JP7178090B2 - Transmembrane pH gradient polymersomes and their use in scavenging ammonia and its methylated analogues - Google Patents

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本発明は、膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソーム並びにアンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、トリメチルアミン（ＴＭＡ））の除去におけるそれらの使用に関する。より具体的には、本発明は、非生分解性両親媒性ブロックコポリマーを含むポリマーソーム、並びに例えば、高アンモニア血症、トリメチルアミン尿症、心血管疾患及び／又は慢性腎疾患の治療のためのアンモニア及び／又はそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）の除去におけるポリマーソームの経腸（例えば、経口）使用若しくは局所使用に関する。 The present invention relates to transmembrane pH-gradient polymersomes and their use in scavenging ammonia and its methylated analogues, such as trimethylamine (TMA). More specifically, the present invention relates to polymersomes comprising non-biodegradable amphiphilic block copolymers and for the treatment of, for example, hyperammonemia, trimethylaminuria, cardiovascular disease and/or chronic renal disease. Enteral (eg, oral) or topical use of polymersomes in the removal of ammonia and/or its methylated analogues (eg, TMA).

アンモニア（ＮＨ３）及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ（Ｎ（ＣＨ３）３）は、類似の物理化学的性質（例えば、低分子量、類似のｐＫａ及びｌｏｇＰなど）を有する。これらは両方とも、主に消化管で生成され、体内におけるそれらの過剰な存在は、様々な障害及びそれらの症状に関連している。 Ammonia (NH 3 ) and its methylated analogues (e.g. TMA(N(CH 3 ) 3 ) have similar physico-chemical properties (e.g. low molecular weight, similar pKa and logP, etc.). Both are produced primarily in the gastrointestinal tract and their excessive presence in the body is associated with various disorders and their symptoms.

アンモニア
アンモニア（ＮＨ３）は、肝機能障害（例えば、肝硬変、急性肝不全、門脈大循環シャント、先天性アンモニア代謝異常による）を患っている患者に蓄積する神経毒性のある内因性代謝産物である（Ｍａｔｏｏｒｉ及びＬｅｒｏｕｘ ＡＤＤＲ ２０１５；９０：５５－６８）。 Ammonia ammonia (NH 3 ) is an endogenous neurotoxic metabolite that accumulates in patients with liver dysfunction (e.g., due to cirrhosis, acute liver failure, portosystemic shunt, congenital abnormal ammonia metabolism). (Matoori and Leroux ADDR 2015;90:55-68).

血液における高アンモニアレベル（高アンモニア血症）は、潜在的に死に至る深刻な急性及び慢性の症状を有する神経精神医学的状態である肝性脳症に関連する（Ｖｉｌｓｔｒｕｐら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１４；６０：７１５－７３５）。肝性脳症は、米国だけで２００９年に２００００超の入院をもたらし、７０億米国ドルを超えるコストがかかっている（Ｓｔｅｐａｎｏｖａら，Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ ２０１２；１０：１０３４－１０４１．ｅ１；Ｐｏｏｒｄａｄ，Ａｌｉｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒａｐ ２００６；２５：３－９）。肝性脳症による単一入院当たりの入院コストは、２００４年の２２，５１１米国ドルから２０１０年の３７，３９８米国ドルへと増加した（Ｎｅｆｆら、Ｃｌｉｎｉｃｏｅｃｏｎ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ Ｒｅｓ．２０１３；５：１４３－１５２）。 High ammonia levels in the blood (hyperammonemia) are associated with hepatic encephalopathy, a neuropsychiatric condition with severe acute and chronic symptoms that are potentially fatal (Vilstrup et al., Hepatology 2014; 60:715). -735). Hepatic encephalopathy resulted in over 20,000 hospitalizations in 2009 in the United States alone, at a cost of over US$7 billion (Stepanova et al., Clin Gastroenterol Hepatol 2012; 10:1034-1041.e1; Poordad, Alim Pharmacol Therap 2006;25:3-9). Hospitalization costs per single admission for hepatic encephalopathy increased from US$22,511 in 2004 to US$37,398 in 2010 (Neff et al., Clinicoecon Outcomes Res. 2013;5:143-152). .

体内のアンモニアの主な供給源の１つは、結腸におけるウレアーゼ産生細菌である（Ｍａｔｏｏｒｉ及びＬｅｒｏｕｘ、前出）。したがって、肝性脳症のための臨床実践ガイドラインは、むしろ非特異的様式で結腸アンモニアの生成及び吸収に取り組む非吸収性二糖類ラクツロース（一般的に使用される下剤）及び抗生物質リファキシミン（例えば、Ｘｉｆａｘａｎ（商標））を肝性脳症の第一選択療法及び第二選択療法として勧めている（Ｖｉｌｓｔｒｕｐら、前出）。これらの両方の経口に利用可能な療法は、患者集団の大部分において肝性脳症の症状及び進行を制御するのに失敗し、これらの療法下にある多くの患者は、下痢などの副作用に苦しむ（Ｖｉｌｓｔｒｕｐら、前出；Ｒｏｓｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１２；９２：３２１－３３１；Ｌｅｅｖｙら，Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ ２００７；Ｍｕｌｌｅｎら、Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ ２０１４；１２：１３９０－１３９７．ｅ２）。 One of the major sources of ammonia in the body is urease-producing bacteria in the colon (Matoori and Leroux, supra). Therefore, clinical practice guidelines for hepatic encephalopathy rather address the production and absorption of colonic ammonia in a non-specific manner. ™) is recommended as a first-line and second-line therapy for hepatic encephalopathy (Vilstrup et al., supra). Both of these orally available therapies fail to control the symptoms and progression of hepatic encephalopathy in the majority of the patient population, and many patients under these therapies suffer side effects such as diarrhea. (Vilstrup et al., supra; Rose Clinical Pharmacology & Therapeutics 2012; 92:321-331; Leevy et al., Dig Dis Sci 2007; Mullen et al., Clin Gastroenterol Hepatol 2014; 12:1390-1397.e2).

経口投与される球状炭素吸着体（ＡＳＴ－１２０、Ｋｒｅｍｅｚｉｎ（登録商標））はまた、肝性脳症の動物モデルにおけるアンモニアの隔離及び高アンモニア血症関連症状の改善について開示されている（Ｂｏｓｏｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１１；５３：１９９５－２００２）。機構的に、アンモニアは、腸内でＡＳＴ－１２０微粒子に吸着し、その後、糞を介して***される。肝性脳症患者での臨床試験において、ＡＳＴ－１２０治療は、おそらくアンモニアの不十分な結合により、神経心理学的症状に臨床的改善をもたらさなかった（Ｂａｊａｊら、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ ２０１３；５８：Ｓ８４，Ｂｏｓｏｉら、前出）。炭素吸着剤は、様々な化合物に結合し、重要な内因性又は外因性物質との干渉のリスクを有することが知られている（Ｓｃｈｕｌｍａｎら，Ａｍ Ｊ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ ２００６；４７：５６５－５７７；Ｎｅｕｖｏｎｅｎ及びＥｌｏｎｅｎ Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９８０；１７：５１－５７；Ｎｅｕｖｏｎｅｎ及びＯｌｋｋｏｌａ Ｍｅｄ Ｔｏｘｉｃｏｌ １９８８；３：３３－５８）。 An orally administered spherical carbon sorbent (AST-120, Kremezin®) has also been disclosed for ammonia sequestration and improvement of hyperammonemia-related symptoms in an animal model of hepatic encephalopathy (Bosoi et al. Hepatology 2011;53:1995-2002). Mechanistically, ammonia adsorbs to AST-120 microparticles in the intestine and is subsequently excreted via feces. In clinical trials in patients with hepatic encephalopathy, AST-120 treatment did not lead to clinical improvement in neuropsychological symptoms, possibly due to insufficient binding of ammonia (Bajaj et al., J. Hepatol 2013;58:S84 , Bosoi et al., supra). Carbon adsorbents are known to bind a variety of compounds and carry the risk of interference with important endogenous or exogenous substances (Schulman et al., Am J Kidney Dis 2006; 47:565-577; Neuvonen and Elonen Eur J Clin Pharmacol 1980; 17:51-57; Neuvonen and Olkkola Med Toxicol 1988; 3:33-58).

侵襲的であり、主に、重症の急性高アンモニア血症の症状を治療するのに適しているので、体外のアプローチ（例えば、血液透析）に基づくアンモニア除去治療戦略は、肝性脳症の慢性的性質によって理想的ではない。 Ammonia removal treatment strategies based on extracorporeal approaches (e.g., hemodialysis) are invasive and primarily suitable for treating the symptoms of severe acute hyperammonemia, which may be the primary cause of chronic hepatic encephalopathy. Not ideal by nature.

高アンモニア血症誘発性肝性脳症を患っている患者のための理想的な治療法は、腸内治療（例えば、経口）であり、アンモニア取り込みに強力かつ選択的であり、かつ胃腸管の過酷な環境において安定である。 The ideal therapy for patients suffering from hyperammonemia-induced hepatic encephalopathy is enteral therapy (e.g., oral), potent and selective for ammonia uptake, and severe gastrointestinal tract. stable in a harsh environment.

トリメチルアミン
トリメチルアミン（ＴＭＡ）（Ｎ（ＣＨ３）３）は、栄養物質（例えば、コリン、カルニチン、レシチン）の細菌代謝によって腸内で生成される第三級アミンである（Ｗａｎｇ Ｚら、（２０１１）．Ｎａｔｕｒｅ ４７２（７３４１），５７－６３；Ｗｉｓｅ ＰＭら（２０１１）．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １２４（１１），１０５８－１０６３）。その後、ＴＭＡは、肝臓においてフラビンモノオキシゲナーゼ３によって酸化され、非臭気トリメチルアミン－Ｎ－オキシド（ＴＭＡＯ）になる（Ｙｅｕｎｇ ＣＫら、（２００７）．Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，４６４（２），２５１－２５９）。ＴＭＡ及びその代謝物ＴＭＡＯは、いくつかの疾患の病因に関与している。 TrimethylamineTrimethylamine (TMA) (N( CH3 ) 3 ) is a tertiary amine produced in the intestine by bacterial metabolism of nutritional substances (e.g. choline, carnitine, lecithin) (Wang Z et al. (2011) Wise PM et al (2011).The American journal of medicine 124(11), 1058-1063). TMA is then oxidized by flavin monooxygenase 3 in the liver to non-odorous trimethylamine-N-oxide (TMAO) (Yeung CK et al. (2007). Archives of biochemistry and biophysics, 464(2), 251-259 ). TMA and its metabolite TMAO are involved in the pathogenesis of several diseases.

トリメチルアミン尿症（魚臭症候群としても知られている）は、フラビンモノオキシゲナーゼ３欠乏と関連する常染色体劣性障害である（Ｙｅｕｎｇら、前出）。トリメチルアミン尿症に罹患している患者は、体液（尿、汗）及び呼気中のＴＭＡ量の上昇により、一般に、（多くの場合、腐った魚に関連する）悪臭が漂う（Ｗｉｓｅら、前出）。トリメチルアミン尿症の診断は、通常、食事のコリン負荷並びにその後のＴＭＡ及びＴＭＡＯの尿分析に基づく（Ｗｉｓｅら、前出）。知覚可能な匂いは、主に皮膚表面から生じ、食事に依存して変化する（Ｗｉｓｅら、前出）。それらの悪臭により、トリメチルアミン尿症患者は、多くの場合心理的な症状（例えば、うつ病、自殺傾向）及び社会的孤立に苦しむ（Ｔｏｄｄ ＷＡ（１９７９）．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，９４（６），９３６－９３７）。 Trimethylaminuria (also known as fish odor syndrome) is an autosomal recessive disorder associated with flavin monooxygenase 3 deficiency (Yeung et al., supra). Patients with trimethylaminuria generally have a foul odor (often associated with rotten fish) due to elevated amounts of TMA in body fluids (urine, sweat) and exhaled breath (Wise et al., supra). ). Diagnosis of trimethylaminuria is usually based on dietary choline load and subsequent TMA and TMAO urine analysis (Wise et al., supra). Perceivable odors originate primarily from the skin surface and vary depending on diet (Wise et al., supra). Because of their malodor, trimethylaminuria patients often suffer from psychological symptoms (e.g. depression, suicidal tendencies) and social isolation (Todd WA (1979). The Journal of pediatrics, 94(6), 936-937).

ＴＭＡＯレベルの上昇はまた、心血管疾患及び慢性腎疾患のリスクの増加と関連しており（Ｔａｎｇ ＷＷら（２０１３）．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６８（１７），１５７５－１５８４；Ｔａｎｇ ＷＷら（２０１５）．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ １１６（３），４４８－４５５）；腸の微生物ＴＭＡ生産の阻害は、アテローム硬化性病変の減少につながった（Ｗａｎｇ Ｚら（２０１５）．Ｃｅｌｌ １６３（７），１５８５－１５９５）。 Elevated TMAO levels are also associated with increased risk of cardiovascular disease and chronic kidney disease (Tang WW et al. (2013). New England Journal of Medicine 368(17), 1575-1584; Tang WW et al. (2015). ).Circulation research 116(3),448-455); .

さらに、ＴＭＡは、細菌性膣炎における不快臭の一因であることが見出された（Ｂｌａｎｋｅｎｓｔｅｉｎ Ｔら（２０１５）．Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ２９２（２），３５５－３６２）。 Furthermore, TMA was found to contribute to the odor nuisance in bacterial vaginosis (Blankenstein T et al. (2015). Archives of gynecology and obstetrics 292(2), 355-362).

トリメチルアミン尿症の治療
トリメチルアミン尿症の治療において、アブラナ科野菜及びカルニチン、コリン、又はレシチンが豊富な食品を避けるなどの食事制限は、悪臭を減少させるために推奨されている（Ｃａｓｈｍａｎ ＪＲら（１９９９）、食物インドールの存在下でのヒトフラビン含有モノオキシゲナーゼ３型（ＦＭＯ３）の阻害のインビトロ及びインビボ研究（Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ－ｖｉｖｏ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｌａｖｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｆｏｒｍ ３（ＦＭＯ３） ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｉｎｄｏｌｅｓ）、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５８，１０４７－１０５５；Ｃａｓｈｍａｎ ＪＲら（２００３）。トリメチルアミン尿症に関連するヒトフラビン含有モノオキシゲナーゼ３型（ＦＭＯ３）の生化学的及び臨床的態様（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｆｌａｖｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｆｏｒｍ ３（ＦＭＯ３） ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｒｕｇ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４（２），１５１－１７０；Ｄａｎｋｓ ＤＭら（１９７６）。トリメチルアミン尿症：食事は必ずしも魚臭を抑制しない（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ：ｄｉｅｔ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ａｌｗａｙｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｆｉｓｈｙ ｏｄｏｒ）、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２９５（１７），９６２－９６２）。しかしながら、これらの制限措置は、患者にとって厄介であり、必ずしも悪臭体蒸気の十分な減少をもたらさない（Ｄａｎｋｓら、前出）。腸においてＴＭＡ生成微生物の成長及び代謝を阻害する特定の経口適用抗生物質（例えば、ネオマイシン、メトロニダゾール）は、一時的に症状を緩和することができる（Ｄａｎｋｓら、前出；Ｔｒｅａｃｙ Ｅら（１９９５）．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ，１８（３），３０６－３１２）。しかしながら、有益な効果は全ての患者において観察されず（Ｔｒｅａｃｙら、前出）、長期の抗生物質の使用は、胃腸の副作用のリスクを有する（Ｌｅｖｙ Ｊ（２０００） Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，９５（１），Ｓ８－Ｓ１０）。経口投与された活性炭への吸着によるＴＭＡの除去はまた、トリメチルアミン尿症に罹患する特定の患者に有益であることが示されている（Ｙａｍａｚａｋｉ Ｈら（２００４）日本人のトリメチルアミン尿症の患者におけるトリメチルアミンの尿***に対する食事サプリメント、活性炭及び銅クロロフィリンの効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｈａｒｃｏａｌ ａｎｄ ｃｏｐｐｅｒ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎ，ｏｎ ｕｒｉｎａｒｙ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７４（２２），２７３９－２７４７）。さらに、ＴＭＡはプロトン化状態で低揮発性であるので、酸性石鹸の使用が推奨される（Ｗｉｌｃｋｅｎ Ｂ （１９９３） 魚臭症候群における酸性石鹸（Ａｃｉｄ ｓｏａｐｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｓｈ ｏｄｏｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）．ＢＭＪ： Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，３０７（６９１７），１４９７）。 Treatment of Trimethylaminuria In the treatment of trimethylaminuria, dietary restrictions such as avoiding cruciferous vegetables and foods rich in carnitine, choline, or lecithin are recommended to reduce malodour (Cashman JR et al. (1999) ), In-vitro and in-vivo studies inhibition of human flavin-containing monooxygenase form 3 (FMO3) in the presence of dietary indole Cashman JR et al (2003).Biochemical and clinical aspects of the human flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) associated with trimethylaminuria. flavin-containing monooxygenase form 3 (FMO3) related to trimethylaminoria), Current drug metabolism, 4(2), 151-170; Danks DM et al. does not always control the fishery), The New England Journal of Medicine, 295(17), 962-962). However, these restrictive measures are cumbersome to the patient and do not always result in adequate reduction of malodorous body vapors (Danks et al., supra). Certain orally applied antibiotics (e.g., neomycin, metronidazole) that inhibit the growth and metabolism of TMA-producing microorganisms in the gut can temporarily relieve symptoms (Danks et al., supra; Treacy E et al. (1995). .Journal of inherited metabolic disease, 18(3), 306-312). However, no beneficial effects were observed in all patients (Tracy et al., supra), and long-term antibiotic use carries the risk of gastrointestinal side effects (Levy J (2000) The American Journal of Gastroenterology, 95 ( 1), S8-S10). Removal of TMA by adsorption to orally administered activated charcoal has also been shown to be beneficial in certain patients with trimethylaminuria (Yamazaki H et al. (2004) in Japanese patients with trimethylaminuria).トリメチルアミンの尿***に対する食事サプリメント、活性炭及び銅クロロフィリンの効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｈａｒｃｏａｌ ａｎｄ ｃｏｐｐｅｒ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎ，ｏｎ ｕｒｉｎａｒｙ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７４（２２），２７３９－２７４７）。 In addition, the use of acid soaps is recommended because TMA has low volatility in its protonated state (Wilcken B (1993) Acid soaps in the fish odor syndrome. BMJ: British Medical Journal). , 307 (6917), 1497).

