＨＤの評価用データ取得方法」と称することがある。）は、測定工程を少なくとも含み、必要に応じて更にその他の工程を含む。 (ADHD evaluation data acquisition method)
A method of acquiring data for evaluating whether an evaluation subject of the present invention is suffering from ADHD or has a possibility of developing ADHD (hereinafter referred to as "ADHD evaluation data acquisition method") ) includes at least a measurement step, and further includes other steps as necessary.

＜測定工程＞
前記ＡＤＨＤの評価用データ取得方法における測定工程は、評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を測定する測定工程であり、上記した本発明のＡＤＨＤの評価方法のその他の工程における測定工程と同様にして行うことができる。 <Measurement process>
The measurement step in the ADHD evaluation data acquisition method is a measurement step of measuring the amount of cytokine in a sample derived from an evaluation subject, in the same manner as the measurement step in the other steps of the ADHD evaluation method of the present invention. It can be carried out.

＜その他の工程＞
前記ＡＤＨＤの評価用データ取得方法における前記その他の工程としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、試料調製工程などが挙げられる。 <Other processes>
The other steps in the ADHD evaluation data acquisition method are not particularly limited as long as they do not impair the effects of the present invention, and can be appropriately selected according to the purpose. Examples thereof include a sample preparation step. .

＜＜試料調製工程＞＞
前記ＡＤＨＤの評価用データ取得方法における試料調製工程は、前記評価対象由来の試料を調製する工程であり、上記した本発明のＡＤＨＤの評価方法のその他の工程における試料調製工程と同様にして行うことができる。 <<Sample preparation process>>
The sample preparation step in the ADHD evaluation data acquisition method is a step of preparing a sample derived from the evaluation subject, and is performed in the same manner as the sample preparation steps in the other steps of the ADHD evaluation method of the present invention. can be done.

本発明のＡＤＨＤの評価用データ取得方法は、前記サイトカイン以外の物質の量の測定と組み合わせて行ってもよい。 The ADHD evaluation data acquisition method of the present invention may be performed in combination with the measurement of the amounts of substances other than cytokines.

本発明のＡＤＨＤの評価用データ取得方法によれば、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価するために有用なデータを収集することができる。 According to the ADHD evaluation data acquisition method of the present invention, useful data can be collected for highly accurate evaluation of whether or not a person is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD.

（ＡＤＨＤの評価、診断、又は診断補助用キット）
上記したように、本発明のＡＤＨＤの評価方法によれば、評価対象由来の試料における前記サイトカインの量を指標とすることで、前記評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価することができるので、本発明は、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かの評価、診断、又は診断補助用キット（以下、「ＡＤＨＤの評価、診断、又は診断補助用キット」と称することがある。）にも関する。 (ADHD evaluation, diagnosis, or diagnostic aid kit)
As described above, according to the method for evaluating ADHD of the present invention, the amount of the cytokine in a sample derived from an evaluation subject is used as an index to determine whether or not the subject is suffering from ADHD or the possibility of developing ADHD. Since it is possible to evaluate with high accuracy whether or not the subject has ADHD, the present invention can be used for evaluation, diagnosis, or diagnostic assistance of whether or not the subject is suffering from or likely to develop ADHD It also relates to a kit (hereinafter sometimes referred to as "ADHD evaluation, diagnosis, or diagnostic aid kit").

前記ＡＤＨＤの評価、診断、又は診断補助用キットは、サイトカイン検出手段を少なくとも含み、必要に応じて、更にその他の構成を含む。 The kit for evaluating, diagnosing, or diagnosing ADHD includes at least cytokine detection means, and if necessary, further includes other components.

＜サイトカイン検出手段＞
前記サイトカイン検出手段としては、前記試料における目的のサイトカイン、好ましくはＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１種以上のサイトカインを検出することができる限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記サイトカインを免疫学的に検出するために、前記サイトカインに対する抗体を固定した検出器具が含まれることが好ましい。 <Means for detecting cytokine>
Said cytokine detection means includes a cytokine of interest in said sample, preferably the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF. There is no particular limitation as long as it can detect one or more cytokines selected from Preferably, a detection device is included that secures the .

