JP7063808B2 - Ns1およびns2遺伝子シフトを含む組換えrsウイルス株 - Google Patents
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Description
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる2015年12月11日に出願された米国仮出願第62/266,206号の優先権を主張するものである。
本明細書に開示される主題は、RSウイルス(respiratory syncytial virus: RSV)およびワクチンとして使用するのに適したその弱毒化変異株に関する。
ヒトRSウイルス(RSV)は、幼児期に世界中のほぼ全ての人に感染し、かなりの死亡率および罹患率の原因となる。米国だけでも、RSVは毎年75,000~125,000人の入院に関係しており、控えめに見積もっても、RSVは世界中で毎年6400万人の小児感染と16万人以上の小児死亡の原因になっていると推定される。RSVのもう1つの顕著な特徴は、幼児期の重度の感染の後に、気道反応性に対する素因を含めて、気道機能不全が頻繁に起こり、一部の個体においては何年間にもわたって続き、青年期以降にまで引きずる可能性があることである。RSV感染は喘息を悪化させ、喘息の発症に関わっている可能性がある。
RSVゲノムまたはアンチゲノム中のNS1および/またはNS2遺伝子の位置がプロモーターに対してより遠位の位置にシフトしている弱毒化表現型を有する新規な組換えRSVを、本明細書において報告する。遺伝子位置の変化は、所望のレベルの弱毒化および免疫原性を達成するために、他の座位での突然変異と組み合わせて存在し得る。本明細書に記載の組換えRSV株は、弱毒生RSVワクチンとして使用するのに適している。
RSウイルス(respiratory syncytial virus:RSV)ゲノムに対する1つまたは複数の改変によって弱毒化された組換えRSVであって、該1つまたは複数の改変が、
(a) NS1遺伝子およびNS2遺伝子の、RSVゲノムの遺伝子位置1および2からの、それぞれ遺伝子位置7および8へのシフト;
(b) NS1遺伝子およびNS2遺伝子の、RSVゲノムの遺伝子位置1および2からの、それぞれ遺伝子位置9および10へのシフト;
(c) NS1遺伝子の、位置1よりも高い遺伝子位置へのシフト;
(d) NS2遺伝子の、位置2よりも高い遺伝子位置へのシフト;または
(e) (c)と(d)の組み合わせ
を含む、組換えRSV。
[本発明1002]
前記1つまたは複数の改変が(a)を含む、本発明1001の組換えRSV。
[本発明1003]
前記1つまたは複数の改変が(b)を含む、本発明1001の組換えRSV。
[本発明1004]
前記1つまたは複数の改変が(c)を含む、本発明1001の組換えRSV。
[本発明1005]
前記1つまたは複数の改変が(d)を含む、本発明1001の組換えRSV。
[本発明1006]
前記1つまたは複数の改変が(e)を含む、本発明1001の組換えRSV。
[本発明1007]
NS1遺伝子が遺伝子位置7または9にシフトした、本発明1004~1006のいずれかの組換えRSV。
[本発明1008]
RSVゲノムが、NS1遺伝子またはNS2遺伝子の全部または一部の欠失を含む改変をさらに含む、前記本発明のいずれかの組換えRSV。
[本発明1009]
RSVゲノムが、M2-2遺伝子の全部または一部の欠失を含む改変をさらに含む、前記本発明のいずれかの組換えRSV。
[本発明1010]
RSVゲノムが、前記1つまたは複数の改変を含み、かつSEQ ID NO:2 (6120/NS12FM2)と少なくとも90%、少なくとも95%、および/または少なくとも99%同一のポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列を含む、本発明1001~1002または1004~1009のいずれかの組換えRSV。
[本発明1011]
RSVゲノムが、SEQ ID NO:2 (6120/NS12FM2)で示されるポジティブセンス配列を含む、本発明1010の組換えRSV。
[本発明1012]
RSVゲノムが、前記1つまたは複数の改変を含み、かつSEQ ID NO:4 (6120/NS12Ltr)と少なくとも90%、少なくとも95%、および/または少なくとも99%同一のポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列を含む、本発明1001または1003~1009のいずれかの組換えRSV。
[本発明1013]
RSVゲノムが、SEQ ID NO:4 (6120/NS12Ltr)で示されるポジティブセンス配列を含む、本発明1012の組換えRSV。
[本発明1014]
RSVゲノムが、前記1つまたは複数の改変を含み、かつSEQ ID NO:6 (6120/NS12FM2/ΔNS2)またはSEQ ID NO:8 (6120/NS12Ltr/ΔNS2)と少なくとも90%、少なくとも95%、および/または少なくとも99%同一のポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列を含む、本発明1008の組換えRSV。
[本発明1015]
RSVゲノムが、SEQ ID NO:6 (6120/NS12FM2/ΔNS2)またはSEQ ID NO:8 (6120/NS12Ltr/ΔNS2)で示されるポジティブセンス配列を含む、本発明1014の組換えRSV。
[本発明1016]
RSVゲノムがレポーター遺伝子をさらに含み、任意で、該レポーター遺伝子が緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードする、本発明1001の組換えRSV。
