JP7060631B2 - 腫瘍を治療および／または予防する薬物の調製におけるイソバレリルスピラマイシンｉ、ｉｉおよび／またはｉｉｉの応用、ならびに薬物 - Google Patents

Description

本発明は薬物の技術分野に属し、具体的に、腫瘍を治療および／または予防する薬物の調製におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩの応用、ならびに薬物に関する。

腫瘍は一般的で、よく見られる疾患であり、内外の各種発癌性因子の長期的作用下で、人体の組織細胞に遺伝子の突然変異が生じて、その成長および分化に対する正常な制御を失い、クローン性異常増殖および分化が生じて形成される新生物または病的増殖物である。腫瘍は良性腫瘍および悪性腫瘍に分けられ、悪性腫瘍はさらに上皮組織由来の癌、間葉組織由来の肉腫および癌肉腫の３種に細分される。通常、人々が言う「癌」は、一般的にすべての悪性腫瘍を指す。

悪性腫瘍は人々の健康を脅かす主要な悪性疾患の１つであり、現在、全世界で死因第１位である。最新データでは、２００７年、全世界で総死亡数の１３％を占める約７９０万人が各種癌で亡くなり、１２００万を超える腫瘍症例が診断され、このうち７２％以上の腫瘍患者および致死症例はいずれも発展途上国で発生しており、上昇し続ける傾向を呈している。２０１５年、全世界の腫瘍による致死数は９００万人まで増加し、２０３０年に１２００万人を超えると推定されている。現在、中国では毎年癌発症数が約２８０万で、死亡数は４０万人を超え、中国の各種疾病による致死原因の１位となっており、上昇し続ける傾向を呈している。社会の生活リズムが速くなるのに伴い、競争のストレスは増大し、さらに人々の生活方式および環境の変化により、腫瘍発症率および死亡数は年々増加し、すでに現代社会で一般的で発症率が高い疾患となっている。患者の生活の質に深刻な影響を及ぼすだけでなく、家庭および社会に重い経済的および精神的負担をもたらし、さらに全世界を悩ます重大な社会問題でもあり、癌の治療および予防は一貫して全世界で最も切実な問題の１つである。現在、化学療法は腫瘍に抵抗する主要な手段であり、比較的良好な治療効果を有するが、たびたび骨髄抑制、免疫機能低下などの副作用を引き起こし、患者は治療を続けることが難しく、さらに化学療法薬に治療過程で出現する薬剤耐性は、現在、すでに臨床治療における難題の１つとなっている。近年、全世界の抗腫瘍薬市場は急速に成長しており、米国ＦＤＡの統計データに基づくと、全世界の抗癌剤市場の売上総額は２００４年の２４０億米ドルから、２００７年の３９６億米ドルに激増している。世界で毎年新規の抗腫瘍薬が発売されているが、現在でも依然として癌に打ち勝つ有効な手段はない。同時に、新しい癌の種類が絶えず発見され、さらに腫瘍の薬剤抵抗性／薬剤耐性の発生および増強により、新規の効果的な抗癌剤を発見する必要性は、明らかに差し迫っている。

カリマイシン（Ｃａｒｒｉｍｙｃｉｎ）は、遺伝子組み換え技術によりカルボマイシン産生菌の４’’イソバレリルトランスフェラーゼ遺伝子（４’’－ｏ－ａｃｙｌ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）をスピラマイシン産生菌中にクローニングし、スピラマイシンの４’’－ＯＨを一定方向でアシル化し、４’’位にイソバレリル基側鎖を付加して形成される、４’’イソバレリルスピラマイシンを主要成分とした新規の抗生物質である。

カリマイシンは、数種のスピラマイシン誘導体からなり、主要な活性成分であるイソバレリルスピラマイシン（Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）の総含量は６０％以上であり、薬学的に許容可能な薬物組成物である。中心構造は１６員環ラクトン環で、１分子のホロサミン、１分子のミカミノースおよび１分子のミカロースと結合してなる。その主要成分のイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩが、スピラマイシンの構造と異なる部分は、ミカロースの４’’位に結合するのがイソバレリル基であり、ヒドロキシ基でないことである。該薬は、瀋陽同聯などが１．１類新薬に共同で申請している。

カリマイシンの主成分の化学構造は、式（１）に示す通りである。

式中、Ｒ＝Ｈ、Ｒ’＝ＣＯＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２のとき、イソバレリルスピラマイシンＩである。
Ｒ＝ＣＯＣＨ_３、Ｒ’＝ＣＯＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２のとき、イソバレリルスピラマイシンＩＩである。
Ｒ＝ＣＯＣＨ_２ＣＨ_３、Ｒ’＝ＣＯＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２のとき、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩである。

カリマイシンは１６員環マクロライド系抗生物質に属し、活性基のカルボキシル基、アルコキシ基、エポキシ基、ケトン基およびアルデヒド基、ならびに１対の共役したＣ＝Ｃを有し、分子量は約８８４～９８２である。似た化学構造を有するため、カリマイシンおよびマクロライド系抗生物質は多くの共通性を有する。つまり、エステル類、アセトン、クロロホルム、アルコール類など多くの有機溶媒に易溶であり、石油エーテルに微溶であり、水に難溶である。分子構造中に２つのジメチルアミン基を含んで弱アルカリ性を呈し、酸性水溶液に易溶である。溶解度が温度の上昇に伴って低下する「負の溶解性」の性質を有する。カリマイシンの主要成分であるイソバレリルスピラマイシンの４’’位の炭素鎖は比較的長く、親水性が劣るため、水への溶解度はスピラマイシンおよび４’’－アセチルスピラマイシンより低い。

カリマイシンは白色の非結晶粉末であり、吸湿性を少し有し、比旋光度は約－８０．８°、紫外線の最大吸収波長は２３１～２３２ｎｍである。それ自体に弱い蛍光発色基を持ち、濃硫酸または塩酸で紫色を呈し、強い紫色の蛍光を発生させる。２３１～２３２ｎｍ部分に最大吸光度を有する。

該薬は親油性が良好で、組織浸透力が高く、内服吸収が速く、体内維持時間が長く、持続的な抗生物質持続効果を有する。薬効および化学的立体配座の関係に基づくと、マクロライド系抗生物質の４’’位をアシル化すると、その親油性および体内活性が上昇し、体内の抗菌活性および臨床治療効果はいずれも顕著に上昇する。さらに抗生物質の体内における安定性は、４’’ヒドロキシエステルの炭素鎖の伸長に伴って高くなり、すなわちイソバレリルスピラマイシン＞ブチリルスピラマイシン＞プロピオニルスピラマイシン＞アセチルスピラマイシンである。

予備的な体内外での薬力学試験は、該薬が多くのＧ陽性菌に対して比較的良好な抗菌活性を有するだけでなく、一部のＧ陰性菌にも一定の作用を有することを明確に示す。各技術指標はアジスロマイシン、エリスロマイシン、アセチルスピラマイシン、ミデカマイシンより明らかに優れており、特に肺炎マイコプラズマに対する抗菌活性が最も高い。エリスロマイシン耐性菌、淋菌、肺炎球菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、インフルエンザ菌、インフルエンザ菌、バクテロイデスフラジリス、レジオネラ菌、不活性の桿菌およびウェルシュ菌に対しても一定の抗菌活性を有し、臨床のエリスロマイシン耐性黄色ブドウ球菌に対してわずかな交差耐性を有する。カリマイシンは、主にグラム陽性菌感染症、特に上気道感染症の治療に用いられ、泌尿器系の感染などに用いられ得る。

