JP7093556B2 - 組成物の製造方法 - Google Patents
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Description
溶媒により昆虫に含まれる脂溶性成分を除去する工程を含む、組成物の製造方法である。
ヤママユ(Antheraea yamamai)蛹、及びカイコ(Bombyx mori)蛹に含まれ、且つ該昆虫を捕食したヒト又は動物に対して免疫抑制作用を有する物質の同定を行った。ヤママユ蛹の乾燥粉末、及びカイコ蛹の乾燥粉末に蒸留水を加えて撹拌し、遠心分離により上清を得た。得られた上清に酢酸エチルを加えて液液分配し、得られた酢酸エチル層をロータリーエバポレータにて溶媒を留去し、乾固した。残留物に蒸留水を加えてC18固相カラムに添加し、素通り画分を回収した。得られた素通り画分を高速液体クロマトグラフィ(Develosil C30カラム)にて溶出させ、得られた溶出画分毎の免疫抑制活性を測定した。免疫抑制活性の測定は、マウスマクロファージ細胞株(RAW264細胞)の培養液に、100 ng/mLとなるようにLPSを添加し、さらに各溶出画分を添加して、各溶出画分による一酸化窒素産出阻害率を求めた。図1に示したクロマトグラムの220 nm(mV)のピークを含む溶出画分に、一酸化窒素の産出阻害が確認された。したがって、免疫抑制作用を有する物質は、該溶出画分に存在することが示された。
ヤママユ(Antheraea yamamai)蛹、及びカイコ(Bombyx mori)蛹から同定された1,2-ベンゼンジオールが免疫抑制作用を有するか否かを、マウスマクロファージ細胞株(RAW264細胞)からの一酸化窒素の産出を指標に評価した。培養液に100 ng/mLとなるようにリポ多糖(LPS)を添加し、さらに1,2-ベンゼンジオールを0 μg/mL ~ 10 μg/mLとなるように加えたところ、図4に示すように、1,2-ベンゼンジオールの濃度依存的に一酸化窒素の産出阻害がみられた。また、図5に示すように、1 μg/mL以上の1,2-ベンゼンジオールの存在下では、マウスマクロファージ細胞株の増殖阻害が確認された。したがって、ベンゼンジオール及び/又はその誘導体は、免疫抑制作用のみならず、強い細胞毒性を有することも示唆された。
さまざまな種の昆虫に含まれる1,2-ベンゼンジオール含有量を測定するとともに、昆虫に含まれる脂溶性成分の除去による含有量の変化を検証した。測定対象に対して10倍量の80%アセトンを加えて撹拌し、遠心分離して得られた上清について、ガスクロマトグラフィ質量分析計(GC/MS)を用いて1,2-ベンゼンジオールを定量し、測定対象に含有される1,2-ベンゼンジオール量を明らかにした。
昆虫に含まれる脂溶性成分を除去した組成物が有する免疫賦活能を、脂溶性成分の除去工程を施さない昆虫と比較した。測定対象1gに対して、10 mLの緩衝液(20 mM Tris-HCl pH8.0, 150 mMNaCl)を添加し、室温で1日間~2日間激しく振とうした上清をフィルターろ過し、細胞培養液で希釈した。希釈した検体を含む培養液をマウスマクロファージ細胞株(RAW264細胞)に添加して24時間培養し、培養上清を回収して一酸化窒素産生量を測定した。
Claims (9)
- 昆虫を原料とする飼料用の組成物の製造方法であって、
前記昆虫が、カイコガ科、ヤママユガ科、及びミズアブ科から選ばれる1又は複数の、幼虫、前蛹、蛹、それらの乾燥物、それらの粉末、及びそれらの乾燥粉末からなる群から選ばれる一又は複数であり、
溶媒により昆虫に含まれる脂溶性成分を除去する工程のみからなり、前記脂溶性成分を除去して得られた組成物のベンゼンジオールの含有量が1μg/g未満である、組成物の製造方法 - 前記昆虫が、カイコガ科、及び/又はヤママユガ科である、請求項1に記載の組成物の製造方法
- 前記昆虫が、ミズアブ科である、請求項1に記載の組成物の製造方法
- 前記溶媒が、ベンゼンジオールが可溶である、請求項1~3いずれか一項に記載の組成物の製造方法
- 前記溶媒が、ヘキサン、アセトン、ベンゼン、トルエン、リグロイン、ジエチルエーテル、石油エーテル、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロメタン、シクロヘキサン、クロロホルム、メタノール、エタノール、1―プロパノール、2-プロパノール、1-ブタノール、2―ブタノール、グリセリン、プロピレングリコール、エチルメチルケトン、1,1,1,2―テトラフルオロエタン、1,1,2―トリクロロエテン、亜酸化窒素、二酸化炭素、プロパン、ブタン、及びそれらの混合物からなる群から選ばれる一又は複数である、請求項1~4いずれか一項に記載の組成物の製造方法
- 前記脂溶性成分が、ベンゼンジオールを含有する、請求項1~5いずれか一項に記載の組成物の製造方法
- 前記工程が、昆虫を溶媒に曝露させることで昆虫に含まれる脂溶性成分を該溶媒に溶出させ、さらに昆虫に含まれる脂溶性成分が溶出した該溶媒を昆虫から分離する工程である、
請求項1~6いずれか一項に記載の組成物の製造方法 - 前記脂溶性成分を除去して得られた組成物が、免疫賦活作用を有する、請求項1~7いずれか一項に記載の組成物の製造方法
- 前記脂溶性成分を除去して得られた組成物が、成長遅滞作用を有さない、請求項1~7いずれか一項に記載の組成物の製造方法
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