[本発明1017]
RSVゲノムが、
前記1つまたは複数の改変およびレポーター遺伝子、ならびにSEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、もしくはSEQ ID NO:7と少なくとも90%、少なくとも95%、および/もしくは少なくとも99%同一のポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列;ならびに/または
SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、もしくはSEQ ID NO:7に示されるポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列
を含む、本発明1016の組換えRSV。
[本発明1018]
遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、低下したNS1遺伝子および/またはNS2遺伝子の発現;
遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、低下したNS1遺伝子および/またはNS2遺伝子の転写;ならびに/または
遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、低下した宿主インターフェロン応答の阻害
を示す、本発明1001~1017のいずれかの組換えRSV。
[本発明1019]
ウイルス感染に応答してインターフェロンを産生し得る培養細胞において、次第に制限を受けやすくなる、本発明1001~1018のいずれかの組換えRSV。
[本発明1020]
ウイルス感染に応答してインターフェロンを産生し得ない培養細胞において、複製効率を保持する、本発明1001~1018のいずれかの組換えRSV。
[本発明1021]
サブタイプA RSVまたはサブタイプB RSVである、前記本発明のいずれかの組換えRSV。
[本発明1022]
感染性であり、弱毒化されており、かつ自己複製性である、前記本発明のいずれかの組換えRSV。
[本発明1023]
本発明1001~1022のいずれかの組換えRSVゲノムのゲノムヌクレオチド配列、または該RSVゲノムのアンチゲノムcDNAもしくはRNA配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
[本発明1024]
本発明1023の単離されたポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
[本発明1025]
本発明1023または本発明1024の単離されたポリヌクレオチドまたはベクターを含む、細胞。
[本発明1026]
許容性の細胞培養物に本発明1024のベクターをトランスフェクトする段階;
該細胞培養物を、ウイルスの複製を可能にするのに十分な期間にわたってインキュベートする段階;および
複製された組換えRSVを精製する段階
を含む、組換えRSVを製造する方法。
[本発明1027]
本発明1026の方法によって製造された、組換えRSV。
[本発明1028]
本発明1001~1022または1027のいずれかの組換えRSVを含む、薬学的組成物。
[本発明1029]
免疫原として有効な量の本発明1028の薬学的組成物を対象に投与する段階を含む、対象においてRSVに対する免疫応答を誘発する方法。
[本発明1030]
薬学的組成物を鼻腔内投与する、本発明1029の方法。
[本発明1031]
RSVを注射、エアロゾル送達、鼻腔用スプレーまたは点鼻剤によって投与する、本発明1029または1030の方法。
[本発明1032]
対象がヒトである、本発明1029~1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
対象が1~6ヶ月齢である、本発明1029~1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
対象がRSVについて血清反応陰性である、本発明1029~1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
対象においてRSVに対する免疫応答を誘発するための、本発明1001~1022または本発明1027のいずれかの組換えRSVの使用。
本開示の上記のおよび他の特徴ならびに利点は、添付の図面を参照しながら進めるいくつかの態様の以下の詳細な説明から、より明らかになるであろう。
添付の配列表に記載される核酸配列およびアミノ酸配列は、37 C.F.R. 1.822に定義されるヌクレオチド塩基の標準的な文字略号およびアミノ酸の3文字コードを用いて示される。配列表は、2016年12月9日に作成された「Sequence.txt」(約164kb)という名前のファイルの形でASCIIテキストファイルとして提出されており、参照により本明細書に組み入れられる。添付の配列表において:
SEQ ID NO:1は、組換えRSV株6120/NS12FM2GFPのアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:2は、組換えRSV株6120/NS12FM2のアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:3は、組換えRSV株6120/NS12LtrGFPのアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:4は、組換えRSV株6120/NS12LtrのアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:5は、組換えRSV株6120/NS12FM2/ΔNS2/GFPのアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:6は、組換えRSV株6120/NS12FM2/ΔNS2のアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:7は、組換えRSV株6120/NS12Ltr/ΔNS2/GFPのアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:8は、組換えRSV株6120/NS12Ltr/ΔNS2のアンチゲノムcDNA配列である。