本出願人は最近の一研究において、ヒト乳腺癌細胞ＭＣＦ－７およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２またはマウス肝癌細胞Ｈ_２２、ヒト非小細胞肺癌細胞Ａ５４９、Ｌｅｗｉｓ肺癌細胞、ヒト大細胞肺癌細胞Ｈ４６０およびＨ１２９９、ヒト腎淡明細胞癌細胞７８６－Ｏ、ヒト腎細胞癌細胞７６９－Ｐ、ヒト神経膠腫細胞Ｕ２５１、ヒト神経膠芽腫細胞Ａ１７２、ヒト組織リンパ腫細胞Ｕ９３７、ヒト子宮頸癌細胞ＨｅＬａ、ヒト前立腺癌細胞ＰＣ３、ヒト膵臓腺癌細胞ＰＡＮＣ－１、ヒト食道癌細胞ＴＥ－１、ヒト胃腺癌細胞ＳＧＣ７９０１、ヒト結腸癌細胞ＨＴ－２９、ヒト前骨髄球性白血病細胞ＨＬ－６０、ヒト甲状腺癌細胞ＴＰＣ－１、ヒト膀胱癌細胞Ｔ－２４を用いて、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩに対して行った体外での増殖抑制活性評価で、試料が測定した細胞に対して、いずれも良好な増殖抑制活性を示すことを発見した。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩが腫瘍治療の新しい薬物となる可能性があることを明確に示し、これにより本発明を完成した。

本発明が解決しようとする技術的問題は既存技術の不足を克服することにあり、腫瘍を治療および／または予防する薬物の調製におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩの応用を提供する。

上記技術的問題を解決するため、本発明は以下の技術案を採用する。

本発明は、まず腫瘍を治療および／または予防する薬物の調製におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩの応用を提供する。

このうち、前記腫瘍は固形腫瘍および非固形腫瘍を含む。

さらに、前記固形腫瘍は良性固形腫瘍および悪性固形腫瘍を含む。前記非固形腫瘍は、リンパ腫または白血病である。

さらに、前記悪性固形腫瘍は、乳腺癌、肝癌、肺癌、腎癌、脳腫瘍、子宮頸癌、前立腺癌、リンパ腫、膵臓腺癌、食道癌、胃癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌または悪性皮膚腫瘍である。

好ましくは、前記脳腫瘍は神経膠腫または髄膜腫であり、前記胃癌は胃腺癌である。

本発明は、試験により、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩがヒト乳腺癌細胞ＭＣＦ－７およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２、ヒト非小細胞肺癌細胞Ａ５４９、ヒト大細胞肺癌細胞Ｈ４６０およびＨ１２９９、ヒト腎淡明細胞癌細胞７８６－Ｏ、ヒト腎細胞癌細胞７６９－Ｐ、ヒト組織リンパ腫細胞Ｕ９３７、ヒト子宮頸癌細胞ＨｅＬａ、ヒト前立腺癌細胞ＰＣ３、ヒト神経膠腫細胞Ｕ２５１、ヒト神経膠芽腫細胞Ａ１７２、ヒト膵臓腺癌細胞ＰＡＮＣ－１、ヒト結腸癌細胞ＨＴ－２９、ヒト食道癌細胞ＴＥ－１、ヒト胃腺癌細胞ＳＧＣ７９０１、ヒト前骨髄球性白血病細胞ＨＬ－６０、ヒト甲状腺癌細胞ＴＰＣ－１、ヒト膀胱癌細胞Ｔ－２４に対して、良好な増殖抑制活性を有することを明確に示す。これにより、これらの腫瘍または癌疾患の治療に、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩを用いることができることを実証している。

さらに、前記薬物は、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩ、その薬学的に許容可能な塩、ならびに薬学的に許容可能な添加剤で製造した各種剤形である。

さらに、前記薬物は、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩ、その薬学的に許容可能な塩、抗腫瘍薬、ならびに薬学的に許容可能な添加剤で製造した各種剤形である。

本発明において、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩ、ならびに抗腫瘍薬の少なくとも１つから配合剤を製造することができる。

さらに、配合剤を製造するとき、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩ、ならびに第２活性成分の用量比は１～９９：９９～１、好ましくは５～９５：９５～５、より好ましくは１０～９０：９０～１０、さらに好ましくは２０～８０：８０～２０である。

さらに、前記薬物は、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩ、その薬学的に許容可能な塩を含む第１薬剤と、抗腫瘍薬を含む第２薬剤との組合せである。

本発明において、活性成分のイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩを含む第１薬剤と、化学療法薬、放射線治療薬、標的治療薬または免疫治療薬の少なくとも１つを含む第２薬剤とを併用投与することもできる。併用投与するとき、第１薬剤および第２薬剤の投与順序はどちらでもよく、先に第１薬剤を投与することも、先に第２薬剤を投与することも、２つの薬剤を同時に使用することもできる。

併用投与するとき、第１薬剤および第２薬剤の用量比は１～９９：９９～１、好ましくは５～９５：９５～５、より好ましくは１０～９０：９０～１０、さらに好ましくは２０～８０：８０～２０である。

さらに、前記抗腫瘍薬は、化学療法薬、放射線治療薬、標的治療薬および／または免疫治療薬である。

本発明は、さらに腫瘍を治療および／または予防する薬物を提供する。このうち、前記薬物の活性成分はイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩを含む。

さらに、前記薬物は第２活性成分をさらに含む。

さらに、前記第２活性成分は、化学療法薬、放射線治療薬、標的治療薬または免疫治療薬の少なくとも１つを含む。

本発明は、さらに腫瘍を治療および／または予防する併用製品を提供する。このうち、前記併用製品は第１薬剤および第２薬剤を含み、前記第１薬剤の活性成分はイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩであり、前記第２薬剤は化学療法薬、放射線治療薬、標的治療薬または免疫治療薬の少なくとも１つを含む。

さらに、前記薬物または第１薬剤は、薬学的に許容可能な剤形である。

さらに、前記薬物または第１薬剤におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩの用量は５～１５００ｍｇ；好ましくは５０～１０００ｍｇ；より好ましくは１００～４００ｍｇである。

本発明において、前記イソバレリルスピラマイシンＩは既存技術の方法により分離、調製することができ、例えば中国特許出願公開第１０１７８５７７８号明細書の実施例１の方法により分離、調製する。前記イソバレリルスピラマイシンＩＩは既存技術の方法により分離、調製することができ、例えば中国特許出願公開第１０１７８５７７９号明細書の実施例１の方法により分離、調製する。前記イソバレリルスピラマイシンＩＩＩは既存技術の方法により分離、調製することができ、例えば中国特許出願公開第１０１７７３５１０号明細書の実施例１の方法により分離、調製する。

上記技術案を採用すると、本発明は既存技術と比較して、以下の有益な効果を有する。

本発明は、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩが、比較的良好な抗腫瘍作用を有し、特に乳腺癌、肝癌、肺癌、リンパ腫、子宮頸癌、前立腺癌、結腸癌または白血病などの腫瘍に対して、比較的良好な治療効果を有することを証明している。腫瘍を治療および／または予防する薬物の調製におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩの応用、ならびにその臨床における普及に理論的根拠を提供するだけでなく、重要な経済的効果および社会的効果を有する。

本発明の実施例の目的、技術案および利点をより明確にするため、以下、本発明の実施例の図を組み合わせて、実施例中の技術案について明確、完全に説明する。以下の実施例は本発明を説明するものであり、本発明の範囲を制限するものではない。

実施例１、イソバレリルスピラマイシンＩ錠
規格：２００ｍｇ／３５０ｍｇ
裸錠の処方：
イソバレリルスピラマイシンＩ ２００ｇ
微結晶セルロース １１０ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム ２２ｇ
ポビドンＫ_３０（５％） １５ｇ
ステアリン酸マグネシウム ３ｇ
製造 １０００錠
コーティング液の処方：
オパドライＩＩ ２１ｇ
蒸留水 適量
製造 １０５ｍｌ

