JP7054540B2 - 局所脂肪の減少に用いる医薬組成物およびその用途 - Google Patents

Description

本発明は、複数の薬物含有ミセル、および薬物含有ミセルに包まれたクルクミンを含む、局所脂肪の減少に用いられる医薬組成物に関する。さらに前記医薬組成物は局所の脂肪減少に用いられる。

近年、美意識が変化し、また、健康、体型や体重などへの意識が高まっていることにつれ、人々は単純のダイエットだけでなく、より健康で且つ美しいからだを作り上げるため、局所の脂肪減少または曲線美を一層重視している。さらに、飲食や運動による一般的なダイエット方法は特定単一部位の脂肪を減少させることができない。特定部位の脂肪（例えば腰、腹、脚、腕、顎、および顔など）を減らすには、従来脂肪吸引手術などでしかできない。

従来局所細胞の減少に用いられる主な手法は脂肪吸引手術であるが、脂肪吸引手術は神経、血管、および他の組織に損傷を与え、且つ感染、出血量が多い、麻酔時間が長い、および事前予防ができない脂肪塞栓症や麻酔アレルギーの死に至るリスクがある。また、脂肪吸引手術には術後に激しい打撲や腫れ、強烈な痛み、３ヶ月から６ヶ月以上に及ぶ長い回復期、施術部位の凸凹などの問題が挙げられる。そのため、統計上多くの人は脂肪吸引で局所にたまっていた皮下脂肪を減少し、これにより曲線美を作り上げることを望んでいるが、実際に脂肪吸引手術を行った人数はそれの４割にも満たさず、曲線美を作り上げたい、または局所脂肪を減らしたい多くの消費者は、脂肪吸引手術の副作用、術後の痛み、またはリスクなどの問題によってあきらめている。

しかし、非手術的の局所脂肪減少医薬組成物や装置は一部の副作用を抑えられるが、ほとんどは効果が悪く、なおかつ他の副作用（例えば周辺正常細胞の壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）、周辺組織の炎症、および激しい痛み）があり、実施部位にも制限がある。そのため、局所の脂肪を有効に減少させ、且つ副作用が少なく、安定性が良好で、回復期間が短い局所脂肪減少医薬組成物は依然として欠けている。
消費者や医者において高い需要がある中、現状の技術的制限を突破する局所脂肪減少医薬組成物の開発は求められている課題である。

従来技術の欠点を考慮して、本発明は、界面活性剤によって形成された複数薬物含有ミセル、および前記薬物含有ミセルに包まれたクルクミンを含む局所脂肪の減少に用いられる一つの医薬組成物を提供する。前記局所脂肪の減少に用いられる医薬組成物は投与部位の脂肪を減少させる効果を持ち、且つ高い安定性、高い生体可用率、低い副作用および持続放出の利点を有する。

本発明は投与部位の脂肪細胞の細胞アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を促進することにより、投与部位の脂肪細胞を減少させる目的に達する。本発明は従来の技術による周辺細胞壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）、および炎症の不良反応と副作用を大幅に改善して、かつ局所脂肪減少の効果は著しく他の非手術的局所脂肪減少医薬組成物より優れている。本発明は注射、皮下植入、静脈内注射、埋め込み式輸液、軟膏、パップ、または他の経皮吸収システムを用いて、皮下脂肪を減少させる部位に投与し、手術や装置の介入やアシストを必要としない。好ましくは、皮下脂肪注射を用いて局所部位の皮下脂肪層に投与する。好ましくは、本発明の医薬組成物の注射剤形は注射用液剤または注射用粉末剤（ｐｏｗｄｅｒ ｆｏｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ， ｏｒ ｐｏｗｄｅｒ ｆｏｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）を含むが、これらに限らない。本発明中の局所脂肪は腰、腹、脚、腕、顎、および顔などの部位の脂肪を含むが、これらに限らない。

本発明中のウコン抽出物は任意の溶媒および任意の抽出法で抽出したウコン成分混合物、市販されているウコン抽出物、重量百分率７５％以上のクルクミン（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）を含む任意の混合物、重量百分率７５％以上のクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含む任意の混合物、または市販されているクルクミンを指す。

そのうち、クルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）はクルクミン（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）、デメトキシクルクミン（ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｃｕｒｃｕｍｉｎ）、およびビスデメトキシクルクミン（ｂｉｓｄｅｍｅｔｈｏｘｙｃｕｒｃｕｍｉｎ）の総称である。

本発明中、レスベラトロールは天然植物から抽出されたまたは市販されているレスベラトロールを指す。好ましくは、レスベラトロールの純度は重量百分率９０％～１００％である。

本発明中、緑茶抽出物は任意の溶媒および任意の抽出法で抽出した緑茶成分混合物、市販されている緑茶抽出物、重量百分率４５％以上のエピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）を含む任意混合物、または市販されているエピガロカテキンガレートを指す。

本発明中、ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）は界面活性剤によって形成された微細構造であり、前記界面活性剤は一つの親水基と一つの疎水基（親油基）があり、親水基が外向き疎水基（親油基）が内向きで微細構造を形成している。好ましくは、前記微細構造は円形、類円形、または他の微細構造である。

本発明中、薬物含有ミセルはクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含むミセル、好ましくは、薬物含有ミセルはクルクミン（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）を含むミセルを指す。即ち薬物含有ミセルはクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を包んでまたは含んでいるミセル、好ましくは、薬物含有ミセルはクルクミンを包んでまたは含んでいるミセルを指す。

本発明中、第二親油性薬物ミセルはクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）以外の親油性薬物を含むミセルを指す。即ち、第二親油性薬物ミセルは第二親油性薬物を包んでまたは含んでいるミセルを指す。

そのうち、他の親油性薬物（または第二親油性薬物と呼ぶ）はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、シネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）および他のクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）以外の親油性薬物から選ばれる１種以上を指す。他の親油性薬物はクルクミン以外の親油性薬物を指す。

本発明中、水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上を指す。
本発明中、使われている「沈殿物を発生しない状態」は肉眼で、即ち装置を使用せずに確認しうる沈殿物がない状態を指す。
本発明中、「局所皮下脂肪」は本発明医薬組成物、皮下注射剤、または皮下脂肪層注射剤を投与する部位の皮下脂肪を指す。
本発明中、医学薬学上認められる水溶液は注射液、注射用水溶液、および生理食塩水から選ばれる１種以上を指す。
本発明中、局所麻酔剤はアミド、ｐ－アミノベンズアミドエステル、アミノエーテル、および他の局所麻酔薬から選ばれる１種以上を指す。好ましくは、前記アミドはジブカイン（Ｄｉｂｕｃａｉｎｅ）、リドカイン（Ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、メピバカイン塩酸塩（Ｍｅｐｉｖａｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、ブピバカイン塩酸塩（Ｂｕｐｉｖａｃｉｎｅ ＨＣｌ）、ピロカイン塩酸塩（Ｐｙｒｒｏｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、プリロカイン塩酸塩（Ｐｒｉｌｏｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、Ｄｉｇａｍｍａｃａｉｎｅ、およびオキセサゼイン（Ｏｘｅｔｈａｚａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。好ましくは、前記ｐ－アミノベンズアミドエステルはブタカイン（Ｂｕｔａｃａｉｎｅ）、ジメトカイン（Ｄｉｍｅｔｈｏｃａｉｎｅ）、およびツトカイン（Ｔｕｔｏｃａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。好ましくは、前記アミノエーテルはジメチソキン（Ｑｕｉｎｉｓｏｃａｉｎｅ）、およびプラモキシン（Ｐｒａｍｏｃａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。

本発明中、抗酸化物質はβ－カロテン（ｂｅｔａ－ｃａｒｏｔｅｎｅ）、ルテイン（ｌｕｔｅｉｎ）、リコペン（ｌｙｃｏｐｅｎｅ）、ビリルビン（ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ）、ビタミンＡ（ｖｉｔａｍｉｎ Ａ）、ビタミンＣ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ、別称アスコルビン酸，即ちａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＥ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｅ），尿酸（ｕｒｉｃ ａｃｉｄ）、一酸化窒素（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ）、ニトロキシド（ｎｉｔｒｏｘｉｄｅ）、ピルビン酸（ｐｙｒｕｖａｔｅ）、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓｅ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）、グルタチオンペルオキシダーゼ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｓ）、Ｎ－アセチルシステイン（Ｎ－ａｃｅｔｙｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）、および他の抗酸化物質から選ばれる１種以上である。

本発明中、前記医薬組成物は温度が２５℃±２℃、相対湿度がＲＨ６０％±５％、直射日光を避けた状態で加速安定性試験行った際、前記医薬組成物は最低２４時間沈殿物を発生しない状態を維持した。

または、前記医薬組成物は温度が２５℃±２℃、相対湿度がＲＨ６０％±５％、直射日光を避けた状態で加速安定性試験行った際、前記医薬組成物は最低６ヶ月沈殿物を発生しない状態を維持した。

本発明は個体の局所に投与する一種の医薬組成物を提供する。前記医薬組成物は、
複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
前記薬物含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
前記薬物含有ミセルは医薬学上認められるポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）により形成された微細構造であり、且つ前記ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに医学薬学上認められる水溶液を含み、且つ前記医学薬学上認められる水溶液中に複数の前記薬物含有ミセルが均一に分散している。

好ましくは、前記のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。
好ましくは、前記クルクミノイドと前記ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体の重量比は１：８～１：５００である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体の重量比は１：２０～１：１５０である。

好ましくは、前記医薬組成物中の前記クルクミノイド濃度は０．３～１２０ｍｇ／ｇである。

好ましくは、前記医薬組成物中の前記クルクミノイド濃度は２～９１ｍｇ／ｇである。

好ましくは、前記薬物含有ミセルの粒子径は３～５０ ｎｍである。

好ましくは、前記薬物含有ミセルの粒子径は５～２０ ｎｍである。

好ましくは、前記クルクミノイドはクルクミン（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）である。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに一つの第二親油性薬物ミセルを含む、前記第二親油性薬物ミセルは前記医学薬学上認められる水溶液中に均一に分散している。前記第二親油性薬物ミセルは第二ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体により形成された第二微細構造であり、且つ一つの第二親油性薬物が前記第二親油性薬物ミセルの中に包まれている。

好ましくは、前記ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。

好ましくは、前記第二ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。好ましくは、前記第二親油性薬物はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、シネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロールおよびクルクミノイド以外の親油性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記第二親油性薬物の重量比は３０：１～１：１０である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記第二親油性薬物の重量比は２０：１～１：８である。

好ましくは、前記医学薬学上認められる水溶液中はさらに一つの水溶性薬物を含む。

好ましくは、前記水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記水溶性薬物の重量比は３０：１～１：１０である。

好ましくは、前記医薬組成物中のエピガロカテキンガレート濃度は０．１～１５ｍｇ／ｍＬである。

好ましくは、前記医薬組成物中は薬物溶解度を増やすため、さらに共溶媒（Ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ）を含む。

好ましくは、前記共溶媒はポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、エタノール（ｅｔｈａｎｏｌ）、および他の共溶媒から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記ポリエチレングリコールはポリエチレングリコール２００（ＰＥＧ ２００）、ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ ４００）、ポリエチレングリコール６００（ＰＥＧ ６００）、および他のポリエチレングリコールから選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記医薬組成物中は薬物またはミセルの沈殿速度を下げるため、さらに懸濁化剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を含む。

好ましくは、前記懸濁化剤はアルギン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅ）、グリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｓｏｄｉｕｍ）、マンニトール（ｍａｎｎｉｔｏｌ）、および他の懸濁化剤から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記医薬組成物中は医薬組成物の安定性及び薬物の溶解度を増やすため、さらに油相賦形剤（ｏｉｌ ｐｈａｓｅ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）を含む。

好ましくは、油相賦形剤は不飽和脂肪酸、グリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、および他の油相賦形剤から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記不飽和脂肪酸はオレイン酸（ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、ひまし油（ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ごま油（ｓｅｓａｍｅ ｏｉｌ）、綿実油（ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄ ｏｉｌ）、大豆油（ｓｏｙｂｅａｎ ｏｉｌ）、サフラワー油（ｓａｆｆｌｏｗｅｒ ｏｉｌ）、コーン油（ｃｏｒｎ ｏｉｌ）、および他の不飽和脂肪酸から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記トリグリセリドは中鎖トリグリセリド（ｍｅｄｉｕｍ ｃｈａｉｎ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ）、および他のトリグリセリドから選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記医学薬学上認められる水溶液は局所麻酔薬を含む。

好ましくは、前記医学薬学上認められる水溶液は抗酸化物質を含む。

本発明はさらに、一つの皮下注射剤、一つの皮下脂肪層注射剤、一つの皮下埋込装置、一つの皮下埋込物、一つの静脈内注射剤、一つの埋め込み式輸液剤、一つの軟膏、一つのパップ、および他の経皮吸収システムを調製する、医薬組成物の一種の用途を提供する。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに一つの第二親油性薬物ミセルを含む、前記第二親油性薬物ミセルは医学薬学上認められる水溶液中に均一に分散している。そのうち、前記第二親油性薬物ミセルは第二非イオン性界面活性剤により形成された第二微細構造であり、且つ一つの第二親油性薬物が前記第二親油性薬物ミセルの中に包まれている。
好ましくは、前記第二非イオン性界面活性剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸（ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記医学薬学上認められる水溶液中はさらに一つの水溶性薬物を含む。

本発明は、さらに局所皮下脂肪の減少に使う薬剤または皮下注射剤（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）を調製する一種医薬組成物の用途を提供する。前記医薬組成物は、
複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
前記薬物含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
そのうち、前記薬物含有ミセルは医薬学上認められる一つの非イオン性界面活性剤（ｎｏｎｉｏｎｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）により形成された微細構造であり、且つ前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに医学薬学上認められる水溶液を含み、且つ医学薬学上認められる水溶液中に複数の上記薬物含有ミセルが均一に分散している。

好ましくは、前記非イオン性界面活性剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸 （ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記非イオン性界面活性剤の重量比は１：８～１：５００である。

好ましくは、前記医薬組成物中の前記クルクミノイド濃度は０．３～１２０ｍｇ／ｇである。

好ましくは、前記薬物含有ミセルの粒子径は３～５０ｎｍである。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに一つの第二親油性薬物ミセルを含む、前記第二親油性薬物ミセルは医学薬学上認められる水溶液中に均一に分散している。そのうち、前記第二親油性薬物ミセルは第二非イオン性界面活性剤により形成された第二微細構造であり、且つ一つの第二親油性薬物が前記第二親油性薬物ミセルの中に包まれている。

好ましくは、前記第二非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。

好ましくは、前記第二非イオン性界面活性剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸（ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記第二非イオン性界面活性剤はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記第二親油性薬物はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、シネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロール、およびクルクミノイド以外の親油性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記第二親油性薬物の重量比は３０：１～１：１０である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記第二親油性薬物の重量比は２０：１～１：８である。

好ましくは、前記医学薬学上認められる水溶液中はさらに一つの水溶性薬物を含む。

好ましくは、前記水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記水溶性薬物の重量比は３０：１～１：１０である。

好ましくは、前記クルクミノイドと前記水溶性薬物の重量比は２０：１～１：８である。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤、皮下脂肪層注射剤、埋め込み式輸液、軟膏剤、パップ剤、または他の経皮吸収システムである。

好ましくは、前記薬物は一つの投与部位の皮下脂肪を減少させるために、前記投与部位に投与された。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量は平方センチメートル当たり０．０２～２０ｍｇである。

前記薬物の剤形は皮下注射剤または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量は平方センチメートル当たり０．０４～１６ｍｇである。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量はキログラム当たり０．０１～４０ｍｇである。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量はキログラム当たり０．１～２０ｍｇである。

好ましくは、前記薬物の投与頻度は１～３０日置きに１～１２回投与部位に投与される。

好ましくは、前記薬物の投与頻度は１～３０日置きに１～６回投与部位に投与される。

好ましくは、前記クルクミノイドはクルクミン（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）である。

好ましくは、前記の医薬組成物はさらに一つの共溶媒（ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ）、一つの懸濁化剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、および一つの油相賦形剤（ｏｉｌ ｐｈａｓｅ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）から選ばれる１種以上を含む。