前記サイトカインに対する抗体を固定する対象としては、固体又は不溶性材料である担体であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、濾過、沈殿、磁性分離などにより反応混合物から分離することができる担体などが挙げられる。 The target for immobilizing the antibody against the cytokine is not particularly limited as long as it is a carrier that is a solid or insoluble material, and can be appropriately selected according to the purpose. and a carrier that can be separated from.

前記担体の形状としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ビーズ、磁性ビーズ、薄膜、微細管、フィルター、プレート、マイクロプレート、カーボンナノチューブ、センサーチップなどが挙げられる。前記薄膜やプレート等の平坦な担体は、ピット、溝、フィルター底部などを設けてもよい。 The shape of the carrier is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the intended purpose. be done. A flat carrier such as the membrane or plate may be provided with pits, grooves, filter bottoms, and the like.

＜その他の構成＞
前記その他の構成としては、特に制限はなく、公知の診断用キットなどに含まれる構成を目的に応じて適宜選択することができ、例えば、免疫学的測定法に用いる試薬、キットの取扱説明書などが挙げられる。 <Other configurations>
The other configuration is not particularly limited, and can be appropriately selected from those included in known diagnostic kits according to the purpose. etc.

前記ＡＤＨＤの評価、診断、又は診断補助用キットによれば、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを高い精度で評価、診断、又は診断補助することができる。 According to the kit for evaluating, diagnosing, or assisting in diagnosis of ADHD, it is possible to highly accurately evaluate, diagnose, or assist diagnosis whether or not a person is suffering from ADHD or has a possibility of developing ADHD.

以下に本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。 Examples of the present invention will be described below, but the present invention is not limited to these examples.

（実施例１）
被検者として、ＡＤＨＤ患者２０名（患者群）、及び健常者２０名（健常者群）の２群を用いた。患者群を健常者群より先に収集し、それと人数、性別比、及び平均年齢が一致する健常者を後で収集した。
唾液検体の採取は、ＡＤＨＤ患者は起床後と、同日の日中の２回、健常者は日中に１回行った。採取した唾液に含まれるサイトカイン（２７種）を分析した。 (Example 1)
Two groups of 20 ADHD patients (patient group) and 20 healthy subjects (healthy subject group) were used as subjects. A group of patients was collected before a group of healthy subjects, followed by collection of healthy subjects matched in number, sex ratio, and average age.
Saliva specimens were collected from ADHD patients after waking up and twice during the day on the same day, and from healthy subjects once during the day. Cytokines (27 types) contained in the collected saliva were analyzed.

表１に被検者背景を示した。

Table 1 shows the subject background.

検体収集機関、分析装置、サイトカイン分析キット、分析を行ったサイトカインの種類、及び検査方法の詳細を以下に示す。
・検体収集機関：信州大学医学部附属病院
・分析装置：Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ（バイオ・ラッドラボラトリーズ（株））
・サイトカイン分析キット：
Ｂｉｏ－ＰｌｅｘＰｒｏＨｕｍａｎＣｙｔｏｋｉｎｅ２７－Ｐｌｅｘ（バイオ・ラッドラボラトリーズ（株））
・分析を行ったサイトカインの種類：
ＩＬ－１β、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＦＧＦ、Ｅｏｔａｘｉｎ、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＰ－１０、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１α、ＰＤＧＦ－ＢＢ、ＭＩＰ－１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＮＦ－α、ＶＥＧＦ
・検査方法：
（１）唾液からの測定サンプルの採取方法
１）採取カップ（日本メディカル：型番ＭＳ－５０）を２つ用意し、ＩＤを記入する（２つの採取カップのＩＤは同一とする）。
２）採取カップに採取量１５０μＬのラインを入れる。
３）２つのカップに必要量（およそ１５０μＬ）の唾液を入れ、採取後２時間以内に－８０℃で凍結保存する。 Details of the sample collection institution, analyzer, cytokine analysis kit, types of cytokines analyzed, and test methods are shown below.
・ Specimen collection institution: Shinshu University Hospital ・ Analyzer: Bio-Plex (Bio-Rad Laboratories Co., Ltd.)
・ Cytokine analysis kit:
Bio-Plex Pro Human Cytokine 27-Plex (Bio-Rad Laboratories, Inc.)
・ Types of cytokines analyzed:
IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12 p70, IL-13, IL -15, IL-17A, FGF, Eotaxin, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IP-10, MCP-1, MIP-1α, PDGF-BB, MIP-1β, RANTES, TNF-α, VEGF
· Inspection method :
(1) Method of Collecting Measurement Samples from Saliva 1) Prepare two collection cups (Nippon Medical: Model No. MS-50) and enter the IDs (the IDs of the two collection cups should be the same).
2) Put a line of 150 µL of collection volume into the collection cup.
3) Fill two cups with the required amount of saliva (approximately 150 μL) and store frozen at −80° C. within 2 hours after collection.