SEQ ID NO:9~24は、図1~2および7~8に示される組換えRSVアンチゲノムcDNA配列の断片である。
SEQ ID NO:25および26は、遺伝子開始転写シグナルのヌクレオチド配列である。
本明細書には、ある範囲の弱毒表現型を示すヒトRSVの組換え株を作製するのに有用な突然変異が開示される。本発明の突然変異は、NS1および/またはNS2遺伝子を、RSVゲノムまたはアンチゲノム中のそれらの天然の位置から、より高い位置に、すなわちプロモーターに対してより遠位の位置に、シフトさせることに基づいている。また、このような突然変異を含み、弱毒生ワクチンとして使用するのに適した組換えRSV株も本明細書に開示される。さらに、開示されたウイルスの発現に関連する方法および組成物が本明細書に開示される。例えば、記載されたウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子が開示される。
いくつかの態様において、RSVゲノムまたはアンチゲノムは、NS1/NS2遺伝子の位置の(例えば、それぞれ位置7および8、または9および10への)シフトに加えて、N、P、M、SH、G、F、M2 (M2-1 ORFまたはM2-2 ORF)およびL遺伝子の1つまたは複数に1つまたは複数の突然変異を含む。例えば、RSVゲノムまたはアンチゲノムは、NS1/NS2遺伝子の位置の(例えば、それぞれ位置7および8、または9および10への)シフトに加えて、M2-2タンパク質の発現を除去するまたは低下させる突然変異をM2遺伝子のM2-2 ORFに含むことができる。そのような突然変異は、1つまたは複数の点突然変異、M2-2 ORFの部分的欠失、またはM2-2タンパク質の完全欠失を含み得る。
項目1. RSVゲノムまたはアンチゲノム配列を含む弱毒化表現型を有する組換えRSウイルス変異体をコードする単離されたポリヌクレオチド分子であって、該RSVゲノムまたはアンチゲノムは、
(a) NS1遺伝子が位置1よりも高い遺伝子位置にある;
(b) NS2遺伝子が位置2よりも高い遺伝子位置にある;および
(c) (a)と(b)の組み合わせ;
からなる群より選択される改変を含み、任意で、レポーター遺伝子をさらに含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
項目2. 前記改変が(a)と(b)の組み合わせである、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目3. NS1遺伝子が遺伝子位置7にあり、かつNS2遺伝子が遺伝子位置8にある、項目2記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目4. NS1遺伝子が遺伝子位置9にあり、かつNS2遺伝子が遺伝子位置10にある、項目2記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目5. 前記改変が(a)である、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目6. NS1遺伝子が遺伝子位置7または9にある、項目5記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目7. 前記改変が(b)である、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目8. RSVゲノムまたはアンチゲノムがNS1またはNS2遺伝子の全部または一部の欠失をさらに含む、項目5、6または7記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目9. M2-2遺伝子の全部または一部の欠失をさらに含む、項目1~8のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目10. RSVゲノムまたはアンチゲノムが、SEQ ID NO:2と少なくとも90%同一である配列によって示されるポジティブセンス配列を有する、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目11. RSVゲノムまたはアンチゲノムが、SEQ ID NO:2に示されるポジティブセンス配列を有する、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目12. RSVゲノムまたはアンチゲノムが、SEQ ID NO:4と少なくとも90%同一である配列によって示されるポジティブセンス配列を有する、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目13. RSVゲノムまたはアンチゲノムが、SEQ ID NO:4に示されるポジティブセンス配列を有する、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目14. RSVゲノムまたはアンチゲノムが、SEQ ID NO:6およびSEQ ID