好ましくは、前記の微細構造は前記の油相賦形剤および前記の共溶媒のうち少なくとも一つと前記非イオン性界面活性剤により形成されている。

本発明は、さらに体重の減少に使う薬剤または皮下注射剤を調製する一種医薬組成物の用途を提供する。前記医薬組成物は、
複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
前記薬物含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
そのうち、前記薬物含有ミセルは医薬学上認められる一つの非イオン性界面活性剤（ｎｏｎｉｏｎｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）により形成された微細構造であり、且つ前記ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに医学薬学上認められる水溶液を含み、且つ前記医学薬学上認められる水溶液中に複数の前記薬物含有ミセルが均一に分散している。

好ましくは、前記クルクミノイドはクルクミン（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）である。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに一つの第二親油性薬物ミセルを含む、前記第二親油性薬物ミセルは医学薬学上認められる水溶液中に均一に分散している。そのうち、前記第二親油性薬物ミセルは第二非イオン性界面活性剤により形成された第二微細構造であり、一つの第二親油性薬物が前記第二親油性薬物ミセルに包まれていて、且つ前記第二親油性薬物はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、シネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）、およびクルクミノイド以外の他の親油性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記医薬組成物はさらに一つの水溶性薬物を含み、且つ前記水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、 エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤、静脈内注射剤、または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量は平方センチメートル当たり０．２～１６ｍｇである。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤、静脈内注射剤、または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量は平方センチメートル当たり０．４～８ｍｇである。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤、静脈内注射剤、または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量はキログラム当たり０．４～４０ｍｇである。

好ましくは、前記薬物の剤形は皮下注射剤、静脈内注射剤、または皮下脂肪層注射剤、且つ前記薬物の注射投与量はキログラム当たり０．８～２０ｍｇである。

好ましくは、前記薬物の投与頻度は１～２０日置きに３～６０回投与部位に投与される。

好ましくは、前記薬物の投与頻度は１～１４日置きに６～４２回投与部位に投与される。

好ましくは、前記の医薬組成物はさらに一つの共溶媒（ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ）、一つの懸濁化剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、および一つの油相賦形剤（ｏｉｌ ｐｈａｓｅ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）から選ばれる１種以上を含む。

好ましくは、前記の微細構造は前記の油相賦形剤および前記の共溶媒のうち少なくとも一つと前記非イオン性界面活性剤により形成されている。

本発明は個体局所の皮下脂肪量の減少に用いられる一種の方法を提供するものであって、前記方法には個体の局所に用いる医薬組成物も含み、そのうち、前記医薬組成物は、
複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
前記薬物含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
そのうち、前記薬物含有ミセルは医薬学上認められる一つの非イオン性界面活性剤（ｎｏｎｉｏｎｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）により形成された微細構造であり、且つ前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。

好ましくは、皮下注射剤、皮下脂肪層注射剤、埋め込み式輸液、軟膏剤、パップ剤、または他の経皮吸収システムを用いて前記個体の前記局所に前記医薬組成物を投与する。

好ましくは、前記個体の前記局所に平方センチメートル当たり０．０２～２０ ｍｇ投与する。

好ましくは、前記個体の前記局所にキログラム当たり０．０１～４０ ｍｇ投与する。

好ましくは、前記個体の前記局所に投与する頻度は１～３０日置きに１～１２回である。

本発明は個体体重の減少に用いられる一種の方法であって、前記方法には個体に用いる医薬組成物も含み、前記医薬組成物は、
複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
前記薬物含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
そのうち、前記薬物含有ミセルは医薬学上認められる一つの非イオン性界面活性剤（ｎｏｎｉｏｎｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）により形成された微細構造であり、且つ前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。

好ましくは、前記皮下注射剤、静脈内注射剤、または皮下脂肪層注射剤を用いて前記個体の前記局所に医薬組成物を投与する。

好ましくは、前記個体の局所に平方センチメートル当たり０．２～１６ｍｇ投与する。

好ましくは、前記個体の局所にキログラム当たり０．４～４０ｍｇ投与する。

好ましくは、前記個体の局所に投与する頻度は１～２０日置きに３～６０回である。

好ましくは、皮下注射剤、皮下脂肪層注射剤、静脈内注射剤、埋め込み式輸液、軟膏、パップ、または他の経皮吸収システムを用いて前記個体の局所に前記医薬組成物を投与する。

ウコン抽出物の経口投与がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 ウコン抽出物の経口投与がラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフ。 異なる賦形剤で調製したクルクミン皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 異なる賦形剤で調製したクルクミン皮下注射剤がラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフ。 ミセルがラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 ミセルがラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフ。 賦形剤を含まないレスベラトロール皮下注射剤がラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 異なる賦形剤で調製したクルクミン－レスベラトロール複合薬の皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 ミセルを含むクルクミン単一薬、レスベラトロール単一薬、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬の皮下注射剤がラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の供与頻度がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の供与頻度がラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフ。 クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の供与量がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物が成熟脂肪細胞のアポトーシスに対する影響。 賦形剤を含まない緑茶抽出物皮下注射剤がラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物の給与頻度がラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。 クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物の給与頻度がラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフ。 クルクミン－他の水溶性薬物複合薬医薬組成物が成熟脂肪細胞のアポトーシスに対する影響。

実験一：ウコン抽出物の経口投与がラットの皮下脂肪量および体重に対する影響
以下の方法でウコン抽出物経口投与液を調製：適量のウコン抽出物を適量の注射用滅菌水と混ぜ、攪拌してウコン抽出物経口投与液とした。

実験は７週齢のＳＤ系雄ラット（ｍａｌｅ Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ）を用いて行った。最初に、高脂肪食（ｈｉｇｈ－ｆａｔ ｄｉｅｔ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ， Ｉｎｃ．、型番＃Ｄ１２４９２）で１２頭のラットに給餌し、皮下脂肪の増加を誘発した。ラットの体重が３３０±１０ｇに達するまで連続給餌した後、ラットをランダムで高脂肪食コントロール群およびウコン抽出物経口投与群の２群に分け、各群は６頭のラットを含み、体重に有意差がないようにした。各頭のラットの体重を記録し、各ラットの「実験前体重」と定義した。その後、以下の方法で薬物を投与した。

ウコン抽出物経口投与群：毎日高脂肪食を給餌し、且つチューブ給餌でラットにウコン抽出物経口液を給餌し、投与するウコン抽出物の投与量を１００ｍｇ／ｋｇ／日にし、２０日間連続給餌した。給餌のウコン抽出物中、クルクミンの重量百分率は９５％であった。

高脂肪食コントロール群：毎日高脂肪食を給餌したが、ウコン抽出物は給餌しない。

実験期間毎日体重変化を記録し、週一回飲水量摂食量を記録した。実験の２０日目に断食させ、２１日目に犠死した。

各頭のラットの体重を記録し、各ラットの「実験後体重」と定義した。各頭のラットの「実験後体重」から「実験前体重」を引き、「総体重増加量」を得た。最後に、ラットの左右両側鼠径下の皮下脂肪を計量し、各群の鼠径下皮下脂肪量を計算した。平均値±ＳＤでデータ表示し、統計処理した。統計処理の結果は記号またはアルファベットで表示し、記号またはアルファベットが異なる場合は有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示し、記号またはアルファベットが同じの場合は有意差がない（ｐ＞０．０５）ことを示す。

図１Ａおよび図１Ｂを参照されたい。図１Ａはウコン抽出物を経口でラット投与した皮下脂肪量に対する影響の棒グラフである。そのうち、前記鼠径下皮下脂肪量は左右両側の鼠径下脂肪量の合計である。図１Ｂはウコン抽出物を経口でラットに投与した総体重増加量に対する影響の棒グラフである。

図１Ａで示すように、高脂肪食コントロール群のラットは鼠径下皮下脂肪量が６．４±１．５ｇで、ウコン抽出物経口投与群ラットは鼠径下皮下脂肪量が６．１±０．８ｇであり、両者に有意差がない（ｐ＞０．０５）ため、ウコン抽出物の経口投与は局所脂肪を減少させることができない。

図１Ｂで示すように、高脂肪食コントロール群のラットは総体重増加量が１３５±１２ｇで、ウコン抽出物経口投与群ラットは総体重増加量が１４２±１０ｇであり、両者に有意差がない（ｐ＞０．０５）ため、ウコン抽出物の経口投与は体重を減少させることができない。

上述の実験により、ウコン抽出物の経口投与は局所脂肪を減少させられなく、また体重も減少させられないことを明らかにした。前記問題を解決するために、本発明者らはさらに本発明のクルクミンを含む医薬組成物および皮下注射剤を研究開発した。

実験二：クルクミンの皮下注射剤がラットの皮下脂肪量および体重に対する影響
以下の方法でクルクミン生理食塩水溶液、クルクミンＰＥＧ溶液、およびクルクミンＥＬＰ溶液を調製した。

クルクミン生理食塩水溶液の調製方法：
クルクミン４５０ｍｇと適量の注射用生理食塩水を混合し、最終体積を９０ｍＬにした。クルクミンが完全に溶解するまで均一に撹拌し、クルクミン生理食塩水溶液を得た。また、前記クルクミン生理食塩水溶液中のクルクミン濃度は５ｍｇ／ｍＬであった。
クルクミンＰＥＧ溶液の調製方法：
１５ｇのポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ４００、ＰＥＧ４００と略する）、１５ｇのグリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、および適量の注射用生理食塩水を混合し、最終体積を１００ｍＬにした。ポリエチレングリコールとグリセロールが完全に溶解するまで撹拌し、ポリエチレングリコールとグリセロールの混合液を得た。クルクミン４５０ｍｇと適量のポリエチレングリコールとグリセロールの混合液を混合し、最終体積を９０ｍＬにした。クルクミンが完全に溶解するまで撹拌し、クルクミンＰＥＧ溶液を得た。前記クルクミンＰＥＧ溶液中のクルクミン濃度は５ｍｇ／ｍＬであった。

クルクミンＥＬＰ溶液の調製方法：
クルクミン４５０ｍｇと８０～１４０ｍＬのジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）を混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。１８ｇのＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ ＥＬＰ、ＥＬＰ、ポリオキシル３５ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ポリオキシル３５硬化ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ））を加え、１００～３００ｒｐｍの回転数で撹拌してジクロロメタンを揮発させた。ジクロロメタンを完全に揮発した後、最終体積が９０ ｍＬになるように注射用生理食塩水をゆっくり加え、撹拌した後クルクミンＥＬＰ溶液を得た。上述クルクミンＥＬＰ溶液中のクルクミン濃度は５ｍｇ／ｍＬ、ＰＥＧ－３５ヒマシ油（ＥＬＰ）の濃度は約重量百分率２０％であり、且つクルクミンとＰＥＧ－３５ヒマシ油の重量比は１：４０であった。

実験は６週齢のＳＤ系雄ラット（ｍａｌｅ Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ）を用いて行った。最初に、高脂肪食（ｈｉｇｈ－ｆａｔ ｄｉｅｔ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ， Ｉｎｃ．、型番＃Ｄ１２４９２）で２０頭のラットに給餌し、皮下脂肪の増加を誘発した。ラットの体重が３３０±１０ｇに達するまで連続給餌した後、ラットをランダムでコントロール群、生理食塩水群、ＰＥＧ群、およびＥＬＰ群の４群に分け、各群は５頭のラットを含み、体重に有意差がないようにした。各頭のラットの体重を記録し、各ラットの「実験前体重」と定義した。その後、以下の方法で薬物を投与した。

クルクミン生理食塩水、クルクミンＰＥＧ溶液、およびクルクミンＥＬＰ溶液をそれぞれ生理食塩水群、ＰＥＧ群、およびＥＬＰ群のラットの鼠径下の皮下脂肪層に注射した。毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）のため、毎回のクルクミン注射量はキログラム当たり２０ｍｇ（２０ｍｇ／ｋｇ）となる（計算式４ｍＬ／ｋｇ×５ｍｇ／ｍＬ＝２０ｍｇ／ｋｇ）。コントロール群は上述と同様な方法で同じ体積の注射用生理食塩水を注射投与した。

上述注射部位はラット鼠径下の脂肪部であり、左右両側均等に注射した。実験の１、２、３、および４日目に各１回注射した。実験期間毎日高脂肪食を給餌且つ体重変化を記録し、週一回飲水量摂食量を記録した。実験は１４日間行い、１５日目に二酸化炭素で犠死した。

各頭のラットの体重を記録し、各ラットの「実験後体重」と定義した。各頭のラットの「実験後体重」から「実験前体重」を引き、「総増加体重」を得た。各群ラットの総増加体重をコントロール群ラットの総増加体重で割り、「相対総増加体重」を得た。

ラットの左右両側鼠径下の皮下脂肪を計量し、左右両側鼠径下の皮下脂肪の合計を求め、鼠径下皮下脂肪量を計算した。各群ラットの鼠径下皮下脂肪量をコントロール群ラットの鼠径下皮下脂肪量で割り、「相対鼠径下皮下脂肪重量」を得た。

平均値±ＳＤでデータ表示し、一元配置分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）で統計処理した。統計処理の結果は記号またはアルファベットで表示し、記号またはアルファベットが異なる場合は有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示し、記号またはアルファベットが同じの場合は有意差がない（ｐ＞０．０５）ことを示す。

図２Ａおよび図２Ｂを参照されたい。図２Ａは異なる賦形剤で調製したクルクミン皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフである。図２Ｂは異なる賦形剤で調製したクルクミン皮下注射剤がラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフである。

図２Ａで示すように、コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００±２７．６％、生理食塩水群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９９．８±８．０％、ＰＥＧ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９３．６±５．８％、ＥＬＰ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は６２．８±２０．５％であった。生理食塩水群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量はコントロール群ラットと有意差がないため、直接クルクミンを投与部位の皮下脂肪層に注射すると投与部位の皮下脂肪（局所脂肪）を減少させることができないと示した。ＰＥＧ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量はコントロール群ラットと有意差がなかったが、ＥＬＰ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量はコントロール群ラットと有意差（ｐ＜０．０５）を示し、且つＥＬＰ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は３７．２％減少した。

図２Ｂで示すように、コントロール群ラットの相対総増加体重は１００．０±３０．８％、生理食塩水群ラットの相対総増加体重は１１０．０±１８．７％、ＰＥＧ群ラットの相対総増加体重は１１２．５±２０．７％、ＥＬＰ群ラットの相対総増加体重は８７．１±３３．１％であった。４群の間に有意差は見られなかったが（ｐ＞０．０５）、ＥＬＰ群ラットの相対総増加体重はコントロール群ラットと比べ１２．９％減少したため、ＥＬＰ群のラットは体重減少の傾向を示した。

上述の実験結果により、直接クルクミンを投与部位の皮下脂肪層に注射すると投与部位の皮下脂肪（局所脂肪）を減少させられなく、また体重も減少させられないことを明らかにした。賦形剤ＰＥＧ（一般的な共溶媒）を添加したクルクミン組成物を投与部位の皮下脂肪層に注射すると、投与部位の脂肪（局所脂肪）を著しく減少させられなく、体重も減少させられないが、非イオン性界面活性剤のＥＬＰを添加したクルクミン組成物を投与部位の皮下脂肪層に注射すると、投与部位の脂肪（局所脂肪）を減少させただけでなく、体重も減少の傾向を見せた。そのため、クルクミン組成物は投与部位の皮下脂肪（局所脂肪）および体重を減少させるため、非イオン性界面活性剤を含有すべきかを更なる検討が必要とされている。

さらに分析したところ、上述投与したクルクミンＰＥＧ溶液中にミセルは存在しないが、一方でクルクミンＥＬＰ溶液中にミセルが存在し、且つクルクミンはＥＬＰによって形成されたミセルに包まれていることが明らかとなった。そのため、ミセルが局所脂肪および体重の減少に対する影響も更なる検討が必要とされている。

実験三：非イオン性界面活性剤を含むクルクミン単一薬組成物皮下注射剤がラットの皮下脂肪量および体重に対する影響
以下の方法でクルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形、クルクミンＥＬＰミセル剤形、およびクルクミンＨＳ－１５ミセル剤形を調製した。

クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形の調製方法：２０ｇのＰＥＧ－３５ヒマシ油（即ちＥＬＰ）と適量の注射用生理食塩水を混合し、最終重量を１００ｇにした。ＰＥＧ－３５ヒマシ油（即ちＥＬＰ）が完全に溶解するまで均一に撹拌し、２０％ＥＬＰ溶液を得た。クルクミン４００ｍｇと適量の２０％ＥＬＰ溶液を混合し、最終重量を８０ｇにした。クルクミンが完全に溶解するまで撹拌し、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形を得た。上述クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形中のクルクミン濃度は約５ｍｇ／ｍＬ、ＰＥＧ－３５ヒマシ油（ＥＬＰ）の濃度は約重量百分率２０％であり、且つクルクミンとＰＥＧ－３５ヒマシ油の重量比は約１：４０であった。

クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形の調製方法：２０ｇのポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ ＨＳ １５、ＨＳ－１５と略す）と適量の注射用生理食塩水を混合し、最終重量を１００ ｇにした。ポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（即ちＨＳ－１５）が完全に溶解するまで撹拌し、２０％ＨＳ－１５溶液を得た。クルクミン４００ｍｇと適量の２０％ＨＳ－１５溶液を混合し、最終重量を８０ｇにした。クルクミンが完全に溶解するまで均一に撹拌し、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形を得た。上述クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形中のクルクミン濃度は約５ｍｇ／ｍＬ、ポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（即ちＨＳ－１５）の濃度は約重量百分率２０％であり、且つクルクミンとポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（即ちＨＳ－１５）の重量比は約１：４０であった。

クルクミンＥＬＰミセル剤形の調製方法：実験二のクルクミンＥＬＰ溶液の調製方法と同様に行った。

クルクミンＨＳ－１５ミセル剤形の調製方法：クルクミン５００ｍｇとジクロロメタン８０～１４０ｍＬを混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。２０ｇのポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ ＨＳ １５、ＨＳ－１５と略す）を加え、１００～３００ｒｐｍの回転数で撹拌してジクロロメタンを揮発させた。ジクロロメタンを完全に揮発した後、最終体積が１００ ｇになるように注射用生理食塩水をゆっくり加え、均一に撹拌して複数の薬物含有ミセルを形成させ、クルクミンＨＳ－１５ミセル剤形を得た。上述クルクミンＨＳ－１５ミセル剤形中のクルクミン濃度は約５ｍｇ／ｇ、ポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（ＨＳ－１５）の濃度は重量百分率２０％であり、且つクルクミンとポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（ＨＳ－１５）の重量比は１：４０であった。

粒子径測定装置（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてクルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形、クルクミンＥＬＰミセル剤形、およびクルクミンＨＳ－１５ミセル剤形中にミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）の有無を確認し、ミセルの粒子径を測定した。

結果はクルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形およびクルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形中に薬物沈殿（クルクミン沈殿）があり、且つ薬物含有ミセルの数が比較的少ないことを示した。クルクミンＥＬＰミセル剤形およびクルクミンＨＳ－１５ミセル剤形は分離なく澄んでいて、且つ薬物含有ミセルの数が比較的多いことを示した。

また、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形、クルクミンＥＬＰミセル剤形、およびクルクミンＨＳ－１５ミセル剤形の粒子径は順番に１３．１６±０．１８ｎｍ、１３．１８±１．４５ｎｍ、１２．４３±０．４０ｎｍ、１１．４６±０．４１ｎｍであり、ＰＤＩ値は順番に０．２２±０．０３、０．１８±０．０５、０．２８±０．０５、０．１８±０．０４である。

そのため、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形、およびクルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形中に薬物沈殿（クルクミン沈殿）が見られたが、上清液にはまだミセルを含んでいるため（粒子径は２５０ｎｍ未満、且つＰＤＩ値は０．４未満）、そのため、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形、クルクミンＥＬＰミセル剤形、およびクルクミンＨＳ－１５ミセル剤形は全て本発明の医薬組成物である。

実験は６週齢のＳＤ系雄ラット（ｍａｌｅ Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔ）を用いて行った。最初に、高脂肪食（ｈｉｇｈ－ｆａｔ ｄｉｅｔ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ， Ｉｎｃ．、型番＃Ｄ１２４９２）で２０頭のラットに給餌し、皮下脂肪の増加を誘発した。ラットの体重が３３０±１０ｇに達するまで連続給餌した後、ラットをランダムでコントロール群、ＥＬＰ部分ミセル群、ＨＳ－１５部分ミセル群、ＥＬＰミセル群、およびＨＳ－１５ミセル群の５群に分け、各群は４頭のラットを含み、体重に有意差がないようにした。各頭のラットの体重を記録し、各ラットの「実験前体重」と定義した。その後、以下の方法で薬物を投与した。

クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形、クルクミンＥＬＰミセル剤形、およびクルクミンＨＳ－１５ミセル剤形をそれぞれ均一に混合させ（部分ミセル剤形中の沈殿物を均一に分散させ）、それぞれＥＬＰ部分ミセル群、ＨＳ－１５部分ミセル群、ＥＬＰミセル群、およびＨＳ－１５ミセル群ラットの鼠径下の皮下脂肪層に注射した。毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）のため、毎回のクルクミン注射量はキログラム当たり２０ｍｇ（２０ｍｇ／ｋｇ）となる（計算式４ｍＬ／ｋｇ×５ｍｇ／ｍＬ＝２０ｍｇ／ｋｇ）。コントロール群は上述と同様な方法で同じ体積の注射用生理食塩水を注射投与した。

上述注射部位はラット鼠径下の脂肪部であり、左右両側均等に注射した。実験の１、２、３、４、５、および６日目に各１回注射した。実験期間毎日高脂肪食を給餌し、且つ毎日体重変化を記録し、週一回飲水量摂食量を記録した。実験は１４日間行い、１５日目に二酸化炭素で犠死した。

各頭のラットの体重を記録し、各ラットの「実験後体重」と定義した。各頭のラットの「実験後体重」から「実験前体重」を引き、「総増加体重」を得た。各群ラットの総増加体重をコントロール群ラットの総増加体重で割り、「相対総増加体重」を得た。

ラットの左右両側鼠径下の皮下脂肪を計量し、左右両側鼠径下の皮下脂肪の合計を求め、鼠径下皮下脂肪量を計算した。各群ラットの鼠径下皮下脂肪量をコントロール群ラットの鼠径下皮下脂肪量で割り、「相対鼠径下皮下脂肪重量」を得た。

平均値±ＳＤでデータ表示し、一元配置分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）で統計処理した。統計処理の結果は記号またはアルファベットで表示し、記号またはアルファベットが異なる場合は有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示し、記号またはアルファベットが同じの場合は有意差がない（ｐ＞０．０５）ことを示す。

上述の剤形調製方法および粒子径分析結果により、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形およびクルクミンＥＬＰミセル剤形中のＥＬＰ濃度とクルクミン濃度は同じであって、薬物含有ミセルの数にのみ違いがあることを明らかにした。そのため、コントロール群と比べ、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形は投与部位の局所脂肪を著しく減少させられないが、クルクミンＥＬＰミセル剤形は投与部位の局所脂肪を著しく減少させた場合、薬物含有ミセルの形成はクルクミン組成物が投与部位の局所脂肪を著しく減少させるカギとなる。

同様に、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形およびクルクミンＨＳ－１５ミセル剤形中のＨＳ－１５濃度とクルクミン濃度は同じであって、薬物含有ミセルの数にのみ違いがあることを明らかにした。したがって、コントロール群と比べ、クルクミンＨＳ－１５部分ミセル剤形は著しく投与部位の局所脂肪を減少させられないが、クルクミンＨＳ－１５ミセル剤形は投与部位の局所脂肪を著しく減少させた場合、薬物含有ミセルの形成はクルクミン組成物が投与部位の局所脂肪を著しく減少させるカギとなる。

一方で、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形およびクルクミンＥＬＰミセル剤形中のＥＬＰ濃度とクルクミン濃度は同じであって、薬物含有ミセルの数にのみ違いがあるため。したがって、コントロール群と比べ、クルクミンＥＬＰ部分ミセル剤形は著しく体重を減少させられないが、クルクミンＥＬＰミセル剤形は体重を著しく減少させた場合、薬物含有ミセルの形成はクルクミン組成物が体重を著しく減少させるカギとなる。

図３を参照されたい。図３はミセルがラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフである。図３で、縦軸は相対鼠径下皮下脂肪重量（％）、横軸は順番にコントロール群、ＨＳ－１５部分ミセル群、ＨＳ－１５ミセル群、ＥＬＰ部分ミセル群、およびＥＬＰミセル群である。

図３で示すように、コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００．０±２６．４％、ＨＳ－１５部分ミセル群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は７４．７±１０．１、ＨＳ－１５ミセル群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は６７．６±８．６％、ＥＬＰ部分ミセル群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は７１．８±２２．９％、ＥＬＰミセル群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は６５．０±７．２％であった。

コントロール群ラットと比べ、ＨＳ－１５部分ミセル群とＥＬＰ部分ミセル群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は減少の傾向を見せたが、有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。一方で、ＨＳ－１５ミセル群とＥＬＰミセル群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は著しくそれぞれ３２．４％と３５％減少した（ｐ＜０．０５）。

上述の資料により、部分ミセル剤形中の非イオン性界面活性剤濃度およびクルクミン濃度はミセル剤形と一致し、且つ一部のミセルを含むが、部分ミセル剤形は傾向的に局所脂肪を減少させられるものの、著しく局所脂肪を減少させられなかった。一方で、大量の薬物含有ミセルを含むミセル剤形は著しく局所脂肪を減少させられた。

そのため、薬物含有ミセルの形成はクルクミン組成物が著しく投与部位の局所脂肪を減少させるカギである。即ち、少量の薬物含有ミセルを含むクルクミン組成物は傾向的に局所脂肪を減少させられ、大量の薬物含有ミセルを含むクルクミン組成物は著しく局所脂肪を減少させられる。

図４を参照されたい。図４はミセルがラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフである。図４で、縦軸は相対総増加体重（％）、横軸は順番にコントロール群、ＨＳ－１５部分ミセル群、ＨＳ－１５ミセル群、ＥＬＰ部分ミセル群、およびＥＬＰミセル群である。

図４で示すように、コントロール群ラットの相対総増加体重は１００．０±２０．６％、ＨＳ－１５部分ミセル群ラットの相対総増加体重は１００．０±１７．３％、ＨＳ－１５ミセル群ラットの相対総増加体重は９６．４±１８．５％、ＥＬＰ部分ミセル群ラットの相対総増加体重は７３．８±１１．２％、ＥＬＰミセル群ラットの相対総増加体重は５４．８±１４．３％であった。

コントロール群ラットと比べ、ＥＬＰ部分ミセル群ラットの相対総増加体重は減少の傾向を見せたが、有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。ＥＬＰミセル群ラットの相対総増加体重は４５．２％減少し、コントロール群と顕著な差（ｐ＜０．０５）を示した。

上述の資料により、ＥＬＰ部分ミセル剤形中の非イオン性界面活性剤濃度およびクルクミン濃度はＥＬＰミセル剤形と一致し、且つ一部のミセルを含むが、ＥＬＰ部分ミセル剤形は傾向的に体重を減少させられたが、著しく体重を減少させられなかった。一方で、大量の薬物含有ミセルを含むＥＬＰミセル剤形は著しく体重を減少させられた。

そのため、薬物含有ミセルの形成はクルクミン組成物が体重を著しく減少させるカギである。即ち、少量の薬物含有ミセルを含むクルクミン組成物は傾向的に体重を減少させられ、大量の薬物含有ミセルを含むクルクミン組成物は著しく体重を減少させられる。

本実験中、大量のミセルを含むＨＳ－１５ミセル剤形は体重を著しく減少させていないが、発明者らの経験により、投与頻度または投与量を増やすと、大量のミセルを含むＨＳ－１５ミセル剤形も体重を著しく減少させられるため、非イオン性界面活性剤のＨＳ－１５も本特許請求の範囲に含むべきである。

実験四：本発明の医薬組成物の調製
上述の実験により、非イオン性界面活性剤でミセルを形成することはクルクミン組成物が局所脂肪を減少させるカギである。したがって、本発明はクルクミン単一医薬組成物中に複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）を含む特徴を持つ、一種の局所脂肪を減少させるクルクミン単一薬医薬組成物を提供する。

クルクミン単一薬医薬組成物の調製手順：
（ａ）第一重量のクルクミンと溶媒を混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。
（ｂ）第二重量の医学薬学上認められる界面活性剤を加え、回転数１００～３００ｒｐｍで撹拌し、溶媒を揮発させ、そのうち前記界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。
（ｃ）溶媒を完全に揮発した後、第三重量の医学薬学上認められる水溶液をゆっくり加え、複数の薬物含有ミセルを得た。
（ｄ）０．２μｍのフィルターで濾過した後、薬物含有ミセルを含む濾過液を暗所で冷蔵保存する。

そのうち、ステップ（ｃ）中、前記薬物含有ミセルは界面活性剤により形成された一つの微細構造であり、且つクルクミンは前記薬物含有ミセルに含まれていて、第三重量は０ｇ以上である。

好ましくは、ステップ（ｃ）の操作手順は：溶媒を完全に揮発した後、第三重量の医学薬学上認められる水溶液をゆっくり加え、均一に撹拌し、複数の薬物含有ミセルを得る。

好ましくは、ステップ（ａ）中、溶媒の沸点は純水の沸点より低い。

好ましくは、ステップ（ａ）中、溶媒は親水性溶媒である。

好ましくは、前記親水性溶媒はメタノール、エタノール、アセトンおよび他の親水性溶媒から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ）中の溶媒は親油性溶媒である。

好ましくは、前記親油性溶媒はジエチルエーテル、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ジクロロメタン、ヘキサンおよび他の親油性溶媒から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ｂ）中、前記界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。

好ましくは、前記非イオン性界面活性剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸（ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ）および（ｂ）中、前記第一重量のクルクミンと前記第二重量の界面活性剤の重量比は１：５から１：５００である。

好ましくは、ステップ（ａ）および（ｂ）中、前記第一重量のクルクミンと前記第二重量の界面活性剤の重量比は１：２０から１：１５０である。

好ましくは、ステップ（ａ）および（ｃ）中、前記第一重量のクルクミンと前記第三重量の医学薬学上認められる水溶液の重量比は１：４００から３：５０である。

好ましくは、ステップ（ｃ）中、前記医学薬学上認められる水溶液は注射液、注射用水溶液、または生理食塩水である。

好ましくは、ステップ（ｃ）中、前記医学薬学上認められる水溶液は局所麻酔薬を含む。

好ましくは、ステップ（ｃ）中、前記医学薬学上認められる水溶液は抗酸化物質を含む。

実験五：医薬組成物の品質測定
実験５－１ 組成分析
医薬組成物を少なくとも２０分間静置し、分離が生じなかった場合は粒子径測定装置を用いて測定する。

粒子径測定装置（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いて医薬組成物中にミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）の有無を測定する。医薬組成物を粒子径測定装置で分析して粒子径は２５０ｎｍ未満、ＰＤＩ値は０．４未満であり、肉眼で観察して医薬組成物中の溶液は澄んで透明であり、且つ医薬組成物中の溶液にレーザーを照射した後に光路が見られた場合、医薬組成物中にミセルが存在することとなる。
医薬組成物にミセルを有する場合、調製された医薬組成物は、本発明の局所脂肪を減少させるために使用され得る医薬組成物である。
好ましくは、医薬組成物を静置した後分離しなく且つ沈殿物を含まない場合、調製した医薬組成物は本発明の好ましい医薬組成物である。

実験５－２ 粒子径分布状況を用いて医薬組成物の安定性を分析
粒子径測定装置（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）（Ｍａｌｖｅｒｎより購入）を用いて粒子径分布状況および多分散指数（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ；ＰＤＩ）を測定し、多分散指数が０．４未満の場合、医薬組成物の安定性が良いことを示し、即ち医薬組成物中のミセルは安定に存在しうる。

実験５－３ 加速安定性試験を用いて医薬組成物の安定性を測定
本発明の医薬組成物の保存条件は摂氏２～８℃である。医薬組成物の安定性を測定するため、発明者らは医薬組成物を比較的高温度且つ高湿度（温度２５℃±２℃、相対湿度ＲＨ６０％±５％）の環境で加速安定性試験を行い、医薬組成物中のミセルが比較的高温度の状態で安定しうる時間を観察し、それに基づき加速安定性の式で摂氏２～８℃の条件下で保存しうる時間を推算した。詳細は以下の通り。

医薬組成物が２５℃の条件下でｎヶ月保存できる場合、前記医薬組成物が５℃の条件下で保存できる時間はｎヶ月の２^{（（２５－５）／１０）}倍である。即ち、前記医薬組成物が５℃の条件下で保存できる時間はｎヶ月の２^２、即ち４倍である。

例えば、医薬組成物が２５℃の条件下で６ヶ月保存できる場合、前記医薬組成物が５℃の条件下で保存できる時間は２４ヶ月である（６ヶ月×４倍＝２４ヶ月）。

好ましくは、温度が２５℃±２℃、相対湿度がＲＨ６０％±５％、直射日光を避けた状態で加速安定性試験行った際、前記医薬組成物は最低２４時間沈殿物を発生しない状態を維持した。