調製工程：
裸錠の調製：主薬および添加剤をそれぞれ１００メッシュに通し、処方量のイソバレリルスピラマイシンＩ、微結晶セルロースおよび処方の１／２量のカルボキシメチルデンプンナトリウムを均一に混合する。その後５％ポビドンＫ_３０水溶液を添加して軟質材料を作製し、１８メッシュで造粒し、湿潤顆粒を６０℃の通風条件下で２ｈ乾燥させる。乾燥後１８メッシュで整粒し、さらに処方の１／２量のカルボキシメチルデンプンナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムを添加して均一に混合した後、直径１１ｍｍの臼で打錠すると、重量が３５０ｍｇ、硬度が６．５ｋｇの薬物含有裸錠が得られる。

コーティング液の調製：調製容器中に必要なオパドライＩＩ（白色）を量り、必要量の水を添加する。何回かに分けて添加し、すべて添加した後、撹拌速度を低下させて渦を消失させ、引き続き３０ｍｉｎ撹拌して得られる。

フィルムコーティング錠の調製：裸錠をコーティングパン内に入れる。コーティング条件を確定し、主機の速度２０ｒ／ｍｉｎ、給気温度４０℃、排気温度３０℃、噴霧圧力０．０２ＭＰａ、噴霧流量１ｍｌ／ｍｉｎでコーティングを行う。安定すると、錠剤表面が滑らかで、色合いが均等になるまで噴霧コーティングを１．５ｈ続ける。フィルムコーティングの検査基準に符合すると合格である。コーティングで重量が５％前後増す。

実施例２、イソバレリルスピラマイシンＩ素錠（１００００錠で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末 １０００ｇ
低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（５％） ９２．５ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム（３％） ５５．５ｇ
ステアリン酸マグネシウム（１％） １８．５ｇ
デンプン 総重量－その他の原料、添加剤の重量
総重量 １８５０ｇ

調製工程：適量のデンプンを秤取して１５％濃度まで希釈し、糊状になるまで加熱して接着剤を作製する。主原料のイソバレリルスピラマイシンＩ、添加剤のデンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムをそれぞれ１００メッシュに通し、処方量に応じて、必要な主原料および添加剤を秤取する。イソバレリルスピラマイシンＩ、デンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースを均一になるまで十分に混合した後、１５％デンプン濃度のデンプン糊で軟質材料を作製する。１４メッシュで造粒し、５０～６０℃で乾燥させて、水分を３～５％に制御し、１４メッシュで整粒する。カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、顆粒の含有量を測定する。顆粒の含有量に基づいて錠剤の重量を計算し、打錠（Φ９ｍｍの臼）して、錠剤重量の差を測定する。検査に合格後、包装する。

実施例３、イソバレリルスピラマイシンＩカプセル剤（１００００粒で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末 １０００ｇ
デンプン １０８０－イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末の重量
薬用３号カプセル １０００粒
流動パラフィン ５０ｍｌ

調製工程：主原料のイソバレリルスピラマイシンＩ、添加剤の薬用デンプンを工程の処方量に応じてそれぞれ秤取した後、混合器に入れて１．５～２時間十分に混合する。サンプリングし、含有量を測定して得られたデータは、理論データと基本的に一致するべきである（各カプセルに詰める重量は約０．１０５ｇである）。検査に合格した薬用３号カプセルおよび混合した原料を全自動カプセル充填機の操作の要求に応じ、それぞれローディング装置に入れて充填し、充填したカプセルに対して有意検定を行う（±１０％以内、＜０．３ｇ）。溶出率は要求に符合する。検査後、要求に符合するカプセルを艶出し機内に入れ、流動パラフィンを添加して１５～２０分間艶出しを行った後、取り出して完成品の包装および検査を行う。

実施例４、イソバレリルスピラマイシンＩドライシロップ（１００００袋で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末 １２５０ｇ
クエン酸（０．５％） １５ｇ
スクロース 総重量－その他の原料、添加剤
総重量 約５００ｇ
色素（クルクミン） 約１ｇ

調製工程：イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末、クエン酸、スクロースをそれぞれ高速気流粉砕機で粉砕し、顆粒の８５％が３００メッシュを、１５％が１８０メッシュを通るようにする。その後粉砕後の微粉を処方量に応じて秤取してから１～１．５時間十分に混合し、その含有量を測定し、容量（理論容量は各袋５００ｍｇ）を計算する。その後混合物を包装機中に入れ、アルミ箔を取り付け、包装機の操作の要求に応じて包装する。容量の差は±５％以内であり、包装後、検査に合格したものの外部包装を行う。

実施例５、イソバレリルスピラマイシンＩ顆粒剤（１００００袋で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末 １２５０ｇ
粉砂糖 ２００００ｇ
デキストリン ９０００ｇ
５％ＰＶＰ－Ｋ_３０ 適量

調製工程：イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末、粉砂糖、デキストリンを１２０メッシュに通し、処方量に応じてイソバレリルスピラマイシンＩ、粉砂糖、デキストリンを秤取して均一に混合する。均一に混合した上記材料から、５％ＰＶＰ－Ｋ_３０溶液を用いて軟質材料を作製し、振動造粒機で造粒し、７０℃で乾燥させて整粒する。検査に合格後、包装する。

実施例６、イソバレリルスピラマイシンＩ凍結乾燥粉末注射剤
イソバレリルスピラマイシンＩ原料粉末５００ｍｇおよび等モルのアジピン酸を秤取して均一に混合した後、５ｍｌ水中に溶解すると、淡黄色の透明な溶液が得られ、ｐＨは４．６～５．６の間である。さらに凍結乾燥支持剤としてマンニトール４０ｍｇを添加し、低温で９ｈ急速冷凍させた後、凍結乾燥させると、淡黄色の軟らかな塊が得られる。使用前に１０ｍｌの滅菌水で溶解する。

実施例７、イソバレリルスピラマイシンＩＩ錠
規格：２００ｍｇ／３５０ｍｇ
裸錠の処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩ ２００ｇ
微結晶セルロース １１０ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム ２２ｇ
ポビドンＫ_３０（５％） １５ｇ
ステアリン酸マグネシウム ３ｇ
製造 １０００錠
コーティング液の処方：
オパドライＩＩ ２１ｇ
蒸留水 適量
製造 １０５ｍｌ

調製工程：
裸錠の調製：主薬および添加剤をそれぞれ１００メッシュに通し、処方量のイソバレリルスピラマイシンＩＩ、微結晶セルロースおよび処方の１／２量のカルボキシメチルデンプンナトリウムを均一に混合する。その後５％ポビドンＫ_３０水溶液を添加して軟質材料を作製し、１８メッシュで造粒し、湿潤顆粒を６０℃の通風条件下で２ｈ乾燥させる。乾燥後１８メッシュで整粒し、さらに処方の１／２量のカルボキシメチルデンプンナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムを添加して均一に混合した後、直径１１ｍｍの臼で打錠すると、重量が３５０ｍｇ、硬度が６．５ｋｇの薬物含有裸錠が得られる。

コーティング液の調製：調製容器中に必要なオパドライＩＩ（白色）を量り、必要量の水を添加する。何回かに分けて添加し、すべて添加した後、撹拌速度を低下させて渦を消失させ、引き続き３０ｍｉｎ撹拌して得られる。

フィルムコーティング錠の調製：裸錠をコーティングパン内に入れる。コーティング条件を確定し、主機の速度２０ｒ／ｍｉｎ、給気温度４０℃、排気温度３０℃、噴霧圧力０．０２ＭＰａ、噴霧流量１ｍｌ／ｍｉｎでコーティングを行う。安定すると、錠剤表面が滑らかで、色合いが均等になるまで噴霧コーティングを１．５ｈ続ける。フィルムコーティングの検査基準に符合すると合格である。コーティングで重量が５％前後増す。

実施例８、イソバレリルスピラマイシンＩＩ素錠（１００００錠で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末 １０００ｇ
低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（５％） ９２．５ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム（３％） ５５．５ｇ
ステアリン酸マグネシウム（１％） １８．５ｇ
デンプン 総重量－その他の原料、添加剤の重量
総重量 １８５０ｇ