以上のようにして採取したサンプルについて、上記した分析装置及びサイトカイン分析キットを用いて２７種類のサイトカインの濃度を測定した。 Concentrations of 27 types of cytokines in the samples collected as described above were measured using the analyzer and cytokine analysis kit described above.

更に、得られた分析結果について、統計分析ソフト（ＩＢＭＳＰＳＳＳｔａｔｉｓｔｉｃｓ、日本アイ・ビー・エム（株））を使用してＭａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙｔｅｓｔを行った。
なお、サイトカインの測定濃度値が検出限界より低い場合、ＬＯＤ値（ＬｉｍｉｔｏｆＤｅｔｅｃｔｉｏｎ；ブランクの濃度に、ブランク間で観測される濃度揺らぎを加えた濃度のことで、ブランクから求められる測定下限値を意味し、算出式はブランクの値＋２×ブランクのＳＤ値）が算出可能な場合に限り、ＬＯＤ／２値を測定値として代用した。適用条件としては、ＬＯＤ／２値が、サンプル濃度、ＬＬＯＱ（標準液の低濃度域）の測定下限値よりも低値である場合のみ適用とした。また、ＬＯＤ／２値よりＬＬＯＱ値が低値であった場合は、ＬＬＯＱ／２値を測定値として用いた。
ＬＯＤ値は、８個のスタンダード濃度の実測値から求めたスタンダードカーブ回帰式の係数を用いて算出した。ただし、ＬＯＤ／２値がスタンダードの最も薄い濃度値（Ｓ８）よりも高い場合は、Ｓ８濃度値／２を測定値として代用した。 Further, the Mann-Whitney test was performed on the obtained analysis results using statistical analysis software (IBM SPSS Statistics, IBM Japan, Ltd.).
If the measured cytokine concentration value is lower than the detection limit, the LOD value (Limit of Detection) is the concentration obtained by adding the concentration fluctuation observed between blanks to the blank concentration. The LOD/2 value was substituted as the measured value only when the calculation formula was able to calculate the blank value + 2 x blank SD value). As an application condition, it was applied only when the LOD/2 value was lower than the lower measurement limit value of the sample concentration and LLOQ (low concentration range of the standard solution). Also, when the LLOQ value was lower than the LOD/2 value, the LLOQ/2 value was used as the measured value.
The LOD value was calculated using the coefficients of the standard curve regression equation obtained from the measured values of eight standard concentrations. However, when the LOD/2 value was higher than the lightest density value (S8) of the standard, the S8 density value/2 was substituted as the measured value.

＜解析１＞
患者群において、１回目（起床後）に採取した唾液中のサイトカインの濃度、及び２回目（日中）に採取した唾液中のサイトカインの濃度と、健常群において採取した唾液中のサイトカインの濃度とを比較した。なお、患者群のうち、１名からは２回目（日中）の唾液の採取ができなかったため、患者群における２回目（日中）に採取したサンプルは１９検体とした。 <Analysis 1>
In the patient group, the concentration of cytokines in saliva collected for the first time (after waking up), the concentration of cytokines in saliva collected for the second time (daytime), and the concentration of cytokines in saliva collected in the healthy group compared. In addition, since saliva could not be collected for the second time (daytime) from one of the patient groups, 19 samples were collected for the second time (daytime) in the patient group.

