JP7110344B2 - 細胞検査装置及び細胞検査方法 - Google Patents
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Description
ROSEを用いない場合、穿刺針等で採取した細胞は、細胞を採取した場所とは別の検査場所に搬送されて病理診断などの検査が行われる。その結果、必要な細胞が採取されていなかった場合は、再度、細胞の採取が必要である。ROSEを用いた検査では、細胞を採取した現場で必要な細胞が採取されたか否かを判断できるため、容易に細胞の採取を追加できる。したがって、ROSEは、再検査率を低減することができるため、各施設でのROSEの実施が望まれている。
ベースプレートの凹部に顕微鏡スライドを嵌め、顕微鏡スライド上に中空管を載置する。中空管の空間に所定のサンプル細胞懸濁液を入れ、細胞が重力により沈降するのを待つ。細胞が顕微鏡スライドに沈降したら、上澄み液を吸引によって取り出し、細胞を染色した後、顕微鏡スライド上の細胞を観察する。
また、一般にスライド上に沈降した細胞を染色する際は、スライドを染色液に浸すため、スライド上の細胞が染色液内に脱落するという問題がある。
前記スライド上で前記細胞を染色する染色工程と、前記スライド上に前記細胞を沈降させる細胞沈降工程と、前記光源で照明しながら前記観察部により前記スライド上の前記細胞を観察する観察工程と、を備え、前記濃縮液作製工程において、底面にフィルタが設けられ内部空間を有する内筒を前記底面側から前記外筒の前記貫通孔内に進入させ、前記内筒を前記スライドに近づけることによって、前記細胞濃縮液を作製し、
前記観察工程は、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で観察を行う。
本発明の第5の態様に係る細胞検査方法は、上記第1の態様において、前記観察工程において、前記内筒の前記フィルタを前記スライドに接触させてもよい。
を備え、前記チャンバ内に前記細胞浮遊液を収容した状態であって、前記内筒が、前記底面側から前記外筒の前記貫通孔に進入されて前記スライドに接近した状態のとき、前記細胞の濃縮が実行され、前記細胞が、前記染色液により染色され、かつ前記スライドに沈降した状態において、前記内筒が、前記外筒に進入したままの状態のとき、前記観察部による前記細胞の観察が実行可能な状態となる。
本発明の第8の態様に係る細胞検査装置は、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査装置であって、ベースプレートと、貫通孔が形成され、スライド上に配置される外筒と、底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、光源と、前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、前記スライドと前記外筒の前記貫通孔とにより細胞浮遊液を注入するためのチャンバが形成され、前記ベースプレートは、観察穴が形成され、前記スライドを載置する窪みを有し、前記内筒の前記フィルタは、光透過性の材料からなり、前記光源は、前記チャンバ内の細胞を、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で照明する。
本発明の第10の態様に係る細胞検査装置は、上記第8の態様において、前記観察穴には、前記観察部が挿通可能であってもよい。
本発明の第12の態様に係る細胞検査装置は、上記第7の態様、または、上記第8の態様において、前記フィルタは、前記細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなっていてもよい。
本発明の第13の態様に係る細胞検査装置は、上記第7の態様、または、上記第8の態様において、前記フィルタは、前記細胞よりも小さな孔径を有していてもよい。
本発明の一実施形態に係る細胞検査装置について、図1から図16を参照して説明する。
細胞検査装置1は、細胞浮遊液に含まれる細胞を観察する装置である。なお、細胞は細菌を含んでいてもよい。細胞検査装置1は、図1に示すように、ベースプレート30上に配置された外筒10及び内筒20と、観察部50とを備えている。
上部11は、外筒10の長手方向に垂直な方向に拡径している。上部11には、上部11の上面11aに向かって開口する凹部11bが形成されている。凹部11bから細胞浮遊液が注入される。貫通孔14の第1端14aは、凹部11bの底面11cに開口し、貫通孔14の第2端14bは底部12の底面12aに開口している。これにより、貫通孔14は、上部11の凹部11bから底部12の底面12aまで貫通している。
底部12は、外筒10の長手方向に垂直な方向に拡径している。底部12の底面12aには、円環状の溝12bが設けられている。溝12bには、ゴム等の弾性部材によって形成されたOリング15が配設されている。底部12には、後述するネジ33が挿通可能なネジ穴12cが、底部12の厚み方向に貫通して形成されている。ネジ穴12cは、外筒10の長手軸を挟んで対称に一対設けられている。
上部21は、外筒10の長手方向に垂直な方向に拡径している。上部21には、上部21の上面21aに向かって開口する凹部21bが形成されている。凹部21bは、図1に示すように、筒部22に向かって縮径する。