調製工程：適量のデンプンを秤取して１５％濃度まで希釈し、糊状になるまで加熱して接着剤を作製する。主原料のイソバレリルスピラマイシンＩＩ、添加剤のデンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムをそれぞれ１００メッシュに通し、処方量に応じて、必要な主原料および添加剤を秤取する。イソバレリルスピラマイシンＩＩ、デンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースを均一になるまで十分に混合した後、１５％デンプン濃度のデンプン糊で軟質材料を作製する。１４メッシュで造粒し、５０～６０℃で乾燥させて、水分を３～５％に制御し、１４メッシュで整粒する。カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、顆粒の含有量を測定する。顆粒の含有量に基づいて錠剤の重量を計算し、打錠（Φ９ｍｍの臼）して、錠剤重量の差を測定する。検査に合格後、包装する。

実施例９、イソバレリルスピラマイシンＩＩカプセル剤（１００００粒で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末 １０００ｇ
デンプン １０８０－イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末の重量
薬用３号カプセル １０００粒
流動パラフィン ５０ｍｌ

調製工程：主原料のイソバレリルスピラマイシンＩＩ、添加剤の薬用デンプンを工程の処方量に応じてそれぞれ秤取した後、混合器に入れて１．５～２時間十分に混合する。サンプリングし、含有量を測定して得られたデータは、理論データと基本的に一致するべきである（各カプセルに詰める重量は約０．１０５ｇである）。検査に合格した薬用３号カプセルおよび混合した原料を全自動カプセル充填機の操作の要求に応じ、それぞれローディング装置に入れて充填し、充填したカプセルに対して有意検定を行う（±１０％以内、＜０．３ｇ）。溶出率は要求に符合する。検査後、要求に符合するカプセルを艶出し機内に入れ、流動パラフィンを添加して１５～２０分間艶出しを行った後、取り出して完成品の包装および検査を行う。

実施例１０、イソバレリルスピラマイシンＩＩドライシロップ（１００００袋で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末 １２５０ｇ
クエン酸（０．５％） １５ｇ
スクロース 総重量－その他の原料、添加剤
総重量 約５００ｇ
色素（クルクミン） 約１ｇ

調製工程：イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末、クエン酸、スクロースをそれぞれ高速気流粉砕機で粉砕し、顆粒の８５％が３００メッシュを、１５％が１８０メッシュを通るようにする。その後粉砕後の微粉を処方量に応じて秤取してから１～１．５時間十分に混合し、その含有量を測定し、容量（理論容量は各袋５００ｍｇ）を計算する。その後混合物を包装機中に入れ、アルミ箔を取り付け、包装機の操作の要求に応じて包装する。容量の差は±５％以内であり、包装後、検査に合格したものの外部包装を行う。

実施例１１、イソバレリルスピラマイシンＩＩ顆粒剤（１００００袋で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末 １２５０ｇ
粉砂糖 ２００００ｇ
デキストリン ９０００ｇ
５％ＰＶＰ－Ｋ_３０ 適量

調製工程：イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末、粉砂糖、デキストリンを１２０メッシュに通し、処方量に応じてイソバレリルスピラマイシンＩＩ、粉砂糖、デキストリンを秤取して均一に混合する。均一に混合した上記材料から、５％ＰＶＰ－Ｋ_３０溶液を用いて軟質材料を作製し、振動造粒機で造粒し、７０℃で乾燥させて整粒する。検査に合格後、包装する。

実施例１２、イソバレリルスピラマイシンＩＩ凍結乾燥粉末注射剤
イソバレリルスピラマイシンＩＩ原料粉末５００ｍｇおよび等モルのアジピン酸を秤取して均一に混合した後、５ｍｌ水中に溶解すると、淡黄色の透明な溶液が得られ、ｐＨは４．６～５．６の間である。さらに凍結乾燥支持剤としてマンニトール４０ｍｇを添加し、低温で９ｈ急速冷凍させた後、凍結乾燥させると、淡黄色の軟らかな塊が得られる。使用前に１０ｍｌの滅菌水で溶解する。

実施例１３、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ錠
規格：２００ｍｇ／３５０ｍｇ
裸錠の処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ ２００ｇ
微結晶セルロース １１０ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム ２２ｇ
ポビドンＫ_３０（５％） １５ｇ
ステアリン酸マグネシウム ３ｇ
製造 １０００錠
コーティング液の処方：
オパドライＩＩ ２１ｇ
蒸留水 適量
製造 １０５ｍｌ

調製工程：
裸錠の調製：主薬および添加剤をそれぞれ１００メッシュに通し、処方量のイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、微結晶セルロースおよび処方の１／２量のカルボキシメチルデンプンナトリウムを均一に混合する。その後５％ポビドンＫ_３０水溶液を添加して軟質材料を作製し、１８メッシュで造粒し、湿潤顆粒を６０℃の通風条件下で２ｈ乾燥させる。乾燥後１８メッシュで整粒し、さらに処方の１／２量のカルボキシメチルデンプンナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムを添加して均一に混合した後、直径１１ｍｍの臼で打錠すると、重量が３５０ｍｇ、硬度が６．５ｋｇの薬物含有裸錠が得られる。

コーティング液の調製：調製容器中に必要なオパドライＩＩ（白色）を量り、必要量の水を添加する。何回かに分けて添加し、すべて添加した後、撹拌速度を低下させて渦を消失させ、引き続き３０ｍｉｎ撹拌して得られる。

フィルムコーティング錠の調製：裸錠をコーティングパン内に入れる。コーティング条件を確定し、主機の速度２０ｒ／ｍｉｎ、給気温度４０℃、排気温度３０℃、噴霧圧力０．０２ＭＰａ、噴霧流量１ｍｌ／ｍｉｎでコーティングを行う。安定すると、錠剤表面が滑らかで、色合いが均等になるまで噴霧コーティングを１．５ｈ続ける。フィルムコーティングの検査基準に符合すると合格である。コーティングで重量が５％前後増す。

実施例１４、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ素錠（１００００錠で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末 １０００ｇ
低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（５％） ９２．５ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム（３％） ５５．５ｇ
ステアリン酸マグネシウム（１％） １８．５ｇ
デンプン 総重量－その他の原料、添加剤の重量
総重量 １８５０ｇ

調製工程：適量のデンプンを秤取して１５％濃度まで希釈し、糊状になるまで加熱して接着剤を作製する。主原料のイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、添加剤のデンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムをそれぞれ１００メッシュに通し、処方量に応じて、必要な主原料および添加剤を秤取する。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、デンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースを均一になるまで十分に混合した後、１５％デンプン濃度のデンプン糊で軟質材料を作製する。１４メッシュで造粒し、５０～６０℃で乾燥させて、水分を３～５％に制御し、１４メッシュで整粒する。カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、顆粒の含有量を測定する。顆粒の含有量に基づいて錠剤の重量を計算し、打錠（Φ９ｍｍの臼）して、錠剤重量の差を測定する。検査に合格後、包装する。

実施例１５、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩカプセル剤（１００００粒で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末 １０００ｇ
デンプン １０８０－イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末の重量
薬用３号カプセル １０００粒
流動パラフィン ５０ｍｌ

調製工程：主原料のイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、添加剤の薬用デンプンを工程の処方量に応じてそれぞれ秤取した後、混合器に入れて１．５～２時間十分に混合する。サンプリングし、含有量を測定して得られたデータは、理論データと基本的に一致するべきである（各カプセルに詰める重量は約０．１０５ｇである）。検査に合格した薬用３号カプセルおよび混合した原料を全自動カプセル充填機の操作の要求に応じ、それぞれローディング装置に入れて充填し、充填したカプセルに対して有意検定を行う（±１０％以内、＜０．３ｇ）。溶出率は要求に符合する。検査後、要求に符合するカプセルを艶出し機内に入れ、流動パラフィンを添加して１５～２０分間艶出しを行った後、取り出して完成品の包装および検査を行う。