アンモニアメチル化類似体ジメチルアミン（ＤＭＡ）は、ＴＭＡ及びアンモニアと類似の物理化学的性質を共有し、ＧＩ管で生成される。これは、既知の発癌物質の前駆体である。 The ammonia methylated analog dimethylamine (DMA) shares similar physicochemical properties with TMA and ammonia and is produced in the GI tract. It is a precursor of known carcinogens.

本発明の説明はいくつかの文書を参照し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。 The description of the present invention refers to several documents, the contents of which are hereby incorporated by reference in their entireties.

本発明は、経腸（例えば、経口）及び局所経路を介するアンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）の解毒／除去のための膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソームの組成物、調製及び使用を説明する。本明細書で示されるように、本発明のポリマーソームは、模擬胃腸液中のアンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を強力に隔離し、この過酷な環境に抵抗する。さらに、本発明のポリマーソームは、乳濁液（例えば、ローション及びクリームなどの局所製剤）中のＴＭＡを強力に隔離する。 The present invention describes the composition, preparation and use of transmembrane pH gradient polymersomes for the detoxification/removal of ammonia and its methylated analogues (e.g. TMA) via enteral (e.g. oral) and topical routes. do. As shown herein, the polymersomes of the invention potently sequester ammonia and its methylated analogues (eg, TMA) in simulated gastrointestinal fluids and resist this harsh environment. Furthermore, the polymersomes of the present invention strongly sequester TMA in emulsions (eg, topical formulations such as lotions and creams).

より具体的には、本発明のポリマーソームは、例えば、膜貫通ｐＨ勾配リポソーム（例えば、実施例１を参照）とは異なり、腸内で遭遇する状態を模倣する媒体で希釈したときに、それらの隔離特性を呈することが示された。様々な模擬胃腸状態（高胆汁塩濃度（実施例６～８及び１３）、低浸透圧及び高浸透圧（実施例９）、消化酵素の存在（実施例１０）及び高カチオン濃度（実施例１１）の下でアンモニア取り込みを示すことにより、胃腸環境におけるポリマーソームの安定性及び有効性が以下の実施例で実証された。ポリマーソームの安定性及び有効性は、例えば、局所製剤（実施例１３）に対応する水中油型（ｏ／ｗ）乳濁液中でも実証された。 More specifically, the polymersomes of the present invention, unlike e.g., transmembrane pH-gradient liposomes (see, e.g., Example 1), show that when diluted in a medium that mimics the conditions encountered in the intestine, they was shown to exhibit sequestering properties of Various simulated gastrointestinal conditions (high bile salt concentration (Examples 6-8 and 13), hypo- and hyperosmolarity (Example 9), presence of digestive enzymes (Example 10) and high cation concentration (Example 11) The stability and efficacy of polymersomes in the gastrointestinal environment was demonstrated in the following examples by demonstrating ammonia uptake under the conditions of, for example, topical formulations (Example 13 ) was also demonstrated in an oil-in-water (o/w) emulsion corresponding to

本発明は、例えば、非生分解性両親媒性ブロックコポリマー（例えば、ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ、ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレングリコール）、ＰＳ－ｂ－ＰＥＧとしても知られる））で構成されたポリマーソームについて記載する。 The present invention provides, for example, non-biodegradable amphiphilic block copolymers such as poly(styrene)-b-poly(ethylene oxide) (PS-b-PEO, poly(styrene)-b-poly(ethylene glycol), PS -b-PEG)) composed of polymersomes are described.

より具体的には、本発明の一態様によると、ポリマーソームであって、（ａ）その膜が、本明細書で定義される疎水性非荷電非生分解性ポリマーと親水性非荷電非生分解性ポリマーのブロックコポリマーを含み、該疎水性非荷電非生分解性ポリマー／親水性非荷電非生分解性ポリマーの分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）であり；かつ（ｂ）そのコアが酸を包囲する、ポリマーソームが提供される。 More specifically, according to one aspect of the present invention, polymersomes, the membrane of which (a) comprises a hydrophobic, uncharged, non-biodegradable polymer as defined herein and a hydrophilic, uncharged, non-biodegradable block copolymers of degradable polymers, wherein the molecular weight ratio of hydrophobic non-charged non-biodegradable polymer/hydrophilic non-charged non-biodegradable polymer is greater than 1.0 and less than 4.0 (e.g., greater than 1.0 high, less than 3.0); and (b) the core surrounds the acid.

より具体的には、本発明の一態様によると、（ａ）本明細書で定義される疎水性非荷電非生分解性ポリマーと親水性非荷電非生分解性ポリマーのブロックコポリマーを含み、該疎水性非荷電非生分解性ポリマー／親水性非荷電非生分解性ポリマーの分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソームが提供される。 More specifically, according to one aspect of the present invention, it comprises (a) a block copolymer of a hydrophobic, uncharged, non-biodegradable polymer as defined herein and a hydrophilic, uncharged, non-biodegradable polymer, said A membrane having a hydrophobic non-charged non-biodegradable polymer/hydrophilic non-charged non-biodegradable polymer molecular weight ratio of greater than 1.0 and less than 4.0 (e.g., greater than 1.0 and less than 3.0) and (b) a core surrounding an acid.

より具体的には、本発明の一態様によると、（ａ）本明細書で定義される疎水性非荷電非生分解性ポリマーと親水性非荷電非生分解性ポリマーのブロックコポリマーを含む膜であって、該疎水性非荷電非生分解性ポリマー／親水性非荷電非生分解性ポリマーの分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、からなるポリマーソームが提供される。 More specifically, according to one aspect of the present invention, a membrane comprising (a) a block copolymer of a hydrophobic, uncharged, non-biodegradable polymer as defined herein and a hydrophilic, uncharged, non-biodegradable polymer wherein the hydrophobic non-charged non-biodegradable polymer/hydrophilic non-charged non-biodegradable polymer molecular weight ratio is greater than 1.0 and less than 4.0 (e.g., greater than 1.0 and less than 3.0 ); and (b) a core surrounding an acid.

本発明のより具体的な態様によると、ポリマーソームであって、（ａ）その膜が、ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）であり；かつ（ｂ）そのコアが酸を包囲する、ポリマーソームが提供される。本発明のより具体的な態様によると、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソームが提供される。本発明のより具体的な態様によると、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、からなるポリマーソームが提供される。本発明のポリマーソームは架橋されてもよいし、されなくてもよい。 According to a more specific aspect of the present invention, a polymersome wherein (a) the membrane comprises a block copolymer of poly(styrene) (PS) and poly(ethylene oxide) (PEO), the PS/PEO molecular weight Polymersomes are provided wherein the ratio is greater than 1.0 and less than 4.0 (eg, greater than 1.0 and less than 3.0); and (b) the core surrounds the acid. According to a more particular embodiment of the present invention, (a) block copolymers of poly(styrene) (PS) and poly(ethylene oxide) (PEO), wherein said PS/PEO molecular weight ratio is greater than 1.0;4. Polymersomes are provided that include a membrane that is less than 0 (eg, greater than 1.0 and less than 3.0); and (b) a core surrounding an acid. According to a more particular embodiment of the present invention, (a) block copolymers of poly(styrene) (PS) and poly(ethylene oxide) (PEO), wherein said PS/PEO molecular weight ratio is greater than 1.0;4. A polymersome is provided that consists of a membrane that is less than 0 (eg, greater than 1.0 and less than 3.0); and (b) a core that surrounds the acid. The polymersomes of the invention may or may not be crosslinked.

特定の実施形態において、ポリマーソームであって、（ａ）その膜が、ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーからなり、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）であり；かつ（ｂ）そのコアが酸を包囲する、ポリマーソームが提供される。特定の実施形態において、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーからなり、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソームが提供される。特定の実施形態において、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーからなり、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、からなるポリマーソームが提供される。 In certain embodiments, polymersomes, wherein (a) the membrane consists of block copolymers of poly(styrene) (PS) and poly(ethylene oxide) (PEO), wherein the PS/PEO molecular weight ratio is 1.0 Polymersomes are provided that are higher and less than 4.0 (eg, greater than 1.0 and less than 3.0); and (b) the core of which surrounds an acid. In certain embodiments, (a) consists of block copolymers of poly(styrene) (PS) and poly(ethylene oxide) (PEO), wherein the PS/PEO molecular weight ratio is greater than 1.0 and less than 4.0 (e.g., (greater than 1.0 and less than 3.0); and (b) a core surrounding an acid. In certain embodiments, (a) consists of block copolymers of poly(styrene) (PS) and poly(ethylene oxide) (PEO), wherein the PS/PEO molecular weight ratio is greater than 1.0 and less than 4.0 (e.g., (greater than 1.0 and less than 3.0); and (b) a core surrounding an acid.

本発明のポリマーソームの特定の実施形態において、該ブロックコポリマーは、ジブロックコポリマーである。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該酸は、ポリマーソームが水和したときに、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４のｐＨを生じる濃度にある。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該酸は、酸性水溶液中にある。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、酸性水溶液中のｐＨは、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４である。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該酸は、（ｉ）クエン酸、イソクエン酸、リンゴ酸、酒石酸若しくは乳酸などのヒドロキシ酸；（ｉｉ）酢酸などの小鎖脂肪酸；（ｉｉｉ）ウロン酸などの糖酸；（ｉｖ）マロン酸などのジカルボン酸；（ｖ）プロパン－１，２，３－トリカルボン酸若しくはアコニット酸などのトリカルボン酸；（ｖｉ）１，２，３，４－ブタンテトラカルボン酸などのテトラカルボン酸；（ｖｉｉ）１，２，３，４，５－ペンタンペンタカルボン酸などのペンタカルボン酸；（ｖｉｉｉ）ポリ（アクリル酸）若しくはポリ（メタクリル酸）などのポリマーポリ（カルボン酸）；（ｉｘ）エチレンジアミン四酢酸などのポリアミノカルボン酸；又は（ｘ）それらの少なくとも２つの組合せである。より具体的な実施形態において、該酸は、ヒドロキシ酸、好ましくはクエン酸である。別の特定の実施形態において、本発明のポリマーソームは、酸含有水相と、コポリマーを含む有機溶媒を混合することを含む方法によって調製される。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、有機溶媒は、水非混和性又は部分的水混和性である。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該ポリマーソームコアは、さらに、アンモニアを包囲する。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該ポリマーソームコアは、さらに、アンモニア又はそのメチル化類似体を包囲し、該メチル化類似体は好ましくはＴＭＡである。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該ポリマーソームコアは、さらに、アンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を包囲する。 In certain embodiments of the polymersomes of the invention, the block copolymers are diblock copolymers. In another particular embodiment of the polymersomes of the invention, the acid is at a concentration that produces a pH of 1-6, preferably 2-5, more preferably 2-4 when the polymersomes are hydrated. . In another specific embodiment of the polymersomes of the invention, the acid is in an acidic aqueous solution. In another particular embodiment of the polymersomes of the invention, the pH in the acidic aqueous solution is 1-6, preferably 2-5, more preferably 2-4. In another specific embodiment of the polymersomes of the invention, the acid is (i) a hydroxy acid such as citric acid, isocitric acid, malic acid, tartaric acid or lactic acid; (ii) a small chain fatty acid such as acetic acid; (iv) dicarboxylic acids such as malonic acid; (v) tricarboxylic acids such as propane-1,2,3-tricarboxylic acid or aconitic acid; (vi) 1,2,3,4- (vii) pentacarboxylic acids such as 1,2,3,4,5-pentanepentacarboxylic acid; (viii) polymers such as poly(acrylic acid) or poly(methacrylic acid); (ix) a polyaminocarboxylic acid such as ethylenediaminetetraacetic acid; or (x) a combination of at least two thereof. In a more specific embodiment, said acid is a hydroxy acid, preferably citric acid. In another specific embodiment, the polymersomes of the invention are prepared by a method comprising mixing an acid-containing aqueous phase and an organic solvent containing the copolymer. In another specific embodiment of the polymersomes of the invention, the organic solvent is water-immiscible or partially water-miscible. In another specific embodiment of the polymersomes of the invention, the polymersome core further surrounds ammonia. In another specific embodiment of the polymersomes of the invention, the polymersome core further surrounds ammonia or a methylated analogue thereof, said methylated analogue being preferably TMA. In another specific embodiment of the polymersomes of the invention, the polymersome core further surrounds an ammonia-methylated analog (eg, TMA).

本発明の別の態様によると、本発明のポリマーソーム、及び少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物が提供される。 According to another aspect of the invention there is provided a composition comprising a polymersome of the invention and at least one pharmaceutically acceptable excipient.

本発明の組成物の別の特定の実施形態において、該組成物は、液体、又は固体の形態にある。本発明の組成物の別の特定の実施形態において、該組成物は、液体、半固体又は固体の形態にある。 In another particular embodiment of the composition of the invention, the composition is in liquid or solid form. In another particular embodiment of the composition of the invention, the composition is in liquid, semi-solid or solid form.

本発明の別の態様によると、腸内使用のために、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物が提供される。本発明の別の態様によると、経腸使用又は局所使用のための、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物が提供される。 According to another aspect of the invention there is provided a polymersome of the invention or a composition of the invention for enteral use. According to another aspect of the invention there is provided a polymersome of the invention or a composition of the invention for enteral or topical use.

本発明の別の態様によると、局所使用のための、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物が提供される。 According to another aspect of the invention there is provided a polymersome of the invention or a composition of the invention for topical use.

別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、アンモニアを除去する際に使用するためのものである。 According to another aspect, the polymersomes of the invention or the compositions of the invention are for use in removing ammonia.

別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、アンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を除去する際に使用するためのものである。 According to another aspect, the polymersomes of the invention or compositions of the invention are for use in removing ammonia methylated analogues (eg, TMA).

本発明のポリマーソーム又は組成物は、アンモニア若しくはアンモニアメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状、好ましくは高アンモニア血症又はトリメチルアミン尿症の治療に使用するためのものである。 The polymersomes or compositions of the invention are for use in the treatment of diseases or disorders associated with ammonia or ammonia-methylated analogues, or symptoms thereof, preferably hyperammonemia or trimethylaminuria.

別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、高アンモニア血症の治療に使用するためのものである。 According to another aspect, the polymersomes of the invention or the compositions of the invention are for use in treating hyperammonemia.

別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、それを必要とする対象におけるトリメチルアミン尿症若しくはその症状又はＴＭＡ関連心血管疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連腎疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連細菌性膣炎若しくはその症状の治療に使用するためのものである。 According to another aspect, the polymersome of the invention or the composition of the invention is used for treating trimethylaminuria or a symptom thereof or TMA-associated cardiovascular disease or a symptom thereof or TMA-associated renal disease or a symptom thereof or a subject in need thereof. For use in the treatment of TMA-associated bacterial vaginosis or symptoms thereof.

使用するためのポリマーソームの特定の実施形態において、トリメチルアミン尿症の症状及び／又は細菌性膣炎の症状は、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭である。 In certain embodiments of the polymersomes for use, the symptom of trimethylaminuria and/or the symptom of bacterial vaginosis is malodor (e.g., from the skin and/or urine and/or breath and/or vagina). be.

別の態様において、それを必要とする対象に、ポリマーソーム又は組成物を（例えば、経腸又は局所）投与することを含む本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物を使用する方法が提供される。別の態様において、それを必要とする対象への（例えば、経腸又は局所）投与のための本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物の使用が提供される。別の態様において、薬剤としての本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物の使用が提供される。 In another aspect, methods of using the polymersomes of the invention or compositions of the invention are provided comprising administering (e.g., enterally or topically) the polymersomes or compositions to a subject in need thereof. be. In another aspect, use of a polymersome of the invention or a composition of the invention for administration (eg, enteral or topical) to a subject in need thereof is provided. In another aspect there is provided the use of a polymersome of the invention or a composition of the invention as a medicament.

別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、アンモニアを除去するための（薬剤の製造のための）ものである。別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、それを必要とする対象におけるアンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を除去するための（薬剤の製造のための）ものである。別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、それを必要とする対象におけるアンモニア若しくはアンモニアメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状、及び好ましくは、高アンモニア血症又はトリメチルアミン尿症、より好ましくは高アンモニア血症の治療のため（薬剤の製造のため）のものである。別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、それを必要とする対象におけるトリメチルアミン尿症若しくはその症状又はＴＭＡ関連心血管疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連腎疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連細菌性膣炎若しくはその症状の治療のため（薬剤の製造のため）のものである。上記の方法（複数可）又は使用（複数可）の特定の実施形態において、トリメチルアミン尿症の症状及び／又は細菌性膣炎の症状は、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭である。 According to another aspect, the method(s) or use(s) described above is for removing ammonia (for the manufacture of a medicament). According to another aspect, the above method(s) or use(s) is used for removing ammonia methylated analogues (e.g., TMA) in a subject in need thereof (for the manufacture of a medicament). ). According to another aspect, the method(s) or use(s) described above are used in a subject in need thereof for treating a disease or disorder associated with ammonia or an ammonia-methylated analogue, or a symptom thereof, and preferably It is for the treatment of hyperammonemia or trimethylaminuria, more preferably hyperammonemia (for the manufacture of a drug). According to another aspect, the method(s) or use(s) described above is used for the treatment of trimethylaminuria or a symptom thereof or TMA-related cardiovascular disease or a symptom thereof or TMA-related renal disease or a symptom thereof in a subject in need thereof. For the treatment of symptoms or TMA-associated bacterial vaginosis or its symptoms (for the manufacture of a drug). In certain embodiments of the above method(s) or use(s), the symptoms of trimethylaminuria and/or the symptoms of bacterial vaginosis are (e.g., cutaneous and/or urinary and/or respiratory and/or or from the vagina).