筒部22には、図3に示すように、筒部22の長手方向に沿って内部空間23が形成されている。内部空間23の第1端23aは凹部21bに開口し、内部空間23の第2端23bは内筒20の底面20aに開口している。これにより、内部空間23は、上部21から筒部22の底面20aまで貫通している。
筒部22の底面20aには、フィルタ24が接着されている。フィルタ24は、筒部22の底面20aを覆っている。フィルタ24は、細胞よりも小さな孔径を有している。フィルタ24の濾材は、特に限定されないが、例えば、織布または不織布からなる。フィルタ24は、光透過性を有する材料からなる。フィルタ24は、細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなる。
筒部22の長手軸方向に対して垂直方向における筒部22の先端部26(上部21が配置されている側とは反対側)の外径寸法L1は、筒部22の長手軸方向に対して垂直方向における筒部22の外径寸法L2より小さい。これにより、筒部22の先端部26には、段部27が形成されている。
ベースプレート30には、厚み方向(上面30aから下面30b)まで貫通するネジ穴30cが形成されている。窪み31は、略長方形状であり、スライド40が載置される。観察穴32は、窪み31に形成されており、図1に示すように、窪み31から下面30bまで貫通されている。観察部50は、観察穴32に進入可能である。
外筒10の連通孔16には、チューブ61を介してシリンジ60が接続されている。チューブ61は外筒10に対して着脱可能である。染色液は、シリンジ60からチューブ61を通ってチャンバPに注入される。染色液の他に細胞をスライド40上に固定する固定液が、シリンジ60からチャンバPに注入されてもよい。
また、拡径している内筒20の上部21が、外筒10の上部11の凹部11bに当接するまで、内筒20の筒部22が外筒10の貫通孔14内に進入可能である。この当接状態では、フィルタ24とスライド40とは間隔をあけて配置されている。フィルタ24からスライド40までの距離Dは、内筒20で連通孔16を塞がない程度であればよく、例えば、3mm以上5mm未満である。さらに、この当接状態では、段部27に連通孔16が位置するため、連通孔16を通った液体は空間P1に注入される。
細胞検査装置1は、さらにモニタ(図示略)を備えている。モニタは、観察部50に接続されている。観察部50により取得された細胞の画像は、モニタに表示される。
まず、図5に示すように、ネジ33により外筒10をベースプレート30に固定し、チャンバPを形成する(準備工程:ステップS1)。外筒10が固定されたベースプレート30を顕微鏡のステージ(図示略)に嵌合させる。
次に、患者の体内を超音波内視鏡で観察しながら穿刺針等を組織に刺入し、細胞を採取する。図7に示すように、採取された細胞Tをシャーレ90に吐出し、細胞保存液をシャーレ90内に注入して、細胞Tをほぐす。細胞Tをほぐした後、図8に示すように、底部にフィルタ91が設けられた容器92をシャーレ90内に挿入する。図9に示すように、シャーレ90内に容器92を押し進めていくと、図10に示すように、容器92内の細胞浮遊液Cと、シャーレ90内の細胞Taとに分離される。このようにして、細胞浮遊液Cが作製される。
次に、図16に示すように、光ファイバ81を有する光源80を用いて細胞Tに光を照射する。光ファイバ81は内部空間23に挿通可能である。すなわち、光ファイバ81の外径寸法は、内部空間23の内径寸法より小さい。光ファイバ81を内部空間23に挿通し、光源80により光を照明しながら、観察部50によりスライド40上の細胞Tをモニタ(図示略)で観察する(観察工程:ステップS6)。必要に応じて観察部50を観察穴32内に進入させ、スライド40に近づける。必要な細胞が採取されていれば、図10に示す細胞Taを病理検査に搬送する。一方、必要な細胞が採取されていない場合は、内視鏡を用いて再度細胞を採取する。
また、染色液Sを注入する連通孔16が筒部22の外壁13aに設けられているため、観察部50による観察の妨げにならない。
細胞検査装置1は、スライド40が載置されるベースプレート30を備えているため、外筒10とスライド40とを固定することができる。これにより、より安定して、細胞Tを観察することができる。
細胞検査装置1は、内筒20の内部空間23に挿通可能である光ファイバ81(光源)を備えているため、細胞Tを鮮明に観察することができる。
フィルタ24は、細胞浮遊液Cの屈折率より高い屈折率を有する材料からなるため、光源80から照射された光を拡散することができる。これにより、光源80から照射された光を効率良く利用することができる。
内筒20のフィルタ24をスライド40と間隔をあけて配置されているため、観察部50で細胞Tを観察する際、フィルタ24が映り込むのを防止することができる。
外筒10の外壁13aに染色液Sを注入する連通孔16が形成されているため、染色液Sを貯留するシリンジ60が観察部50による観察の妨げにならない。
ベースプレート30は、一般に使用される顕微鏡のステージに嵌合されるだけであり、シリンジ60のチューブ61が外筒10に対して着脱可能であるので、ベースプレート30と、外筒10と、内筒20とを使用ごとに交換するディスポーザブルタイプとして構成することができる。なお、ネジ33を取り外すことにより、ベースプレート30は使いまわすことも可能である。
また、連通孔16を筒部13に形成したが、外筒10の底部12に貫通孔14と外部とを連通する連通孔が形成されていてもよい。また、外筒10に連通孔16を設けず、図18に示すように、シリンジ65に設けられたチューブ66を内筒20の内部空間23に挿通し、内部空間23からフィルタ24を通って、空間P1に染色液Sを注入してもよい。
