JP7138873B2 - コラーゲン含有組成物の製造方法及びコラーゲン単離物 - Google Patents
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Description
水産加工工場から排出されるサケの頭部を入手し、その頭部から鼻軟骨を摘出して、200gの生軟骨を採取した(サケ8匹相当)。採取した生軟骨は2.8mm孔径のプレートを取り付けたミートチョッパーを使用し細分化処理を行い抽出用出発原料とした。
上記に調製した抽出原料からコラーゲンを抽出した。
・水2400mLを添加し、4℃下で攪拌した後、遠心分離装置により10,000g×20分間の処理を行って固液分離し、その固部を回収し、更に同様の操作をもう一度繰り返した。2回目の上清のpHを測定したところpH11.92であった。更に同様の水洗を繰り返し、最終水洗時のpHは9.47であった。
・10mMクエン酸水溶液を2000mL添加し、4℃下で24時間攪拌し、上清のpHを測定したところpH3.0であった。
・リゾパスペプシン(商品名「ニューラーゼF3G」、天野エンザイム株式会社社製)を添加し、4℃下で48時間攪拌した。その処理後のpHを測定したところpH3.0であった。
・遠心分離装置により10,000g×20分間の処理を行って固液分離し、その液部を回収した。
・リン酸水素二ナトリウムを終濃度20mMとなる量で添加し、4℃下で1時間攪拌した。
・6MHCl水溶液または6MNaOH水溶液の滴下による微調整によりpH8.0に調整した。
・粉体NaClを終濃度4.4Mとなる量で添加し、4℃下で24時間攪拌した。
・遠心分離装置により10,000g×20分間の処理を行って固液分離し、その固部を塩析沈殿物として回収した。
・0.5M酢酸水溶液1200mLを添加し、塩析沈殿物を溶解させた。
・粉体硫酸アンモニウムを終濃度11W/V%となる量で添加し、4℃下で24時間攪拌した。
・遠心分離装置により10,000g×20分間の処理を行って固液分離し、その固部を11%硫安沈殿物として回収した。また、その液部を上清として回収した。
・上記上清に粉体硫酸アンモニウムを終濃度20W/V%となる量で添加し、4℃下で24時間攪拌した。
・遠心分離装置により10,000g×20分間の処理を行って固液分離し、その固部を20%硫安沈殿物として回収した。
・透析による脱塩した。具体的には、分画分子量12,000~16,000の透析チューブ(エーディア株式会社のセルロースチューブ 36/32)に充填して水中に浸漬して脱塩した。
・真空凍結乾燥機により乾燥した。
製造例1の製造フローにおいて、リゾパスペプシンによる酵素処理によるコラーゲンの可溶化率について検討した。
図6には、製造例1で得られた塩析沈殿物の一部をSDS-PAGEゲル電気泳動にかけたときのゲルの写真を示す。
図7には、製造例1で得られた塩析沈殿物の一部をイオンクロマトグラフィー分析にかけたときの結果を示す。
図8には、製造例1で得られた塩析沈殿物、11%硫安沈殿物、及び20%硫安沈殿物を、解析した結果を示す。
Claims (8)
- 魚類軟骨を抽出原料とし、アルカリ性溶媒で洗浄処理を行って前記抽出原料から糖質系細胞外マトリックス物質を除去するアルカリ洗浄工程と、前記アルカリ洗浄工程後の処理物に対して希薄酸性溶媒中で酸性プロテアーゼによる酵素処理を行ってコラーゲンを可溶化させる酵素処理工程と、前記酵素処理工程後の処理物を固液分離して該コラーゲンを含む液部を回収するコラーゲン含有液部回収工程と、前記液部のpHを中和調整するコラーゲン含有液部中和工程と、前記コラーゲン含有液部中和工程後の処理物を塩析して、その塩析沈殿物としてII型コラーゲン及びXI型コラーゲンを含む該コラーゲンを得る塩析処理工程を含むことを特徴とするコラーゲン含有組成物の製造方法。
- 前記酸性プロテアーゼによる酵素処理が、真菌由来の非動物性ペプシンによる処理である、請求項1記載のコラーゲン含有組成物の製造方法。
- 前記塩析沈殿物を得るための塩析処理を4M以上の塩濃度で行う、請求項1又は2記載のコラーゲン含有組成物の製造方法。
- 前記コラーゲン含有組成物としてコラーゲン含有量が60質量%以上であるものを得る、請求項1~3のいずれか1項に記載のコラーゲン含有組成物の製造方法。
- 請求項1~4のいずれか1項に記載のコラーゲン含有組成物の製造方法によりコラーゲン含有組成物を得、得られたコラーゲン含有組成物を分画又は精製し、XI型コラーゲンを富化した組成物を得ることを特徴とするXI型コラーゲン含有組成物の製造方法。
- 前記分画又は精製の処理は、硫安沈殿による処理である、請求項5記載のXI型コラーゲン含有組成物の製造方法。
- 請求項1~4のいずれか1項に記載のコラーゲン含有組成物の製造方法によりコラーゲン含有組成物を得、得られたコラーゲン含有組成物を分画又は精製し、II型コラーゲンを富化した組成物を得ることを特徴とするII型コラーゲン含有組成物の製造方法。
- 前記分画又は精製の処理は、硫安沈殿による処理である、請求項7記載のII型コラーゲン含有組成物の製造方法。
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Food Chem.,2003年,vol.80,pp.1-7 |
Mar. Drugs,2019年,vol.17, no.4,pp.223(1-16) |
日本水産学会大会講演要旨集,1995年,秋季,p.133[928] |
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