実施例１６、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩドライシロップ（１００００袋で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末 １２５０ｇ
クエン酸（０．５％） １５ｇ
スクロース 総重量－その他の原料、添加剤
総重量 約５００ｇ
色素（クルクミン） 約１ｇ

調製工程：イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末、クエン酸、スクロースをそれぞれ高速気流粉砕機で粉砕し、顆粒の８５％が３００メッシュを、１５％が１８０メッシュを通るようにする。その後粉砕後の微粉を処方量に応じて秤取してから１～１．５時間十分に混合し、その含有量を測定し、容量（理論容量は各袋５００ｍｇ）を計算する。その後混合物を包装機中に入れ、アルミ箔を取り付け、包装機の操作の要求に応じて包装する。容量の差は±５％以内であり、包装後、検査に合格したものの外部包装を行う。

実施例１７、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ顆粒剤（１００００袋で計算）
処方：
イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末 １２５０ｇ
粉砂糖 ２００００ｇ
デキストリン ９０００ｇ
５％ＰＶＰ－Ｋ_３０ 適量

調製工程：イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末、粉砂糖、デキストリンを１２０メッシュに通し、処方量に応じてイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、粉砂糖、デキストリンを秤取して均一に混合する。均一に混合した上記材料から、５％ＰＶＰ－Ｋ_３０溶液を用いて軟質材料を作製し、振動造粒機で造粒し、７０℃で乾燥させて整粒する。検査に合格後、包装する。

実施例１８、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ凍結乾燥粉末注射剤
イソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原料粉末５００ｍｇおよび等モルのアジピン酸を秤取して均一に混合した後、５ｍｌ水中に溶解すると、淡黄色の透明な溶液が得られ、ｐＨは４．６～５．６の間である。さらに凍結乾燥支持剤としてマンニトール４０ｍｇを添加し、低温で９ｈ急速冷凍させた後、凍結乾燥させると、淡黄色の軟らかな塊が得られる。使用前に１０ｍｌの滅菌水で溶解する。

試験例１、抗腫瘍活性のバイオアッセイ
測定の目的は、測定試料の体外での細胞増殖抑制作用または細胞毒性活性を評価することである。

細胞株：
ヒト乳腺癌細胞ＭＣＦ－７およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２、ヒト非小細胞肺癌細胞Ａ５４９、ヒト大細胞肺癌細胞Ｈ４６０およびＨ１２９９、ヒト腎淡明細胞癌細胞７８６－Ｏ、ヒト腎細胞癌細胞７６９－Ｐ、ヒト神経膠腫細胞Ｕ２５１、ヒト神経膠芽腫細胞Ａ１７２、ヒト組織リンパ腫細胞Ｕ９３７、ヒト子宮頸癌細胞ＨｅＬａ、ヒト前立腺癌細胞ＰＣ３、ヒト膵臓腺癌細胞ＰＡＮＣ－１、ヒト食道癌細胞ＴＥ－１、ヒト胃腺癌細胞ＳＧＣ７９０１、ヒト結腸癌細胞ＨＴ－２９、ヒト前骨髄球性白血病細胞ＨＬ－６０、ヒト甲状腺癌細胞ＴＰＣ－１、ヒト膀胱癌細胞Ｔ－２４。

試薬：
ＲＰＭＩ１６４０培地、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ低グルコース培地、ウシ胎児血清は米国Ｇｉｂｃｏ社から購入し、トリプシン、グルタミン、ペニシリン、ストレプトマイシン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、メチルチアゾリルテトラゾリウム（ＭＴＴ）は、米国Ｓｉｇｍａ社から購入した。

機器：
炭酸ガスインキュベータ（Ｓａｎｙｏ、Ｊａｐａｎ）、酵素免疫測定装置（Ｔｅｃａｎ、Ａｕｓｔｒｉａ）、９６ウェル培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）、倒立顕微鏡（Ｍｏｔｉｃ、Ｃｈｉｎａ）。

操作の工程は以下の通りである。
接着細胞：
ＭＣＦ－７、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨｅｐＧ２、Ａ５４９、Ｈ４６０、Ｈ１２９９、７８６－Ｏ、７６９－Ｐ、Ｕ２５１、Ａ１７２、ＨｅＬａ、ＰＣ３、ＰＡＮＣ－１、ＴＥ－１、ＳＧＣ７９０１、ＨＴ－２９は接着細胞である。対数期の接着腫瘍細胞を選択し、パンクレアチンで消化した後、１０％ウシ胎児血清を含む培地で４～５×１０^４／ｍｌの細胞懸濁液を調製する。９６ウェル細胞プレート中に各ウェル１００μｌで接種し、３７℃、５％ＣＯ_２で２４ｈ培養する。実験群は異なる濃度の測定試料イソバレリルスピラマイシンＩ、イソバレリルスピラマイシンＩＩ、イソバレリルスピラマイシンＩＩＩを含む新しい培地に交換し、対照群は同体積の溶媒を含む培地に交換する。各群に３つの平行ウェルを設け、３７℃、５％ＣＯ_２で４８ｈ培養する。上清液を捨て、ＰＢＳで慎重に３回洗浄し、各ウェルに０．５ｍｇ／ｍｌＭＴＴを含む新しく調製した培地を１００μＬ添加し、３７℃で続けて４ｈ培養する。慎重に上清を除去し、１５０μＬＤＭＳＯを添加し、小型振盪器で１０ｍｉｎ均一に混合した後、マイクロプレートリーダを用いて４９２ｎｍ部分の光学密度値を測定する。

浮遊細胞：
Ｕ９３７、ＨＬ－６０は浮遊細胞である。対数期の細胞を選択し、１０％仔牛血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地で２×１０^５／ｍｌの細胞懸濁液を調製する。９６ウェル培養プレート中に各ウェル５０μｌで接種し、３７℃、５％ＣＯ_２で２４ｈ培養する。実験群に異なる濃度の測定試料カリマイシンを含む培地５０μＬを添加し、対照群は同体積の溶媒を含む培地を添加する。各群に３つの平行ウェルを設け、３７℃、５％ＣＯ_２で４８ｈ培養する。各ウェルに５ｍｇ／ｍｌＭＴＴを含む新しく調製した培地を１０μＬ添加し、３７℃で続けて４ｈ培養する。溶解液（ＳＤＳ１０ｇ、０．１ｍＬの１０ＭＨＣｌ、イソブタノール５ｍＬを蒸留水で１００ｍＬに希釈する）１００μＬで結晶を溶解し、３７℃で１２ｈ培養する。マイクロプレートリーダを用いて４９２ｎｍ部分の光学密度値を測定する。

結果の評価：
下式により、腫瘍細胞の成長に対する薬物の抑制率を計算する。
腫瘍細胞成長抑制率（％）＝[Ａ_４９２（陰性対照）－Ａ_４９２（投与群）]／Ａ_４９２（陰性対照）×１００％

これから試料の半数阻害濃度（ＩＣ_５０）を求める。

結果：
ヒト乳腺癌細胞ＭＣＦ－７およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２、ヒト非小細胞肺癌細胞Ａ５４９、ヒト大細胞肺癌細胞Ｈ４６０およびＨ１２９９、ヒト腎淡明細胞癌細胞７８６－Ｏ、ヒト腎細胞癌細胞７６９－Ｐ、ヒト神経膠腫細胞Ｕ２５１、ヒト神経膠芽腫細胞Ａ１７２、ヒト組織リンパ腫細胞Ｕ９３７、ヒト子宮頸癌細胞ＨｅＬａ、ヒト前立腺癌細胞ＰＣ３、ヒト膵臓腺癌細胞ＰＡＮＣ－１、ヒト食道癌細胞ＴＥ－１、ヒト胃腺癌細胞ＳＧＣ－７９０１、ヒト結腸癌細胞ＨＴ－２９、ヒト前骨髄球性白血病細胞ＨＬ－６０、ヒト甲状腺癌細胞ＴＰＣ－１、ヒト膀胱癌細胞Ｔ－２４を用いる。