本発明のさらに別の態様によると、本発明のポリマーソームを作製する方法であって、（ａ）有機溶媒、好ましくは水非混和性又は部分的水混和性有機溶媒にＰＳとＰＥＯのブロックコポリマーを溶解して、コポリマー含有有機相を形成すること；（ｂ）ポリマーソームを形成するために、酸含有水相とコポリマー含有有機溶媒相を混合すること；及び（ｃ）有機溶媒を除去すること、を含む方法が提供される。 According to yet another aspect of the invention, a method of making the polymersomes of the invention comprises: (a) block copolymers of PS and PEO in an organic solvent, preferably a water-immiscible or partially water-miscible organic solvent; to form a copolymer-containing organic phase; (b) mixing an acid-containing aqueous phase and a copolymer-containing organic solvent phase to form polymersomes; and (c) removing the organic solvent. is provided.

本発明の方法の特定の実施形態において、該水相は、５０～７００ｍＭの酸を含む。 In certain embodiments of the methods of the invention, the aqueous phase comprises 50-700 mM acid.

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象においてアンモニアを除去するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。 In another aspect, the invention provides a kit comprising a polymersome or composition as described above for removing ammonia in a subject in need thereof, and instructions for using the polymersome or composition. .

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象における高アンモニア血症を治療するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。 In another aspect, the invention provides a kit comprising a polymersome or composition as described above and instructions for using the polymersome or composition for treating hyperammonemia in a subject in need thereof. I will provide a.

別の態様において、本発明は、アンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を除去するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。 In another aspect, the invention provides a kit comprising the polymersomes or compositions described above for removing ammonia-methylated analogues (e.g., TMA) and instructions for using the polymersomes or compositions. offer.

別の態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるトリメチルアミン尿症若しくはその症状又はＴＭＡ関連心血管疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連腎疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連細菌性膣炎又はその症状を治療するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。 In another aspect, the present invention provides trimethylaminuria or symptoms thereof or TMA-related cardiovascular disease or symptoms thereof or TMA-related kidney disease or symptoms thereof or TMA-associated bacterial vaginosis or symptoms thereof in a subject in need thereof. Kits are provided that include the polymersomes or compositions described above for treatment and instructions for using the polymersomes or compositions.

キットの特定の実施形態において、トリメチルアミン尿症の症状及び／又は細菌性膣炎の症状は、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭である。 In certain embodiments of the kit, the symptom of trimethylaminuria and/or the symptom of bacterial vaginosis is malodor (eg, from skin and/or urine and/or breath and/or vagina).

本発明の他の目的、利点及び特徴は、添付の図面を参照して、単なる例として与えられる以下のその具体的な実施形態の非限定的な説明を読めばより明らかになるであろう。 Other objects, advantages and features of the present invention will become more apparent on reading the following non-limiting description of specific embodiments thereof, given by way of example only, with reference to the accompanying drawings.

膜水和法を用いて調製した膜貫通ｐＨ勾配リポソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。Graph showing in vitro ammonia uptake of transmembrane pH gradient liposomes prepared using the membrane hydration method (n=3, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．７のＰＢＤ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。Transmembrane pH-gradient PBD-b-PEO polymersomes with a PBD/PEO number-average Mw ratio of about 1.7 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent. (n=3, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．４のＰＤＭＳ／ＰＭＯＸＡ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。transmembrane pH gradient PMOXA-b-PDMS-b with a PDMS/PMOXA number average Mw ratio of about 2.4 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent - Graph showing in vitro ammonia uptake of PMOXA polymersomes (n=3, mean and standard deviation). 膜水和法を用いて調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。Graph showing in vitro ammonia uptake of transmembrane pH-gradient PS-b-PEO polymersomes with PS/PEO number-average Mw ratios of about 1.3 or 2.5 prepared using the membrane hydration method (n = 3, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。Transmembrane pH-gradient PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number-average Mw ratio of about 1.0 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent. (n=3, mean and standard deviation) in vitro ammonia uptake at high bile salt concentrations. 有機溶媒としてジクロロメタン又はトルエンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３～２．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。A transmembrane pH gradient PS with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 to 2.8 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase and an aqueous acidic phase using dichloromethane or toluene as the organic solvent -b-PEO polymersomes in vitro ammonia uptake at high bile salt concentrations (n=3, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約３．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。Transmembrane pH-gradient PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number-average Mw ratio of about 3.8 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent. (n=3, mean and standard deviation) in vitro ammonia uptake at high bile salt concentrations. 有機溶媒としてクロロホルムを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。transmembrane pH gradient PS-b-PEO having a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3, prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase and an aqueous acidic phase, using chloroform as the organic solvent; Graph showing in vitro ammonia uptake at high bile salt concentrations (n=3, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、低浸透圧及び高浸透圧条件下でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。transmembrane pH gradient PS-b with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 or 2.5, prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent - PEO polymersomes are graphs showing in vitro ammonia uptake under hypotonic and hypertonic conditions (n=3, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、消化酵素の存在下でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。Transmembrane pH-gradient PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number-average Mw ratio of about 2.5 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent. (n=3, mean and standard deviation) in vitro ammonia uptake in the presence of digestive enzymes. 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高カリウム濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。Transmembrane pH-gradient PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent. is a graph showing in vitro ammonia uptake at high potassium concentrations of (n=3, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用い、様々な濃度の酸を用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３～４、平均値及び標準偏差）。transmembrane pH with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent and various concentrations of acid Figure 10 is a graph showing in vitro ammonia uptake of gradient PS-b-PEO polymersomes (n=3-4, mean and standard deviation). 有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．４又は２．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度で、Ｏ／Ｗ乳濁液での前暴露後の、インビトロＴＭＡ取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。transmembrane pH gradient PS-b with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.4 or 2.0 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent - PEO polymersomes in vitro TMA uptake after pre-exposure with O/W emulsion at high bile salt concentrations (n=3, mean and standard deviation).

本発明は、アンモニア及び／又はそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を捕捉するための膜貫通ｐＨ勾配を有するポリマーソーム、該ポリマーソームを含む組成物、該ポリマーソームを作製するためのプロセス並びにこれらのポリマーソーム及び組成物の使用を包含する。 The present invention provides polymersomes having transmembrane pH gradients for trapping ammonia and/or its methylated analogues (e.g., TMA), compositions comprising said polymersomes, processes for making said polymersomes and Uses of these polymersomes and compositions are included.

ポリマーソーム
ポリマーソームは小胞であり、その二重膜は合成コポリマーから構成されている。それらは、レーザー回折によって決定されるように、５０ｎｍ～１００μｍ又はそれ以上の範囲、特定の実施形態において１００ｎｍ～４０μｍの範囲の平均直径を有する。１００ｎｍ～４０μｍと変動する平均直径を有する本発明の被試験ポリマーソームは、効果的にアンモニアをカプセル化することができたが、４０μｍ超の直径を有するポリマーソームはまた効果的であり得ないと考える理由はない。 Polymersomes Polymersomes are vesicles whose double membrane is composed of synthetic copolymers. They have average diameters ranging from 50 nm to 100 μm or more, in certain embodiments from 100 nm to 40 μm, as determined by laser diffraction. Tested polymersomes of the present invention with average diameters varying from 100 nm to 40 μm were able to effectively encapsulate ammonia, although polymersomes with diameters greater than 40 μm may also not be effective. No reason to think.

本発明のポリマーソームは、非生分解性両親媒性ブロックコポリマーを含み、有機溶媒を用いて調製される。 The polymersomes of the invention comprise non-biodegradable amphiphilic block copolymers and are prepared using organic solvents.

本発明の作用機序は、ポリマーソーム膜全域のｐＨ勾配に基づく。水性ポリマーソームコア中に含有される酸性剤は、腸及び皮膚における生理学的ｐＨとは異なる（より低い）ｐＨを有する。したがって、アンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）は、それらの荷電していない状態でポリマーソームの疎水性ポリマー膜を通って拡散し、その後、内部区画内でそのプロトン化（イオン化）状態（例えば、アンモニアの場合にはアンモニウム）で捕捉することができる。アンモニア及びＴＭＡは、主に腸及び皮膚のｐＨでそのプロトン化状態で存在するが、ごく一部が常にその非イオン化状態にある。この画分は、ポリマーソーム中に拡散し、ポリマーソーム内にそのプロトン化状態で捕捉することができ、この結果、平衡に変わり、小胞内により多くのアンモニア及びＴＭＡをもたらす。 The mechanism of action of the present invention is based on a pH gradient across the polymersome membrane. The acidic agent contained in the aqueous polymersome core has a different (lower) pH than the physiological pH in the intestine and skin. Thus, ammonia and its methylated analogues (e.g., TMA) diffuse through the hydrophobic polymer membrane of the polymersome in their uncharged state and then within their protonated (ionized) state within the internal compartment. (eg, ammonium in the case of ammonia). Ammonia and TMA exist primarily in their protonated state at intestinal and skin pH, but a small portion is always in their non-ionized state. This fraction diffuses into the polymersome and can be trapped in its protonated state within the polymersome, resulting in a shift in equilibrium, resulting in more ammonia and TMA within the vesicle.

したがって、本明細書で使用する「アンモニアを捕捉するための膜貫通ｐＨ勾配」の性質及び／又は「アンモニア及び／又はそのメチル化類似体を捕捉するための膜貫通ｐＨ勾配」は、腸内及び皮膚上で遭遇する状態を模倣する媒体に希釈した場合に、アンモニア（及び／又はそのメチル化類似体）を隔離する本発明のポリマーソームの能力を指す。 Thus, the properties of the "transmembrane pH gradient for trapping ammonia" and/or the "transmembrane pH gradient for trapping ammonia and/or its methylated analogues" as used herein are the intestinal and Refers to the ability of the polymersomes of the invention to sequester ammonia (and/or its methylated analogues) when diluted in a medium that mimics the conditions encountered on the skin.

本明細書で使用する用語「アンモニアメチル化類似体」は、そのように限定されないが、ＴＭＡ及びＤＭＡを指す。特定の実施形態において、それはＴＭＡを指す。 As used herein, the term "ammonia-methylated analog" refers to, but is not limited to, TMA and DMA. In certain embodiments, it refers to TMA.

ブロックコポリマー
「ポリマー」は、連結されたモノマー単位を含む巨大分子である。モノマー単位は、単一の種類（均質）、又は様々な種類（異種）のものであり得る。２種以上の異なるモノマーが共に結合して、重合する場合、その成果物はコポリマーと呼ばれる。別の種類の２以上のモノマー（別のブロック）に共有結合した単一種の２以上のモノマー（ブロック）の配列で作られたコポリマーは、ブロックコポリマーと呼ばれる。共に共有結合した２つのブロックの種類で作られたコポリマーはジブロックと呼ばれ、３つのブロックの種類で作られたコポリマーはトリブロックなどと呼ばれる。ブロックコポリマーは、それらを生成するために使用される特定の合成の結果として、異なる末端基を含むことができる。 A block copolymer "polymer" is a macromolecule comprising linked monomeric units. The monomeric units can be of a single type (homogeneous) or different types (heterogeneous). When two or more different monomers are joined together and polymerized, the result is called a copolymer. A copolymer made up of an arrangement of two or more monomers of a single type (block) covalently linked to two or more monomers of another type (another block) is called a block copolymer. Copolymers made of two block types covalently bonded together are called diblocks, copolymers made of three block types are called triblocks, and so on. Block copolymers can contain different end groups as a result of the particular synthesis used to produce them.

本発明のポリマーソームは、ブロックコポリマーを含む。特定の実施形態において、本発明のブロックコポリマーは、ジブロック又はトリブロックコポリマーである。これらのブロックコポリマーは、両親媒性であり、少なくとも２つのポリマー、すなわち、芳香族の疎水性の高いポリマー（例えば、ポリ（スチレン））及び親水性非荷電非生分解性ポリマーで形成されている。より具体的な実施形態において、ブロックコポリマーは、ジブロックコポリマー（例えば、ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ））、又はトリブロックコポリマー（例えば、ＰＥＯ－ｂ－ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ））（すなわち、ＰＳ ＰＥＯブロックコポリマー））である。 Polymersomes of the invention include block copolymers. In certain embodiments, the block copolymers of the invention are diblock or triblock copolymers. These block copolymers are amphiphilic and are formed of at least two polymers: an aromatic, highly hydrophobic polymer (e.g., poly(styrene)) and a hydrophilic, uncharged, non-biodegradable polymer. . In more specific embodiments, the block copolymer is a diblock copolymer (eg, poly(styrene)-b-poly(ethylene oxide) (PS-b-PEO)) or a triblock copolymer (eg, PEO-b-PS -b-PEO)) (ie PS PEO block copolymer)).

「両親媒性」コポリマーは、親水性（水溶性）基と疎水性（水不溶性）基の両方を含有するものである。 An "amphiphilic" copolymer is one that contains both hydrophilic (water-soluble) and hydrophobic (water-insoluble) groups.

本明細書で使用する用語「非生分解性」は、胃腸状態で非加水分解性（例えば、胃腸管における酵素（例えば、プロテアーゼ、リパーゼ）による分解又は他の手段（例えば、ｐＨ）を介した分解に対する耐性）を意味する。 As used herein, the term "non-biodegradable" means non-hydrolyzable in gastrointestinal conditions (e.g., degradation by enzymes (e.g., proteases, lipases) in the gastrointestinal tract or via other means (e.g., pH)). resistance to decomposition).