好ましくは、２５℃±２℃、相対湿度がＲＨ６０％±５％、直射日光を避けた状態で加速安定性試験行った際、前記医薬組成物は最低６ヶ月沈殿物を発生しない状態を維持した。
好ましくは、温度が２～８℃の条件下で、前記医薬組成物は最低２４ヶ月沈殿物を発生しない状態を維持した。

実験六：各種非イオン性界面活性剤により形成された薬物含有ミセルの最大薬物負荷量
薬物含有ミセルの最大薬物負荷量は直接注射量を影響するため、局所皮下脂肪層（例えば顔の皮下脂肪層）の一回に収容する薬物の体積、副作用、および負担に大きく影響する。そのため、本実験は各種非イオン性界面活性剤により形成された薬物含有ミセルの最大薬物負荷量を探り、本発明医薬組成物の調製において最適の賦形剤となる非イオン性界面活性剤を検討する。

４種類の非イオン性界面活性剤で本実験を行った。前記４種類の非イオン性界面活性剤はＰＥＧ－３５ヒマシ油（即ちＥＬＰ）、ポリエチレングリコール（１５）－ヒドロキシステアリン酸（即ちＨＳ－１５）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０、ＲＨ ４０）、およびツイーン８０（即ちＴｗｅｅｎ ８０）であった。

実験は４群に分け、それぞれはＥＬＰ群、ＨＳ－１５群、ＲＨ４０群、およびＴｗｅｅｎ ８０群であった。

実験手順：
（ａ’）２．０ｇ（第一重量の例）のクルクミンと３００～５００ｍＬのジクロロメタンを混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。
（ｂ’）１８．０ｇ（第二重量の例）上述一種類の非イオン性界面活性剤を加え、１００～３００ｒｐｍの回転数で撹拌してジクロロメタンを揮発させた。
（ｃ’）溶媒を完全に揮発した後、２０ｇの組成物を得る。２ｇの前記組成物を採り、８ ｇ（第三重量の例）の注射用生理食塩水をゆっくり加え、均一に撹拌し、分析する組成物を得る。分析する組成物中のクルクミン濃度は２０ｍｇ／ｇ、且つ非イオン性界面活性剤の濃度は１８％である。

ＥＬＰ群、ＨＳ－１５群、ＲＨ４０群、およびＴｗｅｅｎ ８０群の分析する組成物を２０分間以上静置し、分離現象を観察する。分離が発生した場合は、クルクミン濃度が高すぎて分析する組成物中のミセルを破裂させたことを意味する。即ち、前記非イオン性界面活性剤はクルクミン濃度が２０ｍｇ／ｇである本発明医薬組成物を調製することができない。

実験結果により、ＨＳ－１５群およびＲＨ４０群の分析する組成物は共に分離現象が生じ、ＥＬＰ群およびＴｗｅｅｎ ８０群の分析する組成物のみ分離現象が生じなかったことを示した。そのため、ＨＳ－１５およびＲＨ４０により形成された薬物含有ミセルの最大薬物負荷量は２０ｍｇ／ｇ未満である。ＥＬＰおよびＴｗｅｅｎ ８０により形成された薬物含有ミセルはクルクミン濃度が２０ｍｇ／ｇの医薬組成物を調製しうる。

しかし、Ｔｗｅｅｎ ８０は毒性を有するため、各国の薬局方（ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）は有害反応または毒性を防ぐため、Ｔｗｅｅｎ ８０の注射濃度を０．４％未満と規制されている。そのため、Ｔｗｅｅｎ ８０により形成された薬物含有ミセル薬物負荷量上限は０．４４ｍｇ／ｇであるべきだ（式：２０ｍｇ／ｇ×（０．４％／１８％）＝０．４４ｍｇ／ｇ）。

ＥＬＰの最大薬物負荷制限を明らかにするため、発明者らは引き続き実験六を行ってＥＬＰの最大薬物負荷量は１１１ｍｇ／ｇ以上であることを明らかにした（クルクミンとＥＬＰは１：８で調製された医薬組成物中に含有するクルクミンは１１１ｍｇ／ｇである）。
上述の結果により、ＥＬＰは本発明医薬組成物を調製する最適の賦形剤である。ＥＬＰを用いて調製した医薬組成物中、クルクミン濃度は１１１ｍｇ／ｇに達せるが、他の非イオン性界面活性剤で調製した医薬組成物のクルクミン濃度はいずれも２０ｍｇ／ｇ未満であった（表一を参照）。

非イオン性界面活性剤の薬物負荷量上限が最も低いのはＨＳ－１５およびＲＨ４０のうちどれかを明らかにするため、発明者らはさらに前記の非イオン性界面活性剤を用いてクルクミン濃度が１０ｍｇ／ｇの本発明医薬組成物を調製した。結果により、ＥＬＰ、ＨＳ－１５、ＲＨ４０、およびＴｗｅｅｎ８０は全てクルクミン濃度が１０ｍｇ／ｇの本発明医薬組成物を調製することができ、且つ前記クルクミン濃度が１０ｍｇ／ｇの本発明医薬組成物はいずれも分離なく澄んでいて、粒子径は順番に１５．９５±０．２４ｎｍ、８８．２３±１１６．０６ｎｍ、２１．６３±９．３４ｎｍ、１１．３７±０．１３ｎｍ、ＰＤＩ値は順番に０．３２±０．０２、０．４８±０．２７、０．２６±０．０９、０．３３±０．０４である。

そのうち、ＨＳ－１５を用いてクルクミン濃度が１０ｍｇ／ｇの本発明医薬組成物を調製した際、調製された医薬組成物のＰＤＩ値は０．４を超えるため、本発明のミセルが存在する定義（粒子径が２５０ｎｍ未満、ＰＤＩ値が０．４未満、医薬組成物中の溶液を肉眼で観察する際は澄んで透明であり、且つ医薬組成物中の溶液にレーザーを照射した後に光路が見られる）と一致しない。そのため、本発明で使われる非イオン性界面活性剤中、ＨＳ－１５の薬物負荷上限が最も低い。

実験六：ＰＥＧ－３５ヒマシ油（ＥＬＰ）を用いて医薬組成物を調製
本実験はクルクミンとＰＥＧ－３５ヒマシ油の比率変化で一連の本発明医薬組成物を調製し、且つ安定性分析を行ってクルクミンとＰＥＧ－３５ヒマシ油の適切な比率およびＥＬＰを用いて本発明医薬組成物を調製した際の最大薬物負荷量を明らかにした。

実験は９群（即ち１～９群）に分け、各群の医薬組成物の調製方法は実験五の実験手順と概ね同じで、クルクミンの重量（ステップ（ａ’）の第一重量）、ＥＬＰ重量（ステップ（ｂ’）の第二重量）、注射用生理食塩水の重量（ステップ（ｃ’）の第三重量）にのみ違いがあった。本実験中のクルクミンの重量（ステップ（ａ’）の第一重量）、ＥＬＰ重量（ステップ（ｂ’）の第二重量）、注射用生理食塩水の重量（ステップ（ｃ’）の第三重量）の添加した比例は表二の通りであった。

本実験中、１～９群のクルクミンとＥＬＰの比率（重量比）は順番に一対四（１：４）、一対五（１：５）、一対八（１：８）、一対十（１：１０）、一対二十（１：２０）、一対四十（１：４０）、一対百（１：１００）、および一対百五十（１：１５０）、一対五百（１：５００）であり、且つ調製された１～９群の医薬組成物中、クルクミンの最終濃度は順番に２００ｍｇ／ｇ、１６７ｍｇ／ｇ、１１１ｍｇ／ｇ、９１ｍｇ／ｇ、４７．６２ｍｇ／ｇ、７．５ｍｇ／ｇ、３ｍｇ／ｇ、２ｍｇ／ｇ、０．５ｍｇ／ｇであった。即ち、１～９群医薬組成物の調製方法中、ステップ（ａ’）中のクルクミンとステップ（ｂ’）中のＥＬＰ重量比（第一重量と第二重量の比）は順番に一対四、一対五、一対八、一対十、一対二十、一対四十、一対百、一対百五十、および一対五百であり、且つステップ（ｃ’）に第三重量の注射用生理食塩水を加えた後、最終クルクミン濃度が２００ｍｇ／ｇ、１６７ｍｇ／ｇ、１１１ｍｇ／ｇ、９１ｍｇ／ｇ、４７．６２ｍｇ／ｇ、７．５ｍｇ／ｇ、３ｍｇ／ｇ、２ｍｇ／ｇ、および０．５ｍｇ／ｇである医薬組成物を調製した。そのうち、薬物最終濃度をｍｇ／ｇで表示された際、グラム当たりの医薬組成物中に含有するクルクミンのミリグラム数を意味する。

粒子径測定装置（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いて医薬組成物中にミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）の有無を測定し、且つミセルの粒子径を測定した。

粒子径測定装置（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いて粒子径分布状況および多分散指数（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ； ＰＤＩ）を測定し、医薬組成物の安定性を評価した。高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＬＣ、例えばＨＰＬＣ－ＵＶ）を用いてミセル中のクルクミン含有量を分析し、「初期薬物含有量」と定義する。

加速安定性試験を用いて医薬組成物が３ヶ月の高温条件保存（２５±２℃）で分離の有無を観察し、且つ高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＬＣ、例えばＨＰＬＣ－ＵＶ）を用いてミセル中のクルクミン含有量を分析し、「加速実験後の薬物含有量」と定義した。「加速実験後の薬物含有量」を「初期薬物含有量」で割り、「薬物含有率」を得た。薬物含有率が９５％以上の場合、医薬組成物の安定性が優れていることを意味する。

表三を参照されたい。表三は医薬組成物の安定性分析結果である。表三によると、２～９群医薬組成物はミセルがあるため、クルクミンとＥＬＰの比率が１：５から１：５００で調製された医薬組成物は、全て本発明の局所脂肪を減少させるために使用され得る医薬組成物である。

安定性において、クルクミンとＥＬＰの比率が１：４および１：５の際に、ＰＤＩは０．４を超える。クルクミンとＥＬＰの比率が１：８から１：５００の際に、ＰＤＩは０．４未満であった。そのため、安定性のより良い本発明の局所脂肪を減少させるために使用され得る医薬組成物を調製するため、クルクミン割りＥＬＰは五分の一（１／５）未満であるべきだ。即ち、安定性のより良い本発明の局所脂肪を減少させるために使用され得る医薬組成物を調製するため、クルクミンの重量を１重量単位にする際、ＥＬＰの重量は５重量単位を超えるべきだ。好ましくは、クルクミンの重量を１重量単位にする際、ＥＬＰの重量は８～５００重量単位である。好ましくは、クルクミンの重量を１重量単位にする際、ＥＬＰの重量は２０～１５０重量単位である。

表三の資料により、５～８群医薬組成物を２５℃の環境下で３ヶ月保存した後、各試料のクルクミン薬物含有率はいずれも９５％を超え、且つ初期薬物含有量と比較して著しく減少していない。前記の結果により、上述医薬組成物は優れた安定性を持ち、且つ加速実験の式に基づき、前記医薬組成物は２～８℃の冷蔵条件において、少なくとも２４ヶ月保存できる。

空欄は未分析を意味する。

実験七：クルクミン－レスベラトロール複合薬皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響
実験７－１ レスベラトロール単一薬皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響
レスベラトロール皮下注射剤の調製方法：
レスベラトロールを適量の注射用生理食塩水と混ぜ、レスベラトロール皮下注射剤を得た。

ラットを高脂肪食コントロール群およびレスベラトロール群に分け、各群は６頭のラットを含む。ラットの給餌方法は実験二と同様であった。レスベラトロール皮下注射剤をレスベラトロール群の鼠径下の皮下脂肪層に注射し、毎回レスベラトロールの注射量はキログラム当たり８ｍｇであった（８ｍｇ／ｋｇ）。高脂肪食コントロール群は上述の注射方法で同じ体積の注射用水を投与した。

上述注射部位はラット鼠径下の脂肪部であり、左右両側均等に注射した。実験の１、３、および５日目に各１回注射した。実験期間毎日高脂肪食を給餌し、且つ毎日体重変化を記録し、週一回飲水量摂食量を記録した。実験は２０日間行い、２１日目に二酸化炭素で犠死した。

図５を参照されたい。図５は賦形剤を含まないレスベラトロール皮下注射剤がラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフである。

図５で示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００．００±２１．５１％、レスベラトロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１１１．５９±１１．２８８％であった。レスベラトロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は高脂肪食コントロール群と有意差がないため、賦形剤を含まない親油性植物抽出物－レスベラトロールは投与部位の脂肪（局所脂肪）を減少させることができないと示した。そのため、発明者らは直接レスベラトロールおよびクルクミンを混合して皮下脂肪に注射しても、局所脂肪を減少させられないと思い、さらに賦形剤が複合薬（レスベラトロール＋クルクミン）の局所脂肪溶解効果に有益であるかを検討する。

実験７－２ 賦形剤を含むクルクミン－レスベラトロール混合薬がラットの皮下脂肪量に対する影響
以下の方法で剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液、およびＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液を調製した。

剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液の調製方法：
０．０５ｇのレスベラトロール、０．２ｇのクルクミン、および２ｇのマンニトール（ｍａｎｎｉｔｏｌ）粉砕しよく混ぜ、一つの粉末を得た。０．０５ｇのカルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，、ＣＭＣ）を４０ｍＬの滅菌水と混ぜ、６０℃～７０℃まで加熱して溶かし、０．０５５ｇのツイーン８０（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０、 Ｔｗｅｅｎ ８０）を加え完全に溶けるまで撹拌し、５０ｍＬまでメスアップして一つの液剤を得た。液剤を粉末の中に入れ、混ぜ合わせると剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液を得た。前記剤形ＡはＴｗｅｅｎ ８０にマンニトール加えたことを意味する。前記剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液中にミセルを含まず、クルクミン濃度は４ｍｇ／ｍＬ、レスベラトロール濃度は１ｍｇ／ｍＬであった。

ＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液の調製方法：
０．２ｇのレスベラトロール、０．８ｇのクルクミン、および１５０～２００ｍＬのジクロロメタンを混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。４０ｇのＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ ＥＬＰ、ポリオキシル３５ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ポリオキシル３５硬化ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ＥＬＰと略する）を加え、１００～３００ｒｐｍの回転数で撹拌してジクロロメタンを揮発させた。ジクロロメタンを完全に揮発した後、最終体積が２００ｍＬになるように注射用生理食塩水をゆっくり加え、撹拌した後ＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液を得た。上述ＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液中にミセルを含み、クルクミン濃度は４ｍｇ／ｍＬ、レスベラトロール濃度は１ｍｇ／ｍＬ、ＰＥＧ－３５ヒマシ油（ＥＬＰ）の濃度は約重量百分率２０％であり、且つクルクミン、レスベラトロール、とＰＥＧ－３５ヒマシ油の重量比は４：１：２００であった。

ラットをランダムで高脂肪食コントロール群、剤形Ａの複合薬低用量群、剤形Ａの複合薬高用量群、およびＥＬＰの複合薬低用量群の４群に分け、ラットの給餌方法は実験二と同様であった。

剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液を剤形Ａの複合薬低用量群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり０．２ｍＬの剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液（０．２ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の注射量は体重キログラム当たり１ｍｇクルクミン－レスベラトロール複合薬（１ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液を剤形Ａの複合薬高用量群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり１ｍＬの剤形Ａを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液（１ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の注射量は体重キログラム当たり５ｍｇクルクミン－レスベラトロール複合薬（５ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。ＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液をＥＬＰの複合薬低用量群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり０．２ｍＬのＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液（０．２ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の注射量は体重キログラム当たり１ｍｇクルクミン－レスベラトロール複合薬（１ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。高脂肪食コントロール群は上述と同様な方法で同じ体積の注射用生理食塩水を注射投与した。

上述注射部位はラット鼠径下の脂肪部であり、左右両側均等に注射した。実験の１、３、および５日目に各１回注射した。実験期間毎日高脂肪食を給餌し、実験は２０日間行い、２１日目に二酸化炭素で犠死した。

図６を参照されたい。図は異なる賦形剤で調製したクルクミン－レスベラトロール複合薬の皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフである。