試料に対して行う体外での増殖抑制活性の評価結果は、以下の表１、表２および表３の通りである。

結果は、測定した細胞に対して、試料のイソバレリルスピラマイシンＩ、イソバレリルスピラマイシンＩＩおよびイソバレリルスピラマイシンＩＩＩが良好な増殖抑制活性を有することを示している。

試験例２、体内試験
１、大細胞肺癌細胞Ｈ４６０ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＨ４６０細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表４、表５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２０．７０％、４６．３３％および７０．１１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１４．２２％、３４．４３％および６１．１２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１７．４１％、２３．３１％および６３．９３％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ５６．５６％、４９．００％および３１．９６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ５１．９７％、４６．４９％および３７．８９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６３．０３％、４２．５４％および３５．９５％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

２、ヒト非小細胞肺癌Ｈ１２９９ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＨ１２９９細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表６、表７）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２２．１１％、４３．８３％および６９．９５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１７．３２％、４４．２１％および５８．３７％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１３．１１％、４９．３８％および６２．７８％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８９．４２％、４９．８１％および２７．４３％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８３．０１％、４６．９４％および３６．８６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８９．８８％、４８．１１％および３２．４３％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

３、ヒト食道癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＴＥ－１細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、モデル群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表８、表９）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３０．９２％、５１．０１％および６９．７１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２４．８７％、４３．７８％および７２．４８％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２２．６４％、４０．１７％および６５．４６％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６０．５５％、４０．７０％および２０．６１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７０．３２％、５０．５１％および３６．４９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６６．５２％、５０．７１％および３０．７２％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

４、ヒト胃腺癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＳＧＣ７９０１細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表１０、表１１）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３１．５６％、５３．１３％および７０．７８％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２４．４４％、４１．７６％および７０．２４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２１．６８％、４１．１３％および６３．３４％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６１．１３％、４２．６７％および２０．２３％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７０．４８％、５１．４２％および３６．９５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６５．４８％、４９．４４％および３０．３４％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

５、ヒト前立腺癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＰＣ３細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表１２、表１３）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３３．８７％、５１．３３％および７１．０１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２３．４９％、４０．１６％および５０．４４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２５．４４％、４０．１６％および６０．３７％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７０．４３％、４９．１４％および３０．７２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８３．０４％、６０．０８％および４４．４８％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７５．７５％、５５．０２％および３４．５７％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

６、ヒト乳腺癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＭＣＦ－７細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表１４、表１５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３１．１０％、５１．７２％および７０．１２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２０．５５％、４１．７２％および５６．８１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２６．７５％、３９．０８％および６１．７８％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７１．９２％、４９．０５％および３０．８０％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７９．２３％、６０．５８％および４４．４４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７５．０３％、５４．９２％および３４．９１％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

７、ヒト乳腺癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表１６、表１７）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２２．８４％、５５．１７％および６９．１１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１８．１７％、２９．６６％および５８．９１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２４．３５％、２１．０１％および６２．９３％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６９．７１％、４４．１８％および２７．７４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８０．２２％、５８．７８％および３０．８９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６８．３６％、５０．１２％および３５．２７％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

８、ヒト膵臓腺癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＰＡＮＣ－１細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表１８、表１９）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３１．１０％、５１．７２％および７０．１２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２０．５５％、４１．７２％および５６．８１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２６．７５％、３９．０８％および６１．７８％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７１．９２％、４９．０５％および３０．８０％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７９．２３％、６０．５８％および４４．４４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７５．０３％、５４．９２％および３４．９１％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

９．ヒト肝癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＨｅｐＧ－２細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表２０、表２１）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２４．４３％、５７．９３％および６８．２２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２１．０７％、３１．４３％および６１．５６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３８．９２％、６０．５４％および６３．２８％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６５．０３％、４２．１２％および２７．４９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８１．０３％、５７．０２％および３９．３１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６４．６９％、４３．１８％および３２．７１％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１０、ヒト非小細胞肺癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＡ５４９細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表２２、表２３）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２４．００％、５８．１０％および６９．５２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２０．７３％、３１．８７％および６０．１９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３７．９９％、５５．９５％および６６．５３％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６７．１８％、４１．９３％および２８．３５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８３．４１％、５８．７５％および３９．４２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６５．９３％、４７．２５％および３３．０４％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１１、ヒト神経膠腫ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＵ２５１細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表２４、表２５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３０．９４％、４４．５３％および６９．２１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１０．９１％、１５．８１％および４０．２６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１５．４５％、３２．７４％および５９．５６％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７６．４０％、４４．５４％および２５．８０％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７６．１４％、５１．８８％および４３．２６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６８．１６％、５４．３４％および４１．１０％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１２、ヒト神経膠芽腫ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＡ１７２細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、テモゾロミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表２６、表２７）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３０．７５％、４４．２６％および６８．７９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１０．８５％、１５．７１％および４０．０１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１５．３５％、３２．５４％および５９．１９％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７４．４９％、４３．４３％および２５．１６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７４．２４％、５０．５９％および４２．１８％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６６．４５％、５２．８９％および４０．０８％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１３、ヒトリンパ腫ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＵ９３７細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表２８、表２９）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ４１．７３％、５０．７３％および６５．０３％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２５．６１％、３５．４４％および４３．６３％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ４１．１９％、５３．０３％および６１．７７％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６８．６５％、３９．７４％および３５．２５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７４．１９％、５２．１０％および４６．０９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６３．３６％、４９．３０％および３８．６６％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１４、ヒト子宮頸癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＨｅＬａ細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表３０、表３１）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ４６．６９％、５１．５７％および６５．５５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３０．６７％、４２．９０％および４３．３０％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３９．３３％、５２．４１％および６１．６８％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６９．１８％、３９．５７％および３０．９１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ３０．６７％、４２．９０％および４３．３０％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ３９．３３％、５２．４１％および６１．６８％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１５、ヒト腎淡明細胞癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期の７８６－Ｏ細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表３２、表３３）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３４．７０％、３９．２２％および６４．３６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１９．６９％、４１．０９％および６０．００％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３５．８０％、５２．１４％および６２．４９％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ３７．８８％、３７．１９％および３６．８９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７６．９２％、５３．６１％および３５．７４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７３．１３％、５１．３３％および３４．２０％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１６、ヒト腎細胞癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期の７６９－Ｐ細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、モデル群、シクロホスファミド群、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表３４、表３５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３３．６８％、４７．３３％および６８．８２％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３８．２９％、４７．６１％および６１．７９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ４０．８７％、６０．５０％および６４．４６％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７５．７８％、５７．１２％および３６．８８％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６８．２２％、４２．６４％および３４．７６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６１．５９％、５１．５９％および３５．５５％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１７、ヒトＨＴ－２９ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＨＴ－２９細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表３６、表３７）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１６．１０％、４９．７２％および７０．１４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１６．２４％、３２．４１％および５５．７４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１９．２２％、４１．３５％および６３．１９％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８１．６０％、４９．２２％および２９．１１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８４．１８％、７９．３４％および４４．０５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８５．５４％、５３．４８％および３５．６３％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１８、ヒトＨＬ－６０ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＨＬ－６０細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表３８、表３９）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１１．５７％、３４．７８％および６４．１９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１５．９２％、２９．４８％および５１．８１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１７．１０％、２９．９２％および５５．０５％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８４．９６％、５９．５４％および３２．７０％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７５．３９％、６５．１８％および４１．３６％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７６．０９％、６１．９０％および３９．８７％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

１９、ヒト甲状腺癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＴＰＣ－１細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表４０、表４１）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２３．８８％、５７．２８％および６７．４９％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２０．９１％、３１．６１％および６２．０４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ３９．０６％、６０．２５％および６２．９４％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６５．４５％、４３．４３％および２８．１１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８６．１５％、５９．０８％および３８．６１％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ６１．９３％、４５．０１％および３４．７５％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