疎水性非荷電非生分解性ポリマー
特定の実施形態において、本発明のコポリマーに使用される疎水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリ（エチルエチレン）（－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｃ２Ｈ５））ｎ－、すなわち、－（Ｃ４Ｈ８）ｎ－）又はポリ（スチレン）（－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｐｈ））ｎ－、すなわち、－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｃ６Ｈ５））ｎ－、すなわち－（Ｃ８Ｈ８）ｎ－）である。特定の実施形態において、疎水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリ（スチレン）である。本発明で使用するためのポリ（スチレン）には、非置換スチレンモノマー及び／又は置換／官能化スチレンモノマーが含まれ得る。具体的に別段の定義がない限り、したがって、用語「ポリ（スチレン）」は、もっぱら非置換のスチレンモノマー、置換モノマーと非置換モノマーの混合物、又はもっぱら置換モノマーを含むポリ（スチレン）を命名するために一般的に本明細書で使用される。スチレンモノマー上の１以上の置換基は、フェニル上及び／又は炭素上に置換基を含んでよく、その上にフェニルが結合しており、かつ／又はフェニル（例えば、二環系、三環系など、Ｃ３～Ｃ６アリール（複数可）及び／又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル（複数可）を含む）と多環誘導体を形成し得る。潜在的な置換基には、アルキル（Ｃ１～Ｃ７（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６又はＣ７、より具体的には、Ｃ１、Ｃ２又はＣ３）、アリール（Ｃ３～Ｃ６）、Ｃ３～Ｃ８のシクロアルキル、アリールアルキル、アセトキシル、アルコキシル（メトキシル、エトキシル、プロパノキシル、ブトキシルなど）、ハロゲン（Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆなど）、アミン、アミド、アルキルアミン、ＮＯ２が含まれる。置換基は、それ自体が置換されていてよい。そのように限定されないが、置換スチレンモノマーには、アセトキシスチレン、ベンズヒドリルスチレン、ベンジルオキシメトキシスチレン、ブロモスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、クロロスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、フルオロスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、ｔｅｒｔ－ブトキシスチレン、ｔｅｒｔ－ブチルスチレン、クロロメチルスチレン、ジクロロスチレン、ジフルオロスチレン、ジメトキシスチレン、ジメチルスチレン、ジメチルビニルベンジルアミン、ジフェニルメチルペンテン、（ジフェニルホスフィノ）スチレン、エトキシスチレン、イソプロペニルアニリン、イソプロペニル－α，α－ジメチルベンジルイソシアネート、［Ｎ－（メチルアミノエチル）アミノメチル］スチレン、メチルスチレン、ニトロスチレン、ペンタフルオロフェニル、４－ビニル安息香酸、ペンタフルオロスチレン、（トリフルオロメチル）スチレン（２－、３－又は４－）、トリメチルスチレン、ビニルアニリン（３－又は４－）、ビニルアニソール、ビニル安息香酸（３－、４－）、ビニルベンジルクロリド、（ビニルベンジル）トリメチルアンモニウムビニルビフェニル、４－ビニルベンゾシクロブテン（４－など）、ビニルアントラセン（９－など）、２－ビニルナフタレン、ビニルビフェニル（３－、４－など）などが含まれる。特定の実施形態において、置換スチレンモノマーは、アルキルスチレン（例えば、メチルスチレン）又はｔｅｒｔ－ブチルスチレンである。一実施形態において、ＰＳは、少なくとも１つの置換スチレンモノマーを含む。置換基には、非イオン性基（例えば、メチル基又はｔｅｒｔ－ブチル基）であり得る。別の特定の実施形態において、ポリ（スチレン）中のスチレンモノマーは置換されていない。 Hydrophobic, Uncharged, Non-Biodegradable Polymer In certain embodiments, the hydrophobic, uncharged, non-biodegradable polymer used in the copolymers of the invention is poly(ethylethylene)(--(CH 2 --CH(C 2 H 5 )) n —, ie —(C 4 H 8 ) n —) or poly(styrene)(—(CH 2 —CH(Ph)) n —, ie —(CH 2 —CH(C 6 H 5 )) n -, ie -(C 8 H 8 ) n -). In certain embodiments, the hydrophobic, uncharged, non-biodegradable polymer is poly(styrene). Poly(styrene) for use in the present invention may include unsubstituted styrene monomers and/or substituted/functionalized styrene monomers. Unless specifically defined otherwise, the term "poly(styrene)" thus designates poly(styrene) containing exclusively unsubstituted styrene monomers, a mixture of substituted and unsubstituted monomers, or exclusively substituted monomers. is generally used herein for The one or more substituents on the styrene monomer may include substituents on the phenyl and/or carbon to which the phenyl is attached and/or phenyl (e.g. bicyclic, tricyclic such as C3-C6 aryl(s) and/or C3-C6 cycloalkyl(s)) to form polycyclic derivatives. Potential substituents include alkyl (C1-C7 (C1, C2, C3, C4, C5, C6 or C7, more particularly C1, C2 or C3), aryl (C3-C6), C3- C8 cycloalkyl, arylalkyl, acetoxyl, alkoxyl (methoxyl, ethoxyl, propanoxyl, butoxyl , etc.), halogens (Br, Cl, F, etc.), amines, amides, alkylamines, NO2. Substituted styrene monomers include, but are not so limited to, acetoxystyrene, benzhydrylstyrene, benzyloxymethoxystyrene, bromostyrene (2-, 3-, 4- or alpha), chloro Styrene (2-, 3-, 4- or alpha), fluorostyrene (2-, 3-, 4- or alpha), tert-butoxystyrene, tert-butylstyrene, chloromethylstyrene, dichlorostyrene, difluorostyrene, dimethoxy Styrene, dimethylstyrene, dimethylvinylbenzylamine, diphenylmethylpentene, (diphenylphosphino)styrene, ethoxystyrene, isopropenylaniline, isopropenyl-α,α-dimethylbenzyl isocyanate, [N-(methylaminoethyl)aminomethyl] Styrene, methylstyrene, nitrostyrene, pentafluorophenyl, 4-vinylbenzoic acid, pentafluorostyrene, (trifluoromethyl)styrene (2-, 3- or 4-), trimethylstyrene, vinylaniline (3- or 4- ), vinylanisole, vinylbenzoic acid (3-, 4-), vinylbenzyl chloride, (vinylbenzyl)trimethylammonium vinylbiphenyl, 4-vinylbenzocyclobutene (4-, etc.), vinylanthracene (9-, etc.), 2 - vinylnaphthalene, vinylbiphenyl (3-, 4-, etc.), etc. In certain embodiments, the substituted styrene monomer is an alkylstyrene (eg, methylstyrene) or tert-butylstyrene. , PS comprises at least one substituted styrene monomer.The substituent can be a non-ionic group, such as a methyl group or a tert-butyl group.In another specific embodiment, in poly(styrene) of the styrene monomers are not substituted.

親水性非荷電非生分解性ポリマー
本発明のブロックコポリマー中のポリ（スチレン）と共に使用することができる親水性非荷電非生分解性ポリマーには、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（エチルオキサゾリン）、ポリ（メチルオキサゾリン）、及びオリゴエチレングリコールアルキルアクリレートのポリマーが含まれる。特定の実施形態において、親水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリエチレンオキシドである。 Hydrophilic, Uncharged, Non-Biodegradable Polymers Hydrophilic, uncharged, non-biodegradable polymers that can be used with the poly(styrene) in the block copolymers of the present invention include poly(ethylene oxide), poly(N-vinylpyrrolidone). , poly(ethyloxazoline), poly(methyloxazoline), and polymers of oligoethylene glycol alkyl acrylates. In certain embodiments, the hydrophilic, uncharged, non-biodegradable polymer is polyethylene oxide.

本発明における使用のためのポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）は、一般式：（－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－、すなわち、－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ－）を有し、非置換及び置換／官能化エチレンオキシドモノマーを含む。したがって、具体的に特に定義しない限り、用語「ポリ（エチレンオキシド）」又はＰＥＯは、もっぱら非置換のエチレンオキシドモノマー、置換モノマーと非置換モノマーの混合物又はもっぱら置換モノマーを含むＰＥＯを命名するために本明細書で一般的に使用される。一実施形態において、ＰＥＯは、少なくとも１つの置換エチレンオキシドモノマーを含む。別の実施形態において、エチレンオキシドモノマーは、置換されていない。 Poly(ethylene oxide) (PEO) for use in the present invention has the general formula: (—(O—CH 2 —CH 2 ) n —, i.e., —(C 2 H 4 O) n —), Includes unsubstituted and substituted/functionalized ethylene oxide monomers. Thus, unless specifically defined otherwise, the term "poly(ethylene oxide)" or PEO is used herein to designate a PEO comprising exclusively unsubstituted ethylene oxide monomer, a mixture of substituted and unsubstituted monomers or exclusively substituted monomers. commonly used in writing. In one embodiment, the PEO comprises at least one substituted ethylene oxide monomer. In another embodiment, the ethylene oxide monomer is unsubstituted.

ポリマーの割合
ＰＳとＰＥＯのブロック（例えば、ジブロックＰＳ－ｂ－ＰＥＯ又はトリブロックＰＥＯ－ｂ－ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ）の分子量は、二重層の構造及び安定性が保持される限り、変更することができる。本発明者らは、安定したＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、１．０より高く、４未満のＰＳ／ＰＥＯ数平均分子量比（例えば、実施例６～１３を参照）を形成することを見出した。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１より高く、約３．９以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は約１．３以上、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．８以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．１未満である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．７以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．７以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．６以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．６以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．５以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．５以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．４以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．４以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．３以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．３以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．２以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．２以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．１以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．１以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．０以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．０以下である。 The polymer proportions PS and the molecular weight of the PEO block (eg, diblock PS-b-PEO or triblock PEO-b-PS-b-PEO) are varied as long as bilayer structure and stability are maintained. be able to. The inventors have found that stable PS PEO polymersomes form PS/PEO number average molecular weight ratios greater than 1.0 and less than 4 (see, eg, Examples 6-13). In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 4. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 4. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 4. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 4. In another particular embodiment, the ratio is greater than about 1 and less than or equal to about 3.9. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.8. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.7. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.7. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.7. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.7. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.7. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.6. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.6. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.6. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.6. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.6. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.5. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.5. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.5. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.5. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.5. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.4. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.4. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.4. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.4. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.4. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.3. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.3. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.3. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.3. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.3. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.2. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.2. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.2. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.2. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.2. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 3.2. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3.1. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3.1. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3.1. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3.1. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than 3. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than 3. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than 3. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than 3. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than or equal to about 2.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than or equal to about 2.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.9. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.1 and less than or equal to about 2.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.2 and less than or equal to about 2.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.8. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.7. In another particular embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.7. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.7 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.7. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.7. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.6. In another particular embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.6. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.6 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.6. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.6. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.5. In another particular embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.5. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.5 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.5. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.5. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.4. In another specific embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.4. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.4 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.4. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.4. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.3. In another specific embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.3. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.3 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.3. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.3. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.2. In another particular embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.2. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.2 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.2. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.2. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.1. In another specific embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.1. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.1 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.1. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.1. In another particular embodiment, the ratio is greater than 1 and less than or equal to about 2.0. In another particular embodiment, the ratio is greater than about 1.1 and less than or equal to about 2.0. In certain embodiments, the ratio is from about 1.2 to about 2.0 or less. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.3 and less than or equal to about 2.0. In certain embodiments, the ratio is greater than or equal to about 1.4 and less than or equal to about 2.0.

上記の文の一般性を制限することなく、約４００ｇ／モル～２０，０００ｇ／モルの分子量を有するＰＥＯは、本発明に包含される。しかしながら、出願人らは、より高い分子量のＰＥＯは本発明で効果的に使用することができなかったことを予想する理由はない。分子量のより低いポリマーは、操作しやすいかもしれない。典型的には、ＰＥＯの分子量は、１０００～５０００ｇ／モルである。ＰＳ分子量は、上記の比を満たすように選択される。本発明によると、ＰＥＯが例えば、約２０，０００ｇ／モルの分子量を有する場合、ＰＳ分子量は約６０，０００ｇ／モル未満である。 Without limiting the generality of the above sentence, PEOs with molecular weights from about 400 g/mole to 20,000 g/mole are included in the present invention. However, Applicants have no reason to expect that higher molecular weight PEO could not be effectively used in the present invention. Lower molecular weight polymers may be easier to manipulate. Typically, the molecular weight of PEO is between 1000 and 5000 g/mol. The PS molecular weight is selected to satisfy the above ratios. According to the present invention, the PS molecular weight is less than about 60,000 g/mol when the PEO has a molecular weight of, for example, about 20,000 g/mol.

疎水性非荷電非生分解性ポリマー＋親水性非荷電非生分解性ポリマー（ジブロックコポリマー又はトリブロックコポリマー（例えば、ＰＳ－ｂ－ΡΕΟコポリマー又はＰＥＯ－ｂ－ＰＳ－ｂ－ΡΕΟコポリマー））で作られたポリマーソームの特性
この仮説に限定されないが、小胞膜内の高度に疎水性のポリマー（例えば、パイスタッキング相互作用を行う能力を有する芳香族（例えば、ＰＳ））の強力な相互作用は、胃腸液並びに油及び界面活性剤などの局所製剤に含まれる賦形剤に対する耐性を提供すると考えられている。実際、脂質（リポソーム）で作られる小胞、又はポリ（ブタジエン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ；ポリ（ブタジエン）－ｂ－ポリ（エチレングリコール）、ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＧとしても知られる；及びポリ（２－メチルオキサゾリン）－ｂ－ポリ（ジメチルシロキサン）－ｂ－ポリ（２－メチルオキサゾリン）、ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡ）などの他の両親媒性ジブロックコポリマーは、単純緩衝液（例えば、実施例３を参照）でアンモニアを取り込むことができないか、又は単純緩衝液でアンモニアを取り込むことができるが、腸液を模倣する媒体（例えば、実施例１及び２を参照）ではそれらを隔離する性質を失う。 Hydrophobic non-charged non-biodegradable polymer + hydrophilic non-charged non-biodegradable polymer (diblock copolymer or triblock copolymer (e.g. PS-b-ΡΕΟ copolymer or PEO-b-PS-b-ΡΕΟ copolymer)) Properties of the engineered polymersomes Although not limited to this hypothesis, strong interactions of highly hydrophobic polymers within the vesicle membrane (e.g. aromatics (e.g. PS) with the ability to undergo pi-stacking interactions) is believed to provide resistance to gastrointestinal fluids and excipients contained in topical formulations such as oils and surfactants. In fact, vesicles made of lipids (liposomes) or as poly(butadiene)-b-poly(ethylene oxide) (PBD-b-PEO; poly(butadiene)-b-poly(ethylene glycol), PBD-b-PEG and other amphiphilic diblocks such as poly(2-methyloxazoline)-b-poly(dimethylsiloxane)-b-poly(2-methyloxazoline), PMOXA-b-PDMS-b-PMOXA) The copolymer either cannot take up ammonia in a simple buffer (see, e.g., Example 3), or can take up ammonia in a simple buffer, but in a medium that mimics intestinal fluids (e.g., Examples 1 and 2). ) lose their isolating properties.

ポリマーソームの調製方法
コポリマーの調製
コポリマーを作製するための任意の公知の方法を用いることができる。本明細書に記載の実施例で使用されるコポリマーは、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ社（ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ及びＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡ）及びＰｏｌｙｍｅｒ Ｓｏｕｒｃｅ社（ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ）から購入した。 Method for preparing polymersomes
Preparation of Copolymers Any known method for making copolymers can be used. The copolymers used in the examples described herein were purchased from Advanced Polymer Materials (PS-b-PEO and PMOXA-b-PDMS-b-PMOXA) and Polymer Source (PBD-b-PEO). .

ポリマーソームの調製
コポリマーを有機溶媒に溶解し、有機相を形成し、後者を酸性水溶液（例えば、クエン酸）（水相）と混合する。そのように限定されないが、混合は、水相中のポリマーを微細分散させ、その後、安定したポリマーソームを形成すると考えられる。混合工程は、異なる技術を介して行うことができる。例えば、水中油型（ｏ／ｗ）乳濁液（すなわち、酸性水溶液（すなわち、水相）中のポリマー含有有機溶媒相（すなわち、油相）、逆相蒸発、ナノ沈殿、又はダブル乳化の方法を用いて、ポリマー含有有機相と水相を混合することができる。 Preparation of polymersomes The copolymer is dissolved in an organic solvent to form an organic phase and the latter is mixed with an acidic aqueous solution (eg citric acid) (aqueous phase). Although not so limited, it is believed that the mixing finely disperses the polymer in the aqueous phase, which then forms stable polymersomes. The mixing step can be done via different techniques. For example, methods of oil-in-water (o/w) emulsion (i.e. polymer-containing organic solvent phase (i.e. oil phase) in acidic aqueous solution (i.e. water phase), reverse phase evaporation, nanoprecipitation, or double emulsification can be used to mix the polymer-containing organic phase and the aqueous phase.

ｏ／ｗ乳化法では、ポリマー含有有機溶媒を、しばらくの間、及び乳濁液を形成するのに十分な時間、超音波処理下で水性酸性相と混合する。以下の実施例において、水性相は、ポリマー含有有機溶媒相の添加前に３０分間、攪拌しながら有機溶媒で飽和させた。その後、ポリマー含有有機溶媒相を、以下の機械の特定のパラメータ：振幅７０、周期０．７５（ＵＰ２００Ｈ、２００Ｗ、２４ｋＨｚ、ヒールシャー超音波技術）を使用して、（超音波処理機によって生成される熱を低減するために）氷浴中で３分間、超音波処理下で酸含有水相に添加した。乳濁液を作製するための当技術分野で公知の任意の方法を用いることができる。超音波処理、並びに乳濁液を生成するのに適切な特定の超音波処理パラメータ及び時間の使用は、使用される乳化技術に依存する。乳濁液は、本発明の調製方法で安定である必要はない。 In the o/w emulsification method, the polymer-containing organic solvent is mixed with the aqueous acidic phase under sonication for some time and for a time sufficient to form an emulsion. In the examples below, the aqueous phase was saturated with the organic solvent with stirring for 30 minutes prior to the addition of the polymer-containing organic solvent phase. The polymer-containing organic solvent phase was then sieved (generated by a sonicator) using the following machine specific parameters: amplitude 70, period 0.75 (UP200H, 200 W, 24 kHz, Hielscher ultrasonic technology). It was added to the acid-containing aqueous phase under sonication for 3 minutes in an ice bath (to reduce heat build-up). Any method known in the art for making emulsions can be used. The use of sonication and the specific sonication parameters and times appropriate to produce an emulsion will depend on the emulsification technique used. Emulsions need not be stable in the method of preparation of the present invention.

逆相蒸発法で、ポリマー含有有機溶媒と酸含有水相を含む二相系を超音波処理すると、油中水型（ｗ／ｏ）乳濁液が形成する。粘性ゲルのような状態が形成されるまで、外側相を減圧下で蒸発させた。ポリマーソームは、ゲル状態の崩壊に際して形成する（Ｓｚｏｋａ及びＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ．ＰＮＡＳ １９７８；７５：４１９４－４１９８）。 Sonication of a two-phase system comprising a polymer-containing organic solvent and an acid-containing aqueous phase in a reverse-phase evaporation method results in the formation of a water-in-oil (w/o) emulsion. The external phase was evaporated under reduced pressure until a viscous gel-like state was formed. Polymersomes form upon disruption of the gel state (Szoka and Papahadjopoulos. PNAS 1978;75:4194-4198).

ナノ沈殿法では、ポリマーを、適切な有機溶媒に溶解し、そこへ酸含有水をゆっくりと添加した。 In the nanoprecipitation method, the polymer was dissolved in a suitable organic solvent to which acid-containing water was slowly added.

ダブル乳化法では、ポリマーソームは、酸含有水性内相を含有するｗ／ｏ／ｗダブル乳濁液、中間相の完全又は部分的に水不混和性のポリマー含有有機溶媒、及び水性外相中で形成する。 In the double emulsification method, polymersomes are produced in a w/o/w double emulsion containing an acid-containing internal aqueous phase, a completely or partially water-immiscible polymer-containing organic solvent in the middle phase, and an aqueous external phase. Form.

次いで、有機溶媒は、任意の公知の技術を用いてポリマーソームから除去される。溶媒は、対象による有害な溶媒摂取又は皮膚暴露を避けるために、投与前に除去される。そのように限定されないが、周囲圧力より低い圧力の印加、熱、濾過、クロスフロー濾過、透析、又はこれらの方法の組み合わせを用いて、溶媒を除去してもよい。 The organic solvent is then removed from the polymersomes using any known technique. Solvents are removed prior to administration to avoid harmful solvent ingestion or skin exposure by the subject. Although not so limited, solvent may be removed using application of sub-ambient pressure, heat, filtration, cross-flow filtration, dialysis, or a combination of these methods.