図６で示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００．０±１３％、剤形Ａの複合薬低用量群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１３４．９±３９％、剤形Ａの複合薬高用量群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１３４．９±１４％、ＥＬＰの複合薬低用量群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は７１．１±１４％であった。高脂肪食コントロール群と比べ、剤形Ａの複合薬低用量群または剤形Ａの複合薬高用量群は投与部位の脂肪（局所脂肪）を著しく減少することができなかった（ｐ＞０．０５）。

ＥＬＰの複合薬低用量群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量はコントロール群ラットと顕著な差（ｐ＜０．０５）を示し、且つＥＬＰの複合薬低用量群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は２８．９％減少した。上述の調製方法により、投与したＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液中に薬物含有ミセル（クルクミンを含む）および第二親油性薬物ミセル（レスベラトロールを含む）を含有することを明らかにした。そのため、クルクミン単一薬医薬組成物と同じく、ミセルの形成もクルクミン－レスベラトロール複合薬が局所脂肪を顕著に減少させられるカギである。

実験７－３ クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物と単一薬医薬組成物の比較
以下の方法で本発明クルクミン単一薬医薬組成物、レスベラトロール単一薬医薬組成物、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を調製した。

クルクミン単一薬医薬組成物の調製方法：実験二のクルクミンＥＬＰ溶液の調製方法と同様に行った。そのうち、クルクミン濃度は５ｍｇ／ｍＬであった。

レスベラトロール単一薬医薬組成物の調製方法：実験二のクルクミンＥＬＰ溶液の調製方法と概ね同様で、クルクミンをレスベラトロールに換えて行った。調製したレスベラトロール単一薬医薬組成物中、レスベラトロール濃度は５ｍｇ／ｍＬであった。

クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の調製方法：実験７－２のＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液の調製方法と同様に行った。そのうち、クルクミンとレスベラトロールの全濃度は５ｍｇ／ｍＬ、且つクルクミンとレスベラトロールの比率は４：１であった。

ラットを高脂肪食コントロール群、クルクミン群、レスベラトロール群、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬群に分け、各群は５頭のラットを含む。ラットの給餌方法は実験二と同様であった。

クルクミン単一薬医薬組成物、レスベラトロール単一薬医薬組成物、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物をそれぞれクルクミン群、レスベラトロール群、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットの鼠径下の皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり２ｍＬ（２ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の注射量は体重キログラム当たり１０ｍｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。即ち、クルクミン群ラットに体重キログラム当たり１０ｍｇのクルクミン、レスベラトロール群ラットに体重キログラム当たり１０ｍｇのレスベラトロール、クルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットに体重キログラム当たり８ｍｇのクルクミンおよび２ｍｇのレスベラトロールを投与した。高脂肪食コントロール群は上述と同様な方法で同じ体積の注射用生理食塩水を注射投与した。

上述注射部位はラット鼠径下の脂肪部であり、左右両側均等に注射した。実験の１、２、３、および４日目に各１回注射した。実験期間毎日高脂肪食を給餌し、実験は１４日間行い、１５日目に二酸化炭素で犠死した。

毎回各群に１０ｍｇ／ｋｇの薬物を投与しているため、クルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットの局所脂肪溶解効果はクルクミン群とレスベラトロール群の間であるはずだ。クルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットの局所脂肪溶解効果がクルクミン群およびレスベラトロール群よりも優れている場合、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物は局所脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

図７を参照されたい。図７はミセルを含むクルクミン単一薬、レスベラトロール単一薬、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬の皮下注射剤がラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフである。

図７で示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００．０±１４．６％、クルクミン群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９３．５±６．５％、レスベラトロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９１．６±２７．８％、クルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は８０．０±５．８％であった。高脂肪食コントロール群と比べ、クルクミン群またはレスベラトロール群は投与部位の脂肪（局所脂肪）を著しく減少することができなかった（ｐ＞０．０５）。

クルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は高脂肪食コントロール群ラットと顕著な差（ｐ＜０．０５）を示し、且つクルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は２０％減少した。

クルクミン群、レスベラトロール群、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬群ラットを比較すると、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物は局所脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

実験７－４ 投与頻度がラットの皮下脂肪量および体重に対する影響
本実験はクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を投与する際、トータル投与量は同じで投与頻度を変え、投与頻度がラットの皮下脂肪量および体重に対する影響を評価した。本実験はさらに市販の局所脂肪溶解注射剤の主要成分をラットの投与し、本発明クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物と市販の局所脂肪溶解注射剤がラット皮下脂肪量および体重に対する影響を同時に比較する。

以下の方法でデオキシコール酸ナトリウム溶液およびクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を調製した。

デオキシコール酸ナトリウム溶液の調製方法：適量のデオキシコール酸ナトリウムを注射用滅菌水と混ぜ、デオキシコール酸ナトリウムの濃度を２．５７５ｍｇ／ｍＬにし、撹拌した後デオキシコール酸ナトリウム溶液とした。そのうち、デオキシコール酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、商品コードＤ６７５０）は市販の局所脂肪溶解注射剤ＡＴＸ－１０１（商品名はＫｙｂｅｌｌａ）の主要成分である。

クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の調製方法：実験７－２のＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液の調製方法と同様に行った。そのうち、クルクミンとレスベラトロールの全濃度は５ｍｇ／ｍＬ、且つクルクミンとレスベラトロールの比率は４：１であった。

ラットをランダムで高脂肪食コントロール群、デオキシコール酸ナトリウム群、クルクミン－レスベラトロール高頻度投与群（本実験中は高頻度投与群と略す）、およびクルクミン－レスベラトロール低頻度投与群（本実験中は低頻度投与群と略す）の４群に分け、ラットの給餌方法は実験二と同様であった。

以下で薬物の投与方法を説明する。

デオキシコール酸ナトリウム群：デオキシコール酸ナトリウム溶液をデオキシコール酸ナトリウム群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり１０．３ｍｇ（１０．３ｍｇ／ｋｇ、計算式は２．５７５ｍｇ／ｍＬ×４ｍＬ／ｋｇ＝１０．３ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。実験の１、３、５日目に各１回注射し、全３回注射をして、トータル投与量は３０．９ｍｇ／ｋｇであった（１０．３ｍｇ／ｋｇ×３回＝３０．９ｍｇ／ｋｇ）。

高頻度投与群：クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を高頻度投与群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり２０ｍｇ（２０ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×４ｍＬ／ｋｇ＝２０ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。実験の１、３、５、７、９、１１日目に各１回注射し、全６回注射をして、トータル投与量は１２０ｍｇ／ｋｇであった（２０ｍｇ／ｋｇ×６回＝１２０ｍｇ／ｋｇ）。

低頻度投与群：クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を低頻度投与群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり８ｍＬ（８ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり４０ｍｇ（４０ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×８ｍＬ／ｋｇ＝４０ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。実験の１、３、５日目に各１回注射し、全３回注射をして、トータル投与量は１２０ｍｇ／ｋｇであった（４０ｍｇ／ｋｇ×３回＝１２０ｍｇ／ｋｇ）。

高脂肪食コントロール群：上述と同様な方法で同じ体積の注射用水を注射投与した。

実験期間毎日高脂肪食を給餌し、実験は２０日間行い、２１日目に二酸化炭素で犠死した。

図８Ａおよび図８Ｂを参照されたい。図８Ａはクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の供与頻度がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフであり、図８Ｂはクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の供与頻度がラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフである。

図８Ａで示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００．０±２２．６％、デオキシコール酸ナトリウム群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は８８．８±１６．７％、高頻度投与群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は６２．３±５．１％、低頻度投与群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は６５．４±１１．３％であった。高脂肪食コントロール群と比べ、高頻度投与群および低頻度投与群はいずれも投与部位の脂肪（局所脂肪）を著しく減少させた（ｐ＜０．０５）。そのため、クルクミン－レスベラトロール複合薬の濃度が十分であれば、低頻度投与でも局所脂肪溶解の効果を得有られる。
低頻度投与群と比べ、高頻度投与群の局所脂肪溶解効果はより優れている。そのため、高頻度投与と低頻度投与の間に著しい違いはないが、高頻度投与の局所脂肪溶解効果はより良い傾向を見せた。

図８Ｂで示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対総増加体重は１００．０±１１．６％、デオキシコール酸ナトリウム群ラットの相対総増加体重は１００．２±１２．６％、高頻度投与群ラットの相対総増加体重は６３．５±５．５％、低頻度投与群ラットの相対総増加体重は７８．７±１１．５％であった。高脂肪食コントロール群の相対総増加体重と比べ、低頻度投与群と高頻度投与群の相対総増加体重は著しく減少し（ｐ＜０．０５）、且つ相対総増加体重はそれぞれ２１．３％と３６．５％減少し、顕著な体重減少効果を見られた。

そのため、本発明クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物は体重を著しく減少させられ、且つ高頻度投与群の体重減少効果は低頻度投与群よりも著しく優れている（ｐ＜０．０５）。

発明者らの経験により、ラットに適用する投与頻度は３～６回の場合、人間に適用する投与頻度は１～１２回になる。好ましくは、人間において投与頻度は１～６回である。

好ましくは、人間においての投与頻度は１～３０日置きに１～１２回である。好ましくは、人間においての投与頻度は１～３０日置きに１～６回である。若しくは、好ましくは、人間においての投与頻度は１～２０日置きに３～６０回である。好ましくは、人間においての投与頻度は１～１４日置きに６～４２回である。

実験７－５ 投与量がラットの皮下脂肪量に対する影響
本実験は各群のラットにクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を投与する際、投与量を変え、投与量がラットの皮下脂肪量に対する影響を評価した。本実験はさらにもう一種類臨床試験を行っている局所脂肪溶解注射剤の主要成分をラットの投与し、本発明クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物ともう一種類臨床試験を行っている局所脂肪溶解注射剤がラット皮下脂肪量に対する影響を同時に比較する。

以下の方法でＥＬＰ溶液、ＬＩＰＯ－２０２溶液、およびクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を調製した。

ＥＬＰ溶液：１８ｇのＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ ＥＬＰ、ポリオキシル３５ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ポリオキシル３５硬化ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ＥＬＰと略す）を適量の注射用生理食塩水と混ぜ最終体積を９０ｍＬにし、撹拌した後ＥＬＰ溶液を得た。そのうち、ＥＬＰ濃度は約２０％である。

ＬＩＰＯ－２０２溶液の調製方法：
ＬＩＰＯ－２０２は臨床試験を行っている局所脂肪溶解注射剤であり、主要成分はサルメテロールキシナホ酸塩（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌｘｉｎａｆｏｎａｔｅ）である。

（ｉ）１ｍｇのサルメテロールキシナホ酸塩（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を適量のメタノールと混ぜ、トータル体積を１ｍＬにして１ｍｇ／ｍＬのｓｔｏｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎを得た。

（ｉｉ）滅菌水でｓｔｏｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎを連続１０倍希釈して、サルメテロールキシナホ酸塩の最終濃度を０．０１μｇ／ｍＬに調製し、本実験に使われるＬＩＰＯ－２０２溶液にした。

クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の調製方法：実験７－２のＥＬＰを含むクルクミン－レスベラトロール複合薬溶液の調製方法と同様に行った。そのうち、クルクミンとレスベラトロールの全濃度は５ｍｇ／ｍＬ、クルクミンとレスベラトロールの比率は４：１、且つＥＬＰ濃度は２０％であった。

ラットをランダムで高脂肪食コントロール群、コントロール群、ＬＩＰＯ－２０２群、複合薬１ｍｇ／ｍＬ群、複合薬５ｍｇ／ｍＬ群、複合薬１０ｍｇ／ｍＬ群、および複合薬２０ｍｇ／ｍＬ群の７群に分け、ラットの給餌方法は実験二と同様であった。

以下で薬物の投与方法を説明する。

コントロール群：ＥＬＰ溶液をコントロール群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）であった。

ＬＩＰＯ－２０２群：ＬＩＰＯ－２０２溶液をＬＩＰＯ－２０２群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり０．０４μｇ（０．０４μｇ／ｋｇ、計算式は０．０１μｇ／ｍＬ×４ｍＬ／ｋｇ＝０．０４μｇ／ｋｇ）になるようにした。

複合薬１ｍｇ／ｍＬ群：クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を複合薬１ｍｇ／ｍＬ群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり０．２ｍＬ（０．２ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり１ｍｇ（１ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×０．２ｍＬ／ｋｇ＝１ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。

複合薬５ｍｇ／ｍＬ群：クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を複合薬５ｍｇ／ｍＬ群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり１ｍＬ（１ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり５ｍｇ（５ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×１ｍＬ／ｋｇ＝５ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。

複合薬１０ｍｇ／ｍＬ群：クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を複合薬１０ｍｇ／ｍＬ群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり２ｍＬ（２ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり１０ｍｇ（１０ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×２ｍＬ／ｋｇ＝１０ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。

複合薬２０ｍｇ／ｍＬ群：クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物を複合薬２０ｍｇ／ｍＬ群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり２０ｍｇ（２０ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×４ｍＬ／ｋｇ＝２０ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。

高脂肪食コントロール群：上述と同様な方法で同じ体積の注射用水を注射投与した。

実験の１、２、３、４日目に各１回注射し、実験期間毎日高脂肪食を給餌し、実験は１４日間行い、１５日目に二酸化炭素で犠死した。

図９を参照されたい。図９はクルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物の供与量がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフである。

図９で示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００±１５．２％、コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９９．２±２２．０％、ＬＩＰＯ－２０２群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９７．８±１２．８％、複合薬１ｍｇ／ｍＬ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９０．１±１２．２％、複合薬５ｍｇ／ｍＬ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は８０．９±１３．９％、複合薬１０ｍｇ／ｍＬ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は７３．９±９．５％、複合薬２０ｍｇ／ｍＬ群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は６４．１±１２．０％であった。

そのため、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物は投与量が５ｍｇ／ｋｇの際に著しい局所脂肪溶解効果を持ち、且つ投与量が高いほど効果が著しい。クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物は投与量が１ｍｇ／ｋｇの際に、著しい局所脂肪溶解効果はないか、その傾向は見られた。発明者らの経験により、投与頻度を上げれば、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物は投与量が１ｍｇ／ｋｇの際にも著しい局所脂肪溶解効果が見られる。

発明者らの経験により、ラットに適用する投与量は１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇの場合、人間に適用する投与量は０．０１～４０ｍｇ／ｋｇになる。好ましくは、人間において投与量は０．１～２０ｍｇ／ｋｇである。

好ましくは、人間において平方センチメートル当たり０．０２～２０ｍｇ投与する。好ましくは、人間において平方センチメートル当たり０．０４～１６ｍｇ投与する。好ましくは、人間において平方センチメートル当たり０．２～１２ｍｇ投与する。好ましくは、人間において平方センチメートル当たり０．４～８ｍｇ投与する。

好ましくは、人間においてキログラム当たり０．０１～４０ｍｇ投与する。好ましくは、人間においてキログラム当たり０．４～４０ｍｇ投与する。好ましくは、人間においてキログラム当たり０．８～２０ｍｇ投与する。

実験八：クルクミン複合薬医薬組成物が脂肪溶解に対する影響
本実験はクルクミンとレスベラトロール以外の親油性薬物を用いて複合薬医薬組成物を調製し、各種親油性複合薬医薬組成物が成熟脂肪細胞に対する脂肪溶解効果を評価する。本実験はプエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、およびシネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）を用いて各種親油性薬物複合薬医薬組成物を調製した。

実験８－１ 細胞毒性測定
細胞生存実験（ＭＴＴ ａｓｓａｙ）を用いて、５０ｐｐｍのクルクミン、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、またはシネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）は脂肪細胞以外、他の細胞に対し毒性の有無を評価し、毒性がない場合のみ脂肪溶解測定を行った。

実験結果により、５０ｐｐｍのクルクミン、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、ケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、およびシネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）はラット脂肪細胞以外の一般体細胞（ｓｏｍａｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）に対して細胞毒性がないため、この投与量において一般体細胞に影響はない。

実験８－２ 成熟脂肪細胞脂肪溶解効果
以下の方法でＤＭＳＯコントロール群細胞培養液、クルクミン細胞培養液、プエラリン細胞培養液、ケルセチン細胞培養液、シネフリン細胞培養液、クルクミン－プエラリン複合薬細胞培養液、クルクミン－ケルセチン複合薬細胞培養液、およびクルクミン－シネフリン複合薬細胞培養液を調製した。

ＤＭＳＯコントロール群細胞培養液：ＤＭＳＯを適量の滅菌水と混ぜ、０．５％のＤＭＳＯ溶液を調製した。０．５％ＤＭＳＯ溶液を細胞培養液（商品名はＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ、Ｇｉｂｃｏより購入）と混ぜ、ＤＭＳＯコントロール群細胞培養液を調製した。そのうち、０．５％ＤＭＳＯ溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