２０、ヒト膀胱癌ヌードマウスモデルに対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
対数期のＴ－２４細胞で、トリパンブルー色素排除試験により生細胞＞９５％のものを用いる。トリプシン消化し、遠心分離して上清を除去し、ｍａｔｒｉｇｅｌで細胞濃度を１×１０^７／ｍｌに調整する。細胞をヌードマウスの右わき下皮下に０．２ｍｌ／匹で接種し、接種１日目と記す。腫瘍が≧１００ｍｍ^３まで成長すると、動物を無作為に各群６匹で１１群に分け、イソバレリルスピラマイシンＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの３つの用量群である。各群の動物に連続して３０日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。投与停止の翌日にマウスを屠殺し、指標を測定する。ヌードマウスへの投与開始から屠殺するまでの期間、２日ごとに腫瘍の長径、短径および体重を記録する。

腫瘍体積および相対腫瘍増殖率の計算
２ｄごとにヌードマウスの体重および移植腫瘍の長径（ａ）、短径（ｂ）を測定し、下記の公式により、腫瘍体積（ｖ）、相対腫瘍体積（ＲＴＶ）および相対腫瘍増殖率（Ｔ／Ｃ）をそれぞれ計算する。このうちＶ＝ａ×ｂ^２／２；ＲＴＶ＝Ｖ／Ｖ_０（Ｖ_０は投与前の腫瘍体積、Ｖは屠殺前の腫瘍体積）、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群ＲＴＶ／モデル対照群ＲＴＶ×１００％である。

腫瘍成長抑制率の計算
マウスの重さを量ってから屠殺し、腫瘍を完全に剥離し、血痕、脂肪など非腫瘍組織を除去して腫瘍重量を量り、腫瘍成長抑制率を計算する。各群マウスの平均腫瘍重量を治療効果の指標とする。腫瘍成長抑制率（％）＝（１－治療群の平均腫瘍重量／モデル群の平均腫瘍重量）×１００％。

試験結果は、対照群と比較して、各投与群が腫瘍成長抑制率、腫瘍体積、相対腫瘍体積および相対腫瘍増殖率に対して、一定程度の抑制作用を有することを明確に示す（表４２、表４３）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２０．５５％、４９．２０％および６５．８４％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ１５．５７％、４１．９９％および５９．２５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍成長抑制率は、それぞれ２１．００％、４４．８４％および６１．３０％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群の腫瘍体積および相対腫瘍体積は、モデル群より明らかに低い（ｐ＜０．０５）。

イソバレリルスピラマイシンＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ７７．７８％、５８．９２％および３３．９５％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８１．３９％、６４．８９％および４６．７０％である。イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの低、中、高３つの用量群の相対腫瘍増殖率は、それぞれ８０．３４％、６２．３５％および３９．３９％である。イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの低、中、高３つの用量群における動物の体重は、モデル群と比較していずれも明らかな変化はない。

２１、マウスのＨ_２２肝癌移植腫瘍およびマウスのＬｅｗｉｓ肺癌移植腫瘍に対する抑制作用
マウス固形腫瘍モデルの構築
液体窒素で凍結保存したＨ_２２細胞株を昆明マウス体内で起こし、３代後腹水を採取する。５０ｍｌ遠沈管に入れ、１０ｍｌの０．９％生理食塩水を添加し、１０００ｒｐｍ、室温で５ｍｉｎ遠心分離して、上清を捨てる。１０ｍｌの０．９％生理食塩水を添加し、ピペットで吹き付けて均一に混合し、カウント後、生理食塩水で５×１０^６生細胞／ｍｌに希釈する。氷水中で保存し、７５％エタノールでマウスの右わき下皮膚を消毒する。昆明マウスの右前足のわき下皮下に、各匹０．２ｍｌを迅速に接種する。

Ｌｅｗｉｓ肺癌細胞を、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベータで培養する。対数期の細胞を用い、０．２５％パンクレアチンで消化し、細胞を集め、遠心分離して上清を除去し、滅菌生理食塩水で２回洗浄する。細胞を生理食塩水中に懸濁させ、トリパンブルー染色で生存細胞が９５％より多いかを測定し、さらに細胞のカウントを行う。Ｌｅｗｉｓ細胞の濃度を１×１０^７／ｍＬに調整し、氷水中で保存する。７５％エタノールでマウスの右わき下皮膚を消毒し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右わき部に０．２ｍＬを皮下注射で迅速に接種する。

動物の群分けおよび投与方法
Ｈ_２２肝癌モデルについて、接種の翌日、腫瘍を接種したマウスを無作為に各群１０匹で群分けする。モデル対照群、陽性薬シクロホスファミド対照群（ＣＴＸ、２６ｍｇ／ｋｇ）、イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群を含む。各群の動物に連続して７日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。

Ｌｅｗｉｓ肺癌モデルについて、接種の翌日、腫瘍を接種したマウスを無作為に各群１０匹で群分けする。モデル対照群、陽性薬シクロホスファミド対照群（ＣＴＸ、３０ｍｇ／ｋｇ）、イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１２．５、２５および５０ｍｇ／ｋｇの３つの用量群を含む。各群の動物に連続して１５日間胃内投与し、投与体積は２０ｍｌ／ｋｇである。

腫瘍抑制率の計算：
担癌マウスに最後の投与を行った翌日、重さを量ってから屠殺する。皮下腫瘍を解剖して重さを量り、各群の平均腫瘍重量をそれぞれ計算し、腫瘍抑制率を計算する。
腫瘍抑制率＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％
Ｔ：投与群の平均腫瘍重量；Ｃ：ブランク対照群の平均腫瘍重量。

結果：
１．マウスのＨ_２２肝癌移植腫瘍に対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
表４４の結果から、昆明マウスのＨ_２２肝癌に対する陽性対照薬シクロホスファミドの腫瘍抑制率は７３．０３％であることがわかる。イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群は、マウスのＨ_２２肝癌の成長に対して明らかな抑制作用を有する。

陽性薬シクロホスファミド群は正常対照群と比較して、体重がやや低下する。カリマイシンの各投与群における動物の体重は、投与前と比較していずれも幾分増加し、モデル対照群と比較して明らかな差はない。

２．マウスのＬｅｗｉｓ肺癌移植腫瘍に対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの抑制作用
表４６の結果から、マウスのＬｅｗｉｓ肺癌に対する陽性対照薬シクロホスファミドの腫瘍抑制率は７６．４３％であることがわかる。イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群は、マウスのＬｅｗｉｓ肺癌の成長に対して明らかな抑制作用を有する。カリマイシンの各投与群における動物の体重は、投与前と比較していずれも幾分増加し、モデル対照群と比較して明らかな差はない。

２２、担癌マウスの免疫機能に対するイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩの影響
方法
１、担癌マウスの胸腺インデックスおよび脾臓インデックスに対する影響
担癌マウスを屠殺後、脾臓および胸腺を採取して重さを量り、脾臓インデックスおよび胸腺インデックスを計算する。

２、担癌マウスのリンパ細胞増殖活性およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性に対する影響
２．１ 脾リンパ細胞の調製
シャーレに無血清のＲＰＭＩ１６４０培地を入れ、氷上に置く。無菌で脾臓を採取し、滅菌スライドガラスで脾臓を軽くすり潰し、単細胞懸濁液を作製する。２重滅菌ガーゼでろ過し、無血清のＲＰＭＩ１６４０培地で２回洗浄し、１５００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離して上清液を除去する。赤血球溶解液を２ｍＬ添加して２ｍｉｎ静置し、ＲＰＭＩ１６４０培地を８ｍＬ添加する。１５００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離して上清液を除去し、ＲＰＭＩ１６４０培地で２回洗浄する。トリパンブルー染色で生細胞をカウントすると、生細胞＞９５％である。体積で１０％のウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地で単細胞懸濁液を作製する。