有機溶媒の除去後、ポリマーソームを（ポリマーソームの内外にある酸性水溶液と共に）そのまま使用し、非カプセル化媒体の組成を変更するために精製し、かつ／又はさらに従来の医薬乾燥手順（例えば、凍結乾燥、噴霧乾燥）により乾燥させることができる。乾燥工程は、保存及び輸送が容易である固体の剤形（粉末又はカプセル又は錠剤）の調製を可能にする。次いで、ポリマーソームを経口投与することが意図される場合は、乾燥ポリマーソームを水性媒体（例えば、水、ジュース）中に再分散させるか、又はそのまま（例えば、カプセル、錠剤）患者が摂取することができる。ポリマーソームを局所的に投与することが意図される場合は、ポリマーソームを、水溶液、ゲル、泡又はローション若しくはクリームなどの乳濁液などの任意の関連する局所製剤中に分散させることができる。全ての（そのまま、精製及び／又は乾燥された）そのような形態において、ポリマーソームコアは酸を含有する。胃腸管内又は皮膚上の製剤中にある場合、この酸はポリマーソームの膜貫通ｐＨ勾配を提供する。本発明のそのように形成されたポリマーソームは、コア内のｐＨ及び／又は浸透圧を調節するためにポリマーソームの調製中に添加することができる酸、潜在的には塩（すなわち、ナトリウム、カリウム又はカルシウムなどの対イオンで部分的に脱プロトン化された酸）を含有し、その水和物の形態では、ポリマーソームはさらに水を含有する。 After removal of the organic solvent, the polymersomes can be used as is (along with the acidic aqueous solution inside and outside the polymersomes), purified to alter the composition of the non-encapsulating medium, and/or further conventional pharmaceutical drying procedures (e.g., freeze drying, spray drying). The drying process allows the preparation of solid dosage forms (powder or capsules or tablets) that are easy to store and transport. If the polymersomes are intended to be administered orally, the dried polymersomes can then be redispersed in an aqueous medium (e.g. water, juice) or taken as is (e.g. capsules, tablets) by the patient. can be done. When the polymersomes are intended to be administered topically, they can be dispersed in any relevant topical formulation such as aqueous solutions, gels, foams or emulsions such as lotions or creams. In all such forms (neat, purified and/or dried) the polymersome core contains acid. When in formulations in the gastrointestinal tract or on the skin, this acid provides a transmembrane pH gradient for the polymersomes. The so-formed polymersomes of the present invention are characterized by the addition of acids, potentially salts (i.e., sodium, acid (partially deprotonated with a counterion such as potassium or calcium), and in its hydrated form, the polymersome additionally contains water.

ポリマーソームが水和される（すなわち、水性の酸性コアを含有する）場合は、そのコアのｐＨは、一般に約１～６（１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５又は６）である。特定の実施形態において、それは、約１～約５、約１～約４．５、約１～約４、約１．５～約５、約１．５～約４．５、約１．５～約４、約２～約５、約２～約４．５、約２～約４、約２．５～約５、約２．５～約４．５、約２．５～約４、約３～約５、約３～約４．５、及び約３～約５である。 When the polymersome is hydrated (ie, contains an aqueous acidic core), the pH of the core is generally about 1 to 6 (1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5 , 4, 4.5, 5, 5.5 or 6). In certain embodiments, it is about 1 to about 5, about 1 to about 4.5, about 1 to about 4, about 1.5 to about 5, about 1.5 to about 4.5, about 1.5 to about 4, about 2 to about 5, about 2 to about 4.5, about 2 to about 4, about 2.5 to about 5, about 2.5 to about 4.5, about 2.5 to about 4, about 3 to about 5, about 3 to about 4.5, and about 3 to about 5.

必ずしも、本発明のポリマーソームの安定性のために必要ではないが、それらはまた、架橋することができる。例えば、架橋剤のｐ－キシリレン－ジクロリド、１，４－ビス－クロロメチルジフェニル、モノクロロジメチルエーテル、ジメチルホルマール、トリス－（クロロメチル）－メシチレン、又はｐ，ｐ’－ビス－クロロメチル－１，４－ジフェニルブタンとのフリーデル・クラフツ反応を用いて、ポリ（スチレン）を架橋することができる（Ｄａｖａｎｋｏｖ及びＴｓｙｕｒｕｐａ，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ １９９０；１３：２７－４２）。 They can also be crosslinked, although not necessarily for the stability of the polymersomes of the invention. For example, the crosslinkers p-xylylene-dichloride, 1,4-bis-chloromethyldiphenyl, monochlorodimethylether, dimethylformal, tris-(chloromethyl)-mesitylene, or p,p'-bis-chloromethyl-1,4 -The Friedel-Crafts reaction with diphenylbutane can be used to crosslink poly(styrene) (Davankov and Tsyurupa, Reactive Polymers 1990; 13:27-42).

溶媒
本発明において使用される溶媒はコポリマーを溶解し、次いで、ポリマー含有溶媒は、酸性水相と混合される。混合工程の間に（例えば、ｏ／ｗ乳濁液）、ポリマーの微細分散物が水性相中に形成される。混合工程の後に、溶媒は、患者／対象が摂取しないことを確実にするために除去（例えば、蒸発）される。 Solvent The solvent used in the present invention dissolves the copolymer, and the polymer-containing solvent is then mixed with the acidic aqueous phase. During the mixing process (eg o/w emulsion) a fine dispersion of the polymer is formed in the aqueous phase. After the mixing step, the solvent is removed (eg, evaporated) to ensure that it is not ingested by the patient/subject.

約２％～約４０％（ｖ／ｖ）の濃度の溶媒相／水相比率を使用することができる。特定の実施形態において、溶媒相／水相比率は、約５％～３０％（ｖ／ｖ）である。別の特定で実施形態において、溶媒相／水相比率は、約５％～２０％（ｖ／ｖ）である。別の特定の実施形態において、溶媒相／水相比率は、約５％～１５％（ｖ／ｖ）である。別の特定の実施形態において、溶媒相／水相比率は、約１０％（ｖ／ｖ）である。特定の実施形態において、生じる乳濁液中の溶媒相／水相比率は、約９％（ｖ／ｖ）である。 Solvent phase/aqueous phase ratios of concentrations from about 2% to about 40% (v/v) can be used. In certain embodiments, the solvent phase/aqueous phase ratio is about 5% to 30% (v/v). In another particular embodiment, the solvent phase/aqueous phase ratio is about 5% to 20% (v/v). In another particular embodiment, the solvent phase/aqueous phase ratio is about 5% to 15% (v/v). In another particular embodiment, the solvent phase/aqueous phase ratio is about 10% (v/v). In certain embodiments, the solvent phase/aqueous phase ratio in the resulting emulsion is about 9% (v/v).

特定の実施形態において、溶媒は有機溶媒である。 In certain embodiments, the solvent is an organic solvent.

そのように限定されないが、該溶媒は、塩素化溶媒（例えば、ジクロロメタン、例えば、実施例５～６、８～１０、１２参照；又はクロロホルム、例えば、実施例７参照）、アレーン又はアレーン誘導体（例えば、トルエン、例えば、実施例６参照）、脂肪族溶媒又は脂肪族溶媒誘導体（例えば、ヘキサン、１－ヘキサノール）、ケトン又はケトン誘導体（例えば、２－ヘキサノン）、エーテル又はエーテル誘導体（例えば、ジエチルエーテル）、又はそれらの混合物（例えば、ｏ／ｗ乳濁液、ｗ／ｏ／ｗダブル乳濁液又は逆相蒸発技術を使用する場合）であり得る。 Although not so limited, the solvent may be a chlorinated solvent (e.g., dichloromethane, see e.g., Examples 5-6, 8-10, 12; or chloroform, e.g., see Example 7), an arene or an arene derivative ( eg toluene, see eg Example 6), aliphatic solvents or aliphatic solvent derivatives (eg hexane, 1-hexanol), ketones or ketone derivatives (eg 2-hexanone), ethers or ether derivatives (eg diethyl ether), or mixtures thereof (eg, when using o/w emulsion, w/o/w double emulsion or reverse phase evaporation techniques).

特定の実施形態において、ｏ／ｗ乳濁液を用いて、ポリマー含有有機相と水相を混合する場合、本発明に有用な溶媒は、水不混和性又は部分的水不混和性の有機溶媒である。そのように限定されないが、そのような溶媒には、例えば、ジクロロメタン、例えば、実施例５～６、８～１０、１２参照；又はクロロホルム、例えば、実施例７参照）、アレーン又はアレーン誘導体（例えば、トルエン、例えば、実施例６参照）、脂肪族溶媒又は脂肪族溶媒誘導体（例えば、ヘキサン、１－ヘキサノール）、ケトン又はケトン誘導体（例えば、２－ヘキサノン）、エーテル又はエーテル誘導体（例えば、ジエチルエーテル）、又はそれらの混合物が含まれる。 In certain embodiments, when an o/w emulsion is used to mix the polymer-containing organic and aqueous phases, solvents useful in the present invention include water-immiscible or partially water-immiscible organic solvents. is. Without being so limited, such solvents include, for example, dichloromethane, see for example Examples 5-6, 8-10, 12; or chloroform, see for example Example 7), arenes or arene derivatives (for example , toluene, see eg Example 6), aliphatic solvents or aliphatic solvent derivatives (eg hexane, 1-hexanol), ketones or ketone derivatives (eg 2-hexanone), ethers or ether derivatives (eg diethyl ether ), or mixtures thereof.

酸及び酸性溶液
ポリマーソームのコアにおける酸性溶液は、好ましくは、塩基性化合物（例えば、アンモニア、ＴＭＡ、ＤＭＡ）の高い保持のために、低ｐＨで高い緩衝能を有する。該酸は、動物に対して無毒であり、ポリマーソーム膜から透過しない（又は弱くしか透過しない）。 Acid and Acidic Solutions Acidic solutions in the core of polymersomes preferably have high buffering capacity at low pH due to high retention of basic compounds (eg, ammonia, TMA, DMA). The acid is non-toxic to animals and does not permeate (or only weakly permeate) polymersome membranes.

そのように限定されないが、ポリマーソームコアに包囲される酸は、（ｉ）クエン酸、イソクエン酸、リンゴ酸、酒石酸、又は乳酸などのヒドロキシ酸；（ｉｉ）酢酸などの小鎖脂肪酸；（ｉｉｉ）ウロン酸などの糖酸；（ｉｖ）マロン酸などのジカルボン酸；（ｖ）プロパン－１，２，３－トリカルボン酸又はアコニット酸などのトリカルボン酸；（ｖｉ）１，２，３，４－ブタンテトラカルボン酸などのテトラカルボン酸；（ｖｉｉ）１，２，３，４，５－ペンタンペンタカルボン酸などのペンタカルボン酸；（ｖｉｉｉ）ポリ（アクリル酸）又はポリ（メタクリル酸）などのポリマーポリ（カルボン酸）；（ｉｘ）エチレンジアミン四酢酸などのポリアミノカルボン酸；又は（ｘ）それらの少なくとも２つの組合せである。特定の実施形態において、クエン酸が使用される。上記の特定の酸は、特定の用量で、特定の薬理学的活性を有してよいが、本発明のポリマーソームで使用されるカプセル化された酸は、直接的な薬理学的機能又は撮像機能を発揮することを目的としないが、単に膜貫通ｐＨ勾配を作るために使用される。本発明は、それらがまた特定の薬理学的活性を有するか否かに関わらず、上記の酸のいずれか１種の使用を包含する。しかしながら、本発明の特定の実施形態又は態様に従って、該酸は、抗生物質、抗癌薬、抗高血圧薬、抗真菌薬、抗不安薬、抗炎症薬、免疫調節薬、抗ウイルス薬、又は脂質低下剤として知られる上記の酸のいずれか以外の酸ではあり得ない。 Without being so limited, acids enclosed in the polymersome core may include (i) hydroxy acids such as citric acid, isocitric acid, malic acid, tartaric acid, or lactic acid; (ii) small chain fatty acids such as acetic acid; (iv) dicarboxylic acids such as malonic acid; (v) tricarboxylic acids such as propane-1,2,3-tricarboxylic acid or aconitic acid; (vi) 1,2,3,4- (vii) pentacarboxylic acids such as 1,2,3,4,5-pentanepentacarboxylic acid; (viii) polymers such as poly(acrylic acid) or poly(methacrylic acid); (ix) a polyaminocarboxylic acid such as ethylenediaminetetraacetic acid; or (x) a combination of at least two thereof. In certain embodiments, citric acid is used. While the specific acids described above may have specific pharmacological activities at specific doses, the encapsulated acids used in the polymersomes of the invention may have direct pharmacological functions or imaging It is not intended to be functional, but is simply used to create a transmembrane pH gradient. The present invention encompasses the use of any one of the above acids, whether or not they also possess a particular pharmacological activity. However, according to certain embodiments or aspects of the invention, the acid is an antibiotic, an anticancer drug, an antihypertensive drug, an antifungal drug, an anxiolytic drug, an anti-inflammatory drug, an immunomodulatory drug, an antiviral drug, or a lipid It cannot be an acid other than one of the acids mentioned above known as lowering agents.

特定の実施形態において、本方法で使用される酸の濃度は、５０～７００ｍＭで変化し得る。クエン酸が使用される場合、５０～８００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのオスモル濃度で約１００ｍＭ～６００ｍＭのクエン酸溶液が最適に使用される（図１２参照）。別の特定の実施形態において、オスモル濃度は１００～７５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。別の特定の実施形態において、オスモル濃度は１００～７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。別の特定の実施形態において、オスモル濃度は１１５～７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。 In certain embodiments, the concentration of acid used in the method may vary from 50-700 mM. If citric acid is used, a citric acid solution of about 100 mM to 600 mM at an osmolality of 50-800 mOsmol/kg is optimally used (see Figure 12). In another particular embodiment, the osmolality is 100-750 mOsmol/kg. In another particular embodiment, the osmolality is 100-700 mOsmol/kg. In another particular embodiment, the osmolality is 115-700 mOsmol/kg.

コア内の酸は、ポリマーソームが水和された場合に、１～６のｐＨを生じる濃度で存在する。 The acid in the core is present at a concentration that produces a pH of 1-6 when the polymersome is hydrated.

使用方法
本発明の膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソームは、それを必要とする対象におけるアンモニア若しくはそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状（例えば、高アンモニア血症（経腸）又はトリメチルアミン尿症（経腸又は局所））の腸内治療（例えば、経口、結腸、直腸）、又は局所治療に使用することができる。 Methods of Use The transmembrane pH gradient polymersomes of the present invention can be used to treat diseases or disorders associated with ammonia or its methylated analogs, or symptoms thereof (e.g., hyperammonemia (enteral) or trimethylamine) in subjects in need thereof. It can be used for enteral (eg, oral, colonic, rectal) or topical treatment of urinary disease (enteral or topical).

本明細書で使用する「アンモニア若しくはアンモニアメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状」には、高アンモニア血症（例えば、肝機能障害によって誘導される）、肝性脳症、肝硬変、急性肝不全、急性増悪慢性肝不全、門脈大循環バイパス、門脈大循環シャント、薬物誘発性高アンモニア血症、肝アンモニア代謝の先天性欠損症（原発性高アンモニア血症）、肝アンモニア代謝に影響を与える先天性欠損症（二次性高アンモニア血症）、トリメチルアミン尿症、ＴＭＡ関連心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、冠状動脈疾患、心筋梗塞）、ＴＭＡ関連腎疾患（例えば、腎臓の尿細管間質性線維症及び機能不全、腎不全、慢性腎疾患関連死亡）又はＴＭＡ関連細菌性膣炎、若しくはその症状が含まれる。アンモニア若しくはそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害に関連して本明細書で使用する用語「その症状」には、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭が含まれる。 As used herein, "ammonia or ammonia-methylated analog associated diseases or disorders, or symptoms thereof" include hyperammonemia (e.g., induced by liver dysfunction), hepatic encephalopathy, cirrhosis, Acute liver failure, acute exacerbation chronic liver failure, portosystemic bypass, portosystemic shunt, drug-induced hyperammonemia, congenital deficiency of hepatic ammonia metabolism (primary hyperammonemia), hepatic ammonia metabolism birth defects (secondary hyperammonemia), trimethylaminuria, TMA-related cardiovascular disease (eg, atherosclerosis, peripheral artery disease, coronary artery disease, myocardial infarction) Included are renal disease (eg, renal tubulointerstitial fibrosis and dysfunction, renal failure, chronic renal disease-related mortality) or TMA-associated bacterial vaginosis, or symptoms thereof. As used herein in relation to diseases or disorders associated with ammonia or its methylated analogues, the term "symptoms thereof" includes (e.g., from the skin and/or urine and/or breath and/or vagina) Contains odors.

ポリマーソームは、異なる剤形で対象に経腸投与することができ、例えば、水性媒体（例えば、水、ジュース）に分散するか、又はそのまま対象が乾燥形態（例えば、カプセル、錠剤）で摂取することができる。ポリマーソームは、糞により***される。ポリマーソームはまた、異なる剤形で対象に局所投与することができ、例えば、水性溶液、泡、ゲル、又は乳濁液（例えば、ｏ／ｗ又はｗ／ｏ）などの局所製剤（例えば、ローション、クリーム）中に分散させることができる。 Polymersomes can be enterally administered to a subject in different dosage forms, e.g., dispersed in an aqueous medium (e.g., water, juice), or taken as is by the subject in dry form (e.g., capsules, tablets). be able to. Polymersomes are excreted by feces. Polymersomes can also be topically administered to a subject in different formulations, for example topical formulations such as aqueous solutions, foams, gels, or emulsions (e.g. o/w or w/o) (e.g. lotions). , cream).