－解析結果１－
患者群の１回目（起床後）に採取した唾液中のサイトカインの濃度は、データが取得できなかったＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ以外では、ＩＬ－１３、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、及びＶＥＧＦ以外のサイトカインにおいて、健常群において採取した唾液中のサイトカインの濃度を上回る濃度で検出された。
一方、患者群の２回目（日中）に採取した唾液中のサイトカインの濃度は、起床後に採取した唾液中のサイトカインの濃度と比べて濃度値が低下し、健常者群の平均値に近づく傾向が認められた。
そのため、以下の解析においては、患者群では、２回目（日中）に採取した唾液検体を用いることとした。 -Analysis result 1-
The concentrations of cytokines in saliva collected for the first time (after waking up) from the patient group were IL-13, G-CSF, IP-10, RANTES, except for IL-15 and GM-CSF, for which data could not be obtained. and cytokines other than VEGF were detected at concentrations higher than those in saliva collected in the healthy group.
On the other hand, the cytokine concentration in the saliva sampled the second time (daytime) from the patient group was lower than the cytokine concentration in the saliva sampled after waking up, and tended to approach the average value of the healthy subject group. was accepted.
Therefore, in the following analysis, the patient group used saliva specimens collected for the second time (daytime).

＜解析２＞
患者群の２回目（日中）に採取した唾液中のサイトカインの濃度と、健常者群の唾液中のサイトカインの濃度について、Ｍａｎｎ－ＷｈｉｔｎｅｙＴｅｓｔによる統計分析を行った。その結果を表２に示す。
なお、分析した２７種類のサイトカイン中、データ損失があった１１種類のサイトカイン（ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＦＧＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＣＰ－１、ＰＤＧＦ－ＢＢ、ＭＩＰ－１β、ＲＡＮＴＥＳ）については、解析から除外した。 <Analysis 2>
Statistical analysis was performed by the Mann-Whitney Test on the saliva concentrations of cytokines in saliva sampled for the second time (daytime) from the patient group and the cytokine concentrations in the saliva of the healthy subject group. Table 2 shows the results.
Of the 27 cytokines analyzed, 11 cytokines with data loss (IL-2, IL-4, IL-5, IL-15, IL-17A, FGF, GM-CSF, MCP-1, PDGF-BB, MIP-1β, RANTES) were excluded from the analysis.

－解析結果２－
解析２の結果、患者と健常者の唾液中のサイトカインの濃度に関し、いくつかのサイトカインには両者間で有意差が認められた（表２）。
なお、すべてのサイトカインの種類について、性別及び年齢における有意差の有無についても分析を行ったが、性別及び年齢における有意差は認められなかった。
これらの結果から、患者から採取した唾液に含まれるサイトカインのうち、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦについては、性別及び年齢に関係なく、健常者から採取した唾液に含まれるそれらのサイトカインの濃度より有意に低いことが示された。なお、有意差があったサイトカインの唾液に含まれる濃度平均値を示すグラフを図１に示した（実線：健常者群、破線：ＡＤＨＤ患者群）。

-Analysis result 2-
As a result of Analysis 2, significant differences were observed in some cytokine concentrations in the saliva of patients and healthy subjects (Table 2).
For all types of cytokines, the presence or absence of significant differences in sex and age was also analyzed, but no significant differences in sex and age were observed.
From these results, among cytokines contained in saliva collected from patients, IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF , regardless of gender and age, were significantly lower than the concentrations of these cytokines contained in saliva collected from healthy subjects. FIG. 1 shows a graph showing the average concentrations of cytokines contained in saliva showing significant differences (solid line: healthy subject group, dashed line: ADHD patient group).

＜解析３＞
解析２の結果、患者群と健常群との間で有意差が認められた８種類のサイトカインについて、更に、ステップワイズ法を用いたロジスティック回帰分析によるモデル化、及びＲＯＣ解析による判定能の検証を行った。 <Analysis 3>
As a result of Analysis 2, the 8 types of cytokines that showed significant differences between the patient group and the healthy group were further modeled by logistic regression analysis using the stepwise method, and the determination ability was verified by ROC analysis. went.