２．２ 脾リンパ細胞の増殖活性測定
脾細胞懸濁液を用い、細胞密度を１×１０^７／ｍＬに調整する。各マウスに、Ａ．対照ウェル：ＲＰＭＩ１６４０培地１００μｌを添加；Ｂ．コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）刺激ウェル：コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）溶液１００μＬ（１０ｍｇ／Ｌ）を添加；Ｃ．細菌内毒素（ＬＰＳ）刺激ウェル：細菌内毒素（ＬＰＳ）溶液を１００μＬ（２０ｍｇ／Ｌ）添加、を設ける。上記細胞を９６ウェルプレート中に添加し、その後各ウェルに１００μＬの脾細胞懸濁液を添加する。培養プレートを体積で５％のＣＯ_２、３７℃、飽和湿度条件下に移し、７２ｈ培養した後、各ウェルにＭＴＴ溶液（５ｇ／Ｌ）を１０μＬ添加し、同様の条件で引き続き４ｈ培養してから培養を終了する。溶解液（ＳＤＳ１０ｇ、０．１ｍＬの１０ＭＨＣｌ、イソブタノール５ｍＬを蒸留水で１００ｍＬに希釈する）を１００μｌ添加し、１０ｍｉｎ振盪させ、結晶を充分に溶解させて５７０ｎｍ部分の各ウェルの吸光度（ＯＤ）値を測定し、リンパ細胞の増殖率を計算する。リンパ細胞の増殖率（％）＝［（Ｔ－Ｃ）／Ｃ］×１００％、式中Ｔは刺激ウェルの吸光度値、Ｃは対照ウェルの吸光度値である。

２．３ ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性測定
脾細胞懸濁液を用い、細胞密度を１×１０^７／ｍＬに調整する（エフェクター細胞）。Ｋ５６２細胞懸濁液を細胞密度１×１０^５／ｍＬに調整する（標的細胞）。各マウスに、Ａ．エフェクター細胞および標的細胞のウェル（数量比は２０：１）：脾細胞懸濁液２０μＬおよびＫ５６２細胞懸濁液１００μＬを添加；Ｂ．エフェクター細胞対照ウェル：脾細胞懸濁液１００μＬおよびＲＰＭＩ１６４０培地１００μＬを添加；Ｃ．標的細胞対照ウェル：Ｋ５６２細胞懸濁液１００μＬおよびＲＰＭＩ１６４０培地１００μＬを添加、を設ける。上記細胞を９６ウェルプレートに添加し、培養プレートを体積で５％のＣＯ_２、３７℃、飽和湿度条件下に移して２２ｈ培養した後、各ウェルにＭＴＴ溶液（５ｇ／Ｌ）を１０μＬ添加し、同様の条件で引き続き４ｈ培養してから培養を終了する。溶解液（ＳＤＳ１０ｇ、０．１ｍＬの１０ＭＨＣｌ、イソブタノール５ｍＬを蒸留水で１００ｍＬに希釈する）を１００μｌ添加し、１０ｍｉｎ振盪させ、結晶を充分に溶解させて４９０ｎｍ部分の各ウェルの吸光度値を測定し、ＮＫ細胞活性を計算する。ＮＫ細胞活性（％）＝［ＴＯ－（Ｓ－Ｅ）］／ＴＯ×１００％、式中ＴＯは標的細胞対照ウェルの吸光度値、Ｓはエフェクター細胞対照ウェルの吸光度値、Ｅはエフェクター細胞の吸光度値である。

結果
１、Ｈ_２２肝癌担癌マウスの胸腺インデックスおよび脾臓インデックスに対する影響
表４８の結果から、陽性対照薬シクロホスファミド群の動物の胸腺インデックスおよび脾臓インデックスは、対照群と比較して顕著に低下する（Ｐ＜０．０１）ことがわかる。イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群における動物の胸腺インデックスは、対照群と比較して明らかな変化はない。

２、Ｌｅｗｉｓ肺癌担癌マウスの胸腺インデックスおよび脾臓インデックスに対する影響
表４９の結果から、陽性対照薬シクロホスファミド群の動物の脾臓インデックスは、対照群と比較して顕著に低下する（Ｐ＜０．０１）ことがわかる。イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群における動物の脾臓インデックスおよび胸腺インデックスは、対照群と比較して明らかな変化はない。

３、Ｌｅｗｉｓ肺癌担癌マウスのＮＫ細胞活性に対する影響
表５０の結果から、陽性対照薬シクロホスファミド群の動物のＮＫ細胞活性は、対照群と比較して顕著に低下する（Ｐ＜０．０５）ことがわかる。イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群における動物のＮＫ細胞活性は、対照群と比較して明らかに増加する（Ｐ＜０．０１）。

４、Ｌｅｗｉｓ肺癌担癌マウスのリンパ細胞増殖活性に対する影響
表５１の結果から、陽性対照薬シクロホスファミド群の動物のリンパ細胞活性は、明らかに抑制される（Ｐ＜０．０５）ことがわかる。イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群における動物のリンパ細胞活性は、対照群と比較して明らかに増加する（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）。

５、Ａ５４９肺癌担癌マウスの脾臓インデックスに対する影響
表５２の結果から、陽性対照薬シクロホスファミド群の動物の脾臓インデックスは、対照群と比較して顕著に低下する（Ｐ＜０．０１）ことがわかる。イソバレリルスピラマイシンＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群；イソバレリルスピラマイシンＩＩＩの１３、２６および５２ｍｇ／ｋｇの３つの用量群における動物の脾臓インデックスは、対照群と比較して明らかな変化はない。

以上の記載は本発明の好ましい実施例に過ぎず、本発明をどのような形式でも制限しない。本発明を好ましい実施例により上記のように開示したが、本発明を限定するものではない。当業者は本発明の技術案を逸脱しない範囲内で、上記に開示した技術内容を利用して、同等変化した同等の実施例に変更または修正することができるが、いずれも本発明の技術案の内容を逸脱しない。本発明の技術的本質に基づき、以上の実施例に対して行う簡単な修正、同等変化および修飾は、いずれも本発明案の範囲内に属する。

Claims (9)

1. 腫瘍を治療および／または予防する薬物の調製におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩもしくはＩＩＩまたはイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩもしくはＩＩＩの薬学的に許容可能な塩の使用であって、
   前記腫瘍が乳腺癌、肝癌、肺癌、腎癌、脳腫瘍、子宮頸癌、前立腺癌、リンパ腫、膵臓腺癌、食道癌、胃癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、リンパ腫、白血病または悪性皮膚腫瘍である、使用。
2. 前記脳腫瘍が神経膠腫または髄膜腫であり、前記胃癌が胃腺癌であることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
3. 前記薬物が、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩおよび薬学的に許容可能な添加剤を含む各種剤形である、あるいは前記薬物が、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩの薬学的に許容可能な塩および薬学的に許容可能な添加剤を含む各種剤形である、請求項１または２に記載の使用。
4. 前記薬物が、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩ、抗腫瘍薬、ならびに薬学的に許容可能な添加剤を含む各種剤形である、あるいは前記薬物が、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩの薬学的に許容可能な塩、抗腫瘍薬、ならびに薬学的に許容可能な添加剤を含む各種剤形である、請求項１または２に記載の使用。
5. 前記薬物が、イソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩ、その薬学的に許容可能な塩を含む第１薬剤と、抗腫瘍薬を含む第２薬剤との組合せであることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用。
6. 前記抗腫瘍薬が、化学療法薬、放射線治療薬、標的治療薬および／または免疫治療薬であることを特徴とする、請求項４または５に記載の使用。
7. 前記薬物におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩの用量が５～１５００ｍｇの範囲である、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用。
8. 前記薬物におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩの用量が５０～１０００ｍｇの範囲である、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用。
9. 前記薬物におけるイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩまたはＩＩＩの用量が１００～４００ｍｇの範囲である、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用。