NO:8からなる群より選択される配列と少なくとも90%同一である配列によって示されるポジティブセンス配列を有する、項目8記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目15. レポーター遺伝子が緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードする、項目1記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目16. RSVゲノムまたはアンチゲノムが、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5およびSEQ ID NO:7からなる群より選択される配列と少なくとも90%同一である配列によって示されるポジティブセンス配列を有する、項目15記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目17. 遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、NS1遺伝子および/またはNS2遺伝子の発現が低下している、項目1~16のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目18. 遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、NS1遺伝子および/またはNS2遺伝子の転写が低下している、項目1~17のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目19. 遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、宿主インターフェロン応答の阻害が低下している、項目1~16のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目20. RSV変異体が、ウイルス感染に応答してインターフェロンを産生し得る培養細胞において、次第に制限を受けやすくなる、項目1~16のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目21. RSV変異体が、ウイルス感染に応答してインターフェロンを産生し得ない培養細胞において、複製効率を保持する、項目1~16のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
項目22. 項目1~21のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
項目23. 項目1~21のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチドを含む、細胞。
項目24. 項目1~21のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド分子によってコードされる組換えRSV変異体を免疫学的に有効な量で含有する、薬学的組成物。
項目25. アジュバントをさらに含む、項目24記載の薬学的組成物。
項目26. 項目24記載の薬学的組成物を投与することを含んでなる、RSVに対して対象をワクチン接種する方法。
項目27. 薬学的組成物を鼻腔内投与する、項目26記載の方法。
項目28. 薬学的組成物を注射、エアロゾル送達、鼻腔用スプレー、または点鼻剤によって投与する、項目26または27記載の方法。
この実施例は、組換えRSV 6120/NS12FM2/GFPおよび6120/NS12FM2の設計、構築および回収を示す。
この実施例は、rRSV 6120/NS12Ltr/GFPおよび6120/NS12Ltrの設計および構築を示す。
この実施例は、組換えRSV 6120/NS12FM2/GFPの複製特性を記載する。
この実施例は、組換えRSV 6120/NS12Ltr/GFPの複製特性を記載する。
この実施例は、RSV 6120/NS12M2F/GFPおよびRSV 6120/NS12FM2からのNS2遺伝子の欠失を記載する。
この実施例は、RSV 6120/NS12Ltr/GFPおよびRSV 6120/NS12LtrからのNS2遺伝子の欠失を記載する。
この実施例は、組換えウイルス6120/NS12FM2/ΔNS2/GFPの複製特性を記載する。
Claims (21)
- RSウイルス(respiratory syncytial virus:RSV)ゲノムに対する1つまたは複数の改変によって弱毒化された組換えRSVであって、該1つまたは複数の改変が、
(a) NS1遺伝子およびNS2遺伝子の、RSVゲノムの遺伝子位置1および2からの、それぞれ遺伝子位置7および8へのシフト;または
(b) NS1遺伝子およびNS2遺伝子の、RSVゲノムの遺伝子位置1および2からの、それぞれ遺伝子位置9および10へのシフト
を含み、かつ
該組換えRSVが、ウイルス感染に応答してインターフェロンを産生し得る培養細胞において、制限の影響を受けやすくなり、
該組換えRSVが、ウイルス感染に応答してインターフェロンを産生し得ない培養細胞において、複製効率を保持し、かつ
該組換えRSVが、感染性であり、弱毒化されており、かつ自己複製性である
、前記組換えRSV。 - 前記1つまたは複数の改変が(a)を含む、請求項1に記載の組換えRSV。