クルクミン細胞培養液：クルクミンを適量の０．５％ＤＭＳＯ溶液と混ぜ、クルクミン溶液を調製した。クルクミン溶液を細胞培養液（商品名はＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ、Ｇｉｂｃｏより購入）と混ぜ、５０ｐｐｍのクルクミンを含むクルクミン細胞培養液を調製した。そのうち、クルクミン溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

プエラリン細胞培養液：プエラリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を適量の０．５％ＤＭＳＯ溶液と混ぜ、プエラリン溶液を調製した。プエラリン溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのプエラリンを含むプエラリン細胞培養液を調製した。そのうち、プエラリン溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

ケルセチン細胞培養液：ケルセチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を適量の０．５％ＤＭＳＯ溶液と混ぜ、ケルセチン溶液を調製した。ケルセチン溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのケルセチンを含むプエラリン細胞培養液を調製した。そのうち、ケルセチン溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

シネフリン細胞培養液：シネフリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を適量の０．５％ＤＭＳＯ溶液と混ぜ、シネフリン溶液を調製した。シネフリン溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのシネフリンを含むシネフリン細胞培養液を調製した。そのうち、シネフリン溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

クルクミン－プエラリン複合薬細胞培養液：クルクミンとプエラリンを適量の０．５％ＤＭＳＯ溶液と混ぜ、クルクミン－プエラリン複合薬溶液を調製した。そのうち、クルクミンとプエラリンの重量比は２：３であった。クルクミン－プエラリン複合薬溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのクルクミン－プエラリン複合薬を含むクルクミン－プエラリン複合薬細胞培養液を調製した。そのうちクルクミンの濃度は２０ｐｐｍ、プエラリンの濃度は３０ｐｐｍ、且つクルクミン－プエラリン複合薬溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

クルクミン－ケルセチン複合薬細胞培養液：クルクミンとケルセチンを適量の０．５％ＤＭＳＯ溶液と混ぜ、クルクミン－ケルセチン複合薬溶液を調製した。そのうち、クルクミンとケルセチンの重量比は２：３であった。クルクミン－ケルセチン複合薬溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのクルクミン－ケルセチン複合薬を含むクルクミン－ケルセチン複合薬細胞培養液を調製した。そのうちクルクミンの濃度は２０ｐｐｍ、ケルセチンの濃度は３０ｐｐｍ、且つクルクミン－ケルセチン複合薬溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

クルクミン－シネフリン複合薬細胞培養液：クルクミンとシネフリンを適量の０．５％ＤＭＳＯ溶液と混ぜ、クルクミン－シネフリン複合薬溶液を調製した。そのうち、クルクミンとシネフリンの重量比は２：３であった。クルクミン－シネフリン複合薬溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのクルクミン－シネフリン複合薬を含むクルクミン－シネフリン複合薬細胞培養液を調製した。そのうちクルクミンの濃度は２０ｐｐｍ、シネフリンの濃度は３０ｐｐｍ、且つクルクミン－シネフリン複合薬溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

成熟脂肪細胞脂肪溶解効果の実験手順
３Ｔ３－Ｌ１前脂肪細胞（台湾食品工業発展研究所（ＢＣＲＣ）より購入）を１２ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに接種し、各ｗｅｌｌ中の細胞数を１×１０^５にした。２日間培養後、細胞分化誘導培養液（ＤＭＩ ｍｅｄｉｕｍ、０．５μＭ ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）、０．１μＭ Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）、および５μｇ／ｍｌ Ｉｎｓｕｌｉｎ（Ｈｕｍｕｎｌｉｎ Ｒ．より購入）を含む）で２日間培養した。その後、５μｇ／ｍｌのインスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）を含む細胞培養液で６日間培養し、細胞形態が紡錘形から球形になり且つ細胞内に多くの脂肪滴を積み重ねた際、成熟脂肪細胞に分化したと示す。

成熟脂肪細胞をＤＭＳＯコントロール群、クルクミン群、プエラリン群、ケルセチン群、シネフリン群、クルクミン－プエラリン複合薬群、クルクミン－ケルセチン複合薬群、およびクルクミン－シネフリン複合薬群の８群に分けた。

ＤＭＳＯコントロール群細胞培養液、クルクミン細胞培養液、プエラリン細胞培養液、ケルセチン細胞培養液、シネフリン細胞培養液、クルクミン－プエラリン複合薬細胞培養液、クルクミン－ケルセチン複合薬細胞培養液、およびクルクミン－シネフリン複合薬細胞培養液で、それぞれＤＭＳＯコントロール群、クルクミン群、プエラリン群、ケルセチン群、シネフリン群、クルクミン－プエラリン複合薬群、クルクミン－ケルセチン複合薬群、およびクルクミン－シネフリン複合薬群中の成熟脂肪細胞を２４時間培養した。

アネキシンＶタンパク質（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅより購入）およびＰｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ染色液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅより購入、ＰＩと略す）を各群の細胞と一定時間混合後、フローサイトメトリー（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を用いて各群細胞がアネキシンＶタンパク質およびＰＩ染色液にラベル（ｌａｂｅｌ）された比率を分析し、成熟脂肪細胞がアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）した比率を評価した。そのうち、同時にアネキシンＶタンパク質とＰＩ染色液にラベルされた成熟脂肪細胞は、アポトーシスに入ったことを意味する。アポトーシスに入った成熟脂肪細胞が多いほど、投与した薬物の脂肪溶解効果が良いことを意味し、且つ脂肪溶解は細胞壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）によるのでなくアポトーシスによることを意味する。

平均値±ＳＤでデータ表示し、一元配置分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）で統計処理した。統計処理の結果は記号またはアルファベットで表示し、記号またはアルファベットが異なる場合は有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示し、記号またはアルファベットが同じの場合は有意差がない（ｐ＞０．０５）ことを示す。

各群に投与したトータル薬物量は全て５０ｐｐｍであるため、クルクミン－プエラリン複合薬群のアポトーシス効果はクルクミン群とプエラリン群の間であるはずだ。クルクミン－プエラリン複合薬群のアポトーシス効果がクルクミン群およびプエラリン群よりも優れている場合、クルクミン－プエラリン複合薬医薬組成物は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。同様に、クルクミン－ケルセチン複合薬群のアポトーシス効果はクルクミン群とケルセチン群の間であるはずだ。クルクミン－ケルセチン複合薬群のアポトーシス効果がクルクミン群およびケルセチン群よりも優れている場合、クルクミン－ケルセチン複合薬医薬組成物は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。クルクミン－シネフリン複合薬群のアポトーシス効果はクルクミン群とシネフリン群の間であるはずだ。クルクミン－シネフリン複合薬群のアポトーシス効果がクルクミン群およびシネフリン群よりも優れている場合、クルクミン－シネフリン複合薬医薬組成物は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

図１０を参照されたい。図１０はクルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物が成熟脂肪細胞のアポトーシスに対する影響を示す。

図１０の結果により、ＤＭＳＯコントロール群のアポトーシス率は０．８±０．２％、クルクミン群のアポトーシス率は７８．４±５．４％、プエラリン群のアポトーシス率は２．０±１．６％、ケルセチン群のアポトーシス率は１．８±０．６％、シネフリン群のアポトーシス率は０．９±０．２％、クルクミン－プエラリン複合薬群のアポトーシス率８０．０±５．９％、クルクミン－ケルセチン複合薬群のアポトーシス率は８０．４±７．０％、クルクミン－シネフリン複合薬群のアポトーシス率は８０．８±４．８％であった。

クルクミン群、プエラリン群、およびクルクミン－プエラリン複合薬群のアポトーシス効果を比較すると、クルクミン－プエラリン複合薬群は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

クルクミン群、ケルセチン群、およびクルクミン－ケルセチン複合薬群のアポトーシス効果を比較すると、クルクミン－ケルセチン複合薬群は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

クルクミン群、シネフリン群、およびクルクミン－シネフリン複合薬群のアポトーシス効果を比較すると、クルクミン－シネフリン複合薬群は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

そのため、クルクミンと各種親油性薬物による複合薬医薬組成物は全て脂肪溶解効果があり、且つクルクミンと各種親油性薬物は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。そのため、本発明はクルクミンと各種親油性薬物で薬物含有ミセルおよび第二親油性薬物ミセルを調製し、さらにクルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物を調製し、局所脂肪溶解および体重減少の医薬組成物として用いられる。

本発明は第一種のクルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物を調製する方法を提供し、前記クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物は複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）および第二親油性薬物ミセルを含む。第一種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法以下の通りである。
（Ａ）薬物含有ミセル副構成物の調製手順で、一つの薬物含有ミセル副構成物を調製する。
（Ｂ）第二親油性薬物副構成物の調製手順で、一つの第二親油性薬物副構成物を調製する。
（Ｃ）前記薬物含有ミセル副構成物と前記第二親油性薬物副構成物を混合し、クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物を調製した。

そのうち、前記薬物含有ミセル副構成物の調製手順（Ａ）は以下のステップ（ａ２）～（ｄ２）を含む：
（ａ２）クルクミンと第一溶媒を混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。
（ｂ２）医学薬学上認められる第一界面活性剤を加え、回転数１００～３００ｒｐｍで撹拌し、第一溶媒を揮発させ、そのうち前記第一界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。
（ｃ２）第一溶媒を完全に揮発した後、複数の薬物含有ミセルを得た。
（ｄ２）０．２μｍフィルターで濾過し、濾過液は薬物含有ミセルを含む前記薬物含有ミセル副構成物になる。

且つ、前記第二親油性薬物副構成物の調製手順（Ｂ）は以下のステップ（ａ３）～（ｄ３）を含む：
（ａ３）一つの第二親油性薬物と第二溶媒を混合し、室温で第二親油性薬物が完全に溶解するまで２００～５００ｒｐｍで撹拌した。
（ｂ３）医学薬学上認められる第二界面活性剤を加え、回転数１００ ～３００ ｒｐｍで撹拌し、第二溶媒を揮発させ、そのうち前記第二界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。
（ｃ３）第二溶媒を完全に揮発した後、複数の第二親油性薬物ミセルを得た。
（ｄ３）０．２μｍフィルターで濾過し、濾過液は第二親油性薬物ミセルを含む前記第二親油性薬物ミセル副構成物になる。
そのうち、ステップ（ｃ２）中、前記薬物含有ミセルは第一界面活性剤により形成された一つの微細構造であり、且つクルクミンは前記薬物含有ミセルに包まれている。ステップ（ｃ３）中、前記第二親油性薬物ミセルは第二界面活性剤により形成された一つの微細構造であり、且つ前記第二親油性薬物ミセルで前記第二親油性薬物を包んでいる。

好ましくは、ステップ（ｃ２）の操作手順は：第一溶媒を完全に揮発した後、医学薬学上認められる水溶液をゆっくり加え、均一に撹拌し、複数の薬物含有ミセルを得る。

好ましくは、ステップ（ｃ３）の操作手順は：第二溶媒を完全に揮発した後、医学薬学上認められる水溶液をゆっくり加え、均一に撹拌し、複数の第二親油性薬物ミセルを得る。

好ましくは、前記第二親油性薬物はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、シネフリン（ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）、およびクルクミン以外の親油性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ２）または／およびステップ（ａ３）中、第一溶媒または／および第二溶媒の沸点は純水の沸点より低い。

好ましくは、ステップ（ａ２）または／およびステップ（ａ３）中、第一溶媒または／および第二溶媒は親水性溶媒である。

好ましくは、前記親水性溶媒はメタノール、エタノール、アセトンおよび他の親水性溶媒から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ２）または／およびステップ（ａ３）中、第一溶媒または／および第二溶媒は親油性溶媒である。

好ましくは、前記親油性溶媒はジエチルエーテル、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ジクロロメタン、ヘキサンおよび他の親油性溶媒から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ２）または／およびステップ（ｂ３）中、前記第一界面活性剤または／および第二界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。

好ましくは、前記非イオン性界面活性剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸（ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。

好ましくは、クルクミンと前記第二親油性薬物の重量比は３０：１～１：１０である。

好ましくは、ステップ（ａ２）および（ｂ２）中、前記クルクミンと前記第二重量の界面活性剤の重量比は１：４から１：５００である。

好ましくは、ステップ（ａ３）および（ｂ３）中、前記第二親油性薬物と前記第二重量の界面活性剤の重量比は１：４から１：５００である。

好ましくは、ステップ（ｃ２）および（ｃ３）中、前記医学薬学上認められる水溶液は注射液、注射用水溶液、または生理食塩水である。

好ましくは、ステップ（ｃ３）および（ｃ３）中、前記医学薬学上認められる水溶液は局所麻酔薬を含む。

好ましくは、前記局所麻酔剤はアミン、ｐ－アミノベンズアミドエステル、およびアミノエーテルから選ばれる１種以上である。

好ましくは、アミド類はジブカイン（Ｄｉｂｕｃａｉｎｅ）、リドカイン（Ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、メピバカイン塩酸塩（Ｍｅｐｉｖａｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、ブピバカイン塩酸塩（Ｂｕｐｉｖａｃｉｎｅ ＨＣｌ）、ピロカイン塩酸塩（Ｐｙｒｒｏｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、プリロカイン塩酸塩（Ｐｒｉｌｏｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、Ｄｉｇａｍｍａｃａｉｎｅ、およびオキセサゼイン（Ｏｘｅｔｈａｚａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ｐ－アミノベンズアミドエステルはブタカイン（Ｂｕｔａｃａｉｎｅ）、ジメトカイン（Ｄｉｍｅｔｈｏｃａｉｎｅ）、およびツトカイン（Ｔｕｔｏｃａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。

好ましくは、アミノエーテルはジメチソキン（Ｑｕｉｎｉｓｏｃａｉｎｅ）、およびプラモキシン（Ｐｒａｍｏｃａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ｃ３）および（ｃ３）中、前記医学薬学上認められる水溶液は抗酸化物質を含む。

好ましくは、抗酸化物質はβ－カロテン（ｂｅｔａ－ｃａｒｏｔｅｎｅ）、ルテイン（ｌｕｔｅｉｎ）、リコペン（ｌｙｃｏｐｅｎｅ）、ビリルビン（ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ）、ビタミンＡ（ｖｉｔａｍｉｎ Ａ）、ビタミンＣ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ、別称アスコルビン酸，即ちａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＥ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｅ），尿酸（ｕｒｉｃ ａｃｉｄ）、一酸化窒素（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ）、ニトロキシド（ｎｉｔｒｏｘｉｄｅ）、ピルビン酸（ｐｙｒｕｖａｔｅ）、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓｅ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）、グルタチオンペルオキシダーゼ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｓ）、Ｎ－アセチルシステイン（Ｎ－ａｃｅｔｙｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、およびナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）から選ばれる１種以上である。

本発明は第二種のクルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物を調製する方法を提供し、且つ前記第二種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法は第一種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法よりも簡易である。前記第二種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法以下の通りである。
（ａ４）クルクミン、第二親油性薬物、および溶媒を混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで２００～５００ｒｐｍで撹拌した。
（ｂ４）医学薬学上認められる一つの界面活性剤を加え、回転数１００～３００ｒｐｍで撹拌し溶媒を揮発させ、そのうち前記界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。
（ｃ４）溶媒を完全に揮発した後、医学薬学上認められる水溶液をゆっくり加え、均一に撹拌し複数の薬物含有ミセルおよび第二親油性薬物ミセルを形成した。
（ｄ４）０．２μｍのフィルターで濾過した後、複数の薬物含有ミセルおよび複数の第二親油性薬物ミセルを含む濾過液を暗所で冷蔵保存する。

前記第二種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法中に使用される溶媒、界面活性剤、医学薬学上認められる水溶液、および第二親油性薬物の種類範囲は、第一種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法と同様である。且つ、前記第二種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法中の各成分間比率関係範囲も、第一種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法と同様である。

好ましくは、前記医学薬学上認められる水溶液は局所麻酔薬または／および抗酸化物質を含む。

好ましくは、前記第二種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法中に使用される局所麻酔薬または／および抗酸化物質の種類範囲は、第一種クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物の調製方法と同様である。