本明細書で使用する用語「対象」又は「それを必要とする対象」は、本発明の有効量のポリマーソーム又はその組成物の摂取から利益を得る対象を指す。それは、動物、哺乳動物、特定の実施形態においてヒトを指す。本発明の組成物はまた、獣医学的用途に使用され、ペット又は他の動物（例えば、ネコ、イヌ、ウマなどのペット；及び牛、魚、ブタ、家禽など）に使用され得る。特定の実施形態において、該対象は、（例えば、肝機能障害によって誘発される）高アンモニア血症を患っている。特定の実施形態において、該対象は、肝性脳症、肝硬変、急性肝不全、急性増悪慢性肝不全、門脈大循環バイパス、門脈大循環シャント、薬物誘発性高アンモニア血症、肝アンモニア代謝の先天的欠陥（原発性高アンモニア血症）、又は肝アンモニア代謝に影響を与える先天性欠損症（二次性高アンモニア血症）、又はそれらの任意の症状を患っている。別の特定の実施形態において、該対象は、トリメチルアミン尿症、ＴＭＡ関連心血管疾患、ＴＭＡ関連腎疾患、ＴＭＡ関連細菌性膣炎、又はそれらの任意の症状を患っている。 As used herein, the term "subject" or "subject in need thereof" refers to a subject who would benefit from ingestion of an effective amount of the polymersomes or compositions thereof of the present invention. It refers to animals, mammals, in certain embodiments humans. The compositions of the present invention may also be used in veterinary applications and may be used in pets or other animals (eg, pets such as cats, dogs, horses; and cattle, fish, pigs, poultry, etc.). In certain embodiments, the subject has hyperammonemia (eg, induced by liver dysfunction). In certain embodiments, the subject has hepatic encephalopathy, cirrhosis, acute liver failure, acute exacerbation chronic liver failure, portosystemic bypass, portosystemic shunt, drug-induced hyperammonemia, hepatic ammonia metabolism Suffering from a birth defect (primary hyperammonemia) or a birth defect affecting hepatic ammonia metabolism (secondary hyperammonemia), or any symptoms thereof. In another specific embodiment, the subject has trimethylaminuria, TMA-related cardiovascular disease, TMA-related kidney disease, TMA-related bacterial vaginosis, or any symptom thereof.

組成物
本発明のポリマーソームは、液体（例えば、液体懸濁液）、半固体（例えば、ローション若しくはクリームなどの乳濁液）又は固体形態（例えば、粉末、カプセル、錠剤、坐剤）として保存され得る。 Compositions Polymersomes of the present invention may be stored as liquids (e.g., liquid suspensions), semi-solids (e.g., emulsions such as lotions or creams), or solid forms (e.g., powders, capsules, tablets, suppositories). can be

本発明はまた、薬剤の調製におけるポリマーソーム及び／又は組成物の使用に関する。 The invention also relates to the use of polymersomes and/or compositions in the preparation of medicaments.

本発明はまた、本発明の上記のポリマーソームを含む医薬組成物に関する。 The present invention also relates to pharmaceutical compositions comprising the above polymersomes of the invention.

そのように限定されないが、本発明のポリマーソーム又はその組成物は、経腸経路（すなわち、胃腸管を介して）又は局所経路を介して投与され得る。例えば、経口経路が使用される場合は、該ポリマーソームは、例えば、錠剤、被覆錠剤、硬質若しくは軟質ゼラチンカプセル、又は懸濁液の形態であり得る。例えば、直腸／結腸内経路が使用される場合は、該ポリマーソームは、例えば、坐剤又は懸濁液の形態であり得る。例えば、局所経路が使用される場合は、該ポリマーソームは、ローション若しくはクリームなどの乳濁液（例えば、ｏ／ｗ又はｗ／ｏ）、ゲル及び泡、又は水溶液の形態であり得る。 Without being so limited, the polymersomes or compositions thereof of the present invention can be administered via the enteral route (ie, via the gastrointestinal tract) or via topical routes. For example, when the oral route is used, the polymersomes can be in the form of tablets, coated tablets, hard or soft gelatin capsules, or suspensions, for example. For example, where the rectal/intracolonic route is used, the polymersomes can be in the form of, for example, suppositories or suspensions. For example, when a topical route is used, the polymersomes can be in the form of emulsions such as lotions or creams (eg, o/w or w/o), gels and foams, or aqueous solutions.

本発明の組成物は、限定されないが、水性又は非水性溶液を含む薬学的に許容される担体を含有することができる。非水性溶媒の例としては、限定されないが、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、乳濁液などが挙げられる。水性担体には、限定されないが、水、アルコール、生理食塩水、及び緩衝液が含まれる。薬学的に許容される担体はまた、生理学的に許容される水性ビヒクル（例えば、糖溶液、生理食塩水）又は経腸若しくは局所経路に適する他の公知の担体を含むことができる。 Compositions of the invention can contain pharmaceutically acceptable carriers including, but not limited to, aqueous or non-aqueous solutions. Examples of non-aqueous solvents include, but are not limited to, propylene glycol, polyethylene glycol, emulsions, and the like. Aqueous carriers include, but are not limited to, water, alcohols, saline, and buffered solutions. Pharmaceutically acceptable carriers can also include physiologically acceptable aqueous vehicles (eg, sugar solutions, saline) or other known carriers suitable for the enteral or topical route.

錠剤、被覆錠剤、又は硬質ゼラチンカプセルの調製のために、本発明のポリマーソームは、任意の公知の薬学的に不活性の、無機若しくは有機賦形剤及び／又は担体と混合することができる。適切な賦形剤／担体の例としては、ラクトース、トウモロコシデンプン又はその誘導体、タルク又はステアリン酸若しくはその塩が挙げられる。 For the preparation of tablets, coated tablets, or hard gelatin capsules, the polymersomes of the invention can be mixed with any known pharmaceutically inert, inorganic or organic excipients and/or carriers. Examples of suitable excipients/carriers include lactose, corn starch or derivatives thereof, talc or stearic acid or salts thereof.

懸濁液の調製ために（ポリマーソームが水に溶解しないので、液体形態は懸濁液である）、使用され得る賦形剤には、例えば、水、ポリオール、サッカロース、転化糖及びグルコースが含まれ得る。 For the preparation of suspensions (liquid forms are suspensions since polymersomes do not dissolve in water), excipients that can be used include, for example, water, polyols, saccharose, invert sugar and glucose. can be

乳濁液の調製のために、本発明のポリマーソームは、任意の公知の薬学的に不活性な、無機若しくは有機の賦形剤及び／又は担体と混合することができる。適切な賦形剤／担体の例としては、水、界面活性剤（例えば、ポリソルベート、ソルビタンエステル、ラウリル硫酸ナトリウムなど）、油（例えば、鉱油又は植物油）が挙げられる。 For the preparation of emulsions, the polymersomes of the invention can be mixed with any known pharmaceutically inert, inorganic or organic excipients and/or carriers. Examples of suitable excipients/carriers include water, surfactants (eg, polysorbates, sorbitan esters, sodium lauryl sulfate, etc.), oils (eg, mineral or vegetable oils).

本発明の組成物はまた、防腐剤、安定剤、湿潤剤、甘味料、着色剤、着臭剤、浸透圧の変化のための塩、緩衝剤、又は抗酸化剤を含有し得る。それらはまた、他の治療活性剤を含有し得る。 The compositions of the present invention may also contain preservatives, stabilizers, wetting agents, sweeteners, coloring agents, flavoring agents, salts for altering osmotic pressure, buffering agents, or antioxidants. They may also contain other therapeutically active agents.

担体などの本発明の組成物の製造に使用される全ての賦形剤は、無毒であり、より一般的に薬学的に許容されることが前提である。薬学的に許容される担体、賦形剤などの本明細書で使用する「薬学的に許容される」は、本発明の特定の組成物が投与される対象にとって薬理学的に許容され、実質的に無毒であることを意味する。 It is assumed that all excipients used in preparing the compositions of the invention, such as carriers, are non-toxic and more generally pharmaceutically acceptable. "Pharmaceutically acceptable" as used herein, such as pharmaceutically acceptable carriers, excipients, etc., means pharmacologically acceptable to the subject to whom a particular composition of the invention is administered, means non-toxic.

併用療法
本発明のポリマーソームはまた、併用療法で、すなわち、同時若しくは連続投与のための少なくとも１種の他の活性剤又は療法と組み合わせて投与することができる。併用療法は、アンモニア又はそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状のための少なくとも１種の他の薬剤又は療法と組み合わせた本発明のポリマーソーム又は組成物を含むことができる。 Combination Therapy The polymersomes of the invention can also be administered in combination therapy, ie, combined with at least one other active agent or therapy for simultaneous or sequential administration. Combination therapy can include a polymersome or composition of the invention in combination with at least one other drug or therapy for a disease or disorder associated with ammonia or its methylated analogs, or a symptom thereof.

例えば、併用療法は、少なくとも１種の他の抗高アンモニア血症薬若しくは療法と組み合わせるか、又は高アンモニア血症を有する対象の疾患若しくは状態の少なくとも１種の他の症状の予防又は治療に使用される薬剤又は療法と組み合わせた本発明のポリマーソーム又は組成物を含むことができる。この文脈において、本発明のポリマーソーム又は組成物と組み合わせて（同時に又は連続的に）投与され得る活性成分又は療法の例としては、ラクツロース、リファキシミン、グリセロールフェニルブチレート、ラクチトール、分岐鎖アミノ酸、ネオマイシン、メトロニダゾール、プロバイオティクス、グルタミナーゼ阻害剤、Ｌ－オルニチン－Ｌ－アスパラギン酸、血液透析、腹膜透析、フェニル酪酸ナトリウム、ナトリウムフェニルアセテート／安息香酸ナトリウム、又はカルグルミン酸が挙げられる。 For example, combination therapy is combined with at least one other antihyperammonemic drug or therapy, or used to prevent or treat at least one other symptom of a disease or condition in a subject with hyperammonemia. The polymersomes or compositions of the invention can be included in combination with a drug or therapy for which treatment is desired. In this context, examples of active ingredients or therapies that may be administered in combination (simultaneously or sequentially) with the polymersomes or compositions of the invention include lactulose, rifaximin, glycerol phenylbutyrate, lactitol, branched chain amino acids, neomycin. , metronidazole, probiotics, glutaminase inhibitors, L-ornithine-L-aspartic acid, hemodialysis, peritoneal dialysis, sodium phenylbutyrate, sodium phenylacetate/sodium benzoate, or cargluminic acid.

別の例として、併用療法は、少なくとも１種の他の抗トリメチルアミン尿症剤若しくは療法と組み合わせるか、又はトリメチルアミン尿症を有する対象の疾患若しくは状態の少なくとも１種の他の症状の予防又は治療に使用される薬剤又は療法と組み合わせた本発明のポリマーソーム又は組成物を含むことができる。この文脈において、本発明のポリマーソーム又は組成物と組み合わせて（同時に又は連続的に）投与され得る活性成分又は療法の例としては、特定の経口適用される抗生物質（例えば、ネオマイシン、メトロニダゾール）、活性炭、酸性石鹸が挙げられる。 As another example, a combination therapy is combined with at least one other anti-trimethylaminuria agent or therapy, or for the prevention or treatment of at least one other symptom of a disease or condition in a subject with trimethylaminuria. The polymersomes or compositions of the invention can be included in combination with the drug or therapy used. In this context, examples of active ingredients or therapies that may be administered in combination (simultaneously or sequentially) with the polymersomes or compositions of the invention include certain orally applied antibiotics (e.g., neomycin, metronidazole), Activated charcoal, acid soap.

キット
本発明のポリマーソーム又は組成物の少なくとも１種及びそれらの使用説明書を含むキットも本発明の範囲内である。該キットはさらに、少なくとも１種の追加試薬、又は本発明のポリマーソームの１以上の追加の種類を含有することができる。キットは、典型的には、キットの内容の使用目的を示すラベルを含む。用語ラベルは、キット上又はキットと共に供給される、又はそうでなければキットに付属する任意の書き込み、又は記録物質を含む。該キットはさらに、１以上の容器（複数可）、試薬（複数可）、投与装置（複数可）を含み得る。 Kits Also within the scope of the invention are kits comprising at least one polymersome or composition of the invention and instructions for their use. The kit can further contain at least one additional reagent, or one or more additional types of polymersomes of the invention. Kits typically include a label indicating the intended use of the contents of the kit. The term label includes any written or recorded material supplied on or with the kit, or otherwise associated with the kit. The kit may further comprise one or more container(s), reagent(s), administration device(s).

投薬量
本発明のポリマーソーム又はその組成物が投与される投薬量は、年齢、（例えば、他の疾患又は状態の）対象が摂取する他の薬剤を含む多くの要因並びに他の臨床的に関連する要因に依存する。典型的には、単回用量内に含有される本発明のポリマーソーム又はその組成物の量は、著しい毒性を誘導することなく、アンモニア又はそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害又はその症状（例えば、高アンモニア血症、トリメチルアミン尿症）を効果的に治療する量である。 Dosage The dosage at which the polymersomes or compositions thereof of the invention are administered depends on many factors, including age, other medications taken by the subject (e.g., for other diseases or conditions), and other clinically relevant factors. depends on the factors Typically, the amount of the polymersomes or compositions thereof of the invention contained within a single dose is sufficient to treat diseases or disorders associated with ammonia or its methylated analogues, or symptoms thereof, without inducing significant toxicity. (eg, hyperammonemia, trimethylaminuria).

本発明のポリマーソーム又はその組成物の有効量はまた、直接測定され得る。有効量は、毎日又は毎週、又はその画分で与えられ得る。典型的には、ブロックコポリマーの質量で表される本発明のポリマーソームの用量は、１日あたり体重１ｋｇあたり約１ｍｇから最大約５００ｍｇの範囲（例えば、１日あたり体重１ｋｇあたり１ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、又は２５０ｍｇ）である。投薬量は、単一又は複数の投与計画で提供され得る。例えば、いくつかの実施形態において、有効量は、１日あたり約２５０ｍｇ～約５００ｍｇ、１日あたり約５００ｍｇ～約１０００ｍｇ、１日あたり約１ｇ、１日あたり約２～１２ｇ、１週間あたり約１４～約８６ｇの組成物などの範囲であり得る。 Effective amounts of polymersomes of the invention or compositions thereof can also be measured directly. An effective amount may be given daily or weekly, or a fraction thereof. Typically, doses of polymersomes of the invention, expressed in terms of mass of block copolymer, range from about 1 mg per kg body weight per day up to about 500 mg per kg body weight per day (e.g., 1 mg, 10 mg, 50 mg per kg body weight per day). , 100 mg, or 250 mg). Dosages may be provided in single or multiple dose regimens. For example, in some embodiments, the effective amount is about 250 mg to about 500 mg per day, about 500 mg to about 1000 mg per day, about 1 g per day, about 2-12 g per day, about 14 mg per week. to about 86 g of composition, and so on.

本発明は、本明細書に記載の割合で、上記有機相と水相を混合する技術を使用して、本明細書に記載の溶媒及び酸又は酸性溶液を用いて調製された本明細書に記載のブロックコポリマー、又はそれを含む組成物の任意の組み合わせを包含する。 The present invention relates to the present invention prepared using a solvent and an acid or acidic solution as described herein using the technique of mixing the organic and aqueous phases in the proportions described herein. Any combination of the described block copolymers or compositions comprising same is included.

本発明を説明する文脈における（特に以下の特許請求の範囲の文脈における）用語「１つ（ａ）」及び「１つ（ａｎ）」及び「その」及び類似の指示対象の使用は、特に本明細書に示されていないか、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、単数と複数の両方を包含すると解釈されるべきである。 The use of the terms "a" and "an" and "the" and similar referents in the context of describing the present invention (particularly in the context of the claims below) specifically refers to the It should be construed to encompass both singular and plural unless otherwise indicated in the specification or clearly contradicted by context.

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する」は、特に断りのない限り、オープンエンドの用語（すなわち、「を含むが、これらに限定されない」を意味する）と解釈されるべきである。 The terms “comprising,” “having,” “including,” and “containing” refer to open-ended terms (i.e., “including but not limited to”) unless otherwise specified. means).

本明細書における値の範囲の列挙は、特に本明細書に示されない限り、範囲内に入るそれぞれ別個の値に個々に言及する簡略方法として役立つことを単に意図し、かつ各別個の値は、本明細書に個々に列挙されているように本明細書に組み込まれる。範囲内の値の全てのサブセットも、個々に本明細書に列挙されているように、本明細書に組み込まれる。 Recitation of ranges of values herein is merely intended to serve as a shorthand method of referring individually to each separate value falling within the range, unless otherwise indicated herein, and each separate value is incorporated herein as if individually recited herein. All subsets of values within a range are also incorporated herein as if individually recited herein.

本明細書に記載の全ての方法は、本明細書に特に示されない限り、又は特に文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で行うことができる。 All methods described herein can be performed in any suitable order unless otherwise indicated herein or otherwise clearly contradicted by context.

本明細書に提供される任意の及び全ての実施例、又は例示的な言語（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることが意図され、特に請求しない限り、本発明の範囲を限定するものではない。 The use of any and all examples, or exemplary language (e.g., "such as") provided herein is merely intended to further clarify the invention, unless otherwise claimed. It is not intended to limit the scope of the invention.

本明細書中の言語は、本発明の実施に不可欠な任意の非請求要素を示すものとして解釈されるべきではない。 No language in the specification should be construed as indicating any non-claimed element essential to the practice of the invention.