－解析結果３－
解析３の結果、８種類のサイトカインの中で、ＩＬ－１ｒａとＶＥＧＦとの組合せが、ＲＯＣ解析によるＡＵＣ（ＡｒｅａＵｎｄｅｒＣｕｒｖｅ）が０．９１４（感度：０．７２２、特異度：１．０００）と最も１に近づいた。なお、他のサイトカインの組み合わせから算出されるＡＵＣは、該ＩＬ－１ｒａとＶＥＧＦとの組み合わせから算出されるＡＵＣよりも低かった。
なお、ＩＬ－１βのＡＵＣは０．７５３、ＩＬ－１ｒａのＡＵＣは０．７０８、ＩＬ－７のＡＵＣは０．７１７、ＩＬ－８のＡＵＣは０．８２１、ＩＬ－１２ｐ７０のＡＵＣは０．７４６、Ｇ－ＣＳＦのＡＵＣは０．７６４、ＩＦＮ－γのＡＵＣは０．７５６、ＶＥＧＦのＡＵＣは０．８０８であった。 -Analysis result 3-
As a result of Analysis 3, among the 8 types of cytokines, the combination of IL-1ra and VEGF had an AUC (Area Under Curve) by ROC analysis of 0.914 (sensitivity: 0.722, specificity: 1.000). and closest to 1. The AUC calculated from the combination of other cytokines was lower than the AUC calculated from the combination of IL-1ra and VEGF.
The AUC of IL-1β is 0.753, the AUC of IL-1ra is 0.708, the AUC of IL-7 is 0.717, the AUC of IL-8 is 0.821, and the AUC of IL-12 p70 is 0. .746, G-CSF AUC was 0.764, IFN-γ AUC was 0.756, and VEGF AUC was 0.808.

以上の結果から、唾液中のサイトカインの濃度について、ＡＤＨＤ患者では、健常者に比べ濃度が低下するサイトカイン（ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＶＥＧＦ）があることが分かった。
更に、ＩＬ－１ｒａとＶＥＧＦとの組合せは、特に患者群と健常者群との間における差異が大きいことが示された。
このため、評価対象由来の試料に含まれるサイトカインの量を指標とすることで、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は罹患する可能性を有するか否かを評価できることが分かった。 From the above results, regarding the concentration of cytokines in saliva, cytokines (IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G- CSF, IFN-γ, VEGF).
Furthermore, the combination of IL-1ra and VEGF showed a particularly large difference between the patient group and the healthy group.
Therefore, it was found that it is possible to evaluate whether or not a subject has or is likely to have ADHD by using the amount of cytokine contained in a sample derived from an evaluation subject as an index.