実験九：クルクミン－緑茶抽出物複合薬皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響
実験９－１ 緑茶抽出物単一薬皮下注射剤がラットの皮下脂肪量に対する影響
緑茶抽出物皮下注射剤の調製方法：
緑茶抽出物を適量の注射用生理食塩水と混ぜ、緑茶抽出物皮下注射剤を得た。
ラットを高脂肪食コントロール群および緑茶抽出物群に分け、各群は６頭のラットを含む。ラットの給餌方法は実験二と同様であった。緑茶抽出物皮下注射剤を緑茶抽出物群ラットの鼠径下の皮下脂肪層に注射し、毎回緑茶抽出物の注射量は体重キログラム当たり８ｍｇ（８ｍｇ／ｋｇ）であった。高脂肪食コントロール群は上述の注射方法で同じ体積の注射用水を投与した。

上述注射部位はラット鼠径下の脂肪部であり、左右両側均等に注射した。実験の１、３、および５日目に各１回注射した。実験期間毎日高脂肪食を給餌し、且つ毎日体重変化を記録し、週一回飲水量摂食量を記録した。実験は２０日間行い、２１日目に二酸化炭素で犠死した。

図１１を参照されたい。図１１：賦形剤を含まない緑茶抽出物皮下注射剤がラットの局所皮下脂肪量に対する影響の棒グラフ。

図１１で示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００．００±２１．５１％、緑茶抽出物群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は９９．５０±１３．１４％であった。緑茶抽出物群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は高脂肪食コントロール群と有意差がないため、賦形剤を含まない水溶性植物抽出物－緑茶抽出物は投与部位の脂肪（局所脂肪）を減少させることができないと示した。

実験９－２ 投与頻度がラットの皮下脂肪量および体重に対する影響
本実験は各群のラットにクルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物を投与する際、トータル投与量は同じで投与頻度を変え、投与頻度がラットの皮下脂肪量および体重に対する影響を評価した。本実験はさらに市販の局所脂肪溶解注射剤の主要成分をラットの投与し、本発明クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物と市販の局所脂肪溶解注射剤がラット皮下脂肪量および体重に対する影響を同時に比較する。

以下の方法でデオキシコール酸ナトリウム溶液およびクルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物を調製した。

デオキシコール酸ナトリウムの調製方法：実験７－４のデオキシコール酸ナトリウムの調製方法と同様に行った。

クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物の調製方法：クルクミン０．８ｇとジクロロメタン１５０～２００ｍＬを混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。４０ｇのＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ ＥＬＰ、ポリオキシル３５ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ポリオキシル３５硬化ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）、ＥＬＰと略する）を加え、１００～３００ｒｐｍの回転数で撹拌してジクロロメタンを揮発させた。ジクロロメタンを完全に揮発した後、最終体積が２００ｍＬになるように注射用生理食塩水をゆっくり加え、そのうち、注射用生理食塩水中に０．２ｇの緑茶抽出物を含む。均一に撹拌して、ＥＬＰを含むクルクミン－緑茶抽出物複合薬溶液を得た。前記ＥＬＰを含むクルクミン－緑茶抽出物複合薬溶液中に薬物含有ミセルを含み、クルクミンと緑茶抽出物の全濃度は５ｍｇ／ｍＬ、且つクルクミンと緑茶抽出物の重量比は４：１であった。

ラットをランダムで高脂肪食コントロール群、デオキシコール酸ナトリウム群、クルクミン－緑茶抽出物高頻度投与群（本実験は高頻度投与群と略す）、およびクルクミン－緑茶抽出物低頻度投与群（本実験は低頻度投与群と略す）の４群に分け、ラットの給餌方法は実験二と同様であった。

以下で薬物の投与方法を説明する。

デオキシコール酸ナトリウム群：デオキシコール酸ナトリウム溶液をデオキシコール酸ナトリウム群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり１０．３ｍｇ（１０．３ｍｇ／ｋｇ、計算式は２．５７５ｍｇ／ｍＬ×４ｍＬ／ｋｇ＝１０．３ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。実験の１、２、５日目に各１回注射し、全３回注射をして、トータル投与量は３０．９ｍｇ／ｋｇであった（１０．３ｍｇ／ｋｇ×３回＝３０．９ｍｇ／ｋｇ）。

高頻度投与群：クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物を高頻度投与群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり４ｍＬ（４ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり２０ｍｇ（２０ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×４ｍＬ／ｋｇ＝２０ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。実験の１、３、５、７、９、１１日目に各１回注射し、全６回注射をして、トータル投与量は１２０ｍｇ／ｋｇであった（２０ｍｇ／ｋｇ×６回＝１２０ｍｇ／ｋｇ）。
低頻度投与群：クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物を低頻度投与群ラットの鼠径下皮下脂肪層に注射し、毎回の注射量は体重キログラム当たり８ｍＬ（８ｍＬ／ｋｇ）であり、毎回の投与量は体重キログラム当たり４０ｍｇ（４０ｍｇ／ｋｇ、計算式は５ｍｇ／ｍＬ×８ｍＬ／ｋｇ＝４０ｍｇ／ｋｇ）になるようにした。実験の１、３、５日目に各１回注射し、全３回注射をして、トータル投与量は１２０ｍｇ／ｋｇであった（４０ｍｇ／ｋｇ×３回＝１２０ｍｇ／ｋｇ）。

高脂肪食コントロール群：上述と同様な方法で同じ体積の注射用水を注射投与した。

実験期間毎日高脂肪食を給餌し、実験は２０日間行い、２１日目に二酸化炭素で犠死した。

図１２Ａおよび図１２Ｂを参照されたい。図１２Ａはクルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物の供与頻度がラットの皮下脂肪量に対する影響の棒グラフであり、図１２Ｂはクルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物の供与頻度がラットの総体重増加量に対する影響の棒グラフである。

図１２Ａで示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は１００．０±２２．６％、デオキシコール酸ナトリウム群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は８８．８±１６．７％、高頻度投与群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は５７．６±７．４％、低頻度投与群ラットの相対鼠径下皮下脂肪重量は６０．７±４．０％であった。

高脂肪食コントロール群と比べ、高頻度投与群および低頻度投与群はいずれも投与部位の脂肪（局所脂肪）を著しく減少させた（ｐ＜０．０５）。そのため、クルクミン－緑茶抽出物複合薬の濃度が十分であれば、低頻度投与でも局所脂肪溶解の効果を得有られる。低頻度投与群と比べ、高頻度投与群の局所脂肪溶解効果はより優れている。そのため、高頻度投与と低頻度投与の間に著しい違いはないが、高頻度投与の局所脂肪溶解効果はより良い傾向を見せた。

図１２Ｂで示すように、高脂肪食コントロール群ラットの相対総増加体重は１００．０±１１．６％、デオキシコール酸ナトリウム群ラットの相対総増加体重は１００．２±１２．６％、高頻度投与群ラットの相対総増加体重は５８．７±９．０％、低頻度投与群ラットの相対総増加体重は７４．９±９．０％であった。高脂肪食コントロール群の相対総増加体重と比べ、低頻度投与群と高頻度投与群の相対総増加体重は著しく減少し（ｐ＜０．０５）、且つ相対総増加体重はそれぞれ２５．１％と４１．３％減少し、顕著な体重減少効果を見られた。

そのため、本発明クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物は体重を著しく減少させられ、且つ高頻度投与群の体重減少効果は低頻度投与群よりも著しく優れている（ｐ＜０．０５）。

発明者らの経験により、ラットに適用する投与頻度は３～６回の場合、人間に適用する投与頻度は１～１２回になる。好ましくは、人間において投与頻度は１～６回である。

好ましくは、人間においての投与頻度は１～３０日置きに１～１２回である。好ましくは、人間においての投与頻度は１～３０日置きに１～６回である。若しくは、好ましくは、人間においての投与頻度は１～２０日置きに３～６０回である。好ましくは、人間においての投与頻度は１～１４日置きに６～４２回である。

実験十：クルクミン複合薬医薬組成物が脂肪溶解に対する影響
本実験は緑茶抽出物以外の水溶性薬物を用いて複合薬医薬組成物を調製し、各種水溶性複合薬医薬組成物が成熟脂肪細胞に対する脂肪溶解効果を評価する。

本実験はカフェイン（ｃａｆｆｅｉｎｅ）、およびＬ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）で各種水溶性複合薬医薬組成物を調製した。

実験１０－１ 細胞毒性測定
細胞生存実験（ＭＴＴ ａｓｓａｙ）を用いて、５０ｐｐｍのカフェイン（ｃａｆｆｅｉｎｅ）、およびＬ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）は脂肪細胞以外、他の細胞に対し毒性の有無を評価し、毒性がない場合のみ脂肪溶解測定を行った。

実験結果により、５０ｐｐｍのカフェイン（ｃａｆｆｅｉｎｅ）、およびＬ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）はラット脂肪細胞以外の一般体細胞（ｓｏｍａｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）に対して細胞毒性がないため、この投与量において一般体細胞に影響はない。

実験１０－２ 成熟脂肪細胞脂肪溶解効果
以下の方法で滅菌水コントロール群細胞培養液、クルクミン細胞培養液、カフェイン細胞培養液、Ｌ－カルニチン細胞培養液、クルクミン－カフェイン複合薬細胞培養液、およびクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬細胞培養液を調製した。

滅菌水コントロール群細胞培養液：滅菌水（ｓｔｅｒｉｌｅ ｗａｔｅｒ）を細胞培養液と混ぜ、滅菌水コントロール群細胞培養液を調製した。そのうち、滅菌水と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

クルクミン細胞培養液：実験８－２のクルクミン細胞培養液の調製方法と同様に行った。
カフェイン細胞培養液：カフェイン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を適量の滅菌水溶液と混ぜ、カフェイン溶液を調製した。カフェイン溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのカフェインを含むカフェイン細胞培養液を調製した。そのうち、カフェイン溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

Ｌ－カルニチン細胞培養液：Ｌ－カルニチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入）を適量の滅菌水と混ぜ、Ｌ－カルニチン溶液を調製した。Ｌ－カルニチン溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ ｐｐｍのＬ－カルニチンを含むＬ－カルニチン細胞培養液を調製した。そのうち、Ｌ－カルニチン溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

クルクミン－カフェイン複合薬細胞培養液：クルクミンとカフェインを適量の滅菌水と混ぜ、クルクミン－カフェイン複合薬溶液を調製した。そのうち、クルクミンとカフェインの重量比は２：３であった。クルクミン－カフェイン複合薬溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのクルクミン－カフェイン複合薬を含むクルクミン－カフェイン複合薬細胞培養液を調製した。そのうち、クルクミンの濃度は２０ｐｐｍ、カフェインの濃度は３０ｐｐｍ、且つクルクミン－カフェイン複合薬溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬細胞培養液：クルクミンとＬ－カルニチンを適量の滅菌水溶液と混ぜ、クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬溶液を調製した。そのうち、クルクミンとＬ－カルニチンの重量比は２：３であった。クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬溶液を細胞培養液と混ぜ、５０ｐｐｍのクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬を含むクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬細胞培養液を調製した。そのうちクルクミンの濃度は２０ｐｐｍ、Ｌ－カルニチンの濃度は３０ｐｐｍ、且つクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬溶液と細胞培養液の体積比は１：１０００であった。

成熟脂肪細胞の方法は実験８－２と同様に行った。

成熟脂肪細胞を滅菌水コントロール群、クルクミン群、カフェイン群、Ｌ－カルニチン群、クルクミン－カフェイン複合薬群、およびクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬群の６群に分けた。

滅菌水コントロール群細胞培養液、クルクミン細胞培養液、カフェイン細胞培養液、Ｌ－カルニチン細胞培養液、クルクミン－カフェイン複合薬細胞培養液、およびクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬細胞培養液で、それぞれ滅菌水コントロール群、クルクミン群、カフェイン群、Ｌ－カルニチン群、クルクミン－カフェイン複合薬群、およびクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬群中の成熟脂肪細胞を２４時間培養した。

アネキシンＶタンパク質（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅより購入）およびＰｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ染色液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅより購入、ＰＩと略す）を各群の細胞と一定時間混合した後、フローサイトメトリー（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を用いて各群細胞がアネキシンＶタンパク質およびＰＩ染色液にラベル（ｌａｂｅｌ）された比率を分析し、成熟脂肪細胞がアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）した比率を評価した。そのうち、同時にアネキシンＶタンパク質とＰＩ染色液にラベルされた成熟脂肪細胞は、アポトーシスに入ったことを意味する。アポトーシスに入った成熟脂肪細胞が多いほど、投与した薬物の脂肪溶解効果が良いことを意味し、且つ脂肪溶解は細胞壊死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）によるのでなくアポトーシスによることを意味する。

各群に投与したトータル薬物量は全て５０ｐｐｍで、且つクルクミンは４割を占め、カフェインは６割を占めるため、クルクミン－カフェイン複合薬群のアポトーシス効果はクルクミン群とカフェイン群の平均値に近いはずである。クルクミン－カフェイン複合薬群のアポトーシス効果がクルクミン群およびカフェイン群の平均値よりも著しく優れている場合、クルクミン－カフェイン複合薬医薬組成物は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。同様に、各群に投与したトータル薬物量は全て５０ｐｐｍで、且つクルクミンは４割を占め、Ｌ－カルニチンは６割を占めるため、クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬群のアポトーシス効果はクルクミン群とＬ－カルニチン群の平均値に近いはずである。クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬群のアポトーシス効果がクルクミン群およびＬ－カルニチン群の平均値よりも著しく優れている場合、クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬医薬組成物は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

図１３を参照されたい。図１３はクルクミン－他の水溶性薬物複合薬医薬組成物が成熟脂肪細胞のアポトーシスに対する影響を示す。

図１３の結果により、滅菌水コントロール群のアポトーシス率は０．８±０．４％、クルクミン群のアポトーシス率は７８．４±５．４％、カフェイン群のアポトーシス率は２．０±１．７％、Ｌ－カルニチン群のアポトーシス率は１．７±０．５％、クルクミン－カフェイン複合薬群のアポトーシス率は６９．３±４．５％、クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬群のアポトーシス率は７４．１±１０．２％であった。

クルクミン群、カフェイン群、およびクルクミン－カフェイン複合薬群のアポトーシス効果を比較すると、クルクミン－カフェイン複合薬群は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

クルクミン群、Ｌ－カルニチン群、およびクルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬群のアポトーシス効果を比較すると、クルクミン－Ｌ－カルニチン複合薬群は脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。

そのため、クルクミンと各種水溶性薬物により形成された複合薬医薬組成物は全て脂肪溶解効果があり、且つクルクミンと各種水溶性薬物は全て脂肪溶解に相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）を持つ。そのため、本発明はクルクミンと各種水溶性薬物用いて薬物含有ミセルを含むクルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物を調製し、局所脂肪溶解および体重減少の医薬組成物として用いられる。

本発明は一種類のクルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物を調製する方法を提供し、前記クルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物は複数の薬物含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）および水溶性薬物ミセルを含む。クルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物の調製方法以下の通りである。
（ａ５）クルクミンと溶媒を混合し、室温でクルクミンが完全に溶解するまで１５０～５００ｒｐｍで撹拌した。
（ｂ５）医学薬学上認められる一つの界面活性剤を加え、回転数１００～３００ｒｐｍで均一に撹拌し溶媒を揮発させ、そのうち前記界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える。
（ｃ５）溶媒を完全に揮発した後、第一医学薬学上認められる水溶液をゆっくり加え、回転数１００～３００ｒｐｍで撹拌し複数の薬物含有ミセルを得た。
（ｄ５）０．２μｍのフィルターで濾過した後、薬物含有ミセルを含む濾過液を暗所で冷蔵保存した。

そのうち、前記第一医学薬学上認められる水溶液中は一種の水溶性薬物を含む。

好ましくは、前記第一医学薬学上認められる水溶液は局所麻酔薬を含む。

好ましくは、前記局所麻酔剤はアミン、ｐ－アミノベンズアミドエステル、およびアミノエーテルから選ばれる１種以上である。

好ましくは、アミド類はジブカイン（Ｄｉｂｕｃａｉｎｅ）、リドカイン（Ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、メピバカイン塩酸塩（Ｍｅｐｉｖａｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、ブピバカイン塩酸塩（Ｂｕｐｉｖａｃｉｎｅ ＨＣｌ）、ピロカイン塩酸塩（Ｐｙｒｒｏｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、プリロカイン塩酸塩（Ｐｒｉｌｏｃａｉｎｅ ＨＣｌ）、Ｄｉｇａｍｍａｃａｉｎｅ、およびオキセサゼイン（Ｏｘｅｔｈａｚａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ｐ－アミノベンズアミドエステルはブタカイン（Ｂｕｔａｃａｉｎｅ）、ジメトカイン（Ｄｉｍｅｔｈｏｃａｉｎｅ）、およびツトカイン（Ｔｕｔｏｃａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。