また、フィルタ24は、細胞浮遊液の屈折率より高い材料からなるとしたが、必ずしも細胞浮遊液の屈折率より高い材料から構成されていなくてもよい。
外筒10をベースプレート30にネジ33により固定したが、外筒10とベースプレート30との固定はこれに限らない。また、外筒10がベースプレート30上に載置されているだけでもよい。
また、細胞検査方法は、必ずしも液体C3を内部空間23の外に排出する吸引工程(ステップS4)を備える必要はないが、液体C3は着色されているため、内部空間23に液体C3がない方が、光ファイバ81からの光を効率よく利用することができる。例えば、内筒20を外筒10から取り出し、内筒20を上下逆さまにして、内部空間23内の液体C3を排出してもよい。
また、観察部50により取得された細胞Tの画像をモニタ(図示略)で観察したが、目視で細胞Tを観察してもよい。
S 染色液
P チャンバ
1 細胞検査装置
10 外筒
14 貫通孔
16 連通孔
20 内筒
20a 底面
20b 外側面
23 内部空間
24 フィルタ
30 ベースプレート
32 観察穴(貫通穴)
40 スライド
50 観察部
60 シリンジ
80 光源
81 光ファイバ
Claims (13)
- 光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、
貫通孔を有する外筒とスライドとで形成されるチャンバ内に、前記細胞浮遊液を注入して細胞濃縮液を作製する濃縮液作製工程と、
前記スライド上で前記細胞を染色する染色工程と、
前記スライド上に前記細胞を沈降させる細胞沈降工程と、
前記光源で照明しながら前記観察部により前記スライド上の前記細胞を観察する観察工程と、
を備え、
前記濃縮液作製工程において、底面にフィルタが設けられ内部空間を有する内筒を前記底面側から前記外筒の前記貫通孔内に進入させ、前記内筒を前記スライドに近づけることによって、前記細胞濃縮液を作製し、
前記観察工程は、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で観察を行う
細胞検査方法。 - 前記染色工程は、前記内筒と前記外筒の前記貫通孔とによって囲われた空間に染色液を注入することによって、前記細胞濃縮液中の前記細胞を染色する
請求項1に記載の細胞検査方法。 - 前記内筒の前記内部空間内の染色液を吸引する吸引工程をさらに備える
請求項2に記載の細胞検査方法。 - 前記観察工程において、
前記内筒の前記フィルタを前記スライドと間隔をあけて配置する
請求項1に記載の細胞検査方法。 - 前記観察工程において、
前記内筒の前記フィルタを前記スライドに接触させる
請求項1に記載の細胞検査方法。 - 前記濃縮液作製工程および前記染色工程のうち少なくとも一方において、前記内筒を前記外筒の長手方向に進退させる
請求項4または請求項5に記載の細胞検査方法。 - 細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査装置であって、
貫通孔を有し、スライド上に配置され、前記貫通孔と前記スライドとによりチャンバが形成される外筒と、
底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、
前記細胞の濃縮が実行された状態の前記チャンバ内に染色液を注入する染色液注入部と、
前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、
前記チャンバ内に前記細胞浮遊液を収容した状態であって、前記内筒が、前記底面側から前記外筒の前記貫通孔に進入されて前記スライドに接近した状態のとき、前記細胞の濃縮が実行され、
前記細胞が、前記染色液により染色され、かつ前記スライドに沈降した状態において、前記内筒が、前記外筒に進入したままの状態のとき、前記観察部による前記細胞の観察が実行可能な状態となる
細胞検査装置。 - 細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査装置であって、
ベースプレートと、
貫通孔が形成され、スライド上に配置される外筒と、
底面にフィルタが設けられ、内部空間を有し、前記外筒の前記貫通孔内に挿通可能である内筒と、
光源と、
前記スライドに対して前記外筒と反対側に設けられた観察部と、
を備え、
前記スライドと前記外筒の前記貫通孔とにより細胞浮遊液を注入するためのチャンバが形成され、
前記ベースプレートは、観察穴が形成され、前記スライドを載置する窪みを有し、
前記内筒の前記フィルタは、光透過性の材料からなり、前記光源は、前記チャンバ内の細胞を、前記内筒を前記外筒に進入させた状態で照明する
細胞検査装置。 - 前記外筒の側壁には、前記外筒の前記貫通孔と外部とを連通する連通孔が設けられている請求項7または請求項8に記載の細胞検査装置。
- 前記観察穴には、前記観察部が挿通可能である
請求項8に記載の細胞検査装置。 - 前記内筒の前記内部空間に挿通可能な光ファイバをさらに備える
請求項7に記載の細胞検査装置。 - 前記フィルタは、前記細胞浮遊液の屈折率より高い屈折率を有する材料からなる
請求項7または請求項8に記載の細胞検査装置。 - 前記フィルタは、前記細胞よりも小さな孔径を有している
請求項7または請求項8に記載の細胞検査装置。
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