本発明の態様としては、例えば、以下のものなどが挙げられる。
＜１＞評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を指標として、注意欠如・多動症（ＡＤＨＤ）に罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する評価工程を含むことを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する方法である。
＜２＞前記評価方法が、評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を測定する測定工程を更に含む、前記＜１＞に記載の方法である。
＜３＞前記評価工程が、前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量と、基準値とを比較する処理を含み、
前記基準値が、健常個体由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値及びＡＤＨＤ患者由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値の少なくともいずれかであり、
前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量が、前記健常個体由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値より少ない場合、及び前記ＡＤＨＤ患者由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値と同量以下の場合の少なくともいずれかの場合に、前記評価対象が、ＡＤＨＤに罹患している又は発症する可能性を有すると評価する工程である前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の方法である。
＜４＞前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１種以上のサイトカインである前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の方法である。
＜５＞前記評価工程が、前記サイトカインの量のデータに基づいてＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価することが可能な評価式に前記サイトカインの量のデータを代入することを含み、前記評価式には、前記サイトカインの量のデータが代入される少なくとも１つの変数が含まれている前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の方法である。
＜６＞前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される２種以上のサイトカインであり、
前記評価工程が、前記２種以上のサイトカインの量のデータに基づいてＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価することが可能な評価式に前記２種以上のサイトカインの量のデータを代入することを含み、前記評価式には、前記２種以上のサイトカインの量のデータが代入される少なくとも２つの変数が含まれている前記＜５＞に記載の方法である。
＜７＞前記評価対象由来の試料が、唾液である前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の方法である。
＜８＞前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ及びＶＥＧＦである前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の方法である。
＜９＞評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を測定する測定工程を含むことを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価するためのデータを取得する方法である。
＜１０＞前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１種以上のサイトカインである前記＜９＞に記載の方法である。
＜１１＞前記評価対象由来の試料が、唾液である前記＜９＞から＜１０＞のいずれかに記載の方法である。
＜１２＞前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ及びＶＥＧＦである前記＜９＞から＜１１＞のいずれかに記載の方法である。 Embodiments of the present invention include, for example, the following.
<1> Characterized by including an evaluation step of evaluating whether or not attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD) is afflicted or likely to develop, using the amount of cytokine in the sample derived from the evaluation subject as an index. This is a method for evaluating whether or not an evaluation subject is suffering from ADHD or whether or not there is a possibility of developing ADHD.
<2> The method according to <1>, wherein the evaluation method further includes a measuring step of measuring the amount of cytokine in the sample derived from the subject of evaluation.
<3> The evaluation step includes a process of comparing the amount of cytokine in the sample derived from the evaluation subject and a reference value,
The reference value is at least one of a value based on the amount of cytokine in a sample derived from a healthy individual and a value based on the amount of cytokine in a sample derived from an ADHD patient;
If the amount of cytokine in the evaluation subject-derived sample is less than the value based on the amount of cytokine in the healthy individual-derived sample, and if it is equal to or less than the value based on the amount of cytokine in the ADHD patient-derived sample The method according to any one of <1> to <2> above, wherein in at least any one of the cases, the subject is assessed as having or being likely to develop ADHD.
<4> The cytokine is one or more cytokines selected from the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF The method according to any one of <1> to <3> above.
<5> In the evaluation step, the amount of the cytokine is expressed in an evaluation formula capable of evaluating whether or not ADHD is afflicted or likely to develop based on the data of the amount of the cytokine. The method according to any one of <1> to <2>, including substituting data, wherein the evaluation formula includes at least one variable into which the cytokine amount data is substituted. .
<6> Two or more cytokines selected from the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF and
In the evaluation step, the two or more cytokines are included in an evaluation formula capable of evaluating whether or not ADHD is afflicted or likely to develop based on the data of the amount of the two or more cytokines. The method according to <5>, wherein the evaluation formula includes at least two variables into which the data on the amount of the two or more cytokines is substituted. is.
<7> The method according to any one of <1> to <6>, wherein the sample derived from the subject of evaluation is saliva.
<8> The method according to any one of <1> to <7>, wherein the cytokines are IL-1ra and VEGF.
<9> For evaluating whether an evaluation subject suffers from or is likely to develop ADHD, which includes a measurement step of measuring the amount of cytokine in a sample derived from the evaluation subject. It is a method to acquire the data of
<10> The cytokine is one or more cytokines selected from the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF The method according to <9> above.
<11> The method according to any one of <9> to <10>, wherein the sample derived from the subject of evaluation is saliva.
<12> The method according to any one of <9> to <11>, wherein the cytokines are IL-1ra and VEGF.

Claims

評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を指標として、注意欠如・多動症（ＡＤＨＤ）に罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する評価工程を含み、
前記評価工程が、前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量と、基準値とを比較する処理を含み、
前記基準値が、健常個体由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値及びＡＤＨＤ患者由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値の少なくともいずれかであり、
前記評価対象由来の試料におけるサイトカインの量が、前記健常個体由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値より少ない場合、及び前記ＡＤＨＤ患者由来の試料におけるサイトカインの量に基づく値と同量以下の場合の少なくともいずれかの場合に、前記評価対象が、ＡＤＨＤに罹患している又は発症する可能性を有すると評価する工程であり、
前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１種以上のサイトカインであり、
前記評価対象由来の試料が、唾液であることを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する方法。 Using the amount of cytokines in a sample derived from an evaluation subject as an index, it includes an evaluation step of evaluating whether or not the subject is suffering from or is likely to develop attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD),
The evaluation step includes a process of comparing the amount of cytokine in the sample derived from the evaluation subject and a reference value,
The reference value is at least one of a value based on the amount of cytokine in a sample derived from a healthy individual and a value based on the amount of cytokine in a sample derived from an ADHD patient;
If the amount of cytokine in the evaluation subject-derived sample is less than the value based on the amount of cytokine in the healthy individual-derived sample, and if it is equal to or less than the value based on the amount of cytokine in the ADHD patient-derived sample In at least any one of the above cases, assessing that the subject is suffering from or likely to develop ADHD;
the cytokine is one or more cytokines selected from the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF;
A method for evaluating whether an evaluation subject has or is likely to develop ADHD, wherein the sample derived from the evaluation subject is saliva .