本明細書では、用語「約」はその通常の意味を有する。実施形態において、それは、限定された数値のプラス又はマイナス１０％を意味し得る。 As used herein, the term "about" has its ordinary meaning. In embodiments, it can mean a limited number plus or minus 10%.

特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。 Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs.

本発明は、以下の非限定的実施例によりさらに詳細に示される。 The invention is illustrated in further detail by the following non-limiting examples.

実施例１：膜水和法を用いて調製したリポソームのインビトロアンモニア取り込み
リポソーム調製
５４：４５：１モル％で（ｉ）１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）又は１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、（ｉｉ）コレステロール及び（ｉｉｉ）１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ＰＥＯ）－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＯ）で構成されるリポソームを、膜水和法により調製した。ＤＰＰＣ ３６．７ｍｇ／ｍＬ、ＤＳＰＣ ３９．５ｍｇ／ｍＬ、コレステロール１９．３ｍｇ／ｍＬ、及びＤＳＰＥ－ＰＥＯ １３．９ｍｇ／ｍＬのストック溶液をクロロホルムで調製した。 Example 1: In Vitro Ammonia Uptake of Liposomes Prepared Using the Membrane Hydration Method Liposome Preparation 54:45:1 mol % of (i) 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DPPC) or 1 ,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), (ii) cholesterol and (iii) 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy (PEO)- 2000], liposomes composed of (DSPE-PEO) were prepared by the membrane hydration method. Stock solutions of 36.7 mg/mL DPPC, 39.5 mg/mL DSPC, 19.3 mg/mL cholesterol, and 13.9 mg/mL DSPE-PEO were prepared in chloroform.

ＤＳＰＣリポソームについて、８．２ｍｇのコレステロール、２０．２ｍｇのＤＳＰＣ、及び１．３ｍｇのＤＳＰＥ－ＰＥＯを、クロロホルムストック溶液としてガラスバイアルに添加した。ＤＰＰＣリポソームについては、１９．７ｍｇのＤＰＰＣ、８．７ｍｇのコレステロール、及び１．４ｍｇのＤＳＰＥ－ＰＥＯを、クロロホルムストック溶液としてガラスバイアルに添加した。その後、有機溶媒を２時間の窒素流によって除去し、一晩、真空下で貯蔵保存した。５５℃に加熱し、脂質膜がそれ以上見えなくなるまでゆっくりと混合しながら、乾燥膜を３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ２．０で２５０ｍＭのクエン酸溶液１ｍＬで水和した（脂質濃度＝２９．８ｍｇ／ｍＬ）。リポソームはｐＨ２のクエン酸溶液を封入した。プロセスの終了時に、リポソーム内外にクエン酸が存在する。 For DSPC liposomes, 8.2 mg cholesterol, 20.2 mg DSPC, and 1.3 mg DSPE-PEO were added as chloroform stock solutions to glass vials. For DPPC liposomes, 19.7 mg DPPC, 8.7 mg cholesterol, and 1.4 mg DSPE-PEO were added as chloroform stock solutions to glass vials. The organic solvent was then removed by a stream of nitrogen for 2 hours and stored overnight under vacuum. The dry film was hydrated with 1 mL of a 250 mM citric acid solution at 300 mOsmol/kg, pH 2.0 while heating to 55° C. and mixing slowly until no more lipid film was visible (lipid concentration=29.8 mg/mL). ). Liposomes encapsulated a pH 2 citric acid solution. At the end of the process there is citric acid inside and outside the liposomes.

インビトロアンモニア取り込み
膜貫通ｐＨ勾配を、胆汁塩コール酸ナトリウム（ＳＣ）及びデオキシコール酸ナトリウム（ＳＤＣ、両方とも２５ｍＭ）の非存在下及び存在下でｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに調節したリン酸緩衝液（最終濃度５０ｍＭ）に希釈して、３７℃に維持した並んだ拡散セル内で生成した。デュアルチャンバシステムを、ポリカーボネート膜（孔サイズ＝５０ｎｍ）によって分離し、物理的に一方の側にリポソームを隔離した。脂質及び拡散細胞内のアンモニア濃度は、それぞれ、１．７５ｍｇ／ｍＬ及び１．５ｍＭであった。割り当てた時間に、４０μＬのアリコートを、リポソームを含まない区画から採取し、アンモニア濃度を、等量のアルカリ性の次亜塩素酸ナトリウム溶液及びフェノールニトロプルシド溶液を用いてベルテロー反応によって決定した。アンモニア取り込み能を、式１：
アンモニア捕捉能＝カプセル化アンモニア［μモル］／総脂質質量［ｇ］
＝（総アンモニア［μモル］－遊離アンモニア［μモル］）／総脂質質量［ｇ］
を用いて定量した。 In vitro ammonia uptake Phosphate-buffered transmembrane pH gradient adjusted to pH 6.8 and 300 mOsmol/kg in the absence and presence of bile salts sodium cholate (SC) and sodium deoxycholate (SDC, both 25 mM) (50 mM final concentration) and produced in side-by-side diffusion cells maintained at 37°C. The dual-chamber system was separated by a polycarbonate membrane (pore size = 50 nm) to physically segregate the liposomes on one side. Ammonia concentrations in lipid and diffusion cells were 1.75 mg/mL and 1.5 mM, respectively. At the allotted times, 40 μL aliquots were taken from the liposome-free compartments and ammonia concentrations were determined by Berthelot reaction using equal volumes of alkaline sodium hypochlorite and phenol nitroprusside solutions. Ammonia uptake capacity is calculated by Equation 1:
Ammonia scavenging capacity = encapsulated ammonia [μmole]/total lipid mass [g]
= (total ammonia [μmole]−free ammonia [μmole])/total lipid mass [g]
was quantified using

リポソーム製剤は、リン酸緩衝液中でアンモニアを捕捉することができたが、胆汁塩含有媒体では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図１に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 The liposomal formulation was able to entrap ammonia in phosphate buffer, but not bile salt-containing media (n=3). Results are reported in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例２：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することによって調製した、約（すなわち、小数点２桁目を四捨五入した）１．７のＰＢＤ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームを、水中油型（ｏ／ｗ）乳化法を用いて生成した。より具体的には、６０ｍｇのＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ（約１．７のＰＢＤ／ＰＥＯ数平均分子量（Ｍｗ）比（すなわち、２５００ｇ／モル／１５００ｇ／モル）、ＰＢＤ（２５００）－ｂ－ＰＥＯ（１５００））を、１００μＬのジクロロメタンに溶解した。ポリマージクロロメタン溶液（ポリマー含有有機溶媒相、すなわち、油相）を、氷浴中で３分間超音波処理しながら（振幅７０、周期０．７５、継続時間３分）、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ２．０で２５０ｍＭのクエン酸溶液（酸性水相）１ｍＬを滴加し、９％（ｖ／ｖ）の溶媒／水相比を有する乳濁液を形成させた。有機溶媒を、４０℃で少なくとも５分間、ロータリーエバポレーターを用いて蒸発させた。ポリマーソームはｐＨ２のクエン酸溶液をカプセル化した。プロセスの最後に、ポリマーソームの内外にクエン酸がある。 Example 2: A PBD/PEO number average of about (i.e., rounded to two decimal places) 1.7 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent In Vitro Ammonia Uptake of PBD-b-PEO Polymersomes with Mw Ratios Polymersome Preparation PBD-b-PEO polymersomes were produced using an oil-in-water (o/w) emulsification method. More specifically, 60 mg of PBD-b-PEO (PBD/PEO number average molecular weight (Mw) ratio of about 1.7 (i.e., 2500 g/mol/1500 g/mol), PBD(2500)-b-PEO ( 1500)) was dissolved in 100 μL of dichloromethane. A polymer dichloromethane solution (polymer-containing organic solvent phase, i.e., oil phase) was sonicated for 3 minutes in an ice bath (amplitude 70, period 0.75, duration 3 minutes) at 300 mOsmol/kg, pH 2.0. 1 mL of 250 mM citric acid solution (acidic aqueous phase) was added dropwise to form an emulsion with a solvent/aqueous phase ratio of 9% (v/v). Organic solvents were evaporated using a rotary evaporator at 40° C. for at least 5 minutes. Polymersomes encapsulated a pH 2 citric acid solution. At the end of the process, there is citric acid inside and outside the polymersome.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、１．７５ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を用いて、実施例１に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。アンモニア捕捉能を、式２：
アンモニア捕捉能＝カプセル化アンモニア［μモル］／総ポリマー質量［ｇ］
＝（総アンモニア［μモル］－遊離アンモニア［μモル］）／総ポリマー質量［ｇ］
を用いて定量した。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using side-by-side diffusion cells as described in Example 1 using a polymer concentration of 1.75 mg/mL. The ammonia scavenging capacity is expressed by Equation 2:
Ammonia scavenging capacity = encapsulated ammonia [μmole]/total polymer mass [g]
= (total ammonia [μmole]−free ammonia [μmole])/total polymer mass [g]
was quantified using

ＰＢＤ ＰＥＯポリマーソームは、リン酸緩衝液中でアンモニアを捕捉することができたが、胆汁塩含有媒体では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図２に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PBD PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in phosphate buffer, but not in bile salt-containing media (n=3). Results are reported in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例３：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．４のＰＤＭＳ／ＰＭＯＸＡ数平均Ｍｗ比を有するＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡポリマーソーム（約２．４のＰＤＭＳ／ＰＭＯＸＡ数平均Ｍｗ比（ＰＭＯＸＡ（５２０）－ｂ－ＰＤＭＳ（２５３０）－ｂ－ＰＭＯＸＡ（５２０）））を実施例２に記載のように生成した。 Example 3: PMOXA-b-PDMS-b with a PDMS/PMOXA number average Mw ratio of about 2.4 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent - In vitro ammonia uptake of PMOXA polymersomes Polymersome preparation PMOXA(520))) was prepared as described in Example 2.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、胆汁塩なし（すなわち、リン酸緩衝液のみ）で、実施例２に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using side-by-side diffusion cells as described in Example 2 without bile salts (ie phosphate buffer only).

ＰＭＯＸＡ ＰＤＭＳ ＰＭＯＸＡポリマーソームは、胆汁塩を含まない（すなわち、リン酸緩衝液のみの）媒体中では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図３に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PMOXA PDMS PMOXA polymersomes could not be captured in media without bile salts (ie, phosphate buffer only) (n=3). Results are reported in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例４：膜水和法を用いて調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームを、膜水和法を用いて生成した。より具体的には、２９．８ｍｇのＰＳ－ｂ－ＰＥＯ（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０）のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比））を、１００μＬのジクロロメタンに溶解し、ガラスバイアルに添加した。その後、有機溶媒を２時間、窒素流によって除去し、真空下で一晩保存した。乾燥膜を、６５℃に加熱し、１．２５時間超音波処理しながら、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇで、ｐＨ２．０の２５０ｍＭのクエン酸溶液１ｍＬで水和した。 Example 4: In vitro ammonia uptake of PS-b-PEO polymersomes with PS/PEO number-average Mw ratios of about 1.3 or 2.5 prepared using the membrane hydration method Polymersome preparation PS-b- PEO polymersomes were produced using the membrane hydration method. More specifically, 29.8 mg of PS-b-PEO (about 1.3 (PS(2600)-b-PEO(2000)), or about 2.5 (PS(5150)-b-PEO(2060) ) was dissolved in 100 μL of dichloromethane and added to a glass vial. The organic solvent was then removed by a stream of nitrogen for 2 hours and stored under vacuum overnight. Dried membranes were hydrated with 1 mL of 250 mM citric acid solution, pH 2.0, at 300 mOsmol/kg while heating to 65° C. and sonicating for 1.25 h.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、実施例３に記載（すなわち、リン酸緩衝液のみ）の並んだ拡散セルを用いて調べた。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using side-by-side diffusion cells as described in Example 3 (ie, phosphate buffer only).

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩を含まない（すなわち、リン酸緩衝液のみの）媒体中では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図４に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes could not be captured in media without bile salts (ie, phosphate buffer only) (n=3). Results are reported in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例５：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．０（ＰＳ（１９７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。 Example 5: PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.0 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent Polymersome preparation PS/PEO number average Mw ratio of about 1.0 (PS(1970)-b-PEO(2000)) was performed. It was produced as described in Example 2.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、胆汁塩組成物を変更して（ＳＣ ３０ｍＭ、ＳＤＣ ３０ｍＭ、タウロコール酸ナトリウム（ＳＴＣ）３０ｍＭ、最終ｐＨ６．８及びオスモル濃度３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、実施例２に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。この胆汁塩濃度は、生理的濃度の２倍に相当する。 In vitro ammonia uptake In vitro ammonia uptake was measured as described in Example 2 by varying the bile salt composition (SC 30 mM, SDC 30 mM, sodium taurocholate (STC) 30 mM, final pH 6.8 and osmolality 300 mOsmol/kg). was investigated using a diffusion cell. This bile salt concentration corresponds to twice the physiological concentration.

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図５に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes were unable to scavenge ammonia in bile salt-containing media (n=3). The results are shown in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例６：有機溶媒としてジクロロメタン又はトルエンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３～２．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約１．６（ＰＳ（３１５０－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約１．８（ＰＳ（３５７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約２．０（ＰＳ（３９００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載のように生成した。ＰＳ／ＰＥＯポリマーソーム（約２．８（ＰＳ（６０００）－ｂ－ＰＥＯ（２１８０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載のように調製したが、有機溶媒としてジクロロメタンの代わりにトルエンを使用し、かつポリマー量を少なくした（２０ｍｇ）。 Example 6: PS with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3-2.8 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane or toluene as the organic solvent - In vitro ammonia uptake of b-PEO polymersomes at high bile salt concentrations Polymersome preparation PS (3150-b-PEO (2000)), about 1.8 (PS (3570)-b-PEO (2000)), about 2.0 (PS (3900)-b-PEO (2000)), or about 2.5 (PS/PEO number average Mw ratio of PS(5150)-b-PEO(2060)) was produced as described in Example 2. PS/PEO polymersomes (approximately 2.8 (PS The PS/PEO number average Mw ratio of (6000)-b-PEO (2180)) was prepared as described in Example 2, but using toluene instead of dichloromethane as the organic solvent and increasing the polymer amount to reduced (20 mg).

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、約１．３～２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ ＰＥＯポリマーソームについて、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。ＰＳ ＰＥＯポリマーソーム（約２．８（ＰＳ（６０００）－ｂ－ＰＥＯ（２１８０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ）を、リン酸濃度を変更して（２５ｍＭ）、４４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ６．８で、実施例５に記載したように評価した。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using side-by-side diffusion cells as described in Example 5 for PS PEO polymersomes with PS/PEO number average Mw ratios of about 1.3-2.5. PS PEO polymersomes (PS/PEO number average Mw of about 2.8 (PS(6000)-b-PEO(2180))) were prepared with varying phosphate concentrations (25 mM) at 440 mOsmol/kg, pH 6.8. was evaluated as described in Example 5.

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図６に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in bile salt-containing media (n=3). The results are shown in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例７：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約３．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマー合成
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯを、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）により合成した。まず、市販のＰＥＯモノメチルエーテル（２１５０ｇ／ｍｏｌ－1）を、ＴＨＦ中のブロモイソブチリルブロミド（５．０当量）及びトリエチルアミン（５．０当量）と反応させ、マクロ開始剤を得た。その後の重合反応では、このマクロ開始剤（１．０当量）、ＣｕＢｒ（１．６当量）、及び４，４’－ジノニル－２，２’－ジピリジル（１．４当量）をシュレンクフラスコに移し、真空アルゴンサイクルにより脱気した。スチレン（７０当量）を別の反応フラスコに加え、アルゴンを用いて脱気し、反応フラスコに移した。反応を２４時間、１１５℃で行った。最終生成物の精製を、塩基性アルミナのカラムを通して溶液を通過させ、その後、ヘキサンで２回沈殿させることによって達成した。ポリマーの数平均分子量を、１Ｈ ＮＭＲ分光法によって決定し、芳香族ポリスチレンピークとＰＥＧ骨格の積分値を比較し、ＰＳ（８１００）－ｂ－ＰＥＯ（２１５０）のポリマー組成物を得た。 Example 7: PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number average Mw ratio of about 3.8 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent In Vitro Ammonia Uptake at High Bile Salt Concentrations Polymer Synthesis PS-b-PEO was synthesized by atom transfer radical polymerization (ATRP). First, commercially available PEO monomethyl ether (2150 g/mol −1 ) was reacted with bromoisobutyryl bromide (5.0 eq) and triethylamine (5.0 eq) in THF to give the macroinitiator. For the subsequent polymerization reaction, the macroinitiator (1.0 eq.), CuBr (1.6 eq.), and 4,4'-dinonyl-2,2'-dipyridyl (1.4 eq.) were transferred to a Schlenk flask. , was degassed by a vacuum argon cycle. Styrene (70 equivalents) was added to another reaction flask, degassed with argon and transferred to the reaction flask. The reaction was carried out at 115°C for 24 hours. Purification of the final product was achieved by passing the solution through a column of basic alumina followed by two precipitations with hexane. The number average molecular weight of the polymer was determined by 1 H NMR spectroscopy, comparing the aromatic polystyrene peak and the integral of the PEG backbone to give a polymer composition of PS(8100)-b-PEO(2150).

ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約３．８（ＰＳ（８１００）－ｂ－ＰＥＯ（２１５０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。 Polymersome Preparation PS-b-PEO polymersomes (PS/PEO number average Mw ratio of approximately 3.8 (PS(8100)-b-PEO(2150))) were produced as described in Example 2.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ポリマー濃度を１．２４ｍｇ／ｍＬに変更して、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using side-by-side diffusion cells as described in Example 5, with the polymer concentration changed to 1.24 mg/mL.