- 前記1つまたは複数の改変が(b)を含む、請求項1に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、NS2遺伝子の全部または一部の欠失を含む改変をさらに含む、請求項1~3のいずれか一項に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、M2-2遺伝子の全部または一部の欠失を含む改変をさらに含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、前記1つまたは複数の改変を含み、かつSEQ ID NO:2 (6120/NS12FM2)と少なくとも90%、少なくとも95%、および/または少なくとも99%同一のポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列を含む、請求項1~2または4~5のいずれか一項に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、SEQ ID NO:2 (6120/NS12FM2)で示されるポジティブセンス配列を含む、請求項6に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、前記1つまたは複数の改変を含み、かつSEQ ID NO:4 (6120/NS12Ltr)と少なくとも90%、少なくとも95%、および/または少なくとも99%同一のポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列を含む、請求項1または3~5のいずれか一項に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、SEQ ID NO:4 (6120/NS12Ltr)で示されるポジティブセンス配列を含む、請求項8に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、前記1つまたは複数の改変を含み、かつSEQ ID NO:6 (6120/NS12FM2/ΔNS2)またはSEQ ID NO:8 (6120/NS12Ltr/ΔNS2)と少なくとも90%、少なくとも95%、および/または少なくとも99%同一のポジティブセンス配列に対応するヌクレオチド配列を含む、請求項4に記載の組換えRSV。
- RSVゲノムが、SEQ ID NO:6 (6120/NS12FM2/ΔNS2)またはSEQ ID NO:8 (6120/NS12Ltr/ΔNS2)で示されるポジティブセンス配列を含む、請求項10に記載の組換えRSV。
- 遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、低下したNS1遺伝子および/またはNS2遺伝子の発現;
遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、低下したNS1遺伝子および/またはNS2遺伝子の転写;ならびに/または
遺伝子位置1にNS1遺伝子および遺伝子位置2にNS2遺伝子を有するRSVと比較して、低下した宿主インターフェロン応答の阻害
を示す、請求項1~11のいずれか一項に記載の組換えRSV。 - サブタイプA RSVもしくはサブタイプB RSVである、
請求項1~12のいずれか一項に記載の組換えRSV。 - 請求項1~13のいずれか一項に記載の組換えRSVゲノムのゲノムヌクレオチド配列、または該RSVゲノムのアンチゲノムcDNAもしくはRNA配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
- 請求項14に記載の単離されたポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
- 請求項14または請求項15に記載の単離されたポリヌクレオチドまたはベクターを含む、細胞。
- 許容性の細胞培養物に請求項15に記載のベクターをトランスフェクトする段階;
該細胞培養物を、ウイルスの複製を可能にするのに十分な期間にわたってインキュベートする段階;および
複製された組換えRSVを精製する段階
を含む、組換えRSVを製造する方法。 - 請求項1~13のいずれか一項に記載の組換えRSVを含む、薬学的組成物。
- 請求項1~13のいずれか一項に記載の組換えRSVを免疫原として有効な量で含む、対象においてRSVに対する免疫応答を誘発するための薬学的組成物。
- 鼻腔内投与される、かつ/または
注射、エアロゾル送達、鼻腔用スプレーもしくは点鼻剤によって投与される、
請求項19に記載の薬学的組成物。 - 対象がヒトである、
対象が1~6ヶ月齢である、かつ/または
対象がRSVについて血清反応陰性である、
請求項19または20に記載の薬学的組成物。
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BUKREYEV, A. et al.,Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor expressed by recombinant respiratory syncytial virus attenuates viral replication and increases the level of pulmonary antigen-presenting cells,Journal of Virology,2001年,Vol.75, No.24,P.12128-12140 |
MUNIR, S. et al.,Nonstructural proteins 1 and 2 of respiratory syncytial virus suppress maturation of human dendritic cells,Journal of Virology,2008年,Vol.82, No.17,P.8780-8796 |
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