好ましくは、アミノエーテルはジメチソキン（Ｑｕｉｎｉｓｏｃａｉｎｅ）、およびプラモキシン（Ｐｒａｍｏｃａｉｎｅ）から選ばれる１種以上である。

好ましくは、前記第一医学薬学上認められる水溶液は抗酸化物質を含む。

好ましくは、抗酸化物質はβ－カロテン（ｂｅｔａ－ｃａｒｏｔｅｎｅ）、ルテイン（ｌｕｔｅｉｎ）、リコペン（ｌｙｃｏｐｅｎｅ）、ビリルビン（ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ）、ビタミンＡ（ｖｉｔａｍｉｎ Ａ）、ビタミンＣ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ、別称アスコルビン酸，即ちａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、ビタミンＥ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｅ），尿酸（ｕｒｉｃ ａｃｉｄ）、一酸化窒素（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ）、ニトロキシド（ｎｉｔｒｏｘｉｄｅ）、ピルビン酸（ｐｙｒｕｖａｔｅ）、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓｅ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）、グルタチオンペルオキシダーゼ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｓ）、Ｎ－アセチルシステイン（Ｎ－ａｃｅｔｙｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、およびナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ５）中、溶媒の沸点は純水の沸点より低い。

好ましくは、ステップ（ａ５）中、溶媒は親水性溶媒である。

好ましくは、前記親水性溶媒はメタノール、エタノール、アセトンおよび他の親水性溶媒から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ５）中の溶媒は親油性溶媒である。

好ましくは、前記親油性溶媒はジエチルエーテル、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ジクロロメタン、ヘキサンおよび他の親油性溶媒から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ｂ５）中、前記界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。

好ましくは、前記非イオン性界面活性剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸（ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である。
好ましくは、前記のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体はＰＥＧ－３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＰ）、ＰＥＧ－４０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）、および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ｃ５）とステップ（ｄ５）の間に、さらに以下のステップを含む。

（Ｃ５１）第二医学薬学上認められる水溶液を加え、均一に撹拌し、第二医学薬学上認められる水溶液を完全に溶かす。

好ましくは、前記水溶性薬物は前記第一医学薬学上認められる水溶液に溶解し、前記薬物含有ミセルは界面活性剤により形成された一つの微細構造であり、且つクルクミンは前記薬物含有ミセルに包まれている。

好ましくは、前記第一医学薬学上認められる水溶液中の水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上である。

好ましくは、ステップ（ａ５）および（ｃ５）中、クルクミンと前記水溶性薬物の重量比は３０：１～１：１０である。

好ましくは、ステップ（ａ５）～（ｃ５）中、前記クルクミンと前記水溶性薬物のトータル重量を一重量単位とし、前記界面活性剤の重量は０．２４～７０重量単位、または前記クルクミンと前記水溶性薬物のトータル重量と前記界面活性剤の重量比は４：１～１：７０である。

好ましくは、ステップ（ａ５）、（ｃ５）、および（ａ５１）中、前記クルクミンと前記水溶性薬物のトータル重量を一重量単位とし、前記第一医学薬学上認められる水溶液と前記第二医学薬学上認められる水溶液のトータル重量は１６～４００重量単位である。

好ましくは、ステップ（ｃ５）および（ｃ５１）中、前記第一医学薬学上認められる水溶液および前記第二医学薬学上認められる水溶液は注射液、注射用水溶液、または生理食塩水である。

本発明の実施例により、本発明が提供するクルクミン単一薬医薬組成物、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物、クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物、クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物、およびクルクミン－他の水溶性薬物複合薬医薬組成物、および本発明が提供する他の医薬組成物はいずれも局所脂肪を減少させられ、且つ体重を減少させられる。そのため、本発明提供のクルクミン単一薬医薬組成物、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物、クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物、クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物、およびクルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物、および本発明が提供する他の医薬組成物は、皮下埋込装置、皮下埋込物、埋め込み式輸液、軟膏、またはパップの調製に用いられ、皮下埋込、埋め込み式輸液、軟膏、またはパップ等の方式で皮下脂肪を減少させる部位に投与できる。または、皮下埋込装置、皮下埋込物、埋め込み式輸液、軟膏、またはパップの調製に用いられ、皮下埋込、静脈内注射、埋め込み式輸液、軟膏、またはパップ等の方式で個体に投与し、個体の体重を減少させる。

好ましくは、本発明提供のクルクミン単一薬医薬組成物、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物、クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物、クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物、およびクルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物、および本発明が提供する他の医薬組成物は、皮下脂肪注射で投与部位の脂肪または体重を減少させる。そのため、本発明提供のクルクミン単一薬医薬組成物、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物、クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物、クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物、およびクルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物、および本発明が提供する他の医薬組成物は、局所皮下脂肪の減少に用いる皮下脂肪層注射剤または皮下注射剤の調製に用いられる。

好ましくは、本発明提供のクルクミン単一薬医薬組成物、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物、クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物、クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物、およびクルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物、および本発明が提供する他の医薬組成物は、皮下脂肪注射または静脈内注射を通して体重を減少させられる。そのため、本発明提供のクルクミン単一薬医薬組成物、クルクミン－レスベラトロール複合薬医薬組成物、クルクミン－緑茶抽出物複合薬医薬組成物、クルクミン－他の親油性薬物複合薬医薬組成物、およびクルクミン－水溶性薬物複合薬医薬組成物、および本発明が提供する他の医薬組成物は、体重減少に用いる皮下脂肪層注射剤、静脈内注射剤、または皮下注射剤の調製に用いられる。

上述は本発明の好ましい実施例であり、本発明の権利要求を限定するものでないため、本発明提示の精神を離れない修正は本発明の権利要求に含まれるべきである。

Claims (47)

1. 個体の局所に投与され、皮下脂肪の減少または体重の減少のために適用される注射剤であって、
   複数のクルクミノイド含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
   前記クルクミノイド含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
   前記クルクミノイド含有ミセルは医薬学上認められる非イオン性界面活性剤により形成された微細構造であり、前記非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシル１５ヒドロキシステアレート（２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸またはｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５としても知られている）およびその組み合わせの群から選択され、前記ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体がポリオキシル３５ヒマシ油（ポリオキシル３５硬化ヒマシ油）、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油および他のポリオキシエチレンヒマシ油誘導体から選択され、且つ前記非イオン性界面活性剤の親水親油バランス値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ，ＨＬＢ値）が１０を超え、
   前記クルクミノイド含有ミセルに包まれた油が存在しない、または前記クルクミノイド含有ミセルに包まれたＰＥＧ４００が存在せず、
   前記クルクミノイドと前記非イオン性界面活性剤の重量比は１：８～１：５００である、注射剤。
2. 前記クルクミノイドと前記非イオン性界面活性剤の重量比は１：２０～１：１５０である、請求項１に記載の注射剤。
3. 前記注射剤中の前記クルクミノイド濃度は０．３～１２０ｍｇ／ｇである、請求項１または２に記載の注射剤。
4. 前記注射剤中の前記クルクミノイド濃度は２～９１ｍｇ／ｇである、請求項３に記載の注射剤。
5. 前記クルクミノイド含有ミセルの粒子径は３～５０ｎｍである、請求項１～４のいずれか１項に記載の注射剤。
6. 前記クルクミノイド含有ミセルの粒子径は５～２０ｎｍである、請求項５に記載の注射剤。
7. 前記注射剤中さらに医薬学上認められる水溶液を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の注射剤。
8. さらに一つの第二親油性薬物ミセルを含み、前記第二親油性薬物ミセルは第二非イオン性界面活性剤により形成された第二微細構造であり、且つ第二親油性薬物が前記第二親油性薬物ミセルに包まれており、前記第二非イオン性界面活性剤はポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリオキシル１５ヒドロキシステアレート（２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸またはｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５としても知られている）、ポリオキシル３５ヒマシ油（ポリオキシル３５硬化ヒマシ油）およびポリオキシル４０硬化ヒマシ油、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である、請求項１～７のいずれか１項に記載の注射剤。
9. 前記第二非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える、請求項８に記載の注射剤。
10. 前記第二親油性薬物はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロールおよびクルクミノイド以外の親油性薬物から選ばれる１種以上である、請求項８または９に記載の注射剤。
11. 前記クルクミノイドと前記第二親油性薬物の重量比は３０：１～１：１０である、請求項８～１０のいずれか１項に記載の注射剤。
12. 前記注射剤はさらに一つの水溶性薬物を含む請求項１～１１のいずれか１項に記載の注射剤。
13. 前記水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）、および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上である、請求項１２に記載の注射剤。
14. 前記クルクミノイドと前記水溶性薬物の重量比は３０：１～１：１０である、請求項１２または１３に記載の注射剤。
15. 個体の局所に有効量の医薬組成物を注射することにより前記個体の局所の皮下脂肪量を減らすための前記医薬組成物の製造における組成物の使用であって、
    前記組成物は、
    複数のクルクミノイド含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
    前記クルクミノイド含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
    前記クルクミノイド含有ミセルは医薬学上認められる非イオン性界面活性剤（ｎｏｎｉｏｎｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）により形成された微細構造であり、且つ前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超え、
    前記クルクミノイド含有ミセルに包まれた油が存在しない、または前記クルクミノイド含有ミセルに包まれたＰＥＧ４００が存在せず、
    前記クルクミノイドと前記非イオン性界面活性剤の重量比は１：８～１：５００であり、
    前記医薬組成物中の前記クルクミノイド濃度は０．３～１２０ｍｇ／ｇであり、
    前記個体の前記局所へ注射される医薬組成物の投与量は、キログラム当たり０．０１～４０ｍｇである、使用。
16. 前記非イオン性界面活性剤はポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリオキシル１５ヒドロキシステアレート（２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸またはｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５としても知られている）、ポリオキシル３５ヒマシ油（ポリオキシル３５硬化ヒマシ油）、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である、請求項１５に記載の使用。
17. 前記医薬組成物中の前記クルクミノイド濃度は０．５～１２０ｍｇ／ｇである、請求項１５または１６に記載の使用。
18. 前記クルクミノイド含有ミセルの粒子径は３～５０ｎｍである、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の使用。
19. 前記医薬組成物はさらに医薬学上認められる水溶液を含む、請求項１５～１８のいずれか１項に記載の使用。
20. 前記医薬組成物はさらに一つの第二親油性薬物ミセルを含み、ここで、前記第二親油性薬物ミセルは第二非イオン性界面活性剤により形成された第二微細構造であり、且つ第二親油性薬物が前記第二親油性薬物ミセルに包まれている、請求項１５～１９のいずれか１項に記載の使用。
21. 前記第二非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超える、請求項２０に記載の使用。
22. 前記第二非イオン性界面活性剤はポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリオキシル１５ヒドロキシステアレート（２－ヒドロキシエチル １２－ヒドロキシステアリン酸またはｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５としても知られている）、ポリオキシル３５ヒマシ油（ポリオキシル３５硬化ヒマシ油）、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、および他の非イオン性界面活性剤から選ばれる１種以上である、請求項２０または２１に記載の使用。
23. 前記第二親油性薬物はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）およびクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）以外の親油性薬物から選ばれる１種以上である、請求項２０～２２のいずれか１項に記載の使用。
24. 前記クルクミノイドと前記第二親油性薬物の重量比は３０：１～１：１０である、請求項２０～２３のいずれか１項に記載の使用。
25. 前記医薬組成物はさらに水溶性薬物を含む請求項１５～２４のいずれか１項に記載の使用。
26. 前記水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、 エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上である、請求項２５に記載の使用。
27. 前記クルクミノイドと前記水溶性薬物の重量比は３０：１～１：１０である、請求項２５または２６に記載の使用。
28. 前記注射は、皮下注射、皮下脂肪層注射、または埋め込み式輸液によるものである、請求項１５～２７のいずれか１項に記載の使用。
29. 前記個体の前記局所へ注射される医薬組成物の投与量は、平方センチメートル当たり０．０２～２０ｍｇである、請求項１５～２８のいずれか１項に記載の使用。
30. 前記個体の前記局所へ注射される医薬組成物の投与量は、キログラム当たり０．１～４０ｍｇである、請求項１５～２８のいずれか１項に記載の使用。
31. 前記個体の前記局所に注射する頻度は１～３０日置きに１～１２回である、請求項１５～３０のいずれか１項に記載の使用。
32. 前記クルクミノイドと前記非イオン性界面活性剤の重量比は１：１０～１：１５０である、請求項１５～３１のいずれか１項に記載の使用。
33. 前記組成物はさらに一つの共溶媒（ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ）、一つの懸濁化剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、および一つの油相賦形剤（ｏｉｌ ｐｈａｓｅ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）から選ばれる１種以上を含む、請求項１５～３２のいずれか１項に記載の使用。
34. 前記油相賦形剤および前記共溶媒の少なくとも一つは前記非イオン性界面活性剤と前記微細構造を形成する、請求項３３に記載の使用。
35. 個体の局所に有効量の医薬組成物を注射することにより前記個体体重を減少するための前記医薬組成物の製造における組成物の使用であって、
    前記組成物は、
    複数のクルクミノイド含有ミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）、および
    前記クルクミノイド含有ミセルに包まれたクルクミノイド（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄ）を含み、
    前記クルクミノイド含有ミセルは医薬学上認められる一つの非イオン性界面活性剤（ｎｏｎｉｏｎｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）により形成された微細構造であり、且つ前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｖａｌｕｅ）は１０を超え、
    前記クルクミノイド含有ミセルに包まれた油が存在しない、または前記クルクミノイド含有ミセルに包まれたＰＥＧ４００が存在せず、
    前記クルクミノイドと前記非イオン性界面活性剤の重量比は１：８～１：５００であり、
    前記医薬組成物中の前記クルクミノイド濃度は０．３～１２０ｍｇ／ｇであり、
    前記個体の局所に投与される前記医薬組成物の投与量は０．４～４０ｍｇ／ｋｇである、使用。
36. 前記医薬組成物はさらに一つの医薬学上認められる水溶液を含む、請求項３５に記載の使用。
37. 前記医薬組成物はさらに一つの第二親油性薬物ミセルを含み、ここで、前記第二親油性薬物ミセルは第二非イオン性界面活性剤により形成された第二微細構造であり、第二親油性薬物が前記第二親油性薬物ミセルに包まれていて、且つ前記第二親油性薬物はケルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、プエラリン（ｐｕｅｒａｒｉｎ）、レスベラトロール（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）、およびクルクミノイド以外の他の親油性薬物から選ばれる１種以上である、請求項３５または３６に記載の使用。
38. 前記組成物はさらに水溶性薬物を含み、前記水溶性薬物は緑茶抽出物、エピガロカテキンガレート（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピカテキンガレート（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、エピガロカテキン（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、ガロカテキンガレート（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、ガロカテキン（Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキンガレート（Ｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ）、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）、カフェイン（Ｃａｆｆｅｉｎｅ）、カルニチン（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、Ｌ－カルニチン（Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ）、シネフリン（Ｓｙｎｅｐｈｒｉｎｅ）、クロロゲン酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）および他の水溶性薬物から選ばれる１種以上である、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の使用。
39. 前記注射は、皮下注射、埋め込み式輸液、静脈内注射、または皮下脂肪層注射によるものである、請求項３５～３８のいずれか１項に記載の使用。
40. 前記個体へ注射される医薬組成物の投与量は、平方センチメートル当たり０．２～１６ｍｇである、請求項３５～３９のいずれか１項に記載の使用。
41. 前記個体へ注射される医薬組成物の投与量は、キログラム当たり１～４０ｍｇである、請求項３５～３９のいずれか１項に記載の使用。
42. 前記個体に注射する頻度は１～２０日置きに３～６０回である、請求項３５～４１のいずれか１項に記載の使用。
43. 前記組成物はさらに共溶媒（ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ）、懸濁化剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ
    ａｇｅｎｔ）、および油相賦形剤（ｏｉｌ ｐｈａｓｅ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）から選ばれる１種以上を含む、請求項３５～４２のいずれか１項に記載の使用。
44. 前記油相賦形剤および前記共溶媒の少なくとも一つは前記非イオン性界面活性剤と共に前記微細構造を形成する、請求項４３に記載の使用。
45. 前記クルクミノイドがクルクミンである、請求項１に記載の注射剤。
46. 前記クルクミノイドがクルクミンである、請求項１５に記載の使用。
47. 前記クルクミノイドがクルクミンである、請求項３５に記載の使用。

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