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図７に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in bile salt-containing media (n=3). The results are shown in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例８：有機溶媒としてクロロホルムを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、有機溶媒としてジクロロメタンの代わりにクロロホルムを用いて、実施例２に記載したように生成した。 Example 8: PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using chloroform as the organic solvent Polymersome preparation PS-b-PEO polymersomes (PS/PEO number-average Mw ratio of about 1.3 (PS(2600)-b-PEO(2000))) were treated with organic Prepared as described in Example 2 using chloroform instead of dichloromethane as solvent.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using the side-by-side diffusion cell described in Example 5.

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図８に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in bile salt-containing media (n=3). The results are shown in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例９：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することによって調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの低浸透圧及び高浸透圧条件下でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００）又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。 Example 9: PS-b with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 or 2.5 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent - In vitro ammonia uptake of PEO polymersomes under hypotonic and hypertonic conditions Polymersome preparation PS-b-PEO polymersomes (about 1.3 (PS(2600)-b-PEO(2000) or about 2. 5 (PS/PEO number average Mw ratio of PS(5150)-b-PEO(2060))) was produced as described in Example 2.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８で緩衝液を変更して（低浸透圧条件：ＳＣ ２５ｍＭ及びＳＤＣ ２５ｍＭを含有するリン酸緩衝液１０ｍＭ、最終オスモル濃度１６０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ；高浸透圧性条件：ＳＣ ３０ｍＭ、ＳＤＣ ３０ｍＭ、及びＳＴＣの３０ｍＭを含有するリン酸緩衝液５０ｍＭ、塩化ナトリウムを添加すると、最終オスモル濃度は６２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに達する、すなわち、生理的条件で胃腸管に見られるものよりも劇的に極端な条件）、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was measured by changing buffers at pH 6.8 (hypoosmolar conditions: 10 mM phosphate buffer containing 25 mM SC and 25 mM SDC, final osmolality 160 mOsmol/kg; hyperosmolar conditions: 50 mM phosphate buffer containing 30 mM SC, 30 mM SDC, and 30 mM STC, with the addition of sodium chloride, the final osmolality reaches 620 mOsmol/kg, i.e. more dramatic than that found in the gastrointestinal tract under physiological conditions. extreme conditions), using the side-by-side diffusion cells described in Example 5.

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、低浸透圧及び高浸透圧条件下で、胆汁酸塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図９に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in bile salt-containing media under hypo- and hyper-osmotic conditions (n=3). The results are shown in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例１０：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの消化酵素の存在下でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０）のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。 Example 10: PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number average Mw ratio of about 2.5 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent Polymersome preparation PS-b-PEO polymersomes (approximately 2.5 (PS/PEO number average Mw ratio of PS(5150)-b-PEO(2060)) were carried out. It was produced as described in Example 2.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇで、緩衝液を変更して（リン酸緩衝液５０ｍＭ、ＳＣ １２．５ｍＭ、ＳＤＣ １２．５ｍＭ、ブタ膵臓からのトリプシン １ｍｇ／ｍＬ（約１００００ユニット／ｍＬ）、ウシ膵臓からのα－キモトリプシン（ＩＩ型） １ｍｇ／ｍＬ（約４０ユニット／ｍＬ）、ブタ膵臓からのリパーゼ（ＩＩ型） ３ｍｇ／ｍＬ（約３００ユニット／ｍＬ））、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。酵素の活性は、米国薬局方（ＵＳＰ３９－ＮＦ３４）の模擬腸液中のプロテアーゼ及びリパーゼ活性に相当する。実施例５で使用したものよりも低い胆汁塩濃度を選択して、酵素活性を確実にし、反応速度を四時間に制限し、消化酵素の分解生成物による干渉を回避した。 In vitro ammonia uptake was measured at pH 6.8 and 300 mOsmol/kg with buffer changes (50 mM phosphate buffer, 12.5 mM SC, 12.5 mM SDC, 1 mg/mL trypsin from porcine pancreas (approximately 10000 units/mL), α-chymotrypsin (type II) from bovine pancreas 1 mg/mL (approximately 40 units/mL), lipase (type II) from porcine pancreas 3 mg/mL (approximately 300 units/mL)), performed A side-by-side diffusion cell as described in Example 5 was used. The activity of the enzyme corresponds to the protease and lipase activity in simulated intestinal fluid from the United States Pharmacopeia (USP39-NF34). Bile salt concentrations lower than those used in Example 5 were chosen to ensure enzymatic activity, limit the reaction rate to 4 hours, and avoid interference by degradation products of digestive enzymes.

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体及び消化酵素含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図１０に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in bile salt- and digestive enzyme-containing media (n=3). The results are shown in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例１１：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高いカリウム濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。 Example 11: PS-b-PEO polymersomes with a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent Polymersome preparation PS-b-PEO polymersomes (PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 (PS(2600)-b-PEO(2000))) were prepared in the examples 2 as described.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、２５０ｍＭのカリウム濃度（最終ｐＨ６．８及びオスモル濃度７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を用いて、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using side-by-side diffusion cells as described in Example 5 using a potassium concentration of 250 mM (final pH 6.8 and osmolality 700 mOsmol/kg).

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、２５０ｍＭのカリウム濃度で、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図１１に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。 PS PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in bile salt-containing media at a potassium concentration of 250 mM (n=3). The results are shown in FIG. Each point in the graph represents the mean of n=3 groups and the error bars represent the standard deviation.

実施例１２：有機溶媒としてジクロロメタンを使用し、酸濃度を変更して、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することによって調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、ｐＨ２．０のクエン酸溶液 １００ｍＭ（１１５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、２００ｍＭ（２３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、２５０ｍＭ（３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、３００ｍＭ（３４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、４００ｍＭ（４６０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、５００ｍＭ（５８０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）又は６００ｍＭ（７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を用いて、実施例２に記載したように生成した。 Example 12: A PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent and varying the acid concentration In Vitro Ammonia Uptake of PS-b-PEO Polymersomes Polymersome Preparation PS-b-PEO polymersomes (PS/PEO number average Mw ratio of about 1.3 PS(2600)-b-PEO(2000)) were prepared at pH 2.0. 0 citric acid solution 100 mM (115 mOsmol/kg), 200 mM (230 mOsmol/kg), 250 mM (300 mOsmol/kg), 300 mM (340 mOsmol/kg), 400 mM (460 mOsmol/kg), 500 mM (580 mOsmol/kg) or 600 mM (700 mOsmol/kg) /kg) was used to produce as described in Example 2.

インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８（最終オスモル濃度３００～４００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）で、実施例３に記載（すなわち、リン酸緩衝液のみ）の並んだ拡散セルを用いて調べた。 In Vitro Ammonia Uptake In vitro ammonia uptake was investigated using an aligned diffusion cell as described in Example 3 (ie phosphate buffer only) at pH 6.8 (final osmolality 300-400 mOsmol/kg).

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩を含まない媒体（ｎ＝３～４）中でアンモニアを捕捉することができた。結果を図１２に示す。グラフの各点はｎ＝３～４のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソーム中のアンモニアの捕獲能（ポリマー１ｇ当たり捕捉されるアンモニア）は、ＡＳＴ－１２０活性炭（炭１ｇ当たり捕捉されるアンモニア、Ｂｏｓｏｉら、前出）で作られたアンモニア吸着微小粒子のそれよりも２０倍高かった。特許請求の範囲は、実施例に記載の好ましい実施形態によって限定されるべきではないが、全体としての説明と一致する最も広い解釈が与えられるべきである。 PS PEO polymersomes were able to scavenge ammonia in media without bile salts (n=3-4). The results are shown in FIG. Each point on the graph represents the mean of n=3-4 groups and the error bars represent the standard deviation. The trapping capacity of ammonia (ammonia trapped per gram of polymer) in transmembrane pH gradient polymersomes was measured using ammonia-adsorbing microparticles made of AST-120 activated carbon (ammonia trapped per gram of charcoal, Bosoi et al., supra). was 20 times higher than that of The claims should not be limited by the preferred embodiments described in the examples, but should be given the broadest interpretation consistent with the description as a whole.

実施例１３：有機溶媒としてジクロロメタンを使用して、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．４～２．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのＯ／Ｗ乳濁液への前暴露後の、高胆汁酸塩濃度でのインビトロＴＭＡ取り込み
ポリマーソーム調製
ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（約１．４（ＰＳ（２７７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））及び約２．０（ＰＳ（３９００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均分子量（Ｍｗ）比）を、実施例２に記載したように生成した。 Example 13: PS- having a PS/PEO number average Mw ratio of about 1.4-2.0 prepared by mixing a polymer-containing organic solvent phase with an aqueous acidic phase using dichloromethane as the organic solvent In vitro TMA uptake at high bile salt concentrations after pre-exposure of b-PEO polymersomes to O/W emulsion Polymersome preparation Poly(styrene)-b-poly(ethylene oxide) (approximately 1.4 (PS (2770)-b-PEO(2000)) and about 2.0 (PS/PEO number average molecular weight (Mw) ratio of PS(3900)-b-PEO(2000)) as described in Example 2. generated in

インビトロＴＭＡ取り込み
膜貫通ｐＨ勾配を、それぞれ３０ｍＭの胆汁塩コール酸ナトリウム（ＳＣ）、デオキシコール酸ナトリウム（ＳＤＣ）、及びタウロコール酸ナトリウム（ＳＴＣ）の存在下（約１．４及び２．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）又は非存在下（約１．４のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）で、ｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌに調整した５０ｍＭのリン酸緩衝液での希釈によって、３７℃に維持した並んだ拡散セルで生成した。Ｏ／Ｗ乳濁液へのポリマーソームの前暴露を伴う実験において（クリーム又はローションへの組み込みを模倣するため）、１０％（ｖ／ｖ）のＯ／Ｗ乳濁液（５％（ｍ／ｖ）のポリソルベート８０、１５％（ｖ／ｖ）の鉱油、及び総体積に到達するのに十分なリン酸緩衝生理食塩水）を、取り込み実験の直前にポリマーソーム分散液（約１．４のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）に添加した。 In Vitro TMA Uptake A transmembrane pH gradient was established in the presence of 30 mM bile salts sodium cholate (SC), sodium deoxycholate (SDC), and sodium taurocholate (STC), respectively (PS of approximately 1.4 and 2.0). /PEO number average Mw ratio) or in the absence (PS/PEO number average Mw ratio of about 1.4) by dilution with 50 mM phosphate buffer adjusted to pH 6.8 and 300 mOsmol/L at 37°C. were generated in side-by-side diffusion cells maintained at . In experiments involving pre-exposure of polymersomes to O/W emulsion (to mimic incorporation into creams or lotions), 10% (v/v) O/W emulsion (5% (m/ v) Polysorbate 80, 15% (v/v) mineral oil, and enough phosphate-buffered saline to reach total volume) was added to the polymersome dispersion (approximately 1.4 PS/PEO number average Mw ratio).

デュアルチャンバシステムを、物理的に一方の側にポリマーソームを隔離するポリカーボネート膜（孔サイズ＝５０ｎｍ）により分離した。拡散セル内のポリマー及びＴＭＡの濃度は、それぞれ、１．７５ｍｇ／ｍＬ及び１．５ｍＭであった。割り当てられた時間で、４０μＬのアリコートを、ポリマーソームを含まないコンパートメントから取り、ＴＭＡの濃度を、ＴＭＡ標準物質で較正したＰｏｃｋｅｔＣｈｅｍ（商標）ＢＡ ＰＡ－４１４０（Ａｒｋｒａｙ社）によって測定した。ＴＭＡ捕捉能を、式３を用いて定量し、総ＴＭＡ濃度は、１０分のインキュベーションでの細胞中のＴＭＡ量を指す。
式３：
ＴＭＡ捕捉能＝カプセル化ＴＭＡ［μモル］／総ポリマー質量［ｇ］
＝（総ＴＭＡ［μモル］－遊離ＴＭＡ［μモル］）／総ポリマー質量［ｇ］ The dual-chamber system was separated by a polycarbonate membrane (pore size = 50 nm) that physically segregated the polymersomes on one side. The concentrations of polymer and TMA in the diffusion cell were 1.75 mg/mL and 1.5 mM, respectively. At the allotted times, 40 μL aliquots were taken from the polymersome-free compartment and the concentration of TMA was measured by PocketChem™ BA PA PA-4140 (Arkray) calibrated with TMA standards. TMA scavenging capacity was quantified using Equation 3 and total TMA concentration refers to the amount of TMA in cells at 10 min incubation.
Equation 3:
TMA scavenging capacity = encapsulated TMA [μmole]/total polymer mass [g]
= (total TMA [μmole]−free TMA [μmole])/total polymer mass [g]

ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体及びＯ／Ｗ乳濁液中でＴＭＡを捕捉することができた（ｎ＝３）。ポリマーソームが、腸管環境を模倣した過酷な条件下で、又はＯ／Ｗ乳濁液（例えば、局所投与用のローション若しくはクリーム）への組み込み後にＴＭＡを効率的に捕捉したことをデータは示す。結果を図１３に示す。グラフの各ヒストグラムバーはグループ（ｎ＝３）の平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
参考文献

Figure 0007178090000001
PS PEO polymersomes were able to entrap TMA in bile salt-containing media and O/W emulsions (n=3). The data show that polymersomes efficiently captured TMA under harsh conditions mimicking the intestinal environment or after incorporation into O/W emulsions (eg, lotions or creams for topical administration). The results are shown in FIG. Each histogram bar in the graph represents the mean of the group (n=3) and error bars represent the standard deviation.
References
Figure 0007178090000001

Claims (14)

（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、前記ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より大きく約３．８以下である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソーム。 (a) a membrane comprising a block copolymer of poly(styrene) (PS) and poly(ethylene oxide) (PEO), wherein said PS/PEO molecular weight ratio is greater than 1.0 and less than or equal to about 3.8; and (b) an acid. A polymersome comprising a core surrounding a . 前記ブロックコポリマーがジブロックコポリマーである、請求項１に記載のポリマーソーム。 2. The polymersome of claim 1, wherein said block copolymer is a diblock copolymer. 前記ポリマーソームが水和された場合に、前記酸が、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４のｐＨを生じる濃度にある、請求項１又は２に記載のポリマーソーム。 3. The polymersome of claim 1 or 2, wherein the acid is at a concentration that produces a pH of 1-6, preferably 2-5, more preferably 2-4 when the polymersome is hydrated. 前記酸が酸性水溶液内にある、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリマーソーム。 4. The polymersome of any one of claims 1-3, wherein the acid is in an acidic aqueous solution. 前記酸性水溶液中のｐＨが、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４である、請求項４に記載のポリマーソーム。 5. The polymersome according to claim 4, wherein the acidic aqueous solution has a pH of 1-6, preferably 2-5, more preferably 2-4. 前記酸が、ヒドロキシ酸、最も好ましくはクエン酸である、請求項１～５のいずれか一項に記載のポリマーソーム。 A polymersome according to any one of claims 1 to 5, wherein said acid is a hydroxy acid, most preferably citric acid. 前記ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が、約１．３以上、３．１未満である、請求項１～６のいずれか一項に記載のポリマーソーム。 7. The polymersome of any one of claims 1-6 , wherein the PS/PEO molecular weight ratio is about 1.3 or more and less than 3.1. 前記ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が、約１．４以上、３．１未満である、請求項１～６のいずれか一項に記載のポリマーソーム。 7. The polymersome of any one of claims 1-6 , wherein the PS/PEO molecular weight ratio is about 1.4 or more and less than 3.1. 請求項１～８のいずれか一項に記載のポリマーソーム、及び少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物。 A composition comprising the polymersome of any one of claims 1-8 and at least one pharmaceutically acceptable excipient. 前記組成物が、液体、半固体又は固体の形態にある、請求項９に記載の組成物。 10. The composition of claim 9 , wherein the composition is in liquid, semi-solid or solid form. 経腸使用又は局所使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリマーソーム又は請求項９若しくは１０に記載の組成物。 A polymersome according to any one of claims 1 to 7 or a composition according to claim 9 or 10 for enteral or topical use. アンモニア、トリメチルアミン（ＴＭＡ）、若しくはジメチルアミン（ＤＭＡ）に関連する疾患又は障害、又はその症状、好ましくは高アンモニア血症又はトリメチルアミン尿症の治療に使用するための、請求項１１に記載のポリマーソーム又は組成物。 12. A polymersome according to claim 11 for use in the treatment of diseases or disorders associated with ammonia, trimethylamine (TMA) or dimethylamine (DMA), or symptoms thereof, preferably hyperammonemia or trimethylaminuria. or composition. ａ．有機溶媒、好ましくは、水非混和性又は部分的水混和性有機溶媒にＰＳとＰＥＯのブロックコポリマーを溶解し、コポリマー含有有機相を形成すること；
ｂ．前記ポリマーソームを形成するように、前記コポリマー含有有機溶媒相と酸含有水相を混合すること；及び
ｃ．前記有機溶媒を除去すること、
を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のポリマーソームを作製する方法。 a. dissolving a block copolymer of PS and PEO in an organic solvent, preferably a water-immiscible or partially water-miscible organic solvent, to form a copolymer-containing organic phase;
b. mixing the copolymer-containing organic solvent phase and the acid-containing aqueous phase to form the polymersome; and c. removing the organic solvent;
A method of making a polymersome according to any one of claims 1 to 8 , comprising 前記水相が５０～７００ｍＭの酸を含む、請求項１３に記載の方法。 14. The method of claim 13 , wherein the aqueous phase comprises 50-700 mM acid.
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