評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を指標として、注意欠如・多動症（ＡＤＨＤ）に罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する評価工程を含み、Using the amount of cytokines in a sample derived from an evaluation subject as an index, it includes an evaluation step of evaluating whether or not the subject is suffering from or is likely to develop attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD),
前記評価工程が、前記サイトカインの量のデータに基づいてＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価することが可能な評価式に前記サイトカインの量のデータを代入することを含み、前記評価式には、前記サイトカインの量のデータが代入される少なくとも１つの変数が含まれており、前記評価式から得られた値を一般的な人の値と比較をして、前記評価対象が、ＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する工程であり、In the evaluation step, the cytokine amount data is substituted into an evaluation formula capable of evaluating whether or not ADHD is present or likely to develop based on the cytokine amount data. wherein the evaluation formula includes at least one variable into which the cytokine amount data is substituted, and the value obtained from the evaluation formula is compared with the value of a general person. a step of evaluating whether the subject is suffering from ADHD or has a possibility of developing ADHD,
前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１種以上のサイトカインであり、the cytokine is one or more cytokines selected from the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF;
前記評価対象由来の試料が、唾液であることを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価する方法。A method for evaluating whether an evaluation subject has or is likely to develop ADHD, wherein the sample derived from the evaluation subject is saliva.

前記方法が、評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を測定する測定工程を更に含む、請求項１から２のいずれかに記載の方法。3. The method of any one of claims 1-2, wherein the method further comprises a measuring step of measuring the amount of cytokine in the sample derived from the subject to be evaluated.

前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ及びＶＥＧＦである請求項１から３のいずれかに記載の方法。4. The method of any one of claims 1-3, wherein said cytokines are IL-1ra and VEGF.

評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を測定する測定工程を含み、Including a measuring step of measuring the amount of cytokine in the sample derived from the evaluation subject,
前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１種以上のサイトカインであり、the cytokine is one or more cytokines selected from the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF;
前記評価対象由来の試料が、唾液であることを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かを評価するためのデータを取得する方法。A method for obtaining data for evaluating whether or not an evaluation subject has or is likely to develop ADHD, wherein the sample derived from the evaluation subject is saliva.

前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ及びＶＥＧＦである請求項５に記載の方法。6. The method of claim 5, wherein said cytokines are IL-1ra and VEGF.

評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を、前記評価対象が注意欠如・多動症（ＡＤＨＤ）に罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かに関する医師による評価を補助するための指標として提供する工程を含み、The amount of cytokines in a sample derived from an evaluation subject is used as an index to assist a physician's evaluation of whether the evaluation subject suffers from or is likely to develop attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD). including the step of providing
前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１β、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、及びＶＥＧＦからなる群から選択される１種以上のサイトカインであり、the cytokine is one or more cytokines selected from the group consisting of IL-1ra, IL-1β, IL-7, IL-8, IL-12 p70, G-CSF, IFN-γ, and VEGF;
前記評価対象由来の試料が、唾液であることを特徴とする、評価対象がＡＤＨＤに罹患しているか否か又は発症する可能性を有するか否かの評価を補助するための方法。A method for assisting evaluation of whether or not an evaluation subject has or is likely to develop ADHD, wherein the sample derived from the evaluation subject is saliva.

前記方法が、評価対象由来の試料におけるサイトカインの量を測定する測定工程を更に含む、請求項７に記載の方法。8. The method of claim 7, wherein the method further comprises a measuring step of measuring the amount of cytokine in the sample from the subject of evaluation.

前記サイトカインが、ＩＬ－１ｒａ及びＶＥＧＦである請求項７から８のいずれかに記載の方法。9. The method of any one of claims 7-8, wherein said cytokines are IL-1ra and VEGF.